Sunteți pe pagina 1din 18

CUPRINS

CAPITOLUL I INTRODUCERE.......................................................................................................................... 2
CAPITOLUL II METODE DE DETERMINARE A ACIUNII SINERGICE A UNOR ANTIOXIDANI
POLIFENOLICI..................................................................................................................................................... 3
II.I INTRODUCERE.............................................................................................................................................3
II.II PREPARARE, EXTRACIE I PURIFICARE PRELIMINAR...........................................................3
II.III METODE DE DETERMINARE A UNOR ANTIOXIDAI POLIFENOLICI......................................4
II.III.1 METODE CROMATOGRAFICE..........................................................................................................................4
II.III.2 METODE SPECTROMETRICE...........................................................................................................................7
II.III.3 METODE ELECTROFORETICE..........................................................................................................................7
II.III.4 VOLTAMETRIA CICLIC..................................................................................................................................7
II.IV METODE DE DETRMINARE A ACIUNII ANTIOXIDANTE A UNOR COMPUI
POLIFENOLICI........................................................................................................................................................7
II.IV.1 TESTUL PAO(TEZA DE DOCTORAT GABRIELA IORDCHESCU).....................................................................7
II.IV.2 TESTUL DPPH(TEZA DE DOCTORAT GABRIELA IORDCHESCU)...................................................................8
II.IV.3 DETERMINAREA NUMRULUI TBA(TEZA DE DOCTORAT GABRIELA IORDCHESCU).................................8
II.IV.4 EFICACITATEA ANTIOXIDANT(TEZA DE DOCTORAT GABRIELA IORDCHESCU)..........................................9
II.IV.5 DETERMINAREA INDICELUI DE PEROXID(TEZA DE DOCTORAT GABRIELA IORDCHESCU)...........................9
II.IV.6 GRADUL DE OXIDARE..................................................................................................................................10
II.IV.7 TESTUL CU O-FENANTROLINA.....................................................................................................................10
II.IV.8 DETERMINAREA CONINUTULUI N COMPUI POLIFENOLICI PRIN METODA BARY I THROPE(TEZA DE
DOCTORAT GABRIELA IORDCHESCU).......................................................................................................................10
II.IV.9 TOXICITATEA ANTIOXIDANILOR................................................................................................................10
II.V METODE DE EVALUARE A EFICIENEI ANTIOXIDANTE.............................................................10
II.V.1 METODE DE DETERMINARE A GRADULUI DE OXIDARE.................................................................................10
II.V.2 METODE DE DETERMINARE A CANTITII DE OXIGEN CONSUMATE.............................................................10
II.V.3 METODE PENTRU TESTAREA STABILITII ULEIURILOR I A GRSIMILOR!!!!!!!!!.......................................10
II.V.4 METODE ANALITICE!!!!!!!!...........................................................................................................................10
CAPITOLUL III CALCUL STATISTIC............................................................................................................. 12
III.I OBINEREA POPULAIEI STATISTICE FORMAT DIN VALORI EXPERIMENTALE............12
III.II CALCULUL VALORILOR PARAMETRILOR STATISTICI AI UNEI REPARTIII TEORETICE
NORMALE..............................................................................................................................................................12
III.II.1 SEMNIFICAIA PARAMETRILOR STATISTICI AI UNEI REPARTIII TEORETICE NORMALE................................12
III.II.2 VERIFICAREA CARACTERULUI NTMPLTOR AL MPRTIERII REZULTATELOR EXPERIMENTALE.............15
III.II.3 VERIFICAREA NORMALITII REPARTIIEI DATELOR EXPERIMENTALE........................................................15
III.II.4 VVVVVV.......................................................................................................................................................15
III.II.5 VVVVVV.......................................................................................................................................................15
III.II.6 VVVV...........................................................................................................................................................15
III.IV VERIFICAREA CARACTERULUI NTMPLTOR AL MPRTIERII REZULTATELOR
EXPERIMENTALE................................................................................................................................................15
III.IV.1 CALCULUL PARAMETRILOR STATISTICI AI REPARTIIEI NORMALE.............................................................15

CAPITOLUL I
INTRODUCERE
Avnd n vedere preocuparea omului pentru sntate i longevitate s-au fcut nenumrate studii cu
privire la modalitile de a le pstra i eventual mbunti. Printre aceste studii fac parte i acelea care
determin coninutul n compui polifenolici naturali cu proprieti antioxidante, antialergice, antiinflamatorii, antivirale i anticanceroase. Astfel de compui sunt acizii polifenolici i compuii
flavonoidici care se clasific n foarte multe categorii cum ar fi: flavonoli, flavone, catehine,
proantocianidine, antocianidine i isoflavonoizi

