Manual de Qumica Orgnica, 2 Semestre

Lic. Ciencias de la Tierra

Fac. Ciencias, UNAM

PRCTICA No.8

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

IDENTIFICACIN DE TERPENOS EN MANZANILLA
INTRODUCCIN
La cromatografa en capa fina (CF), (en ingls Thin Layer Chromatography o TLC) es una
tcnica analtica rpida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Qumica Orgnica.
Entre otras cosas permite:
- Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar as, por ejemplo, la
efectividad de una etapa de purificacin.
- Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran ser idnticas. Si, por el
contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.
- Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo desaparecen los reactivos
y cmo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber cuando la reaccin ha
acabado.
La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de
una lmina de plstico o aluminio que previamente ha
sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase
estacionaria). Entonces, la lmina se coloca en una
cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes
mezclados (fase mvil). A medida que la mezcla de
disolventes asciende por capilaridad a travs del
adsorbente, se produce un reparto diferencial de los
productos presentes en la muestra entre el disolvente y el
adsorbente.

Adsorbentes y eluyentes

Fig. 1. CCP

Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados son la gel de slice (Si 2) y
la almina (Al2O3), ambas de carcter polar. La almina anhidra es el ms activo de los dos, es
decir, es el que retiene con ms fuerza a los compuestos; por ello se utiliza para separar
compuestos relativamente apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo, teres, aldehdos y
cetonas). La gel de slice, por el contrario, se utiliza para separar sustancias ms polares
(alcoholes, aminas, cidos carboxlicos). El proceso de adsorcin se debe a interacciones
intermoleculares de tipo dipolo-dipolo o enlaces de hidrgeno entre el soluto y el adsorbente. El
adsorbente debe ser inerte con las sustancias a analizar y no actuar como catalizador en
reacciones de descomposicin. El adsorbente interacciona con las sustancias mediante
interaccin dipolo-dipolo o mediante enlace de hidrgeno si lo presentan.
El orden de elucin de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase mvil o
eluyente.
El eluyente puede ser un disolvente nico o dos miscibles de distinta polaridad. En el siguiente
recuadro se recoge por orden creciente de fuerza eluyente los disolventes ms comnmente
empleados.
Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato de etilo < acetona < 2-propanol <metanol < agua

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Usualmente se emplea una mezcla de dos disolventes en proporcin variable; la polaridad de la

mezcla ser el valor promediado en funcin de la cantidad de cada disolvente empleada. El
eluyente idneo para cada caso ha de encontrarse por "el mtodo del ensayo y del error".
OBJETIVOS
1.
2.

Extraer los metabolitos secundarios presentes en la flor de Matriacaria chamomilla

Separar por cromatografa en capa fina los terpenos presentes en el extracto de flores de
manzanilla
Comparar los Rf obtenidos experimentalmente con los reportados en literatura.

3.

ACTIVIDADES PREVIAS
Elabora un mapa conceptual con los distintos tipos de cromatografa. Indica sus
principales aplicaciones.
Investiga los metabolitos secundarios presentes en la flor de manzanilla
Investiga qu son los terpenos y su importancia mdica y ecolgica.
Dibuja las estructuras qumicas del bisabonol, camazuleno, farneseno.
Investiga cmo se calcula el Rf?
Investiga los tipos de reveladores ms frecuentes en cromatografa en capa fina.
Elabora la ficha tcnica del tolueno, acetona, acetato de etilo, alumina
TOLUENO

Prop. Fsicas
Prop. Qumicas
Punto de Fusin
Puntos de Ebullicin
Toxicologa
Usos y aplicaciones
Frmula Molecular y
Estructural

DISEO EXPERIMENTAL
I.

