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ARGENTINA
OCTAVA EDICIÓN
VOLUMEN
I
FARMACOPEA
ARGENTINA
OCTAVA EDICIÓN
ANMAT
Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica
INAME
Instituto Nacional de Medicamentos
FARMACOPEA
ARGENTINA
OCTAVA EDICIÓN
Presidente de la Nación
Dra. Cristina Fernández de Kirchner
OCTAVA EDICIÓN
VOLUMEN
I
COMISIÓN PERMANENTE
FARMACOPEA ARGENTINA
SECRETARÍA TÉCNICA:
VOCALES:
La Farmacopea Argentina o “Codex Medicamentarius Argentino” es el código oficial donde se describen las
drogas, medicamentos y productos médicos necesarios o útiles para el ejercicio de la medicina y la farmacia,
especificando lo concerniente al origen, preparación , identificación, pureza, valoración y demás condiciones
que aseguran la uniformidad y calidad de las propiedades de los mismos.
La farmacopea no es estática sino que mantiene un continuo estado de actualización convirtiéndose en un
tratado que construye calidad de la mano con los adelantos tecnológicos en constante revisión.
Lejos quedaron los tiempos de los primeros intentos para la reglamentación y control de drogas y
medicamentos en nuestro país; se remontan al 9 de abril de 1822. En esta fecha el Gobernador Martín
Rodríguez y su Ministro de Gobierno, Bernardino Rivadavia, mediante un decreto, reglamentaron el ejercicio de
la Medicina y la Farmacia, estableciendo que “…la elaboración de las medicinas en las boticas será en todo
arreglada a la Farmacopea Española cuarta edición “. La influencia de la cultura francesa en la formación
médico farmacéutica de aquella época, hizo que se adoptara posteriormente la Farmacopea Francesa.
Desde su fundación en 1856, la Asociación Farmacéutica Bonaerense, entidad origen de la actual Academia
Nacional de Farmacia y Bioquímica, trabajó afanosamente para elaborar una Farmacopea Nacional, llegando
a proponer a las autoridades dos proyectos, el de Miguel Puiggari en 1881 y el de Estanislao Zubieta, publicado
en 1880 con el nombre: Formulario Original y Magistral o Farmacopea Argentina. Aunque no llegaron a
oficializarse en el año, estos antecedentes sirvieron para apresurar la decisión del Poder Ejecutivo Nacional de
satisfacer esa sentida necesidad.
Muchos nombres de notables investigadores, científicos y docentes, han quedado ligados a la elaboración de
las sucesivas ediciones demostrando que un calificado recurso humano sería el sostenedor a través del tiempo
del proyecto Farmacopea
Así comenzó la historia que se convirtió en una palpable realidad y hoy se traduce en una Comisión
Permanente y 21 subcomisiones técnicas integradas por aproximadamente 300 profesionales quienes son los
artífices del actual proyecto que ubica a la Argentina entre los países que concientemente saben y proclaman
que la Farmacopea establece estándares de calidad para los medicamentos contribuyendo de esta manera a
velar por la salud de la población.
Presidente
Farmacopea Argentina
PRESENTACIÓN
En el año 2003 se publicó un primer volumen con el propósito de completar anual e ininterrumpidamente
con otros tres volúmenes la Séptima Edición. Si bien se cumplió con el objetivo, debido al tiempo transcurrido,
a la actualización de los equipos técnicos de la Autoridad Sanitaria, habiéndose incorporado la Administración
Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica al Sistema de Inspecciones PIC/S (Pharmaceutical
Inspection Cooperation Scheme), siendo Autoridad Reguladora Nacional de Medicamentos de Referencia de la
Organización Panamericana de la Salud y teniendo en cuenta los avances científicos y tecnológicos, hemos
creído conveniente presentar a ésta como una nueva Edición.
Esta Octava Edición que, por lo tanto incluye las actualizaciones del volumen publicado de la Séptima
Edición y los volúmenes: segundo, tercero y cuarto, son el resultado del trabajo de actualización y revisión
constante realizado por los profesionales que componen la Comisión Permanente y las subcomisiones asesoras,
convocados específicamente con la finalidad de dotar a nuestro país de un material de referencia acorde con los
más modernos requisitos en la materia.
Esta Edición en su conjunto, es el fruto de una rigurosa evaluación de las temáticas presentes en distintas
farmacopeas, monografías, métodos analíticos, disposiciones reglamentarias, trabajos científicos y experiencias
personales del grupo de expertos.
Gracias a la reflexión, el debate y el diálogo permanente con las subcomisiones técnicas, la Comisión
Permanente ha establecido los criterios y metodologías que aseguran la calidad de los medicamentos,
entendiendo que el aseguramiento de su calidad es un pilar básico y prioritario para mejorar la salud de la
población. En esta tarea se ha sentido acompañada por un sinnúmero de interlocutores y ha disfrutado del
estímulo generado por los propios deseos de lograr un producto acorde con la responsabilidad que comparte.
Es por ello que confiamos en que la continuidad del diálogo sea la base más sólida para lograr la excelencia
de este emprendimiento que constituye uno de sus mayores compromisos con la sociedad.
Director Ejecutivo
Farmacopea Argentina
FARMACOPEA ARGENTINA
OBJETIVOS
La finalidad principal de la Farmacopea Argentina es contribuir a promover la salud de la
población, estableciendo parámetros de calidad para los productos empleados en la elaboración de
medicamentos. Las normas y especificaciones contenidas en esta publicación constituyen un elemento
de consulta indispensable para la Autoridad Sanitaria, para los elaboradores, para los profesionales
de la salud, investigadores y docentes, todos ellos involucrados en el aseguramiento de la calidad de
los medicamentos para su empleo seguro por parte del paciente.
Sin embargo, construir la calidad de los medicamentos ya sea determinando las especificaciones y
los controles de calidad que deben cumplirse, así como los límites de impurezas y los productos de
degradación, etc., es una esforzada tarea que sólo pueda llevarse adelante en virtud del trabajo
mancomunado de distintos sectores nucleados por una perspectiva sanitaria compartida.
Farmacéuticos, Químicos, Bioquímicos, Ingenieros y Médicos, contribuyen con su idoneidad en forma
permanente para asegurar esas premisas.
Secretaría Técnica
Farmacopea Argentina
COMPOSICIÓN DE LAS SUBCOMISIONES TÉCNICAS DE LA
FARMACOPEA ARGENTINA
Aguas y Soluciones Parenterales
Coordinador: Farm. Silvetti, Alfredo. Ensayos Farmacotécnicos I
Farm. Achilli, Estela; Ing. Bichman, Mario; Farm. Coordinador: Dr. Meneghini, Alejandro; Farm.
Colombari, Daniel; Bioq. Chiesa, Carlos; Dr. Dal Suarez, Marcelo.
Bo, Héctor; Ing. D' Ambrosio, Cristina; Lic. Duda, Lic. Bava, Adriana; Dra. Calandri, Daniela; Farm.
Guillermo; Dr. Fiore, Esteban; Farm. Goin, José Castaña Eduardo; Dr. Chiaramonte, Eduardo; Dra.
Alberto; Ing. Gomez Copello; Farm. Menéndez Simionato, Laura; Dra. Vidal, Noelia.
Viviana; Farm. Mochetto, Rodolfo; Farm. Neder,
Jorge; Dra. Nista, Liliana; Lic. Petracca, Antonia; Ensayos Farmacotécnicos II
Farm. Ploder, Peter; Farm. Puebla, Ignacio; Farm. Coordinador: Dr. Allemandi, Daniel; Dra.
Stampone, Patricia; Farm. Szyszkowsky, Juiz Olivera, M. Eugenia.
Rubén; Lic. Vedoya, Gabriela Silvia. Dr. Ciccioli, Enrique; Farm. Fasanella, Marta;
Farm. Giornelli, Gabriela; Dra. Lavaselli, Susana;
Biodisponibilidad, Bioequivalencia y Farm. Lloret, M. Antonia; Bioq. Luna, Julio; Lic.
Equivalencia Farmacéutica Martinez, Juan L.; Dr. Nacucchio, Marcelo; Dr.
Coordinador: Dr. Pesce, Guido. Porta, Raúl.
Dra. Bignone, Inés; Dr. Bolaños, Ricardo; Dr.
Bramuglia, Guillermo; Dr. De Leone, Héctor; Farm. Ensayos Farmacotécnicos III
Giarcovich, Silvia; Dra. Niselman, Ada Viviana; Coordinador: Farm. Montes de Oca, Federico;
Farm. Rey, Andrea; Dr. Seoane, Martín; Farm. Farm. Zubata, Patricia.
Steeman, Gabriela; Bioq. y Farm. Viñas, María Dra. Bruno, Claudia; Farm. Roberto, Mónica; Farm.
Alicia. Sakson, Mario; Dra. Sanpedro, Pura; Dra. Sedeño,
Cristina; Dra. Szeliga, María; Lic. Vega, Julio
Biotecnología César.
Coordinador: Dra. Dabsys, Susana.
Dr. Cascone; Dr. Corley, Esteban; Dr. Criscuolo, Estabilidad y Envases
Marcelo; Lic. García Franco, Susana; Dra. Coordinador: Lic. Spinetto, Marta.
Giampaolo, Beatriz; Farm. Goyogana, Francisco; Ing. Ariosti, Alejandro; Dra. Blanco, Mirta; Dra.
Dr. Iglesias, Sergio; Lic. Mammarella, Carlos; Lic. Briñon, Margarita; Lic. Gorisknik, Adriana; Farm.
Ostroswski, Héctor; Bioq. Pardo, Verónica; Farm. Gruc, Olga Alejandra; Farm. Mandrile, Alejandra;
Pesce, Graciela; Lic. Praturlon, María L.;Dr. Dra. Nudelman, Norma; Dra. Ortiz, Cristina; Farm.
Seigelchifer, Mauricio. Pilatti, Carina; Ing. Riera, Mónica; Lic. Sánchez,
Eduardo; Farm. Tamasi, Diego.
Colorantes, Excipientes y Aditivos
Coordinador: Lic. Ciura, Juan M. Emilio. Farmacia Hospitalaria
Dra. Brunet, Noemí; Bioq. Bustos, Mónica; Dr. Coordinador: Dra. Elías, Mónica; Farm y Bioq.
Corseti, Héctor; Dra. Dabbene, Viviana; Dr. Fernandez, María Cristina.
Dobrecky, José; Dr. Ferrari, Jorge; Dr. Jacobi, Bioq. Bernal Castro, Federico; Dra. Bernavei,
Carlos; Dra. Rivas, Viviana; Dr. Rubio García, Alicia; Farm. Buontempo, Fabian; Bioq. Drunday,
Rodolfo; Lic. Taschetti, Mabel; Farm. Trokán, Fabian; Lic. Fernández, Farm. Fillinger, Ester,
Francisco; Lic. Vallese, María Cristina. María Laura; Farm. García, Angélica; Farm.
Hermida, Miguel; Farm. Iglesias, Fabiana; Dr.
Controles Toxicológicos Lagomarsino, Eduardo; Farm. y Bioq. Mato,
Coordinador: Dr. Roses, Otmaro E. Gabriel; Lic. Melero, Marcia; Farm. Menéndez,
Dr. Araldi, Héctor; Bioq. Bindstein, Edith; Dra. Ana María; Dr. Montemerlo, Hugo; Dra. Pita
Bulgach, Delia; Dra. Fulginiti, Ana Susana; Dra. Martin de Portela, María Luz; Farm. Raviolo,
Gruñeiro, Elena; Dra. López, Clara; Dra. Pazos, Rodolfo; Farm. Rodríguez, Luis A.; Dra.
Liliana; Dr. Pico, José Carlos; Dra. Salseduc, Slobodianik de Gurevich, Haydeé; Dra. Soifer,
Marta. Graciela.
Farmacia Oficinal Área de Sangre y hemoderivados.
Coordinadores: Farm. Ruggieri, José; Farm. Coordinador: Bioq. Rossi, Marina.
Mendez, Raquel. Dra. Barravecchia de Dehó, Martha; Dra. Caminos,
Farm. Alvárez, Jorgelina; Farm. Andiñach, Guido; Andrea; Bioq. y Farm. Drucaroff, María Alejandra;
Farm. Callegari, Fernando; Farm. Ferrero, Horacio; Lic. Oliva, Liliana; Dra. Sobrero, Cecilia; Dr.
Farm. Fitanovich, Nora; Farm. Fridman, Gerardo; Zarzur, Jorge.
Farm. Garcia, Roberto; Farm. Gatica, Karina; Farm. Área de Sueros y vacunas. Coordinador:
Gomez, Juan; Farm. Gonzalez, Ana María; Farm. Dra. Perez, Analia.
Julián, Silvia; Farm. Kleinlein, Patricia; Farm. Dra. Brero, María Luisa; Bioq. y Farm. Copello,
López de Souza, María del Carmen; Farm. Lopez, Cecilia; Dr. Dokmetjian, José; Dr. García, Salvador;
Guillermo; Farm. Maino, Héctor; Farm. Mollardo, Dra. Manghi, Marcela; Farm. Pombo, María Luz;
María Teresa; Farm. Moreno, Patricia; Farm. Nadal, Dra. Rodríguez, María Eugenia, Dr. Yantorno,
Ana María; Farm. Paura, Andrea; Farm. Perez Osvaldo.
González, Rocio; Farm. Policelli, Gabriela; Farm.
Quijano, Rubén Darío; Farm. Quiroga, Eduardo; Productos Médicos
Farm. Rencoret, María Mercedes; Farm. Salas, Coordinadores: Dra. Sager de Agostini, Helga.
Vivian; Farm. Tokumoto, Fernanda; Farm. Torres, Farm. Carbone, Nora; Farm. y Bioq. Benitez,
Hugo; Farm. Uema, Sonia; Farm. Valverde, Javier. Sergio; Farm. Costanzo, Ricardo; Farm. Gonzalez,
María Celeste; Farm. Graña, Nora; Farm. Iervasi,
Gases Medicinales Liliana; Farm. Metz, Rita; Farm. Mosconi, Andrea;
Coordinador: Dr. Marceca, Ernesto. Farm. y Bioq. Olivera de O’ Connell, Lucía; Farm.
Farm. Arcos, Marcelo; Farm. Bernaus, Carlos; Peralta, Laura; Ing. Saba, Fernando; Dra.
Farm. Fischer, Alfredo; Farm. Tourville, Antonio; Staravijosky, Alejandra.
Dra. Zavala, Estela.
Química Analítica de Medicamentos 1
Medicamentos Fitoterápicos Coordinador: Lic. Larrinaga, Alicia.
Coordinador: Dra. Ferraro, Graciela. Lic. Abelaira, Sara; Lic. Avancini Noceti,
Dra. Agnese, Alicia; Dr. Amat, Aníbal; Dr. Constanza; Lic. Chiarelli, Silvia; Lic. Diez, María
Cabrera, José Luis; Dra. Debenedetti, Silvia; Dra. Ester; Dra. Dominguez, Silvia; Farm. González,
Flores, María Luján; Dra. Gattuso, Martha; Dra. Soledad; Farm. Lynch, Josefina; Lic. Ponce,
Gattuso, Susana; Dr. Gurni, Alberto; Dra. Lopez, Claudia; Lic. Pozzo, María del Carmen; Dr. Rivas,
Paula; Dra. Nadinic, Elena; Farm. Padula, Laura Z.; Raúl; Dra. Safierowicz, Rosa; Farm. Varela López,
Dra. Rizzo, Inés; Dr. Rondina, Rubén; Lic. Ramón; Farm. Vessuri, María.
Schvarzberg, Nora; Dr. Skliar, Mario; Dra.
Spegazzini, Etile; Dr. Wagner, Marcelo; Lic. Química Analítica de Medicamentos 2
Zeichen, Rita. Coordinador: Dra. Carducci, Clyde.
Dra. Castellano, Patricia; Lic. Centrone, Claudio;
Microbiología Farm. Faroppa, María; Farm. Fernández Otero,
Coordinador: Lic. Horacio Frade; Dr. D’Aquino, Germán; Dra. Hoyos de Rossi, María; Dra. Longhi,
Miguel. Marcela; Dra. Lucangioli, Silvia; Dra. Palacios de
Dra. Albesa de Eraso, Inés; Farm. Arakaki, Regina; Ortiz, Sara; Bioq. Robles, Juan.
Farm. Balanian, Silvia Gladys; Dra. Belixán,
Norma; Farm. Calvete, Javier; Lic. Cerra, Hector; Química Analítica de Medicamentos 3
Dra. Franco, Mirta; Dr. Gutkin, Gabriel; Lic. Coordinador: Lic. Ercolano, Irma.
Lagomarsino, Monica; Dra. Torno, Graciela; Farm. Dra. Alassia de Torres, Liliana; Dr. Blanc, José;
Raffo Palma, Martha; Farm. Salazar, Germán; Dr. Farm. Cereijo, María Inés; Farm. y Bioq. Ceresole,
Sordelli, Daniel; Bioq. Teves, Sergio; Farm. Vivas, Rita; Dra. Circón de Vidal, Noemí; Farm. Fariña,
Ariel. Mirta; Farm. Gabor, Juliana; Dr. Laba, Raul; Farm.
Menéndez, Viviana; Dra. Segall, Adriana; Dra.
Productos Biológicos Serrao, Rosa; Lic. Zinni, Elvira.
Coordinador: Bioq. Albertengo, María Elisa.
Bioq. Esnaola, María Margarita; Bioq. Fraga, Química Analítica de Medicamentos 4
Griselda; Farm. Francinelli, Luisa; Dra. Coordinador: Dra. Pinet, Ana María.
Gorzalczany, Susana; Bioq. Mondelo, Nélida; Dra. Barros, Carmen; Lic. Luque, Graciela; Dr.
Farm. Nisenbaum, Isaac. Marinaro, Bautista; Farm. Palacios, Marcelo Luis;
Dra. Piñeyro, Luisa; Dr. Quatrocchi, Oscar; Farm.
Rosasco, María Ana; Farm. Rodríguez, Eduardo; Revisores Técnicos
Dr. Sprandeo, Norma; Dr. Sproviero, Jorge; Dra. Farm. Compagnucci, María Eugenia; Gear,
Stagnaro, Stella Maris. Jorgelina; Bioq. Martinez, Andrea Verónica;
Martinez, Valeria Soledad.
Radiofármacos
Coordinador: Dr. Caro, Ricardo y Bioq. Aprea, Agradecimientos
Patricia. Dra. Silvia Boni, Farm. Patricia Zubata, Dra. Silvia
Farm. Aletti, Sabrina; Dra. Bergoc, Rosa; Dr. Lavaselli, Farm. Soledad Risso Patrón y Sra.
Boccio, José; Dr. Cañelas, Carlos; Bioq. Samson, Giovanna Sibay Nughes por su colaboración en el
José Cembal; Dr. Duran, Adrián; Dra. Fraga de capítulo 1050. Formas Farmacéuticas.
Suarez, Amanda; Lic. Furnari, Juan Carlos; Farm. Farm. Mónica Cordera y Farm. Isabel E. Rivadulla
Nicolini, Jorge; Dra. Rutty, Gisela; Farm. por su colaboración en el capítulo 1015. Buenas
Zubillaga, Marcela. prácticas de almacenamiento, distribución y
transporte.
Secretaría Técnica Lic. Ana María Chan y María José Arrechea por su
Farm. Assalone, Melina Isabel; Farm. Dal Mas, colaboración en el capítulo 345. Ensayo de
Melina Andrea; Farm. De Angelis, María Celeste. Salmonella/fracción microsomal (Test de Ames)
para detección de mutagenicidad.
A los Laboratorios que colaboraron en la presente
Edición.
FARMACOPEA ARGENTINA
OCTAVA EDICIÓN
PRIMER VOLUMEN
ÍNDICE GENERAL
Consideraciones Generales <230> - Determinación del índice de refracción
<240> - Determinación del intervalo de
destilación
Métodos Generales de Análisis
<250> - Determinación del pH
<10> - Análisis estadístico de resultados de
ensayos biológicos <260> - Determinación del punto de fusión
<20> - Análisis térmico <270> - Determinación del residuo de ignición
<30> - Capacidad neutralizante de ácido <280> - Disolución completa
<40> - Carbono orgánico total <290> - Distribución del tamaño de partícula
en polvos
<50> - Colorantes de uso farmacéutico
<300> - Electroforesis
<60> - Combustión en erlenmeyer con oxígeno
<310> - Ensayo de disgregación
<70> - Conductividad
<320> - Ensayo de disolución
<75> - Conductividad en agua calidad
farmacéutica <330> - Ensayo de endotoxinas bacterianas
<80> - Conservantes <335> - Ensayo de micobacterias
<90> - Control higiénico de productos no <336> - Ensayo de micoplasmas
obligatoriamente estériles <339> - Ensayo de neurovirulencia para
<100> - Cromatografía vacunas a virus vivo
<110> - Determinación de aflatoxinas <340> - Ensayo de piretógenos
<120> - Determinación de agua <345> - Ensayo de Salmonella/fracción
microsomal (Test de Ames) para
<130> - Determinación de alcohol
detección de mutagenicidad
<140> - Determinación de aluminio
<350> - Ensayo de sustancias fácilmente
<150> - Determinación de cinc carbonizables
<160> - Determinación de la densidad relativa <360> - Ensayo de toxicidad anormal
<170> - Determinación de la rotación óptica <370> - Ensayos de esterilidad
<180> - Determinación de la temperatura de <380> - Ensayos de reactividad biológica
solidificación
<383> - Ensayos de suturas
<190> - Determinación de la viscosidad
<385> - Ensayos en hemoderivados
<200> - Determinación de nitrógeno
<390> - Ensayos farmacotécnicos para
<210> - Determinación del contenido extraíble aerosoles
del envase
<400> - Ensayos farmacotécnicos para
<220> - Determinación del contenido neto del supositorios
envase
<410> - Ensayos generales de identificación
<225> - Determinación del índice de peróxidos
<415> - Ensayo para agentes extraños en <700> - Polarografía
vacunas virales
<710> - Sales de bases orgánicas nitrogenadas
<420> - Envases primarios de plástico
<720> - Termómetros
<430> - Envases de vidrio
<730> - Titulación con nitrito
<435> - Envases para productos médicos
<740> - Uniformidad de unidades de
estériles
dosificación
<440> - Espectrofotometría de absorción y
<745> - Vacunas de uso humano
emisión atómica
<750> - Valoración de esteroides
<450> - Espectrofotometría de fluorescencia
<760> - Valoración iodométrica de antibióticos
<460> - Espectrofotometría infrarroja
beta-lactámicos
<470> - Espectrofotometría ultravioleta y
<770> - Valoración microbiológica de
visible
antibióticos
<475> - Esterilización
<780> - Volumetría
<480> - Grasas y aceites fijos
<490> - Identificación de bases orgánicas
Textos de Información General
nitrogenadas
<1005> - Agua Calidad Farmacéutica
<500> - Identificación de tetraciclinas
<1013> - Buenas prácticas de dispensación en
<510> - Impurezas comunes
la farmacia oficinal comunitaria y
<520> - Impurezas orgánicas volátiles hospitalaria
<530> - Liberación de principios activos <1015> - Buenas prácticas de almacenamiento,
distribución y transporte
<540> - Límite de arsénico
<1020> - Buenas prácticas de fabricación para
<550> - Límite de calcio, potasio y sodio
elaboradores, importadores/
<560> - Límite de cloruro y sulfato exportadores de medicamentos
<570> - Límite de dimetilanilina <1025> - Buenas prácticas para la manipulación
de medicamentos citostáticos
<580> - Límite de hierro
endovenosos en centros asistenciales
<590> - Límite de metales pesados
<1027> - Buenas prácticas de preparación de
<600> - Límite de plomo medicamentos magistrales
<610> - Límite de selenio <1030> - Criaderos de pollos libres de
<620> - Materiales volumétricos patógenos especificados para la
producción y control de calidad de las
<625> - Métodos de análisis para Gases vacunas
Medicinales
<1035> - Equivalencia entre medicamentos
<630> - Métodos de farmacognosia
<1040> - Estudios de estabilidad
<635> - Métodos inmunoquímicos
<1050> - Formas farmacéuticas
<640> - Osmolalidad y Osmolaridad
<1060> - Friabilidad y dureza de comprimidos
<650> - Partículas en inyectables
<1070> - Impurezas en productos oficiales
<660> - Partículas metálicas en ungüentos
oftálmicos <1090> - Limpieza de materiales de vidrio
Cantidad Unidad
Definición
Nombre Símbolo Nombre Símbolo
El metro es la longitud del camino recorrido por la luz en
Longitud l metro M el vacío durante un intervalo de tiempo igual a
1/299.792.458 de segundo.
El kilogramo es igual a la masa del patrón internacional
Masa m kilogramo Kg
del kilogramo.
Tiempo t segundo S El segundo es la duración de 9.192.631.770 de la
radiación correspondiente a la transición de los dos
niveles hiperfinos del estado fundamental del átomo de
cesio-133.
El amperio es la corriente constante que, mantenida en
dos conductores paralelos de longitud infinita, de sección
Corriente eléctrica I amperio A circular despreciable, en el vacío y separados por una
distancia de un metro, produciría entre ellos una fuerza
igual a 2 107 newton por metro de longitud.
Temperatura El kelvin es la fracción 1/273,16 de la temperatura
T kelvin K
termodinámica termodinámica del punto triple del agua.
El mol es la cantidad de sustancia de un sistema que
Cantidad de sustancia n mol Mol contiene tantas unidades elementales como el número de
átomos contenidos en 0,012 kilogramos de carbono-12.
La candela es la intensidad luminosa en una dirección
determinada de una fuente emisora de radiación
Intensidad luminosa Iv candela Cd monocromática con una frecuencia de 540 1012 hertz y
cuya intesidad de energía en dicha dirección es de 1/683
watt por estereorradian.
• Desconocido
• •
• •
•
Respuesta (y)
•
• •
• •
•
•
•
•
ln dosis (x)
[NOTA: a lo largo del texto se utilizará el logaritmo neperiano (ln). Donde aparezca el término “antilo-
garitmo” significa la ex. Sin embargo, los Briggs o logaritmos “comunes” (log o log10) pueden ser igualmente
empleados. En este caso el antilogaritmo correspondiente es 10 x ].
Para que un ensayo sea satisfactorio la potencia asumida de la preparación desconocida debe estar próxima a
la verdadera potencia. Sobre el supuesto de esta potencia asumida y la potencia asignada del estándar se prepa-
ran dosis equipotentes (si es posible), esto es, que las dosis correspondientes del estándar y del desconocido se
espera que den la misma respuesta. Si no se dispone de información sobre la potencia asumida, se realizan ensa-
yos preliminares sobre un amplio rango de dosis para determinar el intervalo en el que la curva es lineal.
Cuanto más próxima esté la potencia estimada de una preparación desconocida a la potencia asumida tanto
más próximas estarán las dos rectas, para lo cual deberán dar igual respuesta a igual dosis. La distancia horizon-
tal entre las líneas representa la exactitud de la potencia estimada con respecto a la potencia asumida. A mayor
distancia entre las dos líneas habrá menor exactitud en la asignación de la potencia asumida. Si la línea corres-
pondiente a la preparación desconocida está situada a la derecha de la línea del estándar, la potencia asumida
estará sobrestimada y los cálculos indicarán una potencia estimada inferior a la potencia asumida. De la misma
manera, si la línea de la preparación desconocida está situada a la izquierda de la línea del estándar, la potencia
asumida estará subestimada y los cálculos indicarán una potencia estimada superior a la potencia asumida.
(dosis 2)
I ln ln dosis 2 ln dosis 1 (3.2.5.-1)
(dosis 1)
La pendiente común b, para ensayos con d dosis de cada preparación, se obtiene a partir de la fórmula
H L ( L S LT ...)
b
I n h (3.2.5.-2)
'
El logaritmo de la relación de potencia de una preparación desconocida, por ejemplo T, es M T
PT PS
M T' (3.2.5.-3)
d b
La potencia estimada es una estimación puntual de la verdadera potencia y los límites de confianza pueden
calcularse por la fórmula (3.2.5.-4)
M T' sup
CM T' (C 1)(CM T'2 2V ) (3.2.5.-4)
M T' inf
SCreg
V (3.2.5.-6)
b2d n
Los valores de t se obtienen a partir de la Tabla 8.2 para p = 0,05 y grados de libertad igual a los del error re-
sidual.
La potencia estimada y los límites de confianza, asociados a ella, se calculan multiplicando los antilogarit-
mos de M T' ; M T' superior y M T' inferior por la potencia supuesta AT.
Si las soluciones existentes no son equipotentes en base a potencias asumida y asignada es necesario un factor
de corrección.
3.2.6 Valores perdidos
En un ensayo equilibrado, un accidente sin ninguna relación con los tratamientos aplicados puede llevar a la
pérdida de una o más respuestas, por ejemplo debido a la muerte de un animal. Si se considera que el accidente
no está relacionado de ninguna manera con la composición de la preparación administrada, los cálculos exactos
pueden aún realizarse pero las fórmulas son necesariamente más complicadas y solamente se pueden dar dentro
del marco de trabajo de los modelos lineales generales. No obstante, existe un método aproximado que mantiene
la simplicidad del diseño equilibrado sustituyendo la respuesta perdida por un valor calculado. La pérdida de
información se tiene en cuenta disminuyendo los grados de libertad de la suma total de cuadrados y para el error
residual en una unidad y empleando una de las fórmulas proporcionadas más adelante para el valor perdido. Se
debe tener en mente que éste es sólo un método aproximado y que debe ser preferido el método exacto.
Si se pierde más de una información se puede emplear la misma fórmula. El procedimiento consiste en hacer
una estimación grosera para todos los valores perdidos excepto uno y emplear la propia fórmula apropiada para
éste, empleando todos los valores restantes incluidas las estimaciones groseras. Incluir el valor calculado. Con-
tinuar de forma similar calculando un valor para la primera aproximación grosera. Después de calcular todos los
valores perdidos de la misma manera se repite el ciclo completo desde el principio, empleando en cada cálculo el
valor estimado o calculado más reciente para todas las respuestas a las que se está aplicando la fórmula. Se con-
tinúa hasta que dos ciclos consecutivos dan los mismos valores, normalmente la convergencia es rápida.
Siempre que el número de valores reemplazados sea pequeño con relación al número total de observaciones
en el experimento completo (digamos inferior al 5 %), la aproximación implicada en este reemplazo y la reduc-
ción de grados de libertad por el número de valores perdidos así reemplazados es normalmente bastante satisfac-
toria. Sin embargo, el análisis debe ser interpretado con gran cuidado, especialmente si existe una preponderan-
cia de valores perdidos en un tratamiento o bloque, y se debe consultar a un especialista en estadística si se en-
cuentra alguna característica inusual.
Diseño completamente aleatorizado.
En un ensayo completamente aleatorizado, el valor perdido puede ser sustituido por la media aritmética de las
otras respuestas al mismo tratamiento.
Diseño en bloques aleatorizados.
El valor perdido y' se obtiene aplicando la ecuación:
n B' k T 'G'
y' (3.2.6.-I)
(n 1)(k 1)
en la que B' es la suma de las respuestas del bloque que contiene el valor perdido, T ' es el total del tratamiento
correspondiente y G ' es la suma de todas las respuestas registradas en el ensayo.
Diseño en cuadrado latino.
El valor perdido y' se obtiene a partir de:
k ( B'C 'T ' ) 2G'
y'
(k 1)(k 2) (3.2.6.-II)
donde B' y C ' son las sumas de las respuestas en la fila y columna que contiene el valor perdido. En este caso
k = n.
Diseño cruzado.
Cuando accidentalmente se produce una pérdida de valores en un diseño cruzado, se debe consultar un libro
de estadística (por ejemplo, D. J. Finney, ver Sección 10), ya que las fórmulas apropiadas dependen de las com-
binaciones particulares de tratamientos.
3.3 Modelo de relación de pendientes
3.3.1 Introducción
Este modelo es apropiado, por ejemplo, para algunos ensayos microbiológicos cuando la variable indepen-
diente es la concentración de un factor de crecimiento esencial por debajo de la concentración óptima del medio.
El modelo se ilustra en la Figura 3.3.1.-I
•
•
Estándar
•
•
• •
•
Respuesta (y)
• Desconocido
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• •
• •
••
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•
•
dosis (x)
Figura 3.3.1.-I.-Modelo de relación de pendientes para un diseño 2 3 + 1.
Las dosis se representan en el eje de abscisas y las respuestas se representan en el eje de ordenadas. Las res-
puestas individuales a cada tratamiento se señalan con puntos negros. Las dos líneas son las relaciones dosis-
respuesta calculadas para la preparación estándar y para la desconocida bajo el supuesto de que ambas se cortan
en el cero de dosis. A diferencia del modelo de líneas paralelas, las dosis no se transforman a logaritmos.
Al igual que en el caso de un ensayo basado en el modelo de líneas paralelas, es importante que la potencia
asumida esté cerca de la verdadera potencia y preparar diluciones equipotentes de las preparaciones desconocida
y del estándar (si es posible). Cuanto más próxima esté la potencia asumida del desconocido a la verdadera po-
tencia, más cerca estarán las dos líneas. La relación de las pendientes representa la “verdadera” potencia del
desconocido, relativa a su potencia asumida. Si la pendiente de la preparación desconocida es mayor que la del
estándar, la potencia ha sido subestimada y los cálculos indicarán una potencia estimada superior a la potencia
asumida. De la misma manera, si la pendiente del desconocido es menor que la del estándar, la potencia ha sido
sobrestimada y los cálculos indicarán una potencia estimada inferior a la potencia asumida.
En un ensayo todas las respuestas deben ser examinadas para que satisfagan las condiciones 1, 2 y 3 de la
Sección 3.1. El análisis de varianza que ha de desarrollarse rutinariamente se describe en la Sección 3.3.3, por lo
que el cumplimiento de las condiciones 4B y 5B de la Sección 3.1 puede ser examinado.
3.3.2 Diseño del ensayo
El empleo del análisis estadístico presentado más adelante, impone las siguientes restricciones al ensayo:
a) El estándar y las preparaciones a ensayar tiene que ser analizadas en el mismo número de diluciones
igualmente espaciadas;
b) Un grupo extra de unidades experimentales que no reciben tratamiento pueden ser examinadas (los blan-
cos);
c) Tiene que haber un número igual de unidades experimentales para cada tratamiento.
Como ya se señalo en la Sección 3.1.3 los diseños de ensayo que no cumplen estas restricciones pueden ser
posibles y correctos, pero los análisis estadísticos sencillos presentados aquí no son aplicables y ha de solicitarse
el consejo de un experto o emplearse un programa apropiado.
Un diseño con dos dosis por preparación y un blanco, “diseño cero común (h2 + 1)”es normalmente preferi-
do, ya que permite una mayor precisión juntamente con la posibilidad de revisar la validez dentro de las restric-
ciones mencionadas arriba. Sin embargo, una relación lineal no puede ser siempre asumida como válida por
debajo de dosis cero. Se puede adoptar, con una pequeña pérdida de precisión, un diseño sin blancos. En este
caso se prefiere tres dosis por preparación, “diseño cero común (h3)”, al de dos dosis por preparación. Estas
dosis son, así, dadas como sigue:
1) El estándar se da en una dosis alta, próxima, pero sin exceder la dosis máxima que da una respuesta media
sobre el tramo recto de la línea dosis-respuesta.
2) Las otras dosis están uniformemente espaciadas entre la dosis más alta y la dosis cero.
3) Las preparaciones desconocidas se dan en las dosis correspondientes, basándose en la potencia asumida del
material.
Puede emplearse un diseño completamente aleatorizado, un diseño en bloques aleatorizados o un diseño en
cuadrado latino tal como se describe en la Sección 3.2.2. El empleo de cualquiera de estos diseños necesita un
ajuste de la suma de cuadrados del error como se describe para el análisis basado en el modelo de rectas parale-
las. Se describe más adelante el análisis de un ensayo de una o más preparaciones desconocidas frente a un
estándar.
3.3.3 Análisis de varianza
3.3.3.1 Diseño (hd + 1)
Las respuestas se analizan como se describe en la Sección 3.1 y si es necesario se transforman. Las respues-
tas son entonces promediadas sobre cada tratamiento y cada preparación como se indica en la Tabla 3.3.3.1-I.
Adicionalmente se calcula la respuesta media de los blancos (B).
La suma de cuadrados en el análisis de varianza se calcula como se indica en las Tablas 3.3.3.1-I a 3.3.3.1-III.
La suma de cuadrados debida a no linealidad puede ser calculada sólo si han sido incluidas al menos tres dosis de
cada preparación en el ensayo. El error residual se obtiene restando las variaciones de las fuentes de variación
contempladas en el diseño de la variación total de la respuesta (Tabla 3.3.3.1-IV).
El análisis de varianza se completa ahora como sigue. Cada suma de cuadrados se divide por el correspon-
diente número de grados de libertad para dar los cuadrados medios (CM).
SC fte.devariación
CM fte.devariación
gl fte.devariación
El F calculado es el cociente entre el cuadrado medio de cada fuente de variación y el cuadrado medio del
error residual (s2). La significación de esos valores (conocida como razón F) se evalúa mediante el empleo de la
Tabla 7.1.
CM fte.devariación
F calculado
CM error
Tabla 3.3.3.1.-I.
Fórmulas aplicables al modelo de Relación de pendientes con d dosis para cada preparación y un blanco
Estándar Preparación 1 Preparación 2
(T) (U, etc.)
Respuesta media de la dosis menor S1 T1 U1
Respuesta media de la segunda dosis S2 T2 U2
... … … …
Respuesta media de la dosis mayor Sd Td Ud
Total de la preparación PS = S1+S2+…+Sd PT = T1+T2+…+Td PU = U1+U2+…+Ud
Contraste lineal LS =1S1+2S2+…+dSd LT = 1T1+2T2+…+dTd LU = 1U1+2U2+…+dUd
Valor de la intersección aS = (4d + 2)PS - 6LS aT = (4d + 2)PT - 6LT aU = (4d + 2)PU - 6LU
Valor de la pendiente bS =2LS - (d + 1)PS bT = 2LT - (d + 1)PT bU = 2LU - (d + 1)PU
2 2 2 2
Valor del tratamiento GS =S1 + …+ Sd GT =T1 + …+ Td GU = U12 + …+ Ud2
2 2 2 2 2 2
PS 3b PT 3b PU 3 b
No linealidad (*) J S GS 3 S J T GT 3 T J U GU 3 U
d d d d d d d d d
(*)
No calculado para ensayos de dos dosis
(*)
No se calcula para el diseño completamente aleatorizado.
(**)
Sólo se calcula para el diseño Cuadrado Latino.
(***)
Depende del tipo de diseño.
3.3.3.2 Diseño (hd)
Las fórmulas son básicamente las mismas que las empleadas para el diseño (hd + 1), pero existen algunas pe-
queñas diferencias.
B es descartado en la totalidad de las fórmulas.
K n( PS PT ...)
2
hd
SCblanco se elimina del análisis de varianza.
El número de grados de libertad para los tratamientos se transforma en hd – 1.
El número de grados de libertad del error residual y la varianza total se calcula de la forma descripta para
el modelo de líneas paralelas (ver Tabla 3.2.3.-IV)
La validez del ensayo, la potencia y el intervalo de confianza se determinan como se describe en las Seccio-
nes 3.3.4 y 3.3.5.
3.3.4 Criterios de validez
Se dice que los resultados del ensayo son “estadísticamente válidos” cuando el resultado del análisis de va-
rianza es como sigue:
1) la variación debida a los blancos en los diseños (hd + 1) es no significativa, es decir, la probabilidad
calculada es no inferior a 0,05. Esto indica que la respuesta de los blancos no difiere significativamente del pun-
to de intersección común y la relación lineal es válida hacia la dosis cero.
2) la variación debida a la intersección es no significativa, es decir, la probabilidad calculada es no inferior
a 0,05. Esto indica que se satisface la condición 5B de la Sección 3.1.
3) en ensayos que incluyen al menos tres dosis por preparación, la variación debida a la no linealidad es no
significativa, es decir, la probabilidad calculada es no inferior a 0,05. Esto indica que se satisface la condición
4B de la Sección 3.1.
Una variación significativa debida a los blancos indica que la hipótesis de linealidad es no válida cerca de la
dosis cero. Si es probable que esto sea más sistemático que accidental, para el tipo de ensayo, el diseño hd es
más apropiado. Cualquier respuesta a los blancos debe ser entonces no considerada.
Cuando estos ensayos indican que el ensayo es válido, se calcula la potencia con sus límites de confianza,
como se describe en la Sección 3.3.5.
3.3.5 Estimación de la potencia y límites de confianza
3.3.5.1 Diseño (hd + 1)
La intersección común a' de las preparaciones se puede calcular a partir de
(2d 1) B (2d 3)ha
a'
h(2d 3) 2d 1 (3.3.5.1.-1)
La pendiente del estándar, y análogamente para cada una de las otras preparaciones, se calcula a partir de la
fórmula (3.3.5.1.-2) con su correspondiente LS, LT, LU…
6LS 3d (d 1)a'
b' S (3.3.5.1.-2)
2d 3 3d 2 d
la cual ha de ser multiplicada por AT, la potencia asumida de la preparación a ensayar, para determinar la potencia
estimada RT. Si el paso entre dosis adyacentes no fuera idéntico para el estándar y la preparación desconocida, la
potencia tiene que ser multiplicada por IS /IT. Nótese que a diferencia del análisis de líneas paralelas, no se calcu-
lan antilogaritmos.
El intervalo de confianza para R'T se calcula a partir de
2
Donde b' S
C
b' S s t V1
2 2 2
y K'= (C – 1) V2
V1 y V2 están relacionados con la varianza y covarianza del numerador y del denominador de R'T. Se pueden
obtener a partir de
6 1 3
V1 (3.3.5.1.-5)
n(2d 1) d (d 1) 2(2d 1) hd (d 1)
3d (d 1)
V2
(3d 1)(d 2) hd (d 1) (3.3.5.1.-6)
6 1 3
V1 (3.3.5.2.-2)
nd (2d 1) d 1 h(d 1)
3(d 1)
V2
3(d 1) h(d 1) (3.3.5.2.-3)
4 ENSAYOS QUE DEPENDEN DE RESPUESTAS CUANTALES
4.1 Introducción
En ciertos ensayos es imposible o excesivamente laborioso medir el efecto sobre cada unidad experimental en
una escala cuantitativa. En cambio, un efecto (respuesta) tal como la muerte o síntomas de hipoglucemia, se
pueden observar como que “ocurren” o “no ocurren” en cada unidad y el resultado depende del número de uni-
dades en las cuales ocurre. Tales ensayos se llaman cuantales o del todo-o-nada.
La situación es muy similar a lo descripto para ensayos cuantitativos en la Sección 3.1, pero en lugar de n
respuestas separadas para cada tratamiento se registra un valor único, esto es, la fracción de unidades en cada
grupo de tratamiento que muestra una respuesta. Cuando estas fracciones son representadas frente al logaritmo
de las dosis la curva resultante tiende a ser sigmoidea más que lineal. Se emplea una función matemática que
represente esta curvatura sigmoidea para estimar la curva dosis-respuesta. La función más comúnmente emplea-
da es la función de distribución normal acumulada. Esta función tiene ventajas teóricas y es quizá la mejor elec-
ción si la respuesta es un reflejo de la tolerancia de las unidades. Si la respuesta tiende más a depender de un
proceso de crecimiento, se prefiere el modelo de distribución logística, aunque entre los dos modelos la diferen-
cia en el resultado es muy pequeña.
Los estimadores de máxima verosimilitud de la pendiente y localización de las curvas se pueden determinar
únicamente aplicando un procedimiento iterativo. Existen muchos procedimientos que conducen al mismo resul-
tado, pero difieren en eficiencia debido a la velocidad de convergencia. Uno de los métodos más rápidos es la
optimización directa de la función de máxima verosimilitud, lo cual puede ser fácilmente realizado con progra-
mas de computación que contengan un procedimiento interno elaborado con esta finalidad. Desafortunadamente,
la mayoría de estos procedimientos no proporcionan una estimación del intervalo de confianza y la técnica de
obtención es demasiado complicada para ser descripta aquí. La técnica descripta a continuación no es la más
rápida pero ha sido elegida por su simplicidad comparada con las otras alternativas. Puede ser empleada en en-
sayos en los que una o más preparaciones se comparan al estándar en los que además han de cumplimentarse las
siguientes condiciones:
1) La relación entre el logaritmo de la dosis y la respuesta se puede representar por una curva de distribu-
ción normal acumulada.
2) Las curvas para el estándar y para la preparación muestra son paralelas, es decir, tienen una forma idén-
tica y pueden diferir solamente en su localización horizontal.
3) En teoría, naturalmente no hay respuesta a dosis extremadamente bajas y no hay respuesta a dosis ex-
tremadamente altas.
4.2 Método de probitos
La curva sigmoidea se puede transformar en una recta sustituyendo cada respuesta, esto es la proporción de
respuestas positivas por grupo, por el correspondiente valor de la distribución normal estándar acumulada. Este
valor, a menudo llamado“normito”, toma valores teóricos entre - a + . Tiempo atrás se proponía añadir 5 a
cada normito para obtener “probito”. Esto facilitaba los cálculos hechos a mano ya que se evitaban los valores
negativos. Con la llegada de las computadoras la necesidad de sumar 5 a los normitos ha desaparecido. El térmi-
no “método de normitos” sería más apropiado para el método descripto a continuación. No obstante, ya que el
termino “análisis de probitos” está tan ampliamente difundido se mantendrá dicho término en el texto por razones
históricas.
Una vez que las respuestas han sido linealizadas, debiera ser posible aplicar el análisis de líneas paralelas co-
mo se describe en la Sección 3.2. Desafortunadamente, la validez de condición de homogeneidad de la varianza
para cada dosis no se cumple. La varianza es mínima para normito = 0 y crece para valores tanto positivos como
negativos del normito. Por tanto, es necesario dar más peso a las respuestas en la parte media de la curva y me-
nos peso en las partes más extremas de la misma. Este método, el análisis de varianza, la estimación de la poten-
cia y del intervalo de confianza se describen a continuación.
4.2.1 Tabulación de resultados
La Tabla 4.2.1.-I se emplea para introducir datos en las columnas indicadas por números:
(1) Dosis del estándar o de la preparación desconocido
(2) Número n de unidades sometidas a ese tratamiento.
(3) Número de unidades r que dan respuesta positiva al tratamiento.
(4) Logaritmo x de la dosis.
(5) Proporción p = r / n de respuestas positivas por grupo.
El primer ciclo empieza aquí.
(6) La columna Y se completa con ceros en la primera iteración.
(7) El valor correspondiente a = (Y) de la función de distribución normal estándar acumulada
(ver Tabla 7.4).
Las columnas (8) a (10) se calculan con las siguientes fórmulas:
e Y
2
/2
(8) Z (4.2.1.-1)
2
n z2
(10) w (4.2.1.-3)
2
Las columnas (11) a (15) se pueden calcular fácilmente a partir de las columnas (4), (9) y (10) como wx, wy,
wx2, wy2 y wxy respectivamente y la sumatoria de cada una de las columnas (10) a (15) se calcula separadamente
para cada una de las preparaciones.
Las sumas calculadas en la Tabla 4.2.1.-I se transfieren a las columnas (1) a (6) de la Tabla 4.2.1.-II y se cal-
culan seis columnas adicionales (7) a (12) como sigue.
Tabla 4.2.1.-I Primer tabla de trabajo
(1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) (11) (12) (13) (14) (15)
dosis n r x p Y Z y w wx wy wx2 wy2 wxy
S . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . .
= = = = = =
T . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . .
= = = = = =
etc.
( wx) 2
(7) S xx wx 2 (4.2.1.-4)
w
( wx)( wy)
S xy wxy
(8) w (4.2.1.-5)
( wy) 2
(9) S yy wy 2 (4.2.1.-6)
w
wx
x
(10) w (4.2.1.-7)
wy
(11) y
w (4.2.1.-8)
La columna (6) de la primera tabla de trabajo puede ser ahora sustituida por Y = a + bx y el ciclo se va repi-
tiendo hasta que la diferencia entre dos ciclos se ha hecho pequeña (por ejemplo, la máxima diferencia de Y entre
dos ciclos consecutivos es inferior a 10 –8).
4.2.2 Criterios de validez
Antes de calcular las potencias e intervalos de confianza, debe ser evaluada la validez del ensayo. Si se han
incluido al menos tres dosis para cada preparación, las desviaciones de la linealidad se pueden medir como sigue:
añadir una columna 13 a la Tabla 4.2.1.-II y completarla según la expresión:
S xy2
S yy (4.2.2.-1)
S xx
El total de columna es una medida de las desviaciones de la linealidad y se distribuye, aproximadamente, co-
mo una 2 con N – 2h grados de libertad. La significación de este valor puede establecerse con la Tabla 7.3 o con
una adecuada subrutina en un programa de computación. Si el valor es significativo a un nivel de probabilidad
de 0,05, el ensayo debe probablemente ser rechazado (ver Sección 4.2.4).
Cuando el ensayo anterior no indica desviación significativa de regresión lineal, se contrastan las desviacio-
nes del paralelismo, a un nivel de significación del 0,05, con:
S xy2 ( S xy ) 2
2 (4.2.2.-2)
S xx S xx
donde b 2 S xx
C
b S xx s 2 t 2
2
y 1 1
V
wS
w
T
e Y
Z (4.3.-2)
(1 e Y ) 2
Z e Y e
Y
donde 1
V
w
T
45
S T U
45 45
40 40 40
35 35 35
30 30 30
N° de reticulocitos
25 25 25
20 20 20
15 15 15
10 10 10
5 5 5
0 0 0
Las fórmulas de las Tablas 3.2.3.-I y 3.2.3.-II proporcionan:
PS = 69,7 LS = 16,7
PT = 65,9 LT = 15,9
PU= 80,4 LU = 20,0
10 120
HP 3,333333 HL 5
3 24
K = 51840
El análisis de varianza se puede ahora completar con las fórmulas de las Tablas 3.2.3.-III y 3.2.3.-IV. Este se
muestra en la Tabla 5.1.1.-II.
Tabla 5.1.1.-II. Análisis de varianza
Fuente de Grado de Suma de Cuadrado Razón F Probabilidad
variación libertad cuadrados medio
Tratamientos 8 5041,6
Total 89 5370
El análisis confirma una regresión lineal altamente significativa. La falta de paralelismo es también significa-
tiva (p = 0,0043). La preparación U es por tanto rechazada y el análisis se repite utilizando únicamente la prepa-
ración T y la preparación estándar. El valor K es ahora 30645,6.
Tabla 5.1.1.-III. Análisis de varianza
Fuente de Grado de Suma de Cuadrado Razón F Probabilidad
variación libertad cuadrados medio
Tratamientos 5 2683,4
Total 59 2928,4
El análisis sin la preparación U cumple los requerimientos con respecto a la regresión, linealidad y paralelis-
mo por lo tanto la potencia puede ser calculada. Aplicando las fórmulas de la Sección 3.2.5 se obtiene:
Para la pendiente común
5 (16,7 15,9)
b 7,4148
ln 3 10 2
El ln de la relación de potencias es
65,9 69,7
M T' 0,1707
3 7,4184
2656 ,9
C 1,0069
2656 ,9 4,5370 2,005 2
2656 ,9
V 1,6093
7,4184 2 3 10
Los ln de los límites de confianza para la preparación T son:
0,1719 0,0069 (0,0293 3,2186 ) 0,1719 0,1497
Tomando antilogaritmos encontramos una relación de potencias de 0,8430 con límites de confianza, del 95
por ciento, de 0,7250 y 0,9780.
Multiplicando por la potencia asumida de la preparación T resulta una potencia de 1686 UI/ml con límites de
confianza, del 95 por ciento, de 1450 y 1956 UI/ml.
5.1.2 Ensayo múltiple de cinco dosis con diseño completamente aleatorizado
Ensayo in vitro de tres vacunas de hepatitis B frente a un estándar
De cada una de las vacunas y del estándar se prepararon tres series independientes de cinco diluciones, en
progresión geométrica (al medio). Después de algunos pasos adicionales en el procedimiento del ensayo, se
midieron las absorbancias. Los resultados se muestran en la Tabla 5.1.2.-I.
1:16000 0,043 0,045 0,051 0,097 0,097 0,094 0,086 0,071 0,073 0,082 0,082 0,086
1:8000 0,093 0,099 0,082 0,167 0,157 0,178 0,127 0,146 0,133 0,145 0,144 0,173
1:4000 0,159 0,154 0,166 0,327 0,355 0,345 0,277 0,268 0,269 0,318 0,306 0,316
1:2000 0,283 0,295 0,362 0,501 0,665 0,576 0,586 0,489 0,546 0,552 0,551 0,624
1:1000 0,514 0,531 0,545 1,140 1,386 1,051 0,957 0,866 1,045 1,037 1,039 1,068
Es conocido que los logaritmos de las densidades ópticas tienen una relación lineal con los logaritmos de las
dosis. En la Tabla 5.1.2.-II figuran las respuestas medias de las densidades ópticas logaritmicamente transfor-
madas.
Tabla 5.1.2.-II. Medias de las transformaciones ln de las absorbancias
Figura 5.1.2.-I
0,5
S T
0
-0,5
ln (absorbancia)
-1
-1,5
-2
-2,5
-3
-3,5
0,5
U V
0
-0,5
ln (absorbancia)
-1
-1,5
-2
-2,5
-3
-3,5
El análisis de varianza ya puede ser completado con las fórmulas de las Tablas 3.2.3.-III y 3.2.3.-IV. El resul-
tado se presenta en la Tabla 5.1.2.-III.
Tabla 5.1.2.-III. Análisis de varianza
Fuente de Grado de Suma de Cuadrado Razón F Probabilidad
variación libertad cuadrados medio
Preparaciones 3 4,475 1,492
Regresión 1 47,58 47,58 7126 0,000
No paralelismo 3 0,0187 0,006 0,933 0,434
No linealidad 12 0,0742 0,006 0,926 0,531
Tratamientos 19 52,152
Error Residual 40 0,267 0,0067
Total 59 52,42
Una regresión altamente significativa y un desvío de paralelismo y linealidad no significativa, confirma que
las potencias pueden ser calculadas satisfactoriamente. Aplicando las fórmulas de la Sección 3.2.5 dan:
0,3 (6,109 6,264 6,431 6,384 )
b 0,90848
ln 2 3 4
El ln de la relación de potencias para la preparación T es
5,586 (9,108)
M T' 0,7752
5 0,90848
47,58
C 1,00057
47,58 0,0067 2,021 2
47,58
V 3,8436
0,9085 2 5 3
Tomando antilogaritmos se calcula una relación de potencias de 2,171 con límites de confianza, del 95 por
ciento, de 2,027 y 2,327. Todas las muestras tienen una potencia asignada de 20 µg proteína/ml y por tanto una
potencia de 43,4 µg proteína/ml se encuentra para la preparación desconocida T con límites de confianza, del 95
por ciento, de 40,5 y 46,5 µg proteína/ml.
El mismo procedimiento se sigue para estimar la potencia y los límites de confianza de las otras preparacio-
nes ensayadas. Los resultados se muestran en la Tabla 5.1.2.-IV.
