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LICEO DE CARIARI

PROGRAMA DE BACHILLERATO INTERNACIONAL


Prof. MSc. Mauricio Prez Gutirrez
Biologa NM
Estudiante. Steven Ziga Corrales

Trabajo prescrito N 3
Actividad enzimtica

Efecto de diferentes niveles de temperatura en la actividad enzimtica de la catalasa


presente en el tejido del hgado de Bos taurus.

1. Revisin de la literatura
Las enzimas son partes fundamentales en los procesos metablicos de los seres vivos. Estas
son molculas de naturaleza protenica que aceleran las reacciones bioqumicas (Franco
2007 p. 414). Estas protenas funcionan como catalizadores biolgicos que disminuyen la
energa de activacin de las reacciones que catalizan, de forma que aceleran sustancialmente
la tasa de reaccin. Existen miles de tipos diferentes de enzimas presentes en los organismos
vivos, las cuales son muy especficas para determinadas reacciones. Por ejemplo, la enzima
catalasa, la cual se encuentra en mayores concentraciones en rganos como el hgado y los
riones y ms baja en el tejido conectivo y los epitelios (Cspedes, et al. 1996). Estas
enzimas catalizan la descomposicin del perxido de hidrgeno, transformndolo en agua
y oxgeno (Daz 2006 p. 19). El perxido de hidrogeno es un radical libre, este tipo de
molculas son todas aquellas especies qumicas, cargadas o no, que en su estructura atmica
presentan un electrn desapareado o impar en el orbital externo, dndole una configuracin
espacial que genera gran inestabilidad. (Venereo 2002 p. 128). El H2O2, es un radical libre
toxico para las clulas; de manera que, su sintetizacin ayuda a los procesos biolgicas que
tienen lugar dentro de estas. Daz (2006) afirma que las actividades de la catalasa protegen
no slo de forma directa eliminando aniones suproxido y perxido de hidrgeno,
respectivamente, sino que tambin impiden la formacin del radical hidroxilo OH; la especie
reactiva derivada del oxgeno con mayor poder oxidante. (p. 19). Existen algunos factores
que inhiben en las reacciones de las enzimas. Segn Franco (2007) las enzimas son
inestables a altas temperaturas, a valores extremos de pH, etc., lo que eleva el costo al reducir
la vida til de la enzima. (p. 414). Altas temperaturas y un pH muy cido o alcalino pueden
desnaturalizar las enzimas, dejndolas incapaces de realizar la catlisis. Investigaciones
previas indican el efecto de la temperatura en la actividad enzimtica. Por ejemplo, Salas y
Lafuente (1999) demuestran que la catalasa puede ser una mejor enzima antioxidante al
operar en calor-inducido por la tolerancia de refrigeracin de frutas almacenados en fro de
mandarina Fortune (p. 2410). De la misma manera, existen unas molculas llamadas
inhibidores que reemplazan al sustrato porque presentan una estructura molecular similar y
se adhieren al sitio activo de la catalasa influyendo en su actividad enzimtica. Algunos de
estos son el cianuro, la azida, el sulfuro, la hidroxilamina, el paracetamol, la bleomicina, la
adriamicina, la benzidina y el paraquat (Cspedes, et al. 1996). Tambin, la concentracin
1

