DIAGNOSTIC SEROLOGIC

IN INFECTIA HIV/SIDA

Este bine sa doresti sa fi diagnosticat

la timp!
CONTAGIOZITATE
SCADE CALITATEA VIETII
TRATAMENT
MONITORIZARE
CRESTE CALITATEA
VIETII

Beneficii

AGRAVARE

Temeri

1990
Romania
raporteaza 1094
cazuri de SIDA la
copii,
reprezentnd
jumtate din
totalul de cazuri
de
SIDA pediatric din
Europa

ENCEFALOPATIE HIV

Infectie HIV in SNC

1. DIAGNOSTIC SEROLOGIC
TESTE DE TRIAJ- sensibilitate inalta
ELISA
TESTE RAPIDE
TESTE DE CONFIRMARE- specificitate inalta
WESTERN BLOT
RADIOIMUNOPRECIPITAREA (RIPA)
IMUNOFLUORESCENTA INDIRECTA

2. DETECTIA DIRECTA A VIRUSULUI

SAU A PRODUSELOR VIRALE
IZOLARE VIRALA
DETECTIA ANTIGENEMIEI p24
DETECTIA ACIDULUI NUCLEIC VIRAL
(ARN HIV PLASMATIC SAU ADN HIV PROVIRAL LIMFOCITAR)

TESTE DE TRIAJ

ELISA INDIRECTA

ETAPE
1. Incubare ser pacient 1h la 37C
2. Spalare
3. Incubare conjugat (Ac anti IgG uman x enzima)- 1h la 37C
4. Spalare
5. Incubare substrat 20 30 min la temp camerei
6. Citire la spectrofotometru DO probe, martori, cut off

Distribuirea probelor cu
pipeta automata

Spalator
automat

Spectrofotometru

ELISA de competitie

ETAPE

Incubare ser pacient si conjugat 1h la 37C

Spalare
Incubare substrat 20 30 min la temp camerei
Citire la spectrofotometru DO probe, martori,
cut off

TESTE DE CONFIRMARE
WESTERN BLOT
- test imunoblot folosit pentru confirmarea prezentei anticorpilor
in diferite infectii
- se bazeaza pe detectia anticorpilor defalcati pe grupe antigenice

UTILIZARE
Detectia

proteinelor virale
Caracterizarea preparatelor de anticorpi
mono- si policlonali
Determinarea specificitatii raspunsului
imun impotriva antigenelor virale

PRINCIPIU
Proteinele

dintr-un lizat viral sunt separate

electroforetic dupa greutatea moleculara
prin SDS-PAGE (sodium dodecil sulfat)
Transferate pe o membrana de
nitroceluloza
Detectie prin anticorpi marcati radioactiv
(autoradiografie) sau enzimatic
(COLORIMETRIC)

ELECTROFOREZA
Pe

gel de poliacrilamida
Apoi proteinele sunt transferate pe o
membrana de nitroceluloza prin difuzie,
electroforeza sau prin afinitate
Fixarea se face prin simpla absortie
pasiva, prin legaturi covalente pe
membrana diazotata sau prin legare
specifica pe membrana acoperita de
anticorpi

Tehnica
WESTERN BLOT
1. SDS-PAGE
2. BLOT (transfer)
3. DETECTIA
ANTICORPILOR

WESTERN BLOT detectia Ac serici

Substrate
Stop

color

gp160
gp120

p66

p55
p51

gp41

p31
p24

p17
p10/11
p7/9

Western blot
in infectia HIV
Criteriul minim de
pozitivitate
2 env
+
1 gag

DIAGNOSTIC SEROLOGIC
HIV

 Test

Elisa + in duplicat
WB
Este posibil acest rezultat?; explicati.

Pacient 15 ani
test de triaj infectie HIV
Ce test s-a folosit si care sunt urmatorii pasi?