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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Per, Decana de Amrica
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
ESCUELA DE FARMACIA
DEPARTAMENTO TOXICOLOGAAO
Y QUMICA
LEGAL
ACADEMICO:

5TO

Ao de la consolidacin del Mar de Grau

N : 9

CURSO

Extraccin de Txicos Orgnicos Fijos

TOXICOLO
GIA

DOCENTE: APESTEGUIA INFANTES , JOSE

GRUPO: JUEVES MESA 4
INTEGRANTES:

CADILLO ESPINOZA KATHERINE

12004003
DE LA CRUZ TITO,FIORELLLA
12040008
QUISPE HILARIO, GISELL
12040122
NIO DE GUZMAN CORTEZ NAJHELIND 12040078
MERINO CABALLERO JOSE
11040071

FECHA DE LA PRCTICA: jueves 06 de mayo horario: 11 3 pm

Semestre Acadmico 2016-I

I.

INTRODUCCION

El laboratorio toxicolgico es de utilidad, desde el punto de vista clnico,

como apoyo en el diagnstico y en la evaluacin de un tratamiento y el

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

pronstico de una intoxicacin. Los mtodos de anlisis con los que se

cuentan en toxicologa son muy variados. La eleccin de alguno de ellos
depender de muchos factores instrumentales, personal entrenado, etc.
Tambin se debe considerar las caractersticas fisicoqumicas de los
txicos orgnicos fijos que, son sustancias orgnicas y no voltiles,
comprenden a los txicos alcalinos (fenotiaznicos y benzodiacepinas),
cidos fuertes (salicilatos), cidos dbiles (barbitricos) y neutros
(plaguicidas e insecticidas). Cualquiera de estos grupos, en general
requiere de procedimientos para extraerlos o aislarlos de la matriz
original, luego se procede a la identificacin y finalmente a la
cuantificacin. Los txicos orgnicos fijos son aquellos compuestos
orgnicos que no pueden ser aislados por destilacin. Todos los frmacos
entran en esta categora as como las drogas de abuso, los plaguicidas y
una gran cantidad de sustancias utilizadas en sntesis qumica y en
industria alimentaria.(1) De las intoxicaciones con frmacos, las que
involucran a los psicofrmacos son las ms frecuentes, aunque tambin
son frecuentes las intoxicaciones con aspirina o con paracetamol. La
mayora de las veces, la investigacin de la presencia de estos
compuestos en casos de sospecha de intoxicacin, requiere de la
aplicacin de dos tipos de mtodos:
a) mtodos de aislamiento que separan al compuesto del resto de los
componentes de la muestra pasos de la extraccin en fase slida
Sistema de extraccin en fase slida
b) mtodos de identificacin (y, en algunos casos, de cuantificacin)
Barrido espectral de algunas benzodiacepinas Cromatografa en capa
delgada Analtica del estudio de txicos fijos La espectrofotometra de
absorcin

atmica

es

el

procedimiento

ms

empleado

en

la

determinacin de elementos traza en medios biolgicos. Incluye este

grupo

los

derivados

de

la

destilacin

del

petrleo

muchos

hidrocarburos saturados, no saturados y aromticos; alcohol metlico y

etlico, ter, formol, hidrato de cloral y acetona; aminas aromticas
MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

constituyentes de las anilinas; derivados clorados de los hidrocarburos

aromticos utilizados como insecticidas y combinaciones orgnicas del
fsforo;

salicilatos,

aspirina

fenacetina,

tambin

derivados

de

hidrocarburos aromticos; disolventes de grasas, como el sulfuro y

tetracloruro de carbono; cloroformo y los cloruros y bromuros de metilo;
barbitricos; alcaloides obtenidos de plantas como morfina, codena,
cocana, atropina, papaverina, curare, estricnina, nicotina, quinina,
aconitina, ergotamina, etc.
Clasificacin de los Txicos orgnicos fijos:
NATURALEZA ACIDA.- (marihuana, barbitricos, plaguicidas: OF,
carbamatos, organoclorados, cumarinas
NATURALEZA ALCALINA (cocana, benzos, estricnina)
Metales (plomo, arsnico, mercurio, cadmio).
Custicos y corrosivos (2)

II.