del sustrato puede inhibir en la catlisis de la enzima. Un estudio cintico muestra que la
catalasa de hgado de bovino (BLC: bovine liver catalase), que es una catalasa pequea, se
inhibe reversiblemente y se inactiva irreversiblemente a partir de 200 mM de H2O2
(Mestdagh, et al. 1996 p. 222).
El estudio de las enzimas catalasa es pertinente porque las especies de oxgeno reactivas
como el radical superxido, el radical hidroxilo y el perxido de hidrgeno (H2O2) se forman
durante la reduccin del dioxgeno en agua. Estas especies pueden daar las protenas, los
lpidos y los cidos nucleicos (Daz 2003 p. 76). Por lo que, la sntesis de estos radicales
libres contribuyen a mantener las clulas del organismo en buen estado. As mismo, hay
inhibidores de la catalasa usados en la medicina para distribuir un medicamento por el
organismo de forma ms eficiente; por ejemplo, la bleomicia y el paracetamol.
La desnaturalizacin de la enzima catalasa por altas temperaturas es uno de los principales
factores por los que se lleva a cabo esta investigacin. Esta desnaturalizacin puede tener
darse en organismos con una temperatura corporal muy alta (fiebre), causando problemas
graves de salud. Especialmente, en las enzimas presentes en el tejido de hgado, porque este
cumple el papel de recuperar y transformar numerosos txicos para hacerlos inofensivos
antes de eliminarlos y destruir los glbulos rojos y los glbulos blancos envejecidos, as como
ciertas bacterias presentes en la sangre. De manera que, la desnaturalizacin de las enzimas
del hgado podra afectar sus procesos metablicos. Por lo tanto, el objetivo de esta
investigacin es analizar el efecto que tienen diferentes niveles de temperatura en la actividad
enzimtica de la catalasa presente en el tejido del hgado.

2. Pregunta de investigacin
Qu efecto tienen diferentes niveles de temperatura en la actividad enzimtica de la
catalasa presente en el tejido del hgado de Bos taurus?

3. Hiptesis
H0: No hay diferencia significativa en los efectos sobre la actividad enzimtica de la
catalasa entre los niveles de temperatura.
H1: Hay diferencia significativa en los efectos sobre la actividad enzimtica de la catalasa
en al menos dos niveles de temperatura.

4. Variables
Independiente
Temperatura (C)
2

Niveles de la variable independiente


10 C

20 C

30 C 40 C

50 C

Dependiente
Actividad enzimtica de la catalasa
Controladas
Exposicin directa de la enzima catalasa al fuego
Masa de las muestras de hgado
Tiempo de medicin del porcentaje de oxgeno (60 s)
Inhibidores de la catalasa
Cantidad de sustrato
Enzimas catalasa presentes en el tejido epitelial de la mano.
Temperatura
No controladas
Bajas temperaturas antes del experimento (enfriamiento para mantener el hgado en un
buen estado)
Cantidad exacta de enzimas presentes en la muestra de hgado.

5. Seguridad en el laboratorio

El mechero de alcohol puede causar quemaduras si es usado de forma incorrecta. Se


debe tener mucho cuidado a la hora de utilizarlo. Al encenderlo, las manos no pueden
tener sustancias inflamables como el alcohol. Tampoco se debe intentar encenderlo
con los guantes de ltex puestos. Tambin, se debe utilizar lejos de los reactivos y
otras sustancias inflamables y ponerlo en superficies estables porque el mechero es
de vidrio; por lo que, si se quiebra mientras la flama est encendida, podra causar un
incendio por el alcohol que tiene adentro.
Cuando el tubo de ensayo se encuentre a temperaturas mayores a 38 C, se deben
utilizar pinzas para tubo de ensayo. Si se manipula con las manos desnudas, las altas
temperaturas podran causar quemaduras.
En caso de una quemadura, se debe cubrir la zona afectaba con un pao limpio y
acudir al mdico.

Los instrumentos de vidrio (probeta, vaso de precipitados, etc.) al quebrarse pueden


convertirse en objetos punzo cortantes. Se deber tener cuidado con el uso de estos
instrumentos para evitar que se quiebren. Si alguno se quiebra, se debe recoger las
partes del vidrio quebradas con una escobilla y sacarlas con una palilla. No intente
amontonar los vidrios con la mano, porque podran incrustarse en su piel. Si lo hace,
debe hacerlo con guantes. En caso de que el instrumento se quiebre en la mano y
partes del vidrio se incrusten directamente en ella, se deber colocar la mano en el
chorro de agua del grifo para remover los fragmentos microscpicos y luego usar una
pinza para sacar los fragmentos incrustados. (Ziga 2016 p.3)

