Principiul metodei Lipidele totale din ser sunt extrase la cald cu amestec alcool eter, extractul este evaporat la sec, dup care rezidul este cntrit. Mod de lucru Se adaug cu pictura, agitnd continuu 1 ml ser peste 20 ml amestec alcool eter, ntr-un balon Erlenmeyer. Se agit 10 minute la temperatura camerei, dup care se va ine pe baie de ap fierbinte timp de 1 minut i agitnd. Se filtreaz apoi printr-un filtru cantitativ plisat i degresat n prealabil cu alcooleter. Se spal cantitativ balonul cu precipitat de dou ori cu cte 5 ml eter uor nclzit. Filtratul i eterul de splare se trec ntr-o capsul, dup care se evapor coninutul capsulei pe o baie de ap la sec. Reziduul se reia cu eter i se filtreaz prin filtru cantitativ plisat ntr-o capsul tarat n prealabil (greutatea = G). Se evapor eterul pe baie de ap, se rcete capsula, apoi se cntrete i se menine n exicator pn la pond constant. Se noteaz greutatea cu G. Calculul (G G) 1000 = g lipide / 1000 ml ser n care: G = greutatea capsulei; G = greutatea capsulei i lipide. Metoda cu fosfovanilin Principiul Lipidele serice n prezena fosfovanilinei formeaz la fierbere, n mediu acid, un complex colorat n rou. Intensitatea coloraie obinute se estimeaz fotometric i este proporional cu concentraia acizilor grai nesaturai, respectiv cu concentraia lipidelor totale din ser. Mod de lucru Se realizeaz urmatoarea schem experimental: Reactivi Ser Soluie etalon Ser fiziologic H2O) Ac. Sulfuric
Proba 0,1 (sau 4
Etalon 0,1 4
Martor 0,1 4
Se fierbe 10 minute pe baie de ap. Se rcete imediat sub curent de ap.
Probe Soluie de fosfovanilin
0,1 2
0,1 2
0,1 2
Se agit puternic i se rcesc sub curent de ap. Se las n repaus 20-30 de
minute pentru dezvoltarea culorii. Intensitatea culorii, respectiv extincia se determin fotometric la 530 nm. Calcul Se aplic relaia: mg lipide totale/100 ml ser = (EP EM)/(EE EM) CE unde: EP = extincia probei de analizat EM = extincia martorului EE = extincia etalonului CE = concentraia soluiei etalon de triolein