PARTE EXPERIMENTAL

OBJETIVO

Extraccin de compuestos
como: salicilatos, barbitricos y
plaguicidas, fenotiazidas-benzodiacepinas, por el mtodo de Curry

REACTIVOS

Agua destilada
tungstato de Na 10 %
muestra problema
H2SO4
Eter
CO3HNa 5%
HCl pH3
NaOH 2.5%
Agua destilada

MATERIALES
MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Probeta 25ml.
Matraz
Soporte universal
Bao Mara
Pera de decantacin

MTODO
Determinacin de txicos orgnicos fijos (Mtodo de curry)
FUNDAMENTO DEL MTODO
La tcnica por el mtodo de aislamiento de Curry se basa en la
obtencin de un extracto acuoso libre de protenas, usado en drogas
extrables por el ter etlico en medio acido.

Se aprovecha su mayor

afinidad en solventes orgnica que en solventes acuosos previa

purificacin para la eliminacin de protenas. Se efecta aprovechando
la mayor solubilidad de stos en solventes orgnicos que en el agua, de
modo que poniendo en ntimo contacto el material a investigar con un
solvente orgnico y no miscible con el agua, se aprovecha por particin
el traspaso de las sustancias orgnicas de la fase acuosa a la orgnica,
porque el 70 % de la masa del cuerpo humano est constituido por
agua, de modo que cuando buscamos txicos de este tipo en

orina,

sangre, vmitos y an material visceral los mismos se encontrarn en

fase acuosa. Los solventes habitualmente utilizados para esta tcnica el
ter etlico, tambin denominado Eter sulfrico por su modo de
obtencin, en ambos casos se aprovecha su carcter de inmiscibles con
el agua y su bajo punto de ebullicin que facilitar su posterior
evaporacin.(3)
PROCEDIMIENTO
Desproteinizado

MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Bao mara
por 15
minutos

.180 mL H2O
+
20m mL de NaOH
+
100 mL H2SO4

Se transfiere a una
pera de decantacin
en lo que separa en
dos fases

Se procede
al filtrado

Txicos
alcalinos

Txicos
Fuertes,
dbiles
neutros

Txicos
alcalinos

NH4OH Ph 9.5
5Ml CHCl3
Agitar 5 min

Fase
acuos
a

Txicos
Fuertes,
dbiles
neutros

R4

ac.
y

5mL CO3HNa
Fase
orgni
ca

Evaporar CHCl 3

Agitar 4 min.

Fase acuosa:
tox.
ac.
Fuertes
MESA 4 4

ac.
y

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Fase
orgnica:
Tox.ac dbiles
y neutros
Fase acuosa:
tox.
ac.
Fuertes

Fase
orgnic
a

gts HCl pH 3
Agitar con CHCl3
por 3 min

R
1

Fase
orgnica:
Tox.ac dbiles y
neutros
Txicos
ac.
Dbiles

5ml NaOH 2.5

%
Txicos
ac.
Neutros

Agitar x 5 min.

Txicos
ac.
dbiles
Fase
orgnic
a
MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

HCl pH 3
EXTRACCION 5
ml CHCl3

TXICOS AC.
NEUTROS

R3

CROMATOGRAF
A

Se resuspendi el
R1 y R4 Con 1 mL
de metanol

Se sembr la
muestra en una
placa cromatografa
de silica gel

Se dej correr la muestra en un

sistema de solventes
R1: metanol: acetona (5: 5)
R2:
metanol:
acetona:
trietanolamina (5:5:0,3)

MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Se revelo:
R1: Rvo. trinder
R4: Rvo. Dragendorf

III.

REACCIONES

1. DESPROTEINIZACION
Se basa en la formacin de cido tunsgstico, el cual hace precipitar
protenas contenidas en la muestra.

