2/15/2010

ANTAGONISMUL
MICROBIAN. ANTIBIOTICELE.
BACTERIOCINELE

COMUNITILE MICROBIENE. RELAIILE

DINTRE MICROORGANISME N COMUNITI

Microorganismele prezente ntr-un biotop

particular constituie microflora acestui habitat
(m/f cutanat, intestinal, etc)
Aceasta joac un rol important n protejarea
gazdei fa de o invazie microbian ulterioar,
actionnd prin urmtoarele mecanisme:
competiia pentru aceiai nutrieni;
competiia pentru aceiai receptori de pe
celulele gazdei;
producia de bacteriocine; vitamine;
producerea de acizi grai volatili sau ali
metabolii;
stimularea continu a sistemului imun;
stimularea producerii unor factori imuni de
protecie (anticorpii naturali).

Mi/o care manifest activitate inhibitoare

antagonist (A), mi/o care sufer concurent (C).
Antagonism nespecific:
- Antagonistul este mai activ, utiliznd nutrienii,
oxigenul
- Antagonistul produce metabolii toxici (acizi,
indol, H2S, amoniac, peroxid, etc)
Antagonism specific antagonistul produce
substane cu aciune specific asupra unui sau
mai multor concureni (antibiotice, bacteriocine).

n natur microorganismele vieuiesc n cadrul

asociaiilor, care includ bacterii, micete, alge,
protozoare .a. Astfel de asociaii se ntlnesc n
variate habitate naturale: ap, sol, pe plante, pe
suprafaa i n corpul uman i animal.
BIOTOP spaiu cu condiii de via particulare
(conjunctiva, mucoasa intestinal, orofaringe,
vagin, tegument, etc), populat i transformat de
asociaii de fiine vii.
MICROBIOCENOZ (comunitate microbian)
asociaii microbiene ce populeaz un biotop.

ntre microorganismele unui biotop

se pot stabili relaii:
I.
Indiferente (neutralism)
II.
Favorabile (comensalism/satelitism,
simbioz/mutualism, sinergism)
III.
Defavorabile (parazitism, antagonism)
Antagonism o specie inhib sau omoar
alt specie prin mecanisme specifice
sau nespecifice

Efectul aciunii unui antagonist asupra

concurentului poate fi bacteriostatic sau
bactericid (uneori bacteriolitic).
Utilizarea practic a antagonismului microbian:
1.
Pentru depistarea mi/o produceni de
antibiotice (micete, actinomicete, bacterii)
2.
Pentru obinerea produselor biologice
curative de origine microbian (probiotice,
eubiotice/sinbiotice): Lactobacterina,
Colibacterina, Bifidumbacterina, Bificol, etc
3.
Crearea biocenozelor favorabile
organismului

2/15/2010

I.
-

Probioticele sunt preparate ce conin

bacterii vii sau substane de origine
microbian care, ntroduse pe cale natural,
manifest efecte benefice (fiziologice,
biochimice i imune) pentru organismulgazd prin stabilizarea i optimizarea
funciilor microflorei normale.
Prebioticele sunt preparate ce conin un
ingredient alimentar nedigerabil care
stimuleaz selectiv creterea i activitatea
unui numr limitat de bacterii rezidente ale
microflorei normale intestinale.
Sinbioticele sunt preparate obinute n
urma combinrii raionale dintre probiotice i
prebiotice.

ANTIBIOTICE (AB) produse de origine

natural (microbian, animal sau
vegetal), derivai semi-sintetici sau
produse sintetice care inhib sau omoar
selectiv unele mi/o sau/i celule tumorale,
fr a exercita ca regul efecte toxice
asupra macroorganismului.
Clasificarea AB
Dup efectul asupra celulei
Bacteriostatic (tetraciclina,
cloramfenicol)
Bactericid (streptomicina, polimixina)
Bacteriolitic (peniciline, cefalosporine)

3. De origine microbian (bacitracina din Bacillus

subtilis, gramicidina din Bacillus brevis,
polimixina din Bacillus polimyxa)
4. De origine vegetal fitoncidele (alicina,
rafanin, imanin)
5. De origine animal (lizozimul din albu de ou,
ecmolina din oase de pete, eritrina din mas
eritrocitar, splenocitina din splin)
IV. Dup compoziia chimic (beta-lactamice,
macrolide, aminoglicozide, fenicoli, polipeptide,
poliene, sulfamide, chinolone i fluorochinolone,
nitrofurani, etc)

