Sunteți pe pagina 1din 4

ESTIMAREA DENSITII POPULAIILOR MICROBIENE

Numrarea microorganismelor se executa in mod frecvent in laboratorul de


microbiologic, in vederea aprecierii stadiului de multiplicare a celulelor din diferite
culturi folosite in industrie sau pentru determinarea gradului de contaminare a unor
produse, in special alimentare. Pentru a asigura o numrare rapida si in acelai timp
precisa, innd cont ca incarcatura microbiana a diferitelor produse si culturi poate sa
fie foarte ridicata, se recomanda in prima etapa sa se efectueze diluri ale produsului
supus analizei microbiologice.
1. TEHNICA OBINERII DILUIILOR DECIMALE
Dup recoltare, la omogenizarea probelor destinate analizei microbiologice, se
recomanda ca raportul intre produs si diluant sa fie de 1:10, obinndu-se astfel prima
diluie (diluie 10-1). Pentru efectuarea urmtoarelor diluii decimale, cu o pipeta
sterila, se barboteaza lichidul pentru omogenizare, se recolteaz 1 mL din diluia I si
se scurge lichidul in alta eprubeta cu 9 mL ser fiziologic steril, obinndu-se diluia a
II-a (diluie 10-2 ) si se continua procedeul pana la obinerea diluiei necesare. Gradul
de diluare este condiionat de numrul presupus de microorganisme din proba de
analizat; cu cat numrul este mai mare, cu att se fac mai multe diluii. Pentru
majoritatea produselor sunt suficiente 4 - 8 diluii succesive.
Cnd se face numrarea celulelor dintr-o anumita diluie considerate
corespunztoare, numrul obinut se multiplica cu coeficientul de diluie "k", pentru a
obine numrul de celule existent in produsul iniial (pentru d-I, k = 10, pentru d-II,
k= 100 etc).
Pentru evitarea erorilor se recomanda omogenizarea coninutului eprubetelor in
care s-a fcut diluarea fie prin rotirea eprubetei intre palme, fie, cu ajutorul pipetei
sterile, prin barbotare, nainte de recoltarea volumului de 1 mL destinat urmtoarei

diluii. Se iau toate masurile de precauie pentru a evita contaminarea cu


microorganisme din mediul ambiant, lucrnd in zona de protecie din jurul flecarii
becului de gaz si respectnd regulile de manipulare

Figura 1. Tehnica obinerii diluiilor decimale


Dup efectuarea diluiilor decimale, numrarea microorganismelor se poate realiza
prin metode directe, cu ajutorul camerelor de numrare sau prin metode indirecte.
2. ESTIMAREA DENSITII POPULAIILOR MICROBIENE CU
AJUTORUL CAMEREI THOMA/NEWBAUER
Estimarea densitii populaiilor microbiene cu ajutorul camerei Thoma este o
metoda directa de numrare a celulelor, rapida si uor de efectuat, cu utilizri in
stabilirea dinamicii de acumulare a celulelor microbiene intr-un mediu de cultura, in
scopul urmririi formarii de biomasa, de obinere a unui inocul sau in diferitele
procese fermentative. Metoda prezint dezavantajul ca nu deosebete celulele vii de
cele moarte, este greu de aplicat pentru bacterii de dimensiuni mici, necesita
suspensii celulare destul de dese si nu este foarte exacta.
Principiul metodei: Camerele de numrat reprezint lame de sticla prevzute cu
trei platforme, din care platforma centrala este denivelata fata de celelalte doua cu
0,10 mm. Camera Thoma prezint o reea cu suprafaa de 1 mm , divizata in 400
microcelule elementare, numrtoarea facandu-se in grupuri de 16 microcelule.

Figura 2. Reprezentarea schematica a camerei Thoma- lateral

Figura 3. Camera Thoma - reeaua de numrare


Materiale utilizate:
- suspensii de celule de drojdie si spori de mucegai in apa;
- lamele;
- camera Thoma/ Newbauer;
- pipete sterile.
- microscop.
Mod de lucru:
Se executa. un preparat umed, plasnd suspensia de celule pe suprafaa reelei.
Se aseaza lamela, care, sprijinindu-se pe cele doua platforme laterale, va delimita
inaltimea stratului de lichid, egala cu adncimea camerei (0,1 mm). Preparatul astfel
obinut se fixeaz cu cleme de platina microscopului si se caut imaginea reelei. In

cmpul microscopic, prin deplasarea platinei se pot aduce grupe de cate 16


microcelule elementare si se face numrarea celulelor de drojdii. Se exclud de la
numrare celulele care se afla cu mai mult de jumtate din suprafaa celulei in
exteriorul careului de 4 x 4. Se fac numrri din mai multe cmpuri microscopice
(minimum 5) si se calculeaz numrul mediu de celule dintr-o microcelula.
Calculul

numarului

de

celule

pentru

masuratori

cu

camera

Thoma/Newbauer
Cunoscnd suprafaa unei microelement si volumul su (inscrise pe camera
Thoma) in funcie de diluia folosita la numrare, se poate calcula numrul de celule
prezente intr-un cm lichid de analizat. cu formula:
N n 4000 1000 k - camera Thoma
N

nr. celule
nr. microcelule 10 4 k

- camera Newbauer

in care: n = numrul mediu de celule pe microcelula; 4000 = volumul microcelulei, in


cm3 ; 1000 = factor de transformare in cm3; k - coeficientul de diluie.

S-ar putea să vă placă și

  • 5-Halogenoacizi Hidroxiacizi
    5-Halogenoacizi Hidroxiacizi
    Document22 pagini
    5-Halogenoacizi Hidroxiacizi
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Peptide Si Proteine
    Peptide Si Proteine
    Document23 pagini
    Peptide Si Proteine
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Peptide Si Proteine
    Peptide Si Proteine
    Document23 pagini
    Peptide Si Proteine
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Heterocicli 2 2014
    Heterocicli 2 2014
    Document26 pagini
    Heterocicli 2 2014
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • 4-Halogenoalcooli Fenoli Carbonilici
    4-Halogenoalcooli Fenoli Carbonilici
    Document18 pagini
    4-Halogenoalcooli Fenoli Carbonilici
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Grile Management
    Grile Management
    Document3 pagini
    Grile Management
    RalucaRa Fa
    Încă nu există evaluări
  • Ajfdj
    Ajfdj
    Document6 pagini
    Ajfdj
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Eoetithjrn
    Eoetithjrn
    Document2 pagini
    Eoetithjrn
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Procese de Conservare
    Procese de Conservare
    Document5 pagini
    Procese de Conservare
    Andreea Andrei
    Încă nu există evaluări
  • JSDLA
    JSDLA
    Document4 pagini
    JSDLA
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • TATA
    TATA
    Document3 pagini
    TATA
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • KHBIOL
    KHBIOL
    Document11 pagini
    KHBIOL
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Ajfdj
    Ajfdj
    Document6 pagini
    Ajfdj
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • L12
    L12
    Document5 pagini
    L12
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Ajfdj
    Ajfdj
    Document6 pagini
    Ajfdj
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • L12
    L12
    Document5 pagini
    L12
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Procese de Conservare
    Procese de Conservare
    Document5 pagini
    Procese de Conservare
    Andreea Andrei
    Încă nu există evaluări
  • L12
    L12
    Document5 pagini
    L12
    Mirela Marin
    Încă nu există evaluări
  • Procese de Conservare
    Procese de Conservare
    Document5 pagini
    Procese de Conservare
    Andreea Andrei
    Încă nu există evaluări