2. EXTRACCIN
Los txicos orgnicos se extraen con disolventes orgnicos (ter etlico,
cloroformo, diclorometano, etc.). El principio utilizado es el agotamiento
por disolventes orgnicos.
Ya que la extraccin no es demasiado selectiva, se utiliza una marcha
aprovechando ligeras diferencias en cuanto a la afinidad de algunos de
los txicos de inters segn su pH, pues depende de ella su solubilidad
en el medio.
Se pueden obtienen 4 residuos correspondientes a txicos:
R1: cidos fuertes (compuestos fenlicos y salicilatos)
R2: cidos dbiles (barbitrico y algunas benzodiacepinas)
R3: Neutros (pesticidas, rgano clorados y fosforados)
R4: Alcalinos (benzodiacepinas cocana, cafena)
La extraccin se realiza cuando el toxico se encuentra en forma no
ionizada

MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

2.1.

EXTRACCIN DE ACIDOS

La extraccin en un medio acido favorece el estado no ionizado del

toxico acido.

2.2.

EXTRACCION DE BASES

La extraccin en un medio bsico favorece el estado no ionizado del

toxico alcalino.

2.3.

EXTRACCIN DE NEUTROS

Se extraen con disolventes orgnicos independientemente del pH del

medio.
MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

3. SOLVENTES

EMPLEADOS

EN

LA

EXTRACCION

ACIDA

NEUTRA
La solucin de bicarbonato es aadida con el objeto de neutralizar el
toxico en forma de tartrato.
La solucin de hidrxido de sodio tiene como fin llegar a pH alcalino de
8.15, descomponer el tartrato y liberar los txicos correspondientes a los
barbituratos que a diferencia de los neutros son mucho ms afines al
agua.
El cido clorhdrico tiene como fin acidificar el medio y concentrar el
toxico acido en forma no ionizada en el solvente orgnico.
4. SOLVENTES EMPELADOS EN LA EXTRACCION ALCALINA
El hidrxido de amonio tiene como fin basificar el medio y concentrar el
toxico alcalino en forma no ionizada en el solvente orgnico.
REACCIONES DE IDENTIFICACIN
A. Residuo 1- Anlisis de salicilatos:
La determinacin de los salicilatos se hace generalmente con cloruro
frrico (FeCl3) proveniente del reactivo de Trinder. El reactivo de Trinder
en general est conformado por 40g de HgCl, 120mL de HCl 1N y 40g de
Fe (NO3)3 agregando agua csp 1L.
Cabe resaltar que en el organismo, el cido acetil saliclico sufre una
biotransformacin condicionada por el medio bsico proporcionado por
el intestino delgado, que es el lugar de absorcin, por lo general, de los
salicilatos.

MESA 4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Al agregar el reactivo de Trinder, se obtiene un complejo coloreado de

salicilato frrico. Este complejo de color azul puede ser usado para
cuantificacin espectrofotomtrica de ASA a una longitud de onda de
540nm.

B. Residuo

4-

Anlisis

de

alcaloides,

fenotiazinas

benzodiacepinas:
1. Identificacin fenotiazinas:
La

identificacin

de

fenotiazinas

ha

sido

un

tpico

de

amplia

investigacin sobretodo aplicado al mbito clnico. Forrest F.M y Forrest

F.L, en 1960, propusieron un mtodo de determinacin cualitativa
basado en el uso de FeCl3, HClO3 y HNO3 (el reactivo FPN, de fierro,
perclrico y ntrico), el cual produce un radical libre con coloracin
variable (azul, azul violceo).

MESA 4

1
0

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

La composicin del reactivo FPN consiste en 5 partes de 5% de FeCl3, 50

partes de 50% de cido ntrico y 45 partes de 20% de cido perclrico.
Este ltimo funciona como un estabilizador del radical, al cual le da una
vida de 3 horas, mientras que el cido ntrico ayuda a intensificar el
color.
2. Identificacin benzodiacepinas:
Por lo general, las benzodiacepinas son identificadas por el reactivo de
Dragendorff (Tetraiodobismutato de potasio), formndose un precipitado
de color naranja correspondiente al tetrayodo bismuto de potasio, el cual
da para los compuestos alcaloideos.

IV.

