Objetivos

Llevar a cabo la identificacin del principio activo

Paracetamol en una forma farmacutica slida,
mediante el tiempo de retencin obtenido en HPLC

Prctica #4. Determinacin de

acetaminofn en tabletas por
HPLC
6/Abril/2016

Determinar la concentracin del principio activo presente

en la forma farmacutica proporcionada para lo cual se
utilizarn las reas bajo la curva obtenidas con la
sustancia de referencia y muestra.

Resultados

Estndar
Muestra 1

Muestra 2

Paracetam
ol

Rplica
a)
b)
c)
a)

t
3.833
3.793
3.773
3.760

rea bajo la curva

2259670
2245061
2237481
2063932

b)
a)
b)

3.747
3.733
3.720

2057339
2047132
2038936

PARACETAMOL

X= 2247404
DER= 0.5018
X=
2060635.5
DER= 0.2262
X= 2043034
DER= 0.28

Calculo de la concentracin prctica

Ast

[] St

AM1

M 1
(1657791.500)( 0.0101796
M 1=

Ast

St

AM2

M 2

mg
)
mL

1775692.333

(1675157.500)(0.0101796
M 2=

1775692.333

Calculo del %
Teorica

100%

(100 )(0.009503
Practica

Teorica

M 1 =
0.0100

mg
mL

=95.03

100%

(100 )( 0.009603
Practica

mg
)
mL

M 2 =

mg
0.0100
mL

mg
)
mL

=96.03

=0.009503

mg
)
mL

mg
mL

=0.009603

mg
mL

Calculo de mg de paracetamol
Mg de paracetamol=DC(Am/Aref)
Factor de dilucin (D) = 2500
C= 0.0101796 mg/mL
Am1=1657791.5
Am2=1675157.5
Aref=1775692.333

mg de paracetamol=( 2500 ) ( 0.0101796 )

=23.7592mg
( 1657791.500
1775692.333 )

mg de paracetamol=( 2500 ) ( 0.0101796 )

=24.0081mg
( 1675157.500
1775692.333 )

Discusin
El acetaminofn, compuesto polar, con electrones libres en el tomo de nitrgeno y oxgeno, contiene
diferentes especies que acompaan a la muestra como excipientes, saborizantes, colorantes,
conservantes, los cuales pasarn en un tiempo de retencin diferente al del analito lo que posteriormente
favorecer la exactitud de la cuantificacin, ya que quedan adheridos a la fase de la columna.
Particularmente se esperara que el analito pase primero que los excipientes, pues estos poseen en su
mayora anillos y heterotomos que le disminuyen polaridad.
En la tabla de los resultados se puede observar que las concentraciones obtenidas en las muestras 1 y 2
estan por debajo de la concentracin que mostro el estndar, sin embargo las desviaciones estndar que
dieron las muestras quedaron dentro del rango de las condiciones cromatogrficas sealadas, Se calcul
tambin la concentracin utilizada de estndar y de muestra problema en cada una de las diluciones
llevadas a cabo Por lo que se llev una buena separacin del acetaminofn, y adems con esta tcnica se
pudo calcular la concentracin prctica del producto gracias al rea bajo la curva obtenida por el detector.
Conclusiones

El mtodo cromatogrfico de HPLC tiene una alta reproducibilidad en tiempos de retencin y rea
bajo la curva para la determinacin de la concentracin practica del paracetamol
Una tableta de 500mg de Quitadol tiene entre un 95 % a 96% de Acetaminofen siendo un contenido
de 475 mg por cada una aproximndose a la especificacin del productor de 500 mg netos
contenidos de paracetamol

CUESTIONARIO
1. Defina los siguientes trminos:
Volumen de elusin. Es el volumen de eluyente requerido para causar la elusin. Bajo
condiciones normales de una mezcla conocida de los solutos en una cierta tcnica, el
volumen de elucin puede ser suficiente informacin para identificar los solutos.
Volumen de columna. Volumen cero o muerto (V0 o Vm). Es el volumen de eluyente
que se consume sin que se detecte ningn componente. Se define igual que el
volumen de retencin pero el tiempo utilizado es el tiempo muerto:

El volumen extra en columna representa el volumen total de todos los

componentes del sistema y conducciones capilares que no estn directamente
involucrados en el proceso de separacin, desde el punto de inyeccin de la
muestra hasta la deteccin.
Este volumen extra debe ser minimizado a fin de evitar la formacin de picos anchos y una
disminucin en la eficacia de la columna adems de perder resolucin cromatogrfica.
Tiempo muerto (t0 o tm). Es el tiempo de retencin del componente inerte o gas portador.
Tiempo de retencin (tr). Es el tiempo transcurrido entre el instante en que se introduce la
mezcla y el instante en que se detecta la seal propia del componente en su mxima
intensidad. Los tiempos de retencin no son reproducibles, ni siquiera en una misma
columna cromatogrfica.
Tiempo de retencin relativo. Es la razn entre los tiempos de retencin corregidos del
componente considerado, i, y de otro, p, que se toma como patrn de referencia:
Lnea base. Es la porcin del cromatograma que registra la respuesta del detector cuando
solo sale de la columna el gas portador.
Resolucin. Es el parmetro que expresa el grado de separacin que se puede obtener en
un sistema cromatogrfico para dos componentes dados. Relaciona la capacidad
separadora de un sistema cromatogrfico para dos componentes. Se define como:

Donde Rs es

la

resolucin, tRA y tRB son

los

tiempos

de

retencin

de

los

componentesA y B, y aA y aB son las anchuras de los picos del cromatograma de los

anteriores componentes.
La resolucin puede observarse directamente sobre el cromatograma de picos. Se tendr
una buena resolucin si los picos no se solapan, y est perfectamente delimitado cada pico,
sin que coincida el final de uno con el principio del siguiente.
Si el valor de la resolucin est prximo a 0,7 se obtendr una mala resolucin quedando
los picos solapados, de forma que se distinguen las crestas, pero no la base, y si el valor de
la resolucin est prximo a 1,5 se obtendrn unos picos bien delimitados por lo que se
obtendr una buena resolucin.
Una pobre resolucin es debida principalmente a:

Hay demasiada muestra en la columna.

La columna o placa es corta.

La fase mvil no discrimina entre los componentes.

La columna es demasiado gruesa.

 Eficiencia. Para definir la eficacia se utiliza el concepto de piso terico, y se define ste
como la seccin terico-transversal en la cual se realiza el equilibrio de particin durante el
flujo de fase mvil. Cuanto mayor se el nmero de platos terico (N) mayor ser la eficiencia
de la columna.
El nmero de platos tericos mide la capacidad de la columna para separar los
componentes, no la retencin de los mismos. La eficiencia o el nmero de platos se puede
observa directamente a partir del cromatograma, observando la agudeza de los picos.

Donde N es

el

nmero

de

platos

tericos, L es la longitud de la columna, H es la altura de cada plato, t'R es el tiempo

corregido de retencin de un componente y ai es la anchura del pico cromatogrfico. Y:

Si H tiene un valor pequeo, la distancia entre platos es menor y por tanto la eficiencia ser
mayor. Por el contrario, si H es grande la columna es poco eficiente para separar ese
componente ya que sus molculas estarn muy difundidas.
La velocidad de la fase mvil influye en la eficiencia del sistema cromatogrfico, ya que si la
velocidad es pequea los componentes tendrn ms tiempo parta que se pueda realizar el
equilibrio de reparto, por lo que el nmero de platos ser mayor y la altura de los platos
menor.

2.

Proporcione ejemplos de otros 3 frmacos que puedan determinarse por HPLC.

Carbamacepina
Etosuximida
Fenobarbital

3. Qu sensibilidad de deteccin puede alcanzar este mtodo?

99.9%
4. Qu contaminante puede encontrarse presente en Paracetamol (acetaminofn) materia prima
como producto de degradacin?
Adems de paracetamol, los dems componentes (excipientes) son celulosa polvo, celulosa
microcristalina, estearato magnsico, almidn de maz y dixido de silicio, estos pueden ser
contaminantes en la muestra. Los excipientes son los componentes del medicamento diferentes del
principio activo (sustancia responsable de la actividad farmacolgica). stos se utilizan para
conseguir la forma farmacutica deseada (cpsulas, comprimidos, soluciones, etc.) y facilitan la
preparacin, conservacin y administracin de los medicamentos. Es el nico componente que
puede diferir cuando comparamos un medicamento genrico y su equivalente de marca.
5. Por qu se requieren disolventes de alta pureza grado HPLC, en cromatografa de lquidos de alta
resolucin?

Porque es un mtodo muy sensible y para obtener buenos cromatogramas y para que sea
compatible con el detector, el grado de pureza en el disolvente es importante para que este no
modifique su sensibilidad ni contamine la muestra ya que si est contaminada puede producir picos
indeseables
6. Qu se entiende por un sistema isocrtico y uno en gradiente?
Isocrtico, el solvente conserva la misma concentracin durante todo el tiempo de corrida
(muestreo o anlisis), sea que se trate de un solvente puro o de mezclas de solventes.
Gradiente, lo cual significa que la concentracin del solvente utilizado vara durante la corrida. Esto
depende del tipo de muestra, de columna y de la necesidad del anlisis de mejorar alguna separacin
(depende del analista o investigador). La idea es que la fuerza de arrastre de la fase mvil aumente
gradualmente durante la corrida, de modo que pueda desplazar a los compuestos que se encuentren ms
fuertemente retenidos en la fase estacionaria

Bibliografa

Douglas A.Skoog, Introduccin a la Qumica Analtica Ed Revert S.A. 1986 Espaa

Harris (1992) Analisis Quimico Cuantitativo Ed. Iberoamericana, Mxico
Willard, L Merritt, Jr Dean, J.A. y Settle, F.A. Jr. (1991) Metodos instrumentales de
Anlisis. Ed Iberoamericana, Mxico