CAPITOLUL II
METODE DE DETERMINARE A ACIUNII SINERGICE A UNOR
ANTIOXIDANI POLIFENOLICI
II.I

INTRODUCERE

SSSSSSS

II.II PREPARARE, EXTRACIE I PURIFICARE PRELIMINAR


Analiza compuilor fenolici ncepe cu extracia. Procedura de extracie depinde de planta analizat, de
compuii fenolici ce urmeaz a fi identificai i de procedura analitic ce urmeaz a fi utilizat(Lee i
Widmer 1996)(Shakkinen). Primul pas n vederea realizrii unei bune extracii este strivirea, mcinarea,
macerarea sau frmiarea probei pentru a mri suprafaa de contact cu solventul(Waterman i Mole
1994) )(Shakkinen). Acesta ajut i la amestecarea probei pentru a se asigura un extract reprezentativ
pentru ntreaga prob.
Cum muli compui fenolici se gsesc sub form glicozidic sau esterificat, pregtirea probei ar putea
include i o hidroliz alcalin, acid sau enzimatic n vederea eliberrii acestor compui fenolici.
Aceast etap a hidrolizei poate fi omis dac se analizeaz compuii n forma lor derivat)(Shakkinen).
n cazul acizilor fenolici, cea mai utilizat metod de hidroliz este cea chimic(acid sa bazic) (Lee i
Widmer 1996) i mai rar cea enzimatic(cu -glucozidaza(Kanes . a. 1993) sau hidroxicinamoil-quinate
esteraza(Gaupy . a. 1990)). Hidroliza acid se poate face prin nclzirea probelor cu HCl timp de 2
h(Kuninori i Nishiyama 1986). Hidroliza bazic a esterilor acidului benzoic i a acidului cinamic poate
fi fcut cu NaOH la temperatura camerei timp de 4-24 h(Seo i Morr 1984, Torres .a. 1987, Peleg .a.
1991, Roussef .a. 1992a, b, Romnel i Wrolstad 1993a) sau timp de 90 min. la 60 oC n atmosfer de
N2(Kuninori i Nishiyama 1986). Romnel i Wrolstad(1993a) au testat hidroliza acid n comparaie cu
hidroliza bazic n analiza coninutului n acizi fenolici(acidul elagic, acidul hidroxibenzoic, acidul
hidroxicinamic, flavonoli, flavan-3-oli) din sucul de zmeur. Extractul hidrolizat alcalin a fost foarte
asemntor cu cel acid. Numai acidul elagic a fosta hidrolizat mai eficient n condiii alcaline dect cele
acide(Romnel i Wrolstad 1993a). Recuperarea a fost mai slab(57-67%)pentru extractul cu acid
hidroxicinamic hidrolizat alcalin(Peleg .a. 1991). Totui, Seo i Morr(1984) au gsit c hidroliza cu
NaOH duce la o mai bun recuperare a acidului ferulic extras din soybean protein products urmat de o
hidroliz acid cu HCl. Hollman i Venema(1993) au testat extracia urmat de hidroliz pentru
coninutul n acid elagic din walnuts i berries(cpuni, zmeur, mure) utiliznd HCl sau soluie apoas
de metanol n proporii diferite i variind perioada de hidroliz. Caracteristicile hidrolizei pentru
elagitaninuri din walnuts (optim HCl 5M n soluie apoas de metanol 57% timp de 1h) difer de cele ale
berries(optim cu HCl 3,5 M n soluie apoas de metanol 72% timp de 4-8h). n general, optimizarea
condiiilor de extracie i de hidrolizeste necesar ntotdeauna atunci cnd acizii fenolici sunt
determinai cantitativ din fructe sau alte pri ale plantelor(Lee i Widmer 1996).
Determinarea compuilor flavonoidici n plante a fost studiat pe larg de Markham(1982,1989), de
Harborne(1988,1994) i de Robards i Antolowich(1997)(Shakkinen).
Flavonoizii sunt n general compui stabili i pot fi extrai din diferite plante proaspete sau uscate cu
diferii solveni la rece sau la cald. Pentru extracie, solvenii utilizai se aleg n funcie de polaritatea
compuilor flavonoidici studiai. Uneori se mai folosete i o extracie cu light petroleum sau hexan
pentru a scpa de steroli, carotenoide, clorofile etc.)(The flavomoids, J. B. Harborn, T. J. Mabry, H.
Mabry, pag. 3). Solvenii cei mai utilizai sunt amestecuri de ap i etanol, metanol, aceton sau
dimetilformamid (Robards i Antolowich 1997) )(Shakkinen).
n cazul acizilor fenolici, cei mai utilizai solveni sunt acetatul de etil(Azar .a 1987, Fernndez de
Simn .a. 1990,1992) dietileterul(Fernndez de Simn .a. 1990,1992), metanol i metanol n soluie
3

apos(Kuninori i Nishiyama 1986, Tores .a. 1987, Mckae .a. 1990, Tomas-Lorente 1992) )
(Shakkinen).
Pentru purificarea extractelor s-a folosit:
Precipitarea cu acetat de Pb(care are dezavantajul coprecipitrii i a altor compui nefenolici);
Precipitarea cu polivinil piralidon(PVP) la pH=3,5 n 1-10 % metanol n ap;
Tratarea cu crbune sub form de pudr;
Dializa(dialysis)-pentru izolarea moleculelor grele de flavonoizi(i a taninurilor) care sunt solubile n
ap i sunt amestecate cu carbohidrai sau substane anorganice solubile n extractul crud
II.III METODE DE DETERMINARE A UNOR ANTIOXIDAI POLIFENOLICI