El bistur es un instrumento de laboratorio sumamente afilado. Se recomienda tener


mucho cuidado al manipularlo. Se debe usar el empaque de la cuchilla para unirla con
el mango. Nunca se tiene que sostener de la cuchilla, solo puede hacerse desde el
mango. En caso de un accidente, cubra la herida con un pao limpio hasta que el
sangrado se detenga, luego desinfctela con alcohol. Si la herida es muy profunda, no
para de sangrar o se encuentra en una arteria, se debe hacer lo anterior y acudir
inmediatamente al mdico. (Ziga 2016 p.4)

Se debe evitar el contacto del reactivo H2O2 con los ojos y mucosas. Por lo que, para
manipularlo se deben usar los guantes de ltex; ya que, si se hace con las manos
desnudas, se podra inconscientemente frotar los ojos. En caso de que entre en sus
ojos, se deben enjuagar inmediatamente con abundante agua. Si se ingiere, se debe
enjuagar la boca y tomar agua.

6. Mtodo experimental
6.1 Materiales
Tabla 1. Materiales e instrumentos utilizados en el mtodo experimental

Una probeta
graduada 5 ml
0,05
Un vaso de
precipitados 200 ml
5 tubos de ensayo
Termmetro de
mercurio 1,0
Guantes de ltex
Balanza analtica
0,01
1 litro de agua
Una hielera

Cubos de hielo
Un mechero de
alcohol
Embudo simple
Vidrio de reloj
Mortero con pistilo
2 gradillas para
tubos de ensayo
Pinzas para tubo de
ensayo
Un bistur
Trpode

Rejilla metlica
Sensor de oxgeno
Vernier
Fsforos
Perxido de
hidrgeno (agua
oxigenada)
Hgado de res (800
g)
Servilletas

6.2 Procedimientos
1. Calibracin del sensor de oxgeno
Para calibrar el sensor de oxgeno se debi esperar 15 minutos para que este
detectara el porcentaje de oxgeno presente dentro del laboratorio.
2. Rotulacin de los tubos de ensayo
Se utilizaron 5 tubos de ensayo
En cada tubo de ensayo se escribi con un marcador el nivel de temperatura
correspondiente.
En el primer tubo de ensayo se escribi el nivel de 10 C, en el segundo 20 C y as
sucesivamente hasta llegar a los 50 C.
3. Extraccin de las muestras del hgado
Se sac los 800 g de hgado de la hielera. Se coloc anteriormente ah para que el
hgado se mantuviera en buen estado.
Posteriormente, el hgado fue puesto en agua a temperatura ambiente para que su
temperatura se regulara.
Se utiliz un bistur para extraer una muestra del hgado.
Se pes dicha muestra con la balanza analtica
Luego, se puso la muestra en una caja de Petri para mantenerla aislada del ambiente.
Se hizo lo mismo con las 5 muestras por nivel de temperatura.
Se procur que todas las muestras tuviesen igual masa; por lo que, si alguna
sobrepasaba o disminua los 30,79 g era cortada con el bistur hasta acercarse a la
cantidad de gramos requerida.
Para manipular las muestras de hgado se utilizaron guantes de ltex.
4.

Preparacin del sustrato (perxido de hidrgeno)


Se utilizaron 2 ml de H2O2 para todos los niveles de temperatura
Para medir los 2 ml se utiliz una probeta graduada de 5 ml 0,05.
Una vez se tuvo los 2 ml en la probeta, estos fueron vertidos en un tubo de ensayo
pequeo y posteriormente fueron colocados en una gradilla.
Este procedimiento se hizo 5 veces para los 5 niveles de temperatura.
5. Preparacin de la muestra de hgado para ser inducida en los niveles de
temperatura
Se sac la muestra de hgado de la caja de Petri
Se coloc la muestra en el mortero
Se midieron 5 ml de agua utilizando la probeta graduada
Se agregaron los 5 ml de agua en el mortero junto con la muestra para que esta
quedara ms liquida y fuese ms fcil aumentar y disminuir su temperatura.
5

