Antigen

Reactii antigen- anticorp

Antigen

Virusurile,
bacteriile,
parazitii,
fungii si
celulele alterate ale organismului (infectate cu
un germene sau tumorale)
= antigene.

Anticorpii
substante chimice produse de organism ca raspuns
la patrunderea in sange a numeroase substante
straine organismului (antigene) asa cum sunt :
bacteriile, virusurile, parazitii, fungii, etc.

greac: anti=contra i geano=a nate, a

genera
= termenul care definete orice substan de
origine endogen sau exogen, care, ajuns n
organism, NU este recunoscut ca proprie i
determin apariia unui rspuns imun, ce
vizeaz neutralizarea i eliminarea ei.

Odat ptrunse n organism antigenele pot

determina:
1. Sinteza de molecule de anticorpi, care le recunosc
specific.
2. Instalarea memoriei imunologice ("amintirea"
organismului despre ntlnirile anterioare avute cu
acelai antigen).
3. Apariia eventual a unor reacii imune aberante:
reacii alergice, autoimune

Reactiile antigen anticorp - clasificare

Antigen

Anticorp (Ig)

I. Reactii de agregare
1. reactia de aglutinare
2. reactia de precipitare

II. Reactii de neutralizare:

-

Reactiile antigen anticorp - utilizare

1. identificarea unui microorganism
(antigen) cu ajutorul unui ser imun standard (diagnostic
direct sau bacteriologic)
2. identificarea anticorpilor cu ajutorul unui antigen
cunoscut (diagnostic indirect sau serologic)

Neutralizarea toxinelor bacteriene folosind anticorpi specifici

III. Reactii cu complement

-

Reactii de liza (citoloza, hemoliza); ex. reactia de fixare a complementului (RFC)

Opsonizarea

IV. Reactii cu artificii tehnice

1.
2.
3.

Imunofluorescenta (IF)
Radioimunotestarea (RIA)
Imunoenzimatice

V. Reactii de coaglutinare

Reactia de aglutinare
reactie atg.-atc. de
agregare
Atg.= celule bacteriene sau
fragmente de celule in
suspensie; atg. sunt
particulate
Atc. Sunt multivalenti : IgM
Complexele imune
retele tridimensionale
(electroliti din mediu, in
anumite conditii de
temperatura si pH) =>
agregate vizibile.

Aglutinarea pe lama
dg. direct, bacteriologic
dg. indirect (atc. din serul pacientului): triajul epidemiologic in tifosul
exantematic = r. Kudicke-Stener
reactie de orientare
ofera relatii de ordin calitativ
evidentiaza o corespondenta intre serul imun folosit si antigenul de
identificat

Aglutinarea pe lama-tehnica

Aglutinarea in tuburi

Lama curata: 1 picatura ser fiziologic + 1 picatura picatura ser imun.

In fiecare picatura se suspenda un inocul din cultura bacteriana de
testat (cultura de 18-24 de ore, pe geloza simpla).
Reactie + : in picatura de ser imun apare aglutinarea bacteriilor sub
forma de grunji fini, albi, vizibili cu ochiul liber;
Reactie - : in picatura de ser imun se formeaza o suspensie
omogena

Principiul reactiei: la dilutii crescande de ser se adauga aceeasi

cantitate de atg.
dilutii din serul pacientului: 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640
Se adauga aceeasi cantitate de atg.
Titrul reactiei: dilutia cea mai mare de ser la care se mai observa
aglutinarea.
Clasificare =f(natura, localizarea atg.)
Aglutinare O, somatica
Aglutinare H, flagelara

Aglutinarea H (flagelara)

Aglutinarea O (somatica)
antigenul O- in peretele
celular
- natura GLP
(glucido-lipido-polopeptidica)
- termostabil
- alcoolo-rezistent
- distrus de
formol
Aglutinarea O- grunji fini,
depusi la fundul eprubetei, care
nu disociaza la o aglutinare
brutala
-bacteriile se
unesc prin alipirea cap la cap

antigenul H- bacteriile mobile

- natura P
- termolabil
- distrus de alcool
- rezistent la formol
Aglutinarea H
- flocoane, sediment abundent care
dispare la o agitare brusca
-bacteriile se unesc flageli

Aglutinarea in tuburi

Aglutinarea in tuburi

Ser
cercetat
Antigen

1/2

1/4

1/8

1/16
x

1/32
x

DILUTIA CEA MAI MARE DE SER LA CARE MAI APARE AGLUTINARE

Aglutinarea - utilizare

dg. direct:
identificarea speciilor
si tipurilor de
Salmonella, E.coli,
Shigella

Cinetica anticorpilor intr-o boala infectioasa

dg. Serologic
(determinarea
anticorpilor):
R. Widal in febra
tifoida si paratifoida
(Salmonella typhi, S.
paratyphi A si B)
R. Wright- in
bruceloza
R. Weil-Felix in
tifosul exantematic si
alte ricketsioze.