METODELE DE STUDIU AL ANTAGONISMULUI

1. n mediu solid (metoda traneei)

antagonistul se nsmneaz n centrul cutiei,
concurenii perpendicular. Termostat 24h.
Aprecierea dup dimensiunea zonei de
inhibiie a creterii culturii concurentului.
2. n mediu semisolid I strat antagonistul, II
strat concurentul. Termostat 24h. Aprecierea
zon clar ntre straturi.
3. nsmnarea n mediu lichid (BP) a unui
numr egal de A i C. Dup 24 h de incubaie
se rensmneaz 0,1 ml pe placa cu geloz.
Se compar numrul coloniilor de A i C.

II. Dup spectrul de aciune

- AB cu spectru restrns (ngust) de aciune
(AB anti-G+, anti-G-, anti-tuberculoase,
anti-micotice, anti-tumorale, etc)
- AB cu spectru larg de aciune (G+ i G-)
III. Dup producent (origine)
1. De origine fungic (peniciline,
cefalosporine,...)
2. Din actinomicete (aminoglicozide,
macrolide, cloramfenicol, etc)

Mecanismul de aciune al AB

2/15/2010

Mecanismul de aciune al AB
AB cu aciune asupra sintezei peretelui celular
(dereglarea sintezei peptidoglicanului)
Beta-lactamice (peniciline, cefalosporine).
Deregleaz procesul de sintez a PG, inhibnd
transpeptidazele (inta - PFP)
Vancomicina, teicoplanina (blocheaz transferul
pentapeptidului din MCP spre peretele celular)
Bacitracina (blocheaz reciclarea moleculelor de
transport transmembranar - bactoprenol)
Fosfomicina (blocheaz piruviltransferaza,
implicat n sinteza acidului N-acetil muramic)
Efectul acestor AB este bactericid/litic, doar celulele
metabolic active sunt omorte. Nu afecteaz
celulele eucariote (lipsa PG).
1.

2. AB cu aciune asupra ME i a MCP

AB polipeptidice (polimixina, colistina). Se
fixeaz pe membrane bacteriene (n
special pe lipidul A (ME la bacterii G-),
provocnd dezorganizarea lor. Efect
bactericid.
AB polienice (nistatina, levorina,
amfotericina B, etc). Se fixeaz pe sterolii
MCP ale micetelor, perturbnd respiraia i
dezorganiznd MCP (permeabilitate
excesiv i moartea celulei).
Aceste AB acioneaz i asupra celulelor n
repaos. Relativ toxice, n special nefro.

2/15/2010

3. AB cu aciune asupra ribozomilor

- 30S (aminoside: streptomicina, kanamicina,
gentamicina, tobramicina, amikacina; tetracicline)
- 50S (cloramfenicol, triamfenicol; macrolide:
eritromicina, oleandomicina; lincosamide:
clindamicina, lincomicina).
Se leag pe receptori specifici de pe subunitile 30S
sau 50S, perturbnd sinteza proteic (inhibiia
transpeptidazei, a translocaiei peptidelor, etc).
Rezult inhibiia sintezei proteice sau sinteza
proteinelor nefuncionale. Efectul este
bacteriostatic (aminosidele bactericid), doar
asupra celulelor active metabolic.

4. AB cu aciune asupra acizilor nucleici

- Rifampicina inhib ARN-polimeraza ADNdependent. Rezult stoparea sintezei
ARNm
- Novobiocina , Chinolonele (acidul nalidixic,
ciprofloxacina, ofloxacina) blocheaz
activitatea topo-izomerazelor, intervenind n
conformaia ADN-ului. Efect bactericid.

Sulfamidele i trimetoprimul perturb

sinteza acidului folic i folailor (cofactori
n sinteza AN). Activitate bacteriostatic.

2/15/2010

Producerea AB

Metoda biologic
2.
Metoda sintetic
3.
Metoda semi-sintetic
Etapele metodei biologice:
1.
Cultivarea tulpinilor-producente (ex.:
Penicillium notatum, Actinomyces griseum,
etc) n mediu lichid adecvat
2.
Extragerea AB
3.
Purificarea i concentrarea AB
4.
Controlul toxicitii
5.
Determinarea activitii AB
1.