II.III.1

Metode cromatografice

Metodele cromatografiei pe hrtie au fost dezvoltate pentru compuii flavonoidici n anii `50 `60(Markham1982, Robards i Antolowich 1997) (Shakkinen).
Aceste tehnici au fost nlocuite de cromatografia n strat subire(TLC) n anii `70 care era o tehnic mai
puin costisitoare pentru analiza simultan a mai multor probe(Robards i Antolowich 1997, Harborne
1998). Selecia unei faze staionare convenabile i a unui solvent adecvat depinde de clasa de flavonoizi
ce urmeaz a fi examinat. Flavonoizii hidrofilici, cum sunt flavonolii, pot fi rapid separai prin TLC pe
poliamid sau celuloz microcristalin(Wildanger i Herrmann 1973, Robards i Antolowich 1997). TLC
este nc utilizat n separrile preparative(Lee i Widmer 1996) ca o metod de screening rapid i
ieftin pentru determinarea claselor de compui flavonoidici prezeni n fructe(Fernndez de Simn .a.
1992) i miere(Sebatier .a. 1992). Aplicaiile TLC pentru determinarea cantitativ a acizilor
fenolici(Azor .a. 1987, Regnault-Roger .a. 1987, Srisuna .a. 1989, Agbor-Egbe i Rickard 1990) sunt
de obicei realizate utiliznd cromatografia n faz normal sau pe suport de silice ori celuloz iar
separarea compuilor se face cu un amestec de purttori de tip hidrocarbur(toluen, dioxan sau benzen)
i modificatori organici polari(aceton, butanol, etanol i acid acetic). Avantjele TLC n screening-ul de
extracte din probe fa de HPLC sunt: detecia contaminanilor care ar putea fi absorbii pe faza
staionar a coloanei HPLC sau determinarea condiiilor de extracie necesare pentru o separare cu
succes a compuilor fenolici(Fernndez de Simn .a. 1992, Lee i Widmer 1996).
Cromatografia de gaze(GC) are aplicabilitate limitat n analiza compuilor flavonoidici i a altor
compui fenolici din cauza volatilitii lor sczute; principalul dezavantaj este necesitatea unei etape n
plus care s asigure volatilitatea compuilor fenolici(Lee i Widmer 1996, Robards i Antolowich 1997).
Totui, cromatografia de gaze cuplat cu spectrometria de mas(MS) a fost aplicat pentru analiza
flavonolilor din ceaiul negru(Finger .a. 1991) i din varz(Nielsen .a. 1993). Avantajele cromatografiei
de gaze include i o separare mbuntit a izomerilor foarte apropriai prin simpla cuplare cu un
spectrometru de mas(Mouly .a. 1993, Schmidt .a. 1994). n anii `80, cromatografia de gaze a fost
aplicat pentru analiza acizilor fenolici din fructe(Mller i Herrmann 1983, Schuster i Herrmann
1985) i legume(Huang .a. 1986).
Cromatografia de lichide de nalt performan(HPLC) a fost cea mai utilizat metod cromatografic n
analiza compuilor flavonoidici din ultimii 20 de ani(Harborne 1988, Robards i Antolowich 1997,
Merken i Beecher 2000). A fosta adus o nou dimensiune n investigarea compuilor flavonoidici din
extractele de plante i alimente. Avantajele particulare ale acestei metode este rezoluia mbuntit a
amestecurilor de compui flavonoidici n comparaie cu alte tehnici cromatografice, abilitatea de a obine
date calitative i cantitative ntr-o singur operaie i viteza mare a analizei(Harborne 1988, Markham
1989). Ca i n cazul compuilor flavonoidici, pentru determinarea acizilor fenolici cea mai utilizat
metod este HPLC, mai precis RP-HPLC(reversed-phase high performace liquid chromatographie)(tabel
3 pag 40 Shakkinen).
Sistemele de solveni utilizate n mod normal n HPLC include eluii cu gradient binar ce folosesc drept
solveni acid acetic n soluie apoas, acid formic n soluie apoas sau acid fosforic n soluie apoas cu
metanol sau acetonitril drept modificator organic. pH-ul sau tria ionic a fazei mobile influeneaz
retenia acizilor fenolici pe coloan n funcie de protonare, disociere sau disociere parial(Marko-Varga
i Barcele 1992). Schimbarea pH-ului ce va duce la creterea ionizrii probei poate reduce retenia la
separarea n faz invers . Astfel, cantiti mici de acid acetic(2-5%), acid formic, acid fosforic sau acid
4

trifluoracetic(0.1%) sunt incluse n sistemul de solveni pentru a mpiedica ionizarea gruprilor fenolice
i carboxilice i pentru a crete rezoluia i reproductibilitatea metodelor cromatografice.(Shakkinen)

Cromatografia n faz normal a fost utilizat la separarea compuilor flavonoidici(flavone, flavonoli i


flavonone aglycones) din sucul de portocale(Galensa i Herrmann 1980a,b). Acetaii flavonoizilor au
fost separai isocratic pe LiChrosorbSi60 utiliznd sistemele acetonitril-benzen, etanol-benzen sau izooctan-etanol-acetonitril drept solvent i detecia la 312 nm sau 270 nm. Totui, pentru sistemele n faz
normal, exist posibilitatea ca n cazul materialelor foarte polare s fie reinute pe coloan )Vande
Casteele .a. 1983) ceea ce duce la o alterare gradual a caracteristicilor separrii. Astfel, cromatografia
n faz invers(RP) a fost invariabil o metod de separare a flavonolilor de ali compui flavonoidici din
fructe(tabel 2 pag 36 Shakkinen)

Calea normal de separare utilizeaz o coloan C18(cu particule de 3-5m) mpreun cu o faz mobil
apoas i metanol sau acetonitril drept modificator organic. Mici cantiti de acid acetic, acid formic sau
tampon fosfat ncorporat n faza mobil tinde s marcheze mbuntirea separrilor compuilor
flavonoidici de ali compui fenolici(Lamuela-Ravents i Waterhouse 1994, Merken i Bucher 2000)
(Shakkinen)