Reactia de aglutinare pasiva=aglutinarea pe suport

Sensibilitate mare
Atg.= solutie moleculara
In urma fixarii pe un suport, devine aglutinabil in
prezenta serului imun
Latex, polistiren, colodiu (aglutinare pasiva)
Hematii (hemaglutinare pasiva)

Aglutinarea pasiva

Reactii de aglutinare pasiva-utilizare

Latex-aglutinare:
Determinarea grupului streptococilor
Detectarea antigenelor de Haemophilus, pneumococ,
meningococ din LCR
Antigenul adsorbit pe hematii:
dg. sifilisului: TPHA

Aglutinarea pasiva

cand Ag este fixat pe particule inerte (latex, eritrocite)

Determinarea Ag:
Ag: Haemophilus,
Haemophilus, Streptococcus pneumoniae,
pneumoniae,
Neisseria meningitidis in LCR la un pacient cu meningita

Teste de identificare
Aglutinarea pasiva

Treponema pallidum

TPHA

Aglutinarea pasiva
Diagnosticul sifilisului,
sifilisului, determinarea anticorpilor specifici:
specifici:
TPHA (T
(Treponema pallidum hema
emagglutination test)

Reactia de precipitare
Reactia de precipitare inelara:
Tuburi capilare interfata de contact : inel de precipitare
Industria alimentara, pentru a diferentia originea carnii
Medicina legala: originea petelor de sange
dg. bolilor infectioase:
Reactia Ascoli: dg. retrospectiv al infectiei carbunoase
la animalele moarte
R. Vincent-Bellot: dg meningitei cerebrospinale
epidemice

Reactia de precipitare
r. de agregare, atg.=macromolecule in solutie coloidala,
atc.=Ig G

Reactia de precipitare
Reactia de precipitare inelara

Treponema pallidum

Reactia de precipitare-tehnici

Reactia de floculare

VDRL

precipitarea in toata masa amestecului flocoane

titrarea toxinelor microbiene si a serurilor antitoxice
Flocularea apare prima data in eprubeta in care exista
proportie optima atg-atc

Reactia de precipitare-tehnici

Precipitarea in gel de agar-Tehnici

Precipitarea in gel de agar

sensibilitate si specificitate
utilizeaza gelul de agar ca mediu in care difuzeaza unul sau
ambele elemente care intra in reactie
intalnirea celor doua elemente=>linie de precipitare

1. Difuzia simpla: difuzeaza doar unul dintre reactanti, celalalt este inglobat in
mediul de difuzie

Difuzia radiala Mancini: determinarea cantitativa Ig G, Ig M, Ig A, C3

2. Dubla difuzie: ambii reactanti difuzeaza
Metoda Ouchterlony: antigene bacteriene, virale, diverse proteine
daca exista corespondenta atg-atc => linii de
precipitare
Avantaje:
Se poate determina prezenta mai multor tipuri de anticorpi
specifici in serul pacientului.
Se pot determina mai multe antigene.

Precipitarea in gel

Precipitarea in gel
SIMPLA DIFUZIEDIFUZIE-Rectia MANCINI

Dubla difuzie
Reactia Ouchterlony

Precipitarea in gel de agar-Tehnici

Difuzia in camp electric

Imunelectroforeza: asociaza principiul electroforezei cu principiul
difuziunii in gel
-se efectueaza o EF in gel de agaroza in care se separa
componentele amestecului
- se adauga ser imun si se lasa se reactioneze cu antigenele
separate
- la intalnirea atg cu atc arc de precipitare
- Fiecare fractiune proteica are un arc caracteristic ca pozitie si
morfologie

Difuzia in camp electric

Imunelectroforeza
Determinarea
numarului de fractiuni
dintr-un atg complex
Determinarea clasei de
IgG si a altor proteine
din plasma sanguina
Controlul purificarii
unor preparate
antigenice

Contraimunelectroforeza
Atg si atc migreaza in
sens contrar in camp
electric datorita
incarcarii electrice
diferite
La locul de intalnire cu
atc corespunzator=>
linie de precipitare

ANTIGEN (AG
(AG))-ANTIBODY (AB
(AB)) REACTIONS WITH THE
PARTICIPATION OF COMPLEMENT (C
(C)

1) Bacteriolysis
2) Bactericide
3) Immunohemolysis
4) Complement fixation reaction (CF or
CFA)

Reactii Ag-Atc cu participarea complementului

Reactia de fixare a complementului
DEFINITIE
Reactie Ag-Ac ce are loc in prezenta complementului.
(C)
PRINCIPIUL
C se fixeaza numai pe complexul imun format (Ag-Ac)
fara a produce modificari vizibile.
Pentru vizualizarea reactiei se utilizeaza sistemul
hemolitic indicator.