Tabla 5.1.2.-IV
Potencia final estimada e intervalos de confianza del 95% del ensayo de vacunas (en g proteína/ml)
Límite inferior Estimación Límite superior
5.1.3 Ensayo de dos dosis con diseño de cuadrado latino y sin replicación
Ensayo de Ocitocina usando órgano aislado
Tabla 5.1.3.-I Disposiciones de tratamientos (Cuadrado latino)
Columnas
Filas 1 2 3 4
1 S1 S2 T1 T2
2 S2 T1 T2 S1
3 T1 T2 S1 S2
4 T2 S1 S2 T1
La preparación estándar se administró en dosis de 0,001UI/ml y 0,003 UI/ml. Se prepararon dosis equivalen-
tes de las preparaciones T basándose en una potencia supuesta de 10 UI/ml. Cada uno de los cuatro tratamientos
se aplicó una vez en cada fila y una vez en cada columna.
Tabla 5.1.3.-II Medida de contracción del útero en milímetros.
Columnas Media de las filas (R)
Filas 1 2 3 4
1 26 31 20 33 27,50
2 31,5 18 29 23 25,375
3 17 22 16 28 20,75
4 24 14 24 16 19,50
Media de las 24,625 21,25 22,25 25,00
columnas (C)
Tabla 5.1.3.-III Medias de los tratamientos
Estándar S Preparación T
S1 S2 T1 T2
Media 19,75 28,625 17,75 27,00
35
30
25
Contracción (mm)
20
S
T
15
10
Figura 5.1.3.- I
Las fórmulas de las Tablas 3.2.3.-I y 3.2.3.-II proporcionan:
PS= 48,375 LS = 4,4375
PT = 44,75 LT = 4,625
HP = 2 48
HL 8
6
K= 8672,265625
El análisis de varianza ya puede ser completado con las fórmulas de las Tablas 3.2.3.-III y 3.2.3.-IV. El resul-
tado se muestra en la Tabla 5.1.3.-IV.
Tabla 5.1.3.-IV Análisis de varianza
Fuente de Grado de Suma de Cuadrado Razón F Probabilidad
variación libertad cuadrados medio
Preparaciones 1 13,1406 13,1406
Regresión 1 328,5156 328,5156 512,8248 0,0000
No paralelismo 1 0,1406 0,1406 0,2195 0,6560
Tratamientos 3 341,7969 113,9323
Filas 3 171,5469 57,1823 89,2637 0,0000
Columnas 3 39,7969 13,2656 20,7081 0,0014
Error Residual 6 3,8436 0,6406
Total 15 556,9843 37,1323
El análisis de varianza demostró diferencias significativas entre las filas y las columnas. Esto indica el au-
mento de precisión conseguido mediante el uso de un diseño cuadrado latino en lugar de un diseño completamen-
te aleatorizado.
La regresión altamente significativa y el desvío del paralelismo no significativo, confirman que el ensayo es
válido y se calcula la potencia aplicando las fórmulas de la Sección 3.2.5.
8 (4,4375 4,625 )
b 8,2491
ln 3 4 2
El ln de la relación de potencia para la preparación T es
44,75 48,375
M T' 0,2197
2 8,2491
328,5156
C 1,0118
328,5156 0,6406 5,9878
328,5156
V 0,6035
4 2 (8,2491) 2
Figura 5.2.1-I
Las fórmulas de las Tablas 3.3.3.1.-I y 3.3.3.1.-II proporcionan
PS = 2186,50 PT = 2267
LS = 4842,50 LT = 5060,5
aS = 1556,00 aT = 1375
bS = 939,00 bT = 1053
GS = 1703849,25 GT = 1851907,5
JS = 40,042 JT = 210,042
HB = 0,923076923 HI = 0,023809523
a = 244,25 K = 6302032,071
El análisis de varianza ya puede ser completado con las fórmulas de las Tablas 3.3.3.1.-III y 3.3.3.1.-IV. El
resultado se muestra en la Tabla 5.2.1.-II.
Tablas 5.2.1.-II Análisis de varianza
Fuente de Grado de Suma de Cuadrado Razón F Probabilidad
variación libertad cuadrados medio
Regresión 2 926687,8068 463343,9034 861,3460 0,0000
Blancos 1 1,4423 1,4423 0,0027 0,9600
Intersección 1 390,0119 390,0119 0,7250 0,4227
No linealidad 2 500,1680 250,0840 0,4649 0,6463
Tratamientos 6 927579,4290 154596,5715
Error Residual 7 3765,5000 537,938
Total 13 931344,9290
Una regresión altamente significativa y desviaciones no significativas de linealidad e intersección indica que
puede ser calculada la potencia. Además se observa el cumplimiento de blancos.
Aplicando las fórmulas de la Sección 3.3.5 se obtiene:
a' 243,5769
Pendiente del estándar
6 4842 ,50 9 4 243,5769
bS' 241,5028
2 27 9 3 3
Pendiente de la preparación desconocida
6 5060 ,50 9 4 243,5769
bT' 257 ,0742
2 27 9 3 3
La relación de potencia para la preparación T es
RT' 1,0645
241,5028 2
C 1,0044
241,5028 537 ,938 2,3646 2 0,0852
2
Se calcula una relación de potencias de 1,0645 con límites de confianza, del 95 por ciento, de 1,0037 y
1,1295. Como la preparación analizada tiene una potencia asumida de 250 UI/vial, por lo tanto su potencia esti-
mada es de 266,12 UI/vial con límites de confianza de 250,92 UI/vial y 282,37 UI/vial. Nótese que a diferencia
del análisis de líneas paralelas no se calculan los antilogaritmos.
5.2.2 Ensayo completamente aleatorizado con diseño (3 4)
Un ensayo in vitro de vacunas de influenza
El contenido en antígeno hemaglutinina (HA) de dos vacunas de influenza es determinado por inmunodifu-
sión radial simple. Ambas tienen una potencia en rótulo de 15 g HA por dosis, que equivale a un contenido de
30 g HA/ml. El estándar tiene un contenido asignado de 39 g HA/ml.
Se aplica el estándar y las dos vacunas problema en cuatro concentraciones duplicadas las cuales están prepa-
radas sobre la base de los contenidos asignado y declarado respectivamente. Cuando se establece el equilibrio
entre los reactantes, externo e interno, se mide la zona del área de precipitación anular. Los resultados se mues-
tran en la Tabla 5.2.2.-I.
Tabla 5.2.2.1 Zona de precipitación area (mm 2)
Concentración Estándar Preparación T Preparación U
(g/ml)
I II I II I II
7,5 18,0 18,0 15,1 16,8 15,4 15,7
15,0 22,8 24,5 23,1 24,2 20,2 18,6
22,5 30,4 30,4 28,9 27,4 24,2 23,1
30,0 35,7 36,6 34,4 37,8 27,4 27,0
40 S4
35
S3
Área de precipitación anular (mm)
30 T4
S2 T3
25 U4
T2 U3
20 S1
T1 U2
15
U1
10
5
0
Figura 5.2.2.-I
Una representación gráfica de los datos no muestra hechos inusuales. Aplicando las fórmulas de las Tablas
3.3.3.1.-I y 3.3.3.1.-II se obtiene:
PS = 108,2 PT = 103,85 PU = 85,8
LS = 301,1 LT = 292,1 LU = 234,1
aS = 141,0 aT = 116,7 aU = 139,8
bS = 61,2 bT = 64,95 bU = 39,2
GS = 3114,3 GT = 2909,4 GU = 1917,3
JS = 0,223 JT = 2,227 JU = 0,083
HI = 0,00925926 a' = 11,0416667 K = 14785,7704
y el análisis de varianza se completa con las fórmulas de las Tablas 3.3.3.1.-III y 3.3.3.1.-IV. Esto se muestra en
la Tabla 5.2.2.-II.
Tabla 5.2.2.-II Análisis de varianza
Fuente de Grado de Suma de Cuadrado Razón F Probabilidad
variación libertad cuadrados medio
Regresión 3 1087,66519 362,55065 339,497525 0,0000
Intersección 2 3,47388889 1,7369444 1,62647939 0,2371
No linealidad 6 5,0655 0,84425 0,79055794 0,5943
Tratamientos 11 1096,20458
Error Residual 12 12,815 1,06791667
Total 23 1109,01958
Una regresión altamente significativa y desviaciones no significativa de linealidad e intersección indica que
puede ser calculada la potencia.
Esto proporciona una relación de potencias de 0,95280 para la vacuna T y 0,64863 para la vacuna U.
6,35611 2
C 1,00561
6,35611 1,06791667 2,179 2 0,4444
2
Para la vacuna U son: 0,64877 0,00561 1,42308 0,0035 (1,30104 ) 0,64877 0,05856
El contenido HA por dosis se puede determinar multiplicando las razones de potencias y límites de confianza
por la potencia asumida, 15 µg/dosis. Los resultados están dados en la Tabla 5.2.2.-III
Tabla 5.2.2.-III Estimación de potencia HA (µg/dosis)
Límite inferior Potencia estimada Límite superior
donde M
WM
W
Si el 2 calculado es inferior al valor tabulado correspondiente con (n'–1) grados de libertad las potencias son
homogéneas y tendrán sentido calcular la potencia media y los límites de confianza por el método de la Sección
6.2.3.
Si el valor calculado de este estadístico es superior al valor tabulado, las potencias son heterogéneas. Esto
significa que la variación entre las estimaciones individuales de M es mayor que la que se podría predecir a partir
de las estimaciones de los límites de confianza, esto es, que existe una variabilidad significativa entre los ensa-
yos. Bajo estas circunstancias la condición 4 no se cumple y las ecuaciones de la Sección 6.2.3 ya no se pueden
aplicar. En cambio se pueden usar las fórmulas de la Sección 6.2.4.
6.2.3 Cálculo de la media ponderada y límites de confianza
Se forman los productos WM para cada ensayo y su suma se divide por el peso total de todos los ensayos para
dar el logaritmo de la potencia media ponderada.
M
WM
W (6.2.3.-1)
El error estándar del ln (potencia media) se calcula como la raíz cuadrada de la inversa del peso total:
1
SM
W (6.2.3.-2)
y se obtienen los límites de confianza aproximados a partir de los antilogaritmos de los valores dados por
M t sM (6.2.3.-3)
donde el número de grados de libertad de t es igual a la suma del número de grados de libertad de los cuadrados
medios del error de los ensayos individuales.
6.2.4 Media ponderada y límites de confianza basados en la variación intra e inter ensayo
Cuando los resultados de varios ensayos repetidos se combinan, el valor 2 puede ser significativo. Se consi-
dera entonces que la variación observada tiene dos componentes:
- La variación intra ensayo 1
sM2
W
n' (n'1)
donde M es la media no ponderada. La primera componente varía de ensayo a ensayo mientras que la última es
común para todo M.
Para cada M se calcula entonces un coeficiente de ponderación como sigue
1
W'
s sM2
2
M
sM2
(M M ) 2
Se evalúa la homogeneidad de las potencias estimadas con la fórmula 6.2.2.-1 la cual da un 2 de 4,42 con 5
grados de libertad. Esto es, no significativo (p = 0,49) por lo que se cumplen todas las condiciones.
La potencia media ponderada se calcula con la fórmula 6.2.3.-1, resulta 9,8085.
La fórmula 6.2.3.-2 da una desviación estándar de 0,00673 y límites de confianza, del 95 %, de 9,7951 y
9,8218 que se calculan con la fórmula 6.2.3.-3 donde t tiene 120 grados de libertad.
Al tomar los antilogaritmos se obtiene una potencia de 18187 IU/vial con límites de confianza de 17946
UI/vial y 18431 IU/vial.
6.5 Ejemplo de potencia media ponderada y límites de confianza de ensayos de relación de pendientes con
igual potencia asumida
En la Tabla 6.5.-I se especifican seis estimaciones independientes de potencia de la misma preparación, con
igual potencia asumida (250UI/vial), la potencia corregida por potencia asumida con sus límites de confianza del
95% y el número de grados de libertad de la varianza del error. Cumplen las condiciones 1,2 y 3 de la Sección
6.2.
Tabla 6.5.-I Potencia estimada y peso de cuatro ensayos independientes
Potencia estimada Potencia corregida por potencia asumida Grados de libertad Peso
R R' W
Se evalúa la homogeneidad de las potencias estimadas con la formula 6.2.2.-1 la cual da un 2 de 2,8584 con
5 grados de libertad, esto es “no significativo”, el 2 de tabla es 11,070 por lo que se cumplen todas las condicio-
nes.
La potencia media ponderada se calcula con la fórmula 6.2.3.-1, multiplicada por la potencia supuesta resulta
ser 257,25 UI/ vial.
La fórmula 6.2.3.2 da una desviación estándar de 0,02013 y los limites de confianza, del 95%, obtenidos por
la formula 6.2.3.3, donde t tiene 42 grados de libertad, dan un resultado de 247,08 UI/vial y 267,41 UI/ vial
cuando se multiplican por la potencia supuesta.
7 TABLAS
Las tablas de esta sección proporcionan un listado de valores críticos para los números de grados de libertad
más frecuentes. Si un valor crítico no está en la lista debe buscarse en tablas más completas. Muchos programas
de ordenador incluyen funciones estadísticas y se recomienda su uso en lugar de las tablas de esta sección.
7.1 Distribución F
Si un valor observado es mayor que el valor de la tabla se considera que es significativo (líneas superiores,
p=0,05) y muy significativo (líneas inferiores, p=0,01). gl 1 es el número de grados de libertad del numerador y
gl 2 es el número de grados de libertad del denominador.
gl 1 2 3 4 5 6 8 10 12 15 20
1
gl
2
10 4,965 4,103 3,708 3,478 3,326 3,217 3,072 2,978 2,913 2,845 2,774 2,538
10,044 7,559 6,552 5,994 5,636 5,386 5,057 4,849 4,706 4,558 4,405 3,909
12 4,747 3,885 3,490 3,259 3,106 2,996 2,849 2,753 2,687 2,617 2,544 2,296
9,330 6,927 5,953 5,412 5,064 4,821 4,499 4,296 4,155 4,010 3,858 3,361
15 4,543 3,682 3,287 3,056 2,901 2,790 2,641 2,544 2,475 2,403 2,328 2,066
8,683 6,359 5,417 4,893 4,556 4,318 4,004 3,805 3,666 3,522 3,372 2,868
20 4,351 3,493 3,098 2,866 2,711 2,599 2,447 2,348 2,278 2,203 2,124 1,843
8,096 5,849 4,938 4,431 4,103 3,871 3,564 3,368 3,231 3,088 2,938 2,421
25 4,242 3,385 2,991 2,759 2,603 2,490 2,337 2,236 2,165 2,089 2,007 1,711
7,770 5,568 4,675 4,177 3,855 3,627 3,324 3,129 2,993 2,850 2,699 2,169
30 4,171 3,316 2,922 2,690 2,534 2,421 2,266 2,165 2,092 2,015 1,932 1,622
7,562 5,390 4,510 4,018 3,699 3,473 3,173 2,979 2,843 2,700 2,549 2,006
50 4,034 3,183 2,790 2,557 2,400 2,286 2,130 2,026 1,952 1,871 1,784 1,438
7,171 5,057 4,199 3,720 3,408 3,186 2,890 2,698 2,563 2,419 2,265 1,683
3,841 2,996 2,605 2,372 2,214 2,099 1,938 1,831 1,752 1,666 1,571 1,000
6,635 4,605 3,782 3,319 3,017 2,802 2,511 2,321 2,185 2,039 1,878 1,000
7.2 Distribución t
Si un valor observado es superior al tabulado, se considera que es significativo (p = 0,05) y muy significativo
(p = 0,01).
Tabla 7.2 Niveles de significación de t (valores absolutos)
gl p =0,05 p =0,01 gl p =0,05 p =0,01
8 GLOSARIO DE SÍMBOLOS
a = Intersección de la línea de regresión de la respuesta con respecto a las dosis o al ln (dosis)
b = Pendiente de la línea de regresión de la respuesta con respecto a las dosis o al ln (dosis)
d = Número de niveles de dosis para cada preparación (excepto el blanco de los ensayos de relación de pen-
dientes)
e = Base de los logaritmos naturales (= 2,71828182845905...)
g = Estadístico usado en el teorema de Fieller: g = C – 1/C
gl= Grados de libertad
h = Número de preparaciones de un ensayo incluyendo la preparación estándar
m = Potencia estimada obtenida como una relación de efectos en los modelos lineales generales
n = Número de replicados de cada tratamiento
n' = Numero de ensayos
p = Probabilidad de que un estadístico dado sea mayor que el valor observado. También se utiliza como el
cociente r/n en análisis de probitos
r = Número de unidades con respuesta por grupo de tratamiento, en ensayos que dependen de respuestas
cuantales
Durante los análisis, las propiedades medidas por cada método son registradas en función de la
temperatura y/o el tiempo, permitiendo, para las cuatro primeras técnicas presentadas, la visualización de los
barridos en gráficos cuya interpretación contribuye en gran medida a la elaboración de las conclusiones.
La información producida por los gráficos antedichos, se resume en la Tabla 2, excepto para el Análisis
Térmico Diferencial, cuyas aplicaciones varían según las características de los aparatos.
Tabla 2.
Información CDB ATG ATM
Calor específico SI
en
Temperatura de fusión SI
polímeros
Calor de fusión, cristalinidad SI
Evolución de la fusión, fracción líquida SI
Análisis de la composición SI SI
Identificación y pureza de cristales (material no
SI SI
polimérico)
Evaporación, desorción, secado, sublimación SI SI
Polimorfismo SI SI
Pseudopolimorfismo SI SI
Calores de transición SI
Transiciones polimórficas SI
Mesofases en cristales líquidos SI
Transiciones vítreas, suavizado SI SI
Estabilidad y descomposición térmica, pirólisis,
SI SI SI
despolimerización
Análisis de productos de descomposición SI
gaseosos liberados(por asociación con otros
equipos)
Coeficiente de expansión lineal SI
Comportamiento viscoelástico SI
Compatibilidad de sustancias entre sí y de en
SI SI
sustancias con el material de empaque polímeros
Polimerización, curado SI SI
Cinética de reacción SI SI
RT02
Dado que los resultados dependen en ciertos Tm T0 x2 1
Hf F
casos de las condiciones bajo las cuales se
realizaron los ensayos, es necesario incluir en en la cual:
cada registro térmico una descripción completa de Tm = temperatura de la muestra en cualquier
las mismas, entre las que se encuentran: marca y punto de equilibrio durante la fusión (en °K)
modelo del aparato, tamaño e identificación de la T0 = temperatura de fusión del componente
muestra, material, capacidad y estado del crisol principal puro (en °K)
empleado para contener la muestra, programa de R = constante de los gases (8,134 J/°K mol)
temperaturas, composición y caudal del gas Hf = calor molar de fusión de la muestra
empleado, presión del sistema y sensibilidad de x2 = fracción molar de la impureza eutéctica
las determinaciones. en la muestra completamente fundida
F = fracción fundida
Calorimetría diferencial de Barrido (CDB)
La técnica se basa en mantener iguales las Esta ecuación permite obtener parámetros de
temperaturas de la muestra y la referencia cuando fusión tales como:
se someten ambas a procesos de calentamiento o Tf , Temperatura de Fusión (Punto de Fusión),
enfriamiento (dinámicos, isotérmicos o ambos cuando F = 1
combinados). El procedimiento se realiza en un T0, surge de la extrapolación de la función
horno provisto de un sensor de alta sensibilidad,
donde se ubican tanto el crisol con la muestra, cuando x2 = 0
como el crisol de referencia, vacío. Dado que las Hf, surge de la integración del área de la
transiciones físicas y las reacciones químicas de endoterma de fusión
las muestras van siempre acompañadas de
absorciones o desprendimientos de energía y permite además calcular la Pureza Eutéctica
adicionales a los mencionados procesos, es Pureza Eutéctica = (1- x2) 100 moles %
función del equipo medir las diferencias de flujo (sobre sustancia tal cual)
de calor necesarias para mantener en todo
momento la misma temperatura en ambos En la fórmula anterior se observa que la
crisoles. disminución del punto de fusión es directamente
proporcional a la fracción molar de la impureza.
Determinación de Pureza (análisis de
Los resultados de estas determinaciones son
impurezas eutécticas) -
suficientemente exactos cuando las impurezas no
La fusión de un compuesto cristalino puro
exceden aproximadamente el 1,5% en moles. Las
debe producirse dentro de un intervalo de
impurezas de síntesis y de degradación, entre
temperatura muy reducido, correspondiente a la
otras, guardan cierta similaridad con el producto
temperatura de fusión T0, pero la presencia de
final y generalmente no presentan problemas de
impurezas eutécticas (aquellas solubles en la fase
solubilidad en el material fundido, siendo, en
líquida formada durante la fusión, pero no en la
estos casos, a través de un comportamiento
fase sólida del componente principal) expande el
eutéctico, globalmente cuantificables por esta
mencionado intervalo y produce un descenso en la
técnica
temperatura de finalización de la fusión (Punto de
Las impurezas no eutécticas no son evaluables
Fusión). Las determinaciones de pureza a través
a través de CDB. Su efecto puede ser incluso el de
de DSC se basan en la relación entre el descenso
aumentar el punto de fusión. Ejemplos de
del Punto de Fusión y la cantidad de impurezas
impurezas no eutécticas son los cristales mixtos y
eutécticas, lo cual tiene su expresión matemática a
las soluciones sólidas.
través de la Ley de Van’t Hoff en su forma
A las sustancias que presentan
simplificada (1), que permite predecir el efecto de
simultáneamente más de un estado polimórfico no
las impurezas sobre Tm:
se les determina la pureza, a menos que se
conviertan completamente en la modificación las sustancias volátiles retenidas, además de
estable durante la fusión. cuantificar los respectivos desprendimientos.
El análisis de pureza no debe aplicarse a Muchas sustancias tienen la capacidad de
muestras que funden presentando formar hidratos y/o solvatos. En los primeros, el
simultáneamente fenómenos de evaporación y/o agua está presente no sólo en su superficie como
descomposición. humedad, sino también en el cristal. Esta
propiedad, conocida como pseudopolimorfismo,
Polimorfismo -
puede conducir a complejos procesos de fusión.
Las técnicas de CDB y de ATD son
A través de este análisis, especialmente
particularmente útiles para detectar y caracterizar
cuando está combinado con CDB, es
el polimorfismo (capacidad de una molécula de
formar distintas estructuras al estado sólido), dado generalmente posible distinguir entre la pérdida de
solvente adsorbido en la superficie, la pérdida de
que registran los cambios de entalpía producidos
solvente ocluido en el cristal y las pérdidas de
por las transformaciones sólido–sólido, las
masa producidas por descomposición de la
fusiones y las recristalizaciones. Esas diferentes
sustancia.
estructuras internas que presenta gran parte de las
moléculas, pueden corresponder a diferentes Las mediciones se llevan a cabo bajo el flujo
Puntos de Fusión, solubilidades, reactividades programado de un gas apropiado. El cálculo de la
pérdida porcentual G, se efectúa a través de la
químicas, estabilidades, etc., lo cual puede a su
fórmula siguiente:
vez impactar en propiedades farmacéuticas tales
como velocidad de disolución y biodisponibilidad. G (% de pérdida) = 100 m/m0
Polímeros - en la cual m es la pérdida de masa y m0 es el
La posibilidad de detectar y evaluar peso inicial de la muestra.
temperaturas de transiciones vítreas, fusiones, Dado que el Análisis Termogravimétrico no
recristalizaciones, calores específicos, grado de identifica específicamente los productos de
polimerización, curado etc., le confiere a esta reacción, pueden analizarse los gases
técnica una particular utilidad en el análisis de desprendidos trabajando en combinación con
polímeros, lo cual se refleja en la utilidad que técnicas tales como la Espectrometría de Masa o
presta en el desarrollo y control de la Industria la Espectroscopia Infrarroja por Transformada de
Farmacéutica. Fourier.
Los equipos constan de una microbalanza
Análisis Térmico Diferencial (ATD) asociada a una fuente de calor programable. Estos
Este análisis mide la diferencia de temperatura difieren, principalmente, en el intervalo de masas
entre la muestra en ensayo y una referencia inerte aceptable para las muestras a analizar y las formas
(crisol de referencia), ambas calentadas bajo las de detección de la temperatura y de la masa de la
mismas condiciones, mientras que la CDB muestra.
permite cuantificar las absorciones y
Análisis Termomecánico (ATM)
desprendimientos de calor. Actualmente, de los
análisis de ATD también pueden obtenerse Este análisis mide los cambios dimensionales
resultados calorimétricos cuantificables que (dilatación o contracción) de una muestra
permiten aplicarlo también, como se ha expuesta o no a la acción de pequeñas cargas, en
mencionado, en áreas en las que presta especial función de la temperatura o el tiempo. Se utiliza
utilidad la CDB, como las de polimorfismo y fundamentalmente en polímeros, por lo cual su
.polímeros. relevancia en la Industria Farmacéutica se basa en
su aplicación a sistemas de liberación poliméricos,
Análisis termogravimétrico (ATG) envases y prótesis médicas. Además de permitir
Este análisis registra el peso de la muestra en la detección de transiciones vítreas, es importante
función de la temperatura o del tiempo de en el cálculo de Coeficientes de expansión y de
calentamiento, mediante el empleo de una Conversión.
termobalanza. Incluye programas de
Microscopía de platina calentable
calentamiento dinámico, de temperatura fija
(proceso isotérmico) o mezclas de ambos. Esta técnica reúne la visualización de la
Suministra más información que la pérdida por muestra a través de un microscopio en paralelo a
secado a una temperatura determinada, ya que la posibilidad de programar el calentamiento y/o
detecta las temperaturas a las que se desprenden el enfriamiento de la misma.
Ventajas que presenta:
visualizar, para su estudio, los procesos
de fusión y cristalización.
detectar, durante el calentamiento o el
enfriamiento, procesos que generan
pequeños o ningún cambio de entalpía
(cambios morfológicos y de color).
contribuir a la interpretación de señales o
picos que aparecen en otras técnicas de
Análisis Térmico asociados con
transiciones térmicas, en particular las
polimórficas.
detección de cristales birrefringentes a
través del uso de luz polarizada, lo cual
es de especial interés en el estudio del
polimorfismo utilizando la técnica de
formación de “films cristalinos”.
30. CAPACIDAD NEUTRALIZANTE DE ÁCIDO
Este ensayo se emplea para la determinación de un volumen total de aproximadamente 70 ml y
la capacidad neutralizante de ácido de aquellos mezclar en el Agitador magnético durante 1 minuto.
medicamentos destinados a controlar los efectos de Comprimidos - Pesar no menos de veinte
la acidez gástrica. [NOTA: todos los ensayos se comprimidos y determinar el peso promedio. Moler
realizan a 37 ± 3 °C]. los comprimidos a polvo fino, mezclar hasta
Calibración del medidor de pH - Calibrar un obtener una mezcla uniforme y transferir una
cantidad exactamente pesada del polvo, equivalente
medidor de pH empleando solución reguladora para
a la dosis mínima indicada en el rótulo, a un vaso de
calibración de biftalato de potasio 0,05 M y
precipitados de 250 ml. Si se desea, se puede
solución reguladora para calibración de tetraoxalato
de potasio 0,05 M según se indica en humedecer el polvo agregando no más de 5 ml de
<250>. Determinación del pH. alcohol (neutralizado a un pH aparente de 3,5) y
mezclar hasta humectar completamente. Agregar
Agitador magnético - Transferir 100 ml de 70 ml de agua y mezclar en el Agitador magnético
agua a un vaso de precipitados de 250 ml que durante 1 minuto.
contiene una barra de agitación magnética de Cápsulas - Pesar exactamente no menos de
40 mm 10 mm, recubierta con perfluorocarbono veinte cápsulas. Retirar completamente el
sólido y que tiene un anillo en su centro. Ajustar la contenido de cada cápsula, con la ayuda de un
velocidad de agitación a 300 ± 30 rpm cuando la hisopo de algodón si fuera necesario. Pesar
barra se centra en el vaso, empleando un tacómetro exactamente las cápsulas vacías y determinar el
óptico apropiado. peso promedio del contenido. Mezclar el polvo
Preparación muestra - extraído de las cápsulas hasta obtener una mezcla
Polvos - Transferir una porción exactamente uniforme y proceder según se indica en
pesada de la muestra, especificada en la monografía Comprimidos, comenzando donde dice "transferir
correspondiente, a un vaso de precipitados de una cantidad exactamente pesada...".
250 ml, agregar 70 ml de agua y mezclar en el Procedimiento - Transferir 30,0 ml de ácido
Agitador magnético durante 1 minuto. clorhídrico 1,0 N (SV) a la Preparación muestra
Sólidos efervescentes - Transferir una cantidad correspondiente mientras se agita continuamente
exactamente pesada, equivalente a la dosis mínima con un Agitador magnético. [NOTA: cuando la
indicada en el rótulo, a un vaso de precipitados de capacidad neutralizante de ácido de la muestra
250 ml, agregar 10 ml de agua y agitar rotando ensayada es mayor de 25 mEq, emplear 60,0 ml de
suavemente el vaso de precipitados hasta que la ácido clorhídrico 1,0 N (SV)]. Agitar durante
efervescencia termine. Agregar otros 10 ml de agua 15 minutos exactamente medidos luego de la
y agitar por rotación. Lavar las paredes del vaso adición del ácido, y en un período que no exceda
con 50 ml de agua y mezclar en el Agitador los 5 minutos adicionales, titular el ácido
magnético durante 1 minuto. clorhídrico en exceso con hidróxido de sodio
Suspensiones y otras formas líquidas - 0,5 N (SV) hasta obtener un pH estable de 3,5
Homogeneizar el contenido del envase y determinar (durante 10 a 15 segundos). Calcular el número de
la densidad. Transferir una cantidad exactamente mEq de ácido consumido y expresar el resultado en
pesada de la mezcla Homogénea, equivalente a la términos de miliequivalentes de ácido consumido
dosis mínima indicada en el rótulo, a un vaso de por gramos de la sustancia ensayada. Cada mililitro
precipitados de 250 ml, agregar agua hasta obtener de ácido clorhídrico 1,0 N equivale a 1 mEq de
ácido consumido.
40. CARBONO ORGÁNICO TOTAL
Este ensayo se emplea para determinar la es de 0,806 mg por litro). El sistema de separación
cantidad de carbono que forma parte de los de dióxido de carbono elimina el agua formada en
compuestos orgánicos presentes en el agua. el proceso de descomposición o separa dióxido de
Normalmente, el carbono orgánico es oxidado a carbono de los productos de descomposición y
dióxido de carbono por combustión, por radiación demás componentes de la muestra. Para detectar
ultravioleta o por la adición de agentes oxidantes. dióxido de carbono se emplea un analizador
La cantidad de dióxido de carbono generada en el infrarrojo de gases y un medidor de conductividad o
proceso de descomposición es medida empleando de resistencia eléctrica, los cuales son capaces de
un método apropiado, como por ej., por medio de convertir la concentración de dióxido de carbono en
un analizador infrarrojo de gases, por medición de una señal eléctrica cuantificable. El procesador de
la conductividad eléctrica o de la resistividad. La datos calcula la concentración de carbono orgánico
cantidad de carbono orgánico presente en el agua total en la muestra, basándose en la señal eléctrica
puede calcularse a partir de la cantidad de dióxido originada por el detector.
de carbono medida por los métodos mencionados
Reactivos y soluciones estándar - [NOTA:
anteriormente.
alternativamente a los reactivos y soluciones
El carbono presente en el agua puede tener dos descriptos a continuación, pueden emplearse
orígenes: carbono orgánico y carbono inorgánico. aquellos suministrados o recomendados por el
La cantidad de carbono orgánico se mide por dos
fabricante del aparato].
métodos: uno se basa en medir la cantidad de
Agua para realizar mediciones - Se emplea
carbono total en el agua, a la cual finalmente se le
para preparar las soluciones estándar, las soluciones
resta la cantidad de carbono inorgánico; el otro se
del reactivo oxidante o para lavar el equipo. La
basa en extraer el carbono inorgánico del agua a cantidad de carbono orgánico, cuando se recolecta
ensayar, quedando finalmente una cantidad dentro del envase de muestra, no debe ser mayor de
remanente de carbono que representa el carbono
0,250 mg por litro.
orgánico.
Solución estándar de biftalato de potasio - La
Aparato - Consta de un inyector para la concentración de esta solución es determinada
muestra, un dispositivo de descomposición, un según las especificaciones del fabricante del
sistema de separación del dióxido de carbono, un aparato. Secar el biftalato de potasio a 105 °C
detector y un procesador de datos o un registrador. durante 4 horas y dejar enfriar en un desecador con
Debe calibrarse según las instrucciones del gel de sílice. Pesar exactamente la cantidad
fabricante y debe ser capaz de medir cantidades de especificada de biftalato de potasio seco y disolver
carbono orgánico por debajo de 0,050 mg por litro. en Agua para realizar mediciones.
El inyector está destinado a permitir la Solución estándar para medir carbono
inyección de una cantidad específica de muestra por inorgánico - La concentración de esta solución es
medio de una microjeringa u otro dispositivo de determinada según las indicaciones del fabricante
muestreo. El dispositivo de descomposición, del aparato. Secar bicarbonato de sodio en un
empleado para la combustión, consta de un tubo de desecador con ácido sulfúrico durante no menos de
combustión y un horno eléctrico para calentar la 18 horas. Secar, separadamente, carbonato de sodio
muestra. Ambos dispositivos se ajustan para operar entre 500 y 600 °C durante 30 minutos y dejarlo
a temperaturas específicas. El dispositivo de enfriar en un desecador con gel de sílice. Pesar
descomposición para radiación ultravioleta o para la exactamente las cantidades especificadas de los
adición de agentes oxidantes puede constar, tanto de compuestos de modo que la relación de su
un compartimiento para la reacción de oxidación y contenido de carbono sea (1:1) y disolver en Agua
una lámpara de rayos ultravioleta, o bien de la para realizar mediciones.
combinación de una lámpara ultravioleta con un Reactivo oxidante - Disolver la cantidad
inyector para el reactivo oxidante o de la especificada de persulfato de potasio u otra
combinación de un sistema de calentamiento con un sustancia que se pueda emplear con el mismo
inyector para el reactivo oxidante. El dispositivo de propósito, en Agua para realizar mediciones, para
descomposición para ambos métodos, cuando se lograr la concentración sugerida para el aparato.
emplea una solución de dodecilbencenosulfonato de Gas para eliminar el carbono inorgánico o gas
sodio como muestra, debe generar no menos de transportador - Si fuera necesario, emplear para
0,450 mg por litro de carbono orgánico (el valor dicho propósito nitrógeno, oxígeno u otros gases.
teórico del carbono orgánico total en esta solución
Acido para eliminar el carbono inorgánico - ensayo establecidos por el fabricante del aparato,
Acido clorhídrico diluido, ácido fosfórico o inyectar en el dispositivo de inyección un volumen
cualquier otro ácido que se pueda emplear para de muestra apropiado en relación con la cantidad de
dicho propósito, en suficiente cantidad de Agua carbono a determinar y descomponer la muestra.
para realizar mediciones, para obtener la Detectar el dióxido de carbono generado por medio
concentración especificada por el fabricante del del detector y calcular la cantidad de carbono
aparato. orgánico, empleando un procesador de datos o un
Procedimiento - Emplear el método, analítico registrador.
apropiado según el aparato. Sumergir el recipiente Para el caso de los aparatos que directamente
para la muestra, antes de ser empleado en una extraen el carbono inorgánico, inyectar primero en
mezcla de peróxido de hidrógeno al 30 % y ácido el dispositivo de inyección un volumen de muestra
nítrico diluido (1:1), lavando finalmente con Agua apropiado en relación con la cantidad de carbono a
para realizar mediciones. Lavar la microjeringa determinar, de acuerdo con los procedimientos del
con una mezcla constituida por una solución de ensayo establecidos por el fabricante del aparato.
hidróxido de sodio (1 en 20) y etanol anhidro (1:1) Extraer de la muestra el carbono inorgánico por
o ácido clorhídrico diluido (1 en 4), lavando adición de Ácido para eliminar el carbono
finalmente con Agua para realizar mediciones. inorgánico en el dispositivo de descomposición y
Calibrar el aparato con la Solución estándar de burbujear con Gas transportador para eliminar el
biftalato de potasio o la recomendada por el carbono inorgánico.
fabricante del aparato, emplear el procedimiento Descomponer el carbono orgánico, detectar el
sugerido por el fabricante. dióxido de carbono generado y calcular la cantidad
Es recomendable que el aparato se instale en la de carbono orgánico, empleando un procesador de
línea de producción del agua a ensayar. De no ser datos o un registrador.
así, llevar a cabo este ensayo en un área libre de
solventes orgánico u otras sustancias que afecten el
resultado del ensayo. Realizar las mediciones
inmediatamente después de la recolección de la
muestra.
MEDICIÓN DEL CARBONO ORGÁNICO
POR SUSTRACCIÓN DEL CARBONO
INORGÁNICO DEL CARBONO TOTAL
De acuerdo con los procedimientos del ensayo
establecidos por el fabricante del aparato, inyectar
en el dispositivo de inyección un volumen de
muestra apropiado en relación con la cantidad de
carbono a determinar y descomponer el carbono
orgánico e inorgánico presentes en la muestra.
Detectar el dióxido de carbono generado y calcular
la cantidad de carbono total, emplear para ello un
procesador de datos o un registrador. Determinar
exclusivamente la cantidad de carbono inorgánico
del mismo modo en que se realizó la determinación
de carbono total, modificando la configuración del
aparato si fuera necesario. La cantidad de carbono
orgánico se obtiene restando la cantidad de carbono
inorgánico de la cantidad de carbono total.
MEDICIÓN DEL CARBONO ORGÁNICO
DESPUÉS DE LA EXTRACCIÓN DEL
CARBONO INORGÁNICO
Extraer el carbono inorgánico de la muestra por
adición de Ácido para eliminar el carbono
inorgánico seguido por el burbujeo del Gas
transportador (como por ej., nitrógeno) si fuera
necesario. De acuerdo con los procedimientos del
50. COLORANTES DE USO FARMACÉUTICO
En el presente capítulo se describen los métodos cromatogramas en una cámara sin revestimiento
de análisis y los requisitos específicos para los interno y saturada durante 20 minutos. Desarrollar
colorantes sintéticos utilizados en la formulación de la placa al menos dos veces.
medicamentos. Además de los colorantes descritos Procedimiento - Preparar una Solución muestra
en este capítulo, pueden emplearse aquellos y una Solución estándar que contengan
colorantes naturales autorizados por el Código aproximadamente 1 mg por ml en metanol. Aplicar
Alimentario Nacional. por separado 10 l de cada una de las soluciones y
Se pueden emplear sustancias agregadas desarrollar los cromatograrnas.
exclusivamente para dar color a las preparaciones
Identificación espectrofotométrica - (ver 470.
oficiales, excepto en aquellas destinadas a la
Espectrofotometría ultravioleta y visible).
administración parenteral u oftálmica. Cabe aclarar
[NOTA: proteger las soluciones de la luz.
que las sustancias incorporadas a la formulación
Realizar rápidamente los procedimientos bajo luz
deben ser apropiadas en todos los otros aspectos
tenue, o empleando materiales de vidrio inactínico.]
(ver Consideraciones generales), como por ej., no
tener influencia adversa sobre la eficacia terapéutica Todos los ensayos se realizan en solución de
de los principios activos y no interferir con los acetato de amonio 0,04 M (3,083 g por litro).
ensayos y valoraciones, entre otros. Es Efectuar un barrido espectral entre 210 y 750 nm
recomendable no agregar colorantes a las con un espectrofotómetro apropiado y empleando
preparaciones indicadas para tratamientos una solución de acetato de amonio 0,04 M como
prolongados. Los medicamentos de uso oral que blanco.
contengan tartrazina o eritrosina deben incluir en su Pérdida por secado <680> - Transferir
prospecto una leyenda con el siguiente texto: "Este aproximadamente 2,0 g de muestra, exactamente
medicamento contiene tartrazina como colorante" o pesados, a un recipiente apropiado. Secar a 135 °C
"Este medicamento contiene eritrosina como hasta peso constante. Calcular la pérdida de peso,
colorante", respectivamente. en porcentaje, respecto del peso de la muestra.
METODOS GENERALES DE ANALISIS Determinación de cloruro - Transferir
Identificación cromatográfica - (ver 100. aproximadamente 1,0 g de colorante, exactamente
Cromatografía). pesado, a un recipiente apropiado. Disolver en
[NOTA: proteger las soluciones de la luz. 100 ml de agua y acidificar con 5 ml de ácido
Proceder rápidamente empleando luz tenue o nítrico 1,5 N. Determinar el contenido de cloruro
materiales de vidrio inactínico.] de la solución por titulación, calcular el punto final
Sistema A - Emplear una fase móvil constituida potenciométricamente empleando un electrodo de
por una mezcla de n-butanol, etanol, agua y plata-cloruro de plata y un electrodo de referencia
amoníaco (50:25:25:10). Sembrar las soluciones de vidrio (ver 780. Volumetría). Cada mililitro de
sobre una placa para cromatografía en capa delgada nitrato de plata 0,1 N (SV) equivale a 0,00585 g de
recubierta con celulosa de 0,1 mm de espesor. cloruro de sodio.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara sin Determinación de sulfato - Transferir
revestimiento interno y sin saturar. aproximadamente 5,0 g del colorante, exactamente
Sistema B - Emplear una fase móvil constituida pesados, a un erlenmeyer de 250 ml y disolver en
por una mezcla de metiletilcetona, acetona, agua y 100 ml de agua calentando en un baño de agua.
amoníaco (140:60:60:1). Sembrar las soluciones Agregar 35 g de cloruro de sodio libre de sulfato,
sobre una placa para cromatografía en capa delgada tapar el erlenmeyer y agitar por rotación a
recubierta con gel de sílice 60 de 0,2 mm de intervalos frecuentes durante 1 hora. Enfriar,
espesor. Desarrollar los cromatogramas en una transferir con solución saturada de cloruro de sodio
cámara revestida internamente con papel de filtro y a un matraz aforado de 250 ml y llevar a volumen
saturada durante 2 horas. con solución saturada de cloruro de sodio. Agitar el
Sistema C - Emplear una fase móvil constituida matraz y filtrar la solución a través de un papel de
por una mezcla de acetonitrilo, alcohol isoamílico, filtro seco. Transferir cuantitativamente 100 ml del
agua, amoníaco y metiletilcetona (50:50:15:10:5). filtrado a un vaso de precipitados de 500 ml, diluir a
Sembrar las soluciones sobre una placa para 300 ml con agua y acidificar con ácido clorhídrico
cromatografía en capa delgada recubierta con gel de agregando 1 ml de exceso. Calentar la solución a
sílice 60 de 0,2 mm de espesor. Desarrollar los ebullición y agregar, gota a gota y con agitación, un
exceso de cloruro de bario 0,125 M. Dejar la indicado por una marcada decoloración. Para otros,
mezcla en reposo durante 4 horas sobre una placa sin embargo, el cambio es tan gradual que se
calefactora o durante toda la noche a temperatura requiere un exceso de tricloruro de titanio (no más
ambiente y luego calentar a 80 °C. Dejar de 0,3 ml de solución 0,1 N) y se debe emplear una
sedimentar el precipitado y filtrar. Lavar el solución patrón conveniente de algún otro
precipitado con agua caliente hasta que los lavados colorante, haciendo una titulación por retorno (en
den negativa la reacción para Cloruro (ver 410. general se emplea el azul de metileno). En otros
Ensayos generales de identificación). Colocar el casos es mejor emplear un indicador que se reduzca
precipitado en un crisol, previamente pesado, y luego que el colorante haya reaccionado con el
someter a calcinación hasta peso constante. tricloruro de titanio. Se obtienen buenos resultados
Realizar una determinación con un blanco y hacer empleando una cantidad conocida de verde brillante
las correcciones necesarias. Expresar el resultado como indicador en la titulación de tartrazina].
como porcentaje en peso de sulfato de sodio. Valoración espectrofotométrica - [NOTA:
Materia insoluble en agua - Transferir proteger las soluciones de la luz. Proceder
aproximadamente 4,0 g de muestra, exactamente rápidamente empleando luz tenue o materiales de
vidrio inactínico]. Preparar la Solución muestra y
pesados a un recipiente apropiado. Disolver con
una Solución estándar en acetato de amonio
agitación en 200 ml de agua caliente (entre 80 y
0,04 M, de modo que la concentración sea la
90 °C) y dejar enfriar a temperatura ambiente.
indicada para cada colorante. Determinar la
Filtrar a través de un filtro de vidrio sinterizado de
porosidad fina; previamente pesado, lavar con agua absorbancia de ambas soluciones a la longitud de
fría hasta que las aguas de lavado sean incoloras. onda especificada, con un espectrofotómetro
apropiado, empleando una solución de acetato de
Secar a 135 °C hasta peso constante. Calcular el
amonio 0,04 M como blanco. El porcentaje de
porcentaje de materia insoluble en agua.
colorante total calculado sobre la muestra no debe
Extracto etéreo - Emplear un aparato de ser inferior al porcentaje especificado para cada
extracción tipo soxhlet. Colocar un pequeño trozo colorante.
de alambre de cobre suspendido en el refrigerante y
aproximadamente 0,5 g del mismo alambre en el ESPECIFICACIONES DE COLORANTES
balón. Transferir aproximadamente 2,0 g del AMARANTO (CI 16185)
colorante, exactamente pesados, al aparato de
C20H11N2Na3O10S3 PM: 604,49
extracción y extraer con 150 ml de éter etílico o éter
Definición - El Amaranto es esencialmente la
isopropílico durante 5 horas. Concentrar el extracto
sal trisódica del ácido 1-(4-sulfo-1,1-naftilazo)-2 –
sobre un baño de vapor hasta aproximadamente
naftol-3,6-disulfónico y colorantes subsidiarios,
5 ml. Transferir a un cristalizador previamente junto con cloruro de sodio y/o sulfato de sodio
pesado, evaporar en un baño de agua y luego secar como principales componentes incoloros.
a 105 °C hasta peso constante. El aumento de peso
expresado como porcentaje con respecto a la Caracteres generales - Polvo homogéneo o
muestra tomada corresponde al extracto etéreo. gránulos de color pardo rojizo a pardo rojizo
oscuro. Expuesto a la luz ultravioleta no presenta
Contenido de colorante - fluorescencia apreciable. Soluble en agua.
Titulación con tricloruro de titanio -
METODO I - Preparar una solución al 1,0 % de Identificación cromatogrática - (ver
la muestra en agua y colocar un volumen Identificación cromatográfica en Métodos
equivalente a 20 ml de tricloruro de titanio en un generales de análisis).
erlenmeyer de boca ancha de 500 ml. Agregar 15 g Sistema A: Rf aproximadamente 0,39.
de citrato de sodio y agua hasta obtener un volumen Sistema B: Rf aproximadanente 0,24.
entre 150 y 200 ml. Calentar a ebullición y titular Identificación espectrofotométrica - (ver
con tricloruro de titanio 0,1 N (SV). Identificación espectrofotométrica en Métodos
METODO II - Preparar una solución al 0,5 % generales de análisis). Una solución de 0,02 mg
de la muestra en alcohol. Proceder según se indica por ml en el visible presenta un máximo a 522 nm y
en Método I pero sustituyendo el agua por alcohol en el ultravioleta presenta máximos a 218 y 331 nm,
al 50 %. un mínimo a 311 nm y otro mínimo entre 359 y
METODO III - Proceder según se indica en 389 nm.
Método I pero sustituyendo el citrato de sodio por
15 g de tartrato ácido de sodio. Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
[NOTA: para muchos colorantes el punto final suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
de la titulación con tricloruro de titanio está
(calculados como sales sódicas) no es mayor de luz ultravioleta presenta fluorescencia amarillo
15 %. anaranjada viva. Moderadamente soluble en agua.
Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %. Identificación cromatográfica - (ver
Identificación cromatográfica en Métodos
Extracto etéreo - No más de 0,2 %. generales de análisis).
Plomo <600> - No más de 10 ppm. Sistema A: Rf aproximadamente 0,44.
Sistema B: Rf aproximadamente 0,37.
Arsénico <540> - No más de 3 ppm.
Identificación espectrofotométrica - (ver
Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las Identificación espectrofotométrica en Métodos
soluciones de la luz. Proceder rápidamente generales de análisis). Una solución de 0,015 mg
empleando luz tenue o materiales de vidrio por ml en el visible presenta un máximo a 414 nm y
inactínico.] en el ultravioleta presenta máximos a 225, 236
Emplear una fase móvil constituida por una (muy pequeño) y 289 nm y mínimos a 233 (muy
mezcla de metiletilcetona, acetona y agua pequeño), 269 y 336 nm.
(54:23:23).
Preparar una solución muestra que contenga Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml, correspondientes al 0,25; (calculados como sales sódicas) no es mayor de
0,5 y 1 % respectivamente, empleando en todos los 30 %.
casos agua como solvente. Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %
Aplicar por separado 3 l de cada una de las
Extracto etéreo - No más de 0,2 %.
soluciones sobre una placa para cromatografía en
capa delgada recubierta con celulosa para Plomo <600> - No más de 20 ppm.
cromatografía de aproximadamente 0,1 mm de Arsénico <540> - No más de 2 ppm.
espesor y desarrollar los cromatogramas en una
cámara revestida internamente con papel de filtro y Contenido de colorante total –
saturada durante 2 horas. Valoración espectrofotométrica -
Realizar la estimación visual de las manchas Concentración: 0,015 mg por ml. Determinar la
secundarias de la muestra contra las manchas de las absorbancia a 414 nm. Contiene no menos de
soluciones diluidas. Ninguna de las manchas 70,0 %.
secundarias debe ser mayor a 1 % y la suma de AMARILLO OCASO FCF (CI 15985)
todas ellas no debe ser mayor a 3 %.
C16H10O7N2S2Na2 PM: 452,37
Contenido de colorante total -
Titulación con TiCI3 - Método I. Cada mililitro Definición - El Amarillo ocaso es
de TiCl3 0,1 N equivale a 0,01511 g de esencialmente la sal disódica del ácido
C20H11N2O10S3Na3. Contiene no menos de 85,0 %. 1-p-sulfenilazo-2-naftol-6-sulfónico y colorantes
Valoración espectrofotométrica - subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de
Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la sodio como principales componentes incoloros.
absorbancia a la longitud de onda de máxima Caracteres generales - Polvo homogéneo o
absorción, aproximadamente a 522 nm. Contiene gránulos de color anaranjado rojizo. Expuesto a la
no menos de 85,0 %. luz ultravioleta no presenta fluorescencia
apreciable. Soluble en agua.
AMARILLO DE QUINOLINA(CI 47005)
Identificación cromatográfica - (ver
C18H9NO8S2Na2 (componente principal) Identificación cromatográfica en Métodos
PM: 477,4 (derivado disulfónico) y 375,3 generales de análisis).
(derivado monosulfónico) Sistema A: Rf aproximadamente 0,61.
Definición - El Amarillo de quinolina es Sistema B: Rf aproximadamente 0,37.
esencialmente una mezcla de sales sódicas de Identificación espectrofotométrica - (ver
disulfonatos (principalmente), monosulfonatos y Identificación espectrofotométrica en Métodos
trisulfonatos de quinoftalona y quinolilinedandiona, generales de análisis). Una solución de 0,02 mg
junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como por ml en el visible presenta un máximo a 482 nm y
principales componentes incoloros. en el ultravioleta presenta máximos a 235 y 314 nm
Caracteres generales - Polvo homogéneo o y mínimos a 288 y 347 nm.
gránulos de color amarillo verdoso. Expuesto a la
Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La ultravioleta presenta color azul oscuro. Soluble en
suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato agua.
(calculados como sales sódicas) no es mayor de Identificación cromatográfica - (ver
15 %. Identificación cromatográfica en Métodos
generales de análisis).
Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %.
Sistema A: Rf aproximadamente 0,72.
Extracto etéreo - No más de 0,2 % Sistema B: Rf aproximadamente 0,31.
Plomo <600> - No más de 20 ppm. Identificación espectrofotométrica - (ver
Arsénico <540> - No más de 2 ppm. Identificación espectrofotométrica en Métodos
generales de análisis). Una solución de 0,006 mg
Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las por ml en el visible presenta máximos a 409 y
soluciones de la luz. Proceder rápidamente 630 nm y un mínimo a 456 nm; y en el ultravioleta
empleando luz tenue o materiales de vidrio presenta un máximo 308 nm y mínimos a 270 y
inactínico]. 348 nm.
Emplear una fase móvil constituida por una
mezcla de alcohol isoamílico, acetona, agua y Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
amoníaco (65:50:20:5). suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
Preparar una solución muestra que contenga (calculados como sales sódicas) no es mayor de
20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de 15 %.
0,1; 0,2 y 0,5 rng por ml correspondientes al 0,5; 1 Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %.
y 2,5 % respectivamente, empleando en todos los
Extracto etéreo - No más de 0,2 %.
casos agua como solvente.
Aplicar por separado 3 l de cada una de las Plomo <600> - No más de 20 ppm.
soluciones sobre una placa para cromatografía en Arsénico <540> - No más de 2 ppm.
capa delgada recubierta con gel de sílice 60 para
cromatografía de 0,2 mm de espesor. Desarrollar Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las
los cromatogramas en una cámara sin saturación. soluciones de la luz. Proceder rápidamente
Comparar visualmente las manchas secundarias empleando luz tenue o materiales de vidrio
de la muestra con las manchas de las soluciones inactínico].
diluidas, ninguna de las manchas secundarias debe Emplear una fase móvil constituida por una
ser mayor a 2 % y la suma de todas ellas no debe mezcla de acetonitrilo, alcohol isoamílico,
ser mayor a 5 %. metiletilcetona, amoníaco y agua (50:50:15:5:5).
Preparar una solución muestra que contenga
Contenido de colorante total - 20 mg por ml y una solución diluida que
Titulación con TíCl3 - Método I. Cada mililitro corresponda al 6 % de la muestra (1,2 mg por ml)
de TiCI3 0,1 N equivale a 0,01132 g de que será empleada como estándar, empleando en
C16H10N2O7S2Na2. Contiene no menos de 85,0 %. ambos casos metanol como solvente.
Valoración espectrofotométrica -
Aplicar en banda 50 l de la solución muestra
Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la
sobre una placa para cromatografía en capa delgada
absorbancia a la longitud de onda de máxima
recubierta con gel sílice 60 para cromatografía de
absorción, aproximadamente a 482 nm. Contiene 0,2 mm de espesor, reservando en la placa el
no menos de 85,0 %. espacio correspondiente a dos siembras para una
AZUL BRILLANTE FCF (CI 42090) posterior aplicación del estándar y realización del
blanco. Desarrollar los cromatogramas en una
cámara sin revestimiento interno y saturada durante
C37H34N2Na2O9S3 PM: 792,84 20 minutos. Retirar la placa de la cámara, secarla al
PM:792,84
reparo de la luz y repetir el desarrollo empleando la
Definición - El Azul brillante FCF es misma fase móvil.
esencialmente la Sal disódica de -[4-(N-etil-3- Secar la placa al reparo de la luz y aplicar en
sulfonatobencilamino)-ciclohexa-2,5-dienililideno]- banda 50 l de la solución estándar.
tolueno-2-sulfonato y sus isómeros y colorantes En tres erlenmeyer de 50 ml con tapón de vidrio
subsidiarios, junto con cloruro y/o sulfato de sodio esmerilado colocar el raspado de las manchas
como principales componentes incoloros. secundarias de la muestra (excluyendo la mancha
Caracteres generales - Polvo homogéneo o correspondiente al origen de siembra y la mancha
gránulos de color violeta oscuro. Expuesto a la luz inmediata superior a la principal), el raspado del
estándar y un blanco constituido por el raspado de
un sector limpio del cromatograma. Las tres áreas 638 nm y un mínimo a 455 nm; y en el ultravioleta
raspadas deben ser aproximadamente iguales. presenta máximos a 232 y 311 nm, un mínimo entre
A cada erlenmeyer agregar 6 ml de una mezcla 254 y 269 nm y otro a 351 nm.
de acetona y agua (1:1) y agitar durante 2 ó
Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
3 minutos, luego agregar 18 ml de una solución
suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
bicarbonato de sodio 0,05 M y volver a agitar.