II.III.2

Metode spectrometrice

SSSDS

II.III.3

Metode electroforetice

SSSS

II.III.4

Voltametria ciclic

SSSS
II.IV METODE DE DETRMINARE A ACIUNII ANTIOXIDANTE A UNOR

COMPUI POLIFENOLICI
II.IV.1Testul PAO (teza de doctorat Gabriela Iordchescu)
Testul PAO, sau testul Puterii AntiOxidante, este un test de oxidare forat i se utilizeaz pentru a
determina eficacitatea antioxidanilor naturali sau sintetici. Se bazeaz pe principiul urmririi n
cromatografie n faz gazoas a dispariiei linoleatului de metil n condiii de oxidare de oxidare
forat(temperatur, lumin, prezena oxigenului). Determinrile se fac prin creterea procentual a
reaciei njumtite n raport cu proba martor. Acest test poate dura o perioad de aproximativ 10 h i
permite compararea puterii antioxidante cunoscute sau poteniale a extractelor vegetale.
Metoda este reproductibil i rapid i se realizeaz cu un dispozitiv pus al punct de colectivul condus de
prof. dr. Claudette Berset de la E.N.S.I.A.A. Massy (Frana)(Berset 1990, Cuvelier 1993).
Fiecare prelevare la un timp dat, face obiectul unei analize cromatografice. Pornind de la
cromatogramele obinute, se determin procentul de metil linoleat(ML) rmas neoxidat cu ajutorul
formulei:
%MLneoxidat = (SML/SC20)*(S0C20/S0ML)*100,
unde:
SML suprafaa picului de metil linoleat la timpul t;
SC20 suprafaa picului C20(eicosan)(standard intern insensibil la oxidare) n uniti arbitrare la timpul
t;
S0C20 - suprafaa picului C20(eicosan)(standard intern insensibil la oxidare) n uniti arbitrare la timpul
t0;
S0ML suprafaa picului de metil linoleat la timpul t0.
Cantitatea de metil linoleat rmas neoxidat n funcie de timp se reprezint grafic. Din aceast
diagram se determin timpul pentru jumtate de reacie. n funcie de acesta se determin puterea
antioxidant(PAO) cu ajutorul relaiei:
PAO = [(t-tm)/t]*100
7

unde:
t timpul pentru jumtate de reacie a probei cu antioxidant;
tm - timpul pentru jumtate de reacie a probei martor.
Cunoscnd PAO pentru diferite concentraii de antioxidant n mediul de reacie se traseaz o diagram a
variaiei acestei caracteristici din care se determin concentraia eficace(QE), pentru care puterea
antioxidant este 100.

II.IV.2Testul DPPH(teza de doctorat Gabriela Iordchescu)


Se mai numete i testul antiradical i se utilizeaz pentru a evidenia proprietatea antioxidanilor de a
aciona asupra radicalilor liberi, un radical liber stabil(difenil picril hidrazil DPPH) care prezint
absorban la 515 nm. n figura 1 este prezentat configuraia sa(Kureki 1982, Yoshida 1989, Lamaison
1991)
Fig. 1
.
(C6H5)2 N N C6H7(NO2)3
Prin analogie cu reaciile ntre radicali liberi i compui cu aciune antioxidant(ca de exemplu
polifenolii), DPPH reacioneaz ca acceptor de hidrogen, i n condiiile n care este redus i pierde
absorbana.
.
DPPH + H
DPPH H
Reaciile se urmresc spectrofotometric, determinnd viteza de reacie i puterea antiradical a
antioxidanilor testai.(Lamaison 1988).
Metoda a fost validat cu ajutorul soluiilor etalon de acid rozmarinic(CE 50 = 0.67 * 10-5M), coeficient de
variaie pentru linearitate 2.2%, repetabilitate 3%, reproductibilitate 3.5%.
Se traseaz curbele etalon pentru antioxidanii testai, deoarece dac prezint absorban la 515 nm n
soluie metanolic msurtorile nu pot fi luate n consideraie.
Se determin absorbana iniial a soluiei metanolice de radical liber pentru a fi utilizat drept etalon
pentru soluiile de antioxidani.
Cuvele utilizate pentru determinri trebuie acoperite cu un film protector pentru a evita contactul cu
oxigenul. Se citete absorbana dup 1 minut de reacie i apoi din 15 n 15 minute pn cnd cele dou
componente rmn n echilibru(respectiv reducerea intensitii i stabilizarea culorii).
Se traseaz curbele de dependen a procentului de DPPH n funcie de raportul mg antioxidant/mg
DPPH. Cu ajutorul acestor curbe se calculeaz concentraia de antioxidant eficace(CE50) pentru a reduce
cantitatea de DPPH la 50%. Puterea antiradical(PAR) se determin cu ajutorul formulei:
PAR = 1/CE50

II.IV.3 Determinarea indicelui de TBA (teza de doctorat Gabriela Iordchescu)


Acumularea produselor de degradare oxidativ n cazul diferitelor produse alimentare poate fi evaluat
prin reacia acestora cu acidul 2-tiobarbituric.
Metoda se bazeaz pe formarea complexului colorat dintre produii de oxidare ai unei grsimi i acidul
2-tiobarbituric urmat de msurarea intensitii coloraiei.
Proba mrunit se supune operaiei de distilare n ap distilat acidulat cu HCl. Dup distilare se
adaug acid 2-tiobarbituric i se menine pe baia de ap la fierbere timp de 35 de minute.
Dup rcire se citete extincia la = 532 nm fa de martor, pregtit n aceleai condiii, cu ap distilat
n locul soluiei de prob.
Formula utilizat pentru determinarea valorii TBA este:
NTBA = D532*8,1[mg malonaldehid/Kg produs],
unde,
D532 extincia probei citit la = 532 nm;
8,1 - ..