Reactia de fixare a complementului (RFC)

Complementul:
- Principalul sistem de amplificare a reactiilor atg.-atc.
- Liza bacteriilor sensibilizate de anticorpi =
bacterioliza (fenomenul de vibrioliza a lui Pfeiffer)
- Efect bactericid (bacterii Gram negative)
- Fenomenul de imunohemoliza

Reactia de fixarea a complementului (RFC)

2 sisteme Atg- Atc
Atg si Atc de testat dintre care unul e
cunoscut si altul e necunoscut
Hematii de oaie si Atc omolog
Intre cele 2 sisteme oscileaza complementul

Interpretare RFC
Fixarea C pe primul sistem (RFC pozitiv) nu
produce modificari in amestecul de reactie
care ramane tulbure
Fixarea C pe cel de-al doilea sistem (RFC
negativ) produce liza hematiilor, amestecul
de reactie devine limpede

RFC

RFC-Tehnici

Tehnica Wassermann (reactia BordetWasserman=RBW)- sifilis

Tehnica Ida-Bengston- dg. leptospirozei,
rickettsiozelor, infectiilor cu Chlamydia (titrul
atc.)
Tehnica Breadstreet Taylor- dg. infectiilor
virale, infectiilor cu Mycoplasma, febra Q

REACTII Ag-Ac CE UTILIZEAZA REACTANTI MARCATI

RC DE IMUNFLUORESCENTA (IF)
- directa
- indirecta
RADIOIMUNOTESTAREA (RIA)
ELISA
- indirecta
- sandwich

Teste care utilizeaza vizualizarea complexelor

antigen-anticorp prin artificii tehnice

Sensibilitatea r. atg.-atc.
Substante fluorescente
Enzime (peroxidaza, fosfataza alcalina, galactozidaza)

Reactia de imunofluorescenta (IF)

Reactia de imunofluorescenta

Principiul
Prin cuplarea unei substante fluorescente cu
anticorpii se obtin anticorpi fluorescenti, care
fixandu-se pe antigenul omolog, induc complexe
imunofluorescente, observabile prin examinarea la
microscopul in lumina uv.

Substanta imunofluorescenta + atc. CI fluorescente

microscop UV
IF directa
atc. monospecifici + subst. fluorescenta
metoda rapida de dg. direct (prezenta de atg. in tesuturi)
infectii bacteriene, virale
Dezavantaj: necesitatea unui nr. de seruri
fluorocromate, fiecare ser cu o singura specificitate

Reactia de imunofluorescenta (IF)

Substanta imunofluorescenta + atc. CI fluorescente microscop UV
IF indirecta
atc. marcati=anti Ig
Avantaj: un singur ser imunoglobulinic marcat
Utilizare:- evidentierea atg. intr-un produs
- detectarea atc. intr-un ser necunoscut
Sensibilitate
bacteriologie: id. streptococilor de grup A, dg. infectiilor cauzate de
neisserii, mycoplasme, Bordetella, sifilis
Virusologie: infectii respiratorii; metoda de electie in dg. Rabiei
Parazitologie

FTA-Abs: fluorescent treponemal antibodiesabsorbtion

Imunofluorescenta
METODA DIRECTA / INDIRECTA / SANDWICH

Teste imunoenzimatice

Atg./atc. + enzima (peroxidaza, fosfataza alcalina) CI

(activitate imunologica si enzimatica)
CI detectat prin aprecierea activitatii enzimei fata de
substratul specific
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay)
Indirecta- detectarea atc.
atg. cunoscut adsorbit pe suport
+ser de testat
+ser antiglobulina marcat enzimatic
+substratul pentru enzima
Se masoara spectrofotometric/cu ochiul liber reactia de culoare
Utilizare: detectarea atc. antivirali, antibacterieni (salmoneloze,
bruceloza, rickettsioze)

ELISA

Teste imunoenzimatice

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay)

Tehnica sandwich - detectarea atg.
atc. cunoscuti adsorbiti pe suport
+proba cu atg. de testat
+atc. specifici marcati enzimatic
+substratul pentru enzima
Se masoara spectrofotometric/cu ochiul liber reactia de
culoare
Utilizare: detectari de antigene bacteriene (toxina
difterica, toxinele E. coli, toxinele stafilococice, brucelle,
yersinii, treponeme, rickettsii), virale (virusuri herpetice,
hepatice)

Principiul
Antigenul (ag) sau anticorpul (ac) se cupleaza cu enzime cu o mare
activitate (peroxidaza din hrean, fosfataza alcalina) rezultand
complexe care retin atat activitatea imunologica cat si cea
enzimatica.
Complexul imun va fi detectat prin aprecierea activitatii enzimei fata
de un substrat specific.

ELISA (E
(Enzyme Linked Immunos
mmunosorbent Assay)

ANTIGENANTIGEN-ANTIBODY ASSAYS WITH INTERVENTIONS

ELISA (E
(Enzyme Linked Immunos
mmunosorbent Assay)

ANTIGENANTIGEN-ANTIBODY ASSAYS WITH INTERVENTIONS

Microplate ELISA

ELISA (E
(Enzyme Linked Immunos
mmunosorbent Assay)

Teste rapide (imunocromatografice)

Western blot test

Western blot test

Western blot test

Western blot test

HIV Western Blot Banding Pattern

HIV-Diagnostic de laborator-testul Western Blot
env

gp160
gp120
gp 41

gag

p55
p18
p24

pol

p65
p51
p31

Interpretation of Results for HIV

(General Consensus)

Negative:

No bands present

Positive:

2 ENV band present

(WHO Guidelines)

Indeterminate:

Any bands present but

do not meet criteria for
positive