Tambin, para poder medir la temperatura con el termmetro de mercurio


directamente del tubo de ensayo.
Se utiliz el pistilo para machucar el hgado. Se procur machucarlo y no revolverlo
porque al hacerlo se crea energa cintica la cual podra aumentar la vibracin de las
molculas y aumentar su temperatura.
La mezcla resultante fue agregada a un tubo de ensayo para luego aumentar o
disminuir su temperatura.
6. Induccin de la muestra de hgado a 10 C y 20 C
Una vez hecho el procedimiento anterior, se procedi a inducir la muestra de hgado
a 10 C
Para hacerlo, se agreg agua en un vaso de precipitados de 200 ml y luego se
agregaron cubos de hielo.
Despus, se midi la temperatura del agua utilizando un termmetro de mercurio
1,0.
Se continu agregando hielo hasta que la temperatura estuviese por debajo de 10
C. Se procur que esta no estuviera muy alejada los 10 C.
Luego, se sac el termmetro y se esper a que este volviera a la temperatura
ambiente.
Subsiguientemente, se coloc el tubo de ensayo rotulado con los 10 C y con su
muestra de hgado correspondiente dentro del vaso de precipitados.
Posteriormente, se introdujo el termmetro dentro del tubo de ensayo y se esper a
que este marcara los 10 C.
Se hizo el mismo procedimiento con el nivel de temperatura de 20 C. No obstante,
se utiliz mucho menos hielo.
7. Induccin de la muestra de hgado a 30 C
Para este nivel de temperatura, igual que con los anteriores, se agreg agua en un
vaso de precipitados de 200 ml. No obstante, se agreg agua fra en vez de hielo.
Esto porque la temperatura ambiente se encontraba a 33 C; por lo tanto, se debi
agregar agua fra para disminuir la temperatura.
Despus, se midi la temperatura del agua utilizando un termmetro de mercurio
hasta que esta estuviese a 30 C.
Luego, se sac el termmetro y se esper a que este volviera a la temperatura
ambiente.
Subsiguientemente, se coloc el tubo de ensayo rotulado con los 30 C y con su
muestra de hgado correspondiente dentro del vaso de precipitados.
Posteriormente, se introdujo el termmetro dentro del tubo de ensayo y se esper a
que este marcara los 30 C.

8. Induccin de la muestra de hgado a 40 y 50 C


Se agreg agua en un vaso de precipitados de 200 ml.
6

Se puso el mechero de alcohol debajo de la rejilla metlica y en medio del trpode.


Se encendi el mechero de alcohol con los fsforos
Se coloc el vaso de precipitados sobre la rejilla metlica.
Luego, se meti el tubo de ensayo rotulado con el nivel de temperatura de 40 o 50
C y con su muestra de hgado respectiva en el vaso de precipitados.
Despus, se puso el termmetro de mercurio dentro del tubo de ensayo y se esper a
que marcara la temperatura requerida.
Si la temperatura se exceda de los 40 o 50 C, se debi agregar hielo al vaso de
precipitados.
Nota: Cada uno de los procedimientos de induccin a niveles de temperatura y el
procedimiento siguiente deban tener lapsos muy cortos de tiempo entre ellos para que
no hubiese cambios drsticos en la temperatura.
9. Medicin de la actividad enzimtica por medio del porcentaje de oxgeno
liberado (POL) en la reaccin de la catalasa con el H2O2
Una vez obtenida la temperatura requerida, se extrajo el tubo de ensayo del vaso de
precipitados y se verti la muestra del hgado dentro la botella de 250 ml que est
incluida con el sensor de oxgeno.
Luego, se agreg el H2O2 y se coloc la celda del sensor en la apertura de la botella
y se empuj hasta que estuviera sellado.
Posteriormente, se midi la cantidad de oxigeno producido durante 60 segundos y
se escribi en una tabla hecha anteriormente.
10. Clculo de la media aritmtica, la desviacin estndar y el error absoluto
Para calcular la media aritmtica se sumaron todos los POL y se dividieron entre su
cantidad. Por ejemplo:
Media de 10 C =

14,44+14,03+13,26+13,58+14,11

= 13,88

Para determinar la desviacin estndar se calcul la raz de la sumatoria del valor del
POL menos la media del nivel al cuadrado dividido entre la cantidad. Por ejemplo:
SD=