Activitatea AB se msoar n uniti de mas

(g, mg, g) sau de aciune (UA).
1 UA cantitatea minimal de AB care inhib
creterea unei tulpini de referin n condiii
standarde.
Penicilina 1UA = 0,6 g de substan pur
Cerinele fa de AB:
- Toxicitate selectiv
- Efect terapeutic cu doze minime
- Activitate de lung durat
- Spectru restrns de aciune
- S fie solubile i absorbite uor
- S nu provoace efecte secundare
- S nu se dezvolte rezistena contra AB
- S fie ieftine

Fiecare tulpin izolat manifest

sensibilitate particular. Ea poate fi
studiat n laborator pentru
determinarea profilului de sensibiliti
al acestei tulpini, ceea ce constituie o
antibiogram.
Rezultatele testelor de sensibilitate
permit medicului s claseze tulpinile
bacteriene dup categoriile
terapeutice (S, R, I), uneori sunt utile
n identificarea tulpinilor.

Sensibilitatea microbilor la AB
n funcie de rezultatele clinice, bacteriile se
divizeaz n 3 clase: sensibile la AB (S),
rezistente (R) i intermediare (I, moderat
sensibile).
Tulpinile S efectul terapeutic este obinut cu
doze terapeutice uzuale
Tulpinile R efectul terapeutic nu poate fi
obinut cu doze terapeutice
Tulpinile I succesul terapeutic este
imprevizibil. Ar fi posibil cu doze mari sau la
administarea local a AB.

Testarea sensibilitii bacteriilor la AB

Metoda difuzimetric (rondelelor). Utilizat uzual n
infecii banale.
Condiii: mediu standard, concentraie standard de
mi/o (105/ml), rondele/discuri (comprimate) cu %
standarde de AB, condiii standarde.
Mediul este inoculat cu suspensia bacterian. Dup
uscare n termostat se aplic rondelele 24h, 37 C.
Lectura diametrul zonei de inhibiie a creterii culturii
bacteriene este comparat cu diametrele standarde
pentru fiecare AB. Valori sub acest diametru
tulpina este R, dac este depit S.

2/15/2010

Metoda diluiilor

ntr-un ir de tuburi cu 1 ml BP se efectueaz

diluia AB (256 UA, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2,
1, 0,5, etc). Se adaug n fiecare tub (cu
excepia celui martor) 0,1 ml de suspensie
bacterian 105/ml. Termostat - 24h.
Lectura cea mai mic doz de AB care
inhib creterea culturii dup 24h de
incubare (mediu clar) constituie
Concentraia Minim de Inhibiie (CMI) a
AB pentru tulpina testat.
CMI msoar efectul bacteriostatic.

2/15/2010

Concentraia Minim Bactericid (CMB)

cantitatea minim de AB care omoar
99,9% din inoculum dup 18h de incubare.
Determinarea CMB din ultimele tuburi fr
cretere se repic 0,1 ml de mediu pe
placa cu geloz. Dup 24h se compar
numrul celulelor ce au supravieuit cu nr
iniial de bacterii (105/ml).

Corelaia dintre studii in vitro

i rezultate in vivo
n studii in vitro parametrii (densitatea
suspensiei bacteriene, concentraia AB, etc)
nu se modific n timp. In vivo, la pacieni,
concentraia AB variaz n timp i n funcie
de esut.
Pentru a stabili dac tulpina izolat este
sensibil sau rezistent la un AB se cere
cunoaterea Concentraiei Terapeutice (CT)
(cantitatea de AB prezent n focarul infecios
n cursul tratamentului cu doze terapeutice)
a fiecrui AB testat.

Monitorizatea (supravegherea)
tratamentului cu AB. Verificarea
eficacitii antibioterapiei.
1. Determinarea concentraiilor umorale sau
tisulare ale AB
Indicaii:
Utilizarea unui AB toxic
n caz cnd bolnavul sufer de deficiene
metabolice sau excretoare (renale,
hepatice)
Se compar concentraiile obinute cu CMI a
antibioticului testat (sau cu CT).

