Bioquimica Informe 1

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESINAL DE MEDICINA HUMANA
1._ INTRODUCCION:
La Espectrofotometra es una de las tcnicas
experimentales ms utilizadas para la deteccin especfica
de molculas. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y
su aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomolculas, etc) y estado de agregacin
(slido, lquido, gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la
espectrofotometra son relativamente sencillos.
La mayora de los problemas analticos reales comienzan
con una compleja mezcla a partir de la cual es necesario
aislar, identificar y cuantificar uno o ms componentes dela
misma. Se pueden plantear las siguientes cuestiones: una,
de carcter cualitativo (de qu componente se
trata?), y otra de carcter cuantitativo (cunto hay de ese
componente?).Para ello, se puede utilizar el mtodo
instrumental de anlisis, como es la espectrofotometra
para medir la absorcin de radiacin ultravioleta y visible
que interacta con la materia (tomos y molculas), la
misma es considerada una tcnica cuali y cuantitativa
basndose en la medicin del color o de la longitud de onda
de una radiacin e intensidad de la misma. Se har una
descripcin del mtodo espectrofotomtrico para dar al
lector una idea del empleo del mismo y su utilidad en los
ensayos de sustancias.
BIOQUIMICA Y NUTRICION

2.- OBJETIVOS:
Conocer el funcionamiento del espectrofotmetro.
Conocer la diferencia entre un fotocolormetro y un
espectrofotmetro.
Graficar el espectro de luz.
Indagar la relacin matemtica entre la absorbancia y
tramitacin.

3.- Marco Terico:

La espectrofotometra se refiere a la medida de cantidades
relativas de luz absorbida por una muestra, en funcin de la
longitud de onda.
Cada componente de la solucin tiene su patrn de
absorcin de luz caracterstico comparando la longitud de
onda y la intensidad del mximo de absorcin de luz de una
muestra versus soluciones estndar, es posible determinar
la identidad y la concentracin de componente disueltos en
la muestra (solucin incgnita).
Los mtodos espectrofotomtricos se basan en la medida
de la radiacin electromagntica emitida o absorbida por la
materia; los mtodos de emisin utilizan la radiacin
emitida cuando un analito es excitado por energa trmica,
elctrica o radiante; los mtodos de absorcin estn
basados en la disminucin de la potencia de la radiacin
electromagntica como consecuencia de la absorcin que
se produce en su interaccin con el anlisis. Si se aplica
energa a un tomo, esta puede ser absorbida y un electrn
externo puede ser promovido a una configuracin conocida
como estado excitado; dado que ese estado es inestable, el
atomo retornara inmediatamente al estado fundamental,
emitiendo energa.
La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e
infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es
caracterstica para cada sustancia qumica.
Por lo tanto se dice que la espectrofotometra es
fundamental en el estudio de sustancias desconocidas.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa
es absorbida. El color de las sustancias se debe a que estas
absorben ciertas longitudes de onda de luz blanca que
incide sobre ellas y solo dejan pasan a nuestros ojos
aquellas longitudes de onda no absorbidas.

Ley de Bourguer-Lambert- Beer:

Bourguer, Lambert y Beer, a travs de sus observaciones
establecieron relaciones dela variacin de la intensidad de
luz transmitida por una muestra con el espesor de ella o
con la concentracin de la sustancia, para materiales
translcidos. Estas relaciones se conocen como la ley de
Bourguer-Lambert-Beer o ley general de
la espectrofotometra que permite hallar la concentracin
de una especie qumica a partir de la medida dela
intensidad de luz absorbida por la muestra.
Esta ley se puede expresar en trminos de potencia de luz o
de intensidad de luz, asumiendo luz monocromtica, como:
It/ I0= 10-e bc
Donde:
It, es la intensidad de la luz transmitida por la muestra.
I0, es la intensidad de la luz que incide sobre la muestra y
que proviene de la fuente.
e, es el coeficiente de absortividad molar en unidades de M3. cmb , es la longitud de la trayectoria del haz de luz a travs de
la muestra o el espesor de la celda en cm o lo que se
conoce como paso ptico.

4.- Procedimiento experimental

1.- Preparar la siguiente batera de tubos:
Bicromato
de potasio
Agua
destilada
Concentra
cin (mg
%)
Muestra X
Tubo I
Tubo II
Tubo III
Tubo IV
Tubo X
0.8 ml
1 ml
1.3 ml
1.5 ml
9.2 ml
9 ml
8.7 ml
8.5ml
.
9 ml
. .
.
.
..
. .
.
.
.
1 ml
Solucin stock: Bicromato de Potasio 80 mg%. Calcular la

concentracin en mg% de bicromato de K en cada uno de
los tubos Standard (I-II-II-IV).
Leer las absorbancia de los
cuatro tubos a 350 nm de longitud de onda ( ) en el
espectrofotmetro contra el H2O destilada (Abs. H2O=0).
2. Con los datos obtenidos construir en un papel
milimetrado la grfica de absorbancia en el eje de las
Ordenadas vs concentracin de bicromato de K en el eje de
las Abscisas.