(14,4413,88)2 +(14,0313,88)2 +(13,2613,88)2 +(13,5813,88)2 +(14,1113,88)2


5

= 0,46

Para el error absoluto se calcul la sumatoria del valor de POL menos la media del nivel
dividido entre la cantidad.
Ea =

(14,4413,88)+(14,0313,88)+(13,2613,88)+(13,5813,88)+(14,1113,88)
5

= 0,004

11. Mtodo estadstico


El diseo de la investigacin fue completamente experimental. Parar calcular la media
aritmtica, la desviacin estndar, los errores absolutos y las sumatorias se utiliz la
calculadora grfica TI-84 plus. Se emple la prueba de normalidad de Kolmogorov y
Smirnov (p0,05) para verificar si los grupos de la variable independiente siguen una
distribucin normal. Para comprobar si hay diferencias estadsticamente significativas en las
medias de los niveles de temperatura se aplic una ANOVA con un nivel de significancia de
0,05 (p0.05) y las diferencias estadsticas de las medias se compararon por medio de la
prueba de Duncan, ya que segn Saville (1990) esta es la mejor opcin para realizar un
anlisis exploratorio de las diferencias entre tratamientos. (p. 174). Tambin, se hizo un
grfico box plot para analizar el comportamiento de los grupos por medio de observacin
grfica. Se cre un grfico de dispersin con lneas rectas y marcadores y otro con lneas
suavizadas con el software Excel 2016. Todas las pruebas estadsticas y el grfico box plot
fueron calculados con el software estadstico SPSS 19.

7. Resultados
Tabla 2. Masa de las repeticiones de las muestras de hgado por cada nivel de temperatura
Masa de las muestras de hgado (g) 0,01

Nivel de
temperatura

Muestra

Muestra

Muestra

Muestra

Muestra

#1

#2

#3

#4

#5

10

30,79

30,75

30,71

30,69

30,81

-0,04

20

30,75

30,77

30,65

30,79

30,76

-0,05

30

30,80

30,71

30,78

30,76

30,75

-0,03

40

30,62

30,75

30,72

30,77

30,81

-0,06

50

30,78

30,79

30,67

30,82

30,69

-0,04

(C) 1,0

Error absoluto

Tabla 3. Cantidad de POL por cada repeticin de los niveles de temperatura


Cantidad de oxgeno liberado (%)
Temperatura
Muestra

Muestra

Muestra

Muestra

Muestra

#1

#2

#3

#4

#5

10

14,44

14,03

13,26

13,58

14,11

0,004

20

14,87

14,69

14,45

15,09

15,17

0,004

30

15,54

15,36

15,73

16,03

15,41

0,004

40

14,01

14,12

14,18

13,93

14,06

0,000

50

13,91

13,57

13,43

14,17

13,84

0,004

(C) 1,0

Error absoluto

Tabla 4. Niveles de temperatura con su porcentaje promedio de oxgeno liberado


Temperatura
Cantidad de oxgeno
(C) 1,0
liberado (%)
10
13,88 0,46*
20
14,85 0,29
30
15,61 0,27
40
14,06 0,10
50
13,78 0,29
*Desviacin estndar

Cantidad de oxgeno liberado (%)

El mayor POL se encontr en el nivel de 30 C con 15,61% de oxgeno liberado. El nivel de


50 C tuvo el menor POL con 13,78%. El nivel de 10 C fue el que tuvo una mayor desviacin
estndar; siendo este el que obtuvo un mayor error con respecto a su media aritmtica.
17
16,5
16
15,5
15
14,5
14
13,5
13
12,5
12
10

20

30

Temperatura (C) 1,0

40

50

Figura 1. Grfico de dispersin con lneas rectas, marcadores y errores tpicos. La figura muestra el
POL en un transcurso de 60 segundos por cada nivel de temperatura.
9

El mayor porcentaje de oxgeno tuvo lugar en el nivel de 30 C. Hubo un aumento desde los
10 C hasta los 30 C donde el porcentaje de oxgeno comenz a decrecer. En los niveles de
20 C y 30 C se encuentran los mayores POL. Los 10 C y 50 C tuvieron las menores tasas
de POL; siendo los 50 C el nivel con el POL ms bajo de todos. Del nivel de 30 C a 40 C
ocurri un descenso significativo. No se observ constancia en los 10, 20 y 30 C porque
hubo aumentos y descensos en cada nivel de temperatura. No obstante, parece que hubo poco
descenso de POL del nivel de 40 C al de 50 C.