(calculados como sales sódicas) no es mayor de
Recolectar cada solución con una jeringa de
15 %.
50 ml, realizar una filtración por medio de un
cabezal de filtración con membrana de celulosa Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %.
regenerada de 13 mm de diámetro y 0,45 m de Extracto etéreo - No más de 0,2 %.
porosidad.
Determinar la absorbancia de la solución Plomo <600> - No más de 20 ppm
muestra y la solución estándar a 630 nm, Arsénico <540> - No más de 2 ppm.
empleando la solución blanco como referencia.
Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las
Calcular el porcentaje total de colorantes
soluciones de la luz. Proceder rápidamente
subsidiarios por la fórmula siguiente:
empleando luz tenue o materiales de vidrio
6 AM / AE inactínico].
Emplear una fase móvil constituida por una
en la cual AM es la absorbancia de la solución mezcla de n-butanol, agua, etanol y amoníaco
muestra y AE la absorbancia de la solución estándar. (600:264:135:6).
El porcentaje total de colorantes subsidiarios no Preparar una solución muestra que contenga
debe ser mayor a 6 %. 20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de
Contenido de colorante total - 0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml correspondientes al 0,25;
Titulación con TiCI3 - Método III. Cada 0,5 y 1 % respectivamente, empleando en todos los
mililitro de TiCl3 0,1 N equivale a 0,03964 g de casos agua como solvente.
C37H34N2O9S3Na2. Contiene no menos de 85,0 %. Aplicar por separado 3 l de cada una de las
Valoración espectrofotométrica - soluciones sobre una placa para cromatografía en
Concentración: 0,006 mg por ml. Determinar la capa delgada recubierta con celulosa para
absorbancia a la longitud de onda de máxima cromatografía de 0,1 mm de espesor y desarrollar
absorción, aproximadamente a 630 nm. Contiene los cromatogramas en una cámara revestida
no menos de 85,0 %. internamente con papel de filtro y saturada durante
2 horas.
AZUL PATENTE V (CI 42051) Realizar la estimación visual de las manchas
C54H62N4O14S4Ca PM: 1.159,4 PM:secundarias
1159,4 de la muestra contra las manchas de las
soluciones diluidas, sin tener en cuenta para tal fin
Definición - Es esencialmente la sal cálcica del la primera mancha de Rf inferior a la mancha
ácido disulfónico del anhídrido principal. Ninguna de las manchas secundarias
m-hidroxitetracetildiamino trifenil-carbinol y debe ser mayor a 0,5 % y la suma de todas ellas no
colorantes subsidiarios, junto con cloruro de sodio debe ser mayor a 2 %.
y/o sulfato de sodio y/o cloruro de calcio y/o sulfato Contenido de colorante total -
de calcio. Titulación con TiCl3 - Método III. Cada
Caracteres generales - Polvo homogéneo o mililitro de TiCI3 0,1 N equivale a 0,02898 g de
gránulos color azul violeta, oscuro. Expuesto a la C54H62N4O14S4Ca. Contiene no menos de 85,0 %.
luz ultravioleta no presenta fluorescencia Valoración espectrofotométrica -
apreciable. Poco soluble en agua. Concentración: 0,005 mg por ml. Determinar la
absorbancia a la longitud de onda de máxima
Identificación cromatográfica - (ver
absorción, aproximadamente a 638 nm. Contiene
Identificación cromatográfica en Métodos
no menos de 85,0 %.
generales de análisis).
Sistema A: Rf aproximadamente 0,67. ERITROSINA (CI 45430)
Sistema B: Rf aproximadamente 0,39.
C20H6I4O5Na2 PM:879,87
Identificación espectrofotométrica - (ver
Identificación espectrofotométrica en Métodos Definición - La Eritrosina es esencialmente la
generales de análisis). Una solución de 0,005 mg sal disódica del ácido 2-(2,4,5,7-tetraiodo-3-oxo-
por ml en el visible presenta máximos a 412 y 6-oxoxanten-9-il) benzoico y colorantes
subsidiarios, junto con cloruro de sodio y/o sulfato solución diluida de permanganato de potasio hasta
de sodio como principales componentes incoloros. que la solución se torne rosada]. Filtrar
Caracteres generales - Polvo homogéneo o rápidamente con succión a través de una placa de
vidrio sinterizado. Lavar la placa con agua.
gránulos de color rojo sangre. Expuesto a la luz
Agregar solución de nitrito de sodio, gota a gota y
ultravioleta no presenta fluorescencia apreciable.
con agitación, hasta decoloración total. Agregar
Soluble en agua y en alcohol.
5 ml de solución de ácido sulfámico al 10 % y lavar
Identificación cromatográfica - (ver las paredes del frasco. Enfriar a temperatura
Identificación cromatográfica en Métodos ambiente. Agregar 2 ó 3 g de ioduro de potasio y
generales de análisis). titular el iodo liberado con tiosulfato de sodio
Sistema A: Rf aproximadamente 0,79. 0,1 N (SV), empleando almidón (SR) como
Sistema B: Rf aproximadamente 0,54. indicador. Realizar una determinación con un
Identificación espectrofotométrica - (ver, blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada
Identificación espectrofotométrica en Métodos mililitro de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a
generales de análisis). Una solución de 0,009 mg 0,002115 g de iodo. Contiene entre 56,8 y 58,5 %.
por ml en el visible presenta un máximo a 527 nm y loduro de sodio - Transferir 5 g de muestra a
en el ultravioleta presenta máximos a 262 y 308 nm, un vaso de precipitados de 400 ml y agregar 150 ml
un mínimo entre 338 y 383 nm y mínimos a 238 y de agua. Calentar a temperatura próxima a la
289 nm. ebullición y agregar 5 ml de ácido fosfórico
Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La concentrado. Digerir hasta que el precipitado
suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato coagule bien, enfriar a temperatura ambiente,
(calculados como sales sódicas) no es mayor de transferir a un matraz aforado de 250 ml y llevar a
15 %. volumen. Mezclar vigorosamente y filtrar.
Descartar los primeros ml del filtrado. Transferir
Materia insoluble en agua - No más de 0,2%. una alícuota de 100 ml del filtrado a un vaso de
Extracto etéreo - No más de 0,2 %. precipitados de 500 ml, agregar 2,5 ml de solución
de hidróxido de sodio al 30 % y 15 ml de solución
Plomo <600> - No más de 20 ppm. de permanganato de potasio al 7 %. Proceder según
Arsénico <540> - No más de 2 ppm. se indica en Iodo comenzando donde dice "calentar
a ebullición durante 5 minutos... ". Cada mililitro
lodo - Transferir una cantidad de muestra,
de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 0,002498 g
exactamente pesada, que contenga el equivalente a
de ioduro de sodio. Contiene no más de 0,4 %.
50 mg de iodo, a un vaso de precipitados de 500 ml.
Disolver en 2 ml de solución de hidróxido de sodio Contenido de colorante total -
al 30 %, diluir a 100 ml, agregar perlas de vidrio y Valoración espectrofotométrica -
15 ml de solución de permanganato de potasio al Concentración: 0,009 mg por ml. Determinar la
7 %. Cubrir con un vidrio de reloj y calentar a absorbancia a la longitud de onda de máxima
ebullición durante 5 minutos. Cuando cese la absorción, aproximadamente a 527 nm. Contiene
ebullición, agregar cuidadosamente 10 ml de ácido no menos de 85,0 %.
nítrico y hervir durante 5 minutos más. Lavar el INDIGO CARMIN (CI 73015)
vidrio de reloj y las paredes del vaso (puede haber
exceso de permanganato de potasio). Agregar C16H8N2Na2O8S2 PM: 466,36
rápidamente 5 ml de nitrito de sodio al 10 % con
agitación. Agregar nitrito de sodio, gota a gota, Definición - Es esencialmente una mezcla de la
hasta que la suspensión se aclare, dejando que cada sal disódica del ácido 3,3’-dioxo-
gota reaccione antes de agregar la siguiente. Si 2,2’-bisindolilideno-5,5’-disulfónico y la sal
cuando la solución se decolora se observan disódica del ácido 3,3’-dioxo-2,2’-bisindolilideno-
partículas de dióxido de manganeso, no intentar 5,7’-disulfónico y colorantes subsidiarios, junto con
destruirlas sino agregar inmediatamente solución de cloruro de sodio y/o sulfato de sodio como
permanganato de potasio al 1 % en porciones de principales componentes incoloros.
1 ml hasta que la solución se torne rosada. [NOTA: Caracteres generales - Polvo homogéneo o
si se requieren más de 2 ml o si aparece una gránulos de color azul marino fuerte. Expuesto a la
coloración marrón, agregar primero 10 ml de luz ultravioleta no presenta fluorescencia
solución diluida de permanganato de potasio y apreciable. Poco soluble en agua.
calentar a ebullición. Repetir la adición de nitrito
de sodio, gota a gota, y agregar nuevamente
Identificación cromatográfica - (ver 573 nm y un mínimo a 460 nm; y en el ultravioleta
Identificación cromatográica en Métodos generales presenta un mínimo a 373 nm.
de análisis). Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
Sistema A: Rf aproximadamente 0,38.
suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
Sistema B: Rf aproximadamente 0,32.
(calculados como sales sódicas) no es mayor de
Identificación espectrofotométrica - (ver 20 %.
Identificación espectrofotométrica en Métodos Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %.
generales de análisis). Una solución de 0,02 mg
por ml en el visible presenta un máximo a 611 nm y Extracto etéreo - No más de 0,2 %.
un mínimo entre 401 y 478 nm; y en el ultravioleta Plomo <600> - No más de 20 ppm.
presenta máximos a 252 y 287 nm y mínimos a 231
y 266 nm. Arsénico <540> - No más de 2 ppm.
Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La Contenido de colorante total -
suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato Titulación con. TiCl3 - Método III. Cada
(calculados como sales sódicas) no es mayor de mililitro de TiCI3 0,1 N equivale a 0,01086 g de
15 %. C28H17N5O14S4Na4. Contiene no menos de 80,0 %.
Valoración. espectrofotométrica -
Materia insoluble en agua - No más de 0,4 %. Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la
Extracto etéreo - No más de 0,2 %. absorbancia a la longitud de onda de máxima
absorción, aproximadamente a 573 nm. Contiene
Plomo <600> - No más de 10 ppm.
no menos de 80,0 %.
Arsénico <540> - No más de 3 ppm. PUNZÓ 4R (CI 16225)
Contenido de colorante total -
Titulación con TiCl3 - Método III. Cada C20H11N2O10S3Na3 PM:604,5
mililitro de TiCl3 0,1 N equivale a 0,02332 g de Definición - El punzó 4R es esencialmente la
C16H8N2O8S2Na2. Contiene no menos de 85,0 %. sal trisódica del ácido 2-hidroxi-1-(4-sulfonato-1-
Valoración espectrofotométrica - naftilazo)-naftaleno-6,8-disulfónico y colorantes
Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de
absorbancia a la longitud de onda de máxima sodio como principales componentes incoloros.
absorción, aproximadamente a 611 nm. Contiene
no menos de 85,0 %. Caracteres generales - Polvo homogéneo o
gránulos de color rojo escarlata vivo. Expuesto a la
NEGRO BRILLANTE BN (CI 28440) luz ultravioleta presenta fluorescencia escarlata.
C28H17N5O14S4Na4 PM:867,7 Moderadamente soluble en agua.
Identificación cromatográfica - (ver
Definición - Es esencialmente la sal tetrasódica Identificación cromatográfica en Métodos
del ácido 4-acetamido-5-hidroxi-6-[7-sulfonato-4-
generales de análisis).
(4- sulfonatofenilazo)-1-naftilazo]-naftaleno-1,7-
Sistema A: Rf aproximadamente 0,50.
disul-fónico y colorantes subsidiarios, junto con Sistema B: Rf aproximadamente 0,30.
cloruro de sodio y sulfato de sodio como principales
componentes incoloros. Identificación espectrofotométrica - (ver
Identificación espectrofotométrica en Métodos
Caracteres generales - Polvo homogéneo o
generales de análisis). Una solución de 0,02 mg
gránulos de color negro grisáceo. Expuesto a la luz por ml en el visible presenta un máximo a 507 nm y
ultravioleta no presenta fluorescencia. Poco soluble en el ultravioleta presenta máximos a 217, 246 y
en agua.
333 nm y mínimos a 238, 302 y 374 nm.
Identificación cromatogrática - (ver Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
Identificación cromatográfica en Métodos suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
generales de análisis).
(calculados como sales sódicas) no es mayor de
Sistema A: Rf aproximadamente 0,24.
20 %.
Sistema B: Rf aproximadamente 0,28.
Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %.
Identificación espectrofotométrica - (ver
Identificación espectrofotométrica en Métodos Extracto etéreo - No más de 0,2 %.
generales de análisis). Una solución de 0,02 mg Plomo <600> - No más de 20 ppm.
por ml en el visible presenta máximos a 414 y
Arsénico <540> - No más de 2 ppm. 0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml, correspondientes al 0,25;
Contenido de colorante total - 0,5 y 1 % respectivamente, empleando en todos los
Titulación con TiCl3 - Método I. Cada mililitro casos agua como solvente.
de TiCl3 0,1 N equivale a 0,02511 g de Aplicar por separado 3 l de cada una de las
C20H11N2O10S3Na3. Contiene no menos de 80 %. soluciones sobre una placa para cromatografía en
Valoración espectrofotométrica - capa delgada recubierta con gel de sílice 60 para
Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la cromatografia de 0,2 mm de espesor y desarrollar
absorbancia a la longitud de onda de máxima los cromatogramas en una cámara sin saturación.
absorción aproximadamente a 507 nm. Contiene no Realizar la estimación visual de las manchas
menos de 80,0 %. secundarias de la muestra contra las manchas de las
soluciones diluidas. Ninguna de las manchas
ROJO ALLURA AC (CI 16035) secundarias debe ser mayor a 1 % y la suma de
todas ellas no debe ser mayor a 3 %.
C18H14N2O8S2Na2 PM:496,42
Contenido de colorante total -
Definición - El Rojo Allura AC es Titulación con TiCI3 - Método I. Cada mililitro
esencialmente la sal disódica del ácido de TiCI3 0,1 N equivale a 0,02511 g de
2-hidroxi-1-(2-metoxi-5-metil-4-sulfonato-fenilazo) C18H14N2O8S2Na2. Contiene no menos de 85,0 %.
naftaleno-6-sulfónico y colorantes subsidiarios, Valoración espectrofotométrica -
junto con cloruro de sodio y sulfato de sodio como Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la
principales componentes incoloros. absorbancia a la longitud de onda de máxima
Caracteres generales - Polvo homogéneo o absorción, aproximadamente a 499 nm. Contiene
gránulos de color rojo oscuro. Soluble en agua, no menos de 85,0 %.
insoluble en alcohol. TARTRAZINA (CI 19140)
ldentificación cromatogrática - (ver C16H9N4Na3O9S2 PM:534,4
Identificación cromatográfica en Métodos
generales de análisis). Definición - La Tartrazina es esencialmente la
Sistema A: Rf aproximadamente 0,62. sal trisódica del ácido 5-hidroxi-1-
Sistema B: Rf aproximadamente 0,36. (4-sulfonatofenil)-(4-sulfofenilazo)-pirazol-
3-carboxílico y colorantes subsidiarios, junto con
Identificación espectrofotométrica - (ver cloruro de sodio y/o sulfato de sodio como
Identificación espectrofotométrica en Métodos principales componentes incoloros.
generales de análisis). Una solución de 0,02 mg
por ml en el visible presenta un máximo a 499 nm y Caracteres generales - Polvo homogéneo o
en el ultravioleta presenta máximos a 214, 225 y gránulos de color anaranjado. Expuesto a la luz
315 nm y mínimos a 231, 262 y 351 nm. ultravioleta presenta fluorescencia anaranjada
intensa. Soluble en agua, moderadamente soluble
Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La en alcohol.
suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
(calculados como sales sódicas) no es mayor de Identificación cromatogrática - (ver
15 %. Identificación cromatográfica en Métodos
generales de análisis).
Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %. Sistema A: Rf aproximadamente 0,29.
Extracto etéreo - No más de 0,2 %. Sistema B: Rf aproximadamente 0,24.
Plomo <600> - No más de 10 ppm. Identificación espectrofotométrica - (ver
Identificación espectrofotométrica en Métodos
Arsénico <540> - No más de 3 ppm. generales de análisis). Una solución de 0,02 mg
Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las por ml en el visible presenta un máximo a 426 nm y
soluciones de la luz. Proceder rápidamente en el ultravioleta presenta un máximo a 258 nm y
empleando luz tenue o materiales de vidrio mínimos a 224 y 313 nm.
inactínico.] Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
Emplear una fase móvil constituida por una suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
mezcla de alcohol isoamílico, 1,4-dioxano, (calculados como sales sódicas) no es mayor de
acetonitrilo, acetato de etilo, agua y amoníaco 15 %.
(10:10:10:10:10:2).
Preparar una solución muestra que contenga Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %.
20 mg por ml y soluciones diluidas de la muestra de
Extracto etéreo - No más de 0,2 %. Valoración espectrofotométrica -
Plomo <600> - No más de 20 ppm. Concentración: 0,007 mg por ml. Determinar la
absorbancia a la longitud de onda de máxima
Arsénico <540> - No más de 2 ppm. absorción, aproximadamente a 635 nm. Contiene
Contenido de colorante total - no menos de 80,0 %.
Tilulación con TiCl3 - Método III. Cada VERDE SÓLIDO FCF (CI 42053)
mililitro de TiCI3 0,1 N equivale a 0,01336 g de
C16H9N4Na3O9S2. Contiene no menos de 85,0 %. C37H34N2Na2O10S3 PM:808,86
Valoración espectrofotométrica -
Definición - El Verde sólido FCF es
Concentración: 0,02 mg por ml. Determinar la
esencialmente la sal disódica del ácido N-etil-N-[4-
absorbancia a la longitud de onda de máxima
[[4-[etil-[(3-sulfofenil)metil]amino]fenil](4-hidroxi-
absorción, aproximadamente a 426 nm. Contiene
2-sulfofenil)metileno]-2,5-ciclohexadien-l-iliden]-
no menos de 85,0 %.
3-sulfobenzometanamina, isómeros y colorantes
VERDE S (CI 44090) subsidiarios, junto con cloruro de sodio y sulfato de
sodio como principales componentes incoloros.
C27H25N2O7S2Na PM:576,63
Caracteres generales - Polvo homogéneo o
Definición - El Verde S es esencialmente la sal gránulos de color verde azulado. Expuesto a la luz
sódica del ácido 5-[4-dimetilamino- -[4- ultravioleta presenta fluorescencia color verde.
dimetiliminiocivlohexa-2,5-dienililideno)bencil]-6- Soluble en agua; moderadamente soluble en etanol.
hidroxi-7-sulfonaftaleno-2-sulfónico y colorantes
Identificación cromatográfca - (ver
subsidiarios, junto con cloruro de sodio y de sulfato
Identificación cromatográfica en Métodos
de sodio como principales componentes incoloros.
generales de análisis).
Caracteres generales - Polvo homogéneo o Sistema A: Rf aproximadamente 0,61.
gránulos de color marrón oscuro. Expuesto a la luz Sistema C: Rf aproximadamente 0,02 (aplicar
ultravioleta presenta color pardo violáceo oscuro. 50 l en forma de banda).
Soluble en agua; poco soluble en etanol.
Identificación espectrofotométrica - (ver
ldentifcación cromatográfica - (ver Identificación espectrofotométrica en Métodos
Identificación cromatográfica en Métodos generales de análisis). Una solución de 0,006 mg
generales de análisis). por ml en el visible presenta máximos a 420 y
Sistema A: Rf aproximadamente 0,61. 625 nm y un mínimo a 485 nm; y en el ultravioleta
Sistema C: Rf aproximadamente 0,07 (aplicar presenta un máximo a 302 nm, un mínimo entre 247
50 l en forma de banda). y 269 nm y otro a 356 nm.
Identificación espectrofotométrica - (ver Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La
Identificación espectrofotométrica en Métodos suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato
generales de análisis). Una solución de 0,007 mg (calculados como sales sódicas) no es mayor de
por ml en el visible presenta un máximo a 635 nm y 15 %.
mínimos a 357 y 498 nm; y en el ultravioleta
Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %.
presenta máximos a 239 y 304 nm y un mínimo a
272 nm. Extracto etéreo - No más, de 0,4 %.
Pérdida por secado, cloruro y sulfato - La Plomo <600> - No más de 20 ppm.
suma de Pérdida por secado, Cloruro y Sulfato Arsénico <540> - No más de 2 ppm.
(calculados como sales sódicas) no es mayor de
20 %. Colorantes subsidiarios - [NOTA: proteger las
soluciones de la luz. Proceder rápidamente
Materia insoluble en agua - No más de 0,2 %. empleando luz tenue o materiales de vidrio
Extracto etéreo - No más de 0,2 %. inactínico].
Emplear una fase móvil constituida por una
Plomo <600> - No más de 20 ppm.
mezcla de acetonitrilo, alcohol isoamílico,
Arsénico <540> - No más de 2 ppm. metiletilcetona, agua y amoníaco (50:50:15:10:5).
Valoración del colorante total - Preparar una solución muestra que contenga
Titulación con -TiCI3 - Método III. Cada 20 mg por ml y una solución diluida que
mililitro de TiCl3 0,1 N equivale a 0,02883 g de corresponda al 6 % de la muestra (1,2 mg por ml)
C27H25N2O7S2Na. Contiene no menos de 80,0 %.
que será empleada como estándar, empleando en
ambos casos metanol como solvente.
Aplicar en banda 50 l de la solución muestra
sobre una placa para cromatografía en capa delgada
recubierta con gel de sílice 60 para cromatografía
de 0,2 mm de espesor, reservando en la placa el
espacio correspondiente a dos siembras para una
posterior aplicación del estándar y realización del
blanco. Desarrollar los cromatogramas en una
cámara sin revestimiento interno y saturada durante
20 minutos. Retirar la placa de la cámara, secarla al
reparo de la luz y repetir el desarrollo empleando la
misma fase móvil.
Dejar secar la placa al reparo de la luz y aplicar
en banda 50 l de la solución estándar.
En tres erlenmeyer de 50 ml con tapón de vidrio
esmerilado, colocar el raspado de las manchas
secundarias de la muestra (excluyendo la mancha
correspondiente al origen de siembra y la mancha
inmediata superior a la principal), el raspado del
estándar y un blanco constituido por el raspado de
un sector limpio del cromatograma. Las tres áreas
raspadas deben ser aproximadamente iguales.
A cada erlenmeyer agregar 6 ml de una mezcla
de acetona y agua (1:1) y agitar durante 2 ó
3 minutos. Luego agregar 18 ml de una solución de
bicarbonato de sodio 0,05 M y volver agitar.
Recolectar cada solución con una jeringa de
50 ml, filtrar por medio de un cabezal de filtración
con membrana de celulosa regenerada de 13 mm de
diámetro y 0,45 m de porosidad.
Determinar la absorbancia de la solución
muestra y de la solución estándar a 630 nm,
empleando la solución blanco como referencia.
Calcular el porcentaje total de colorantes
subsidiarios por la fórmula siguiente:
6 AM / AE
en la cual AM es la absorbancia de la solución
muestra y AE la absorbancia de la solución estándar.
El porcentaje total de colorantes subsidiarios no
debe ser mayor a 6 %.
Contenido de colorante total -
Tilulación con TiCI3 - Método III. Cada
mililitro de TiCl3 0,1 N equivale a 0,0404 g de
C37H34N2Na2O10S3. Contiene no menos de 85 %.
Valoración espectrofotométrica -
Concentración: 0,006 mg por ml. Determinar la
absorbancia a la longitud de onda de máxima
absorción, aproximadamente a 625 nm. Contiene
no menos de 85,0 %.
Concentración: 0,006 mg por ml. Determinar la
absorbancia a la longitud de onda de máxima
absorción, aproximadamente a 625 nm. Contiene
no menos de 85,0 %.
60. COMBUSTIÓN EN ERLENMEYER CON OXÍGENO
Este ensayo se realiza como etapa preliminar capítulo general correspondiente; humedecer con
para la determinación de bromo, cloro, iodo, agua la junta esmerilada del erlenmeyer y
selenio y azufre en productos farmacopeicos. La desplazar el aire del mismo con una corriente de
combustión del material a ensayar, generalmente oxígeno, tapar provisoriamente el erlenmeyer con
orgánico, produce compuestos inorgánicos un tapón apropiado hasta que se encienda la
solubles en agua, en los que se analizan los mecha. Agitar por rotación el líquido para
elementos especificados en la monografía o el favorecer la absorción del oxígeno. [NOTA: la
capítulo general correspondiente. saturación del líquido con oxígeno es esencial
para el éxito del procedimiento de combustión].
Aparato (ver Figura) - Consta de un
Encender la tira de papel y sumergir de inmediato
erlenmeyer de 500 ml (a menos que se especifique
el soporte de la muestra en el erlenmeyer.
uno de mayor volumen) de paredes gruesas, cuyo
Mantener firmemente ajustado el tapón durante
borde se eleva formando un reservorio alrededor
del tapón. El tapón de vidrio esmerilado lleva todo el proceso de combustión e invertir el
soldado un soporte para la muestra que consiste en erlenmeyer para que la solución de absorción
forme un cierre hermético alrededor del mismo.
un alambre de platino y una pieza formada por
Evitar que caiga en el líquido cualquier sustancia
una malla de platino soldada que mide
que no se haya quemado completamente. Una vez
aproximadamente 1,5 cm 2 cm.
finalizada la combustión, agitar el erlenmeyer
Procedimiento - vigorosamente y dejar reposar durante no menos
Precaución - Se debe trabajar con anteojos de 10 minutos con agitación intermitente. Luego
protectores y extremando las medidas de proceder según se especifique en la monografía o
seguridad. El analista debe asegurarse que el el capítulo general correspondiente.
erlenmeyer esté perfectamente limpio.
Pesar la sustancia, si es un sólido, en un
cuadrado de papel de filtro libre de haluros, de
aproximadamente 4 cm de lado; plegar el papel
envolviendo la muestra. Las sustancias líquidas
se pesan en cápsulas previamente pesadas para
volúmenes menores de 200 µl se emplean
cápsulas de acetato de celulosa y para volúmenes
mayores de 200 µl son útiles las cápsulas de
gelatina. [NOTA: las cápsulas de gelatina pueden
contener cantidades significativas de haluros o
azufre. Si se emplean tales cápsulas, se debe
realizar una titulación empleando un blanco y
hacer las correcciones necesarias]. Asegurar la
muestra en la malla de platino junto con una tira
de papel de filtro que, a modo de mecha, está
destinada a provocar la combustión cuando se la
enciende. Agregar en el erlenmeyer el líquido Figura. Aparato para combustión en erlenmeyer
absorbente, especificado en la monografía o el con oxígeno.
75. CONDUCTIVIDAD EN AGUA CALIDAD FARMACÉUTICA
En este ensayo se incluyen dos etapas prelimina- mantiene a 25 ± 1 °C, comenzar a agitar vigorosamen-
res. Si las condiciones de ensayo y los límites de te la muestra y observar periódicamente la conducti-
conductividad se cumplen en cualquiera de las etapas vidad. Cuando el cambio en la conductividad (debido
preliminares, el Agua Calidad Farmacéutica cumple a la captación del dióxido de carbono atmosférico) es
con los requisitos del ensayo cuando se especifique en menor que el valor neto de 0,1 S/cm durante 5 minu-
la monografía. En estas circunstancias es innecesario tos, registrar la conductividad.
proceder con la tercera etapa. La muestra no cumple 5. Si la conductividad no es mayor que
con los requisitos del ensayo sólo si no cumple con la 2,1 S/cm, el agua cumple con los requisitos del en-
tercera etapa. sayo de conductividad. Si la conductividad es mayor
Procedimiento que 2,1 S/cm, proceder con la Etapa 3.
ETAPA 1 ETAPA 3
1. Determinar la temperatura y la conductividad 6. Realizar este ensayo dentro de los 5 minutos
del agua realizando una lectura de conductividad no aproximadamente de la determinación de la conducti-
compensada por temperatura. La medida puede lle- vidad en el Paso 5, mientras se mantiene la tempera-
varse a cabo en un recipiente apropiado o como una tura de la muestra a 25 ± 1 °C. Agregar una solución
medida en línea. saturada de cloruro de potasio a la misma muestra de
2. Empleando la Tabla 1. Etapa 1. Requisitos agua (0,3 ml por cada 100 ml de muestra), y determi-
de conductividad y temperatura, encontrar el valor de nar el pH con una exactitud de 0,1 unidades de pH,
temperatura inmediata inferior a la temperatura medi- según se indica en 250. Determinación del pH.
da. El valor de conductividad correspondiente es el 7. Empleando la Tabla 2. Etapa 3. Requisitos
límite a esa temperatura. de conductividad y pH, determinar el límite de la
3. Si la conductividad medida no es mayor que conductividad al valor de pH medido. Si la conducti-
el valor de la Tabla 1, el agua cumple los requisitos vidad medida en el Paso 4 no es mayor que los requi-
del ensayo de conductividad. Si la conductividad es sitos de conductividad para el pH determinado en el
mayor que el valor indicado en la Tabla 1, proceder Paso 6, el agua cumple con los requisitos para el
con la Etapa 2. ensayo de conductividad. Si la conductividad medida
ETAPA 2 es mayor que este valor o el pH se encuentra fuera del
4. Transferir una cantidad suficiente de agua intervalo entre 5,0 y 7,0, el agua no cumple con los
(100 ml o más) a un envase apropiado y agitar. Ajus- requisitos para el ensayo de conductividad.
tar la temperatura, si fuera necesario, y mientras se la
Tabla 7. Asignación del contenido límite de microorganismos para productos farmacéuticos no estériles, según
su vía de administración (Disp. ANMAT 7352/99)
Recuento de aerobios
Vías de Hongos y
Categoría viables totales Enterobacteriaceae Ausencia en 1 g o ml*
administración levaduras
por g o ml
Productos para ser
aplicados sobre
escaras,
1.1 Gérmenes revivificables
ulceraciones o
quemaduras
graves
Enterobacteriaceae
Pseudomonas aeruginosa
1.2 Inhalatoria 10
Staphylococcus aureus
Enterobacteriaceae
Nasal, ótica,
Pseudomonas aeruginosa
2 rectal, tópica y 102
Staphylococcus aureus
vaginal
Pseudomonas aeruginosa**
3 2 2 Staphylococcus aureus
3 Oral 10 10 10
Escherichia coli
Salmonella spp
* Anaerobios sulfitorreductores para productos cuyas materias primas se consideren fuentes de contaminación.
** Pseudomonas aeruginosa solamente para formas farmacéuticas líquidas.
100. CROMATOGRAFÍA
La cromatografía es un método por el cual las activos con carga negativa y se emplean para
sustancias se separan mediante un proceso de separar compuestos básicos, como por ej., las
migración diferencial en un sistema que consta de aminas. Las resinas de intercambio aniónico tienen
dos fases. Una fase que fluye continuamente en una sitios activos con carga positiva para la separación
dirección dada (fase móvil) y otra que permanece de compuestos ácidos, como por ej., fosfatos,
fija (fase estacionaria). En estos sistemas los sulfonatos o carboxilatos. Los compuestos iónicos
componentes de una mezcla pueden presentar o ionizables, solubles en agua, son atraídos a las
diferentes movilidades debido a diferencias en la resinas y las diferencias en la afinidad producen la
capacidad de adsorción, partición, solubilidad, separación cromatográfica. El pH de la fase móvil,
presión de vapor, tamaño molecular o carga. Los la temperatura, el tipo de ión, la concentración
mecanismos de separación son: adsorción, iónica y los modificadores orgánicos afectan el
disolución y partición, filtración y permeación o equilibrio; estas variables pueden ajustarse para
tamices moleculares, intercambio iónico. obtener el grado de separación deseado.
Las técnicas aplicadas mediante los distintos La Cromatografía por tamices moleculares se
mecanismos-mencionados empleados en esta basa en el intercambio repetido de los compuestos
Farmacopea son: Cromatografía en columna, con la fase móvil y con la fase líquida estacionaria
Cromatografía en papel, Cromatografía en capa que se encuentra dentro de los poros del material de
delgada, Cromatografía de gases, Cromatografía relleno.
líquida de alta eficacia y Cromatografía de Empleo de Sustancias de referencia en ensayos
exclusión. de identificación - En Cromatografía en papel y en
La Cromatografía de adsorción se basa en la Cromatografía en capa delgada, la relación entre la
separación de un soluto entre la fase estacionaria distancia recorrida por una sustancia y la distancia
constituida por un adsorbente, como por ej., recorrida por el frente de la fase móvil, se denomina
alúmina activada, sílica gel y resinas de intercambio relación de frente, Rf, de la sustancia. La relación
iónico y la fase móvil constituida por el solvente de entre la distancia recorrida por una sustancia y la
elusión. distancia recorrida por una Sustancia de referencia,
La Cromatografía de partición se basa en la se denomina RE de la sustancia.
distribución selectiva del soluto entre la fase En el caso de la Cromatografía en papel se han
estacionaria y la fase móvil. Se clasifica en observado diferencias en el valor de Rf cuando los
cromatografía de partición en fase normal y cromatogramas se desarrollan en dirección paralela
cromatografía de partición en fase reversa. En la a las fibras de papel en comparación con los
cromatografía de partición en fase normal las desarrollados en forma perpendicular a dicha
sustancias a separar se distribuyen entre dos dirección. En consecuencia, la orientación de las
líquidos inmiscibles uno de los cuales es más polar, fibras del papel en lo que se refiere al flujo de la
actúa como fase estacionaria y se encuentra fase móvil debe ser la misma para una serie de
adsorbido sobre un soporte sólido, brindando una cromatogramas. [NOTA: por lo general, el
gran superficie de contacto a la fase móvil menos fabricante indica el sentido de las fibras en los
polar. En la cromatografía de partición en fase envases de papel para Cromatografía].
reversa la fase estacionaria es menos polar que la Los valores absolutos de Rf, son difíciles de
fase móvil. establecer, ya que varían con las condiciones
El grado de partición de un compuesto dado experimentales por lo tanto se logra una mejor
entre las dos fases líquidas se expresa por su identificación cuando se emplea una muestra de la
coeficiente de partición o de distribución y puede sustancia a ensayar como Sustancia de referencia.
modificarse variando la composición de la fase Para este fin se preparan soluciones de la muestra,
móvil. En el caso de compuestos que se disocian, la la Sustancia de referencia y una mezcla de partes
distribución se puede controlar modificando, entre iguales de ambas y se aplican sobre una línea
otras propiedades, el pH, la constante dieléctrica y paralela a uno de los bordes de la placa
la fuerza iónica. cromatográfica u hoja de papel. Cada aplicación
La Cromatografía de intercambio iónico se contiene aproximadamente la misma cantidad, en
emplea para separar compuestos ionizables y peso, de la muestra y la Sustancia de referencia. Si
solubles en agua. Las fases estacionarias empleadas la misma y la Sustancia de referencia son idénticas,
son generalmente resinas orgánicas sintéticas. Las todos los cromatogramas deben
resinas de intercambio catiónico contienen sitios
coincidir en color y valor de Rf, y el empleado para rellenar la columna, sin necesidad de
cromatograma de la mezcla debe mostrar una única separarlo de su excipiente y se agrega esta mezcla
mancha. al extremo superior de la columna. El paso
En Cromatografía en columna, Cromatografía posterior de solvente hace progresar la sustancia a
en papel y Cromatografía en capa delgada, las través de la columna.
sustancias pueden ser localizadas por: (a) La separación y aislamiento puede mejorarse
observación directa con luz visible o luz haciendo circular mayores cantidades de fase móvil
ultravioleta, si las sustancias poseen color o o un solvente de mayor poder eluyente, a través de
producen fluorescencia; (b) observación con luz la columna y recolectando distintas fracciones del
visible o ultravioleta, después de agregar un eluato que contienen los componentes de la
reactivo que reaccione con las sustancias separadas; muestra.
(c) mediante un contador Geiger-Müller o con La eficiencia de la separación suele controlarse
técnica autorradiográfica, cuando se trabaja con realizando un cromatograma en capa delgada de las
sustancias radiactivas o (d) por estimulación o fracciones individuales.
inhibición del desarrollo microbiano, colocando
Cromatografía de partición
trozos de papel que contienen las sustancias
separadas en medios de cultivo apropiados. Preparación de la columna - Emplear un tubo
cromatográfico de aproximadamente 22 mm de
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA diámetro interno y 200 a 300 mm de largo, sin disco
La Cromatografía en columna se emplea para la de vidrio poroso en su extremo, al que se ajusta un
separación de sustancias en escala preparativa. tubo de salida, sin robinete, de aproximadamente
4 mm de diámetro interno y 50 mm de largo, a
Cromatografía de adsorción
menos que se especifique de otro modo en la
Preparación de la columna - Emplear un tubo monografía correspondiente. Adaptar un trozo de
cromatográfico, cilíndrico, de vidrio o del material lana de vidrio en la base del tubo. Transferir el
especificado en la monografía correspondiente, volumen de fase estacionaria y la cantidad de
generalmente de 10 a 30 mm de diámetro interno y soporte sólido especificados en la monografía
de 150 a 400 mm de largo. En su extremo inferior, correspondiente a un vaso de precipitados de 100 a
el tubo se angosta formando un tubo de salida que 250 ml y mezclar hasta obtener una mezcla
generalmente posee un diámetro interno de 3 a homogénea y espesa. Transferir esta mezcla al tubo
6 mm, pudiendo incluir un robinete para el control cromatográfico y apisonar presionando suavemente,
exacto del caudal. Generalmente se emplea una hasta obtener una masa uniforme. Si la cantidad de
varilla de vidrio u otro material para colocar un soporte sólido especificada es mayor de 3 g,
trozo de lana de vidrio o algodón, en la base del transferir la mezcla al tubo en porciones de
tubo, y si fuera necesario, compactar el adsorbente aproximadamente 2 g y apisonar cada porción.
o una suspensión del mismo uniformemente dentro
Procedimiento - La muestra se puede agregar a
del tubo. En algunos casos, en la base del tubo se
la parte superior de la columna disuelta en un
encuentra soldado un disco de vidrio poroso que
actúa como soporte del contenido del tubo. Colocar volumen apropiado de fase móvil o empleando una
el adsorbente especificado en la monografía solución de la muestra en un volumen apropiado de
fase estacionaria mezclada con una parte adicional
correspondiente de manera que se forme una
del soporte sólido y transferida a la parte superior
columna compacta, homogénea y sin fisuras.
de la columna como una capa extra de soporte. La
Los adsorbentes más empleados son alúmina,
gel de sílice activado y tierra de diatomeas. muestra puede también ser incorporada en la fase
estacionaria, completando la transferencia
Procedimiento - Disolver la muestra en una cuantitativa al tubo cromatográfico, lavando el vaso
cantidad apropiada de solvente y agregarla por el de precipitados, empleado para la preparación de la
extremo superior de la columna. Dejar que esta muestra, y agregando una mezcla de
solución se adsorba y luego agregar nuevas aproximadamente 1 g de soporte sólido y varias
porciones de solvente, de manera que fluya a través gotas del solvente empleado para preparar la
de la columna espontáneamente, por aplicación de solución muestra. Colocar un trozo de lana de
vacío en la base o ejerciendo presión en el extremo vidrio fina por encima del soporte de la fase
superior. En algunos casos, puede modificarse el estacionaria para completar la columna. Dejar que
procedimiento de carga de la muestra en la se adsorba completamente en la fase estacionaria y
columna. Si el producto es sólido (como por ej., luego agregar fase móvil en varias porciones,
comprimidos pulverizados) se lo mezcla permitiendo que cada una penetre en la columna
íntimamente con una porción del adsorbente completamente, antes de comenzar la elución.
Como fase móvil emplear el solvente o la solución porciones sucesivas dejando secar luego de cada
especificada en la monografía correspondiente. aplicación.
Equilibrar la fase móvil con agua si la fase Sujetar el papel por el extremo donde se aplicó
estacionaria es una solución acuosa o si la fase la muestra dentro de la cubeta. El papel debe pasar
estacionaria es un líquido orgánico polar, equilibrar por encima de la varilla colocada en el borde de la
con ese líquido. cubeta y debe colgar libremente en la cámara, sin
Cuando la valoración o el ensayo requieren el tocar su fondo o sus paredes.
empleo de varias columnas cromatográficas Colocar una cantidad apropiada de fase móvil en
colocadas en serie, cuando se especifique el el fondo de la cámara y cerrarla herméticamente.
agregado de la fase móvil en porciones o el cambio Dejar la cámara en estas condiciones durante un
en la composición de la misma, dejar que cada período que permita que el ambiente se sature y el
porción drene completamente a través de la papel se equilibre con el vapor de la fase móvil. La
columna y lavar el vástago con fase móvil antes del saturación de la cámara puede favorecerse mediante
agregado de cada porción. el revestimiento de las paredes internas con un
papel humedecido en fase móvil.
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
Colocar la fase móvil en la cubeta y cerrar la
El mecanismo predominante en Cromatografía cámara herméticamente. Dejar descender la fase
en papel es la partición, esto se debe a que el papel móvil por el papel, hasta que haya recorrido la
posee un contenido natural de agua que puede ser distancia deseada. Retirar el papel de la cámara,
considerada como fase estacionaria. Sin embargo, marcar rápidamente el frente del solvente y dejar
en la práctica, las separaciones frecuentemente son secar.
el resultado de la combinación de efectos de Observar los cromatogramas directamente o
adsorción y partición. revelar la posición de las manchas empleando
Cromatografía descendente reactivos apropiados. Comparar los cromatogramas
obtenidos a partir de la muestra y la Sustancia de
Aparato - Consta de: referencia.
- Una cámara con cierre hermético para La sección del papel que contiene la sustancia o
permitir la saturación con los vapores de la fase sustancias aisladas puede cortarse y eluirse con un
móvil, generalmente construida de vidrio, acero solvente apropiado. La solución resultante puede
inoxidable o porcelana y diseñada de manera que ser valorada mediante técnicas químicas o
permita seguir el proceso sin necesidad de abrirla. instrumentales apropiadas empleando Sustancias de
- Un bastidor de material resistente a la referencia, tratadas de la misma manera que la
corrosión, aproximadamente 5 cm más corto que la muestra, en un intervalo apropiado dé
altura interior de la cámara. El bastidor sirve de concentraciones para realizar una curva de
soporte a las cubetas que contienen la fase móvil y calibración.
de las cuales se suspenden las hojas de papel.
- Una o más cubetas de vidrio o de material Cromatografía ascendente
inatacable por la fase móvil. Aparato - Emplear el aparato descrito en
- Varillas de vidrio, colocadas en forma paralela Cromatografía descendente.
al borde de cada cubeta para mantener suspendidas
Procedimiento - Aplicar la muestra y la
la hoja de papel.
Sustancia de referencia según se indica para el
- Hojas de papel cromatográfico de textura y
Procedimiento en Cromatografía descendente.
espesor apropiados.
Transferir una cantidad apropiada de fase móvil
Procedimiento - Trazar una línea transversal, para cubrir el fondo de la cámara. Colocar la
cerca de uno de los extremos del papel, de modo cubeta vacía en el fondo de la cámara. Colocar el
que cuando se sumerja en la fase móvil quede a papel empleando un soporte apropiado dentro de la
unos pocos centímetros por debajo de la varilla de cubeta vacía, procurando que no toque las paredes
vidrio. Disolver la muestra en un solvente de la cámara. Cerrarla herméticamente y dejarla en
apropiado. Aplicar un volumen de la solución así estas condiciones durante un período que permita
obtenida que contenga aproximadamente entre 1 y que el ambiente se sature y el papel se equilibre con
20 mg de la sustancia a ensayar sobre la línea el vapor de la fase móvil. Colocar la fase móvil en
anteriormente trazada y un volumen similar de la la cubeta y cerrar la cámara herméticamente. Dejar
Sustancia de referencia dejando no menos de 3 cm que el solvente ascienda por el papel hasta que haya
entre cada aplicación. Las aplicaciones no deben recorrido la distancia deseada. Retirar el papel de la
formar una mancha mayor de 6 a 10 mm de cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar.
diámetro, para ello aplicar las soluciones en
[NOTA: pueden emplearse cámaras cilíndricas, placa permita aplicar en toda su superficie una capa
de vidrio, que no requieren el empleo de cubetas y uniforme con el espesor deseado.
en las que la fase móvil se coloca directamente - Una cámara de vidrio cilíndrica o rectangular
sobre el fondo de la cámara. El papel se suspende de aproximadamente 30 cm de altura por 30 cm de
de la tapa que cierra la cámara. Durante la etapa de ancho y 16 cm de fondo, provista de una tapa del
equilibrio, el extremo inferior del papel no debe mismo material que permita el cierre hermético
tocar la fase móvil. La cromatografía comienza para saturarla con los vapores de la fase móvil.
haciendo descender la hoja de papel de modo que - Fase móvil constituida por mezclas de
toque la fase móvil]. solventes orgánicos o soluciones acuosas según se
indique en la monografía correspondiente.
CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
- Reactivos reveladores específicos indicados
La Cromatografía en capa delgada es en las monografías correspondientes.
comúnmente empleada para la identificación de - Un pulverizador que permita aplicar el
sustancias. El mecanismo de separación reactivo revelador, resistente al ataque del mismo.
predominante es la adsorción pero dependiendo del [NOTA: pueden emplearse placas comerciales
adsorbente empleado pueden observarse también preparadas o bien prepararlas en el laboratorio].
fenómenos de partición.
Preparación de la placa - Limpiar
En cromatografía en capa delgada el adsorbente
está constituido por una capa uniforme y perfectamente las placas por inmersión en mezcla
relativamente delgada de un material finamente sulfocrómica (ver 1090. Limpieza de materiales de
vidrio) y luego lavarlas con abundante agua hasta
pulverizado que se aplica sobre una placa rígida de
que el líquido que escurre no deje en la superficie
vidrio, plástico o metal. Esta técnica presenta
de las placas manchas visibles. Secarlas
varias ventajas sobre la cromatografía en papel, se
pueden emplear mayores cantidades de muestra; el perfectamente.
tiempo requerido es menor por lo tanto los riesgos Suspender el adsorbente, con el agregado o no
de reactivos, como por ej., soluciones reguladoras,
de alteración de la muestra por oxidación o por
sustancias fluorescentes, etc., en agua o en
acción de los solventes disminuyen y permite el uso
solventes orgánicos volátiles, agitar durante
de adsorbentes minerales que hacen posible el
30 segundos, hasta formar una suspensión
empleo de reveladores agresivos, como por ej.,
ácido sulfúrico. homogénea. Extender la suspensión sobre una o
varias placas, manualmente o con ayuda del
Aparato - Consta de: aplicador, hasta lograr una capa uniforme de 0,25 a
- Placas de material inerte: las más empleadas 1 mm de espesor. Dejar en reposo durante
son de vidrio de 20 cm 20 cm. 5 minutos. Secar a 105 °C durante 30 minutos y
- Un bastidor o soporte de material resistente a dejar enfriar en un desecador. Generalmente 30 g
la corrosión y aproximadamente 5 cm más corto de adsorbente y 60 ml de agua son suficientes para
que la altura interna de la cámara destinado a cinco placas de 20 cm 20 cm. Cuando se emplea
sostener una o más placas que se disponen emplasto de parís como aglutinante completar la
enfrentadas por su cara no cubierta por el aplicación de los adsorbentes dentro de los
adsorbente. 2 minutos de haber agregado el agua, ya que
- Materiales adsorbentes finamente divididos posteriormente la mezcla empieza a endurecer.
que pueden ser de origen mineral (gel de sílice, Cuando las placas estén secas y a temperatura
alúmina, etc.) u orgánico (celulosa, poliamidas, ambiente, verificar la uniformidad de la distribución
etc.), normalmente de 5 a 40 m de diámetro. y la textura de la capa adsorbente; la luz transmitida
Pueden aplicarse directamente sobre la placa de muestra uniformidad en la distribución y la luz
vidrio o adherirse a la placa a través de emplasto de reflejada muestra uniformidad en la textura.
parís (sulfato de calcio hidratado) en una relación Conservar las placas cromatográficas en un
de 5 a 15 % o con pasta de almidón u otros desecador. Deben emplearse dentro de los tres días
aglutinantes. El primero no produce superficies posteriores a su preparación.
duras como el almidón, pero no es afectado por Procedimiento - Colocar en la cámara una
reactivos reveladores fuertemente oxidantes. El cantidad suficiente de fase móvil hasta obtener una
adsorbente puede contener materiales que ayuden a capa de 1,5 cm. Adherir hojas de papel de filtro
la visualización de las manchas que absorben la luz embebidas en la fase móvil a las paredes de la
ultravioleta. cámara, para facilitar la saturación de la misma con
- Un aparato apropiado para esparcir el el vapor del líquido, a menos que se especifique de
adsorbente de modo que al desplazarlo sobre la otro modo, en la monografía correspondiente.
Cerrar la cámara herméticamente. Trazar una línea Cromatografía gas-líquido: la fase estacionaria
a 2,5 cm del borde inferior y lateral de la placa. puede estar contenida en columnas rellenas o
Aplicar por separado sobre la línea trazada capilares. En las columnas rellenas, la fase líquida
anteriormente y a no menos de 2 cm entre cada se deposita sobre un soporte sólido finamente
aplicación la solución muestra y la solución dividido e inerte en una columna de 1 a 3 m de
estándar empleando una micropipeta para obtener longitud 2 a 4 mm de diámetro interno. Los
una mancha lo más pequeña posible soportes más comúnmente empleados son tierra de
(preferentemente con un diámetro mayor de 5 mm o diatomeas, polímeros porosos o carbono grafito. En
bien en una banda perpendicular al sentido del las columnas capilares, que no contienen soporte, la
desarrollo del cromatograma, de 10 a 20 mm de fase líquida se deposita en la superficie interna de la
largo y 2 a 6 mm de ancho). La aplicación puede columna o puede unirse químicamente a ella.
realizarse en porciones sucesivas que permitan Cromatografía gas-sólido: se emplea como fase
acumular la cantidad de material requerido, dejando estacionaria alúmina, sílice, carbono o resinas
secar cada vez, antes de efectuar la siguiente porosas poliaromáticas.
aplicación.
Aparato - Consta de:
Dejar secar las aplicaciones, ubicar la placa en
- Un reservorio de gas transportador constituido
el soporte y colocarla dentro de la cámara, de modo
por un gas comprimido, como por ej.: helio,
que la fase móvil llegue al borde inferior de la
nitrógeno, hidrógeno, argón o mezclas (como por
placa. Cerrar la cámara y desarrollar los
ej., 95 % de argón y 5 % de metano) según el tipo
cromatogramas hasta que el frente del solvente haya
de detector y columna empleados.
recorrido aproximadamente tres cuartos de la
- Un sistema de inyección constituido por una
longitud de la placa, o la distancia indicada en la
jeringa o un inyector automático.
monografía correspondiente. Los cromatogramas
Los inyectores pueden ser:
requieren para su desarrollo aproximadamente de
Inyectores de flujo dividido: son inyectores
15 minutos a 1 hora. Retirar la placa de la cámara,
capaces de dividir la muestra en dos fracciones, una
marcar el frente del solvente y dejar secar.
pequeña que se introduce en la columna y una
En el caso de que se especifique una
grande que se desecha. También pueden emplearse
cromatografía en capa delgada bidimensional, la
en modo normal sin desechar ninguna porción de la
placa cromatográfica se somete a una cromatografía
muestra para el análisis de trazas o componentes
en una dirección, se seca y luego se somete a una
minoritarios.
segunda cromatografía en ángulo recto respecto de
Inyectores de purga y trampa: están equipados
la dirección original, generalmente en otra cámara
con un dispositivo por el cual las sustancias
equilibrada con un sistema de solventes diferente.
volátiles de la solución se capturan en una trampa
Examinar la placa empleando el método
de baja temperatura. Una vez que se completa el
especificado en la monografía correspondiente.
atrapado de las sustancias, se liberan en el gas
La sección de la placa que contiene la sustancia
transportador mediante la calefacción rápida de la
o sustancias aisladas también pueden separarse
trampa, la cual posee un dispositivo programable de
empleando una espátula, eluirse con un solvente
temperatura.
apropiado y cuantificarse empleando
Inyectores de espacio libre superior: poseen un
espectrofotometría o fluorescencia.
sistema de temperatura programable. Las muestras
Existen además instrumentos de lectura, los
líquidas o sólidas se colocan en envases
densitómetros, que miden la concentración de la
perfectamente cerrados y se calientan durante un
sustancia sobre la placa como reflectancia o
período de tiempo fijo, lo que permite que los
transmitancia, por absorción de luz o fluorescencia,
componentes volátiles de la muestra alcancen un
empleando longitudes de onda entre 190 y 800 nm
equilibrio entre las fases no gaseosa y gaseosa
seleccionadas con filtros o sistemas de difracción.
(espacio libre superior del envase). Una vez
La señal generada puede ser enviada a un
establecido el equilibrio, el inyector introduce
registrador gráfico, integrador o una computadora
automáticamente una cantidad determinada del
provista de programas apropiados.
espacio libre superior del envase en el cromatógrafo
CROMATOGRAFÍA DE GASES de gases.
La Cromatografía de gases se emplea para la - Las columnas pueden ser capilares o rellenas.
separación de sustancias o mezcla de sustancias Las columnas capilares, generalmente fabricadas
volátiles. Pueden emplearse los siguientes con sílice fundida, poseen un diámetro interno de
sistemas: 0,20 a 0,53 mm (estas últimas también llamadas
macrocapilares) y 5 a 60 m de longitud. El espesor
de la fase estacionaria, que a veces se une Este detector responde en forma uniforme a las
químicamente a la superficie interna, es de 0,1 a sustancias volátiles cualquiera sea su estructura, sin
1,0 m, aunque para las fases estacionarias no embargo, es considerablemente menos sensible que
polares puede ser hasta 5 m. el detector de ionización a la llama.