MATERIALES
MATERIAL

1 Cromatoglacas de silica gel

1 vaso de pp de 100 mL
2 vaso de pp de 20 mL
1 mortero de porcelana
Papel filtro
Embudo
2 tubos de ensaye
1 pipeta de 5 mL
1 Pipeta 1 mL
1 lmpara UV365
Parrilla a 60C
Capilares

SUSTANCIAS
Silicagel 60 F254 (Merck) de 10x3 cm
metanol
tolueno
Acetato de etilo

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gradilla
Parrilla de calentamiento
Mosca magntica
Cmaras cromatogrficas

PRECAUCIN!

Es necesario el uso de bata y campana de extraccin. Algunas sustancias volatilizan y pueden

causar irritacin a mucosas y piel. Evita el contacto directo con la piel y tu ropa. Notifica a tu
profesor de cualquier duda y en caso de cualquier accidente. Algunas de las sustancias son
flamables maneja con cuidado.
II.

PROCEDIMIENTO

1. EXTRACCIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Pesa 1 gr de flores de manzanilla fresca y macera con un mortero hasta homogenizar.
2. Pasa a un vaso de precipitado de 40 mL y adiciona 10 ml de acetona. Coloca una
mosca y pon en agitacin moderada en una parrilla de calentamiento durante 5 minutos
sin calor.
3. En otro vaso de precipitado de 40 mL, filtra el extracto y pon a evaporar la acetona en
bao mara o directo a la parrilla evitando cambios bruscos de temperatura. Ten cuidado
de verificar y no someter a cambios bruscos de temperatura para que no tengas un
accidente con tu material.
4. En las paredes del vaso de precipitado quedarn sustancias adheridas de tono verde
amarillento. Resuspende con 1 mL de tolueno para su evaluacin.
2. PREPARACIN DE CROMATOPLACAS EN CAPA FINA
5. Contar con una cromatoplaca de silica 60F254 de aproximadamente 4 x 10 cm. (fase
estacionaria)
6. Marca a una distancia de 0.5 cm aproximadamente una lnea con lpiz
7. Toma una muestra del extracto con un capilar
8. Coloca el capilar al centro de la lnea como muestra la figura y deposita el extracto. Deja
que se evapore un poco y repite el adicionar el extracto en el mismo punto otras 8 a 10
veces. NOTA: TEN PRECAUCIN DE NO LEVANTAR LA SILICA DE LA PLACA.
9. Prepara 10 mL de sistema de elucin Tolueno: acetato de etilo (93:7) y colocalo en
una cmara cromatogrfica. Cierra y deja que se sature con los vapores del sistema de
elucin.
10. Abre la cmara cromatografica e introduce la cromatoplaca en forma vertical, teniendo
cuidado de que el eluyente apenas se encuentre ligeramente debajo de la lnea
marcada con lpiz, para que inicie la adsorcin a travs de la slica.
11. Cierra la cmara y deja que el sistema de elucin (fase mvil), empiece a ser adsorbida.
12. Cuando la fase mvil se encuentra aproximadamente a 0.5 cm del borde superior, se
saca la placa de la cmara, se marca con lpiz hasta donde llego el eluyente y se deja
secar a temperatura ambiente o dentro de la campana de extraccin enciende para la
evaporar.
13. Se mide la distancia con una regla en milmetros del punto de aplicacin a donde se
detuvo la fase mvil, para obtener la distancia recorrida por el disolvente.

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3. REVELADO DE CROMATOPLACAS EN CAPA FINA

14. Se procede a identificar el nmero de bandas (manchas) que representan un
compuesto separado del extracto, al exponer en obscuridad a luz UV.
15. Se marcan las bandas visibles en UV365 encerrando con un lpiz y se anota la coloracin
que presenta cada mancha.
16. Se puede exponer a revelador de vainillina en H 2SO4 (0.1 g vainillina diluido en 10 mL
de cido sulfrico) por aspersin para potenciar la presencia de las bandas, se calienta
en parrilla a 105 durante 5 min. cuidando que no se queme y se vuelve a leer a UV 365.
17. Se mide las distancias con la regla en mm para cada compuesto separado en la
cromatoplaca y se realiza el clculo del Rf.
REGISTRO DE OBSERVACIONES, DATOS, RESULTADOS Y EVIDENCIAS EXPERIMENTALES

I.