Actividad enzimtica

16
15,5
15
14,5
14
13,5
13
10

20

30

Temperatura (C) 1,0

40

50

Figura 2. Grfico con lneas suavizadas. La figura muestra la actividad enzimtica de la catalasa
medida por su POL en un transcurso de 60 segundos por cada nivel de temperatura.

La temperatura ptima de la catalasa tuvo lugar entre los niveles de 20 y 30 C. La mayor


actividad enzimtica se dio a los 30 C.

Figura 3. Grficos blox plot simples de todos los grupos por nivel de temperatura.
10

El nivel que presento mayores intervalos entre sus POL fue el de 10 C. Por otro lado, el de
menores intervalos de POL con respecto a su mediana fue el de 40 C. As mismo, este nivel
fue el nico que pareci seguir una distribucin normal. Se observ variabilidad de medianas
entre todos los niveles de temperatura. Especialmente los niveles de 10 C y 30 C parecieron
tener la mayor diferencia entre sus medianas.
La siguiente tabla muestra los resultados de la prueba de Kolmogorov-Smirnov que verific
la normalidad en los grupos de cada nivel de temperatura. Esta prueba fue necesaria para la
utilizacin de la ANOVA porque requiere que todos los grupos sigan una distribucin
normal.
Tabla 5. Prueba de normalidad con un nivel de significancia de 0,05
Temperatura
(C) 1,0

Kolmogorov-Smirnova
Estadstico

gl

Sig.

10

.223

.200*

20

.165

.200*

30

.207

.200*

40

.133

.200*

.176
5
50
a. Correccin de la significacin de Lilliefors

.200*

Cada uno de los niveles de temperatura tuvieron un p>0,05; por lo tanto, todos los POL de
cada nivel se comportaron como una distribucin normal y fue posible utilizar la ANOVA.
La homogeneidad de varianzas es otro requisito para la utilizacin de ANOVA.
Tabla 6. Prueba de homogeneidad de varianzas
Estadstico
de Levene

gl1

gl2

Sig.

3,277

20

.032

En la prueba de homogeneidad de varianzas, el valor critico de significancia fue de 0,32.


Donde p0,05, por lo que la diferencia de varianzas muestrales no es estadsticamente
significativa.

La prueba ANOVA con un nivel de significancia de 0,05 determin si existe diferencia


significativa en los grupos de cada nivel de temperatura. Para rechazar H0 (vase pg. 2) la
prueba debi presentar un p<0,05. Los resultados fueron:
11

Tabla 7. Prueba de anlisis de varianzas


ANOVA
%Variacin
de masa

Suma de
cuadrados

Inter-grupos

gl

Media
cuadrtica

Sig.

12,623

3,156

37,570

.000

Intra-grupos

1,680

20

0,84

Total

14,302

24

El anlisis de varianza present un p<0,05. Por lo tanto, de todos los niveles de temperatura,
al menos uno tuvo una diferencia estadsticamente significativa.

La prueba de Duncan agrup las medias de los niveles de temperatura por su homogeneidad;
por lo que, se pudo saber cul nivel estaba difiriendo de los otros.
Tabla 8. Prueba de rango mltiple de Duncan
Subconjunto para alfa = 0.05
Temperatura
(C) 1,0
N
1
2
3
50
5
13.7840
10
5
13.8840
40
5
14.0600
20
5
14.9540
30
5
15.6140
Sig.
.169
1.000
1.000
Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos
homogneos
Los grupos de 50, 10 y 40 C son significativamente similares y son el nico subgrupo con
similitudes. Los de 20 y 30 C no se agruparon con ningn otro nivel de temperatura y fueron
los que tuvieron diferencias estadsticamente significativas con respecto de los otros niveles.