Las columnas rellenas, de vidrio o metal, poseen Detector de ionización a la llama alcalino: a
un diámetro interno de 2 a 4 mm y 1 a 3 m de largo. veces llamado NP o detector de nitrógeno-fósforo,
Generalmente contienen un polímero poroso sobre contiene una fuente termoiónica, constituida por
soporte sólido o solo soporte sólido. una sal de un metal alcalino o un elemento de vidrio
El tiempo de retención y la eficiencia dependen que contiene rubidio u otro metal, que produce la
de la temperatura, del caudal del gas transportador. ionización de compuestos con nitrógeno y fósforo
El tiempo de retención es también directamente orgánicos. Es un detector selectivo que muestra
proporcional a la longitud de la columna, mientras poca respuesta a los hidrocarburos.
que la resolución es proporcional a la raíz cuadrada Detector de captura electrónica: contiene una
de la longitud de la columna. Para las columnas fuente de radiación ionizante. Presenta una
rellenas, el caudal del gas transportador se expresa respuesta sumamente alta con sustancias que
generalmente en ml por minuto a presión contienen halógenos y grupos nitro pero pequeña
atmosférica y temperatura ambiente y se mide a la con hidrocarburos. La sensibilidad aumenta con el
salida del detector con un caudalímetro mientras la número y peso atómico de los átomos de halógeno.
columna está a la temperatura de trabajo. Para un - Un registrador que recibe la señal del detector
caudal determinado, la velocidad lineal a través de y calcula las respuestas de los picos e imprime el
una columna rellena es inversamente proporcional cromatograma con los parámetros del
al cuadrado del diámetro de la columna. Para las cromatograma y los picos. Los datos obtenidos
columnas capilares habitualmente se emplea pueden almacenarse y reprocesarse, con cambios en
velocidad lineal en lugar de caudal. la integración y otras variables de cálculo según sea
- Un detector seleccionado de acuerdo a las necesario.
características de la muestra. El detector debe Los datos también pueden recolectarse para ser
mantenerse a una temperatura superior a la de la medidos manualmente en registradores sencillos o
columna para impedir la condensación de las en integradores que pueden calcular respuestas de
sustancias eluidas. Para los análisis cuantitativos picos o que producen cromatogramas con
los detectores deben brindar una respuesta que debe respuestas y alturas de los picos y permiten el
ser directamente proporcional a la cantidad de la almacenado de datos para un posible reprocesado.
sustancia presente en el detector para un intervalo Procedimiento - Acondicionar la columna, el
amplio de concentraciones. El detector más inyector y el detector. Preparar las soluciones
comúnmente empleado es el de ionización a la estándar y muestra según se especifica en la
llama pero también son empleados el de monografía correspondiente.
conductividad térmica, captura electrónica, Adecuar el sistema cromatográfico según se
nitrógeno-fósforo y espectrometría de masa. indica en la monografía correspondiente.
Detector de ionización a la llama: poseen un Inyectar por separado las soluciones estándar y
intervalo lineal, amplio y es sensible a la mayoría muestra, registrar los cromatogramas y medir las
de los compuestos orgánicos. La respuesta de los respuestas de los picos según se especifica en la
detectores depende de la estructura y la monografía correspondiente.
concentración del compuesto y del caudal del gas Una fuente importante de error es la de
de combustión, del aire, del gas de compensación y irreproducibilidad en la cantidad de muestra
del gas transportador. Cuando se emplean inyectada, en particular cuando se hacen
columnas rellenas el gas transportador puede ser inyecciones manuales con una jeringa. Para reducir
helio o nitrógeno y cuando se emplean columnas esta variabilidad, se agrega un estándar interno,
capilares el gas transportador puede ser helio o compuesto que no interfiere en el cromatograma, en
hidrógeno, a menos que se especifique de otro la misma concentración en las soluciones muestra y
modo en la monografía correspondiente. estándar. El cociente entre la respuesta de la
Detector de conductividad térmica: posee un sustancia ensayada y la respuesta del estándar
alambre a una temperatura determinada, colocado interno se compara de un cromatograma a otro. El
en la corriente del gas transportador. Mide la estándar interno debe ser sometido a todo el proceso
diferencia de conductividad térmica entre el gas de preparación de la muestra, para controlar además
transportador junto con la muestra y el gas otros aspectos del análisis cuantitativo. Los
transportador sólo cuando atraviesan el detector. inyectores automáticos mejoran la reproducibilidad
de las inyecciones y reducen la necesidad del orgánica químicamente unida a sílice u otros
estándar interno. materiales. Las partículas son generalmente de 3 a
A partir de los resultados obtenidos calcular el 10 m de diámetro pero los tamaños pueden llegar
contenido de la o las sustancias a ensayar. hasta 50 m o más para las columnas preparativas.
CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE Las partículas recubiertas con una capa delgada de
ALTA EFICACIA fase orgánica tienen una baja resistencia a la
transferencia de masa y, por lo tanto, se obtiene una
La Cromatografía de líquidos de alta eficacia, transferencia rápida de las sustancias entre la fase
CLAE, (comúnmente llamada HPLC en inglés), es estacionaria y la fase móvil. La polaridad de la fase
denominada también Cromatografía líquida de alta estacionaria depende de la polaridad de sus grupos
resolución o rendimiento. La Cromatografía líquida funcionales que van desde el octadecilsilano
de alta eficacia tiene la ventaja de que las relativamente no polar a grupos nitrilo muy polares.
separaciones pueden tener lugar a temperatura Por lo general, las columnas empleadas para las
ambiente para muchas sustancias. Por lo tanto, las separaciones analíticas tienen diámetros internos de
sustancias no volátiles o térmicamente inestables, 2 a 5 mm; para la cromatografía preparativa se
pueden cromatografiarse sin descomposición o emplean columnas de diámetro mayor. En algunos
necesidad de hacer derivados volátiles. casos las columnas pueden calentarse para mejorar
La afinidad de una sustancia por la fase la eficiencia durante la separación, pero rara vez se
estacionaria y, por consiguiente, su tiempo de las emplea a temperaturas por encima de los 60 °C,
retención en la columna, se controla variando la debido a la potencial degradación de la fase
polaridad de la fase móvil mediante el agregado de estacionaria o a la volatilidad de la fase móvil. Las
un segundo y, a veces, un tercer o hasta un cuarto columnas se emplean a temperatura ambiente, a
componente. menos que se especifique de otro modo en la
Aparato - Consta de: monografía correspondiente.
- Un reservorio de fase móvil. - Un detector. Se emplean generalmente:
- Un sistema de bombeo que impulsa Detector espectrofotométrico: consta de una
cantidades exactas de fase móvil desde el celda de flujo colocada a la salida de la columna.
Reservorio de fase móvil a la columna mediante Un haz de radiación ultravioleta pasa a través de la
tuberías y uniones aptas para soportar altas celda de flujo en forma perpendicular a la dirección
presiones. Los sistemas modernos constan de una o del flujo de la fase móvil e incide en el fotodetector.
varias bombas dosificadoras, controladas por A medida que las sustancias eluyen de la columna,
computadora, que pueden programarse para variar pasan a través de la celda y absorben la radiación,
la composición de la fase móvil cuando se trabaja lo que da lugar a cambios cuantificables en el nivel
con gradiente o para mezclar los componentes de la de energía. Este detector es el más empleado.
fase móvil cuando se trabaja en condiciones Existen detectores de longitud de onda fija,
isocráticas. Generalmente se trabaja con gradiente variable y múltiple. Los detectores de longitud de
cuando la muestra es muy compleja o contiene onda fija operan a una sola longitud de onda, en
sustancias que difieren mucho en su factor de general 254 nm, emitida por una lámpara de
capacidad. mercurio de baja presión. Los detectores de
Las bombas pueden dar origen a caudales de longitud de onda variable contienen una frente
hasta 10 ml por minuto y generar presiones de hasta continua, como una lámpara de deuterio o de xenón
6.000 psi. Sin embargo, los caudales típicos son de de alta presión y un monocromador o un filtro de
1 a 2 ml por minuto, con presiones no mayores a interferencia que generan una radiación
2.000 ó 2.500 psi. Las bombas empleadas para el monocromática a una longitud de onda seleccionada
análisis cuantitativo son de material resistente tanto por el analista. Los detectores de longitud de onda
al ataque químico como al ataque mecánico y son variable pueden programarse para variar la longitud
capaces de entregar la fase móvil a una velocidad de onda durante el análisis. Los detectores de
constante, con fluctuaciones mínimas, durante longitud de onda múltiple miden la absorbancia a
períodos prolongados. dos o más longitudes de onda simultáneamente.
- Un sistema de inyección empleado para Detectores por arreglo de diodos: el haz de luz
introducir la muestra. continua atraviesa la celda. Luego la radiación es
- Una columna donde se produce la separación resuelta en sus longitudes de onda constitutivas que
efectiva de los componentes de la muestra son detectadas individualmente mediante el arreglo
inyectada. de diodos. Estos detectores adquieren los datos de
Las fases estacionarias para la cromatografía de absorbancia sobre el intervalo total UV-visible y,
líquidos en fase reversa constan de una fase por lo tanto, proveen al analista varias longitudes de
onda seleccionadas y espectros de los picos eluidos. Equilibrar la columna con la fase móvil y
Los arreglos de diodos tienen, por lo general, menor preparar las soluciones estándar y muestra según se
relación señal-ruido que los detectores de longitud especifique en la monografía correspondiente. Las
de onda fija o variable y, por lo tanto, son menos soluciones deben ser filtradas.
apropiados para el análisis de sustancias presentes Adecuar el sistema cromatográfico según se
en bajas concentraciones. especifica en la monografía correspondiente.
Detectores de índice de refracción: miden la Inyectar por separado las soluciones estándar y
diferencia entre el índice de refracción de la fase muestra, registrar los cromatogramas y medir las
móvil sola y el de la fase móvil que contiene las respuestas de los picos según se especifique en la
sustancias cromatografiadas según eluyan de la monografía correspondiente.
columna. Se emplean para detectar sustancias que A partir de los valores obtenidos calcular el
no absorben radiación ultravioleta, pero son menos contenido de la o las sustancias a ensayar.
sensibles que los detectores ultravioleta. Son Los métodos generalmente empleados son los
sensibles a pequeños cambios en la composición del de estándar externo y estándar interno. En general
solvente, el caudal y la temperatura, por ello se se obtienen resultados confiables por los sistemas
emplea una celda de referencia que contiene la fase de estándar externo, especialmente cuando se
móvil para obtener una línea de base satisfactoria. emplean inyectores automáticos. Este método
Detectores fluorométricos: son sensibles a las compara directamente la respuesta obtenida
sustancias fluorescentes o que puedan convertirse cromatografiando separadamente soluciones
en derivados fluorescentes, ya sea mediante la estándar y muestra. En otros casos se obtienen
transformación química de la sustancia o acoplando mejores resultados empleando el sistema de
reactivos fluorescentes en grupos funcionales estándar interno. En este caso se agrega una
específicos. cantidad conocida de una sustancia no interferente,
Detectores electroquímicos, potenciométricos, el estándar interno, a las soluciones muestra y
voltamétricos o polarográficos: son útiles para la estándar. Luego se compara la relación de
cuantificación de sustancias que pueden oxidarse o respuesta estándar/estándar interno y
reducirse en un electrodo de trabajo. Estos muestra/estándar interno.
detectores son selectivos, sensibles y confiables
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN
pero las fases móviles deben estar libres de oxígeno
disuelto o iones metálicos oxidantes. Debe En la Cromatografía de exclusión las sustancias
emplearse una bomba sin pulso y el pH, la fuerza presentes en la muestra se separan de acuerdo a su
iónica y la temperatura de la fase móvil deben tamaño. Los compuestos cuyas dimensiones sean
permanecer constantes. Los electrodos de trabajo mayores que el tamaño de poro de la fase
son propensos a la contaminación por los productos estacionaria atraviesan la columna sin ser retenidos
de reacción con las consiguientes variaciones en las y eluyen al volumen de exclusión VO (volumen
respuestas. Los detectores electroquímicos con muerto). Los compuestos cuyas dimensiones sean
electrodos de pasta de carbono pueden emplearse menores que el tamaño de poro de la fase
ventajosamente para medir cantidades muy estacionaria se introducen en los poros, quedan
pequeñas, del orden de los ng de sustancias retenidos por más tiempo y eluyen al volumen total
fácilmente oxidables en particular fenoles y de permeación VT (cuanto menor sea dicho tamaño
catecoles. más tiempo quedan retenidos en los poros y
-Un registrador que recibe la información del viceversa).
detector y realiza la impresión del cromatograrna. La Cromatografía de exclusión se puede dividir
Los dispositivos modernos almacenan la señal de en Cromatografía de permeación de geles que
salida del detector permitiendo reprocesar el emplea fases móviles orgánicas no polares y
cromatograma luego de cambiar las variables de rellenos hidrofílicos y Cromatografía por filtración
integración. También pueden emplearse para de geles que emplea fases móviles acuosas y
programar el cromatógrafo controlando la mayoría rellenos hidrofóbicos.
de las variables y automatizando el proceso. Aparato - Emplear el cromatógrafo descrito en
Procedimiento - La composición de la fase Cromatografía de líquidos de alta eficacia.
móvil influye significativamente en la resolución de - Columna. [NOTA: si fuera necesario,
las sustancias en la muestra. [NOTA: deben controlar la temperatura de la columna].
emplearse solventes de grado HPLC y reactivos de El material de relleno puede ser un soporte
alta pureza]. blando, como por ej., un gel o un soporte rígido,
como por ej., vidrio, sílica o un polímero orgánico
entrecruzado compatible con la fase móvil.
- Detector. Generalmente los detectores se En la Figura 1 se representa una separación
basan en propiedades luminiscentes, refractarias o cromatográfica típica de dos sustancias; 1 y 2,
fotométricas (ver Detectores en Cromatografía de donde t1 y t2 son los tiempos de retención,
líquidos de alta eficacia). [NOTA: si fuera respectivamente; h, h/2 y Wh/2 son la altura, la mitad
necesario, se puede conectar a un colector de la altura y el ancho a la mitad de la altura,
automático de fracciones]. respectivamente, para el pico 1; W1 y W2 son los
anchos de los picos 1 y 2 en la línea de base,
Procedimiento - Rellenar la columna según se
especifica en la monografía correspondiente. Las respectivamente.
características de elusión de un compuesto en un La coincidencia de los tiempos de retención de
una muestra y una Sustancia de referencia en un
sistema cromatográfico determinado se puede
único sistema cromatográfico puede emplearse
describir por el coeficiente de distribución, KD, el
como una característica en la construcción de un
cual se calcula por la fórmula siguiente:
perfil de identidad, pero es insuficiente para
(VI - VO)/(VT - VO) establecer la identidad. Los tiempos de retención
en la cual VO es el volumen de retención para la absolutos de un compuesto dado varían de un
sustancia no retenida, VT es el volumen de retención cromatograma al próximo.
para la sustancia que tiene acceso total a todos los [NOTA: en las siguientes fórmulas, tanto los
poros del material de relleno y VI es el volumen de volúmenes de retención como las separaciones
retención para la sustancia a ensayar. Medir cada lineales son directamente proporcionales al tiempo
volumen de retención desde el momento de la de retención y pueden sustituirse en las fórmulas].
aplicación hasta el momento de cada pico máximo Normalmente las comparaciones se hacen en
en particular. función de la retención relativa, a, que se calcula
por la fórmula siguiente:
Determinación de la composición relativa de
cada componente en la mezcla - Proceder para la t2 t0
separación según se especifica en la monografía
correspondiente. Medir las respuestas de los picos
t1 t 0
principales. Si todos los componentes de la muestra
poseen propiedades fisicoquímicas equivalentes, en la cual t2 y t1 son los tiempos de retención de la
como por ej., la absortividad, calcular la cantidad muestra y del estándar respectivamente, medidos
relativa de cada componente dividiendo la respuesta desde el punto de inyección, en condiciones
del pico respectivo por la suma de las respuestas de experimentales idénticas en la misma columna y tO
los picos de todas las sustancias de ensayo. Si los es el tiempo de retención de una sustancia no
componentes de la muestra no poseen propiedades retenida, como por ej., metano en el caso de la
fisicoquímicas equivalentes calcular el contenido cromatografía de gases.
empleando curvas de calibración obtenidas según se El número de platos teóricos N, es una medida
especifica en la monografía correspondiente. de la eficiencia de la columna. Para los picos
gaussianos, se calcula por la fórmula siguiente:
Determinación de pesos moleculares -
Determinar los pesos moleculares de los 2
componentes de la muestra comparando con los t
N 16
estándar de calibración especificados en las W
monografías correspondientes. Graficar los
volúmenes de retención de los estándar de 2
calibración en función del logaritmo de sus pesos t´
moleculares. Trazar la línea recta que mejor se N 5,54
ajuste a los puntos graficados dentro de los límites
W1 / 2
de exclusión total y de permeación total. Los pesos
moleculares de los componentes de la muestra se en la cual t es el tiempo de retención de la sustancia,
estiman a partir de la curva de calibración. W es el ancho del pico en su base, obtenido al
extrapolar los lados del pico con la línea de base y
Determinación de la distribución de pesos
t’ es la diferencia entre el tiempo de retención de la
moleculares en polímeros - Proceder según se
sustancia y el tiempo de elusión de una sustancia
especifica en las monografías correspondientes.
que no es retenida (tiempo muerto). El ancho
INTERPRETACIÓN DE LOS máximo a media altura, W1/2 , es obtenido
CROMATOGRAMAS directamente por integradores electrónicos.
El valor de N depende de la sustancia embargo, comparar los picos de impurezas con el
cromatografiada, así como de las condiciones cromatograma de un estándar a una concentración
operativas, como por ej., la fase móvil, el caudal del similar. El estándar puede ser la misma sustancia a
gas transportador, la temperatura, la calidad y un nivel que corresponde, como por ej., 0,5% de
uniformidad de la fase estacionaria y, para las impureza, o en el caso de las impurezas tóxicas o de
columnas capilares, el espesor de la película de fase impurezas indicadoras, un estándar de la impureza
estacionaria, el diámetro y la longitud de la misma.
columna. El factor de capacidad k’, está relacionado con
Para la separación de dos sustancias en una el coeficiente de distribución de la sustancia a
mezcla, la resolución, R, es determinada por la ensayar entre ambas fases. El factor de capacidad
fórmula siguiente: depende de la naturaleza química de la sustancia;
del área, naturaleza y cantidad de fase estacionaria;
t 2 t1 de la temperatura de la columna y del caudal de la
R fase móvil. Cada sustancia tiene un factor de
1 / 2 W2 W1 capacidad característico para un conjunto específico
de condiciones experimentales. La separación
en la cual t2 y t1 son los tiempos de retención de los cromatográfica sólo se produce si las sustancias
dos componentes y W2 y W1 son los anchos de la involucradas poseen diferentes factores de
base de los picos correspondientes, obtenidos al capacidad. El factor de capacidad se calcula por la
extrapolar los lados con la línea de base. fórmula siguiente:
La respuesta y la altura del pico son
generalmente proporcionales a la cantidad de tn t0
sustancia eluida. En general se miden las k´
respuestas de los picos, sin embargo, la medición de t0
las alturas pueden ser más exactas que la respuesta
cuando se consideran picos parcialmente en la cual tn es el tiempo requerido para que la
superpuestos. sustancia a ensayar eluya a través de la columna
El ensayo de pureza cromatográfica de una (tiempo de retención) y to es el tiempo de elusión
materia prima se basa en la determinación de picos de una sustancia que no es retenida (tiempo
de impurezas y se expresa como un porcentaje de la muerto).
respuesta del pico de la sustancia. Es preferible, sin
[NOTA: a partir de la Tabla 2 preparar al menos solución cuya concentración represente el límite de
cinco Soluciones estándar diluidas incluyendo una detección del sistema cromatográfico empleado].
Columna cromatográfica - Proceder según se
especifica en Método I.
Solvente de extracción - Proceder según se
especifica en Método I.
Solución de derivatización - Mezclar 10 ml de
ácido trifluoroacético con 5 ml de ácido acético
glacial y 35 ml de agua bidestilada (este volumen es
suficiente para realizar 70 derivatizaciones).
Solución muestra - Transferir 25 g de muestra
previamente homogeneizada y molida (tamiz
N° 20), exactamente pesados, a un erlenmeyer de
500 ml. Agregar cantidad suficiente de Solvente de
extracción para que toda la muestra quede
embebida. Agitar 1 hora en un agitador mecánico o
5 minutos en licuadora a alta velocidad. Filtrar y
recolectar el filtrado en un erlenmeyer de 250 ml.
Transferir 16 ml del extracto a un erlenmeyer de
125 ml, agregar 32 ml de Solución reguladora de
fosfato pH 7,4. Agitar y filtrar a través de una
membrana filtrante de porosidad de 0,8 a 1,6 µm.
Aplicar 24 ml del filtrado a través de la Columna
cromatográfica asegurando un caudal de 1 ó 2 gotas
por segundo y cuidando que la columna no se
seque. Lavar la columna con 20 ml de agua y secar
haciendo pasar aire a través de la misma con una
jeringa vacía. Descartar el líquido de lavado. Eluir
las aflatoxinas adsorbidas en la columna lentamente
por acción de la gravedad con 2 ml de metanol.
Recolectar todo el eluido en un envase de 5 ml de
vidrio inactínico. Llevar a sequedad en estufa de
vacío a 55 °C. Disolver el extracto con 200 µl de
acetonitrilo, agitar vigorosamente y agregar 700 µl
de Solución de derivatización. Cerrar el envase y
mezclar. Calentar a 65 °C durante no menos de
8,5 minutos [NOTA: este tiempo es necesario para
una completa derivatización de aflatoxina B1 (B2a)
y G1 (G2a)]. Dejar enfriar a temperatura ambiente
antes de abrir el envase.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo 50 µl de cada Solución estándar
diluida, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Graficar las
respuestas de los picos en función de la
concentración de aflatoxinas, en µg por ml, para
cada aflatoxina. Trazar la recta que mejor se ajuste
a los puntos marcados. Inyectar en el cromatógrafo
50 µl de la Solución muestra, registrar el
cromatograma y medir la respuesta de los picos.
B2a, G2 y B2 son aproximadamente 6, 8 ,9 y
11 minutos, respectivamente. Calcular la
concentración de las aflatoxinas presentes en la
Solución muestra empleando el gráfico de respuesta
en función de la concentración, obtenido a partir de
las Soluciones estándar diluidas.
120. DETERMINACIÓN DE AGUA
A continuación se describen los métodos A menos que se especifique de otro modo en
empleados en esta Farmacopea para la la monografía correspondiente emplear el método
determinación de agua. Estos métodos se basan de titulación volumétrica directa por el método de
en la reacción de Karl Fischer y en la destilación Karl Fischer.
azeotrópica con tolueno.
DETERMINACIÓN DE AGUA POR EL MÉTODO DE KARL FISCHER
La determinación de agua por el método de de azufre y iodo en presencia de metanol y una
Karl Fischer se basa en la reacción cuantitativa base orgánica como la piridina, según la siguiente
entre el agua y un reactivo constituido por dióxido ecuación:
I2 + S02 + 3C5H5N + CH30H + H20 2 (C5H5N+H)I- + (C5H5N+H)-OSO2OCH3
Existen dos métodos diferentes basados en la agua. En el otro, el iodo es producido por la
reacción con el iodo: uno es la titulación electrólisis de un reactivo de Karl Fischer que
volumétrica y el otro es un método de titulación contiene al ión ioduro. El contenido de agua en
culombimétrica. En el primero, el iodo se una muestra puede ser determinado midiendo la
disuelve en el reactivo y el contenido de agua es cantidad de electricidad que se requiere para la
determinado midiendo la cantidad de iodo producción de iodo durante la titulación.
consumido como resultado de la reacción con el
2I- I2 + 2e-
Procedimiento - Transferir al balón de digestión eléctrico hasta que la solución adquiera un color
A, una cantidad de sustancia en ensayo, azul claro y las paredes del balón queden libres de
exactamente pesada o medida, de tal manera que residuo carbonoso. Agregar al producto de la
contenga entre 2 y 3 mg de nitrógeno. Agregar digestión, 70 ml de agua, enfriar y conectar el
1 g de una mezcla pulverizada de sulfato de balón de digestión al aparato de destilación.
potasio y sulfato de cúprico (10:1) y arrastrar Agregar a través del embudo E, 30 ml de
hacia el interior las partículas de sustancia que se hidróxido de sodio al 40 %, lavar el embudo con
hayan adherido al cuello del balón, con ayuda de 10 ml de agua, cerrar perfectamente el robinete G
agua. Agregar 7 ml de ácido sulfúrico, dejándolos y comenzar inmediatamente la destilación con
resbalar por las paredes del balón, y luego, vapor. Recolectar el destilado sobre 15 ml de una
mientras se agita el balón con movimiento solución acuosa de ácido bórico al 4 %, a la cual
circular, agregar cuidadosamente 1 ml de se han agregado tres gotas de solución de rojo
peróxido de hidrógeno al 30 % a lo largo de las metilo (SR) como indicador y cantidad suficiente
paredes del balón. [NOTA: no debe agregarse el de agua, hasta cubrir el extremo abierto del tubo
peróxido de hidrógeno durante el proceso de del refrigerante. Continuar la destilación hasta
digestión]. Calentar el balón directamente sobre obtener entre 80 y 100 ml de destilado. Retirar el
la llama del mechero o sobre un calentador recipiente de absorción, lavar el extremo del tubo
del refrigerante con una pequeña porción de agua
y valorar el destilado con ácido sulfúrico
0,01 N (SV). Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada
mililitro de ácido sulfúrico 0,01 N (SV) equivale a
0,1401 mg de nitrógeno. Si la cantidad de
sustancia en ensayo contiene más de 2 a 3 mg de
nitrógeno, se debe emplear para la titulación ácido
sulfúrico 0,02 o 0,1 N, eligiéndose la
concentración de ácido apropiada de modo que se
consuman por lo menos 15 ml en la titulación. Si
el peso total de la materia seca empleada es mayor
a 0,1 g, aumentar proporcionalmente las
cantidades de ácido sulfúrico y de hidróxido de
sodio.
210. DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EXTRAÍBLE DEL
ENVASE
Los siguientes ensayos están diseñados para en la Tabla son generalmente suficientes para
garantizar que las soluciones y suspensiones orales permitir la extracción y administración de los
contenidas en envases multidosis, dispensadas volúmenes declarados en el rótulo.
como preparaciones líquidas o para reconstituir, y Procedimiento - Seleccionar uno o más envases
las soluciones inyectables en envases monodosis o si el volumen es mayor o igual a 10 ml, tres o más
multidosis, cuando se extraen de su envase original, envases si es mayor a 3 ml y menor a 10 ml, y cinco
proporcionen el volumen declarado en el rótulo del o más envases si es menor o igual a 3 ml. Extraer
producto. individualmente el contenido de cada uno de los
Para determinar el volumen extraíble del envase, envases seleccionados con una jeringa hipodérmica
seleccionar no menos de treinta envases y proceder seca cuya capacidad no exceda tres veces el
según se indica para la forma farmacéutica volumen a ser medido, provista de una aguja de
correspondiente. 0,8 mm de diámetro interno y de no menos de
2,5 cm de largo. Eliminar las burbujas de aire de la
SOLUCIONES Y SUSPENSIONES ORALES, jeringa y de la aguja, verter el contenido de la
JARABES Y POLVOS EN ENVASES jeringa sin vaciar la aguja en una probeta graduada
MULTIDOSIS, O SUSPENSIONES ORALES y de capacidad tal que el volumen a medir ocupe
PARA RECONSTITUIR por lo menos el 40 % de su volumen.
Procedimiento - Seleccionar diez envases y Alternativamente, el contenido de la jeringa
proceder según se indica en el rótulo. Transferir el puede ser transferido a un vaso de precipitados
contenido de cada envase a sendas probetas seco, previamente pesado. Calcular el volumen
graduadas y de capacidad tal que no exceda dos extraído, en mililitros, como el peso, en gramos, de
veces y media el volumen a medir, evitando la inyectable dividido por su densidad, previamente
formación de burbujas y permitiendo que drenen determinada.
durante un período no mayor de 30 minutos. El contenido de dos, tres o cuatro envases de 1 ó
Cuando el líquido quede libre de burbujas de aire, 2 ml puede combinarse para la medición,
medir el volumen de cada uno. empleando una jeringa seca para cada envase. Para
determinar el contenido de los envases de 10 ml o
Interpretación - El volumen promedio de la mayores, abrir los mismos y vaciar sus contenidos
solución, suspensión o jarabe obtenido a partir de directamente en una probeta o en un vaso de
los diez envases no debe ser menor de 100% del precipitados previamente pesado.
volumen declarado en el rótulo y el volumen de El volumen no debe ser menor que el declarado
ningún envase debe ser menor de 95 %. Debe en el rótulo; en el caso de envases examinados
repetirse el ensayo con veinte envases adicionales individualmente o en el caso de envases de 1 ó
cuando: 2 ml, no debe ser menor que la suma de los
a) El volumen promedio es menor de 100 % del volúmenes declarados de los envases seleccionados.
declarado en el rótulo, pero el volumen de ningún Para los inyectables en envases multidosis cuyo
envase es menor de 95 % de la cantidad declarada; rótulo declare que se puede extraer un número
b) El volumen de no más de un envase es menor específico de dosis de un determinado volumen,
de 95 %; pero no menor de 90 % de volumen proceder según se indicó anteriormente empleando
declarado en el rótulo. un número de jeringas igual al número de dosis
El volumen promedio obtenido a partir de los especificadas. El volumen suministrado por cada
treinta envases no debe ser menor de 100 % del jeringa no debe ser menor al de la dosis
volumen declarado en el rótulo y el volumen de no especificada.
más de uno de los treinta envases puede ser menor Para los inyectables oleosos, calentar los
de 95 %, pero no debe ser menor de 90 % del envases a una temperatura no mayor a 37 °C y
volumen declarado en el rótulo. agitarlos cuidadosamente antes de extraer el
contenido. Enfriar a 25 °C antes de medir el
SOLUCIONES Y SUSPENSIONES
volumen extraído.
INYECTABLES
Para inyectables en jeringas prellenadas, armar
Los envases de soluciones y suspensiones el envase con los accesorios necesarios, como por
inyectables deben llenarse con un ligero exceso de ej., aguja o émbolo. Siguiendo el procedimiento
volumen. Los excesos de volúmenes recomendados descrito anteriormente y sin vaciar la aguja,
presionar el émbolo lenta y constantemente para Para soluciones parenterales de gran volumen,
transferir el contenido de cada envase a un vaso de seleccionar un envase y transferir el contenido en
precipitados seco. Pesar y calcular el volumen una probeta graduada y de capacidad tal que el
extraíble. El volumen de cada envase no es menor volumen a medir ocupe por lo menos el 40 % de su
que el declarado en el rótulo. volumen. El volumen no debe ser menor que el
declarado en el rótulo.
Tabla.
Volumen declarado Exceso de volumen recomendado
(ml) Líquidos móviles Líquidos viscosos
0,5 0,10 ml 0,12 ml
1,0 0,10 ml 0,15 ml
2,0 0,15 ml 0,25 ml
5,0 0,30 ml 0,50 ml
10,0 0,50 ml 0,70 ml
20,0 0,60 ml 0,90 ml
30,0 0,80 ml 1,20 ml
50,0 o más 2% 3%
220. DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO NETO DEL ENVASE
Los siguientes ensayos y especificaciones se Eliminar cualquier residuo con solventes
aplican a productos tales como: cremas, geles, apropiados y lavar con porciones de metanol.
jaleas, lociones, ungüentos, pastas, polvos y Calentar a 100 °C durante 5 minutos el envase, la
aerosoles, incluidos los de válvula continua y los válvula y todas las partes asociadas. Enfriar y pesar
dosificadores, presurizados y no presurizados. nuevamente cada envase completo. La diferencia
entre el peso original y el peso del envase vacío es
Procedimiento para formas farmacéuticas
el peso del contenido neto del envase. Determinar
con excepción de aerosoles
el peso del contenido neto para cada envase
Para envases rotulados por peso. ensayado. Los requisitos se cumplen si el
Seleccionar diez envases llenos y quitar todas contenido neto de cada uno de los diez envases no
las etiquetas que puedan afectar la determinación es menor que la cantidad declarada en el rótulo.
del contenido neto del envase. Limpiar y secar
exteriormente los envases y pesar cada envase
individualmente. Cortar cada envase y extraer
cuantitativamente su contenido lavándolo con un
solvente apropiado, si fuera necesario. Secar y
pesar nuevamente cada uno de los envases vacíos
junto con sus partes correspondientes. La
diferencia entre el peso original y el peso del envase
vacío es el peso del contenido neto del envase.
Para envases rotulados por volumen.
Verter el contenido de diez envases en sendas
probetas y dejar que drenen completamente.
Determinar el volumen de cada uno de los diez
envases.
Interpretación - El contenido neto promedio de
los diez envases no debe ser menor que el declarado
y el contenido neto de cualquier envase individual
no debe ser menor de 90 % de la cantidad declarada
cuando la cantidad declarada es menor o igual a
60 g ó 60 ml; o no menor de 95 % de la cantidad
declarada cuando la cantidad declarada es mayor a
60 g ó 60 ml.
Si no se cumple este requisito, determinar el
contenido de veinte envases adicionales. El
contenido promedio de los treinta envases no debe
ser menor de la cantidad declarada y el contenido
neto de no más de uno de los treinta envases puede
ser menor de 90 % de la cantidad declarada cuando
la cantidad declarada es menor o igual a 60 g ó
60 ml; o menor de 95 % de la cantidad declarada
cuando la cantidad declarada es mayor a 60 g ó
60 ml.
Procedimiento para aerosoles
Seleccionar diez envases llenos y quitar todas
las etiquetas que puedan afectar la determinación
del contenido neto del envase. Limpiar y secar
exteriormente los envases y pesar cada envase
individualmente. Retirar el contenido de cada
envase empleando una técnica apropiada, como por
ej., enfriar para reducir la presión interna, retirar la
válvula y verter.
225. DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE PERÓXIDOS
seni
n
senr
El índice de refracción es una constante física
que se emplea a menudo como criterio de pureza.
Muchas de las especificaciones de índice de
refracción en esta Farmacopea se definen a
temperaturas distintas de 25 °C a pesar de ser esta
la temperatura para las mediciones farmacopeicas.
La temperatura debe ajustarse cuidadosamente y
mantenerse constante a ± 0,2 °C, ya que el índice de
refracción varía significativamente con la
temperatura.
Los valores de índice de refracción dados en
esta Farmacopea son para la línea D del sodio
(doblete a 589,0 y 589,6 nm). La mayoría de los
aparatos disponibles están diseñados para ser
empleados con luz blanca pero se calibran para dar
el índice de refracción en función de la línea D del
sodio.
Como no es sencillo medir directamente los
ángulos de incidencia y de refracción, se han
desarrollado sistemas ópticos especiales que se
basan en la medida del ángulo límite de reflexión
total.
Un aparato universalmente difundido que opera
bajo este principio es el refractómetro de Abbe.
El índice de refracción (comúnmente entre
1,3000 y 1,7000) puede ser leído directamente al
tercer decimal y estimado al cuarto decimal.
Para lograr la exactitud teórica de ± 0,0001, es
necesario calibrar el aparato contra un estándar
provisto por el fabricante, verificar con frecuencia
el control de temperatura y la limpieza del aparato
determinando el índice de refracción del agua, que
corresponde a 1,3330 a 20 °C y 1,3325 a 25 °C.
240. DETERMINACIÓN DEL INTERVALO DE DESTILACIÓN
Para determinar el intervalo de temperaturas sobre ella, la porción del balón que queda por
dentro del cual un líquido destila o el porcentaje debajo de la superficie superior del material
de líquido que destila entre dos temperaturas aislante tenga una capacidad de 3 a 4 ml.
especificadas, emplear el Método I o el Método II Receptor - Una probeta de 100 ml graduada
según se especifique en la monografía en divisiones de 1 ml.
correspondiente. El límite inferior del intervalo es Termómetro - Para evitar la necesidad de
la temperatura indicada por el termómetro cuando corrección por columna emergente, se recomienda
la primera gota del condensado cae del extremo un termómetro calibrado, de inmersión parcial con
del refrigerante y el límite superior es el punto subdivisiones no mayores de 0,2 °C (ver 720.
seco, es decir, la temperatura a la cual la última Termómetros). Cuando se coloca en posición, la
gota de líquido se evapora del fondo del matraz de columna queda ubicada en el centro del cuello y la
destilación, sin tener en cuenta el líquido que parte superior del bulbo está a la altura del borde
pueda quedar en las paredes del matraz, o la inferior de la salida lateral.
temperatura observada al recolectarse la Fuente de calor - Un mechero de Bunsen, un
proporción especificada en la monografía calentador o un manto eléctrico con una capacidad
correspondiente. de ajuste comparable a un mechero de Bunsen.
[NOTA: enfriar todos los líquidos que destilan Procedimiento - Armar el aparato y transferir
por debajo de 80 °C, entre 10 y 15 °C antes de
al balón 25 ml del líquido a destilar, evitando que
medir la muestra a destilar].
el líquido penetre por la salida lateral. Insertar el
Método I termómetro, proteger el mechero y el balón de
corrientes de aire externas y aplicar calor,
Aparato - Consta de: regulándolo para que transcurran entre 5 y
Balón de destilación - De vidrio resistente al 10 minutos hasta que la primera gota del destilado
calor, de 50 a 60 ml, con una longitud total de 10 caiga del refrigerante. Continuar la destilación
a 12 cm y un cuello de 14 a 16 mm de diámetro con un flujo de 4 a 5 ml de destilado por minuto,
interno. A media distancia del cuello, recolectando el destilado en el receptor. Aplicar
aproximadamente a 12 cm del fondo del balón, la corrección por columna emergente, si fuera
posee una salida lateral de 10 a 12 cm de largo y necesario y corregir la temperatura observada si la
5 mm de diámetro interno, que forma un ángulo presión barométrica no fuera la normal (760 mm
de 70 a 75° con la parte inferior del cuello. Hg), empleando la fórmula siguiente:
Refrigerante - De vidrio recto, de 55 a 60 cm
de longitud con una camisa de enfriamiento de t1 t2 K 760 b
aproximadamente 40 cm de longitud o un
refrigerante de otro diseño pero con una capacidad en la cual t1 es la temperatura corregida, t2 es la
de intercambio equivalente. El extremo inferior temperatura observada, b es la presión
del refrigerante puede ser curvo para que actúe barométrica, en mm Hg, durante la destilación y K
como tubo colector o puede conectarse a un es el factor de corrección indicado en la Tabla, a
adaptador curvo que cumple con el mismo menos que se especifique de otro modo en la
propósito. monografía correspondiente.
Placas aislantes - Dos placas aislantes
cuadradas, de 14 a 16 cm de lado, de 5 a 7 mm de Método II
espesor, apropiadas para concentrar el calor en la Aparato - Emplear un aparato similar al
parte inferior del matraz. Cada placa tiene un especificado para el Método I, excepto que el
orificio en su centro y las dos placas difieren sólo balón de destilación es de 200 ml, con un cuello
en los diámetros de los orificios, que son de 4 y de 17 a 19 cm de largo y 20 a 22 mm de diámetro
10 cm, respectivamente. Cuando se emplean, las interno.
placas se colocan una sobre la otra en un trípode u
Procedimiento - Proceder según se indica en
otro soporte apropiado, con la placa que tiene el
Método I, pero colocaren el balón 100 ml del
orificio más grande en la parte superior. La
líquido a destilar.
perforación de la placa aislante superior, si ésta se
emplea, debe ser tal que cuando el balón se fija
Tabla. Variación del factor de corrección con la temperatura.
1
Se pueden emplear Soluciones de calibración de medidores del pH disponibles comercialmente,
estandarizadas por métodos reconocidos, rotuladas con un valor de pH exacto a 0,01 unidad de pH y que estén
acompañadas de una tabla con los valores de pH a distintas temperaturas.
260. DETERMINACIÓN DEL PUNTO DE FUSIÓN
Los puntos o intervalos de fusión que figuran vástago del termómetro principal en un punto
en esta Farmacopea se definen como las equidistante de la superficie del baño y de la
temperaturas o intervalos de temperaturas dentro división correspondiente al punto de fusión
de las cuales se observa la aglomeración y luego esperado.
la fusión completa de los sólidos cuando se Calentar el baño con la llama del mechero
procede según los métodos indicados a hasta alcanzar una temperatura de 30 °C debajo
continuación. del punto de fusión esperado. Introducir el
termómetro con el capilar adherido y continuar el
Método I
calentamiento de manera tal que la temperatura se
Para muestras que se reducen fácilmente a eleve a una velocidad de unos 3 °C por minuto,
polvo. hasta alcanzar una temperatura de 3 °C por debajo
Aparato - Consta de un tubo de vidrio de del punto de fusión esperado. A partir de ese
fondo semiesférico de 30 a 40 mm de diámetro instante, se debe elevar la temperatura a razón de
interno y de 12 cm de longitud, el espesor de las 1 °C por minuto aproximadamente, hasta que
paredes no es mayor a 1,5 mm y el vidrio debe ser finalice la fusión. La temperatura a la cual se
apto para exponerse directamente a la llama del observa que la columna de la muestra comienza a
mechero de Bunsen. Para homogeneizar la contraerse de manera franca contra las paredes del
temperatura a este recipiente, se le adapta un tubo, en un punto cualquiera, se define como el
agitador construido con una varilla de vidrio de comienzo de la fusión; y la temperatura a la cual
2 mm de diámetro externo. Ambos termómetros, la sustancia se vuelve completamente líquida, se
el principal que abarca la escala deseada de define como término de la fusión. Agitar
temperatura y el auxiliar para corrección de la continuamente el baño durante el calentamiento.
columna, deben responder a las consideraciones Para establecer exactamente el resultado
generales (ver 720. Termómetros). Consta, obtenido como intervalo de fusión conviene
además, de un tubo capilar de vidrio, cerrado en repetir la determinación. Para ello, dejar enfriar el
uno de sus extremos, de aproximadamente 9 cm baño hasta 10 °C por debajo del punto de fusión o
de longitud y de 0,8 a 1,2 mm de diámetro hasta una temperatura más baja y repetir el
interno, cuyas paredes tienen un espesor de 0,2 a método descrito empleando nuevos tubos
0,3 mm. capilares y nuevas porciones de muestra. Anotar
Procedimiento - Reducir la muestra a polvo la temperatura registrada por el termómetro
fino y secarla en un desecador al vacío sobre un auxiliar al terminar la fusión de la muestra, si
desecante apropiado durante 24 horas o en las fuera necesario, aplicar la corrección por columna
condiciones especificadas en la monografía emergente (ver 720. Termómetros) empleando la
correspondiente. fórmula siguiente:
Elegir un baño apropiado para la temperatura
de fusión que va a determinarse y llenar el tc 0,00016 N T t
recipiente destinado al baño de calefacción hasta
en la cual tc, representa la corrección que debe
un nivel que permita sumergir el termómetro, de
agregarse al punto de fusión observado, N el
modo que la porción superior del bulbo quede 2 a
número de grados de la columna del termómetro
3 cm debajo de la superficie del baño y el extremo
inferior a una distancia aproximadamente igual principal emergente del baño, T la temperatura al
del fondo del recipiente. terminar la fusión y t la temperatura registrada por
el termómetro auxiliar. La corrección se agrega a
Cargar el tubo capilar seco con suficiente
la lectura del termómetro principal.
cantidad de polvo hasta formar una columna de
Cuando se trata de muestras que funden a
2,5 a 3,5 mm de altura, luego de haberlo
comprimido golpeándolo moderadamente sobre temperatura elevada, la determinación es más
una superficie sólida. Unir el tubo capilar al exacta si el capilar no se introduce en el baño de
calefacción hasta que éste se encuentre a una
termómetro, ambos humedecidos con el líquido
temperatura de 10 °C por debajo del punto de
del baño. Ajustar su altura, de modo que la
fusión esperado. Esto es necesario cuando la
muestra contenida en el capilar quede junto al
sustancia pueda descomponerse al calentarla largo
bulbo del termómetro.
Adaptar el termómetro auxiliar de modo que el tiempo.
centro del bulbo quede lo más cercano posible al Los líquidos empleados como baños de
calefacción apropiados son la vaselina líquida o
un aceite de silicona, debiéndose considerar para
su elección la temperatura a determinar.
Método II
Este método se emplea para muestras que no
se reducen fácilmente a polvo.
Procedimiento - Fundir cuidadosamente la
muestra a la temperatura más baja posible e
introducir el material fundido en un capilar abierto
en ambos extremos, hasta formar una columna de
unos 10 mm de altura. Enfriar el capilar cargado
a una temperatura menor o igual a 10 °C durante
aproximadamente 24 horas o a 0 °C durante al
menos 2 horas. Unir el capilar al termómetro y
cuidar que la muestra en el capilar quede junto al
bulbo del termómetro. Introducir en un baño de
agua y calentar, según se indica en el Método I,
excepto que al llegar la temperatura a
aproximadamente 5 °C debajo del punto de fusión
esperado, se aumenta la temperatura a razón de
medio grado por minuto. Se toma como punto de
fusión la temperatura a la cual la muestra
comienza a ascender dentro del tubo capilar.
Método III
Este método se emplea para el ensayo de
vaselina.
Procedimiento - Fundir la muestra, agitando
hasta alcanzar una temperatura de 90 a 92 °C y
luego dejar enfriar la sustancia fundida hasta una
temperatura de 8 a 10 °C sobre el punto de fusión
calculado. Enfriar hasta 5 °C el bulbo de un
termómetro, secar y, mientras esté aún frío,
sumergirlo en la muestra fundida hasta la mitad
del bulbo aproximadamente. Retirar
inmediatamente y sostener en posición vertical,
hasta que la superficie de la muestra depositada
sobre el bulbo solidifique, introducir
aproximadamente 5 minutos en un baño de agua a
una temperatura que no exceda los 16 °C.
Adaptar el termómetro dentro de un tubo de
ensayo, por medio de un corcho, de modo que su
extremo inferior quede 15 mm por encima del
fondo del tubo de ensayo. Suspender el tubo de
ensayo en un baño de agua a una temperatura de
16 °C y elevar la temperatura del baño hasta
30 °C, a razón de 2 °C por minuto y luego a razón
de 1 °C por minuto, hasta que la primera gota se
desprenda del termómetro. La temperatura a la
cual esto sucede representa el punto de fusión.
Para cada determinación emplear una porción
recién fundida de la muestra. Si la variación de
tres determinaciones es menor de 1 °C, tomar el
promedio. Si la variación es mayor de 1 °C
realizar dos determinaciones más y promediar las
cinco.
Actualización total
270. DETERMINACIÓN DEL RESIDUO DE IGNICIÓN <PWG>
Pesar exactamente entre 1 y 2 g de muestra o je del residuo. Continuar la ignición hasta peso
la cantidad especificada en la monografía corres- constante, a menos que se especifique de otro
pondiente en un crisol apropiado, previamente modo en la monografía correspondiente.
sometido a ignición, enfriado y pesado. Realizar la ignición bajo una campana extrac-
Calentar con un mechero, suavemente al prin- tora bien ventilada, pero protegida de las corrien-
cipio y luego con mayor intensidad, hasta que la tes de aire y a la menor temperatura necesaria
muestra se carbonice totalmente, evitando pro- para lograr la combustión completa del residuo
yecciones y enfriar. Humedecer el residuo con carbonoso. Puede emplearse una mufla, si se
1 ml de ácido sulfúrico, a menos que se especifi- desea, y su uso se recomienda para la ignición
que de otro modo en la monografía correspon- final a 600 50 °C.
diente. Calentar suavemente hasta que no se Comprobar la exactitud de la medición y el
desprendan más vapores blancos y someter a sistema de circuitos de la mufla mediante el con-
ignición a 600 50 °C a menos que se especifi- trol de la temperatura en diferentes puntos del
que otra temperatura en la monografía correspon- horno. Colocar la muestra en la posición más
diente, hasta que el residuo carbonoso se consu- apropiada de acuerdo con las condiciones del
ma. Enfriar en un desecador, pesar y calcular el método a aplicar. La variación de temperatura
porcentaje del residuo. Si la cantidad de residuo tolerada es de 25 °C para cada punto evaluado.
obtenido es mayor al límite especificado en la La calibración de la mufla debe llevarse a ca-
monografía correspondiente, humedecer nueva- bo mediante el empleo de un medidor de tempera-
mente el residuo con 1 ml de ácido sulfúrico, tura digital y una termocupla validada.
calentar y someter a ignición como se indicó
anteriormente y nuevamente calcular el porcenta-
280. DISOLUCION COMPLETA
Colocar la cantidad de sustancia especificada en producto, llenar la probeta. Agitar suavemente para
la monografía correspondiente en una probeta de favorecer la disolución: la solución no debe ser
vidrio de 10 ml, con tapa, perfectamente limpia. menos transparente que un volumen igual del
Empleando el solvente especificado en la mismo solvente contenido en una probeta similar
monografía correspondiente o en el rótulo del examinada de la misma manera.
290. DISTRIBUCIÓN DEL TAMAÑO DE PARTÍCULA EN
POLVOS
El tamizado es el método generalmente Farmacopea se emplea la denominación
empleado para determinar la granulometría de los recomendada por la norma ISO 3310-1990.
polvos de uso farmacéutico. Es particularmente útil
cuando la mayoría de las partículas son mayores de Método de tamizado
100 µm. El método analítico consiste en colocar los
Los tamices se fabrican preferentemente de tamices, indicados en la Tabla, uno sobre otro en
acero inoxidable, bronce u otro material inerte. orden creciente de abertura y luego transferir la
Constan de una malla de alambre tejido, con hilos muestra al tamiz superior. El conjunto de tamices
simples y de aberturas cuadradas o casi cuadradas, se agita mediante un dispositivo mecánico que
la cual se fija a la base de un cilindro abierto. pueda impartir a los tamices ya sea un movimiento
rotatorio con golpes de asentamiento (de 200 a
La granulometría de los polvos se caracteriza en
300 revoluciones horizontales y con 150 a
términos descriptivos, según la abertura nominal del
200 golpes de asentamiento por minuto) o un
tamiz por donde pasa dicho polvo. De esta manera
movimiento vibratorio (1 a 2 mm de amplitud), a
se reconocen los siguientes tipos de polvos:
menos que se especifique de otro modo en la
Polvo grueso - No menos de 100 % pasa a
monografía correspondiente. Luego se determina el
través de un tamiz N° 1,7 y no más de 40 % pasa a
peso del material retenido en cada tamiz. Los
través de un tamiz N° 355.
resultados se expresan en porcentaje de peso de
Polvo moderadamente grueso - No menos de polvo en cada uno de los intervalos determinados
100 % pasa a través de un tamiz N° 710 y no más por el tamaño de abertura de los tamices.
de 40 % pasa a través de un tamiz N° 250.
Polvos gruesos y moderadamente gruesos:
Polvo moderadamente fino - No menos de 95 % colocar de 25 a 100 g de muestra sobre un tamiz,
pasa a través de un tamiz N° 355 y no más de 40 % normatizado. Agitar durante no menos de
pasa a través de un tamiz N° 180. 20 minutos o hasta completar el pasaje del polvo.
Polvo fino - No menos de 95 % pasa a través de Determinar el peso de la muestra que atravesó la
un tamiz N° 180 y no más de 40 % pasa a través de malla y el peso de la muestra remanente en el tamiz.
un tamiz N° 125. Polvos moderadamente finos, finos o muy finos:
Polvo muy fino - No menos de 95 % pasa a proceder según se indica en Polvos gruesos y
través de un tamiz N° 125 y no más de 40 % pasa a moderadamente gruesos empleando cantidades que
través de un tamiz N° 90. no excedan los 25 g y agitando no menos de
30 minutos.
Las denominaciones empleadas para los tamices
se detallan en la Tabla junto con la abertura Para los polvos que tiendan a obturar las
nominal de cada uno. Como regla general en esta aberturas del tamiz cepillar cuidadosamente las
mismas periódicamente durante el ensayo.
*ASTM E 11 US: American Society for Testing and Materials Specification E 11 U.S. Standard Sieve Series.
300. ELECTROFORESIS
Las partículas cargadas, disueltas o dispersas en b) algunos soportes no son eléctricamente
una solución electrolítica migran hacia el electrodo neutros; esto provoca, en muchas ocasiones, un
de polaridad opuesta, bajo la acción de un campo flujo electroendosmótico importante;
eléctrico. c) efectos de calentamiento debidos al efecto
En la electroforesis en gel, el desplazamiento de joule pueden provocar evaporación del solvente
las partículas se retarda por las interacciones con la desde el soporte y por capilaridad, ocurriendo un
matriz de gel que constituye el medio de migración movimiento de la solución desde los extremos hacia
y se comporta como un tamiz molecular. Las el centro. Por lo tanto, la fuerza iónica, tiende a
interacciones entre las fuerzas eléctricas y la aumentar progresivamente.
tamización molecular dan lugar a una velocidad de La velocidad de migración depende
migración diferencial según el tamaño, la forma y la fundamentalmente de cuatro factores: movilidad de
carga de las partículas. Las diferentes la partícula cargada, flujo electroendosmótico, flujo
macromoléculas presentes en una mezcla migran a de evaporación y campo eléctrico. Por lo tanto, es
diferentes velocidades durante el proceso necesario trabajar en condiciones experimentales
electroforético, debido a sus propiedades claramente definidas y emplear, siempre que sea
fisicoquímicas, separándose en fracciones posible, Sustancias de referencia.
concretas. Aparato - Consta de:
Las separaciones electroforéticas se pueden
realizar sin soporte, como por ej., en la - Generador de corriente contínua, cuyo voltaje
electroforesis capilar en solución libre o en medios se pueda controlar y estabilizar.
estabilizantes como placas de capa delgada, - Cubeta electroforética. Generalmente son
películas y geles. rectangulares, de vidrio o plástico rígido, con dos
compartimentos separados, el anódico y el catódico,
ELECTROFORESIS DE LIBRE MIGRACIÓN
que contienen la solución de electrolito. En cada
O FRONTAL
compartimento se introduce un electrodo de, por ej.,
Este método se emplea fundamentalmente para platino o grafito; los cuales se conectan por medio
determinar movilidades electroforéticas de un circuito convenientemente aislado a los
experimentalmente y se caracteriza por brindar correspondientes terminales del Generador de
medidas directas y reproducibles. Se aplica corriente contínua para constituir el ánodo y el
principalmente a sustancias de alto peso molecular cátodo. El nivel de líquido en ambos
y poco difundibles. Las bandas se localizan en compartimentos se debe mantener igualado para
principio mediante un método físico como prevenir efecto sifón.
refractometría o conductimetría. Luego de la La cubeta electroforética se cierra
aplicación de un campo eléctrico definido durante herméticamente para mantener un ambiente
un tiempo exactamente medido, se observa la saturado de humedad durante todo el proceso y
ubicación de las nuevas bandas obtenidas. Las reducir la evaporación de solvente. Se puede
condiciones operativas deben ser tales que permitan emplear un dispositivo de seguridad que corte el
obtener tantas bandas como componentes haya en la paso de corriente eléctrica cuando se levanta la
muestra. tapa. Si la potencia eléctrica que pasa a través del
soporte excede los 10 W, es recomendable
ELECTROFORESIS SOBRE UN SOPORTE O
refrigerar el soporte.
ELECTROFORESIS DE ZONA
- Dispositivo portasoportes:
Este método requiere el empleo de cantidades de Para electroforesis en tiras. La tira soporte,
muestra reducidas. previamente humedecida con la solución
Existen diferentes tipos de soportes, como conductora y con los extremos sumergidos en los
papel, gel de agar, acetato de celulosa, almidón, correspondientes compartimentos electródicos, se
agarosa, metacrilamida y gel mixto. La naturaleza fija y se tensa sobre un portasoporte apropiado,
del soporte introduce numerosos factores que diseñado para prevenir la difusión del electrolito
modifican la movilidad: conductor de la corriente eléctrica, como un
a) debido a las sinuosidades de los canalículos bastidor horizontal, un caballete en V invertida o
del soporte, la distancia recorrida aparentemente es una superficie uniforme con puntos de contacto a
menor que la real; intervalos apropiados.