II.IV.4Eficacitatea antioxidant (teza de doctorat Gabriela Iordchescu)


Acest test urmrete determinarea eficacitii antioxidanilor pe un mediu ce imit un produs alimentar,
i a fost pus la punct n special pentru a estima eficiena antioxidanilor n condiiile n care, trebuie s
protejeze coloranii alimentari, n special n condiiile operaiei de extrudare cnd se impun condiii
deosebite de lucru(temperatur ridicat).
Scopul metodei este compararea eficienei antioxidanilor n cazul proteciei pigmenilor carotenoizi din
ardeiul rou n condiiile fotooxidrii.
Metodic
Soluia de concentrat de ardei rou n aceton se obine n urma unei omogenizri cu ajutorul unei
instalaii cu ultrasunete, datorit faptului c produsul este greu solubil n acest solvent. Din soluia
omogenizat, se adaug 200 ppm ntr-o soluie 10% de gelatin la 36 0C. Pentru a asigura
conservabilitatea soluiei se adaug azotur de sodiu.
Probele pregtite conform protocolului testului, s-au dozat n capsule Petri protejate pe laturile exterioare
cu band adeziv de culoare neagr pentru captarea integral a luminii UV i evitrii difuziei luminii n
cazul determinrilor fotometrice. Pentru a evita uscarea gelatinei i pierderea transparenei s-a aplicat un
start de 1 mL de vaselin. S-a utilizat lumina UV pentru a diminua timpul de esxpunere a probelor.
Cu ajutorul spectrofotometrului de reflexie s-a citit E(diferena total de culoare) la momentul T0 i
apoi s-a urmrit n aceli mod evoluia pn la 72 h.
Principiile msurtorilor fotometrice
Fotometria este tehnica de msurare n domeniul vizibil cea mai rspndit i utilizat pentru aprercierea
culorii unui produs. Evoluia culorii obiectelor opace se bazeaz pe msurarea luminii reflectate pe
suprafa.
Culoarea se poate defini prin 3 componente:
Luminozitate (L*) corespunztoare unui numr de fotoni reflectai. Cu ct culoarea este mai
nchis, cu att sunt mai puini fotoni rflectai
Tenta corespunztoare lungimii de und dominat a curbei de reflexie. De obicei o asimilm culorii.
Tenta i saturaia sunt evaluate pornind de la valorile cromatice a* i b*(figura nr. 1)
Figura nr. 1
Tenta i Saturaia n fotometrie
+b*
M1

-a*
VERDE

ROU
+a*
-b*

ALBASTRU
Cei 3 parametrii L*(luminozitatea), i valorile cromatice a* i b* sunt unitile de baz ale fotometriei.
Tenta este definit prin: = arctg b*/a*;
Saturaia este definit prin :
Diferena de culoare E =

( a *2 b * 2 )

(L a b )
2

Colorimetrul determin cei 3 parametrii cu ajutorul fibrelor optice, necesitnd calibrare intern i o
calibrare extern. Pilotajul se face prin microordinator conectat la imprimant.

II.IV.5Determinarea indicelui de peroxid(teza de doctorat Gabriela Iordchescu)


Metoda se bazeaz pe proprietatea peroxizilor de a elibera iodul din KI n mediu slab acid pe o perioad
determinat(pn la descompunerea peroxizilor). Formula de calcul este:
9

Ip= (V-Vm)/M,
n care:
Ip - indice de peroxid;
V volumul de tiosulfat de sodiu 0.01N folosit la titrarea probei de grsime(mL);
Vm - volumul de tiosulfat de sodiu 0.01N folosit la titrarea probei martor(mL);
M masa de produs luat n analiz(g).(Vasu 1985, Banu 1971)

II.IV.6Gradul de oxidare
SSSSS

II.IV.7Testul cu o-fenantrolina
SSS

II.IV.8Determinarea coninutului n compui polifenolici prin metoda Bary i Thrope (teza


de doctorat Gabriela Iordchescu)
Compuii fenolici sunt cei mai activi, datorit structurii lor i a prezenei n cantit i apreciabile n
produsele vegetale. Metoda utilizat pentru dozarea fenolilor totali este metoda Bary i Thrope
modificat de Taga i Miller[1984]. Mostrele uscate i standardele se prepar ntr-o soluie acidificat
(60:40 metanol/ap + 0,3 % HCl). S-au adugat Na2CO3 i reactiv Folin - Ciocalteau cu citirea
absorbanei la 750 nm la un spectrofotometru JASCO UV-VIS. Standardul a fost acidul galic.
Concentraiile n compui fenolici au fost determinate prin comparaie cu o curb de calibrare standard.

II.IV.9Toxicitatea antioxidanilor
SSSS

II.V METODE DE EVALUARE A EFICIENEI ANTIOXIDANTE


II.V.1 Metode de determinare a gradului de oxidare
SSSS

II.V.2 Metode de determinare a cantitii de oxigen consumate


SSSSS

II.V.3 Metode pentru testarea stabilitii uleiurilor i a grsimilor!!!!!!!!!


SSSSSS

10

II.V.4 Metode analitice!!!!!!!!