8. Discusin
Los resultados de la prueba ANOVA determinaron que hubo una diferencia significativa en
algunos de los niveles de temperatura. Esto podra explicarse con el hecho de que la
temperatura es uno de los factores directamente influyentes en la actividad enzimtica.
Segn Franco (2007) La temperatura, junto con el pH, es uno de los principales factores que
intervienen en las actividades enzimticas (p. 413). Por lo que, los diferentes grados de
12

temperatura causaron efectos en la actividad enzimtica. As mismo, el resultado de la prueba


Duncan determin que los niveles con diferencias fueron los de 20 y 30 C. Todas las enzimas
tienen una temperatura ptima en la cual su actividad enzimtica es mayor. En el caso de la
catalasa utilizada en esta investigacin, su temperatura ptima estuvo entre estos dos niveles.
De los 10 C a aproximadamente los 30 C, la actividad enzimtica increment. Tal
fenmeno se puede explicar por medio del aumento de temperatura de los otros niveles. La
velocidad de una reaccin catalizada por una enzima se incrementa al aumentar la
temperatura a la cual se lleva a cabo la reaccin. (Franco 2007 p. 414). Al aumentar la
temperatura, las molculas del sustrato(H2O2) comienzan a moverse con mayor velocidad;
por lo que, aumenta la posibilidad de que estas lleguen al sitio activo de la enzima y se
conviertan en el producto (H2O y O2). Por lo tanto, esto fue lo que sucedi en estos niveles.
No obstante, aproximadamente a partir de los 30 C la actividad enzimtica comenz a
disminuir. Cuando la temperatura de una enzima empieza a incrementarse mucho, esta
comienza a tener problemas porque las enzimas son inestables a altas temperaturas, a
valores extremos de pH, etc., lo que eleva el costo al reducir la vida til de la enzima. (Franco
2007 p. 414). As mismo, la actividad enzimtica decrece cuando la enzima sobrepasa su
temperatura ptima (Franco 2007 p. 416). Por lo que, al sobrepasar la temperatura ptima
de la catalasa estudiada (20 a 30 C), su liberacin de oxigeno comenz a disminuir. Estos
resultados fueron similares a los de Finger (2008) donde el calentamiento a 80 C durante
20 minutos proporcion una reduccin de la actividad enzimtica de la enzima peroxidasa en
un 86,28% y 100% de los genotipos de color prpura y de hoja ancha de la especie Ocimum
sp simultneamente (p. 128) [sic].
El nivel de menor temperatura (10 C) present el segundo POL ms bajo (13,88). Esto fue
porque a temperaturas bajas, el movimiento de las molculas se dificulta; inhibiendo as, en
la actividad enzimtica. Por lo que, la catalasa no trabaj bien a temperaturas bajas. Tal
resultado contrasta con el de Romero (2015) en el cual las bajas temperaturas de
almacenamiento aumentaron la actividad de catalasa (p. 199).
Los niveles de temperatura presentaron una baja desviacin estndar, siendo el de 10 C con
la mayor (0,46). Esto significa que las repeticiones fueron cercanas entre ellas. No obstante,
el hecho de que el nivel de 10 C fuese el que tuvo mayor desviacin estndar puede ser
explicado por la diferencia de temperaturas con respecto a la temperatura ambiente. En el
transcurso de sacar el tubo de ensayo del vaso de precipitados y llevarlo al sensor se tard,
mximo, 30 segundos. El calor, al ser energa en trnsito, va a ser transmitido del ambiente
a la muestra; por lo que, al estar la muestra a una temperatura de 10 C, era ms propensa a
tener ms rpidamente aumentos en su temperatura porque la temperatura ambiente estaba a
32 C. A diferencia de las otras, que su temperatura estaba cerca de los 32 C o los
sobrepasaba.