Para electroforesis en gel. El dispositivo consta reposar para que ocurra la gelificación. Por lo
esencialmente de una placa de vidrio (por ej., un general, la formación del gel requiere
portaobjetos de microscopio) sobre la que se aproximadamente 30 minutos y se completa cuando
deposita, en la totalidad de su superficie, una capa se produce una interfase nítida entre el gel y la capa
firmemente adherida de gel de espesor uniforme. de agua. Eliminar la capa de agua, rellenar el
La conexión entre el gel y la solución conductora se compartimento inferior con la solución reguladora
realiza de varios modos, dependiendo del tipo de indicada en la monografía correspondiente y
aparato empleado. Se deben tomar precauciones destapar los tubos. Introducir los tubos en los
para evitar la condensación de humedad o el dispositivos del compartimento superior y ajustarlos
desecado de la capa sólida. de modo que la parte inferior de los tubos se
- Dispositivo de medida o medio de detección. encuentre inmersa en la solución reguladora del
compartimento inferior. Rellenar los tubos
Procedimiento - Transferir la solución del
cuidadosamente con la solución reguladora
electrolito a los compartimentos electródicos.
Colocar el soporte apropiadamente impregnado con especificada. Preparar la solución muestra y la
el electrolito en la cubeta según las condiciones solución de referencia con el identificador
especificado y aumentar la densidad de estas
indicadas para el tipo de aparato empleado.
soluciones mediante el agregado de sacarosa.
Localizar la zona de aplicación y aplicar la muestra.
Aplicar ambas soluciones en la superficie del gel,
Aplicar la corriente eléctrica durante el tiempo
empleando un tubo diferente para cada solución.
especificado. Luego de desconectar la corriente,
retirar el soporte de la cubeta electroforética, secar Agregar la misma solución reguladora en el
y revelar. compartimento superior. Conectar los electrodos al
generador de corriente y desarrollar la electroforesis
ELECTROFORESIS SOBRE GEL a la temperatura y el voltaje o intensidad de
CILÍNDRICO DE POLIACRILAMIDA corriente constantes especificados en la monografía
En la electroforesis sobre gel cilíndrico de correspondiente.
poliacrilamida, la fase estacionaria está constituida ELECTROFORESIS EN GEL DE
por un gel preparado con una mezcla de acrilamida POLIACRILAMIDA CON DODECIL SULFATO
y N, N’-metilenobisacrilamida; los geles se DE SODIO (SDS-PAGE)
preparan en tubos, generalmente de 0,5 cm de
La electroforesis en gel de poliacrilamida se
diámetro interno y 7,5 cm de longitud; en cada tubo
emplea con fines de caracterización cualitativa de
se aplica una sola muestra.
proteínas en preparaciones biológicas, control de
Aparato - Consta de dos compartimentos pureza y determinaciones cuantitativas.
destinados a las soluciones reguladoras, fabricados La electroforesis analítica en gel es un método
con un material apropiado como polimetacrilato de apropiado para identificar y controlar la
metilo, dispuestos en posición vertical uno arriba homogeneidad de las proteínas en productos
del otro. Cada compartimento está provisto de un farmacéuticos. También se emplea para estimar los
electrodo de platino que se conecta con un pesos moleculares de subunidades proteicas y para
generador de corriente continua que permite determinar las subunidades que componen las
trabajar a intensidad constante o voltaje constante. proteínas purificadas.
Para los geles cilíndricos, el compartimento
superior está provisto en su base de varios Características de los geles de poliacrilamida
dispositivos para los tubos situados equidistantes al Las propiedades de tamización de los geles de
electrodo. poliacrilamida se deben a su particular estructura,
una red tridimensional de fibras y poros obtenida
Procedimiento - [NOTA: se recomienda
mediante enlaces cruzados de unidades de
desgasificar las soluciones antes de la
bisacrilamida bifuncionales con cadenas adyacentes
polimerización y emplear el gel inmediatamente
después de su preparación]. Preparar la mezcla de de poliacrilamida. La polimerización se cataliza a
geles según se especifica en la monografía través de un generador de radicales libres
constituido por persulfato de amonio y
correspondiente. Verter la mezcla de gel en tubos
tetrametiletilendiamina.
apropiados, tapados en la parte inferior, igualar el
Si se aumenta la concentración de acrilamida del
nivel de gel en cada uno de los tubos y rellenar
gel, disminuye su tamaño de poro efectivo. Este se
hasta 1 cm del borde superior. Evitar que queden
burbujas de aire atrapadas en el interior de los define, desde el punto de vista operativo, por sus
tubos. Cubrir la mezcla de gel con una capa de propiedades de tamización molecular; es decir, la
resistencia con la que se opone a la migración de
agua para evitar el contacto con el aire y dejar
macromoléculas. Las concentraciones de moleculares. La migración de los complejos
acrilamida que se pueden emplear se encuentran SDS-polipéptido se efectúa hacia el ánodo, a una
dentro de ciertos límites ya que a altas velocidad superior para los complejos de peso
concentraciones los geles se rompen con mayor molecular más bajo que para aquéllos con peso
facilidad y su manejo es más dificultoso. molecular alto. De este modo, es posible estimar el
Cuando el tamaño de poro disminuye, la peso molecular de una proteína a partir de su
velocidad de migración de la molécula a través del movilidad relativa en un método SDS-PAGE
gel decrece. La resolución para un producto calibrado, siendo la presencia de una única banda
determinado se puede optimizar ajustando el en dicho gel un criterio de pureza.
tamaño de poro del gel o modificando la Las eventuales modificaciones del esqueleto
concentración de acrilamida. Por lo tanto, las polipéptidico, como por ej., una
características físicas de un gel determinado O- o N-glicosilación, tiene un impacto significativo
dependen de su contenido de acrilamida y de sobre el peso molecular aparente de la proteína ya
bisacrilamida. que el SDS no se une del mismo modo a los grupos
Además de la composición del gel, el estado de glucídicos que a los grupos polipéptidicos, por lo
la molécula constituye un factor importante que que en este caso no se mantiene constante la
afecta la movilidad electroforética. Para las relación carga/masa.
proteínas, la movilidad electroforética depende del Condiciones reductoras - La asociación de las
pK de los grupos cargados y del tamaño de la subunidades polipéptidicas y la estructura
molécula; siendo afectada también por la tridimensional de las proteínas se mantiene
naturaleza, concentración y pH de la solución fundamentalmente por la existencia de enlaces
reguladora, la temperatura, la intensidad del campo disulfuro. Uno de los objetivos de la separación
eléctrico aplicado y la naturaleza del material del SDS-PAGE en condiciones reductoras es la ruptura
soporte. de esta estructura por reducción de los enlaces
disulfuro. La desnaturalización y disociación
Electroforésis en gel de poliacrilamida con
completa de las proteínas por tratamiento con
desnaturalización
2-mercaptoetanol o ditiotreitol (DTT) da lugar a un
Este método se emplea para el análisis de desdoblamiento de la cadena polipéptidica, seguido
monómeros polipeptídicos de peso molecular de la formación de un complejo con el SDS. En
comprendido entre 14.000 y 100.000. estas condiciones, el peso molecular de las
La electroforesis en gel de poliacrilamida con subunidades polipéptidicas se puede calcular por
desnaturalización, empleando dodecilsulfato de regresión lineal en presencia de patrones con pesos
sodio (SDS-PAGE), es la técnica electroforética moleculares apropiados.
más empleada para la evaluación de la calidad de Condiciones no reductoras - Para algunos
productos proteicos. De modo general, la análisis no es aconsejable la disociación completa
electroforesis analítica de proteínas se realiza en de la proteína en subunidades peptídicas. Si no se
geles de poliacrilamida en condiciones en las que se emplean agentes reductores como el
asegure la disociación de las proteínas en sus 2-mercaptoetanol o DTT, los enlaces covalentes
subunidades polipeptídicas individuales, disulfuro permanecen intactos manteniéndose la
limitándose los procesos de agregación. Se emplea forma oligomérica de la proteína. Los complejos
frecuentemente para disociar las proteínas antes de SDS-proteína oligomérica migran más lentamente
la aplicación en el gel, el dodecilsulfato de sodio que sus subunidades SDS-polipéptido. Además, las
(SDS), un detergente aniónico fuerte, en proteínas no reducidas no se pueden saturar
combinación con calor. Los polipéptidos completamente con SDS y por lo tanto, no pueden
desnaturalizados se unen al SDS, adquieren carga unirse al detergente en una proporción de masa
negativa y presentan una relación carga/masa constante. Esto hace que la determinación del peso
constante, independientemente del tipo de proteína molecular de estas moléculas por SDS-PAGE sea
considerada. La cantidad de SDS es casi siempre más difícil que los análisis de los polipéptidos
proporcional al peso molecular del polipéptido y es totalmente desnaturalizados, ya que es necesario
independiente de su secuencia ya que los complejos que tanto las proteínas patrón como las proteínas de
SDS-polipéptido migran a través de los geles de la muestra presenten configuraciones similares para
poliacrilamida con movilidades que dependen del que se puedan comparar. Sin embargo, la obtención
tamaño del polipéptido. en el gel de una sola banda coloreada es un criterio
Las movilidades electroforéticas de los de pureza.
complejos SDS-polipéptido resultantes presentan
siempre la misma relación funcional con los pesos
CARACTERíSTICAS DE LA En un gel de poliacrilamida con sistema
ELECTROFORESIS EN GEL CON SISTEMA regulador discontinuo, se recomienda verter el gel
REGULADOR DISCONTINUO de resolución, dejar polimerizar y a continuación
verter el gel de apilamiento ya que la constitución
El método electroforético más usado para la
de los dos geles de archilamida-bisacrilamida es
caracterización de mezclas complejas de proteínas
diferente.
se basa en el empleo de un sistema regulador
Preparación del gel de resolución - En un
discontinuo consistente en dos geles contiguos pero
distintos: un gel inferior, llamado gel de separación erlenmeyer, preparar el volumen apropiado de la
o de resolución, y otro superior, gel de apilamiento. solución de acrilamida que contenga la
concentración deseada para el gel de resolución,
Estos dos geles presentan porosidad, pH y fuerzas
empleando los valores indicados en la Tabla 1.
iónicas diferentes. Además se emplean iones con
Mezclar los componentes en el orden indicado.
diferentes movilidades iónicas en el gel y en la
Antes del agregado de la solución de persulfato de
solución reguladora. La discontinuidad del sistema
provoca una concentración de las muestras de amonio y del tetrametiletilendiamina (TEMED),
mayor tamaño en el gel de apilamiento y por lo filtrar la solución, si fuera necesario, empleando
vacío, a través de una membrana de acetato de
tanto se mejora la resolución. Cuando se aplica la
celulosa (de 0,45 mm de diámetro); mantener la
corriente eléctrica, se desarrolla un gradiente de
solución bajo vacío por rotación de la unidad de
potencial negativo a través de la solución muestra
filtración hasta que no se formen más burbujas.
que conduce a las proteínas hacia el gel de
apilamiento. Los iones glicinato contenidos en la Agregar las cantidades apropiadas de solución de
solución reguladora empujan a las proteínas hacia el persulfato de amonio y de TEMED indicadas en la
Tabla 1, agitar y verter rápidamente en el espacio
gel de apilamiento. Se forma rápidamente una zona
de separación entre las dos placas de vidrio del
de frente móvil cuya cabecera está constituida por
molde. Dejar espacio suficiente para el gel de
iones cloruro de alta movilidad, seguidos de iones
glicinato más lentos en la cola. Se produce un apilamiento (la longitud de un diente del peine más
gradiente de alto voltaje localizado entre los frentes 1 cm). Empleando una pipeta de vidrio de punta
larga, recubrir la solución con isobutanol saturado
iónicos de cabeza y cola, provocando que los
con agua. Dejar el gel en posición vertical a
complejos SDS-proteína se concentren en una zona
temperatura ambiente para que se produzca la
muy estrecha (apilamiento) y migren entre las fases
polimerización.
de cloruro y glicinato. Independientemente del
volumen de muestra aplicado, el conjunto de Preparación del gel de apilamiento – Luego de
complejos SDS-proteína se condensa en una región la polimerización completa del gel de resolución
(aproximadamente 30 minutos), retirar la capa
muy estrecha y penetran en el gel de separación en
superior de isobutanol y lavar varias veces con agua
forma de banda estrecha, bien definida y de alta
la parte superior del gel para eliminar la capa de
densidad proteica. El gel de apilamiento, de tamaño
isobutanol y la posible acrilamida no polimerizada.
de poro, grande, no retarda la migración de la
mayoría de las proteínas y actúa principalmente Eliminar la mayor cantidad posible de líquido de la
como medio anticonvectivo. En la interfase de superficie del gel eliminando el resto de agua con la
ayuda de un papel de filtro.
ambos geles, las proteínas experimentan un
En un erlenmeyer, preparar un volumen
incremento brusco de retardo electroforético debido
apropiado de solución que contenga la
al menor tamaño de poro del gel de resolución.
Una vez que se encuentran en este gel, las proteínas concentración requerida para el gel de resolución,
continúan avanzando lentamente por el efecto de según se indica en la Tabla 2. Mezclar los
componentes en el orden indicado. Antes del
tamización molecular que ejerce la matriz. Los
agregado de la solución de persulfato de amonio y
iones glicinato migran por delante de las proteínas,
del tetrametiletilendiamina, filtrar la solución, si
por lo que éstas se mueven en un medio de pH
fuera necesario, empleando vacío, a través de una
uniforme formado por el tris(hidroximetil)amino-
metano y la glicina. La tamización molecular hace membrana de acetato de celulosa (de 0,45 mm de
que la separación de los complejos SDS-polipéptido diámetro); mantener la solución bajo vacío por
rotación de la unidad de filtración hasta que no se
se base en sus correspondientes pesos moleculares.
formen más burbujas. Agregar las cantidades
PREPARACIÓN DE GELES DE apropiadas de solución de persulfato de amonio y
POLIACRILAMIDA SDS VERTICALES CON de TEMED, indicadas en la Tabla 2, agitar y verter
SISTEMA REGULADOR DISCONTINUO rápidamente en el espacio de separación entre las
Preparación de los geles dos placas de vidrio del molde, directamente sobre
la superficie del gel de resolución polimerizado. De
inmediato, insertar un peine limpio de espaciadores, cortar y tirar el gel de apilamiento y
politetrafluoroetileno en la solución del gel de proceder inmediatamente a la tinción.
apilamiento, evitando la formación de burbujas de DETECCIÓN DE PROTEÍNAS EN GELES
aire. Agregar más solución del gel de apilamiento
hasta rellenar completamente los espacios del peine. Todas las etapas de tinción de geles se realizan a
Colocar el gel en posición vertical y dejar temperatura ambiente con agitación suave (por ej.,
polimerizar a temperatura ambiente. en una placa de movimiento giratorio) en un
recipiente apropiado.
Montaje del gel en el equipo de electroforesis
y separación electroforética Tinción con Coomassie - Es el método de
tinción de proteínas más empleado, con un nivel de
Solución reguladora de desarrollo SDS-
detección del orden de 1 a 10 g de proteína por
PAGE - Disolver en agua 151,4 g de
banda.
tris(hidroximetil)aminoetano, 721,0 g de glicina y
Solución colorante de Coomassie - Disolver
50,0 g de lauril sulfato de sodio, y completar a
1,25 g de Azul brillante de Coomassie R-250 en
5 litros con agua. Inmediatamente antes del uso,
1 litro de una mezcla de agua, metanol y ácido
diluir 10 veces su volumen con agua y mezclar. El
acético glacial (5:4:1).
pH de esta solución debe estar comprendido entre
Solución de decoloración - Emplear una mezcla
8,1 y 8,8.
de agua, metanol y ácido acético glacial (5:4:1).
Procedimiento - Una vez completada la
Procedimiento - Sumergir el gel en un exceso
polimerización (aproximadamente 30 minutos),
de Solución colorante de Coomassie y dejar en
retirar cuidadosamente el peine de
contacto por lo menos durante 1 hora. Eliminar la
politetrafluoroetileno y lavar los pocitos, de
Solución colorante de Coomassie. Decolorar el gel
inmediato, con agua o Solución reguladora de
con un exceso de Solución de decoloración.
desarrollo SDS-PAGE para eliminar la posible
Cambiar la Solución de decoloración varias veces
acrilainida no polimerizada. Recortar los dientes
hasta que las bandas de proteínas teñidas se
del gel de apilamiento, si fuera necesario, con una
distingan nítidamente sobre un fondo claro. Cuanto
aguja hipodérmica roma fijada a una jeringa.
más se lave, menor será la cantidad de proteína que
Quitar las pinzas de uno de los lados cortos, retirar
se pueda detectar. La decoloración se puede
el tubo con precaución y volver a colocarlas.
acelerar agregando en la Solución de decoloración
Proceder del mismo modo en el otro. Retirar el
algunos gramos de resina de intercambio aniónico.
tubo de la parte inferior del gel, montar el gel en el
[NOTA: las soluciones ácido-alcohólicas
aparato de electroforesis y agregar las soluciones
empleadas en este procedimiento no fijan por
reguladoras en los compartimentos superior e
completo las proteínas en el gel. Esto puede
inferior. Eliminar las burbujas que se formen en la
conducir a la pérdida de algunas proteínas de bajo
parte inferior del gel, entre las dos placas de vidrio;
peso molecular durante el proceso de tinción y
preferiblemente efectuar este procedimiento con
decoloración de geles finos. La fijación permanente
una aguja hipodérmica doblada fijada a una jeringa.
se obtiene introduciendo el gel en una mezcla de
[NOTA: nunca realizar un predesarrollo sin
agua, metanol y ácido tricloroacético (5:4:1)
muestras ya que se destruye la discontinuidad de los
durante 1 hora antes de introducirlo en la Solución
sistemas reguladores]. Antes de aplicar las
colorante de Coomassie.]
muestras, lavar cuidadosamente la ranura con
Solución reguladora de desarrollo SDS-PAGE. Tinción con plata - Es el método más sensible
Preparar la solución muestra y la solución de para proteínas teñidas en geles y permite detectar
referencia en el medio recomendado y proceder bandas que contengan 10 a 100 ng de proteína.
según se especifica en la monografía Reactivo de nitrato de plata - A una mezcla de
correspondiente. Aplicar el volumen apropiado de 3 ml de amoníaco concentrado y 40 ml de hidróxido
cada solución en los pocitos del gel de apilamiento de sodio 1 M, agregar 8 ml de una solución al 20 %
y desarrollar la electroforesis. En ocasiones resulta de nitrato de plata, gota a gota, y con agitación.
necesario modificar el tiempo y la relación Diluir con agua a 200 ml.
intensidad/voltaje, para obtener una separación Solución de fijación. - A 250 ml de metanol,
óptima. Comprobar que el frente del indicador se agregar 0,27 ml de solución de formaldehído al
desplace en el gel de resolución. Cuando el 35 % y diluir con agua a 500 ml.
indicador alcance la parte inferior del gel, detener la Solución de desarrollo - Diluir 2,5 ml de una
electroforesis. Retirar el montaje del gel del solución al 2 % de ácido cítrico y 0,27 ml de
aparato y separar las placas de vidrio. Retirar los solución de formaldehído al 35 % con agua a
500 ml.
Solución de bloqueo - Emplear una solución al concentradas de proteínas de peso molecular
10 % v/v de ácido acético. conocido preparadas en la solución reguladora de
Procedimiento - Introducir el gel en exceso en muestra se aplican en el mismo gel contiene la
Solución de fijación durante 1 hora. Eliminar la muestra de la proteína a analizar.
Solución de fijación, agregarla de nuevo e incubar Inmediatamente después del desarrollo
otra vez durante por lo menos 1 hora o durante toda electroforético, señalar la posición del indicador,
la noche, si es conveniente. Eliminar la Solución de azul de bromofenol, para identificar el frente de
fijación y lavar el gel con abundante agua durante migración de los iones. Después de la tinción,
1 hora. Embeber el gel durante 15 minutos en una medir las distancias de migración de cada banda
solución de glutaraldehído al 1 % v/v. Lavar el gel proteica (marcadores y muestras). Dividir la
dos veces durante 15 minutos con abundante agua. distancia de migración de cada proteína por la
Embeber el gel en Reactivo de nitrato de plata distancia de migración del indicador. Las distancias
recientemente preparado, durante 15 minutos, en la de migración normalizadas así obtenidas se
oscuridad. Lavar el gel tres veces durante denominan movilidades relativas de las proteínas
5 minutos con abundante agua, sumergirlo durante (relativas al frente del indicador) y, por convención,
aproximadamente 1 minuto en Solución de se expresan como Rf . Graficar el logaritmo de los
desarrollo hasta que se obtenga una tinción pesos moleculares relativos (Mr) de las proteínas
satisfactoria. Detener el desarrollo por incubación patrón en función de los valores de Rf. Los pesos
en Solución de bloqueo durante 15 minutos y lavar moleculares desconocidos se pueden determinar por
el gel con agua. regresión lineal o por interpolación a partir de las
DESECADO DE GELES DE curvas obtenidas; los valores obtenidos para las
muestras se deben encontrar contenidos en la parte
POLIACRILAMIDA SDS TEÑIDOS
lineal del gráfico.
Los geles se someten a diferentes tratamientos,
dependiendo del método empleado para teñirlos. VALIDACIÓN DEL ENSAYO
Cuando se emplea Tinción con Coomassie, luego de El ensayo sólo es válido si las proteínas
la etapa de decoloración, colocar el gel en una empleadas como marcadores de pesos moleculares
solución al 10 % de glicerol durante por lo menos se distribuyen a lo largo del 80 % de la longitud del
2 horas, siendo posible una incubación durante toda gel y además si, en el intervalo de separación
la noche. Cuando se emplea Tinción con plata, al requerido, la separación obtenida para las bandas de
finalizar el proceso de lavado, sumergir los geles en proteínas relevantes, presenta una relación lineal
una solución al 2 % de glicerol, durante 5 minutos. entre el logaritmo de peso molecular y el Rf . En la
Sumergir dos hojas de celulosa porosa en agua monografía correspondiente se especifican los
durante 5 a 10 minutos, colocar una de las hojas en requisitos de validación adicionales referentes a la
el cuadro de secado, levantar el gel cuidadosamente solución muestra.
y colocarlo sobre la hoja de celulosa. Eliminar las
CUANTIFICACIÓN DE IMPUREZAS
burbujas de aire que eventualmente puedan haber
sido retenidas y algunos ml de agua a lo largo de los Cuando en la monografía se especifica el límite
bordes del gel. Recubrir con la segunda hoja de de impurezas, se debe preparar una solución de
papel y eliminar nuevamente las posibles burbujas referencia correspondiente al nivel de impureza
de aire retenidas. Colocar en estufa para completar especificado, por dilución de la solución muestra.
el secado o dejar secar a temperatura ambiente. En el electroforegrama obtenido a partir de la
solución muestra, ninguna impureza (ni ninguna
DETERMINACIÓN DE PESO MOLECULAR banda, a excepción de la principal) puede ser más
El peso molecular de las proteínas se determina intensa que la banda principal obtenida a partir de la
mediante comparación de sus respectivas solución de referencia.
movilidades con las de varios marcadores de peso Cuando se trabaja en las condiciones validadas,
molecular conocido. Para la calibración de los es posible cuantificar las impurezas por
geles se dispone de mezclas de proteínas de peso normalización con relación a la banda principal,
molecular conocido, que permiten obtener una empleando un densitómetro. En estos casos, se
tinción uniforme. Las soluciones madre debe comprobar la linealidad de las repuestas.
Tabla 1. Preparación del gel de resolución.
Componentes de la Volumen de cada componente por volumen de gel de moldeado
solución de acrilamida (ml)
5 10 15 20 25 30 40 50
6%
Tris pH 8,8 (1,5 M) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
SDS 10 % (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
PSA 10 % (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED (5) 0,004 0,008 0,012 0,016 0,02 0,024 0,032 0,04
8%
Tris pH 8,8 (1,5 M) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
SDS 10 % (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
PSA 10 % (4)- 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED (5) 0,003 0,006 0,009 0,012 0,015 0,018 0,024 0,03
10 %
Tris pH 8,8 (1,5 M) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
SDS 10 % (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
PSA 10 % (4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(5)
TEMED 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
12 %
Tris pH 8,8 (1,5 M) (2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(3)
SDS 10 % 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(4)-
PSA 10 % 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED (5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
Tabla 1 - continuación. Preparación del gel de resolución.
Componentes de la Volumen de cada componente por volumen de gel de moldeado
solución de acrilamida (ml)
5 10 15 20 25 30 40 50
14 %
PSA 10 % (4)- 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED (5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
15 %
SDS 10 % (3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
PSA 10 % (4)- 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED (5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
Medio - El medio de disolución es preferentemente Colocar en cada uno de seis vasos el volumen de
agua desgasificada. Pueden emplearse, según las Medio especificado, colocar los vasos en el equipo,
características de solubilidad del principio activo o equilibrar el Medio a 37,0 ± 0,5 °C y retirar los
de la formulación, soluciones reguladoras de pH 4 a termómetros. Colocar un comprimido o una
8 o ácido clorhídrico 0,001 a 0,1 N. El volumen cápsula en cada vaso, teniendo cuidado de excluir
empleado es 900 ml pudiendo variar entre 500 y las burbujas de aire de la superficie de la unidad de
900 ml. Si el medio es una solución reguladora, dosificación y de inmediato, iniciar la rotación del
ajustar el pH a ± 0,05 unidades del pH especificado elemento de agitación a la velocidad especificada
en la misma. Los gases disueltos pueden producir en la monografía correspondiente. Cumplido el
burbujas que pueden modificar los resultados del tiempo especificado, o a cada uno de los tiempos
ensayo. En esos casos los mismos deben eliminarse establecidos, retirar una alícuota de una zona a una
antes del ensayo. Para ello puede emplearse el distancia media entre la superficie del Medio y la
siguiente método: calentar el medio a 45 °C parte superior del canastillo o de la paleta rotatoria
aproximadamente, agitando suavemente, filtrar y a no menos de 10 mm de la pared del vaso.
inmediatamente aplicando vacío empleando un [NOTA: reemplazar las alícuotas retiradas para el
filtro de 0,45 m o porosidad menor, agitando análisis con volúmenes iguales de Medio calentado
vigorosamente y continuar la agitación aplicando a 37 °C o, cuando se demuestra que la reposición de
vacío aproximadamente durante 5 minutos. Pueden medio no es necesaria, aplicar en los cálculos una
emplearse otras técnicas de desgasificación corrección por el cambio de volumen]. Mantener el
validadas. vaso cubierto durante el tiempo que dure el ensayo
Tiempo - Si se especifican dos o más tiempos, y verificar la temperatura dentro de cada vaso a
las muestras se retirarán sólo en los tiempos intervalos apropiados. Filtrar y analizar las
especificados con una tolerancia de ± 2 %. alícuotas extraídas según se especifica en la
Muestreo individual - monografía correspondiente. [NOTA: emplear un
Procedimiento - Este procedimiento se realiza filtro inerte que no produzca adsorción del principio
sobre seis unidades de la forma farmacéutica. activo o contenga sustancias extraíbles que
interfieran el análisis. Si se emplea un equipo con individual pero combinar volúmenes iguales de las
toma de muestra automática; cada vez que se alícuotas filtradas, extraídas de cada uno de los
introduzcan modificaciones en el equipo, es vasos y emplear la muestra unificada como solución
necesaria la validación del mismo para demostrar muestra. Determinar la cantidad promedio de
que no hay cambios durante el desarrollo del principio activo disuelto en la muestra unificada.
ensayo]. Interpretación -
Cuando la cubierta de la cápsula interfiere con Muestreo individual - A menos que se
el análisis, extraer el contenido de no menos de seis especifique de otro modo en la monografía
cápsulas y disolver las cubiertas de las cápsulas en correspondiente, los requisitos se cumplen si la
el volumen especificado de Medio. Realizar el cantidad de principio activo disuelto se ajusta a la
análisis según se especifica en la monografía Tabla 1. En caso que los resultados no se ajusten al
correspondiente, empleando la solución anterior límite especificado en E1 continuar el ensayo con E2
como blanco y hacer las correcciones necesarias. y si no cumple con la exigencia de E2 proseguir
El factor de corrección no debe ser mayor de 25 % hasta E3.. La cantidad, Q, es la cantidad de
del contenido declarado. principio activo disuelto, especificada en la
Muestreo unificado - monografía correspondiente, expresada como un
Procedimiento - Emplear este procedimiento porcentaje del contenido declarado. Los valores de
cuando en la monografía correspondiente se 5, 15 y 25 % en la Tabla 1 corresponden a
especifique un Procedimiento para muestreo porcentajes del contenido declarado de modo que
unificado. Proceder según se indica en Muestreo estos valores y Q están en los mismos términos.
.
Tabla 1
Mutación operón
Cepa Reversión bio uvrB LPS Plásmido
histidina
Corrimiento de
TA 97a hisD6610 Deleción rfa pKM101
armazón
Corrimiento de
TA 98 hisD3052 Deleción rfa pKM101
armazón
TA 100 his G46 Sustitución Deleción rfa pKM101
Transición
TA 102 hisG428 Tipo salvaje rfa pKM101, pAQ1
/transversión
TA 1535 his G46 Sustitución Deleción rfa -
Corrimiento de
TA 1538 hisD3052 Deleción rfa -
armazón
biouvrB: la mutación por deleción de uvrB química e inducida por UV mediante un aumento de
elimina el sistema de reparación de ADN por la ruta de reparación por recombinación, propensa a
escisión. Eso aumenta la mutabilidad de la bacteria error. El plásmido confiere resistencia a ampicilina.
y la hace sensible a la irradiación con luz UV. La Plásmido pAQ1: este plásmido multicopia lleva
deleción abarca también el gen para biotina lo que la mutación hisG428. Eso amplifica el número de
hace que la bacteria sea dependiente de biotina. sitios para la acción del mutágeno con el
rfa: esta mutación produce una síntesis consiguiente aumento de reversión de la cepa
defectuosa del lipopolisacárido (LPS) de pared lo portadora. El plásmido confiere resistencia a
que aumenta la permeabilidad de la bacteria para tetraciclina.
compuestos voluminosos. La bacteria se vuelve Soluciones y medios de cultivo
sensible al colorante Cristal Violeta.
Plásmido pKM101: aumenta la mutagénesis Soluciones
Cada ensayo debe realizarse con una misma Cloruro de magnesio...................................1,8 g
partida de reactivos, soluciones, medios y agar. Cloruro de potasio.......................................2,7 g
Fosfato dibásico de sodio…......................12,8 g
Preparación de soluciones
Fosfato monobásico de sodio......................2,8 g
A menos que se indique de otro modo las
Agua destilada c.s.p....................................1 litro
soluciones y los medios se esterilizarán en
autoclave. El tiempo total de tratamiento, a 121 ºC, Agregar a 900 ml de agua los ingredientes uno a
dependerá del volumen total a esterilizar. uno, disolviendo por completo cada uno antes de
agregar el siguiente. Completar a volumen con
I. Solución de glucosa al 10 %
agua. Esterilizar por filtración a través de
D-glucosa (Dextrosa).................................100 g membrana filtrante de 0,22 µm. Conservar a
Agua destilada c.s.p..................................1 litro -20 °C.
Agregar la D-glucosa a 700 ml de agua. VII. Solución de ampicilina al 0,8 %
Mezclar hasta que la solución sea límpida.
Ampicilina...............................................800 mg
Completar a volumen con agua destilada.
Fraccionar en volúmenes superiores a 20 ml. Agua destilada..........................................100 ml
Autoclavar. Conservar en heladera. Disolver la ampicilina en el agua caliente
(aproximadamente 40 °C). Esterilizar por filtración
II. Solución de biotina al 0,01 %
a través de membrana filtrante de 0,22 µm.
D-biotina....................................................10 mg Conservar en heladera.
Agua destilada..........................................100 ml
VIII. Solución de tetraciclina al 0,8 %
Calentar el agua (aproximadamente a 40 °C) y
disolver la D-biotina. Esterilizar por filtración a Tetraciclina..............................................800 mg
través de membrana filtrante de 0,22 µm. Agua destilada:Etanol (1:1)......................100 ml
Conservar en heladera. Disolver la tetraciclina en la mezcla de agua
destilada:etanol (1:1). Esterilizar por filtración a
III. Solución de histidina al 0,5 %
través de membrana filtrante de 0,22 µm.
L-histidina . HCl . H2O............................500 mg Conservar en envase inactínico en heladera.
Agua destilada..........................................100 ml
IX. Solución de cristal violeta al 0,1 %
Disolver la histidina en el agua destilada.
Cristal violeta..........................................100 mg
Autoclavar y conservar en heladera.
Agua destilada..........................................100 ml
IV. Solución de histidina/biotina 0,5 mM
Disolver el cristal violeta en el agua. Conservar
D-biotina..................................................124 mg en envase inactínico en heladera.
L-histidina . HCl . H2O..............................96 mg
Agua destilada............................................1 litro X. Soluciones madres de mutágenos control
Agregar los ingredientes a 650 ml de agua Para preparar 1 litro de medio mínimo – glucosa
caliente (aproximadamente a 50 °C) en el orden enriquecido agregar los siguientes volúmenes a
indicado y mezclar con agitador magnético hasta 1 litro del medio agarizado preparado en V. Placas
disolución total antes del agregado del componente de medio mínimo-glucosa (MG):
siguiente. Completar a volumen con agua. Placas MG-biotina
Fraccionar, esterilizar a 121 °C en autoclave Solución de biotina al 0,01 %.......................8 ml
durante 15 minutos. Conservar en envases
inactínicos a temperatura ambiente. Placas MG-histidina
Solución de histidina al 0,5 %......................8 ml
II. Agar blando suplementado con
Placas MG-biotina/histidina
histidina/biotina
Solución de biotina al 0,01 %……………...8 ml
Agar................................................................6 g Solución de histidina 0,5 %..........................8 ml
Cloruro de sodio.............................................6 g
Solución de histidina/biotina 0,5 mM.......100 ml Placas MG-biotina/histidina/Ampicilina
Solución de biotina al 0,01 %.......................8 ml
Agua destilada c.s.p....................................1 litro
Solución de histidina al 0,5 %......................8 ml
Autoclavar el agua con el agar y el cloruro de Solución de ampicilina al 0,8 %...................3 ml
sodio, a 121°C durante 15 minutos. Conservar en (concentración final 24 µg por ml)
envases inactínicos a temperatura ambiente. En el
momento de usar fundir el medio preparado en Placas MG-biotina/histidina/Ampicilina/
microondas o en agua hirviente y agregar la Tetraciclina
Solución de biotina al 0,01 %.......................8 ml
Solución estéril de histidina/biotina 0,5 mM.
Solución de histidina al 0,5 %......................8 ml
III. Caldo nutritivo Solución de ampicilina al 0,8 %...................3 ml
Seguir las instrucciones del fabricante que (concentración final 24 µg por ml)
figuran en el envase. Solución de tetraciclina al 0,8 %.............0,25 ml
(concentración final 2 µg por ml)
IV. Placas de agar nutritivo
Recuperación de las cepas para su
Seguir las instrucciones del fabricante que caracterización fenotípica y para la realización
figuran en el envase. Luego de la esterilización del ensayo
dejar entibiar y volcar en placas de Petri de plástico
estériles. Para cada ensayo las cepas de Salmonella se
recuperan tomando una alícuota del cultivo
V. Placas de medio mínimo-glucosa (MG) congelado y transfiriéndola a caldos nutritivos (con
Agar...............................................................15 g el agregado de antibiótico en los casos que
Medio E (50x).............................................20 ml corresponda para evitar la pérdida de los plásmidos)
Solución de glucosa al 10 %.......................50 ml de manera de obtener una densidad inicial
Agua destilada c.s.p....................................1 litro aproximada de células de entre 106 y 107 UFC por
ml. Los caldos se incuban con agitación suave
Agregar el agar al agua y autoclavar a 121 °C entre 11 y 14 hs a 37 °C hasta una densidad de
durante 30 minutos. Dejar enfriar hasta alrededor
1-2 109 UFC/ml (fase exponencial de crecimiento Todas las cepas deben mostrar una zona de
o comienzo de fase estacionaria). Se sugiere inhibición de crecimiento alrededor del disco
realizar un recuento en placa, mediante diluciones después de 24 horas de incubación a 37 ºC.
seriadas, para confirmar el número de bacterias
e) Deleción uvrB
viables. Concluida la incubación los caldos se
Se realiza un aislamiento del cultivo en una
mantienen a temperatura ambiente protegidos de la
Placa MG-biotina/histidina o en una placa de agar
exposición a la luz fluorescente. De ahora en
nutritivo. Se irradia la placa con luz UV(C) durante
adelante estos caldos serán denominados Cultivos
un período de tiempo previamente estandarizado, se
de trabajo.
envuelve en papel de aluminio para evitar la
NOTA: el resto del cultivo congelado no se fotorreparación en contacto con la luz y se incuba a
reutiliza. 37 °C. Excepto la cepa TA102 el resto de las cepas
Caracterización fenotípica de las cepas de de Salmonella no crecen después de la irradiación.
Salmonella typhimurium utilizadas para la f) Presencia del plásmido pKM101
realización del ensayo (resistencia a ampicilina)
A continuación se describen los ensayos a Se realiza un aislamiento del cultivo en una
realizar con las cepas de Salmonella typhimurium Placa MG-biotina/histidina/Ampicilina o en una
que se utilizarán para la realización del ensayo con placa de agar nutritivo con ampicilina (24 g por
el propósito de confirmar la identidad genética de ml). Se incuba a 37 ºC y debe observarse
las mismas y su tasa de reversión espontánea al crecimiento sólo con las cepas portadoras del
carácter his+. plásmido pKM101.
Estos ensayos deben ser realizados cuando se g) Presencia del plásmido pAQ1 (resistencia a
preparen cultivos de las cepas para ser congelados y tetraciclina)
antes de la realización del Ensayo de Se hace un aislamiento del cultivo en una Placa
Salmonella/Fracción microsomal (Test de Ames) MG-biotina/histidina/Ampicilina/Tetraciclina o en
para la detección de mutagenicidad de compuestos
una placa de agar nutritivo con tetraciclina (2 g
químicos y productos biológicos.
por ml). Se incuba a 37 ºC y debe observarse
Procedimiento crecimiento sólo con la cepa TA102 que es la única
Los ensayos se realizan con cultivos de toda la portadora del plásmido pAQ1.
noche en caldo nutritivo (cultivos de trabajo). NOTA: Las pruebas anteriores pueden
a) Dependencia de histidina (his) realizarse también haciendo una pequeña descarga
Se realiza un aislamiento del cultivo en una horizontal del cultivo en la placa que corresponda
Placa MG-biotina. Como todas las cepas utilizadas en lugar de un aislamiento, lo que permite utilizar
de Salmonella son dependientes de histidina, no una sola placa de cada tipo para evaluar varios
debe observarse crecimiento luego de 48 horas de clones por placa.
incubación a 37 ºC. h) Frecuencia de mutación espontánea
b) Dependencia de biotina (bio) Para determinar la frecuencia de mutación
Se realiza un aislamiento del cultivo en una espontánea de las cepas de Salmonella se emplea el
Placa MG-histidina. No debe observarse método de incorporación en placa (ver más
crecimiento, excepto con la cepa TA102 que es adelante). Los valores de reversión espontánea
independiente de biotina luego de 48 hs de deben encontrarse dentro del rango de valores
incubación a 37 ºC. histórico del laboratorio para cada cepa o del
informado por el proveedor.
c) Dependencia de biotina e histidina (bio,
his) Ensayo de Salmonella/Fracción microsomal
Se realiza un aislamiento del cultivo en una (Test de Ames) para detección de mutagenicidad
Placa MG-biotina/histidina. Debe observarse En esta sección se describirá la realización del
crecimiento con todas las cepas luego de 24-48 hs Ensayo de Salmonella/Fracción microsomal (Test
de incubación a 37 ºC.. de Ames) para la detección de mutagenicidad de
d) Marcador rfa compuestos químicos y productos biológicos.
Se realiza un aislamiento del cultivo en una Preparación de la muestra
Placa MG-biotina/histidina, o en una placa de agar
nutritivo. Se coloca un disco de papel de filtro Solventes
estéril en el centro de la siembra y se aplican sobre Se utilizará preferentemente agua destilada
estéril. Si la muestra a probar no es soluble en agua
él, 10 l de solución de cristal violeta al 0,1 %.
se utilizará dimetil sulfóxido. 6) Agregar a los tubos de vidrio estériles
Si se emplea otro solvente se realizará un mantenidos entre 43 y 45 ºC, en el orden siguiente y
ensayo preliminar de toxicidad del mismo para mezclando después de cada agregado:
determinar la concentración máxima que no afecte Entre 2 y 3 ml de Agar blando suplementado
el crecimiento y supervivencia bacterianos. con histidina/biotina.
Determinación preliminar de la toxicidad de 0,50 ml de la mezcla de activación metabólica
la muestra en estudio (mezcla S9) o de Solución reguladora de
Para esta etapa se empleará el procedimiento de fosfato de sodio 0,2 M pH 7,4
incorporación en placa del Test de Ames que se 0,05 ml de la muestra en ensayo
describe más adelante. 0,1 ml del cultivo de trabajo de la cepa de
Se realizará un ensayo preliminar de toxicidad Salmonella (entre 1 y 2 108 UFC por
para determinar la dosis máxima de la muestra que tubo).
puede emplearse en el ensayo de mutagenicidad. 7) Volcar el contenido de cada tubo en una placa
Esta prueba se realizará en ausencia y presencia de agar MG y dejar solidificar el agar blando a
de la mezcla de activación metabólica y deberán temperatura ambiente.
incluirse un control positivo y uno de solvente. Se 8) Invertir las placas y colocarlas en la estufa de
probarán al menos tres concentraciones de la cultivo a 37 ºC durante 48 horas.
solución (acuosa u orgánica) de la muestra. 9) Contar las colonias revertantes aparecidas en
El ensayo de toxicidad puede llevarse a cabo cada placa.
con una sola cepa (TA100 o TA98, o las cepas que Sembrar cada condición por triplicado.
se emplearán en el ensayo definitivo). Ensayo de preincubación
La cepa se pondrá en presencia de su mutágeno En esta variante del método se preincuba la
específico (por ej. 2-nitro fluoreno para TA98) y se solución de la muestra con la cepa
observará la disminución en el recuento de (aproximadamente 108 UFC por tubo) en presencia
revertantes como resultado de la inhibición de y ausencia del sistema de activación metabólica
crecimiento por la muestra. durante 20 a 30 minutos a 37 ºC antes de mezclar
Se empleará la menor dilución de la muestra que con el agar blando (adicionado de biotina y trazas
no inhiba el crecimiento bacteriano para la de histidina) y volcarlo sobre la superficie de la
realización del ensayo definitivo. placa de medio mínimo con glucosa.
En el caso de productos no tóxicos se propone Los tubos deben ser preincubados con agitación.
una dosis máxima entre 5 y 10 mg por placa Procedimiento experimental
siempre que la solubilidad de los mismos lo 1) Preparar los cultivos de trabajo según lo
permita. descripto anteriormente.
Procedimientos 2) Rotular las placas MG y los tubos de vidrio
Ensayo de incorporación en placa estériles de 13 100 mm.
En este ensayo se exponen directamente las 3) Preparar el sistema de activación metabólica
cepas de Salmonella a la acción de la muestra a y mantenerlo sobre hielo hasta el momento de usar.
probar sobre Placas de medio mínimo-glucosa 4) Preparar las diluciones de la muestra a ser
(MG) en presencia y ausencia de un sistema probada. Se propone un mínimo de cinco
exógeno de activación metabólica. diluciones de la muestra en estudio, que cubran un
Procedimiento experimental rango de tres órdenes de magnitud.
1) Preparar los cultivos de trabajo según lo 5) Fundir el agar blando (AB) conteniendo 0,05
descripto anteriormente. mM histidina y 0,05 mM biotina y mantenerlo entre
2) Rotular las Placas de medio mínimo-glucosa 43 y 45 ºC.
(MG) y los tubos de vidrio estériles de 6) Agregar a los tubos de vidrio estériles
13 100 mm. mantenidos a 43 y 45 ºC, en el orden siguiente y
3) Preparar el sistema exógeno de activación mezclando después de cada agregado:
metabólica y mantenerlo sobre hielo hasta el 0,50 ml de la mezcla de activación metabólica
momento de su uso. (mezcla S9) o de Solución reguladora de
4) Preparar las diluciones de la muestra a ser fosfato de sodio 0,2 M pH 7,4
probadas. Se propone un mínimo de cinco 0,05 ml (o 0,1 ml) de la muestra a probar
diluciones de la muestra en estudio, que cubran un 0,1 ml del cultivo de trabajo de la cepa de
rango de tres órdenes de magnitud. Salmonella (entre 1 y 2 108 UFC por tubo)
5) Fundir el Agar blando suplementado con 7) Incubar los tubos en baño con agitación a
histidina/biotina y mantenerlo entre 43 y 45 ºC. 37 °C durante 20-30 minutos. Concluida la
incubación agregar a cada tubo entre 2 y 3 ml de Controles positivos y negativos
Agar blando suplementado con histidina/biotina. En todas las pruebas deben incluirse controles
8) Volcar el contenido de cada tubo en una placa positivos y negativos.
de agar MG y dejar solidificar el agar blando a El control negativo es el solvente empleado para
temperatura ambiente. solubilizar y diluir la muestra en estudio y deberá
9) Invertir las placas y colocarlas en la estufa de ser probado en ausencia y presencia del sistema
cultivo a 37 ºC durante 48 horas. exógeno de activación metabólica.
10) Contar las colonias revertantes aparecidas Los controles positivos se emplean en las
en cada placa. cantidades por placa que se indican a continuación:
Sembrar cada condición por triplicado.
En el caso del 2-Amino antraceno es necesario ensayar en ausencia y presencia del sistema exógeno de
activación metabólica ya que adquiere actividad mutagénica al ser metabolizado.
Tabla.
El siguiente ensayo se emplea para verificar la Ajustar el pH del medio con hidróxido de
ausencia de contaminación por microorganismos sodio 1 N para obtener, después de la
en productos esterilizados o preparados esterilización, un pH de 7,1 ± 0,2. Filtrar en
asépticamente. Durante el desarrollo del ensayo, caliente, si fuera necesario, a través de un papel de
el área de trabajo no debe estar expuesta a la luz filtro humedecido. Distribuir el medio en
ultravioleta directa ni sometida a otros agentes recipientes de vidrio que mantengan una relación
esterilizantes. Deben realizarse monitoreos entre la superficie expuesta y la profundidad de
microbiológicos del área durante los ensayos. medio tal que no más de la mitad superior
La ausencia de contaminación microbiana, experimente un cambio de color, indicativo de la
evidenciada por este procedimiento, confirma que fijación de oxígeno, al final del período de
el producto cumple con los requisitos del ensayo incubación. Tapar para evitar la contaminación y
aunque el mismo no es suficiente para suponer la la evaporación excesiva del medio durante el
esterilidad de la totalidad del lote ensayado, dadas almacenamiento. Esterilizar empleando un
las limitaciones inherentes a la estadística del procedimiento validado. Enfriar inmediatamente
muestreo. La condición de estéril se asegura a a 25 °C. Si más del tercio superior ha tomado una
través de la validación del proceso de coloración rosada, el medio podrá regenerarse una
esterilización o del procesamiento aséptico. sola vez, calentando los recipientes en un baño de
El ensayo debe realizarse en un área de al agua o con vapor fluente, hasta que desaparezca el
menos igual clase que la empleada para el color. Cuando el medio está listo para emplear, no
procesamiento aséptico. más del décimo superior debe tener un color
rosado.
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo se preparan de acuerdo Caldo Tioglicolato Alternativo
a las siguientes fórmulas. También se pueden (Para incubación en condiciones anaeróbicas)
emplear fórmulas deshidratadas que luego de L-Cisteína ………………………….. 0,50 g
reconstituidas cumplan con el Ensayo de
promoción del crecimiento y el Ensayo de Cloruro de sodio …………………… g
2,50 g
esterilidad de los medios de cultivo. Glucosa monohidrato ……………… 5,50 g
Medio Tioglicolato Extracto de levadura (soluble en 5,00 g
(Para incubación en condiciones aeróbicas) agua) ………………………………..
L-Cistina …….……………………….. 0,50 g Digerido pancreático de caseína …… 15,0 g
Agar (con menos de 15 % de humedad) 0,75 g Tioglicolato de sodio*………….…. 0,50 g
Cloruro de sodio ……………………... 2,50 g Agua purificada c.s.p. ……………… 1.000 ml
Glucosa Monohidrato ………………... 5,50 g pH después de la esterilización: 7,1 ± 0,2.
Extracto de levadura (soluble en agua) 5,00 g *En caso de reemplazarse por Acido tioglicólico
emplear 0,3 ml
Digerido pancreático de caseína ……... 15,0 g
Disolver los componentes sólidos en el agua,
Tioglicolato de sodio * ………………. 0,50 g calentando suavemente, si fuera necesario, hasta
Solución de resazurina sódica (0,1 %) obtener una solución. Ajustar la solución con
recién preparada……..……………….. 1,00 ml hidróxido de sodio 1 N para obtener, después de la
Agua purificada c.s.p. ……………….. esterilización, un pH de 7,1 ± 0,2. Filtrar, si fuera
1.000 ml
necesario, transferir a recipientes apropiados y
pH después de la esterilización: 7,1 ± 0,2. esterilizar empleando un procedimiento validado.
*En caso de reemplazarse por Acido El medio debe ser recientemente preparado o
tioglicólico emplear 0,3 ml. calentado en un baño de vapor y enfriado
rápidamente antes de su empleo. No se debe
Mezclar y calentar hasta disolución completa. recalentar.
Caldo Digerido de Caseína-Soja Los medios de cultivo son aceptables si
existen evidencias de crecimiento en todos los
(Para incubación en condiciones aeróbicas)
envases inoculados dentro de los 3 días de
Digerido pancreático de caseína ……….…… 17,0 g incubación para bacterias y 5 días para hongos y
levaduras. El ensayo de esterilidad no es válido si
Digerido papaínico de harina de soja ………. 3,00 g el medio de cultivo presenta una respuesta
Glucosa monohidrato ………………………. 2,50 g inapropiada al crecimiento microbiano.
Tabla 1
Medio Microorganismos de prueba Incubación
Temperatura Condiciones
(1) Staphylococcus aureus
(ATCC 6538) (1) 30 - 35 °C
(2) Pseudomonas aeruginosa Aeróbicas
Medio Tioglicolato
(ATCC 9027) (2) 30 - 35 °C
(3) Clostridium sporogenes
(ATCC 11437) (3) 30 - 35 °C
Caldo Tioglicolato (1) Clostridium sporogenes Anaeróbicas
Alternativo (4) (ATCC 11437) 30 - 35 °C
(1) Bacillus subtilis
(ATCC 6633) 20 - 25 °C
Caldo Digerido de (2) Candida albicans Aeróbicas
Caseína - Soja (ATCC 10231) 20 - 25 °C
(3) Aspergillus niger
(ATCC 16404) 20 - 25 °C
(1) Como alternativa al Staphylococcus aureus, puede emplearse Bacillus subtilis ATCC 6633.
(2) Como alternativa a Pseudomonas aeruginosa, puede utilizarse Kocuria rhizophila ATCC 9341.
(3) Como alternativa a Clostridium sporogenes y en caso de no ser requerido un esporoformador, puede
utilizarse Bacteroides vulgatus ATCC 8482.
(4) Utilizar para test de esterilidad de dispositivos médicos que contienen tubos de pequeño diámetro.
NOTA: PUEDEN UTILIZARSE CEPAS ATCC O SUS EQUIVALENTES PERTENECIENTES A
OTRAS COLECCIONES DE CULTIVOS MICROBIANOS INTERNACIONALES O NACIONALES
RECONOCIDAS INTERNACIONALMENTE.
Tabla 2. Número mínimo de artículos de muestra en relación al tamaño del lote
Tamaño del lote Mínimo número de artículos muestreados
para cada medio *
Productos inyectables
100 artículos 10% ó 4 (el que sea mayor)
> 100 - 500 10
> 500 2% ó 20 (el que sea menor)
Parenterales de gran volumen 2% ó 10 (el que sea menor)
Antibióticos sólidos
Envases de < 5 g 20
Envases de 5 g 6
Graneles y mezclas Ver Granel de productos sólidos
Productos no inyectables
200 5% ó 2 (el que sea mayor)
> 200 10
Dispositivos médicos
100 10% ó 4 (el que sea mayor)
> 100 - 500 10
> 500 2% ó 20 (el que sea menor)
Tiras de
Láminas 0,5 mm 120 cm2 de superficie total (ambas caras)
5 0,3 cm
Dimensiones
Código Elemento Descripción
(mm)
Adaptador de caucho modelado para la unión con el
A Adaptador para disparador
disparador
B Garganta Balón modificado 50 ml
Entrada: junta cónica esmerilada hembra 29/32
Salida: junta cónica esmerilada macho 24/29
C Cuello Adaptador de vidrio modificado
Entrada: junta cónica esmerilada hembra 24/29
Salida: junta cónica esmerilada macho 24/29
Parte inferior: tubo de vidrio calibrado: diámetro interno 14
Tubo de vidrio de paredes delgadas: diámetro externo 17
D Cámara de impacto superior Balón modificado 100 ml
Entrada: junta cónica esmerilada hembra 24/29
Salida: junta cónica esmerilada hembra 14/23
Tubo de vidrio de pared media: unión cónica esmerilada
E Tubo de conexión 14/23
macho
Codo y parte recta superior: diámetro exterior 13
Parte recta inferior: diámetro exterior 8
Adaptador con tubuladura
F Capuchón roscado de plástico 28/13
lateral y capuchón roscado
Junta de silicona 28/11
Dimensiones
Código Elemento Descripción
(mm)*
Arandela de politetrafluoroetileno 28/11
Rosca de vidrio: paso de rosca 28
Salida lateral (salida hacia la bomba de vacío): diámetro
11
interior mínimo
Porta-filtros modificados, de polipropileno, unido al extremo
G Difusor Figura 2
del tubo mediante un tubo de politetrafluoroetileno
Disco circular de acetal con 4 orificios dispuestos en un
G’ círculo de 5,3 mm de diámetro y una clavija para separación 10
del chorro en el centro
Diámetro de la clavija 2
Altura de resalte de la clavija 2
H Cámara de impacto inferior Erlenmeyer 250 ml
Junta cónica esmerilada hembra 24/29
Las medidas de las juntas esmeriladas corresponden a las designadas por ISO (internacional Organization for
Standarization).
400. ENSAYOS FARMACOTÉCNICOS PARA SUPOSITORIOS
Los supositorios deben cumplir con los alambre de metal en determinados períodos de
siguientes ensayos: tiempo. En todos los casos, el supositorio debe
fundirse o disgregarse a una temperatura no menor
Peso promedio - El peso promedio debe
de 34 °C ni mayor de 37 °C.
cumplir con las especificaciones de la Tabla.
Tabla.
Peso promedio Límite de desviación
de los supositorios del peso promedio
(g) (%)
< 1,5 ± 10
1,5 y 2,5 ± 7,5
> 2,5 ±5
LÍMITES DE ADITIVOS
ADITIVOS LÍMITES (%)
ftalato de bis(2-etilhexilo) 40
octanoato de cinc (2-etilhexanoato de cinc) 1
estearato de calcio o estearato de cinc o una mezcla de ambos 1
N,N´-diaciletilendiaminas (acil significa en particular palmitil y estearil) 1
no más de uno de los siguientes aceites epoxidados o una mezcla de ambos: 10
aceite de soja epoxidado en el cual el contenido de oxígeno oxiránico es 6
a 8 % y el índice de iodo no es mayor a 6.