SSSSSSSSSS

11

CAPITOLUL III
CALCUL STATISTIC
OBINEREA POPULAIEI
EXPERIMENTALE

III.I

STATISTICE

FORMAT

DIN
xi

67.6
70.0
69.1
70.8
70.4
69.7
70.4
69.3
70.6
72.5

71.5
70.1
70.2
70.6
68.6
70.1
67.8
70.2
69.4
70.4

70.5
68.5
70.1
69.3
70.0
69.9
70.3
71.8
68.3
70.5

70.9
70.6
67.0
70.2
69.7
68.3
69.5
72.5
70.6
70.7

68.2
70.8
70.2
68.4
70.8
69.3
70.7
70.9
70.4
69.8

70.2
70.8
72.5
70.8
67.2
71.6
69.1
73.0
70.3
70.6

70.4
70.1
67.9
70.2
69.8
69.5
70.5
70.9
68.9
70.5

69.1
70.6
70.4
70.2
69.5
70.7
69.7
68.5
70.4
70.7

70.1
68.1
70.2
68.4
70.6
71.0
68.4
69.5
70.5
69.5

70.3
69.6
70.4
72.5
69.9
71.4
71.2
70.5
69.3
70.5

69.6
70.8
70.1
68.7
70.2
68.5
70.9
69.9
70.5
70.5

VALORI
ni

70.9
70.9
69.3
69.8
70.6
70.7
70.8
70.6
68.7
70.5

III.II CALCULUL VALORILOR PARAMETRILOR STATISTICI AI UNEI

REPARTIII TEORETICE NORMALE


III.II.1

Semnificaia parametrilor statistici ai unei repartiii teoretice normale

Parametrii statistici sunt mrimi dimensionale sau adimensionale care caracterizeaz sintetic o
populaie statistic. Parametrii statistici utilizai se clasific n dou categorii distincte, n
funcie de semnificaiile pe care le au, astfel:
III.II.1.a
III.II.1.a

Parametrii statistici de tendin(de centrare, plasare);


Parametrii statistici de mprtiere(de concentrare).

III.II.I.a Parametrii statistici de tendin(de centrare, plasare) descriu punctul n jurul cruia se
plaseaz valorile care formeaz o populaie statistic. n aceast categorie de parametrii statistici
se includ: media aritmetic(m), mediana(Me), modulul(Mo) i valoarea central(Xc).
a.1. Media aritmetic(m)
Valoarea mediei aritmetice descrie tendina de localizare(centrare) a valorilor unei populaii
statistice, fiind parametrul cel mai utilizat al tendinei centrale.
Pentru o populaie statistic format din N valori experimentale discrete, valoarea mediei
repartiiei teoretice normale este:
m=
unde,

1 f
*
N i 1 xi

i
a

p * xi
i

j numrul valorilor individuale din populaie, i = 1,

i
a

- frecvena absolut a valorilor individuale i;


=

i
a

- probabilitatea ca valorii variabilei aleatoare x s fie egal cu valoarea

N
variabilei independente i.
Se observ c valoarea mediei aritmetice este egal cu valoarea momentului de ordinul 1 al
valorilor populaiei. Dac populaia statistic este format din variabile numerice cu caracter
continuu, valoarea mediei teoretice este definit de relaia:

12

x2

m=

x * f ( x) * dx

x1
unde, x1 i x2 sunt5 limitele inferioar i superioar intervalului n care se plaseaz valorile
populaiei;
f(x) funcia de densitate de probabilitate a valorilor populaiei statistice.
Pentru o populaie statistic prezentat sub forma unor subiruri:
1
m=
xi

i 1
unde, - nr. de subiruri n care sunt mprite valorile populaiei;

- media aritmetic a subirului care are numrul de ordine i.

Pentru o populaie statistic cu valori grupate n k clase,


i
1 k
i
* xc
m=
f

N i 1 a
unde,

- frecvena absolut a clasei i;


- valoarea central a clasei i.

Pentru populaii statistice foarte numeroase se rein probe(eantioane) de volum n, n<<N, iar
n

X xi
i 1

unde, X media aritmetic a eantionului, valoare care estimeaz punctual valoarea mediei
aritmetice(m) a populaiei.
Pentru populaia statistic de la pct. III.I:
n = 120
m=
X =
a.2. Mediana(Me)
Valoarea x = Me a a variabilei aleatoare pentru care este ndeplinit condiia matematic F(Me) =
0,5 se numete median. F(x) reprezint funcia de repartiie teoretic normal a variabilei
aleatoare x, iar x = Me este valoarea variabilei aleatoare pentru care graficul su prezint un
punct de inflexiune, iar F(Me) = 0,5
Fig. Nr. 1
Semnificaia valorii medianei pentru funcia de repartiie F(x)
GRAFIC

n consecin, mediana(Me) reprezint acea valoare care ocup poziia central a populaiei
dispus n serie statistic, deci, frecvena absolut a valorilor mai mari ca mediana este egal cu
frecvena absolut a valorilor mai mici ca mediana. Valoarea medianei se calculeaz cu relaii
care depind de volumul populaiei, astfel:
1). N este impar, Me = X(N+1)/2, relaie prin care se obine numrul de ordine al valorii care
reprezint mediana irului statistic; mediana are o valoare identic cu cel puin una din valorile
populaiei statistice.
2). N este par, Me = (XN/2+X(N/2) +1)/2, relaie prin care se obine valoarea medianei, ca medie a
valorilor care au numr de ordine N/2 i (N/2) +1 n irul statistic. Dac valorile care au aceste
numere de ordine sunt identice, mediana este valoarea care face parte din populaia statistic.
a.3. Modulul(Mo)
13