3. Una vez obtenida la curva de calibracin, medir la

absorbancia de la muestra problema (Problema X).
4. Obtener el factor de calibracin (Fc) promedio con las
soluciones standard y sus Absorbancia utilizadas para
construir las curvas de calibracin ajustadas.
5. Calcular la concentracin de la muestra problema por los
siguientes mtodos:
A.- Grficamente extrapolando su absorbancia en la curva
de calibracin.
B.- Usando Factor de Calibracin, multiplicando su
absorbancia por el factor de calibracin del standard.
5.- Desarrollo experimental

6.- Conclusiones :
Se ha llegado a la conclusin de que la espectrofotometra
es un mtodo analtico indirecto porque se basa en la
medicin de la absorbancia o transmitancia de las
radiaciones; es de gran utilidad en la actualidad para la
identificacin de un analito en una muestra problema.
La espectrofotometra es el mtodo ms usado, debido a
que es sencillo, especfico y sensible.
7.- Cuestionario

1.- Explique el mecanismo de

funcionamiento de un espectroftometro
Un espectrofotmetro es un instrumento usado en
el anlisis qumico que sirve para medir, en funcin de
la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma
magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y
la concentracin o reacciones qumicas que se miden en
una muestra. Tambin es utilizado en los laboratorios de
qumica para
la cuantificacin de sustancias y microorganismos.
Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de
absorcin atmica o espectrofotmetro de masa y visuales.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz
de luz monocromtica a travs de una muestra y medir la
cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le
permite al operador realizar dos funciones:
1. Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en
la muestra
2. Indicar indirectamente qu cantidad de la sustancia
que nos interesa est presente en la muestra
Componentes de un espectrofotmetro
Cubetas de espectofotometra. En un primer plano, dos
de cuarzo aptas para el trabajo con luz ultravioleta; en
segundo plano, de plstico, para colorimetra (es decir,
empleando luz visible).

Fuente de luz
La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con
las siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad,
distribucin de energa espectral continua y larga vida. Las
fuentes empleadas son: lmpara de wolframio (tambin
llamado tungsteno), lmpara de arco de xenn y lmpara
de deuterio que es utilizada en los laboratorios atmicos.
Monocromador
El monocromador asla las radiaciones de longitud de
onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto,
se usa para obtener luz monocromtica.
Est constituido por las rendijas de entrada y
salida, colimadores y el elemento de dispersin. El
colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es
un lente que lleva el haz de luz que entra con una
determinada longitud de onda hacia un prisma el cual
separa todas las longitudes de onda de ese haz y la
longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona
ese haz hacia la rendija de salida.
Compartimiento de Muestra
Es donde tiene lugar la interaccin, R.E.M con
la materia (debe producirse donde no haya absorcin ni
dispersin de las longitudes de onda). Es importante
destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de
Lambert-Beer en su mxima expresin, con base en sus

leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la

molcula de fundamental-excitado.
Detector
El detector, es quien detecta una radiacin y a su vez lo
deja en evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos:
a) Los que responden a fotones;
b) Los que responden al calor.
Fotodetectores
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de
16 fotodetectores para percibir la seal en forma
simultnea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro
visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las
partes mviles del equipo.

2.-
Que
diferencias existen un
fotocolormetro y un
espectrofotmetro?
Los espectrofotmetros son espectrmetros que permiten
medir la relacin entre la energa radiante de dos rayos, lo
cual es necesario para medir la absorbancia. Los
fotocolormetros emplean filtro para seleccionar las
longitudes de onda en combinacin con un transductor de
radiacin adecuado, a diferencia de los espectrofotmetros
en los que la longitud de onda se puede modificar
continuamente, por lo que es posible registrar espectros de
absorcin.
Otra diferencia radica en que la mayora de los modelos de
espectrofotmetros pueden cubrir la regin UV/visible y a
veces la infrarroja cercana, mientras los foto colormetros
se emplean ms comnmente en la regin visible.

3.- Grafique el espectro de luz, tanto en

el rango visible como no visible con sus
respectivas longitudes de ondas
4.- Que reacio matemticamente

existe entre absorbancia y
transmitancia?
El logaritmo:
Abs = -log T = -log (It/Io)
donde Abs es absorbancia, T es transmitancia, I es
intensidad transmitida (la intensidad de la luz luego de
atravesar la muestra) y Io es intensidad incidente (la
intensidad de luz antes de atravesar la muestra).

5.- Construya una curva de

calibarcion con los siguientes
valores:
Standa
rd 1
Concentra
5
cion
mg/d
Absorbanc
0.025
ia
Standa
rd 2
10
mg/d
0.050
Standa
rd 3
20
mg/d
0.100
Standa
r4
30
mg/d
0.150
Estnd
ar 5
40
mg/d
0.200
Con la curva obtenida halla la concentracin de las

siguientes muestras, sabiendo que sus absorbancias fueron:
Muestra A. 0.015
Muestra B.. 0.125
Muestra C.. 0.350

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