Elabora el diagrama de flujo para la experiencia prctica

II.

Registro de resultados
Completa el cuadro con la coloracin de la banda y la distancia a la que se localiza
Nmero de banda Coloracin a UV365
1
2
3
4
5
6

Distancia en mm del punto de aplicacin

III.

Calculo del Rf para cada compuesto separado.

IV.

Tabla 1 de los compuestos separados del extracto de flor de manzanilla

Nmero de banda
1
2
3
4
5
6

Rf

Posible compuesto

ANLISIS DE RESULTADOS
Las siguientes preguntas son slo una gua para que elabores tus anlisis de resultados, no te
limites a ellas. Tus aportaciones sern valiosas para tu aprendizaje.
1. De acuerdo a pruebas analticas de los terpenos presentes en la flor de manzanilla se
mencionan 6 posibles constituyentes dentro del aceite esencial de la flor. En el extracto
que obtuviste se logro identificar el mismo nmero de compuestos. Argumenta.
2. Consideras que el valor de Rf es confiable para determinar que compuestos se pueden
aislar. Argumenta.
3. De las tcnicas de cromatografa existentes, que ventajas y desventajas encuentras en
cada una de ellas.
4. Explica que importancia se tiene en el tipo de disolventes que forman la fase mvil y si
la utilizada en esta experiencia prctica es eficiente o puedes sugerir otra.

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ACTIVIDAD EXTRACLASE:
De la lectura del artculo de Ormeo, E. y Fernndez, C. Los terpenos de las plantas.
Investigacin y Ciencia: 2012: 62-69 In http://www.thcterapeutico.com/wpcontent/uploads/2013/05/terpenos.pdf Recuperado el 30 de abril de 2013.
Realiza un ensayo mximo de dos cuartillas sobre el impacto ambiental de los terpenos y
entrega como parte de la actividad prctica.
CONCLUSIONES
1. Anota 5 oraciones donde sintetices si se cumpli el objetivo de la prctica y los resultados
obtenidos.

MANEJO DE
RESIDUOS

Recuperar por un mtodo de destilacin los disolventes. Enviar a incineracin los residuos de
extraccin.
BIBLIOGRAFA DE CONSULTA

1. Abbott D. Y Andews R. S. (1970). Introduccin a la Cromatografa, 3a ed., Alhambra, Madrid.

1970.
2. Ault A., (1998). Techniques and Experiments for Organic Chemistry. University Science
Books, US.
3. vila Z. G. et al.(2001). Qumica Orgnica, Experimentos con un enfoque ecolgico,
Direccin General de Publicaciones y Fomento Editorial, UNAM, Mxico.
4. Bates R.B., Schaefer J.P. (1977). Tcnicas de Investigacin en Qumica Orgnica, PrenticeHall Internacional, Madrid.
5. Clement B., (2002). Organic Chemistry Laboratory Manual, Texas A&M University, USA.
6. Fessenden R .J. and Fessenden J. S. (1993). Organic Laboratory Techniques, Brooks/Cole,
USA.
7. Hammond C.(1999). Experimental Organic Techniques, Freeman, USA, 1999.
8. Pavia D. L., Lampman G. M. and Kriz G.S. (1988). Introduction to Organic Laboratory
Techniques, a Contemporary Approach, 3rd. ed.. Saunders College, Fort Worth.
9. Valencia P, G.A. y Martnez, A. (2001). Gua para el reconocimiento de drogas vegetales por
cromatografa en capa fina. Medelln, Colombia. In [http://farmacia.udea.edu.co/~ff/control
%20de%20calidad%20ff.pdf] recuperado el 15 de enero de 2013
ANEXO