valoarea experimental X = Mo care are cea mai amre frecven absolut - este valoarea cea mai
probabil se numete modul. Valoarea modulului teoretic pentru o populaie statistic se
calculeaz cu ajutorul relaiei:
Mo = 3*Me*2m
Valoarea modulului corespunde unui maxim al valorii funciei de frecven(fig. nr. 2), pentru o
populaie format din valori cu caracter continuu.
Fig. Nr. 2
Relaia dintre valoarea funciei de frecven i modulul populaiei.
GRAFIC
Dac graficul funciei de frecven prezint un singur maxim este unimodal populaia va fi
caracterizat de un singur modul(este unimodal). Avnd n vedere c f`(x) = 0 prezint uneori mai
multe soluii, populaia respectiv este multimodal (fig. nr. 3) prezentnd graficul funciei de
frecven pentru o populaie dimodal.
Fig. Nr. 3
Graficul funciei de frecven de repartiie pentru o populaie dimodal
GRAFIC
Valorile X1 = (Mo)1 i X2 = (Mo)2 au cele mai mari frecvene absolute din ntreaga populaie. Pe baza
observaiei directe, se poate identifica valoarea variabilei aleatoare care are cea mai mare frecven
absolut modulul experimental.
Pentru populaiile statistice care respect o repartiie teoretic normal, valoarea modulului teoretic
este egal, sau foarte apropiat, de valoarea modulului experimental.
a.4. Valoarea central(Xc)
valoarea central(Xc) a unei populaii este acea valoare care ocup poziia central a cmpului de
mprtiere. Valoarea central se calculeaz cu ajutorul relaiei:
Xc =

max

xmin
2

Fiind semisuma valorilor extreme ale populaiei. Folosind o relaie similar, se poate calcula valoarea
central a unui cmp de toleran (XT), astfel:
XT =

inf

T sup
2

unde, Tinf i Tsup reprezint limitele cmpului de toleran.


a.5. Consideraii asupra parametrilor statistici de tendin
Asupra parametrilor statistici de tendin ai unei populaii statistice, se impun urmtoarele
consideraii:
A. Parametrii statistici de tendin au mrimi i uniti de msur identice cu cele ale valorilor
experimentale.
B. La calcularea valorilor parametrilor statistici de tendin se rein un numr de zecimale cu 2
uniti mai mare dect numrul de zecimale cu care au fost obinute valorile experimentale.
III.II.I.a Parametrii statistici de mprtiere(de concentrare) descriu tendina de concentrare sau
mprtiere a valorilor populaiei, precum i forma graficului funciei de frecven. n aceast
categorie de parametrii statistici se includ: dispersia, abaterea(eroarea) medie ptratic,
amplitudinea, coeficientul de variaie, asimetria, coeficientul de asimetrie i coeficientul de exces
b.1.
Dispersia(variana)
Dispersia este o mrime adimensional care descrie concentrarea valorilor populaiei n jurul unei
anumite valori. Ea reprezint momentul centrat de ordin 2 fa de valoarea real(vr),
14

D(N) =

1
N

f x v 2
j

i 1

sau fa de valoarea medie(m)


i
1 j
2

m2
D(N) =
f

x
i
a
N i 1
Dispersia valorilor populaiei statistice fa de valoarea real (vr) se calculeaz n cazul proceselor
de etalonare a aparaturii, de verificare(testare) a unui proces analitic sau a unei operaii
tehnologice.
Dispersia valorilor populaiei statistice fa de valoarea media (m) se calculeaz pentru cazul n
care nu se cunoate valoarea real a variabilei aleatoare. Spre exemplu, concentraia molar a
ionilor de Ca+2 n apa provenit de la o surs natural. Pentru c valoarea [Ca +2] este dependent
de foarte muli factori naturali, pentru fiecare populaie statistic se calculeaz dispersia valorilor
fa de valoarea medie.
Pentru cazul unui eantion de volum n, n<<N, dispersia valorilor se calculeaz fa de valoarea
medie a eantionului( X ).
j
i
1
2
2
X 2 n 1
D(N) =
f

x
i
a
n 1 i 1
Valoarea dispersiei afecteaz geometria graficului funciei de frecven, conform fig. nr. 4
Fig. nr. 4
Geometria graficului funciei de frecven n funcie de valoarea dispersiei:
a. Dispersia are valoarea mic
b. Dispersia are valoare mare

GRAFIC
a

Dispersia valorilor unei populaii statistice este o msur a preciziei unui proces analitic sau a
unei operaii tehnologice; dispersiile mici corespund unei precizii mari
b.2. Eroarea(abaterea) medie ptratic
Eroarea(abaterea)medie ptratic eroarea(abaterea) standard este mrimea egal cu radical din
valoarea dispersiei, pstrnd unitatea de msur a valorilor populaiei i notaia sau , dup caz.
Astfel, n cazul unui proces de etalonare sau testare a unui ansamblu analitic, mrimea
i
1 j
vr 2
=
f

a xi
N i 1
se numete eroare medie ptratic(eroare standard); diferena

x v
i

se numete eroare.

Dac nu se cunoate valoarea real a variabilei aleatoare, mrimea


i
1 j
m2
=
f

N i 1 a xi
se numete abatere medie ptratic(abatere standard); diferena

x m
i

se numete abatere.

Eantionul de volum n se caracterizeaz prin abaterea medie ptratic , a crei valoare se


calculeaz:
j
i
1
X 2
=
f

n 1 i 1 a xi
Abaterea medie ptratic a eantionului(), se estimeaz punctual valoarea abaterii medii
ptratice() pentru populaie. Valoarea abaterii(erorii) medii ptratice caracterizeaz precizia
procesului analitic sau tehnologic; valorile mici corespund unor precizii mari. Pentru un proces
normal, analitic sau tehnologic, eroarea(abaterea) standard nu poate fi mai mare dect precizia cu

15

care se face determinarea.(ex. dac la determinarea pH-ului valorile experimentale se obin co o


precizie de ordinul sutimilor, abaterea standard a populaiei nu poate fi > 0.09).
Pe baza valorilor erorilor(abaterilor)se calculeaz i valori ale abaterilor(erorilor) relative la
valoarea medie. Astfel:

x v
v
i

Eroarea relativ =

x m
i

Abaterea relativ =

sunt mrimi adimensionale care caracterizeaz precizia determinrilor.