Tulpini Sensibile CMI/CT <1, ex.: 2/8,

2/16 - efect terapeutic posibil cu doze
uzuale
Tulpini Rezistente CMI/CT>1, ex.: 8/2,
efect terapeutic imposibil
Tulpini Intermediare CMI/CT=1, efect
terapeutic imprevizibil. Pot fi utilizate doze
maxime de AB sau administrarea lor local
Testarea CMI / CMB este indicat n
tratamentul infeciilor grave : meningite,
septicemii, endocardite, infecii cronice sau
la persoane cu imunosupresie.

2. Studiul activitii inhibitorii a lichidelor biologice

(NEI)
Indicaii: infecii grave care nu rspund rapid la
tratament.
Efectuarea: la diluii duble (1/2, ...) ale lichidului
examinat (ser, LCR, urin) se adaug
suspensia bacterian (din tulpina izolat de la
bolnav).
Lectura: dup 24h de incubaie la 37 C se
apreciaz diluia maxim cu efect
bacteriostatic/cid.
NEI 1:8 reflect eficiena antibioticoterapiei

2/15/2010

Rezistena mi/o la antibiotice

Cauzele:
1.
Factori genetici, proprii bacteriilor
2.
Factori ce favorizeaz selecia i difuzarea
tulpinilor bacteriene rezistente
Tipurile de rezisten:
1.
Natural, ereditar, de specie, prezent la toi
membrii unei specii sau gen
lipsa intei ex.: micoplasme, micete;
imposibilitatea de a atinge inta ex.:
Mycobacterium (cerurile, lipidele mpiedic
ptrunderea AB n citoplasm);
bacteriile nu efectueaz procesul inhibat de AB
ex.: acidul folic este preluat din mediu rezisten
la sulfamide

2. Achiziionat, dobndit, afecteaz tulpinile unei

specii sensibile. Depinde de aciunea de selecie exercitat de
AB utilizate n tratament, urmat de rspndirea ei (ntre
bacterii, interuman, transmisie de origine animal).

Mecanismele rezistenei dobndite:

- Diminuarea permeabilitii membranare
- Modificarea intei moleculare
- Eliminarea excesiv a AB
- Inactivarea enzimatic a AB, care poate fi
hidrolizat (penicilinaz, cefalosporinaz)
sau modificat structural (acetilaze,
adenilaze, fosforilaze), etc.

2/15/2010

Rezistena dobndit se poate manifesta fenotipic

(bacteriile n faza de repaos, formele L de
bacterii) sau genetic (genotipic)
Rezistena genetic poate fi:
- Cromozomial, determinat de mutaii (10%)
Mecanisme: modificarea intei moleculare,
diminuarea permeabilitii membranare
- Plasmidic, epidemic, realizat prin transfer de
gene prin intermediul plasmidelor R (poate fi
rezisten multipl).
Mecanisme: inactivarea enzimatic, modificarea
intei, substituia sau supraproducia intei, excreie
excesiv a AB.

Prevenirea rezistenei
1.

2.
3.

4.
5.

6.
7.

Supravegherea epidemiologic a tulpinilor

rezistente
Politic strict de prescriere a AB
Respectarea dozelor terapeutice corecte i a
timpului de tratament necesar
Asocierea AB cu mecanisme de aciune diferite
Prescrierea AB care nu sunt sensibile la betalactamaze, utiliznd inhibitori (acidul clavulanic,
sulbactamul, tazobactamul). Ex.: augmentina
amoxicilina+acid clavulanic
Reciclarea AB
Producerea AB noi

2/15/2010

Efectele negative ale antibioticoterapiei

1. Efect toxic (streptomicina surditate,
cloramfenicolul toxic pentru mduva
osoas, polipeptidele nefrotoxice, etc)
2. Efect teratogen
3. Aciune sensibilizant (penicilina, etc)
4. Disbacterioz
5. Dereglarea imunogenezei
6. Selecia suelor rezistente

Bacteriocinele substane proteice

bactericide produse de numeroase specii
bacteriene i active asupra altor tulpini ale
aceeai specii sau asupra speciilor
nrudite. Producerea bacteriocinelor este
determinat plasmidic (plasmide Col).
Tipuri de bacteriocine: colicine (secretate de
Escherichia coli), corinecine
(Corynebacterium), vibriocine (Vibrio),
piocine (Pseudomonas), etc.
Studiul sensibilitii unei tulpini la
bacteriocine (bacteriocinotipia) se
utilizeaz n scopuri epidemiologice

10