RESULTADOS

CUANTIFICACIN
DE SALICILATO
5mg de salicilato

1OOmL de solucin
0 .1mL

x
X = 0. 005mg de solucin

estndar
MESA 4

1
1

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Concentracin del estndar : 0. 005mg

Densidad

ptica

(DO)

absorbancia

del 0.095

estndar
Densidad ptica ( DO) Absorbancia de la 2.7
muestra problema

Y =

DO Mp x concentracin del estndar / DO

estndar

Y =

2.7 x 0. 005mg / 0.095

0.14mg

14mg %

Y =concentracin de la muestra problema: O.14mg

Y = 14 mg %

menor 3O mg%

reaccin medicamentosa
CROMATOGRAFIA DEL SALICILATO

Frente de

solvente Frente del soluto de la

total :

muestra problema de
8.5 cm

Salicilato : 6.8 cm

RF: 6.8 / 8.5= O.8

cm
MESA 4

1
2

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Frente de solvente

Frente del soluto del

total:

estndar de Salicilato :

RF: 7.3 / 8.5 = O.85

8.5 cm

7.3 cm

cm

CROMATOGRAFIA DE BENZODIAZEINA

MESA 4

1
3

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Frente de solvente

Frente del soluto de la

total : 11.6 cm

muestra problema de
benzodiacepina:

Frente de solvente
total: 11.6 cm

9.5

RF: 9.5 / 11.6 =

O.81

cm
Frente del soluto del
estndar

de

benzodiacepina:

10

RF: 10 / 11.6 = O.86

cm

V.
DISCUSIONES
VI. CUESTIONARIO
1. TCNICA DE STAS OTTO

MESA 4

1
4

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

Una porcin de la papilla de la muestra se trata con dos volmenes de

etanol acidificndolo con cido tartrico dejando en maceracin, si se
sospecha que no estn presentes alcaloides lbiles en la muestra, se
mantiene la mezcla de 60/70C durante la maceracin .A continuacin
se filtra y se procede a la evaporacin del etanol, obtenindose un
residuo siruposo, se trata nuevamente con un volumen de etanol tibio,
se filtra y se evapora, obtenindose un residuo granular seco.
Finalmente se trata con una porcin de cido sulfrico al 5%,
obtenindose un filtrado acuoso libre de protenas.
FUNDAMENTO
La separacin de un compuesto por extraccin se basa en la
transferencia selectiva del compuesto desde una mezcla slida o lquida
con otros compuestos hacia una fase lquida (normalmente un
disolvente orgnico). El xito de la tcnica depende bsicamente de la
diferencia de solubilidad en el disolvente de extraccin entre el
compuesto deseado y los otros compuestos presentes en la mezcla
inicial.6

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Diana Gonzlez. Manual De Procedimientos Analticos Toxicolgicos

Para Laboratorios De Baja Complejidad. International Programme
on Chemical Safety Geneva.
2. Lpez Parra Ana Mara. Diagnstico y tratamiento de un paciente
intoxicado. Toxicologa y legislacin sanitaria- universidad
complutense
de
Madrid.
Disponible
en:
http://cleuadistancia.cleu.edu.mx/cleu/flash/PAG/lecturas/toxicologi
a%20forense/Aportaciones%20del%20laboratorio.pdf
3. Repetto, Manuel; Repetto, Guillermo. Toxicolgica fundamental. 4 a
ed. Sevilla: Editorial Daz de Santos; 2009.
4. Guatelli M. Manual prctico de qumica y toxicologa. Editorial
Universitaria, 1 edicin. Buenos Aires. 1958. Pg. 149-152
MESA 4

1
5

EXTRACCION DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS

5. Gil F, Pla A, Hernndez A, Rodrigo L, Lpez O. Extraccin de Txicos

Orgnicos de una Muestra de Orina. Fraccionamiento del Extracto.
Universidad de Granada, Espaa. Pgina principal- Departamento
de Medicina Legal, Toxicologa y Psiquiatra. [http://www.ugr.es
/~fgil/proyecto/index.html]
6. Lpez Parra Ana aportaciones del laboratorio en diagnstico y el
tratamiento de intoxicaciones facultad de medicina, universidad
complutense

de

Madrid.

Disponible

en:

http://myslide.es/education/metodos-de-extraccion-dealcaloides.html

MESA 4

1
6