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9. Conclusiones
Hubo un efecto en la actividad enzimtica de los diferentes niveles de
temperatura.
A bajas temperaturas (10 C) la actividad enzimtica fue menor.
A altas temperaturas (40 y 50 C) la actividad enzimtica fue menor.
A temperaturas medias (20 y 30 C) la actividad enzimtica fue mayor.
La temperatura ptima estimada estuvo entre los 20 y 30 C.
Los resultados fueron difirieron con algunos de investigaciones previas.

10. Evaluacin del mtodo

Al ser el hgado comprado, no se supo con exactitud a que raza de Bos taurus perteneca. Por
tanto, los resultados son ambiguos y no pueden ser estandarizados porque no se conoce la
procedencia de la enzima. Este problema dio lugar a un error sistemtico.
El hgado fue comprado un da antes; por lo que se tuvo que refrigerar para mantenerlo en un
buen estado. Dado que, la temperatura es un factor que inhibe en la actividad enzimtica, es
un error sistemtico el dejar la muestras en bajas temperaturas antes del experimento.
Los cambios en la temperatura se pueden dar en lapsos muy cortos de tiempo. De manera
que, tardar ms de 20 segundos llevando el tubo de ensayo al sensor pudo inhibir
drsticamente en los resultados.
Hubo pocos niveles de la variable independiente. Esto caus que la investigacin se limitara
a tener muy pocas posibilidades de encontrar la temperatura ptima exacta. Para efectos de
esta investigacin, no fue posible hacerlo por el tiempo que requiere.
El uso de un sensor de oxgeno electrnico les dio mucha confiabilidad a los datos porque
elimin posibles errores sistemticos causados por una observacin difusa. As mismo, el
hecho de que el sensor fue recientemente comprado, hizo que se tuviera mucha ms confianza
en sus mediciones. Esto es porque el sensor de oxgeno Vernier utiliza productos qumicos
ubicados en una celda electroqumica los cuales reaccionan con el oxgeno, de esa manera
hace las lecturas de este. Por lo que, al envejecer el sensor las lecturas disminuirn, ya que
los productos qumicos en la celda electroqumica son reducidos.
No se pudo controlar la cantidad exacta de enzimas presentes en las muestras de hgado
porque tal control requiere de instrumentos y procedimientos ms complejos. No obstante,
intentar sacar muestras con igual cantidad de masa fue una forma de intentar minimizar esta
variable y usar guantes evit que hubiese contacto de las enzimas catalasa presentes en la
mano humana y las del hgado. De esta manera, se control al menos este aspecto.

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11. Mejora a la investigacin

En caso de que se desea una investigacin ms compleja, se recomiendo usar ms niveles de


temperatura con intervalos ms largos. Esto con el objetivo de aumentar las posibilidades de
obtener resultados ms precisos con respecto a la temperatura ptima. Por ejemplo, usar
niveles de 5 a 60 C con intervalos de 5 C.
Para minimizar el problema de la perdida de temperatura en el traslado del tubo de ensayo al
sensor de oxgeno, es recomendable envolver el tubo con un material con propiedades
terminas (papel peridico) para mantener la temperatura de la muestra.
Si se deseara estimar la cantidad de enzimas presentes en la muestra para controlar esta
variable. Se podra buscar en internet la velocidad de reaccin de la enzima catalasa, luego
agregar en una muestra machucada de hgado 4 ml de H2O2 y programar el sensor para que
haga medidas durante el mismo tiempo de reaccin de la catalasa. Despus, dividir el
resultado arrojado por el sensor entre la velocidad de reaccin.
Nota: Se recomienda hacer esto solo si se desea, ya que no hay fundamentos profesionales ni
fuentes que lo respalden. Es simplemente una idea generada por el autor de la investigacin;
por lo que, an no se sabe si es funcional. No obstante, en internet puede haber mejores
maneras de hacerlo, es remendable buscarlas. (Profesor, dgame si est incorrecto para
quitarlo)

12. Literatura Citada

1. Baquero. L, Castro. J, Narves. C (2005) Catalasa, peroxidasa y polifenoloxidasa en


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fisiolgicas para eliminar los radicales libres: II. Catalasa. Instituto de Ciencias
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