b.3. Amplitudinea(R sau W)
Amplitudinea caracterizeaz o populaie statistic prin dimensiunea cmpului de mprtiere a
valorilor. Valoarea amplitudinii se calculeaz cu ajutorul relaiei:
R = Xmax - Xmin
unde, Xmax i Xmin sunt valorile extreme ale populaiei. Valoarea amplitudinii pstreaz unitatea de
msur a valorilor populaiei, fiind un parametru statistic prin care se compar dou populaii
statistice obinute n condiii experimentale identice. Sunt preferate populaiile statistice
caracterizate prin valori mici ale amplitudinii.
b.4. Coeficientul de variaie(C.V.)
Pentru o populaie statistic care este caracterizat prin parametrii m i , valoarea coeficientului
de variaie

C.V.(N) =
m

Se mai numete abatere standard relativ la valoarea medie. Valoarea sa poate fi estimat prin
valoarea coeficientului de variaie a eantionului
C.V.(N) =

Coeficientul de variaie este o mrime adimensional. Sunt preferate procesele analitice sau
tehnologice caracterizate prin valori mici ale coeficientului de variaie, deci valori mari pentru
inversul su 1/C.V.. Mrimea 1/C.V. dimensioneaz raportul dintre mrimea valorilor(descris
prin valoarea medie) i cea a zgomotului de fond(descris prin valoarea abaterii standard). Pentru
a evita riscul confundrii semnalelor analitice cu zgomotul de fond,
1
m
semnal

100
C.V .
zgomotdefond

b.5. Asimetria graficului funciei de frecven


Pentru o populaie statistic N(m, ) format din valori care respect o repartiie teoretic
normal, valorile principalilor parametrii statistici de tendin sunt egale(m = Me = Mo) iar
graficul funciei de frecven este perfect simetric fa de axa x =m. unele populaii normale sunt
caracterizate din valori diferite ale celor 3 parametrii statistici iar graficul funciei de frecven
devine asimetric. Asimetria graficului funciei de frecven se poate caracteriza prin valorile
parametrilor asimetrici(AN).
AN =
Sau coeficientul de asimetrie(1N)
1N =

f x m 3
j

1
N *

m Mo

i 1

pentru o populaie N(m, ). Pentru un eantion n( X ,) se calculeaz parametrii:


An =

X Mo

16

1N =

f x X 3
j

1
n*

i 1

care estimeaz valorile celor care caracterizeaz populaia. Pentru o populaie format din valori
care respect o repartiie teoretic normal, parametrii care caracterizeaz asimetria graficului
funciei de frecven au valoarea zero. n activitatea experimental se pot obine 2 tipuri de
populaii statistice, n funcie de relaia n care se afl valorile parametrilor statistici de tendin m
i Mo.
1).
m > Mo (Mo < Me < m), graficul funciei de frecven prezentat in fig. nr. 5
Fig. nr. 5
Alura graficului funciei de frecven pentru o asimetrie pozitiv(de stnga)
GRAFIC
Populaia statistic este caracterizat prin valoare pozitiv pentru A i valoare negativ pentru 1.
Se consider c asimetria este pozitiv sau de stnga avnd n vedere c valoarea cu frecvena
absolut cea mai mare este mai mic(n stnga) dect valoarea medie a populaiei.
2).
M < Mo (m < Me < Mo), graficul funciei de frecven prezentat n fig. nr. 6.
Fig. nr. 6
Alura graficului funciei de frecven pentru o asimetrie negativ(de dreapta)
GRAFIC
Populaia statistic este caracterizat prin valoare negativ pentru A i valoare negativ pentru 1.
Se consider c asimetria este negativ sau de dreapta. Valoarea modulului este mai mare dect
valoarea medie a populaiei.
Populaiile 1). i 2). sunt mai apropiate de comportarea unei populaii normale, cu ct valorile
parametrilor A i 1 sunt mai apropiate de zero.
b.6. Coeficientul de exces 2
Coeficientul de exces 2 este definit ca raportul dintre valoarea momentului centrat de ordin 4 ;i
valoarea momentului centrat de ordin 2(dispersia), de fiecare dat n raport cu valoarea medie.
i
1 j
m 4
f

j
i
1
N i 1 a xi

m 4
2 =
j
2 f a xi
i
1
N
*
i

1
2
f m 2
N i 1 a xi
valoarea coeficientului de exces, se compar cu cea care caracterizeaz o repartiie normal;
excesul poart numele kurtosis. O populaie normal este caracterizat prin valoarea 2 = 3,
repartiia normal este mezokurtic. Fa de valoarea acestui parametru, se cunosc dou tipuri de
populaii statistice cu repartiii cvsinormale.
1).
2 > 3, repartiia este leptokurtic, fig. nr. 7, curb n stil gotic
Fig. nr. 7
Alura graficului funciei de frecven n cazul unei repartiii leptokurtice

GRAFIC
Se observ c graficul funciei de frecven este ascuit la vrf o concentrare a unor valori n
jurul valorii medii, fr a atinge punctele de inflexiune(m , m + ) i nregistreaz trene mai
lungi dect n cazul unei repartiii normale.
2).

17

III.II.2

Verificarea caracterului ntmpltor al mprtierii rezultatelor experimentale

SSSS

III.II.3

Verificarea normalitii repartiiei datelor experimentale

SSSS

III.II.4

vvvvvv

SSSS

III.II.5

vvvvvv

SSSSS

III.II.6

vvvv

SSS
III.IV VERIFICAREA

CARACTERULUI NTMPLTOR AL MPRTIERII


REZULTATELOR EXPERIMENTALE

III.IV.1

Calculul parametrilor statistici ai repartiiei normale

18