Aceite de semilla de lino epoxidado en el cual el contenido de oxígeno
oxiránico no es mayor de 10 % y el índice de yodo no es mayor de 7
Ningún aditivo antioxidante debe agregarse al a la fabricación de envases para sangre y hemoderi-
polímero. Cuando se agregan colorantes, sólo se vados.
puede agregar azul ultramarino. No se debe agregar
CARACTERÍSTICAS
ningún colorante al poli(cloruro de vinilo) destinado
Polvo, perlas, gránulos o láminas translúcidas de obtenida a partir de la Solución muestra debe ser
espesor variable, incoloras o de color amarillo páli- similar a la obtenida a partir de la Solución están-
do. dar.
C – Absorción infrarroja <460> - Examinar el
IDENTIFICACIÓN - [NOTA: si es necesario,
residuo obtenido en el ensayo para Ftalato de bis(2-
cortar el material a ensayar en trozos de tamaño
etilhexilo) comparando con el espectro obtenido con
apropiado.]
Ftalato de bis(2-etilhexil) SR-FA.
A 2,0 g del material a ensayar agregar 200 ml de
éter libre de peróxidos y calentar a reflujo durante ENSAYOS –
8 horas. Separar el residuo (B) y la solución (Solu- Solución indicadora - Disolver en alcohol
ción A) por filtración. 100 mg de azul de bromotimol, 20 mg de rojo de
Evaporar la Solución A a sequedad bajo presión metilo y 200 mg de fenolftaleína. Diluir a 100 ml
reducida en un baño de agua a 30 °C. Disolver el con el mismo solvente y filtrar.
residuo en 10 ml de tolueno (Solución A1). Disolver Solución S1 - Transferir 5,0 g del material a en-
el residuo B en 60 ml de dicloruro de etileno, calen- sayar a una cápsula. Agregar 30 ml de ácido sulfú-
tando en un baño de agua a reflujo y filtrar. Agre- rico y calentar hasta obtener una masa viscosa ne-
gar la solución gota a gota y con agitación enérgica gra. Enfriar y agregar con precaución 10 ml de
a 600 ml de heptano calentando a una temperatura solución de peróxido de hidrógeno al 30 % y calen-
menor a la temperatura de ebullición. Filtrar la tar suavemente. Dejar enfriar y agregar 1 ml de
mezcla en caliente a través de un filtro caliente para solución de peróxido de hidrógeno al 30 %, repetir
separar el material insolubilizado (B1) de la solu- el agregado y evaporación de la solución de peróxi-
ción orgánica. Dejar enfriar, separar el precipitado do de hidrógeno al 30 % hasta obtener un líquido
(B2) formado y filtrar a través de un filtro de vidrio incoloro. Reducir el volumen hasta 10 ml. Enfriar
sinterizado de porosidad media, previamente pesa- y diluir a 50,0 ml con agua.
do. Solución S2 - Transferir 25 g del material a en-
A - Absorción infrarroja <460>. Disolver el sayar a un erlenmeyer de vidrio al borosilicato.
material insolubilizado B1 en 30 ml de tetrahidrofu- Agregar 500 ml de Agua para Inyectables y cubrir
rano y agregar, en pequeñas porciones con agita- la boca del erlenmeyer con un vaso de precipitados
ción, 40 ml de etanol. Separar el precipitado (B3) de vidrio al borosilicato. Calentar en autoclave a
por filtración y secar al vacío a una temperatura no 121 ± 2 °C durante 20 minutos. Dejar enfriar y
mayor de 50 °C sobre pentóxido de fósforo o cloru- decantar la solución. Diluir la solución a 500 ml.
ro de calcio anhidro. Disolver unos pocos mg del
Aspecto de la solución S2 - Debe ser transpa-
precipitado B3 en 1 ml de tetrahidrofurano. Colocar
rente e incolora.
algunas gotas de la solución obtenida sobre una
placa de cloruro de sodio y evaporar a sequedad Acidez o alcalinidad - A 100 ml de Solu-
entre 100 y 105 °C. Registrar el espectro de absor- ción S2, agregar 0,15 ml de Solución indicadora.
ción infrarroja y comparar con el espectro obtenido No se deben requerir más de 1,5 ml de hidróxido de
con poli(cloruro de vinilo) SR-FA. sodio 0,01 N para cambiar el color del indicador a
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. azul. A 100 ml de Solución S2, agregar 0,2 ml de
Fase estacionaria - Emplear una placa para naranja de metilo (SR). No se debe requerir más de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- 1,0 ml de ácido clorhídrico 0,01 N para iniciar el
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- cambio de color del indicador de amarillo a anaran-
grafía de 0,25 mm de espesor. jado.
Fase móvil - Tolueno. Absorbancia - Evaporar 100 ml de Solución S2
Solución estándar - Disolver 0,8 g de ftalato de a sequedad. Disolver el residuo en 5 ml de hexano.
bis(2-etilhexilo) SR-FA en tolueno y diluir a 10 ml Entre 250 y 310 nm la absorbancia no debe ser
con el mismo solvente. mayor de 0,25.
Solución muestra - Solución A1.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la Sustancias reductoras - Efectuar el ensayo de-
placa 5 µl de cada solución. Dejar secar las aplica- ntro de las 4 horas de preparada la Solución S2. A
ciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el 20,0 ml de Solución S2 agregar 1 ml de ácido sulfú-
frente del solvente haya recorrido aproximadamente rico diluido y 20,0 ml de permanganato de potasio
tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la 0,002 M. Calentar a reflujo durante 3 minutos y
placa de la cámara, marcar el frente del solvente y enfriar inmediatamente. Agregar 1 g de ioduro de
dejarla secar. Examinar bajo luz ultravioleta a potasio y titular inmediatamente con tiosulfato de
254 nm. El valor de Rf e intensidad de la mancha sodio 0,01 N, empleando 0,25 ml de almidón (SR)
como indicador. Realizar una determinación con un
blanco empleando 20 ml de Agua para Inyectables 40 ml de metanol. Filtrar y evaporar a sequedad.
y hacer las correcciones necesarias. La diferencia Pesar los dos residuos. La diferencia entre los pe-
entre los volúmenes consumidos no debe ser mayor sos no debe ser mayor de 10 mg.
de 2,0 ml.
Ftalato de bis(2-etilhexilo) - Examinar el cro-
Aminas aromáticas primarias – matograma obtenido en el ensayo para Aceites
Solución muestra - A 2,5 ml de Solución A1 ob- epoxidados bajo luz ultravioleta a 254 nm y locali-
tenida en la Identificación, agregar 6 ml de agua y zar la zona que corresponde a ftalato de
4 ml de ácido clorhídrico 0,1 M. Agitar vigorosa- bis(2-etilhexilo). Remover el área del gel de sílice
mente y descartar la fase orgánica. A la fase acuosa que corresponde a esta zona y agitarla con 40 ml de
agregar 0,4 ml de una solución de nitrito de sodio al éter. Filtrar sin pérdidas y evaporar a sequedad. El
1 % recientemente preparada. Mezclar y dejar en residuo obtenido no debe pesar más de 40 mg.
reposo durante 1 minuto. Agregar 0,8 ml de una
Cloruro de vinilo -
solución de sulfamato de amonio al 2,5 %, dejar en Sistema cromatográfico (ver 100. Cromatograf-
reposo durante 1 minuto y agregar 2 ml de una
ía) - Emplear un cromatógrafo de gases equipado
solución de diclorhidrato de
con un detector de ionización a la llama, y una
N-(1-Naftil)etilendiamina al 0,5 %. [NOTA: reali-
columna de 3 m x 3 mm rellena con tierra de dia-
zar el ensayo a bajas temperaturas.]
tomea silanizada para cromatografía impregnada
Solución estándar - Proceder según se indica con 5 % p/p de dimetil estearilamida y 5 % p/p de
para la Solución muestra, reemplazando la fase polietilenglicol 400. Mantener la columna, el in-
acuosa por una mezcla de 1 ml de una solución de
yector y el detector a aproximadamente 45, 100 y
naftilamina 0,001 % en ácido clorhídrico 0,1 M,
150 °C, respectivamente. Se emplea nitrógeno
5 ml de agua y 4 ml de ácido clorhídrico 0,1 M
como gas transportador con un caudal de aproxima-
(20 ppm). damente 30 ml por minuto.
Después de 30 minutos, el color de la Solución Solución del estándar interno - Empleando una
muestra no debe ser más intenso que el de la Solu-
microjeringa, transferir 10 µl de éter en 20,0 ml de
ción estándar preparada al mismo tiempo.
N,N-Dimetilacetamida, sumergiendo la punta de la
N,N’-diaciletilendiaminas - Lavar con etanol aguja en el solvente. Inmediatamente antes de usar,
el precipitado B2 obtenido en la Identificación y diluir la solución 1 en 1.000 con
contenido en el filtro de vidrio sinterizado previa- N,N-Dimetilacetamida.
mente pesado. Secar hasta peso constante sobre Solución madre del estándar de cloruro de vini-
pentóxido de fósforo y pesar el filtro. El precipita- lo - Preparar bajo una campana extractora. Trans-
do no debe pesar más de 20 mg. ferir 50,0 ml de N,N-Dimetilacetamida a un reci-
Aceites epoxidados – piente de 50 ml, tapar el recipiente y pesar a la
Fase estacionaria - Emplear una placa para décima de mg. Llenar una jeringa de 50 ml de
polietileno o polipropileno con cloruro de vinilo
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
gaseoso, dejar que el gas este en contacto con la
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
jeringa aproximadamente 3 minutos, vaciar la jerin-
grafía de 1 mm de espesor.
ga y llenar nuevamente con 50 ml de cloruro de
Fase móvil - Tolueno.
Procedimiento - Aplicar sobre la placa, en for- vinilo gaseoso. Adaptar una aguja hipodérmica a la
ma de banda de 30 mm por 3 mm, 0,5 ml de Solu- jeringa y reducir el volumen de gas en la jeringa
hasta 25 ml. Inyectar estos 25 ml de cloruro de
ción A1 obtenida en la Identificación. Dejar secar la
vinilo lentamente en el recipiente y agitarlo suave-
aplicación y desarrollar el cromatograma hasta que
mente evitando el contacto entre el líquido y la
el frente del solvente haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa. Reti- aguja. Pesar el recipiente nuevamente, el aumento
rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol- de peso es de aproximadamente 60 mg (1 µl de la
solución así obtenida contiene aproximadamente
vente. Secar la placa cuidadosamente. Exponer la
1,2 µg de cloruro de vinilo).
placa a vapores de iodo durante 5 minutos. Exami-
Solución estándar de cloruro de vinilo - A
nar el cromatograma y localizar la banda con un Rf
1 volumen de Solución madre del estándar de clo-
de 0 y, si estuviera presente, la banda secundaria
con un Rf de aproximadamente 0,7, ambas corres- ruro de vinilo agregar 3 volúmenes de
pondientes a aceites epoxidados. Remover el área N,N-Dimetilacetamida.
Soluciones estándar - Transferir 10,0 ml de So-
del gel de sílice que corresponde a la banda o ban-
lución del estándar interno a cada uno de seis reci-
das. En forma similar remover un área de gel de
pientes de 50 ml. Cerrar los recipientes. Inyectar 1;
sílice para preparar un blanco. Separadamente
2; 3; 5 y 10 µl, respectivamente, de Solución están-
agitar ambas muestras durante 15 minutos con
dar de cloruro de vinilo en cinco de los recipientes. El ensayo es válido si la opalescencia de la So-
Las seis soluciones así obtenidas contienen respec- lución muestra no es más intensa que la de la Solu-
tivamente, 0 µg; aproximadamente 0,3; 0,6; 0,9; 1,5 ción estándar.
y 3 µg de cloruro de vinilo. Agitar, evitando el
Cadmio - (ver 440. Espectrofotometría de ab-
contacto entre el tapón y el líquido. Colocar los
sorción y emisión atómica).
recipientes en un baño de agua a 60 ± 1 °C durante
Solución madre del estándar - Disolver 0,100 g
2 horas.
de cadmio en el menor volumen posible de una
Solución muestra - Transferir 1,0 g del material mezcla de ácido clorhídrico y agua (50:50). Diluir
a ensayar a un recipiente de 50 ml y agregar 10,0 ml a 100,0 ml con ácido clorhídrico al 1 % v/v para
de Solución del estándar interno. Cerrar el reci-
obtener una solución de concentración conocida de
piente. Agitar, evitando el contacto entre el tapón y
0,1 % de Cd.
el líquido. Colocar el recipiente en un baño de agua
Soluciones estándar - Preparar las soluciones
a 60 ± 1 °C durante 2 horas.
estándar empleando la Solución madre del estándar
Procedimiento – Inyectar por separado en el diluida con ácido clorhídrico al 1 % v/v.
cromatógrafo 1 ml del espacio libre superior de Solución muestra - Evaporar 10 ml de la Solu-
cada recipiente, registrar los cromatogramas y me-
ción S1 a sequedad. Tomar el residuo con 5 ml de
dir las respuestas de los picos principales. Calcular
ácido clorhídrico al 1 % v/v, filtrar y diluir el filtra-
el contenido de cloruro de vinilo. No debe estar
do a 10,0 ml con el mismo ácido.
presente más de 1 ppm de cloruro de vinilo.
Procedimiento - Medir la absorbancia a
Fósforo total – 228,8 nm empleando una lámpara de cadmio de
Solución estándar - Mezclar 0,5 ml de una so- cátodo hueco como fuente de radiación y una llama
lución de fosfato monobásico de potasio que con- de aire-acetileno. No debe estar presente más de
tiene 0,219 g por litro, 10 ml de agua y 25 ml de 0,6 ppm de Cd.
molibdovanádico (SR) y diluir a 50,0 ml con agua Calcio - (ver 440. Espectrofotometría de ab-
(100 ppm).
sorción y emisión atómica).
Solución muestra - Calcinar 0,25 g del material
Solución madre del estándar - Inmediatamente
a ensayar en un crisol de platino con 0,2 g de car-
antes de usar, diluir 1 en 10 con agua una solución
bonato de sodio anhidro y 50 mg de nitrato de pota-
preparada con 1,000 g de carbonato de calcio y
sio. Después de enfriar tomar el residuo con agua, 23 ml de ácido clorhídrico 1 M y diluida a 100,0 ml
y transferir a un matraz aforado de 50 ml. Lavar el con agua (400 ppm de Ca).
crisol con agua, agregar los lavados al matraz, aci-
Soluciones estándar - Preparar las soluciones
dificar con ácido sulfúrico al 60 % p/p hasta que
estándar empleando la Solución madre del están-
cese la efervescencia. Agregar 25 ml de molibdo-
dar, diluida con agua.
vanádico (SR) y diluir a 50,0 ml con agua.
Solución muestra - Calcinar 2,0 g del material a
El ensayo es válido si la coloración amarilla ensayar en un crisol de sílice. Mezclar el residuo
producida en la Solución muestra no es más intensa con 10 ml de ácido clorhídrico y evaporar a seque-
que la de la Solución estándar.
dad en un baño de agua. Tomar este residuo con
Bario – 5 ml de agua, filtrar y diluir a 25,0 ml con el mismo
Solución estándar - Mezclar 1,2 ml de una so- solvente.
lución, preparada disolviendo 0,178 g de cloruro de Procedimiento - Medir la absorbancia a
bario dihidratado en 100,0 ml, diluida 1 en 20 422,7 nm empleando una lámpara de calcio de
(50 ppm de Ba); 0,8 ml de agua y 3 ml de solución cátodo hueco como fuente de radiación y una llama
de sulfato de calcio, preparada agitando 5 g de de aire-acetileno. No debe estar presente más de
sulfato de calcio con 100 ml de agua durante 1 hora, 0,07 % de Ca.
y filtrar. Metales pesados –
Solución muestra - Calcinar 2,0 g del material a
Solución reguladora de acetato pH 3,5 - Disol-
ensayar en un crisol de sílice. Mezclar el residuo
ver 25,0 g de acetato de amonio en 25,0 ml de agua
con 10 ml de ácido clorhídrico y evaporar a seque-
y agregar 38,0 ml de ácido clorhídrico al 25 %.
dad en un baño de agua. Tomar este residuo con
Ajustar a pH 3,5 si fuera necesario, con ácido
dos porciones de 1 ml de agua. Filtrar y agregar clorhídrico 2 M o con amoníaco diluido y diluir a
3 ml de solución de sulfato de calcio preparada 100 ml con agua.
agitando 5 g de sulfato de calcio con 100 ml de
Solución estándar - Proceder según se indica
agua durante 1 hora y filtrar.
para la Solución muestra empleando una mezcla de
10 ml de Solución estándar de plomo diluida 1:5
(ver 590. Límite de metales pesados) y 2 ml de la acético y diluir a 100 ml con agua. Diluir 1 ml de
Solución muestra. esta solución a 10 ml con agua. Antes de usar diluir
Solución muestra - A 10 ml de Solución S1 1 ml de esta solución a 10 ml con agua (10 ppm de
agregar 0,5 ml de fenolftaleína (SR) y luego solu- Zn).
ción concentrada de hidróxido de sodio al 42 % Solución estándar - Proceder según se indica
hasta obtener un color rosa pálido. Diluir a 25 ml para la Solución muestra, empleando una mezcla de
con agua. A 12 ml de la solución así obtenida agre- 2 ml de una Solución madre del estándar y 8 ml de
gar 2 ml de Solución reguladora de acetato pH 3,5 agua (0,2 %).
y mezclar. A continuación agregar 1,2 ml de tioa- Después de 2 minutos, el color violeta de la fase
cetamida-glicerina básica (SR) y mezclar inmedia- inferior de la Solución muestra no debe ser más
tamente. intenso que el de la fase inferior de la Solución
Solución blanco - Proceder según se indica para estándar.
la Solución muestra empleando una mezcla de
Residuo de evaporación - Evaporar a seque-
10 ml de agua y 2 ml de la Solución muestra. dad 50 ml de Solución S2 en un baño de agua y
Después de 2 minutos, la coloración parda de la secar entre 100 y 150 °C. El residuo no debe pesar
Solución muestra no debe ser más intensa que la de
más de 7,5 mg (0,3 %).
la Solución estándar.
VALORACIÓN
Estaño – Llevar a cabo el método de combustión (ver 60.
Solución muestra - A 10 ml de Solución S1 Combustión en erlenmeyer con oxígeno), emplean-
agregar 0,3 ml de ácido tioglicólico y 30 ml de
do 50,0 mg del material a ensayar. Absorber los
agua. Mezclar y agregar 2 ml de una solución de
productos de combustión en 20 ml de hidróxido de
lauril sulfato de sodio al 1 % y 1 ml de una solución
sodio 1 N. A la solución obtenida agregar 2,5 ml de
de ditiol, recientemente preparada, que contiene ácido nítrico, 10,0 ml de nitrato de plata 0,1 N, 5 ml
5 g/l en etanol y diluir a 50 ml con agua. de sulfato férrico amónico (SR) y 1 ml de ftalato de
Solución madre del estándar - Disolver 0,500 g
dibutilo. Titular con tiocianato de amonio 0,05 N
de estaño en una mezcla de 5 ml de agua y 25 ml de
hasta obtener un color amarillo-rojizo. Realizar una
ácido clorhídrico, y diluir a 1 litro. Inmediatamente
determinación con un blanco y hacer las correccio-
antes de usar transferir 1 ml de esta solución a una
nes necesarias. Cada mililitro de nitrato de plata
matraz aforado de 100 ml y diluir a volumen con 0,1 N equivale a 6,25 mg de poli(cloruro de vinilo).
ácido clorhídrico al 2,5 %v/v (5 ppm de Sn).
Solución estándar - Proceder según se indica Poliolefinas
para la Solución muestra, empleando 10 ml de áci- Las poliolefinas se obtienen por polimerización
do sulfúrico al 20 % v/v y 6 ml de Solución madre de etileno o propileno o por copolimerización de
del estándar. estas sustancias con no más de 25 % de homólogos
Después de 15 minutos, el color de la Solución mayores (C4 a C10) o de ácidos carboxílicos o éste-
muestra no debe ser más intenso que el de la Solu- res. Ciertos materiales pueden ser mezclas de po-
ción estándar. liolefinas.
Cinc - [NOTA: preparar un blanco empleando Pueden contener hasta tres antioxidantes, uno o
10 ml de agua. El ensayo no es válido a menos que varios lubricantes o antibloqueantes. Cuando el
la fase inferior obtenida con el blanco sea de color material debe proveer protección de la luz se le
verde.] agregan agentes opacantes como el dióxido de tita-
Solución reguladora de acetato de pH 4,4 - Di- nio.
solver 136 g de acetato de sodio y 77 g de acetato Este texto es aplicable a todas las poliolefinas
de amonio en agua y diluir a 100 ml con el mismo empleadas para propósitos médico-farmacéuticos
solvente. Agregar 250,0 ml de ácido acético glacial con la excepción de los otros materiales poliolefíni-
y mezclar. cos descriptos en este capítulo.
Solución muestra - Diluir 1 ml de Solución S1 a CARACTERÍSTICAS
100 ml con agua. A 10 ml de la solución resultante Polvo, perlas, gránulos o, después de su trans-
agregar 5 ml de Solución reguladora de acetato de formación, láminas de espesor variable o envases.
pH 4,4; 1 ml de tiosulfato de sodio 0,1 M y 5,0 ml Prácticamente insolubles en agua, etanol, hexano y
de una solución de ditizona en cloroformo que metanol; solubles en hidrocarburos aromáticos
contiene 0,01 g/1 y agitar. calientes. Se ablandan a temperaturas entre 65 y
Solución madre del estándar - Disolver una 165 °C. Se queman con una llama azul.
cantidad de sulfato de cinc, equivalente a 0,440 g de
ZnSO4 . 7H2O, en agua. Agregar 1 ml de ácido IDENTIFICACIÓN
A - Absorción infrarroja <460>. A 0,25 g del Solución indicadora - Disolver en alcohol
material a ensayar agregar 10 ml de tolueno y ca- 0,1 g de azul de bromotimol, 20 mg de rojo de meti-
lentar a reflujo durante 15 minutos. Colocar algu- lo y 0,2 g de fenolftaleína. Diluir a 100 ml con el
nas gotas de la solución obtenida sobre una placa de mismo solvente y filtrar.
cloruro de sodio y evaporar el solvente en una estu-
Aspecto de la solución S1 - La Solución S1 de-
fa a 80 °C. El espectro del material presenta máxi-
be ser transparente e incolora.
mos de absorción a 2.920; 2.850; 1.475; 1.465;
1.380; 1.170; 735 y 720 cm 1, el espectro obtenido Acidez o alcalinidad - A 100 ml de la Solu-
debe ser idéntico al espectro obtenido con el mate- ción S1 agregar 0,15 ml de Solución indicadora. No
rial seleccionado como referencia. [NOTA: si el se deben requerir más de 1,5 ml de hidróxido de
material a ensayar se presenta en forma de láminas, sodio 0,01 N para cambiar el color del indicador a
el espectro puede determinarse directamente sobre azul. A 100 ml de Solución S1 agregar 0,2 ml de
un trozo de tamaño apropiado.] naranja de metilo (SR). No se debe requerir más de
B - Debe cumplir con los Ensayos suplementa- 1 ml de ácido clorhídrico 0,01 N para iniciar el
rios para los aditivos presentes. cambio de color del indicador de amarillo a anaran-
C - En un crisol de platino, mezclar aproxima- jado.
damente 20 mg del material a ensayar con 1 g de Absorbancia - Entre 220 y 340 nm, la absor-
sulfato ácido de potasio y calentar hasta fundir bancia de la Solución S1 no debe ser mayor de 0,2.
completamente. Dejar enfriar y agregar 20 ml de
ácido sulfúrico diluido. Calentar suavemente y Sustancias reductoras - A 20 ml de la Solu-
filtrar la solución resultante. Al filtrado agregar ción S1 agregar 1 ml de ácido sulfúrico diluido y
1 ml de ácido fosfórico y 1 ml de solución de 20 ml de permanganato de potasio 0,002 M. Calen-
peróxido de hidrógeno al 30 %. Si la sustancia tar a reflujo durante 3 minutos y enfriar inmediata-
contiene dióxido de titanio como opacante, se desa- mente. Agregar 1 g de ioduro de potasio y titular
rrolla un color anaranjado-amarillento. inmediatamente con tiosulfato de sodio 0,01 N,
empleando 0,25 ml de almidón (SR) como indica-
ENSAYOS - [NOTA: si es necesario, cortar las dor. Realizar una determinación con un blanco y
muestras del material a ensayar en trozos de tamaño hacer las correcciones necesarias. La diferencia
apropiado.] entre los volúmenes no debe ser mayor de 3,0 ml.
Solución S1 - Transferir 25 g del material a en-
sayar a un erlenmeyer de vidrio al borosilicato de Metales pesados extraíbles –
boca esmerilada. Agregar 500 ml de Agua para Solución reguladora de acetato pH 3,5 - Disol-
Inyectables y calentar a reflujo durante 5 horas. ver 25,0 g de acetato de amonio en 25,0 ml de agua
Dejar enfriar y decantar. Reservar una porción de y agregar 38,0 ml de ácido clorhídrico al 25 %.
la solución para el ensayo de Aspecto de la solu- Ajustar a pH 3,5 si fuera necesario, con ácido
ción S1 y filtrar el resto a través de un filtro de vi- clorhídrico 2 M o con amoníaco diluido y diluir a
drio sinterizado de porosidad media. Emplear la 100 ml con agua.
Solución S1 dentro de las 4 horas de su preparación. Solución muestra - Concentrar 50 ml de Solu-
Solución S2 - Transferir 2,0 g del material a en- ción S3 hasta aproximadamente 5 ml en baño de
sayar a un erlenmeyer de vidrio al borosilicato de agua y diluir a 20 ml con agua. A 12 ml de la solu-
boca esmerilada. Agregar 80 ml de tolueno y calen- ción así obtenida agregar 2 ml de Solución regula-
tar a reflujo con agitación constante durante dora de acetato pH 3,5 y mezclar. A continuación
90 minutos. Enfriar a 60 °C y agregar, con agita- agregar 1,2 ml de tioacetamida-glicerina bási-
ción constante, 120 ml de metanol. Filtrar la solu- ca (SR) y mezclar inmediatamente.
ción a través de un filtro de vidrio sinterizado de Solución estándar - Proceder según se indica
porosidad media. Lavar el erlenmeyer y el filtro para la Solución muestra empleando una mezcla de
con 25 ml de una mezcla de 40 ml de tolueno y 2,5 ml de Solución estándar de plomo (ver 590.
60 ml de metanol, agregar el lavado al filtrado y Límite de metales pesados) y 2 ml de la Solución
diluir a 250 ml con la misma mezcla. Preparar un muestra.
blanco. Solución blanco - Proceder según se indica para
Solución S3 - Transferir 100 g del material a en- la Solución muestra empleando una mezcla de
sayar a un erlenmeyer de vidrio al borosilicato de 10 ml de agua y 2 ml de la Solución muestra.
boca esmerilada. Agregar 250 ml de ácido clorhí- Después de 2 minutos, la coloración parda de la
drico 0,1 M y calentar a reflujo con agitación cons- Solución muestra no debe ser más intensa que la de
tante durante 1 hora. Dejar enfriar y decantar la la Solución estándar. No deben encontrarse más de
solución. 2,5 ppm.
Residuo de ignición <270> - No más de 1,0 %, trilo y tetrahidrofurano (50:50). Diluir 2 ml de esta
determinado sobre 5,0 g. Este límite no se aplica a solución a 50 ml con el mismo solvente.
los materiales que contienen dióxido de titanio Solución estándar E - Disolver 60 mg de
como opacante. 3,3-bis(3-ter-butil-4-hidroxifenil)butirato de etileno
en 10 ml de una mezcla de acetonitrilo y tetrahidro-
ENSAYOS SUPLEMENTARIOS - [NOTA:
furano (50:50). Diluir 2 ml de esta solución a 50 ml
estos ensayos se realizan totalmente o en parte sólo
con el mismo solvente.
si son requeridos de acuerdo a la composición o el
uso del material.] Solución estándar F - Disolver 60 mg de
1,3,5-tris[3,5di-ter-butil-4-hidroxibencil]-s-triazina-
Antioxidantes fenólicos – 2,4,6(1H,3H,5H)-triona en 10 ml de una mezcla de
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo acetonitrilo y tetrahidrofurano (50:50). Diluir 2 ml
para cromatografía de líquidos con un detector de esta solución a 50 ml con el mismo solvente.
ultravioleta ajustado a 280 nm y una columna de Solución estándar G - Disolver 60 mg de tetra-
25 cm 4,6mm con fase estacionaria constituida kis [3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)pro-pionato]
por octadecilsilano químicamente unido a partículas de pentaeritritilo en 10 ml de una mezcla de aceto-
de sílice porosa de 5 µm de diámetro. nitrilo y tetrahidrofurano (50:50). Diluir 2 ml de
Fase móvil - Se puede emplear una de las cua- esta solución a 50 ml con el mismo solvente.
tro mezclas siguientes: Solución estándar H - Disolver 60 mg de
Fase móvil 1 - Acetonitrilo y agua (70:30) 2,2',2",6,6',6"-hexa-ter-butil-4,4',4"-[(2,4,6-trimetil-
con un caudal de aproximadamente 2 ml por 1,3,5-bencenotriil)trismetileno]trifenol en 10 ml de
minuto. una mezcla de acetonitrilo y tetrahidrofurano
Fase móvil 2 - Acetonitrilo, tetrahidrofurano (50:50). Diluir 2 ml de esta solución a 50 ml con el
y agua (60:30:10) con un caudal de aproxi- mismo solvente.
madamente 1,5 ml por minuto. Solución estándar 1 - Disolver 60 mg de 3-(3,5-
Fase móvil 3 - Metanol, 2-propanol y agua di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato de octadecilo
(50:45:5) con un caudal de aproximadamente en 10 ml de cloruro de metileno. Diluir 2 ml de
1,5 ml por minuto. esta solución a 50 ml con el mismo solvente.
Fase móvil 4 - Acetonitrilo y tetrahidrofura- Solución estándar J - Disolver 60 mg de fosfito
no (80:20) con un caudal de aproximadamen- de tris (2,4-di-ter-butilfenilo) en 10 ml de cloruro
te 1,5 ml por minuto. de metileno. Diluir 2 ml de esta solución a 50 ml
[NOTA: de las siguientes Soluciones estándar, con el mismo solvente.
preparar únicamente las necesarias para el ensayo Solución estándar K - Disolver 20 mg de
de los antioxidantes fenólicos declarados en la P-EPQ en 10 ml de una mezcla de volúmenes igua-
composición del material a ensayar.] les de acetonitrilo y una solución de hidroperóxido
Solución estándar A - Disolver 25 mg de butil- de terbutilo en tetrahidrofurano con una concentra-
hidroxitolueno y 60 mg de 3,3-bis(3-ter-butil-4- ción de 10 g/1. Dejar reposar en un recipiente ce-
hidroxifenil)butirato de etileno en 10 ml de una rrado durante 1 hora. Diluir 2 ml de esta solución a
mezcla acetonitrilo y tetrahidrofurano (50:50). 50 ml con una mezcla de acetonitrilo y tetrahidrofu-
Diluir 2 ml de esta solución a 50 ml con el mismo rano (50:50).
solvente. Solución muestra S21 - Evaporar 50 ml de la So-
Solución estándar B - Disolver 60 mg de tetra- lución S2 a sequedad al vacío a 45 °C. Disolver el
kis [3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)-propionato] residuo en 5 ml de acetonitrilo y tetrahidrofurano
de pentaeritritilo y 60 mg de (50:50). Preparar una solución blanco a partir del
2,2',2",6,6',6"-hexa-ter-butil-4,4',4"-[(2,4,6-trimetil- blanco correspondiente a la Solución S2.
1,3,5-bencenotriil)trismetileno]trifenol en 10 ml de Solución muestra S22 - Evaporar 50 ml de la So-
una mezcla de acetonitrilo y tetrahidrofurano lución S2 a sequedad al vacío a 45 °C. Disolver el
(50:50). Diluir 2 ml de esta solución a 50 ml con el residuo con 5 ml de cloruro de metileno. Preparar
mismo solvente. una solución blanco a partir de la solución blanco
Solución estándar C - Disolver 60 mg de que corresponde a la Solución S2.
3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato de Solución muestra S23 - Evaporar 50 ml de la So-
octadecilo y 60 mg de fosfito tris(2,4-di-ter- lución S2 a sequedad al vacío a 45 °C. Disolver el
butilfenilo) en 10 ml de cloruro de metileno. Diluir residuo con 5 ml de una mezcla de volúmenes igua-
2 ml de esta solución a 50 ml con el mismo solven- les de acetonitrilo y una solución de hidroperóxido
te. de terbutilo en tetrahidrofurano con una concentra-
Solución estándar D - Disolver 25 mg de butil- ción de 10 g/1. Cerrar el matraz y dejar reposar
hidroxitolueno en 10 ml de una mezcla de acetoni- durante 1 hora. Preparar una solución blanco a
partir de la solución blanco que corresponde a la estándar de antioxidantes de la lista anterior que
Solución S2. son declarados en la composición.
Aptitud del sistema - (ver 100. Cromatografía) Emplear Fase móvil 3 si el material a ensayar
- Cromatografiar la Solución estándar A, emplean- contiene 3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil) propio-
do Fase móvil 1, registrar los cromatogramas y nato de octadecilo y/o fosfito de tris(2,4-di-
medir las respuestas de los picos según se indica en ter-butilfenilo). Inyectar por separado en el cro-
Procedimiento: la resolución, R, entre los picos de matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
butilhidroxitolueno y 3,3-bis(3- 20 µl) de la Solución muestra S22, el blanco corres-
ter-butil-4-hidroxifenil)butirato de etileno no debe pondiente, la Solución estándar C, y la Solución
ser menor de 8. Cromatografiar la Solución están- estándar I o J o 20 µl de las Soluciones estándar I y
dar B, empleando Fase móvil 2, registrar los croma- J.
togramas y medir las respuestas de los picos según Emplear Fase móvil 4 si la sustancia a ensayar
se indica en Procedimiento: la resolución R entre contiene P-EPQ. Inyectar por separado en el cro-
los picos de tetrakis [3-(3,5-ter-butil-4- matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
hidroxi-fenil)propionato] de pentaeritritilo y 20 µl) de la Solución muestra S23, el blanco corres-
2,2',2",6,6',6"-hexa-ter-butil-4,4',4"-[(2,4,6-tri- pondiente y la Solución, estándar K.
metil-1,3,5-bencenotriil)tris-metileno]trifenol no En todos los casos registrar los cromatogramas
debe ser menor de 2. Cromatografiar la Solución durante 30 minutos. Los cromatogramas corres-
estándar C, empleando Fase móvil 3, registrar los pondientes a las Soluciones muestra S21, S22 y S23
cromatogramas y medir las respuestas de los picos deben presentar únicamente picos debidos a los
según se indica en Procedimiento: la resolución R antioxidantes declarados en la composición y otros
entre los picos de 3-(3,5-di-ter-butil-4- picos menores que también aparecen en los croma-
hidroxifenil)propionato de octadecilo y fosfito de togramas correspondientes a los blancos. Las res-
tris(2,4-di-ter-butilfenilo) no debe ser menor de 2. puestas de los picos de las Soluciones muestra S21,
Cromatografiar la Solución estándar E, empleando S22 y S23 deben ser menores que las respuestas co-
Fase móvil 4, registrar los cromatogramas y medir rrespondientes a los picos obtenidos a partir de las
las respuestas de los picos según se indica en Pro- Soluciones estándar D a K.
cedimiento: la resolución R entre los picos principa-
Antioxidantes no-fenólicos –
les (con tiempos de retención de aproximadamente
Fase estacionaria - Emplear una placa para
3,5 y 5,8) no debe ser menor de 6.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Procedimiento – grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
Emplear Fase móvil 1 si el material a ensayar grafía con indicador de fluorescencia de 0,25 mm
contiene butilhidroxitolueno y/o 3,3-bis(3-ter-butil-
de espesor.
4-hidroxifenil)-butirato de etileno. Inyectar por
Fase móvil 1 - Hexano.
separado en el cromatógrafo volúmenes iguales
Fase móvil 2 - Cloruro de metileno.
(aproximadamente 20 µl) de la Solución muestra
Solución estándar L - Disolver 60 mg de 2,2'-
S21, el blanco correspondiente, la Solución estándar bis(octadeciloxi)-5,5'-espirobi [1,3,2-dioxa-
A, y las Soluciones estándar D o E o 20 l de las fosforinano] en 10 ml de cloruro de metileno. Di-
Soluciones estándar D y E. luir 2 ml de esta solución a 10 ml con cloruro de
Emplear Fase móvil 2 si el material a ensayar metileno acidificado (SR).
contiene uno o varios de los siguientes antioxidan- Solución estándar M - Disolver 60 mg de disul-
tes: furo de dioctadecilo en 10 ml de cloruro de metile-
- 1,3,5-tris(3,5-di-ter-butil-4-hidroxibencil)-s- no. Diluir 2 ml de esta solución a 10 ml con cloruro
triazina-2,4,6(1H,3H,5H)-triona, de metileno acidificado (SR).
- tetrakis [3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxi- Solución estándar N - Disolver 60 mg de 3,3'-
fenil)propionato] de pentaeritritilo, tiodipropionato de didodecilo en 10 ml de cloruro
- 2,2',2",6,6',6"-hexa-ter-butil-4,4',4"-[(2,4,6- de metileno. Diluir 2 ml de esta solución a 10 ml
trimetil-1,3,5-bencenotriil) trismetileno] trilfenol, con cloruro de metileno acidificado (SR).
- 3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato de Solución estándar O - Disolver 60 mg de 3,3'-
octadecilo, tiodipropionato de dioctadecilo en 10 ml de cloruro
- fosfito de tris(2,4-di-ter-butilfenilo), de metileno. Diluir 2 ml de esta solución a 10 ml
Inyectar por separado en el cromatógrafo volú- con cloruro de metileno acidificado (SR).
menes iguales (aproximadamente 20 µl) de la Solu- Solución estándar P - Disolver 60 mg de 3,3'-
ción muestra S21, el blanco correspondiente, la tiodipropionato de didodecilo y 60 mg de 3,3'-
Solución estándar B y cada una de las Soluciones tiodipropionato de dioctadeciIo en 10 ml de cloruro
de metileno. Diluir 2 ml de esta solución a 10 ml Procedimiento - Aplicar sobre dos placas 10 µl
con cloruro de metileno acidificado (SR). de la Solución S24. Aplicar sobre la primera placa
Solución muestra S24 - Evaporar 100 ml de la 10 µl de la Solución estándar Q y aplicar sobre la
Solución S2 a sequedad en vacío a 45 °C. Disolver segunda placa 10 µl de las Soluciones estándar R y
el residuo en 2 ml de cloruro de metileno acidifica- S. Dejar secar las aplicaciones. Desarrollar la pri-
do (SR). mera placa, hasta que el frente del solvente haya
Revelador - Preparar una solución de iodo al recorrido aproximadamente 10 cm empleando Fase
1 % en etanol. móvil 1. Retirar la placa de la cámara, marcar el
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la frente del solvente y dejarla secar al aire. Pulveri-
placa 20 µl de la Solución muestra S24, 20 µl de la zar sobre la placa con Revelador 1. Calentar en una
Solución estándar P y 20 µl de cada una de las estufa a 120 °C durante unos minutos para intensi-
Soluciones estándar que corresponden a todos los ficar las manchas. Cualquier mancha que corres-
antioxidantes fenólicos y no-fenólicos presentes en ponda a ácido esteárico en el cromatograma de la
la composición del material a ensayar. Dejar secar Solución muestra S24 debe ser idéntica en posición
las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas (Rf aproximadamente de 0,5) pero no más intensa
hasta que el frente del solvente haya recorrido que la mancha obtenida a partir de la Solución
aproximadamente 18 cm empleando Fase móvil 1. estándar Q.
Retirar la placa de la cámara y dejar secar. Des- Desarrollar la segunda placa hasta que el frente
arrollar nuevamente los cromatogramas hasta que el del solvente haya recorrido aproximadamente
frente del solvente haya recorrido aproximadamente 13 cm empleando Fase móvil 2. Retirar la placa de
17 cm empleando Fase móvil 2. Retirar la placa de la cámara y dejar secar al aire. Desarrollar nueva-
la cámara, marcar el frente del solvente y dejar mente hasta que el frente del solvente haya recorri-
secar. Examinar bajo luz ultravioleta a 254 nm. do aproximadamente 10 cm empleando Fase móvil
Pulverizar sobre la placa con Revelador, dejar secar 3. Retirar la placa de la cámara y marcar el frente
durante 10 a 15 minutos y examinar bajo luz ultra- del solvente. Dejar secar la placa. Pulverizar sobre
violeta a 254 nm. Cualquier mancha en el cromato- la placa con Revelador 2. Calentar en una estufa a
grama de la Solución muestra S24 no debe ser más 120 °C hasta que aparezcan las manchas. Las man-
intensa que las manchas correspondientes obtenidas chas que corresponden a erucamida u oleamida en
a partir de las Soluciones estándar. El ensayo no es el cromatograma de la Solución muestra S24 deben
válido a menos que el cromatograma de la Solución ser idénticas en posición (Rf aproximadamente de
estándar P presente dos manchas claramente sepa- 0,2) pero no más intensas que las manchas obteni-
radas. das a partir de las Soluciones estándar R y S.
Amidas y estearatos – Sustancias solubles en hexano - Transferir
Fase estacionaria - Emplear una placa para 10 g del material a ensayar a un erlenmeyer de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- vidrio al borosilicato de 250 ml con boca esmerila-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- da. Agregar 100 ml de hexano y calentar a reflujo
grafía con indicador de fluorescencia de 0,25 mm durante 4 horas, agitando constantemente. Enfriar
de espesor. en un baño de hielo y filtrar rápidamente (el tiempo
Fase móvil 1 - 2,2,4-Trimetilpentano y etanol de filtración debe ser menor de 5 minutos, si es
(75:25). necesario la filtración puede ser acelerada aplicando
Fase móvil 2 - Hexano. presión sobre la solución) a través de un filtro de
Fase móvil 3 - Cloruro de metileno y metanol vidrio sinterizado de porosidad media manteniendo
(95:5). la solución a aproximadamente 0 °C. Evaporar
Solución estándar Q - Disolver 20 mg de ácido 20 ml del filtrado en un cristalizador previamente
esteárico en 10 ml de cloruro de metileno. pesado en un baño de agua. Secar el residuo en una
Solución estándar R - Disolver 40 mg de olea- estufa entre 100 y 105 °C durante 1 hora. El peso
mida en 20 ml de cloruro de metileno. del residuo obtenido debe ser igual al del residuo
Solución estándar S - Disolver 40 mg de eru- obtenido a partir del material de referencia, con una
camida en 20 ml de cloruro de metileno. desviación máxima de ± 10 % y dicho peso no debe
Solución muestra - Solución S24 preparada en ser mayor de 5 %.
Antioxidantes no fenólicos.
Aluminio extraíble - (ver 440. Espectrofoto-
Revelador 1 - Solución de 2,6-Dicloro-fenol- metría de absorción, y emisión atómica).
indofenol sódico al 0,2 % en etanol. Solución madre del estándar - Disolver en agua
Revelador 2 - Solución de ácido fosfomolíbdico
una cantidad de sulfato de potasio y aluminio, equi-
al 4 % en etanol.
valente a 352 mg de AlK(SO4)2 . 12H2O. Agregar
10 ml de ácido sulfúrico diluido y diluir a 100 ml Soluciones estándar - Preparar las soluciones
con agua (200 ppm de A1). estándar empleando la Solución madre del estándar
Soluciones estándar - Preparar las soluciones diluida con ácido clorhídrico 0,1 M.
estándar empleando la Solución madre del estándar Procedimiento - Medir la absorbancia a
diluida con ácido clorhídrico 0,1 M. 364,3 nm empleando una lámpara de titanio de
Solución muestra - Evaporar a sequedad 100 ml cátodo hueco como fuente de radiación y una llama
de Solución S3 en un baño de agua. Disolver el de óxido nitroso-acetileno. No debe contener más
residuo en 2 ml de ácido clorhídrico y diluir a 10 ml de 1 ppm de Ti extraíble.
con ácido clorhídrico 0,1 M. Cinc extraíble - (ver 440. Espectrofotometría
Procedimiento - Medir la absorbancia a
de absorción y emisión atómica).
309,3 nm empleando una lámpara de aluminio de
Solución madre del estándar - Disolver una
cátodo hueco como fuente de radiación y una llama
cantidad de sulfato de cinc, equivalente a 440 mg de
de óxido nitroso-acetileno. No debe contener más
ZnSO4 . 7H2O, en agua. Agregar 1 ml de ácido
de 1 ppm de Al extraíble. acético y diluir a 100 ml con agua. Diluir 1 ml de
Titanio extraíble - (ver 440. Espectrofoto- esta solución a 10 ml con agua. Antes de usar,
metría de absorción y emisión atómica). diluir 1 ml de esta solución a 10 ml con agua
Solución muestra – Evaporar a sequedad (10 ppm de Zn).
100 ml de Solución S3 en un baño de agua. Disol- Soluciones estándar - Preparar las soluciones
ver el residuo en 2 ml de ácido clorhídrico y diluir a estándar empleando una Solución madre del están-
10,0 ml con ácido clorhídrico 0,1 M. dar diluida con ácido clorhídrico 0,1 M.
Solución madre del estándar - Disolver Solución muestra - Solución S3.
100,0 mg de titanio en 100 ml de ácido clorhídrico Procedimiento - Medir la absorbancia a
diluido hasta 150 ml con agua, calentando si fuera 213,9 nm empleando una lámpara de cinc de cátodo
necesario. Dejar enfriar y diluir a 1 litro con agua hueco como fuente de radiación y una llama de
(100 ppm de Ti). acetileno-aire. No debe contener más de
1 ppm de Zn extraíble.
LÍMITES DE ADITIVOS
ADITIVOS LÍMITES (%)
Aditivos antioxidantes –
butilhidroxitolueno 0,125
tetrakis [3-(3,5-di-ter-butil-4 hidoxifenil)propionato] de pentaeritritilo 0,3
1,3,5-tris(3,5-di-ter-butil-4-hidroxibencil)-s-triazina-2,4,6-(1H,3H,5H)triona 0,3
3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato de octadecilo 0,3
3,3-bis(3-ter- butil-4-hidroxifenil)butirato de etileno 0,3
disulfuro de dioctadecilo 0,3
2,2 ,2 ,6,6 ,6 -hexa-ter-butil-4,4 ,4 -[(2,4,6-trimetil-1,3,5-bencenotriil)trismetileno]trifenol 0,3
2,2’-bis(octadeciloxi)-5,5’-espirobi(1,3,2-dioxafosforinano) 0,3
3,3´-tiodopropionato de didodecilo 0,3
3,3´- tiodipropionato de dioctadecilo 0,3
fosfito de tris(2,4-di-ter-butilfenilo) 0,3
P-EPQ 0,1
copolímero de succinato de dimetilo y (4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)etanol 0,3
El total de de aditivos antioxidante enumerados anteriormente 0,3
Otros aditivos-
hidrocalcita 0,5
alcanoamidas 0,5
LÍMITES DE ADITIVOS – continuación
ADITIVOS LÍMITES (%)
alquenoamidas 0,5
silicio-aluminato de sodio 0,5
sílice 0,5
benzoato de sodio 0,5
ésteres o sales de ácidos grasos 0,5
fosfato trisódico 0,5
vaselina líquida 0,5
óxido de cinc 0,5
talco 0,5
estearato de calcio o cinc o una mezcla de ambos 0,5
dióxido de titanio 4
óxido de magnesio 0,2
Tabla 1.
Cantidad máxima de
Tipo de
ácido clorhídrico
vidrio
0,01 N (ml)
I 2
II-III 17
IV 30
Resistencia hidrolítica de la superficie del vidrio envases a emplear según su capacidad y el volumen
Procedimiento - La Tabla 2 indica la cantidad de de solución empleado en la titulación.
Tabla 2.
Volumen de solución
Capacidad
N° de envases empleado para la
nominal (ml)
titulación (ml)
3 no menor de 10 25
3 30 no menor de 5 50
30 No menor de 3 100
Inmediatamente antes del ensayo, lavar por lo los líquidos de los envases, mezclarlos y medir con
menos 3 veces cada envase con agua, a temperatura una probeta el volumen especificado en la Tabla 2
ambiente. Llenar los envases en su totalidad con para cada caso, transfiriéndolo a un erlenmeyer.
agua, vaciarlos y calcular el volumen de derrame Agregar el mismo volumen de agua en un
promedio. erlenmeyer idéntico, que será empleado como
Llenar las ampollas con agua hasta alcanzar el blanco. Agregar a cada erlenmeyer 0,05 ml de
nivel del hombro y sellarlas. En el caso de los Solución indicadora de rojo de metilo cada 25 ml
frascos, llenarlos al 90 % de su volumen de derrame de líquido y titular el blanco con ácido clorhídrico
y taparlos con vasos de precipitados de vidrio al 0,01 N. Titular la Solución muestra tomando como
borosilicato lavados con agua. Colocar los envases punto final el color obtenido en la titulación del
en el autoclave y calentar a 121 ± 1 °C durante blanco y hacer las correcciones necesarias. La
60 minutos, reducir el calor de modo que el diferencia entre ambas titulaciones representa el
autoclave se enfríe y la presión se normalice en un volumen de ácido clorhídrico 0,01 N requerido para
tiempo entre 38 y 46 minutos, evitando la el volumen empleado de la Solución muestra.
formación de vacío. Calcular el volumen necesario para 100 ml y
En un tiempo no mayor de 1 hora después de referir los resultados a los límites de la Tabla 3.
haber sacado los envases del autoclave, combinar
Tabla 3.
Capacidad del envase correspondiente al 90 %
Cantidad máxima en ml de ácido clorhídrico 0,01 N por
del volumen de derrame promedio
100 ml de Solución muestra
(ml)
Tipo I y II Tipo III
1 2 20
1y 2 1,8 17,6
Tabla 3. Continuación
Capacidad del envase correspondiente al 90 % Cantidad máxima en ml de ácido clorhídrico 0,01 N por
del volumen de derrame promedio 100 ml de Solución muestra
(ml)
Tipo I y II Tipo III
2y 5 1,3 13,2
5 y 10 1 10,2
10 y 20 0,8 8,1
20 y 50 0,6 6,1
50 y 100 0,5 4,8
100 y 200 0,4 3,8
200 y 500 0,3 2,9
500 0,2 2,2
[NOTA: cualquier envase de tamaño intermedio a los mencionados anteriormente debe tener una transmisión
igual o menor que la del envase de tamaño inmediato superior en la Tabla 4.]
435. ENVASES PARA PRODUCTOS MÉDICOS ESTÉRILES
Ver 435. Envases para productos Médicos Estériles en Apartado de Productos Médicos en Volumen III.
440. ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION Y EMISION
ATOMICA
Estas técnicas se emplean para la determinación determinados reduciendo químicamente el elemento
de la concentración de un elemento metálico en una y luego arrastrando el producto con un gas inerte
muestra. La determinación se efectúa mediante la hasta la celda de absorción, donde se lo disocia por
medida de la intensidad de absorción o emisión de calentamiento, colocando los átomos así generados
luz, producida por el vapor atómico del elemento en el paso óptico.
generado a partir de la muestra en solución,
Emisión atómica
realizada a una longitud de onda específica para
cada elemento. Los átomos en el estado excitado generalmente
son inestables y vuelven rápidamente al estado
Absorción atómica basal, perdiendo la energía adquirida en el proceso
Aparato - Consta de una fuente de radiación, un de absorción, dando lugar así a líneas de emisión a
generador de átomos del elemento a analizar (llama, la misma longitud de onda a la cual ocurrió la
horno, generador de vapor, etc.) que permite absorción.
introducir el analito en el paso óptico, un Aparato - Consta esencialmente de los mismos
monocromador y un detector. componentes que el aparato empleado para
absorción atómica, excepto que no requiere una
Generación de vapores atómicos -
fuente de radiación. La excitación se efectúa
Llama - Este sistema emplea un nebulizador empleando llamas de aire-acetileno y óxido nitroso-
para generar una niebla a partir de la solución del acetileno, como las indicadas en Llama.
analito. Por evaporación del solvente cerca de la La espectrofotometría de emisión atómica
base de la llama, se obtienen pequeñas partículas acoplada a plasma inductivo (ICP-AES) es una
sólidas, las que son fundidas y vaporizadas, metodología relacionada, donde mediante
disociándose sus moléculas constituyentes para temperaturas muy elevadas se logra la completa
producir átomos libres en estado basal. ionización de los elementos, minimizando las
El tipo de llama se debe seleccionar de acuerdo interferencias químicas.
con la clase de elemento a analizar:
a) Para elementos fácilmente atomizables como Procedimiento general
cobre, plomo, potasio y sodio se debe emplear Para operar el espectrofotómetro deben seguirse
llama de aire-acetileno. las instrucciones del fabricante y realizar el ensayo
b) Para elementos que forman compuestos a la longitud de onda especificada en la monografía
refractarios y que no se descomponen en la llama correspondiente. Emplear el Método I a menos que
aire-acetileno como aluminio, silicio y tungsteno se se especifique de algún modo en la monografía
debe emplear llama de óxido nitroso-acetileno. correspondiente.
c) Para determinar elementos tales como El espectrofotómetro debe calibrarse según se
arsénico, calcio, cromo, magnesio, molibdeno, indica a continuación:
osmio, selenio o estroncio, pueden ser empleados Para las medidas de absorción - Introducir
indistintamente ambos tipos de llama. agua o la solución blanco especificada en la
Horno de grafito - En éste sistema, la solución monografía correspondiente en el generador de
del analito es atomizada de una sola vez en un tubo vapor atómico y ajustar la lectura de forma que
de grafito, donde se seca y luego se calcina por indique el 100 % de transmitancia. Introducir la
incremento de la temperatura permitiendo eliminar, solución estándar más concentrada en el generador
tanto como sea posible, el material de la matriz sin y ajustar la sensibilidad para obtener una lectura
pérdida del analito. La posterior vaporización de apropiada.
los residuos provenientes del período de calcinado Para las medidas de emisión - Introducir agua o
genera átomos libres, los cuales permanecen en el la solución blanco especificada en la monografía
paso óptico por un período de tiempo mayor que en correspondiente en el generador de vapor atómico y
el caso de la generación mediante llama. ajustar la lectura del aparato a cero. Introducir la
Vapor frío - Este sistema es extremadamente solución estándar más concentrada en el generador
sensible para determinar mercurio y ciertos y ajustar la sensibilidad para obtener una lectura
elementos formadores de hidruros metálicos apropiada.
estables, tales como arsénico, selenio, antimonio,
bismuto, telurio y estaño. Estos pueden ser Método I
Calibración directa
Preparar no menos de tres soluciones estándar Extrapolar la recta hasta su intersección con el eje
que contengan el elemento a determinar, abarcando de las abcisas; la distancia entre este punto y el
el intervalo de concentración recomendado por el punto de intersección de los ejes representa la
fabricante del aparato y para el elemento. Todo concentración del elemento en la solución muestra.
reactivo empleado en la preparación de la solución
muestra se debe agregar a las soluciones estándar en
la misma concentración. Luego de calibrar el
aparato, introducir cada solución estándar en el
generador por lo menos tres veces y registrar la
lectura en cada caso cuando ésta sea constante.
