RAPORT DE PRACTIC

Numele si prenumele studentului: Angelescu Gelu - Ctlin

Universitatea/Facultatea: U.S.A.M.V, Facultatea de Biotehnologii
Institutia si departamentul in care a desfasurat stagiul de pregatire practica: Institutul
Naional de Cercetare-Dezvoltare Chimico-Farmaceutic ICCF Bucureti.
Domeniul de activitate: obinerea de tehnologii, produse si servicii de interes pentru industria
de medicamente si practica terapeutic
Date de contact institutie: Calea Vitan, nr 112, sector 3, cod 031299, Bucureti
Perioada si durata stagiului de pregatire practica: 09.07.2012-27.07.2012, 90 ore

Despre Institutul de Cercetri Chimico Farmaceutice Bucureti

Principala misiune a Institutului Naional de Cercetare-Dezvoltare ChimicoFarmaceutic ICCF Bucureti este de a furniza noi tehnologii, produse i servicii de interes
pentru industria de medicamente i practica terapeutic, acest institut fiind singura unitate de
cercetare din domeniul medicamentelor din Romania capabila s realizeze ntregul ciclu de
dezvoltare a unui nou medicament, de la sinteza substanei farmacologic active, la documentaia
necesar punerii pe pia.

Domeniile de activitate:
n principal, institutul realizeaz, cercetri fundamentale i aplicative, dezvoltare
tehnologic n domeniile: chimico-farmaceutic, biotehnologiei, medicinei; execut si producie
de mic tonaj n vederea susinerii i valorificrii activitii de cercetare tiinific.

Pe lng obiectul principal de activitate, institutul dispune de capaciti pentru:

- activiti conexe activitii de cercetare-dezvoltare: asisten tehnic de profil, lucrri de
consultan tehnico-economic pentru ageni economici interesai, servicii tiinifice i
tehnologice, testare i certificare de produse;

- valorificare, pe baz de contract cu beneficiarii, tehnologiile realizate prin cercetare,

medicamente de uz uman i veterinar, substane active medicamentoase i intermediari, reactivi
puri, teste de diagnostic clinic, substane de uz cosmetic obinute n institut.

Stagiul de practic - obiective

n cele 15 zile de practic efectuat la INCDCF ICCF Bucureti am avut ocazia s particip
la o serie de exprimente i mi-au fost prezentate metode de lucru pentru obinerea unor compu i
utili n terapie.
Acest stagiu a avut ca obiectiv nsuirea unor tehnici de laborator din domeniul farmaceutic,
i fixarea cunotintelor teoretice dobndite pe parcursul celor 3 ani de facultate.
n continuare am prezentat activitile desfurate n perioada de practic:
1. Dozarea proteinelor prin metoda Lowry
-

Aceast dozare se realizeaz pentru a se determina coninutul de

protein dintr-o prob.

Se lucreaz n balon cotat de 100 ml. n acesta se cntreste o cantitate

de 0,03g de material din care se dorete dozare proteinei (aici venin de
viper). Balonul se aduce la semn cu ap distilat i se agit din cnd n
cnd pn se dizolv proba i se obine un amestec omogen.
Din balonul cu amestec se ia 1ml de prob diluat i se pipeteaz ntr-o eprubet. n aceasta
se adaug apoi 1ml de reactiv alcalin de cupru i se incubeaz la temperatura camerei timp de 10
minute.

Dup incubare se pipeteaz 2 ml reactiv Folin Cioclteu (raport 1:10) i se incubeaz

pentru nc 45 minute, tot la temperatura camerei.
Dup cele 45 de minute coninutul eprubetei este transferat intr-un balon cotat de 5ml i este
adus la semn (5ml) cu ap distilat.
Un martor se lucreaz n paralel cu proba/probele, n aceleai condiii, nlocuindu-se proba cu
1ml de apa distilat.
Absorbanele probelor i a martorului sunt citite la spectrofotometru, la lungimea de und
=750nm.

Dup citirea densitilor optice, rezultatele sunt interpretate i se realizeaz calculele de

determinare a coninutului de protein dupa formula:

CP
2. Msurarea si analiza proteinelor cu ajutorul Kit-ului Protein 80 si Protein 230 Agilent
Kit-urile Protein Agilent sunt destinate pentru msurarea i analiza proteinelor cuprinse ntre
4 80 kDa, respectiv 8 230kDa i poate fi folosit pentru analiza lizatelor celulare sau a
proteinelor purificate.
Echipamentul de lucru cuprinde:
-

suport, prevzut cu o sering pentru presiune.

chip, prevazut cu 16 godeuri marcate specific.
un bioanalizor, pentru citirea rezultatelor conectat la calculator.
un electrod Cleaner.
reactivi (gel Dye, destaining solution, buffer, ladder).

Mod de lucru:
Se aeaza chip-ul cu care este prevzut kit-ul n locaul special. Se ridic seringa pn la 1ml
i se nchide capacul, dup care se impinge seringa pn la carlig si se atept 15 secunde, dup
care se elibereaz. Astfel se realizeaz presurizarea chip-ului.

n godeul marcat cu G din dreapta sus se ncarc 12 l de amestec Gel-Dye. Se nchide capacul
kitului si se apas seringa pna la carlig, se ateapt 60 secunde i se elibereaz. Astfel se
distribuie uniform amestecul Gel Dye in intregul chip.
n fiecare godeu marcat cu G se pipeteaza 12 l de amestec Gel
Dye.
n godeul marcat DS se pipeteaza 12 l de solutie Destaining.
n godeul pentru ladder se pipeteaz soluia marker/ladder.
n restul godeurilor (10) se pipeteaz cte 6,5 l de prob.
Dupa pipetare, chip-ul este introdus n bioanalizor pentru citirea
probelor.

