Sunteți pe pagina 1din 2

LP 3 Determinarea activitii amilazei / 2 ore

Determinarea activitii amilazei: principiul


rezultatelor, valori normale, variaii patologice.

metodei,

interpretarea

Amilazele sunt enzime care catalizeaz hidroliza legturilor glicozidice din


amidon, glicogen i poliglucidele derivate ale acestora, ducnd la formarea de
molecule mai mici precum maltoz, dextrine, glucoz.
In cavitatea bucala actioneaza amilaza salivara (ptialina) ce hidrolizeaza
amidonul si glicogenul.
Determinarea activitii amilazei prin metoda Wohlgemuth
Principiul metodei
Amilaza catalizeaz hidroliza amidonului n compui cu mas molecular din ce n ce
mai mic, care pierd proprietatea de a se colora cu iodul.
n 10 eprubete se fac diluii succesive ale probei de ser. Se pune apoi n fiecare din
ele amidon i iod i se observ coloraia. Se apreciaza cantitatea minima de ser necesara
hidrolizei amidonului.
Reactivi
Solutie NaCl 0,9%
Solutie iod 0,1N
Solutie amidon 0,1%
Proba
Ser sau urina
Tehnica de lucru
Se pregatesc 10 eprubete.
In prima eprubeta se pipeteaza 2 ml ser iar in celelalte 9 se pune cate 1 ml NaCl.
Din prima eprubeta se ia 1 ml si se pune in eprubeta 2, din eprubeta 2 se ia 1 ml si se
pune in eprubeta 3, samd. In ultima eprubeta se ia 1 ml si se arunca.
Se adauga in toate eprubetele cate 2 ml solutie amidon.
Se agita si se introduc in termostat la 370C 30 min.
Dupa racire se adauga in fiecare eprubeta cate 3 picaturi de iod 0,1N.
Eprubetele se agita si se observa culoarea.

nr.
1
eprubeta
dilutia
1/1
serului
activitatea 2
amilazica
(UW)

10

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

16

32

64

128

256

512

1024

Interpretarea rezultatelor
Culoarea eprubetelor reflecta gradul de hidroliza al amidonului:
mare)

- eprubetele colorate n albastru conin amidon nehidrolizat (diluia probei a fost prea
- eprubetele colorate n violet conin amilodextrine
- eprubetele colorate n brun-roscat au hidroliza incompleta, conin eritrodextrine
- eprubetele colorate slab glbui conin amidon partial hidrolizat, contin flavodextrine
- eprubetele incolore conin amidon complet hidrolizat
Activitatea amilazei se exprima in unitati Wolgemuth (UW)

1 UW reprezinta cantitatea minima de enzima capabila sa hidrolizeze 1 mg de


amidon, in 30 min la 370C.
1 UD (unitate diastazica) reprezinta cantitatea de enzima capabila sa
hidrolizeze 0,2 ml amidon in conditiile descrise.
1 UW = 2n UD
Unde:
n = nr ultimei eprubete in care nu apare culoarea albastra (amidonul a fost hidrolizat)
Calcul
Se calculeaza cantitatea de amidon (mg) hidrolizata de amilaza continuta in 1 ml ser.
Rezultatul exprimat in UW se obtine inmultind titrul dilutiei ultimei eprubete in care nu
apare culoarea albastra cu 2.
Ex. eprubeta 4 este eprubeta dinaintea celei in care a aparut culoarea albastra
1/8 ml ser.........2 ml amidon 0,1%
1 ml ser............x
X = 2 x 8 = 16
Valori normale
Amilazemie ser: 16 32 UW
Amilazurie urin: 8 64 UW
Variaii patologice
Valori crescute ale amilazei n ser:
- pancreatite acute i cronice, insuficien renal, carcinom de cap de pancreas,
obstrucii intestinale, ulcer perforat, colici biliare, afeciuni ale glandelor salivare, intoxicaii
acute cu alcool;
Afectiune genetica macroamilazemie apar molecule mari de enzima ce nu pot fi excretate
de rinichi.
Valori crescute n urin: ulcer, colici biliare
Valorin sczute ale amilazei n ser
- ciroze, carcinom hepatic, hepatite, alcoolism