[NOTA: si el generador es una llama, lavar con
agua o solución blanco luego de cada introducción;
si se emplea un horno, quemar luego de cada
introducción.] Realizar una curva de calibración,
representando el promedio de cada grupo de tres
lecturas en función de la concentración. Preparar
una solución muestra según se especifica en la
monografía correspondiente, ajustando la
concentración para que la lectura obtenida esté
comprendida dentro del intervalo de
concentraciones de las soluciones estándar.
Introducir la solución muestra en el generador y
registrar la lectura. Repetir este procedimiento dos
veces más y, empleando el promedio de las tres
lecturas, determinar la concentración del elemento a
partir de la curva de calibración.
Método II
Adición de estándar
Transferir volúmenes iguales de la solución
muestra preparada según se especifica en la
monografía correspondiente a tres matraces
aforados. Agregar a dos de ellos una cantidad
conocida de la solución estándar especificada para
producir una serie de soluciones con cantidades
crecientes del elemento a determinar. Diluir el
contenido de cada matraz al volumen requerido con
agua o el solvente especificado en la monografía
correspondiente y homogeneizar. Las
concentraciones de las muestras deben estar
incluidas en la región donde la respuesta del aparato
es directamente proporcional a la concentración.
Luego de calibrar el aparato como se indicó
anteriormente, introducir cada solución en el
generador no menos de tres veces y registrar la
lectura cuando se estabilice. [NOTA: si el
generador es una llama, lavar con agua o la solución
blanco luego de cada introducción; si se emplea un
horno, quemar luego de cada introducción, tomando
la precaución de asegurar que la lectura vuelva al
valor inicial del blanco luego de cada
determinación.] Representar gráficamente los
promedios de las lecturas obtenidas en función de la
cantidad de elemento agregada, trazando la línea
recta que mejor se ajuste a los puntos marcados.
450. ESPECTROFOTOMETRIA DE FLUORESCENCIA
La espectrofotometría de fluorescencia es una en la cual CE es la concentración de la solución
técnica empleada para determinar la concentración estándar, IM es la intensidad de luz emitida por la
de una sustancia comparando la intensidad de luz solución muestra e IE es la intensidad de luz emitida
fluorescente emitida por la misma con la emitida por la solución estándar.
por la Sustancia de referencia correspondiente, en Realizar el ensayo dentro del intervalo de
las mismas condiciones. concentraciones en el cual la respuesta es lineal.
Aparato - Se pueden emplear dos tipos de
aparatos, fluorómetro de filtro y espectro-
fluorómetro. El primero consta de los siguientes
componentes:
— Una fuente de radiación, generalmente una
lámpara de mercurio o tungsteno.
— Un filtro primario colocado entre la fuente de
radiación y la celda, para seleccionar la longitud de
onda de excitación.
— Una celda para contener la muestra.
— Un filtro secundario colocado entre la celda y
el detector, que actúa como un filtro interruptor fino
que permite transmitir la radiación fluorescente,
bloqueando en cambio la radiación dispersa.
— Un detector de fluorescencia colocado de
manera que forme un ángulo de 90 ° con respecto a
la dirección del haz de luz incidente, con el objeto
de minimizar la interferencia de la luz transmitida.
El espectrofluorómetro presenta los mismos
componentes que el fluorómetro de filtro, sólo que
los filtros se han reemplazado por sistemas
monocromadores como prismas o redes de
difracción, siendo frecuentemente empleada una
lámpara de arco de xenón a alta presión como
fuente de radiación.
Procedimiento - Ajustar la lectura del aparato a
cero empleando el solvente o mezcla de solventes
indicados para disolver la muestra, a la longitud de
onda especificada en la monografía
correspondiente. Transferir a la celda un volumen
apropiado de una solución estándar preparada a
partir de la Sustancia de referencia correspondiente
y regular la sensibilidad del aparato de modo que la
lectura sea mayor a 50. Si el segundo ajuste se
realiza modificando la apertura de las rendijas,
ajustar nuevamente a cero el aparato y medir
nuevamente la intensidad de fluorescencia de la
solución estándar. Disolver la muestra en el
solvente o mezcla de solventes especificados en la
monografía correspondiente. Transferir un
volumen apropiado de esta solución a la celda y
medir la intensidad de la luz emitida en las mismas
condiciones. Calcular la concentración de la
sustancia en la solución muestra, por la fórmula
siguiente:
cE I M / I E
460. ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA
INFRARROJO MEDIO de material transparente a la radiación infrarroja.
La absorción debido al solvente puede compensarse
Aparato - Los espectrofotómetros para
colocando el solvente puro en la celda de
registrar espectros en la región infrarroja están
referencia; sin embargo, aquellas regiones del
constituidos por un sistema óptico capaz de proveer
luz monocromática en la región de 4.000 a 600 cm-1 espectro en las que el solvente presenta una fuerte
(2,5 a 15 µm), o en algunos casos por debajo de absorción no deben tenerse en cuenta. La
concentración apropiada del soluto varía según la
200 cm-1 (50 µm), y por elementos que permiten
sustancia, pero en general se emplean
medir el cociente entre las intensidades de luz
concentraciones entre 1 y 10 % para un paso óptico
transmitida e incidente.
de 0,5 a 0,1 mm.
Calibración del aparato - Los aparatos
En fase sólida - A menos que se especifique de
empleados para registrar los espectros infrarrojos
otro modo en la monografía correspondiente,
especificados en esta Farmacopea deben cumplir
triturar en un mortero aproximadamente 1 a 2 mg
con los siguientes ensayos de calibración:
de la sustancia a analizar con 200 a 300 mg de
Resolución - Registrar el espectro de una bromuro de potasio o cloruro de potasio seco y
película de poliestireno de 0,05 mm de espesor. La finamente pulverizado. Estas cantidades son en
distancia entre el máximo de absorción a 2.851 cm-1 general apropiadas para un disco de 13 mm de
(3,51 µm) y el mínimo a 2.870 cm-1 (3,48 µm) debe diámetro y un espectro de intensidad apropiada.
ser equivalente a no menos de 18 % de Moler la mezcla con cuidado, esparcir
transmitancia y la distancia entre el máximo a uniformemente en un molde apropiado y comprimir
1.583 cm-1 (6,32 µm) y el mínimo a 1.589 cm-1 a una presión de aproximadamente 10.000 kg/cm2,
(6,29 µm) debe ser equivalente a no menos de 12 % aplicando vacío. El disco obtenido se coloca en el
de transmitancia. espectrofotómetro con un soporte apropiado.
Verificación de la escala de longitud de onda - Varios factores, tales como una molienda
La escala de longitud de onda puede verificarse inadecuada, humedad e impurezas en el haluro
empleando una película de poliestireno que presente pueden dar origen a discos no aptos para el análisis.
máximos de absorción a los siguientes números de El disco debe desecharse si no es uniforme cuando
onda (en cm-1): se lo examina visualmente o si la transmitancia a
2.000 cm-1 en ausencia de una banda de absorción
3.027,1 (±0,3) 1.583,1 (±0,3) específica, es menor de 75 % sin emplear
2.924,0 (±2,0) 1.181,4 (±0,3) compensación en el haz de referencia.
2.850,7 (±0,3) 1.154,3 (±0,3) En suspensión - Triturar 5 a 10 mg de la
1.9 44,0 (±1,0) 1.069, 1 (±0,3) sustancia a analizar con 2 gotas de vaselina líquida
1.871,0 (±0,3) 1.028,0 (±0,3) apropiada hasta obtener una mezcla cremosa
homogénea. Colocar una porción de la mezcla así
1.801,6 (±0,3) 906,7 (±0,3) obtenida entre dos placas de cloruro de sodio u otro
1.601,4 (±0,3) 698,9 (±0,5) material transparente a la radiación infrarroja y
[NOTA: los valores entre paréntesis indican las presionar suavemente las placas para formar una
tolerancias permitidas.] película fina.
Preparación de la muestra - Las muestras se Gases - Emplear una celda para gases con un
preparan de acuerdo con su naturaleza, de la paso óptico de aproximadamente 100 mm.
siguiente manera: Evacuarla y llenarla a la presión deseada mediante
un robinete o válvula de aguja empleando una línea
En película fina - Colocar 1 ó 2 gotas entre dos
de transferencia apropiada para gases entre la celda
placas de cloruro de sodio u otro material
y el recipiente de la sustancia a analizar. Si fuera
transparente a la radiación Infrarroja y presionar
necesario, ajustar la presión con un gas transparente
suavemente las placas para formar una fina película. a la radiación infrarroja, como por ej. nitrógeno o
También puede emplearse una celda del mismo argón. Para evitar interferencias de absorción
material y de paso óptico apropiado.
debido al vapor de agua, dióxido de carbono u otros
En solución - Preparar una solución en el gases atomosféricos, colocar en el haz de referencia
solvente y a la concentración especificada en la una celda idéntica evacuada o llenada con un gas
monografía correspondiente y transferir a una celda transparente a la radiación infrarroja.
Reflectancia múltiple - Cuando se especifica
este método en una monografía, preparar la muestra
por uno de los siguientes métodos:
Soluciones - Disolver la muestra en el solvente
apropiado bajo las condiciones especificadas en la
monografía correspondiente. Evaporar la solución
sobre una placa de bromuro de talio-ioduro de talio
o sobre otra placa apropiada.
Sólidos - Colocar la muestra sobre una placa de
bromuro de talio-ioduro de talio o sobre otra placa
apropiada, de manera de lograr un contacto
uniforme.
Identificación por medio de espectros de
referencia - Preparar la muestra en condiciones
similares a las indicadas para la obtención del
espectro de referencia y registrar el espectro de la
sustancia a analizar. Sobre éste, registrar las bandas
de poliestireno a 2.851 cm-1 (3,51 µm), 1.601 cm-1
(6,25 µm) y 1.028 cm-1 (9,73 µm). Comparar los
espectros y los máximos del poliestireno indicados
en Verificación de la escala de longitud de onda.
Las zonas correspondientes a la impresión digital
(entre 1.400 a 600 cm-1) de ambas sustancias deben
ser en un todo concordantes.
Identificación por medio de sustancias de
referencia - Preparar la muestra según se
especifica en la monografía correspondiente
teniendo en cuenta la metodología indicada en
Preparación de la muestra. Tratar la Sustancia de
referencia de la misma manera. Registrar los
espectros entre 4.000 y 600 cm-1 (2,5 a 15 µm) bajo
las mismas condiciones. Los máximos de
absorción, correspondientes a la zona de impresión
digital (entre 1.400 a 600 cm-1), en el espectro
obtenido con la muestra deben corresponder en
posición e intensidad relativa a los del obtenido con
la Sustancia de referencia.
470. ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA Y VISIBLE
La espectrofotometría en el ultravioleta y visible Los valores de a, E (1 %, 1 cm) y , a una
consiste en la medida de la absorción de las longitud de onda específica y en un solvente
radiaciones electromagnéticas comprendidas en un determinado son característicos del analito.
intervalo espectral de 200 a 400 nm para la región
Aparato - Consta de un sistema óptico capaz
ultravioleta y de 400 a 700 nm para la región
de producir luz monocromática en la región de 200
visible.
a 800 nm, un dispositivo para seleccionar una banda
El grado en que la radiación es absorbida al
angosta de longitudes de onda, una celda para
pasar a través de un medio homogéneo se expresa
contener la muestra y un detector apropiado para
en términos de absorbancia, A. La absorbancia de
determinar la absorbancia.
una solución es el logaritmo decimal de la inversa
Cuando se emplean aparatos de doble haz, la
de la transmitancia, T, siendo esta última definida:
celda que contiene el blanco se coloca en el haz de
como la fracción de radicación incidente que logra
referencia. Las celdas empleadas para la solución
atravesar la muestra. Para una radiación
muestra y el blanco deben tener las mismas
monocromática, A se calcula mediante la siguiente
características espectrales.
expresión:
Calibración del aparato - Los aparatos
A log 1 / T log I 0 / I empleados para registrar los espectros ultravioleta y
visible indicados en esta Farmacopea deben cumplir
donde Io es la intensidad de radiación incidente e I
con los siguientes ensayos:
es la intensidad de radiación transmitida.
De acuerdo con la ley de Lambert-Beer, la Verificación de la escala de longitud de onda -
absorbancia es proporcional al paso óptico, d, de la La escala de longitud de onda puede verificarse
capa absorbente atravesada por la radiación y a la midiendo los máximos de absorbancia de una
concentración, c, del analito: solución estándar de perclorato de holmio a 241,15;
287,15; 361,50 y 536,30 nm, los máximos de
A kdc absorbancia correspondientes a las líneas de
La constante de proporcionalidad, k, asume emisión de una lámpara de hidrógeno a 486,10 nm
distintas denominaciones según las unidades en que o deuterio a 486,00 nm, o las líneas de un arco de
d y c son expresadas: vapor de mercurio a 253,70; 302,25; 313,16;
334,15; 365,48; 404,66; 435,83; 546,07; 576,96 y
Absortividad (a): es la absorbancia de una 579,07 nm. La tolerancia permitida es de ± 1 nm
solución cuya concentración, c, es de 1 g por litro, para el ultravioleta y ± 3 nm para el visible.
medida en una celda de paso óptico, d, de 1 cm.
Control de absorbancias - Controlar la
a A / cd absorbancia con una solución de dicromato de
Coeficiente de extinción específica [E(1 %, potasio preparada según se indica a continuación:
1 cm)]: es la absorbancia de una solución cuya Solución de dicromato de potasio - Transferir a
concentración, c, es de 1 %, medida en una celda de un matraz aforado de 1 litro aproximadamente
paso óptico, d, de 1 cm, 60 mg de dicromato de potasio, exactamente
pesados y previamente secados a 130 ºC hasta peso
E 1%,1cm A / cd 10a constante. Disolver y diluir a volumen con ácido
sulfúrico 0,005 M.
Absortividad molar ( ): es la absorbancia de Registrar el espectro de la Solución de
una solución cuya concentración es 1 mol por litro, dicromato de potasio y determinar las absorbancias
medida en una celda de paso óptico, d, de 1 cm. a las longitudes de onda especificadas en la Tabla.
Puede calcularse como el producto de la Los valores de E (1 %, 1 cm) deben estar dentro de
absortividad por el peso molecular, PM, del analito. las tolerancia especificadas.
= aPM
Tabla.
Longitud de onda (nm) E (1 %, 1 cm) Tolerancia máxima
235 124,5 122,9 a 126,2
257 144,0 142,4 a 145,7
313 48,6 47,0 a 50,3
350 106,6 104,9 a 108,2
Límite de luz espuria - La absorbancia de una deban efectuar con referencia a una mezcla de
solución de cloruro de potasio al 1,2 %, medida a reactivos, los detalles se describen en las
200 nm con un paso óptico de 1 cm, empleando monografías correspondientes.
agua como blanco, debe ser mayor de 2. Cuando en una monografía se especifica la
longitud de onda a la cual se presenta un máximo de
Resolución (para análisis cualitativo) -
absorción, implica que dicho máximo presenta una
Registrar el espectro de una solución de tolueno al
0,02 % en hexano. La relación entre el máximo de tolerancia de ± 2 nm.
absorbancia a 269 nm, y el mínimo a 266 nm no Cuando un ensayo indica el empleo de una
Sustancia de referencia, se deben realizar las
debe ser menor de 1,5.
medidas espectrofotométricas con la solución
Asimismo, deberán tenerse las siguientes
preparada a partir de la Sustancia de referencia y
precauciones:
luego con la solución correspondiente preparada a
Ancho de rendija (para análisis cuantitativo) -
Cuando se mide la absorbancia a un máximo de partir de la muestra. Efectuar las medidas en
absorción y cuando se emplea un aparato con ancho sucesión inmediata, empleando la misma celda y las
mismas condiciones experimentales.
de rendija variable a la longitud de onda
seleccionada, el ancho de rendija debe ser pequeño Identificación por medio de Sustancias de
comparado con la mitad del ancho de la banda de referencia - Cuando en una monografía se
absorción. Sin embargo, debe ser lo más grande especifica un ensayo de identificación por
posible para obtener un valor alto de Io y debe ser espectrofometría ultravioleta, la solución muestra y
tal que una reducción adicional no resulte en un la solución estándar deben medirse en celdas de
aumento de la lectura de absorbancia. 1 cm de paso óptico, en el intervalo espectral
Celdas - Las absorbancias de las celdas de comprendido entre 200 y 400 mm, a menos que se
lectura, cuando se llenan con el mismo solvente, especifique de otro modo en la monografía
deben ser iguales. Si este no es el caso, debe correspondiente.
aplicarse una corrección apropiada. Disolver una porción de la muestra en el
La tolerancia en el paso óptico de las celdas Solvente especificado para obtener una solución con
empleadas es ± 0,005 cm. Las celdas deben una concentración conocida aproximadamente igual
limpiarse y manipularse con cuidado. a la especificada en Concentración en la
Solventes - Cuando se mide la absorbancia de monografía correspondiente. En forma similar,
una solución a una longitud de onda determinada, la preparar una Solución estándar que contenga la
absorbancia de la celda de referencia y su contenido Sustancia de referencia correspondiente.
no debe ser mayor de 0,4 y es conveniente que sea Registrar en sucesión inmediata los espectros de
menor de 0,2 cuando se mide en referencia al aire a la Solución muestra y la Solución estándar.
la misma longitud de onda. El solvente en la celda Calcular los coeficientes de extinción específica y/o
de referencia debe ser del mismo lote que el la relación de absorbancias según se especifica en la
empleado para preparar la solución muestra. monografía correspondiente. Los requisitos se
cumplen si los espectros de absorción ultravioleta
Determinación de la absorbancia - A menos
de la Solución muestra y la Solución estándar
que se especifique de otro modo en la monografía
presentan máximos y mínimos a las mismas
correspondiente, medir la absorbancia a la longitud
de onda especificada empleando celdas de 1 cm de longitudes de onda, y los coeficientes de extinción
específica y/o la relación de absorbancias están
paso óptico y efectuar las medidas con referencia al
dentro de los límites especificados en dicha
solvente o solventes empleados para preparar la
monografía
solución muestra. En caso de que las medidas se
475. ESTERILIZACIÓN
Ver 475. Esterilización en Apartado de Productos Médicos en Volumen III.
480. GRASAS Y ACEITES FIJOS
Ver 480. Grasas y aceites fijos en Apartado de Fitoterápicos en Volumen III.
490. IDENTIFICACIÓN DE BASES ORGÁNICAS
NITROGENADAS
El siguiente ensayo se emplea para identificar ampolla de decantación y disolver en 25 ml de
sustancias que posean grupos amino terciarios. ácido clorhídrico 0,01 N.
Procedimiento - Para cada solución, proceder
Solución muestra - Para realizar el ensayo sobre
de la siguiente manera: agregar 2 ml de hidróxido
materia prima, disolver 50 mg de la sustancia en
de sodio 1 N y 4 ml de disulfuro de carbono. Agitar
ensayo en 25 ml de ácido clorhídrico 0,01 N. Para
realizar el ensayo sobre comprimidos, reducirlos a durante 2 minutos y, si fuera necesario, centrifugar
polvo fino y disolver con agitación una cantidad, la solución para clarificar la fase inferior. Filtrar a
través de un filtro seco, recolectando el filtrado en
equivalente a 50 mg de la sustancia en ensayo, con
un matraz apropiado con tapón de vidrio.
25 ml de ácido clorhídrico 0,01 N. Si el producto
Determinar el espectro de absorción infrarroja
se presenta en cápsulas, proceder del mismo modo
con una cantidad de polvo extraída de las mismas. de la Solución estándar y la Solución muestra, en
Transferir la solución obtenida a una ampolla de celdas de 1 mm, a una longitud de onda entre 7 y
decantación, filtrar y lavar con agua el residuo y el 15 m, con un espectrofotómetro apropiado,
filtro, si fuera necesario. empleando disulfuro de carbono como blanco. El
Solución estándar - Transferir 50 mg de la espectro de absorción infrarroja de la Solución
Sustancia de referencia correspondiente a una muestra debe presentar las mismas bandas de
absorción que el de la Solución estándar
500. IDENTIFICACION DE TETRACICLINAS
El siguiente ensayo se emplea para identificar e inmediatamente examinar bajo luz ultravioleta a
sustancias pertenecientes al grupo de las 366 mm: el cromatograma de la Solución de
tetraciclinas. A menos que se especifique de otro resolución debe presentar manchas separadas y la
modo en la monografía correspondiente, emplear mancha principal obtenida a partir de la Solución
el Método I. muestra debe ser similar en intensidad, apariencia
Solución estándar - A menos que se y valor de Rf a la obtenida a partir de la Solución
especifique de otro modo en la monografía estándar.
correspondiente, disolver y diluir la Sustancia de
referencia correspondiente a la sustancia a Método II
identificar con el mismo solvente especificado Solución reguladora de pH 3,5 - Disolver
para la Solución muestra, para obtener una 13,4 g de ácido cítrico anhidro y 16,3 g de fósfato
solución con una concentración similar a la dibásico de sodio en 1 litro de agua y mezclar.
obtenida para la Solución muestra. Fase estacionaria - Emplear un papel para
Solución muestra - Proceder según se cromatografía de 20 cm x 20 cm (Whatman N° 1
especifica en la monografía correspondiente. o equivalente). Impregnar la hoja con Solución
reguladora de pH 3,5 y eliminar el exceso del
Método I solvente presionando firmemente la hoja entre dos
Fase estacionaria - Emplear una placa para papeles secantes no fluorescentes.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Fase móvil - Nitrometano, cloroformo y
Cromatografía) recubierta con gel de sílice piridina (20:10:3). Emplear esta mezcla el mismo
octilsilanizado con indicador de fluorescencia de día de preparada.
0,25 mm de espesor. Activar la placa por Solución mezcla - Solución estándar y
calentamiento a 130 °C durante 20 minutos, dejar Solución muestra (50:50).
enfriar y emplearla mientras esté tibia. Procedimiento - En una cámara para
Fase móvil - Acido oxálico 0,5 M, cromatografía ascendente (ver 100.
previamente ajustado a pH 2,0 con hidróxido de Cromatografía), colocar la Fase móvil hasta una
amonio, acetonitrilo y metanol (80:20:20). altura de 0,6 cm. Sobre la línea de siembra en la
Solución de resolución - A menos que se hoja de papel y con una separación de 1,5 cm,
especifique de otro modo en la monografía aplicar 2 µl de la Solución estándar, Solución
correspondiente, preparar una solución en metanol muestra y Solución mezcla. Antes de que las
que contenga 0,5 mg de Clorhidrato de aplicaciones se sequen completamente, colocar el
Clortetraciclina SR-FA, Hiclato de papel en la cámara cromatográfica de manera que
Doxiciclina SR-FA, Oxitetraciclina SR-FA y el borde inferior se introduzca en la Fase móvil.
Clorhidrato de Tetraciclina SR-FA por ml. Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la del solvente haya recorrido aproximadamente
placa 1 µl de la Solución estándar, Solución 10 cm, retirar la hoja de la cámara, marcar el
muestra y Solución de resolución. Dejar secar las frente del solvente y exponerla a vapores de
aplicaciones y desarrollar los cromatogramas amoníaco. Examinar bajo luz ultravioleta a
hasta que el frente del solvente haya recorrido 366 nm y visualizar la posición de las manchas
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la amarillas principales: el valor del Rf de la mancha
placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el principal obtenida a partir de la Solución muestra
frente del solvente y dejarla secar al aire. Exponer y la Solución mezcla debe ser similar al obtenido a
la placa a vapores de amoníaco durante 5 minutos partir de la Solución estándar.
510. IMPUREZAS COMUNES
El perfil de impurezas de un producto se 3. Solución A - Mezclar 850 mg de subnitrato
determina mediante la realización de este ensayo. de bismutocon 40 ml de agua y 10 ml de ácido
La información general necesaria sobre acético glacial.
cromatografía en placa delgada esta contenida en Solución B - Disolver 8 g de ioduro de
<100>. Cromatografía. A menos que se potasio en 20 ml de agua.
especifique de otro modo en la monografía Mezclar la Solución A y la Solución B para
correspondiente emplear el siguiente ensayo. obtener una solución que pueda ser almacenada
Fase estacionaria - Emplear una placa para durante varios meses en envases de vidrio
cromatografía en capa delgada (ver 100. inactínico. Mezclar 10 ml de esta solución con
Cromalografía) recubierta con gel de sílice para 20 ml de ácido acétco glacial y diluir con agua
cromatografía con indicador de fluorescencia de para obtener 100 ml.
0,25 mm de espesor. 4. Solución de ninhidrina para pulverizado -
Fase móvil - Emplear la fase móvil Disolver 200 mg de ninhidrina en 100 ml de
especificada en la monografía correspondiente. alcohol. Calentar la placa luego de pulverizar
Soluciones estándar - Preparar, empleando el sobre ésta.
solvente especificado en la monografía 5. Solución ácida para pulverizado - A 90 ml
correspondiente, soluciones de la Sustancia de de alcohol, en un baño de hielo, agregar
referencia o de la sustancia indicada, de lentamente y con cuidado, agitando
concentraciones exactamente conocidas, iguales a constantemente, 10 ml de ácido sulfúrico.
0,01; 0,05; 0,1 y 0,2 mg por ml. [NOTA: puede Pulverizar sobre la placa y calentar hasta
emplearse calentamiento o sonicación para carbonizar.
favorecer la disolución cuando esto no afecte a la 6. Solución de dicromato ácido para
Sustancia de referencia.] pulverizado - A 100 ml de ácido sulfúrico,
Solución muestra - Preparar, empleando el agregar dicromato de potasio, en cantidad
solvente especificado en la monografía suficiente, para obtener una solución saturada.
correspondiente, una solución que contenga una Pulverizar sobre la placa y calentar hasta
concentración final de aproximadamente 10 mg carbonizar.
por ml. [NOTA: se puede emplear calentamiento 7. Vainillina - Disolver 1 g de vainillina en
o sonicación para favorecer la disolución cuando 100 ml de ácido sulfúrico.
esto no afecte a los componentes de la muestra.] 8. Cloramina T-Acido tricloroacético -
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la Mezclar 10 ml de una solución acuosa de
placa volúmenes iguales (aproximadamente 20 µl) cloramina T al 3 % con 40 ml de una solución
de la Solución muestra y las Soluciones estándar. alcohólica de ácido tricloroacético al 25 %.
Secar las aplicaciones bajo una corriente de Preparar inmediatamente antes de usar.
nitrógeno y desarrollar los cromatogramas hasta 9. Folin C - A 70 ml de agua agregar 10 g de
que el frente del solvente haya recorrido tungstato de sodio y 2,5 g de molibdato de sodio.
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la Agregar 5 ml de ácido fosfórico al 85 % y 10 ml
placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el de ácido clorhídrico al 36 %, calentar a reflujo
frente del solvente y dejar secar al aire. Examinar esta solución durante 10 horas.
la placa empleando el Revelador especificado. 10. Permanganato de potasio (KMnO4) -
Localizar las manchas, con excepción de la Disolver 100 mg de permanganato de potasio en
mancha principal en el cromatograma de la 100 ml de agua.
Solución muestra, y determinar sus intensidades 11. DAB - Mezclar 1 g de p-
relativas comparando con los cromatogramas de dimetilaminobenzaldehído en 100 ml de ácido
las Soluciones estándar correspondientes. El total clorhídrico 0,6 N.
de impurezas comunes no debe ser mayor de 12. DAC - Mezclar 100 mg de p-
2,0 %, a menos que se especifique de otro modo dimetilaminocinamaldehído en 100 ml de ácido
en la monografía correspondiente. clorhídrico 1 N.
13. Ferricianuro - Mezclar cloruro férrico al
Reveladores - 1 % y ferricianuro de potasio al 1 % (50:50).
1. Luz ultravioleta de 254 y 366 nm. Emplear inmediatamente.
2. Iodoplatinato (SR). 14. Fast Blue B -
Reactivo A - Disolver 500 mg de Sal de Fast
Blue B en 100 ml de agua.
Reactivo B - Hidróxido de sodio 0,1 N.
Pulverizar sobre la placa primero con activo A y
luego con reactivo B.
15. Cianuro férrico alcalino - Diluir 1,5 ml de
una solución de ferricianuro de potasio al 1% con
agua a 20 ml y agregar 10 ml de solución de
hidróxido de sodio al 15 %.
16. Solución de iodo para pulverizado -
Preparar una solución de iodo al 0,5 % en
cloroformo.
17. Exponer la placa durante 10 minutos a
vapores de iodo en una cámara cerrada que en el
fondo contiene cristales de iodo.
Solución A - Disolver 0,5 g de ioduro de
potasio en 50 ml de agua.
Solución B - Preparar una solución de 0,5 g
de almidón soluble en 50 ml de agua caliente.
Pulverizar sobre la placa con una mezcla de
volúmenes iguales de Solución A y Solución B.
19. PTS - Disolver 20 g de ácido p-
toluensulfónico en 100 ml de alcohol. Pulverizar
sobre la placa, secar durante 15 minutos a 110 °C
y examinar bajo luz ultravioleta a 366 nm.
20. Solución de o-toluidina para pulverizado -
Disolver 160 mg de o-toluidina en 30 ml de ácido
acético glacial, diluir con agua a 500 ml. Agregar
1 g de ioduro de potasio y mezclar hasta
disolución completa.
21. Mezclar 3 ml de solución de ácido
cloroplatínico (1 en 10) con 97 ml de agua.
Agregar 100 ml de solución de ioduro de potasio
(6 en 100).
22. Solución de iodo-metanol para pulverizado
- Mezclar yodo (SR) y metanol (1:1).
23. Solución A: mezclar cuidadosamente
100 ml de solución de oxido de mercurio al 5 %
con 20 ml de ácido sulfúrico. Diluir a 250 ml con
agua.
Solución B: solución de difenil carbazona al
0,1 %. Esta solución se debe preparar en el día de
su uso o debe ser mantenida bajo refrigeración por
no más de 20 días. Pulverizar en forma sucesiva,
sobre la placa, primero con Solución A y luego
con Solución B.
520. IMPUREZAS ORGÁNICAS VOLÁTILES
Los siguientes métodos se emplean para la [NOTA: se recomienda nitrógeno, cuando se
determinación de impurezas orgánicas volátiles en emplea un gas de compensación adicional para
productos farmacéuticos. El método a emplear, aumentar el caudal en el detector.]
los detalles y variaciones del mismo se Solución estándar - Preparar una solución, en
especifican en las monografías correspondientes. agua libre de sustancias orgánicas o en el solvente
Este ensayo puede evitarse cuando el especificado en la monografía correspondiente,
elaborador tiene la seguridad, en base a su que contenga, por cada ml, 12,0 µg de cloruro de
conocimiento sobre el proceso de elaboración, metileno; 1,2 µg de cloroformo; 7,6 µg de 1,4-
distribución y almacenamiento de un producto, dioxano y 1,6 µg de tricloroetileno. [NOTA: la
que no hay presencia potencial de solventes solución se debe preparar en el día de uso.]
tóxicos y que el material, si se ensaya, cumplirá Solución muestra - Disolver una porción de la
con las normas establecidas (ver Interpretación de muestra, exactamente pesada, en agua libre de
los requisitos en Consideraciones generales). sustancias orgánicas o en el solvente especificado
[NOTA: el agua libre de sustancias orgánicas en la monografía correspondiente, para obtener
especificada en los siguientes métodos no produce una solución con una concentración conocida de
picos interferentes cuando se inyecta en el Sistema aproximadamente 20 mg por ml.
cromatográfico establecido.] Aptitud del sistema - (ver 100.
Cromatografía) - Cromatografiar la Solución
ÓXIDO DE ETILENO - Este ensayo se
realiza sólo cuando se especifica en la monografía estándar, registrar los cromatogramas y medir las
correspondiente. Los parámetros de la Solución respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la resolución, R, no debe ser
estándar y el método de determinación se
menor de 1,0 y la desviación estándar relativa
describen en la monografía correspondiente. El
para inyecciones repetidas no es mayor de 15 %.
límite es 10 ppm.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Método I cromatógrafo volúmenes iguales
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo (aproximadamente 1 µl) de la Solución estándar y
para cromatografía de gases con un detector de la Solución muestra, registrar los cromatogramas
ionización a la llama, una precolumna de y medir las respuestas de los picos principales.
5 m x 0,53 mm de sílice desactivada con Identificar todos los picos presentes en los
fenilmetilsiloxano y una columna de cromatogramas de la Solución muestra. La
30 m x 0,53 mm de sílice fundida recubierta con presencia e identidad de cualquiera de las
una fase estacionaria, químicamente unida, impurezas volátiles enumeradas en la Tabla o la
constituida por 5 % de fenilpolisiloxano y 95 % presencia e identidad de cualquier otra impureza
de metilpolisiloxano de 5 µm. Mantener el orgánica volátil que eluya con un tiempo de
inyector y el detector a aproximadamente 70 y retención comparable, se podrá establecer
260 °C, respectivamente. Programar la empleando un detector de espectrometría de masa
temperatura de la columna del siguiente modo: o mediante el empleo de una segunda columna
mantener a 35 °C durante 5 minutos, aumentar validada que contenga una fase estacionaria
hasta 175 °C a razón de 8 °C por minuto y luego diferente.
aumentar hasta 260 °C a razón de 35 °C por A menos que se especifique de otro modo en
minuto. Mantener a esta temperatura, por lo la monografía correspondiente, la cantidad de
menos, durante 16 minutos. Se emplea helio cada impureza orgánica volátil presente en el
como gas transportador con una velocidad lineal material no debe ser mayor al límite especificado
de aproximadamente 35 cm por segundo. en la Tabla.
Tabla.
Límite de impurezas orgánicas volátiles
Límite
(ppm)
Benceno 2
Cloroformo 60
1,4-Dioxano 380
Cloruro de metileno 600
Tricloroetileno 80
Método II respuestas de los picos según se indica en
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo Procedimiento: la resolución, R, no debe ser
para cromatografía de gases con un detector de menor de 3 y la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 15 %.
ionización a la llama, una precolumna de sílice de
5 m x 0,53 mm desactivada con fenilmetilsiloxano Método IV
y una columna de sílice fundida de Emplear este método para determinar la
30 m x 0,53 mm recubierta con una fase presencia de cloruro de metileno en comprimidos
estacionaria constituida por 94 % de
recubiertos. El límite de cloruro de metileno es
dimetilpolisiloxano y 6 % de cianopropilfenil
500 µg por día, en base a la dosis diaria máxima
polisiloxano (los porcentajes se refieren a la
declarada en el rótulo.
sustitución molar), de 3,0 µm de espesor, Sistema cromatográfico - Proceder según se
empleando una jeringa hermética para gases indica en Método III, pero inyectar 1 ml de
previamente calentada y 1 ml del espacio libre
muestra del espacio libre superior, empleando una
superior. Mantener el inyector y el detector a
jeringa hermética para gases previamente
aproximadamente 140 y 260 °C, respectivamente.
calentada. [NOTA: puede emplearse un aparato
Programar la temperatura de la columna del
de muestreo de espacio libre superior que
siguiente modo: mantener a 40 °C durante automáticamente transfiere una cantidad medida
20 minutos, aumentar rápidamente hasta 240 °C y de muestra del espacio libre superior del vial a la
mantener a esta temperatura durante 20 minutos.
columna.]
Se emplea helio como gas transportador con una
Solución madre del estándar - Transferir
velocidad lineal de aproximadamente 35 cm por
3,8 µl, exactamente medidos, equivalentes a 5 mg
segundo.
de cloruro de metileno a un matraz aforado de
[NOTA: pueden emplearse aparatos de 1 litro, diluir a volumen con agua libre de
muestreo de espacio libre superior que transfieren sustancias orgánicas y mezclar.
automáticamente una cantidad medida del espacio
Solución estándar - [NOTA: realizar una
libre superior del vial a la columna.]
incisión en la cubierta de los comprimidos antes
Solución estándar - Preparar según se indica
de preparar la solución.] Transferir varios
para la Solución estándar en Método I. Transferir
comprimidos enteros, equivalente a 1 g, a un
5 ml de la solución a un vial equipado con un matraz aforado con tapón de vidrio. Transferir
septo y precinto metálico que contenga 1 g de 20 ml de Solución madre del estándar al matraz,
sulfato de sodio anhidro y sellar el vial. Calentar
insertar el tapón con firmeza, colocar en un baño
el vial a 80 °C durante 60 minutos.
ultrasónico hasta que los comprimidos se
Solución muestra - Transferir 100 mg de
desintegren completamente y centrifugar la
muestra, exactamente pesados, a un vial. Agregar solución resultante. Transferir 2 ml de la solución
5,0 ml de agua o el solvente especificado en la sobrenadante transparente a un-vial equipado con
monografía correspondiente y 1 g de sulfato de
un septo y una tapa con precinto metálico y sellar.
sodio anhidro. Tapar con un septo y precintar.
Colocar el vial en un baño de agua a 85 °C
Calentar el vial a 80 °C durante 60 minutos o el
durante aproximadamente 20 minutos.
tiempo especificado en la monografía
Solución muestra - Preparar según se indica
correspondiente. para la Solución estándar, pero empleando 20 ml
Procedimiento - Proceder según se indica en de agua libre de sustancias orgánicas en vez de
Método I.
20 ml de Solución madre del estándar.
Método III Solución de aptitud del sistema - Preparar una
Sistema cromatográfico y Procedimiento - solución en agua libre de sustancias orgánicas que
Proceder según se indica en Método II, pero sin contenga, por ml, 5 µg de alcohol y 5 µg de
cloruro de metileno. Transferir 2,0 ml a un vial
emplear una jeringa hermética para gases
equipado con un septo y una tapa, con precinto
previamente calentada y 1 ml del espacio libre
metálico y sellar. Colocar el vial en un baño de
superior.
agua a 85 °C durante 20 minutos.
Solución estándar y Solución muestra -
Proceder según se indica en Método I. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía)
Aptitud del sistema - (ver 100. Cromatografiar 1 ml de la fase gaseosa de la
Solución de aptitud del sistema, registrar los
Cromatografía) - Cromatografiar la Solución
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
estándar, registrar los cromatogramas y medir las
según se indica en Procedimiento: la resolución,
R, entre el alcohol y el cloruro de metileno no es
menor de 1,5 y la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas no es mayor de 10,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales
(aproximadamente 1 ml) del espacio libre superior
de la Solución estándar y la Solución muestra.
Registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Determinar la
presencia de cloruro de metileno en la Solución
muestra. Calcular la cantidad de cloruro de
metileno, en µg por comprimido.
Calcular la cantidad máxima permitida de
cloruro de metileno, en µg por comprimido por
día, por la fórmula siguiente:
500 g día
C mg comprimido
D mg
Tabla de aceptación 1.
Nivel Unidades ensayadas Criterios
Ningún valor individual debe encontrarse fuera de los
N1 6 correspondientes intervalos establecidos y ningún valor
individual es menor al establecido para el tiempo final.
El promedio de las 12 unidades (N1+N2) debe encontrarse
dentro de cada uno de los intervalos establecidos y el
promedio para el tiempo final no debe ser menor que el
valor establecido para dicho tiempo. Ningún valor
N2 6 individual debe ser diferente en más de un 10 %, del
contenido declarado, de los intervalos establecidos; y
ningún valor individual debe ser menor en más de un
10 %, del contenido declarado, del límite establecido para
el tiempo final.
El promedio de las 24 unidades (N1+N2+N3) debe
encontrarse dentro de cada uno de los intervalos
establecidos y el promedio para el tiempo final no debe
ser menor que el valor establecido para dicho tiempo. No
más de 2 de los 24 valores individuales podrán ser
diferentes en más de un 10 % del contenido declarado de
N3 12
los intervalos establecidos; no más de 2 de los 24 valores
individuales podrán ser menores en más de un 10 % del
contenido declarado del límite establecido para el tiempo
final; y ningún valor individual es diferente en más de un
20 % del contenido declarado por debajo del límite
establecido para el tiempo final.
Tabla de aceptación 2.
Nivel Unidades ensayadas Criterios
En ninguna unidad individual la cantidad disuelta debe ser
Na1 6
mayor de 10 %.
El promedio de la cantidad disuelta para las 12 unidades
(Na1 + Na2) no debe ser mayor de 10 % y en ninguna
Na2 6
unidad individual la cantidad disuelta debe ser mayores de
25.
El promedio de la cantidad disuelta para las 24 unidades
(Na1 + Na2 + Na3) no debe ser mayor de 10 %y en
Na3 12
ninguna unidad individual la cantidad la cantidad disuelta
debe ser mayor de 25 %.
Tabla de aceptación 3.
Nivel Unidades ensayadas Criterios
Nb1 6 Cada unidad individual no debe ser menor de Q + 5 %.
El promedio de la cantidad disuelta para las 12 unidades
Nb2 6 (Nb1 + Nb2) debe ser igual o mayor que Q y ninguna
unidad individual debe ser menor de Q 15 %.
El promedio de las 24 unidades (Nb1 + Nb2 + Nb3) debe
ser igual o mayor que Q, no más de 2 unidades deben ser
Nb3 12
menores de Q 15 % y ninguna unidad individual debe
ser menor de Q 25 %.
540. LIMITE DE ARSENICO
Precaución - La arsina generada es sumamente de la sustancia en ensayo calculada por la fórmula
tóxica. siguiente:
Este procedimiento se diseñó para determinar la 3,0/L
presencia de trazas de arsénico transformándolo en
en la cual L es el límite de arsénico en ppm. Disol-
arsina, la cual forma un complejo de color rojo al ver en agua hasta obtener un volumen de 35 ml.
pasar a través de una solución de dietilditiocarba- Procedimiento - Agregar a la Solución muestra
mato de plata. El color rojo producido se compara,
y a la Solución estándar 20 ml de ácido sulfúrico
visual o espectrofotométricamente, contra un con-
7 N, 2 ml de ioduro de potasio (SR), 0,5 ml de clo-
trol que tiene una cantidad de arsénico equivalente
ruro estañoso concentrado (SR) y 1 ml de alcohol
al límite especificado en la monografía correspon-
isopropílico. Mezclar y dejar reposar a temperatura
diente. Los límites se establecen en términos de ambiente durante 30 minutos. Colocar en la unidad
arsénico. El contenido de arsénico no debe exceder depuradora dos trozos de algodón previamente
el límite especificado en la monografía correspon-
impregnados con solución saturada de acetato de
diente.
plomo, exprimidos para eliminar el exceso de solu-
Existen dos métodos que difieren en el trata-
ción y secados al vacío a temperatura ambiente,
miento preliminar de la muestra a ensayar y del
dejando un pequeño espacio de 2 mm entre las dos
estándar. El Método I se emplea generalmente para porciones de algodón. Lubricar las juntas esmerila-
sustancias inorgánicas y el Método II para sustan- das con grasa apta para emplearse con solventes
cias orgánicas.
orgánicos y conectar la unidad depuradora al tubo
Aparato (ver Figura) - Consta de un generador de absorción. Transferir 3,0 ml de dietilditiocarba-
de arsina A, al que se le adapta una unidad depura- mato de plata (SR) al tubo de absorción. Agregar
dora C, y un tubo de absorción E, con juntas están- 3,0 g de cinc granulado (malla N° 20) a la mezcla
dar o esféricas B y D, colocadas entre las unidades. contenida en el, generador de arsina e inmediata-
Se puede emplear cualquier otro aparato que tenga mente conectar la unidad depuradora al mismo.
características similares. Colocar el sistema en un baño de agua a 25 ± 3 °C y
Solución madre de trióxido de arsénico - Trans- permitir la formación de hidrógeno y el desarrollo
ferir 132,0 mg de trióxido de arsénico, exactamente de color durante 45 minutos agitando el sistema
suavemente a intervalos de 10 minutos. Desconec-
pesados y previamente secados a 105 °C durante
tar el tubo de absorción y la unidad depuradora del
1 hora, a un matraz aforado de 1 litro. Agregar 5 ml
generador de arsina y transferir la solución a celdas
de solución de hidróxido de sodio (1 en 5) y disol-
de absorción de 1 cm.
ver. Neutralizar la solución con ácido sulfúrico
2 N, agregar 10 ml adicionales de ácido sulfúrico El color rojo producido por la Solución muestra
2 N, completar a volumen y mezclar con agua re- no debe ser mayor que el producido por la Solución
estándar. Si fuera necesario, determinar la absor-
cientemente hervida y enfriada.
bancia a la longitud de onda de máxima absorción,
Solución estándar de arsénico - Transferir entre 535 y 540 nm, en un espectrofotómetro o
10,0 ml de la Solución madre de trióxido de arséni- colorímetro apropiado, empleando dietilditiocarba-
co a un matraz aforado de 1 litro y agregar 10 ml de mato de plata (SR) como blanco.
ácido sulfúrico 2 N. Completar a volumen y mez-
clar con agua recientemente hervida y enfriada. Método II
Cada ml de la solución estándar de arsénico contie- Precaución - Se deben tomar medidas de segu-
ne el equivalente a 1 µg de arsénico. Conservar ridad en todo momento ya que algunas sustancias
esta solución en un recipiente de vidrio y emplearla pueden reaccionar en forma explosiva cuando se
dentro de los tres días de preparada. oxidan con peróxido de hidrógeno.
Método I [NOTA 1: si se trabaja con compuestos que con-
tienen halógenos, calentar las muestras con ácido
Solución estándar - Transferir 3,0 ml de la So-
sulfúrico a menor temperatura, evitando que la
lución estándar de arsénico al generador de arsina y
mezcla entre en ebullición y agregar, con mucho
diluir con agua hasta obtener un volumen de 35 ml.
cuidado, el peróxido de hidrógeno antes de efectuar
Solución muestra - A menos que se especifique
de otro modo en la monografía correspondiente, la carbonización, para prevenir la pérdida de arséni-
transferir al generador de arsina la cantidad, en g, co trivalente.]
[NOTA 2: si la sustancia en ensayo reacciona adición. Agregar las primeras gotas muy lentamen-
rápidamente y comienza a carbonizarse con 5 ml de te con agitación constante para evitar una reacción
ácido sulfúrico antes de calentarse, emplear en su violenta. Interrumpir el calentamiento si el des-
lugar 10 ml de ácido sulfúrico diluido (1 en 2) y prendimiento de gases es excesivo. Cuando la
frío, y agregar unas pocas gotas de peróxido de reacción ha terminado, calentar cuidadosamente,
hidrógeno antes de calentar.] rotando el generador de arsina ocasionalmente, para
evitar que algunas porciones de la muestra queden
Solución estándar - Transferir 3,0 ml de Solu-
ción estándar de arsénico al generador de arsina; adheridas a las paredes del generador de arsina.
agregar 2 ml de ácido sulfúrico y mezclar. Agregar Mantener las condiciones de oxidación durante la
digestión agregando pequeñas cantidades de solu-
el volumen de peróxido de hidrógeno al 30 % em-
ción de peróxido de hidrógeno al 30 %, cada vez
pleado en la Solución muestra. Calentar la mezcla
que la mezcla se tome de color marrón o se oscu-
hasta que se desprendan vapores fuertes. Dejar
rezca. Continuar la digestión hasta que la materia
enfriar y agregar con cuidado 10 ml de agua y nue-
vamente calentar hasta que se produzcan vapores orgánica se destruya y se desprendan abundantes
fuertes. Se debe repetir este procedimiento con vapores de trióxido de azufre y que la solución sea
incolora o presente solamente un color amarillo
otros 10 ml de agua para eliminar cualquier traza
pálido. Enfriar y agregar cuidadosamente 10 ml de
del peróxido de hidrógeno. Enfriar y diluir con
agua, mezclar y evaporar nuevamente hasta que
agua hasta 35 ml.
aparezcan vapores fuertes. Si fuera necesario, repe-
Solución muestra - A menos que se especifique tir el procedimiento para eliminar cualquier traza de
de otro modo en la monografía correspondiente, peróxido de hidrógeno. Enfriar, lavar las paredes
transferir al generador de arsina la cantidad, en g, del generador de arsina con 10 ml de agua y diluir
de la sustancia en ensayo calculada por la fórmula con agua a 35 ml.
siguiente: Procedimiento - Proceder según se indica en
3,0/L Procedimiento para el Método I.
Regulador de flujo
Filtro Cámara de reacción
partículas
Convertidor Filtro =1.2 m
Filtro de O3
Generador de O3 Fotomultiplicador
Control
NO NO+NO2 NO2
se lleve a cabo en forma cuantitativa, la con- contenido de la mezcla con la lectura indicada por
centración de ozono debe ser muy superior de el analizador.
2 ppm, máxima cantidad de óxidos de nitró-
geno permitidos en la muestra.
Celda de
muestra
1. Envase de gas
2. Regulador de presión
3. Válvula de aguja
4. Llave de conmutación
5. Tubo detector
6. Bomba dosificadora
7. Extremo abierto atmósfera
Figura 3
El envase que suministra el gas debe estar co- Romper ambos extremos del tubo detector y
nectado a un regulador de presión adecuado y a conectar el tubo entre la bomba dosificadora y la
una válvula de aguja. Conectar a la válvula aguja válvula 4, siguiendo las instrucciones del fabri-
un tubo flexible provisto de una llave de conmu- cante. Operar la bomba 6 de manera de permitir el
tación. Purgar el sistema con la llave 4 en la paso de un volumen adecuado del gas bajo análi-
posición de purga (7) y ajustar el flujo del gas sis a través del tubo. Leer el valor correspondiente
bajo análisis a un valor apropiado. a la longitud de la capa coloreada o a la intensi-
dad del color sobre la escala graduada. Si el resul- mo indicado es 0,05 mg de vapor de agua por litro
tado obtenido es negativo, el tubo detector debe con una desviación estándar relativa máxima de
ser verificado con un gas de calibrado que con- ± 20 %.
tenga la sustancia a detectar.
La bomba dosificadora 6 puede reemplazarse
eventualmente por un caudalímetro apropiado.
No utilizar el tubo detector para más de una
determinación.
Tipos de tubos
Tubo detector de Aceite - Contiene filtros ad-
sorbentes y soportes adecuados para el indicador
ácido sulfúrico. El valor mínimo indicado es
0,1 mg/m3 con una desviación estándar relativa
máxima de ± 30 %.
[NOTA: debido a la gran diversidad de aceites
para compresores, es necesario verificar la reacti-
vidad de los tubos detectores de aceites frente al
aceite usado. La información sobre la reactividad
de diversos aceites se da en el folleto suministra-
do con el tubo.]
Tubo detector de Amoníaco - Contiene filtros
adsorbentes y soportes adecuados para el indica-
dor azul de bromofenol. El valor mínimo indicado
es 5 ppm con una desviación estándar relativa
máxima de 10 %.
Tubo detector de Cloro - Contiene filtros ad-
sorbentes y soportes adecuados para el indicador
o-toluidina. El valor mínimo indicado es 0,5 ppm
con una desviación estándar relativa máxima de
10 %.
Tubo detector de Dióxido de Azufre - Contie-
ne filtros adsorbentes y soportes adecuados para
los indicadores yodo y almidón. El valor mínimo
indicado es 0,5 ppm con una desviación estándar
relativa máxima de ± 15 %.
Tubo detector de Dióxido de Carbono - Con-
tiene filtros adsorbentes y soportes adecuados
para los indicadores hidrazina y violeta cristal. El
valor mínimo indicado es 100 ppm con una des-
viación estándar relativa máxima de ± 15 %.
Tubo detector de Monóxido de Carbono -
Contiene filtros adsorbentes y soportes adecuados
para los indicadores pentóxido de iodo, dióxido
de selenio y ácido sulfúrico fumante. El valor
mínimo indicado es 2,5 ppm con una desviación
estándar relativa máxima de ± 15 %.
Tubo detector para Monóxido y Dióxido de
Nitrógeno - Contiene filtros adsorbentes y sopor-
tes adecuados para una capa oxidante de una sal
de Cr (VI) y el indicador difenilbencidina. El
valor mínimo indicado es 0,5 ppm con una des-
viación estándar relativa máxima de ± 15 %.
Tubo detector de Sulfuro de Hidrógeno -
Contiene filtros adsorbentes y soportes adecuados
para un indicador apropiado de sal de plomo. El
valor mínimo indicado es 0,25 ppm con una des-
viación estándar relativa máxima de ± 10 %.
Tubo detector de Vapor de Agua - Contiene
filtros adsorbentes y soportes adecuados para el
indicador perclorato de magnesio. El valor míni-
630. MÉTODOS DE FARMACOGNOSIA
Ver 630. Métodos de Farmacognosia en Apartado de Fitoterápicos en Volumen III.
635. MÉTODOS INMUNOQUÍMICOS
Los métodos inmunoquímicos se basan en la MÉTODOS EN LOS QUE SE EMPLEA UN
unión específica, reversible y no covalente entre ANTÍGENO O UN ANTICUERPO NO
antígenos y anticuerpos. Estos métodos se emplean MARCADO
para detectar o cuantificar tanto antígenos como
Métodos de inmunoprecipitación
anticuerpos. La formación de un complejo antíge-
Los métodos de inmunoprecipitación incluyen
no-anticuerpo puede ser detectado y la cantidad del las reacciones de floculación y precipitación.
complejo formado puede ser medida por varias Cuando se mezcla una solución de antígeno con su
técnicas. Este método general se aplica a métodos
anticuerpo correspondiente, en las condiciones
inmunoquímicos que emplean, según el caso, reac-
apropiadas, los reactivos forman agregados flocu-
tivos marcados o no marcados.
lantes o precipitantes. La relación entre la cantidad
de los reactivos que produce el menor tiempo de
Los resultados de los métodos inmunoquímicos floculación o la precipitación más acentuada se
dependen de las condiciones experimentales y de la
denomina la relación óptima, generalmente se ob-
naturaleza y calidad de los reactivos empleados. Es
tiene en presencia de cantidades equivalentes de
esencial estandarizar los componentes de un inmu-
antígeno y anticuerpo. La inmunoprecipitación
noensayo y emplear, cuando se hallen disponibles,
puede detectarse por observación visual o determi-
las Preparaciones Internacionales de Referencia narse mediante técnicas de dispersión de la luz
para Inmunoensayos. (ensayos nefelométricos o turbidimétricos). Es
posible lograr un incremento de la sensibilidad
Los reactivos necesarios para numerosos méto-
mediante el empleo, como soporte, de partículas
dos inmunoquímicos se hallan disponibles como kit
(por ej. látex) recubiertas de antígeno o anticuerpo.
comerciales, es decir, un conjunto que incluye los
En los métodos de floculación se emplean dilu-
reactivos (especialmente el antígeno o el anticuer- ciones sucesivas de uno de los reactivos, mientras
po) y los materiales destinados al ensayo in vitro de que en los métodos de inmunodifusión (ID), se
una sustancia específica, así como las instrucciones
obtiene la dilución del reactivo por su difusión en
para su correcto empleo. Los kits deben emplearse
un gel, se establecen gradientes de concentración de
siguiendo las intrucciones del fabricante; es impor-
uno o de ambos reactivos, para crear zonas en el gel
tante asegurarse que el kit es apropiado para el
en las que la relación entre los reactivos favorece la
análisis de la preparación muestra, sobre todo en lo precipitación. Los métodos de floculación se llevan
que se refiere a la especificidad y sensibilidad. Las
a cabo en tubos de ensayo, mientras que los méto-
recomendaciones relativas a los kits para inmuno-
dos de ID pueden realizarse empleando diferentes
ensayos son establecidas por la Organización Mun-
soportes como tubos, placas, portaobjetos, cubetas o
dial de la Salud, Serie de Informes Técnicos 658
cámaras.