3. Realizarea unui preparat proaspt dintr-o tulpina microbian

Preparatul proaspt s-a realizat pe o lama de sticl, cu o picatur de colorant/apa distilat, n
care a fost introdus cu o ans tulpina microbian, n prezena becului de gaz, n vederea
observrii acesteia la microscop.

Dup realizarea preparatului, am observant microscopic:

-

O tulpina de fungi izolat de pe calota glaciar aceast tulpin este neidentificat, datorit
lipsei caracterizrii genetice.

Tuplina fung (stanga) si bacterie (dreapta)

O tulpin de bacterii din genul Agrobacterium mutant pentru obinerea unor cantiti mari
de polizaharide.

O tulpina de drojdii Aureobasidium pullulan important pentru obinerea unor enzime si a

polizaharidelor. Aceast tulpin a fost vizualizat cu obiectivul de imersie, cu ulei de imersie.
4. Obinerea unui extract vegetal de interes terapeutic

Mi s-a prezentat aparatura i procesul de obinere a unui extract din material vegetal, util pentru
realizarea de preparate cu actiune terapeutic.
Planta ce se presupune a contine o substanta valoroas este uscat si tocat i supus unei
extracii (asistat termic, sau nu) in solvent (polar sau nepolar), in condiii de agitare si reflux cu
refrigerant.
Extractul este supus unei rciri la temperatura camerei si apoi este filtrat. Filtratul este mai
departe concentrat n rotavapor i separat fizic sau chimic.

Dup separare, produsul obinut este analizat pentru a se determina continutul de

substanta activ urmrit i se efectueaz teste farmacologice si toxicologice pentru a se exclude
existena unor riscuri si a efectele nocive (adverse).
Daca rezultatele dovedesc ca substana nu prezint niciun risc pentru organism, este brevetat
si aplicat in producie.

5. Tehnici cromatografice (Cromatografie de gaze, HPLC, UPLC)

Cromatografia este o tehnica pentru separarea amestecurilor in componente pentru a analiza, a
indentifica, a purifica i a cuantifica amestecul sau componentele.
Cromatografia este utilizata pentru :
-

Analiz - examinarea amestecului,a componentelor sale si relatiile dintre acestea

Identificare - determinarea unui amestec sau componente pe baza unor componente
dejacunoscute
Purificare - separarea componentelor pentru aizola unul dintre ele ce prezinta interes
pentru studii ulterioare
Cuantificare - determinarea cantitatii amestecului si/sau a componentelor prezente in
prob.

Mi s-a explicat principiul de funcionare a unui aparat pentru cromatografie de gaze, precum
i traseul strbtut de substana de separat de la introducerea n coloan pn la interpretarea
rezultatelor.
Prin cromatografie de gaze pot fi analizate/identificate doar substanele care volatilizeaza la
temperaturi cuprinse ntre 40C si 300C.
Prin HPLC si UPLC (cromatografie lichid de nalt performan ) pot fi separate/analizate
substanele lichide, n funcie de afinitatea acestora faa de faza mobil.
Substanele de separat (gaz sau lichid) sunt introduse n coloana cromatografic prin intermediul
unui injector (prevzut cu sisteme de control a cantitii de substana).

Coloana cromatorgrafica - gaz (stanga), HPLC (dreapta)

Coloana cromatografic se afl n interiorul unui cuptor i la interior este prevazut cu un

inveli de silica gel, care reprezint faza staionar. n interiorul coloanei, dup injectare,
substana ader la faza mobil, fr a interaciona chimic cu aceasta, i este expulzat intr-un
detector de ionizare.
n detector se realizeaz analiza substanei i este afiata cromatograma, pentru a fi
comparat cu un etalon.

Observaii personale
Stagiul de practic efectuat n cadrul INCDCF ICCF m-a ajutat s am o viziune clar cu
privire la viitoarea mea carier n domeniul biotehnologic.
n aceast perioad am reuit s aplic practice cteva din cunotinele acumulate n anii
de facultate, am reuit s fixez ceea ce am nvat, i mai mult, am reuit s vd cum se
desfoar activitatea din acest domeniu ntr-un colectiv cu personal calificat ntr-o atmosfer
profesional.
Cel mai mult am fost atras de laboratoarele de analize cromatografice si de sta ia pilot
(biotehnologii extractive), acestea fiind seciile care dispun de cea mai moderna aparatur din
institut.

Concluzii
1. n urma celor 15 zile de practica la INCDCF ICCF am reuit s fixez i s aplic cteva din
cunotinele acumulate in facultate.
2. Am dobndit noi cunotine n diferite ramuri ale biotehnologiilor farmaceutice.
3. Am realizat c imi doresc o carier n domeniul biotehnologiilor, intr-un colectiv profesional.
4. Am reuit s privesc o perioad din via prin ochii unui angajat n acest domeniu, realiznd
ca aceast carier nu aduce doar beneficii, dar c dac eti pasionat po i trece peste
dezavantaje (de obicei materiale).

10