(1981).
La inmunoprecipitación se denomina simple
MÉTODOS EN LOS QUE SE EMPLEA UN cuando un solo antígeno se combina con su corres-
ANTÍGENO MARCADO O UN ANTICUERPO pondiente anticuerpo; se denomina compleja cuan-
MARCADO do involucra reactivos relacionados pero no seroló-
gicamente idénticos y múltiple cuando intervienen
Los métodos que emplean sustancias marcadas varios reactivos no relacionados serológicamente.
pueden emplear marcadores apropiados como en-
zimas, fluoróforos, luminóforos y radioisótopos. En los métodos de difusión simple se establece
Cuando el marcador es un radioisótopo, el método un gradiente de concentración para uno solo de los
se denomina radioinmunoensayo o ensayo de unión reactivos que difunde desde una fuente externa al
de radioligando. Las recomendaciones para la gel que contiene el reactivo correspondiente a una
medida de la radiactividad que se hallan en 1110. concentración relativamente baja.
Preparaciones radiofarmacéuticas son aplicables a La inmunodifusión radial simple (IDRS) es una
los inmunoensayos que involucran radioisótopos. técnica simple de inmunodifusión cuantitativa.
Todo trabajo que emplee materiales radiactivos Cuando se establece el equilibrio entre los reactivos
debe realizarse de acuerdo con las normas regulato- externo e interno, el área de precipitación circular
rias que rigen en la materia y las reglas de buenas que se origina desde el punto de aplicación del
prácticas internacionalmente aceptadas para la pro- reactivo externo, es directamente proporcional a la
tección frente a los riesgos de radiación. concentración del antígeno aplicado e inversamente
proporcional a la concentración de anticuerpo en el La contrainmunoelectroforesis es un método
gel. cuantitativo rápido que permite establecer gradien-
En los métodos de doble difusión se establecen tes de concentración de antígeno externo y anti-
cuerpo externo en un campo eléctrico según sus
gradientes de concentración para ambos reactivos.
diferentes cargas. Las diluciones de un estándar de
El antígeno y el anticuerpo difunden desde lugares
calibración y las diluciones de la preparación mues-
separados en un gel inicialmente neutro desde el
tra se introducen en una fila de orificios en el gel y
punto de vista inmunológico.
en una fila de orificios opuesta a la primera se in-
Los métodos comparativos de difusión doble se troduce una cantidad conocida del reactivo corres-
emplean para comparar, cualitativamente, diversos pondiente. El título de la preparación muestra en-
antígenos frente a un anticuerpo apropiado o vice- sayada se puede considerar como la dilución más
versa. La comparación se basa en la presencia o elevada que da lugar a línea de precipitación.
ausencia de interacción entre las líneas de precipita-
ción. Se pueden distinguir las reacciones de identi- Existen diversas modificaciones de la inmunoe-
lectroforesis cruzada y de los métodos de elec-
didad, de no identidad o de identidad parcial de
troinmunoensayo.
antígenos/anticuerpos.
Otras técnicas combinan la separación de los
Métodos inmunoelectroforéticos
La inmunoelectroforesis (IE) es una técnica cua- antígenos según su tamaño molecular y sus propie-
dades serológicas.
litativa que combina dos métodos: la electroforesis
en gel seguida de la inmunodifusión. Visualización y caracterización de las líneas
La inmunoelectroforesis cruzada es una modifi- de inmunoprecipitación
cación del método de IE, apropiada para ensayos Estas pueden realizarse mediante tinciones se-
lectivas o no selectivas, por fluorescencia, mediante
cuali y cuantitativos. En una primera fase de la
marcación enzimática e isotópica o por otras técni-
técnica, se lleva a cabo una electroforesis en gel
cas apropiadas. Los métodos de tinción selectiva
clásica tras la cual la banda longitudinal del gel, que
contiene las fracciones a ensayar, se corta y se son los empleados, habitualmente, para la caracteri-
transfiere a otra placa. Esta nueva placa se somete zación de sustancias no proteicas en los precipita-
dos.
a una segunda electroforesis, en un ángulo de 90°
respecto a la primera corrida electroforética, emple- En los geles traslúcidos, como los de agar o aga-
ando un gel que contiene una concentración de rosa, la línea de precipitación es visible claramente,
anticuerpos comparativamente menor con respecto siempre que la concentración de cada uno de los
a los antígenos correspondientes. Para una concen- reactivos sea la apropiada.
tración de anticuerpos y un espesor de gel determi-
nados, la relación entre la respuesta de cada uno de
los picos de precipitación y la cantidad del antígeno VALIDACIÓN DEL MÉTODO
correspondiente es lineal. Criterios de validación
El electroinmunoensayo, a menudo denominado El método inmunoquímico cuantitativo solo es
rocket inmunoelectroforesis, es un método rápido válido si:
cuantitativo para determinar antígenos con carga 1) El antígeno o anticuerpo no discrimina entre
diferente de los anticuerpos o viceversa. La electro- preparación muestra y estándar.
foresis del antígeno que va a ser analizado se lleva a
cabo en un gel que contiene una concentración 2) El método no se ve afectado por otros com-
comparativamente menor del correspondiente anti- ponentes de la preparación muestra o de sus exci-
cuerpo. La preparación muestra y las diluciones del pientes, que pueden variar de una muestra a otra.
antígeno empleado como estándar se introducen en Estos componentes pueden incluir concentraciones
diferentes orificios del gel. Durante la electrofore- elevadas de otras proteínas, sales, conservantes o
sis se forman arcos de precipitación de forma pun- actividad proteolítica contaminante.
tiaguda denominada "rockets" que migran desde los 3) El límite de cuantificación es inferior al crite-
orificios. Cuando el antígeno ya no está en exceso rio de aceptación indicado en la monografía corres-
el frente del precipitado detiene su avance. Para una pondiente.
concentración dada en anticuerpo, la relación entre
la distancia recorrida por el precipitado y la canti- 4) La precisión de la valoración es tal que la va-
dad de antígeno aplicada es lineal. rianza de los resultados corresponde a la exigencia
establecida en la monografía correspondiente.
5) Hay ausencia de errores sistemáticos, ligados b) Las diluciones cubren la gama completa
a la secuencia en la que se ha efectuado la determi- de respuestas desde la unión máxima hasta valores
nación. cercanos a la unión inespecífica, preferentemente
tanto para la preparación muestra como para el
Métodos de validación
estándar.
Para verirficar estos criterios, el método de vali-
dación debe respetar lo siguiente: CÁLCULO ESTADÍSTICO
1) La valoración se realiza, al menos, por tripli- Para el análisis de resultados, las curvas de res-
cado. puestas de la preparación muestra y la del estándar,
pueden evaluarse según los métodos descriptos en
2) La valoración incluye, como mínimo, 3 dilu-
ciones diferentes de la preparación estándar y 10. Análisis estadístico de resultados de ensayos
3 diluciones diferentes de la preparación muestra biológicos.
que supuestamente presentan una actividad similar Un no paralelismo significativo indica que el an-
a la preparación estándar. ticuerpo o el antígeno discrimina entre la prepara-
3) El diseño del ensayo es aleatorizado. ción muestra y el estándar e implica que los resulta-
dos no son válidos.
4) Si la preparación muestra es un suero o si está
En los inmunoensayos con desplazamiento, los
formulada con otros componentes, el estándar se
valores de uniones inespecíficas y del máximo
prepara de la misma manera.
desplazamiento, a una concentración elevada de la
5) La valoración incluye la medida de la unión preparación muestra o del estándar, no deben ser
inespecífica del reactivo marcado. significativamente diferentes. Las diferencias podr-
6) Para los inmunoensayos con desplazamiento: ían reflejar la interferencia debida al efecto matriz
tanto por inhibición de la unión como por degrada-
a) Se determina la unión máxima (despla- ción del marcador.
zamiento cero).
640. OSMOLARIDAD Y OSMOLALIDAD
La concentración osmolar se expresa en osmoles presión de vapor baja aproximadamente 0,3 mm Hg
de soluto por litro de solución, pero generalmente (a 25 °C). Estos cambios físicos son cuantificables,
se emplea el submúltiplo miliosmoles (mosmol) de lo que permite estimaciones exactas de las
soluto por litro de solución. Idealmente, el peso de concentraciones osmolales. La relación existente
un osmol es el peso de la molécula gramo de una entre la miliosmolalidad y el descenso crioscópico
sustancia dividido por el número de iones o puede expresarse por la fórmula siguiente:
especies químicas osmóticamente activas (n)
Osmolalidad (mosmol/kg) =
formados con la disolución. En soluciones ideales,
( T/1,858) 1.000 mosmol/kg
por ejemplo, n = 1 para glucosa, n = 2 para cloruro
de sodio o sulfato de magnesio, n = 3 para el Cuando se emplean osmómetros que miden el
cloruro de calcio y n = 4 para el citrato de sodio. descenso crioscópico, un volumen medido de
solución (generalmente 2 ml) se coloca en un tubo
La concentración osmolar ideal puede
de vidrio sumergido en un baño de temperatura
determinarse por la fórmula siguiente:
controlada. Se coloca en la solución un termistor y
Conc. osmolar= mosmol = (P/M) n 1.000 un sistema de vibración y la temperatura del baño
en la cual P es el peso de sustancia seca o anhidra se reduce hasta lograr que la solución se
según corresponda, en g por litro, y M es el peso sobreenfríe. El sistema de vibración se activa para
molecular asignado, en gramos. inducir la cristalización del agua en la solución
La concentración osmolal se expresa en osmol muestra y el calor de fusión liberado aumenta la
por kilogramo de solvente, pero el submúltiplo temperatura de la mezcla hasta su punto de
empleado generalmente es miliosmoles por congelación. A través de un puente de Wheatstone,
kilogramo (mosmol/kg). el puntó de congelación registrado se convierte en
A medida que aumenta la concentración de una medida de la osmolalidad. Para cada
soluto, aumenta la interacción entre las partículas determinación, emplear un volumen constante de la
disueltas y disminuye la osmolaridad real con solución en ensayo. El aparato se calibra
respecto al valor ideal. La desviación de las empleando dos soluciones estándar de cloruro de
condiciones ideales es generalmente pequeña en sodio que abarcan el intervalo de osmolalidades
soluciones dentro del intervalo fisiológico. En esperado. Puede emplearse agua en lugar de una de
soluciones de alta concentración, la osmolaridad las dos soluciones de referencia para calibrar el
real puede tener valores considerablemente osmómetro. En todo caso, seguir las instrucciones
inferiores a los ideales. Por ejemplo, la del fabricante.
osmolaridad ideal de la Solución Inyectable de Cuando la presión osmótica de la muestra es
Cloruro de Sodio al 0,9 % es mayor que 3000 mosmol, se debe diluir la muestra
empleando un solvente apropiado, hasta llegar a un
9/58,4 2 1.000 = 308 mosmol por litro. Sin
intervalo de mosmol-medible.
embargo, n es algo menor que 2 para soluciones de
cloruro de sodio a esta concentración y la Preparación de las soluciones de referencia
osmolaridad medida real de la Solución inyectable para la calibración del osmómetro
de cloruro de sodio al 0,9 % es aproximadamente
Pesar exactamente la cantidad de cloruro de sodio,
286 mosmol por litro.
previamente secado entre 500 y 650 °C durante 40
Procedimiento general ó 50 minutos y enfriado en un desecador sobre
Cada osmol de soluto agregado a 1,0 kg de agua sílica gel; que se indica en la Tabla. Disolver el
cloruro de sodio en 100 g de agua, exactamente
disminuye el punto de congelación en 1,858 °C y la
pesados, para cada solución de referencia.
Figura.
Micrómetro - Emplear un micrómetro de 1,2 µm o porosidad menor en un intervalo de
platina certificado, con graduaciones de 10 µm. presiones de 10 a 80 psi y membranas filtrantes
Aparatos de filtración - Emplear un embudo (de 25 ó 47 mm, reticuladas o no, de color negro o
filtrante apropiado para el volumen a ensayar, con gris oscuro, de un material apropiado compatible
un diámetro mínimo de aproximadamente 21 mm. con el producto, de 1,0 µm o porosidad menor).
El embudo debe ser de plástico, vidrio acero Emplear pinzas de punta roma para manipular los
inoxidable. Colocar el filtro sobre una criba de filtros de membrana.
acero inoxidable o una placa de vidrio sinterizado
Ambiente para el ensayo -
para que actúe como difusor del filtrado. El
Una campana de flujo laminar u otro recinto -
aparato de filtración está equipado con una fuente
con flujo de aire laminar, con una capacidad
de vacío, un dispensador de solvente capaz de
suficiente para separar el área donde se lleva a
entregar solvente filtrado a través de un filtro
cabo el análisis, con aire filtrado a través de un Operación del retículo para la medición del
filtro HEPA no habiendo más de 3.500 partículas diámetro de partículas -
(mayores o iguales a 0,5 µm) por metro cúbico. El error relativo del retículo empleado debe
Para la determinación del blanco, medir con el medirse inicialmente con un micrómetro de
dispensador un volumen de 50 ml de agua platina certificado. Para realizar esto, alinear la
destilada o desionizada y filtrada. Aplicar vacío y escala micrométrica del retículo con la del
pasar el volumen total de agua a través del filtro micrómetro de la platina para que queden
de membrana. Retirar la membrana de la base del paralelas. [NOTA: comparar las escalas,
embudo y colocarla sobre una cinta con adhesivo empleando el mayor número posible de
en ambas caras, en un portaobjetos o una placa de graduaciones]. Leer el número de divisiones de la
Petri. Dejar secar la membrana, examinarla escala del ocular reticulado, DEOR, comparado
microscópicamente a una magnificación de 100x. con las divisiones del micrómetro de la platina,
Si no más de 20 partículas mayores o iguales a DMP. Calcular el error relativo por la fórmula
10 µm y 5 partículas mayores o iguales a 25 µm siguiente:
están presentes dentro del área de filtración, el
nivel de partículas es apropiado para llevar a cabo DEOR DMP
100
el ensayo. DMP
Durante todo este procedimiento, se deben
emplear guantes apropiados libres de polvo, Un error relativo de ± 2 % es aceptable. La
materiales de vidrio y equipos completamente técnica básica de medición aplicada con el empleo
limpios. Antes de realizar el ensayo limpiar todas del retículo para la medición del tamaño de
las superficies del área de flujo laminar con un partículas consiste en transformar mentalmente la
solvente apropiado. El material de vidrio y los imagen de cada partícula en un círculo y luego
equipos deben haber sido enjuagados compararlo con los círculos de referencia del
sucesivamente con una solución de detergente retículo de 10 y 25 µm. El proceso de medición
libre de residuos a aproximadamente a 100 °C, por tamaño se lleva a cabo sin superponer la
agua caliente, agua destilada o desionizada y partícula en los círculos de referencia; las
alcohol isopropílico. [NOTA: el agua destilada o partículas no deben moverse de sus localizaciones
desionizada y el alcohol isopropílico se deben dentro del campo del retículo (el círculo grande)
filtrar empleando filtros de 1,2 µm o porosidad para compararlas con los círculos de referencia.
menor]. Hacer los enjuagues bajo un flujo Emplear el diámetro interno de los círculos claros
laminar equipado con filtros HEPA. Dejar secar de referencia del retículo para clasificar por
los materiales de vidrio y los aparatos de filtración tamaño a las partículas blancas y transparentes.
bajo la campana. Preferentemente, la campana Emplear el diámetro exterior de los círculos de
debe estar ubicada en una habitación separada, referencia de color negro del retículo para
provista con aire filtrado y acondicionado, clasificar por tamaño a las partículas oscuras.
mantenida bajo presión positiva. Rotar el retículo en el ocular derecho del
microscopio para que la escala lineal quede
Preparación del microscopio – ubicada en la parte inferior del campo; enfocando
Colocar el iluminador auxiliar cerca de la rápida y definidamente el retículo mediante el
platina, enfocar el iluminador para dar un área ajuste del anillo derecho de la dioptra del ocular
concentrada de iluminación sobre una membrana mientras se observa la muestra fuera de foco.
filtrante colocada en la platina. Ajustar la altura Enfocar el microscopio sobre la muestra, mirando
del iluminador para que el ángulo de incidencia de solamente a través del ocular derecho. Luego,
la luz sea 10° ó 20° con respecto a la horizontal. mirando a través del ocular izquierdo, ajustar la
Empleando el iluminador episcópico interno, abrir dioptra del ocular izquierdo para enfocar con
totalmente el campo y la abertura de los definición.
diafragmas. Centrar el filamento de la lámpara y
enfocar el microscopio en un filtro que contenga Preparación del aparato de filtración –
partículas. Ajustar la intensidad de iluminación Lavar preferentemente todos los componentes
reflejada hasta que las partículas sean claramente del aparato de filtración en una solución de
visibles y muestren sombras pronunciadas. detergente líquido y agua caliente. Enjuagar con
Ajustar la intensidad de iluminación episcópica al agua caliente. Aplicar un segundo enjuague con
grado más bajo y luego aumentar la hasta que las agua destilada o desionizada y filtrada, empleando
sombras producidas por las partículas muestren la agua a presión sobre todas las superficies
disminución menos perceptible de contraste. exteriores e interiores del aparato de filtración.
Repetir el procedimiento del enjuague a presión
empleando alcohol isopropílico filtrado. todo el líquido. Retirar el embudo filtrante de la
Finalmente, empleando el dispositivo de enjuague base mientras se mantiene el vacío, cerrar el vacío
a presión, enjuagar el aparato con agua destilada o y retirar la membrana con una pinza de punta
desionizada y filtrada. roma. Colocar la membrana sobre una placa de
Retirar una membrana filtrante de su envase Petri u otro envase similar, fijarla con una cinta
empleando una pinza limpia de punta roma. con adhesivo en ambas caras e identificar la
Emplear agua destilada o desionizada y filtrada muestra. Dejar que el filtro se seque al aire en el
para lavar ambos lados del filtro. Armar el recinto de flujo laminar dejando la tapa del envase
aparato de filtración con el difusor en la base y semiabierta.
colocar el filtro sobre el difusor. Colocar el Polvos y liofilizados - Proceder según se
embudo en la parte superior de la base y fijarlo en indica en Preparación muestra en Recuento de
su lugar. partículas por bloqueo de luz. Empleando una
solución combinada de diez unidades o más o el
Preparación muestra –
número requerido de unidades individuales,
Proceder según se indica en Preparación
proceder según se indica en Preparaciones
muestra en Recuento de partículas por bloqueo de
luz. líquidas.
Preparaciones líquidas - Para inyectables de Inyectables en envases multidosis - Proceder
según se indica en Preparaciones líquidas,
pequeño volumen con un volumen mayor o igual
filtrando el volumen total de la unidad. Calcular
a 25 ml, ensayados individualmente, y para
el resultado del ensayo referido al volumen de una
inyectables de gran volumen, se debe realizar el
porción equivalente a la dosis máxima declarada
ensayo sobre todo el volumen de la unidad. Para
inyectables de gran volumen o inyectables de en el rótulo. Considerar que esta porción es el
pequeño volumen donde el volumen de cada equivalente al contenido del envase total. Por
ejemplo, si el volumen total del envase es 50 ml y
unidad es mayor o igual a 25 ml se deben ensayar
el volumen de la dosis máxima es 10 ml, el
menos de diez unidades seleccionadas en base a la
resultado del ensayo de recuento del volumen
definición de un plan de muestreo estadístico.
total se multiplicará por 0,1 para obtener el
Mezclar y suspender las partículas en cada unidad
invirtiendo veinte veces su contenido. Abrir las resultado del ensayo en base a la dosis máxima de
unidades de manera de generar el menor número 10 ml. [NOTA: para los cálculos, considerar que
esta porción es el equivalente al contenido de un
posible de partículas. Para productos con un
envase lleno].
volumen menor a 25 ml, abrir y combinar el
contenido de diez o más unidades en un envase Recuento de partículas -
limpio. Filtrar las unidades de gran volumen en El ensayo microscópico descrito en esta
forma individual. Se pueden filtrar sección es flexible con respecto al modo de
individualmente las unidades de pequeño volumen recuento, ya que permite contar partículas por ml,
mayor o igual a 25 ml. en muestras que contengan 1 partícula por ml así
Mediante el empleo del embudo de filtración como en muestras que contengan un número
transferir el volumen total de una solución significativamente mayor de partículas por ml.
combinada o una unidad individual y aplicar Este método puede emplearse cuando se cuentan
vacío. Si se va a emplear el procedimiento de todas las partículas en la superficie de la
recuento parcial (ver Procedimiento de recuento membrana de análisis o cuando solamente se
parcial en Recuento de Partículas), no dejar que cuentan aquellas partículas en un área fraccionada
el volumen del líquido en el embudo filtrante se de la superficie de la membrana.
encuentre por debajo de la mitad del volumen del
Procedimiento de recuento total -
embudo entre cada uno de los llenados. [NOTA:
En un recuento total, se ignora el campo
emplear un embudo filtrante apropiado al
reticular (CR) definido por el círculo grande del
volumen de la solución si se va emplear el
retículo y se emplea el filamento vertical. Barrer
procedimiento de recuento parcial. Esto es
la membrana totalmente de derecha a izquierda en
necesario para asegurar la distribución pareja de un camino que colinda, pero no se superponga,
las partículas sobre la membrana]. Después de con el primer camino de barrido. Repetir este
agregar la última porción de la solución, comenzar
procedimiento, moviéndose de izquierda a
a lavar las paredes del embudo filtrante aplicando
derecha, y nuevamente a la izquierda, hasta que
en forma circular agua destilada o desionizada y
todas las partículas de la membrana hayan sido
filtrada y dejar de lavar antes que el volumen contadas. Registrar el número total de partículas
llegue por debajo de un cuarto del nivel de mayores o iguales a 10 µm y mayores o iguales a
llenado. Mantener el vacío hasta haber filtrado
25 µm. Para inyectables de gran volumen, borde izquierdo del área de filtración, mover a un
calcular el número de partículas, por ml, para la CR hacia la parte superior del filtro y continuar
unidad ensayada, por la fórmula siguiente: contando los CR avanzando en la dirección
opuesta. El movimiento de un CR al próximo
P puede ser realizado por dos métodos. Un método
V es definir un punto de referencia (partícula o
irregularidad de la superficie del filtro) y mover
en la cual P es el número total de partículas un CR en relación al punto. Un segundo método
contadas y V es el volumen de la solución, en ml.
es emplear el vernier de la platina del microscopio
Para inyectables de pequeño volumen, calcular el
para mover 1 mm entre los CR. Para facilitar esto
número de partículas, por unidad, por la fórmula
último, ajustar la posición de los controles x e y en
siguiente: la platina del microscopio a un número entero en
P la posición inicial en el centro del borde derecho
del área dé filtración; luego cada CR será una
n división entera de movimiento del control x de la
en la cual P es el número total de partículas posición de la platina. Si se llega a la parte
contadas y n es el número de unidades superior del área de filtración antes de obtener el
combinadas. número deseado de CR se empieza nuevamente en
el centro del borde derecho del área de filtración
Procedimiento de recuento parcial - un CR por debajo del empleado la primera vez.
Si se realizara un recuento parcial de partículas
Esta vez moverse hacia abajo en la membrana
sobre una membrana, el operador debe, en primer
cuando se llega al final de una fila de los CR.
lugar, asegurarse de que se realice una
Continuar como antes hasta completar el número
distribución homogénea de partículas en la de CR.
membrana. Esto es evaluado barriendo Para inyectables de gran volumen, si se emplea un
rápidamente para buscar agregados de partículas.
procedimiento de recuento parcial para los
No debe observarse ningún agregado. Contar las
intervalos de tamaño 10 y 25 µm, calcular las
partículas mayores o iguales a 10 µm en el CR en
partículas por ml, por la fórmula siguiente:
el borde del área de filtración así como en el
centro de la membrana. El número de partículas PAt
mayores o iguales a 10 µm en el CR con el
recuento total más alto de partículas no es más del
ApV
doble del CR con el recuento más bajo de en la cual P es el número de partículas contadas,
partículas. Rechazar un filtro que no cumpla estos At es el área de filtración de la membrana en mm2,
criterios y preparar otro si se emplea un Ap es el área parcial contada en mm2, en base al
procedimiento de recuento parcial, o analizar esta número de campos reticulares contados y V es el
membrana por el método de recuento total. Volumen de solución filtrada, en ml. Para una
El número normal de CR contados para un solución combinada (para unidades de inyectables
recuento parcial es 20. Si se desea un intervalo de de pequeño volumen que contengan menos de
confianza más pequeño con respecto al resultado, 25 ml) o para una sola unidad de un inyectable de
puede contarse un número de campos y partículas pequeño volumen, calcular el número de
mayor. Contar todas las partículas que tengan un partículas por unidad, por la fórmula siguiente:
diámetro mayor o igual a 10 µm y mayor o igual a
25 µm dentro del CR y aquéllas que están en PAt
contacto con el lado derecho del círculo del CR. Ap n
No contar las partículas fuera del CR. Ignorar
aquéllas que tocan el lado izquierdo del círculo de en la cual n es el número de unidades contadas y
CR. La línea divisoria entre el lado derecho y el los otros términos son los definidos anteriormente.
izquierdo del círculo del CR es el filamento Para todos los tipos de productos, si el material
vertical. [NOTA: determinar el tamaño de la ensayado ha sido diluido para que disminuya la
partícula sin cambiar el aumento o la iluminación viscosidad, el factor de dilución debe tomarse en
del microscopio]. cuenta al calcular el resultado final del ensayo.
Para realizar un recuento parcial de partículas
sobre una membrana, comenzar en el borde Interpretación –
derecho del centro del área de filtración y empezar El inyectable cumple con los requisitos del ensayo
a contar los CR adyacentes. Cuando se llega al si el número de partículas promedio presente en
las unidades ensayadas no excede los valores enumerados en la Tabla 2.
Clase E2 Clase F1
Valor nominal
Tolerancia en mg Tolerancia en mg
1 mg 0,006 0,020
2 mg 0,006 0,020
5 mg 0,006 0,020
10 mg 0,008 0,025
20 mg 0,010 0,030
50 mg 0,012 0,040
100 mg 0,015 0,050
200 mg 0,020 0,060
500 mg 0,025 0,080
1g 0,030 0,10
2g 0,040 0,12
5g 0,050 0,15
10 g 0,060 0,20
20 g 0,080 0,25
50 g 0,10 0,30
100 g 0,15 0,5
200 g 0,30 1,0
500 g 0,75 2,5
1 kg 1,5 5
2 kg 3,0 10
Tabla – continuación.
Calse E2 Clase F2
Valor nominal
Tolerancia en mg Tolerancia en mg
5 kg 7,5 25
Estas pesas deben recalibrarse periódicamente La calibración de las balanzas mediante pesas
por comparación con pesas patrones trazables al patrones externas debe realizarse por lo menos
kilogramo Patrón del Bureau International des una vez al año, incluyendo ensayos de
Poids et Mesures (BIPM) de Sévres, París. Este excentricidad (no aplicable a balanzas de platillo
Patrón consiste en un cilindro de platino/iridio suspendido) y repetitividad, esta última con no
(90/10) de 39 mm de diámetro y 39 mm de altura, menos de diez valores.
con una densidad de 21,5 g/cm3. La recalibración Las pesas patrones a emplear dependerán de la
se debe realizar con una periodicidad de 2 a 7 sensibilidad de la balanza y la cantidad no será
años dependiendo del manipuleo, las condiciones menor de siete, debiendo abarcar necesariamente
de conservación y la frecuencia de uso. los valores de pesada que se realicen en dicha
balanza.
[NOTA: Las balanzas deber ser instaladas de manera tal de evitar las vibraciones y/o oscilaciones].
700. POLAROGRAFIA
La polarografía es un método electroquímico la superficie del microelectrodo, para que esto
que proporciona información cualitativa y ocurra es necesaria la presencia de una elevada
cuantitativa de sustancias electro-reducibles y concentración de electrolito soporte, inerte dentro
electro-oxidables, basado en la medición del flujo del intervalo de potencial empleado para el ensayo.
de corriente resultante de la electrólisis de una La reacción del electrolito soporte por aumento del
solución en un microelectrodo polarizable, en potencial causa el incremento final de la corriente,
función del voltaje aplicado. El intervalo de observada en los polarogramas.
concentraciones para las sustancias que se analizan En el caso del EGM, la superficie del electrodo
es de 10-2 a 10-5 M. se renueva constantemente en forma cíclica, por lo
Esta medición puede realizarse por polarografía que la corriente aumenta de un valor pequeño
de corriente directa o de pulsos. A menos que se cuando la gota comienza a formarse hasta alcanzar
especifique de otro modo, emplear la técnica de un valor máximo cuando la gota cae. Mediante el
corriente directa: empleo de un registrador apropiado para medir la
corriente, se obtiene el registro polarográfico
POLAROGRAFIA DE CORRIENTE
característico con perfil de diente de sierra. La
DIRECTA
corriente limitante es la suma de la corriente
En la polarografía de corriente directa residual y de difusión. La corriente residual se resta
convencional, la corriente se mide continuamente a la corriente limitante para obtener la altura de la
mientras se aplica un potencial variable en forma onda. Los cambios en las corrientes de difusión y
lineal. Esta corriente se compone de dos elementos: capacitiva, según la variación del tamaño de la gota,
el primero es la corriente de difusión, producida por producen las oscilaciones en los polarogramas
la sustancia que experimenta la reducción u típicos.
oxidación en el electrodo de trabajo y que es La relación lineal entre la corriente de difusión,
directamente proporcional a la concentración de id, y la concentración de especies electro-activas
esta sustancia; y el segundo es la corriente está dada por la ecuación de Ilkovic:
capacitiva, relacionada con la carga de la doble
capa electroquímica. id 708nD1 2 m2 3t 1 6 c
Un polarógrafo emplea un electrodo de goteo de
mercurio (EGM) capaz de proporcionar un flujo en la cual id es la corriente máxima en
constante de pequeñas gotas de mercurio, de microamperios, n es el número de electrones
tamaño reproducible, que fluyen del orificio de un requeridos por molécula de sustancia electroactiva,
tubo capilar conectado a un reservorio de mercurio, D es el coeficiente de difusión en cm2 por segundo,
y un electrodo de referencia, generalmente de m es la velocidad de flujo de mercurio del EGM en
calomel saturado (ECS), el cual debe ser de mg por segundo, t es el tiempo de caída de la gota
superficie grande. en segundos y c es la concentración del analito en
Al aplicar el voltaje inicial, se observa el flujo milimoles por litro.
de una muy pequeña corriente residual; a medida Los polarógrafos modernos, capaces de efectuar
que el voltaje aplicado varía; dicho flujo presenta polarografía por muestreo, están equipados con
mínimas variaciones, hasta que la sustancia bajo registradores para determinar la corriente durante la
valoración experimenta la reducción u oxidación. última porción de la vida de la gota, registrando
Al principio la corriente aumenta gradualmente y sólo las corrientes máximas y evitando las
luego lo hace de manera casi lineal con el voltaje oscilaciones debidas al crecimiento de la gota.
hasta alcanzar un valor limitante. En la porción Para aparatos en los que la corriente se mide con
ascendente inicial de la onda polarográfica, el galvanómetros, las ondas con perfil de diente de
aumento del flujo de corriente se corresponde con sierra corresponden a oscilaciones cercanas a la
una disminución de la concentración de las especies corriente promedio, mientras que si se emplean
electroactivas en la superficie del electrodo. A registradores que operan en modo amortiguado, la
medida que el voltaje y la corriente crecen, la medida de la corriente es el promedio de las
concentración de las especies reactivas disminuye oscilaciones. Para los polarogramas obtenidos de
aún más hasta alcanzar un valor mínimo en la esta manera, la id, dada por la ecuación de Ilkovic es
superficie del electrodo. La corriente está limitada la corriente promedio en microamperios observada
por la velocidad a la cual las especies reaccionantes durante la vida de la gota, cuando el coeficiente 708
pueden difundir desde el seno de la solución hasta es reemplazado por 607.
Potencial de media-onda - El potencial de Comenzar el goteo de mercurio desde el capilar,
media-onda (E1/2) corresponde, en el polarograma, insertar el capilar en la solución muestra y ajustar la
al punto medio de la distancia entre la corriente altura del reservorio de mercurio. Modificar el
residual y la meseta de la corriente limitante. Este flujo de nitrógeno de modo que pase sobre la
potencial es por lo general independiente de la superficie de la solución, a fin de que la misma esté
concentración del analito o del capilar empleado libre de vibraciones durante el tiempo en que se
para obtener la onda, siendo característico de las registra la onda. Registrar el polarograma en el
especies electroactivas, por lo que sirve como intervalo de potencial indicado en la monografía
criterio de identificación de una sustancia. El E1/2 correspondiente, empleando un registrador o un
depende de la composición de la solución y puede galvanómetro de sensibilidad apropiada para
cambiar con variaciones en el pH o en el sistema de obtener una onda apropiada. Medir la altura de la
solventes, o con el agregado de agentes onda y, a menos que se especifique de otro modo en
complejantes. la monografía correspondiente, comparar ésta con
A menos que se especifique de otro modo, el la altura de la onda obtenida con la Sustancia de
potencial del EGM es igual al voltaje aplicado referencia correspondiente, medida bajo las mismas
frente al ECS, luego de realizar la corrección por la condiciones.
caída óhmica, iR (el potencial necesario para pasar
POLAROGRAFÍA DE PULSOS
la corriente, i, a través de una solución con una
resistencia R). Es especialmente importante hacer En la polarografia de pulso normal, se aplica un
esta corrección para soluciones no acuosas que pulso de potencial al electrodo de mercurio cerca
poseen alta resistencia. del final de la vida de la gota. A cada gota
siguiente se le aplica un pulso ligeramente mayor,
Medición de la altura de la onda (ver Figura)
con una velocidad de incremento-determinada por
- Para fines cuantitativos, es necesario determinar la velocidad de barrido seleccionada. La corriente
la altura de la onda polarográfica. Ya que ésta es un se mide al término del pulso, representando
índice de la magnitud de la corriente de difusión id,
principalmente la corriente de difusión, ya que en
se mide verticalmente, compensado la corriente
esas condiciones la corriente capacitiva es casi nula.
residual, por extrapolación del segmento de la curva
La aplicación de pulsos cortos permite una
que precede a la onda hasta más allá del ascenso en
sensibilidad aproximadamente diez veces mayor
la misma. Para una onda bien formada donde esta que la polarografía de corriente directa y la
extrapolación es paralela a la meseta de la corriente corriente limitante se mide con mayor facilidad, ya
limitante, la medición no es ambigua. Para ondas
que las ondas están exentas de oscilaciones.
no muy bien definidas, puede emplearse el siguiente
procedimiento a menos que se especifique de otro La polarografía de pulso diferencial es una
modo en la monografía correspondiente. Tanto la técnica mediante la cual un pulso de altura fija
corriente residual como la corriente limitante se aplicado al final de la vida de cada gota se
extrapolan con líneas rectas. La altura de la onda se superpone a una rampa de incremento lineal de
toma como la distancia vertical entre estas líneas corriente directa. El flujo de corriente se mide justo
medidas a nivel del potencial de media-onda. antes de la aplicación del pulso. La diferencia entre
estas dos corrientes se mide y se representa en el
Precaución - El mercurio metálico tiene una registrador; dicha señal diferencial proporciona una
presión de vapor importante a temperatura curva que se aproxima a la derivada de la onda
ambiente; por lo tanto, el área de trabajo debe
polarográfica, con pico cuyo potencial máximo es
construirse de modo que cualquier salpicadura o
equivalente a:
gota derramada puedan recuperarse
completamente con relativa facilidad. Limpiar el 12 2
mercurio después de cada empleo del aparato.
donde E es la altura del pulso. La altura del pico
Procedimiento - Transferir una porción de la es directamente proporcional a la concentración a
dilución final de la muestra a una celda velocidades de barrido y alturas de pulso constante.
polarográfica apropiada, inmersa en un baño de Esta técnica es muy sensible (pueden determinarse
agua regulado a 25,0 ± 0,5 °C. Pasar una corriente concentraciones del orden de 10-7 M) y proporciona
de nitrógeno a través de la solución durante 10 a mejor resolución entre ondas poco espaciadas.
15 minutos para eliminar el oxígeno disuelto.
Figura. Medición de la altura de la onda.
710. SALES DE BASES ORGÁNICAS NITROGENADAS
Solución estándar - A menos que se aforados de 100 ml y completar a volumen con
especifique de otro modo en la monografía ácido sulfúrico diluido (1 en 70). Determinar la
correspondiente, preparar una solución en ácido absorbancia de cada solución en celdas de 1 cm, a
sulfúrico diluido (1 en 70) que contenga en cada la longitud de onda especificada con un
ml, aproximadamente 500 µg de la Sustancia de espectrofotómetro apropiado, empleando ácido
referencia especificada, calculada sobre la sulfúrico diluido (1 en 70) como blanco. Designar
sustancia anhidra y exactamente pesada. la absorbancia de la solución obtenida a partir de
Solución muestra - Si la forma farmacéutica la Solución estándar como AE y la obtenida a
es un comprimido, pesar y reducir a polvo fino no partir de la Solución muestra como AM. Calcular
menos de veinte unidades. Pesar exactamente una el resultado de la valoración según se especifica
porción del polvo, equivalente a 25 mg del en la monografía correspondiente.
principio activo, y transferirla a una ampolla de
decantación de 125 ml. Si la forma farmacéutica
es líquida, transferir un volumen de la misma
exactamente medido, equivalente a 25 mg del
principio activo, a una ampolla de decantación de
125 ml.
Agregar 20 ml de ácido sulfúrico diluido
(1 en 350) a la ampolla de decantación y agitar
durante 5 minutos. Agregar 20 ml de éter, agitar
cuidadosamente, filtrar la fase ácida y transferirla
a una segunda ampolla de decantación de 125 ml.
Agitar la fase etérea con dos porciones de 10 ml
de ácido sulfúrico diluido (1 en 350), filtrar cada
porción de ácido en la segunda ampolla de
decantación que contiene la fase ácida y descartar
el éter. Agregar al extracto ácido 10 ml de
hidróxido de sodio (SR) y 50 ml de éter, agitar
cuidadosamente y separar ambas fases. La fase
etérea se identifica como E1. Transferir la fase
acuosa a una tercera ampolla de decantación de
125 ml que contenga 50 ml de éter. Agitar la
tercera ampolla de decantación cuidadosamente y
descartar la fase acuosa. La fase etérea se
identifica como E2. Lavar la fase etérea E1 con
20 ml de agua, separar la fase acuosa y emplear
esta última para lavar la fase etérea E2. Separar y
descartar el agua. Extraer cada una de las dos
fases etéreas, E1 y E2, con porciones de 20; 20 y
5 ml de ácido sulfúrico diluido (1 en 70) en ese
orden, pero extrayendo cada vez primero la fase
etérea E2 de la tercera ampolla de decantación y
después la fase etérea E1 de la segunda ampolla
de decantación. Combinar los extractos ácidos en
un matraz aforado de 50 ml, diluir á volumen con
ácido y mezclar. Esta fracción constituye la
Solución muestra. [NOTA: el éter puede
sustituirse por hexano o heptano si esto mejora la
extracción].
Procedimiento - A menos que se especifique
de otro modo en la monografía correspondiente,
transferir 5,0 ml de la Solución estándar y 5,0 ml
de la Solución muestra a sendos matraces
720. TERMOMETROS
Para seleccionar un termómetro, deben considerarse Los límites inferior y superior del intervalo de
las condiciones bajo las cuales habrá de emplearse. temperatura especificado en las Tablas deben
En la Tabla 1, Tabla 2 y Tabla 3 se especifican las considerarse incluidos en el intervalo.
características de algunos termómetros útiles para
los ensayos farmacopeicos.
Donde P1 P2 P 3 y M1 M2 M3
Fórmulas para efectuar el ANOVA para el modelo de rectas paralelas con d dosis de cada preparación.
(*) No se calcula para el diseño completamente aleatorizado. R es la media de respuestas para cada bloque o fila.
(**) Solo se calcula para el diseño cuadrado latino.
El cuadrado medio de cada una de las fuentes de variación se calcula como el cociente entre la Suma de Cuadrados (SC) y
sus correspondientes grados de libertad.
SC fte.de variación
CM fte.de variación
gl fte.de variación
El F calculado es el cociente entre el Cuadrado Medio (CM) de la fuente de variación y el Cuadrado Medio del Error
(CMerror= s2).
CM fte.de variación
Fcalculado
CM error
Estimación de potencia e Intervalos de Confianza:
P2 SCreg
I Log LogP2 LogP1 V
P1 b 2 dn
H L LS LT ... SCreg .
b C
Inh SCreg . s 2 t 2
PT PS
M 'T M ´Sup C M ´T (C 1) C (M ´T ) 2 2 V
db
M ´Inf C M ´T (C 1) C (M ´T ) 2 2 V
ANOVA
Modelo de Rectas Paralelas
Desv. Paralelismo= SI
Signif.
NO
Regresión = NO
Signif.
SI
Desv. Linealidad = SI
Signif.
NO
NO
SI
Descartar placa SI Dif. e/ Bloques =
anómala Signif.
NO
Aceptar el ensayo y el Repetir el ensayo y Rechazar
cálculo de potencia ajustar la Pot. supuesta el ensayo
Curva Dosis-Respuesta:
Donde P1 P2 Pd
Total dn 1 SCtotal Y 2 G2 / N
S xy X i Ti ni xi Ti / N
2
S xx ni xi2 ni xi /N
Glosario
A-B-…-N: Réplicas o bloques según corresponda al diseño estadístico.
b : Pendiente de la regresión lineal en los logaritmos de las dosis.
C: Estadístico empleado para el cálculo de los Intervalos de Confianza
CM: Cuadrado medio: cociente entre la Suma de Cuadrados de la fuente de variación y sus grados de libertad.
d: Número de niveles de dosis para cada preparación.
dh: Número total de tratamientos en la valoración.
F: Estadístico a comparar con el valor tabulado en tablas de distribución F de Ficher para los grados de libertad
correspondientes al numerador y denominador del estadístico F calculado.
CM fte.devariación
Fcalculado
CM error
G2/N: ( yi)2/N
h: Número de preparaciones en la valoración que incluyen a la del estándar.
Hp, HT: Multiplicadores empleados en el análisis de Varianza para Rectas Paralelas.
I: Logaritmo de la relación entre dosis adyacentes.
K: Factor de corrección en los cálculos de Suma de Cuadrados en el Análisis de la Varianza.
L: Longitud de intervalos de Confianza en logaritmo.
LS, LT: contraste lineal para el Estándar y Muestra respectivamente.
M´: Logaritmo de la relación de Potencias.
n: número de réplicas para cada tratamiento.
N: número total de respuestas.
P1-P2-...-Pn-M1-M2-...-Mn: Dosis de estándar y muestra respectivamente.
PS, PT: respuestas medias.
R: Potencia estimada de la preparación a ensayar.
R´: Relación de potencias.
R1,…,Rn: Respuesta media en cada fila para el diseño de Cuadrado Latino o de cada Bloque para el diseño de bloques
aleatórios.
s: Estimador del desvío estándar.
s s2
S1,…,Sn: Respuesta media para cada preparación de Estándar.
s2: Estimador de la varianza por el Cuadrado Medio del Error en el ANOVA.
t: Estadístico de Student.
T1,…,Tn: Respuesta media para cada preparación muestra.
Ti: Sumatoria de respuestas para la dosis i en curva dosis-respuesta.
V: Coeficiente de la Varianza para el cálculo de los límites de confianza.
x: Logaritmo de la dosis.
y: Respuesta individual o su transformación.
Tabla 1. Preparación de soluciones madre y diluciones de ensayo de Sustancias de referencia
Antibiótico y tipo de
Solvente inicial (y concentración Dosis intermedia
valoración [Difusión Concentración Período de
inicial en donde se especifique); Diluyente final ( g de actividad o
en placa (DP) final por ml uso
diluyente adicional, si es diferente Unidades por ml)
o Turbidimétrico (T)]
Amikacina (T) Agua 1 mg 14 días Agua 10 g
Anfotericina B (DP) Dimetilsulfóxido 1 mg Mismo día B. 10 1,0 g
Bacitracina cinc (DP) Ácido clorhídrico 0,01 N 100 U Mismo día B. 1 1,0 U
Bleomicina (DP) B. 16 2U 14 días B. 16 0,04 U
Candicidina (T) Dimetilsulfóxido 1 mg Mismo día Agua 0,06 g
Capreomicina (T) Agua 1 mg 7 días Agua 100 g
Carbenicilina (DP) B. 1 1 mg 14 días B. 1 20 g
Cefalotina (DP) B. 1 1 mg 5 días B. 1 1,0 g
Cicloserina (T) Agua 1 mg 30 días Agua 50 g
Cloranfenicol (T) Alcohol (10 mg/ml); [Agua] 1 mg 30 días Agua 2,5 g
Clortetraciclina (T) Ácido clorhídrico 0,01 N 1 mg 4 días Agua 0,06 g
Cloxacilina (DP) B. 1 1 mg 7 días B. 1 5,0 g
Colistimetato sódico (DP) Agua (10 mg/ml); [B. 6] 1 mg Mismo día B. 6 1,0 g
Colistina (DP) Agua (10 mg/ml); [B. 6] 1 mg 14 días B. 6 1,0 g
Democlociclina (T) Ácido clorhídrico 0,1 N 1 mg 4 días Agua 0,1 g
Dihidroestreptomicina (DP) B. 3 1 mg 30 días B. 3 1,0 g
Dihidroestreptomicina (T) Agua 1 mg 30 días Agua 30 g
Doxiciclina (T) Ácido clorhídrico 0,1 N 1 mg 5 días Agua 0,1 g
Eritromicina (DP) Metanol (10 mg/ml); [B. 3] 1 mg 14 días B. 3 1,0 g
Estreptomicina (T) agua 1 mg 30 días Agua 30 g
Tabla 1. - continuación. Preparación de soluciones madre y diluciones de ensayo de Sustancias de referencia.
Antibiótico y tipo de
Solvente inicial (y concentración Dosis intermedia
valoración [Difusión Concentración Período de
inicial en donde se especifique); Diluyente final ( g de actividad o
en placa (DP) final por ml uso
diluyente adicional, si es diferente Unidades por ml)
o Turbidimétrico (T)]
Gentamicina (DP) B. 3 1 mg 30 día B. 3 0,1 g
Gramicidina (T) Alcohol al 95 % 1 mg 30 días Alcohol al 95 % 0,04 g
Kanamicina (T) Agua 1 mg 30 días Agua 10,0 g
Metaciclina (T) Agua 1 mg 7 días Agua 0,06 g
Nafcilina(DP) B. 1 1 mg 2 días B. 1 2,0 g
Natamicina (DP) Dimetilsulfóxido 1 mg Mismo día B. 10 5,00 g
Neomicina (DP) B. 3 1 mg 14 días B. 3 1,0 g
Neomicina (T) B. 3 100 g 14 días B. 3 1,0 g
Netilmicina (DP) B. 3 1 mg 7 días B. 3 0,1 g
Nistatina (DP) Dimetilformamida 1.000 U Mismo día B. 6 20 U
Novobiocina (DP) Alcohol (10 mg/ml); [B. 3] 1 mg 5 días B. 6 0,5 g
Oxitetraciclina (T) Ácido clorhídrico 0,1 N 1 mg 4 días Agua 0,24 g
Paromomicina (DP) B. 3 1 mg 21 días B. 3 1,0 g
Penicilina G (DP) [B. 1] 1.000 U 4 días B. 1 1,0 Ug
Polimixina B (DP) Agua; B. 6 10.000 U 14 días B. 6 10 Ug
Rolitetraciclina (T) Agua 1 mg 1 día Agua 0,24 g
Sisomicina (DP) B. 3 1 mg 14 días B. 3 0,1 g
Tetraciclina (T) Ácido clorhídrico 0,1 N 1 mg 1 día Agua 0,24 g
Ticarcilina (DP) B. 1 1 mg 1 día B. 1 5,0 g
Tobramicina (T) Agua 1 mg 14 días Agua 2,5 g
Solución madre Solución muestra
Antibiótico y tipo de
Solvente inicial (y concentración Dosis intermedia
valoración [Difusión Concentración Período de
inicial en donde se especifique); Diluyente final ( g de actividad o
en placa (DP) final por ml uso
diluyente adicional, si es diferente Unidades por ml)
o Turbidimétrico (T)]
Troleandomicina (T) Alcohol isopropílico-agua (4:1) 1 mg Mismo día Agua 25 g
Vancomicina (DP) Agua 1 mg 7 días B. 4 10 g
NOTAS -
“B” indica “solución reguladora” y el número siguiente se refiere a las soluciones reguladoras de fosfato de potasio definidas en este capítulo.
Para anfotericina B, colistimetato sódico y nistatina, preparar las soluciones de la Sustancia de referencia y la Solución muestra simultáneamente.
Para anfotericina B, diluir adicionalmente la Solución madre con dimetilsulfóxido hasta obtener una serie de soluciones cuya concentración intermedia sea de
20 g por ml antes de hacer las soluciones muestra. La Solución muestra debe contener la misma cantidad de dimetilsulfóxido que las soluciones de la
Sustancia de referencia.
Para bacitracina cinc, cada una de las diluciones del estándar debe contener la misma cantidad de ácido clorhídrico que la Solución muestra.
Para la valoración turbidimétrica de neomicina, diluir la Solución madre de 100 g por ml cuantitativamente con Solución reguladora N° 3 hasta obtener una
solución que tenga una concentración equivalente a 25,0 g de neomicina por ml. Para cada Solución muestra agregar 5,0 ml de ácido clorhídrico 0,01 N a
cada matraz aforado, diluir a volumen con Solución reguladora N°3 y mezclar para obtener una serie de soluciones cuya concentración intermedia sea de
1,0 µg de neomicina por ml.
Para nistatina, diluir adicionalmente la Solución madre con dimetilformamida hasta obtener una concentración intermedia de 400 Unidades por ml antes de
hacer las Soluciones muestra. Las Soluciones muestra deben contener la misma cantidad de dimetilformamida que las Soluciones estándar. Emplear material
inactínico de vidrio.
Para Polimixina B, preparar la Solución madre mediante el agregado de 2 ml de agua por cada 5 mg de Sustancia de referencia.
Tabla 2. Organismos de ensayo para antibióticos valorados según el procedimiento indicado en la Tabla 1.
Antibiótico Organismo de Ensayo Número ATCC *
American Type Culture Collection, 12.301 Parklawn drive, Rockville, MD 20852, EEUU.
Pueden emplearse también otras cepas de colección de características equivalentes, como ser:
NCTC (National Collection of Type Cultures), Central Publish Health Laboratory, Colindone Av, London NW
95HT, Inglaterra.
NCYC (National Collection of Yeast Cultures), Brewing Industry Research Fundation, Nutfield, Redhill RH 14
HY, Surrey, Inglaterra.
NCIB (National Collection of Industry Bacteria), Torry Research Station, PO Box 31, 135 AbbeyRoad,
Aberdeen AB) 8 DG, Escocia.
Tabla 3. Preparación del inóculo.
Condiciones de incubación Condiciones para inocular el medio de cultivo
Organismo de ensayo y Tiempo Dilución de la susp. Cantidad
Medio Temp. Medio Antibióticos analizados
N° ATCC (horas) original (25 % T) (ml por 100 ml)
11 2 Paromomicina
1
Los solventes relativamente neutros de baja constante dieléctrica como benceno, tolueno, cloroformo o dioxano pueden emplearse con cualquier solvente ácido o básico para aumentar la sensibilidad
del punto final.
2
En la solución titulante.
Tabla 2. Sistemas de electrododos para titulaciones potenciométricas.
Precipitimetría Plata E E 0,0591 log Ag Calomel (con puente salino Titulación con/de plata
(plata) de nitrato de potasio) incluyendo haluros o
tiocianatos
1
Forma apropiada de la ecuación de Nernst que describe el sistema de electrodos indicado: k = constante del electrodo de vidrio; k´ = constante derivada del
equilibrio Hg-Hg (II)-EDTA; M = cualquier metal titulable con EDTA; [ox] y [red] de la ecuación, ox + ne- red.
2
La lista es representativa pero no es completa.
TEXTOS DE INFORMACIÓN GENERAL
1005. AGUA CALIDAD FARMACÉUTICA
El agua es la principal materia prima utilizada apropiadas para asegurar un adecuado control y
en la industria farmacéutica. Puede ser empleada monitoreo del conteo microbiológico de aerobios
como excipiente, en pasos de síntesis, en la manu- totales. En condiciones normales, un límite de
factura de productos terminados o como agente de acción apropiado es un conteo de aerobios viables
limpieza de reactores, equipamiento, materiales de de 10 microorganismos cada 100 ml, determinados
envase primario y otros. por filtración por membrana.
Según el proceso farmacéutico del que se trate, El Agua para Inyectables debe cumplir con los
se requerirán distintos grados de calidad de agua. El requisitos especificados en la monografía de Agua
control de la calidad del agua, incluyendo su cali- para Inyectables en esta Farmacopea.
dad microbiológica, es un importante desafío para
Agua Purificada
la industria farmacéutica.
El Agua Purificada es el agua para la prepara-
CLASIFICACIÓN Y REQUERIMIENTOS ción de todos los medicamentos que no requieran el
DEL AGUA CALIDAD FARMACOPEA uso de Agua para Inyectables a menos que la mo-
ARGENTINA nografía del producto especifique otra calidad de
agua.
Agua Potable
Durante la producción y almacenamiento del
Con la denominación de Agua Potable de sumi-
Agua Purificada deben tomarse las medidas apro-
nistro público y Agua Potable de uso domiciliario,
piadas para asegurar un adecuado control y monito-
se entiende la que es apta para la alimentación y uso
doméstico: no deberá contener sustancias o cuerpos reo del conteo microbiológico de aerobios totales.
En condiciones normales, un límite de acción apro-
extraños de origen biológico, orgánico, inorgánico o
piado es un conteo de aerobios viables de 100 mi-
radiactivo en tenores tales que la hagan peligrosa
croorganismos por mililitro, determinados por filta-
para la salud. Deberá presentar sabor agradable y
ción por membrana.
ser prácticamente incolora, inodora, límpida y
transparente (Art. 982 – Res MSyAS N°494 del El Agua Purificada debe cumplir con los requi-
7.07.94). sitos especificados en la monografía de Agua Puri-
ficada en esta Farmacopea.
El Agua Potable no está descripta por una mo-
nografía de la Farmacopea Argentina pero debe CALIDAD DE AGUA SEGÚN EL USO
cumplir con los requisitos especificados para Agua FARMACÉUTICO
Potable en Código Alimentario Argentino. Ley La calificación y validación de los sistemas de
Nacional 18.284/69, Capítulo XII: Bebidas Hídri-
obtención, almacenamiento y distribución de agua
cas, Agua y Agua Gasificada. Sin embargo, debe
resultan fundamentales para el cumplimiento de las
analizarse la calidad del Agua Potable en el lugar de
Buenas Prácticas de Fabricación.
manufactura para corroborar su adecuación a los
La calidad de agua a emplear se determina en
parámetros de calidad establecidos. El agua potable función de la naturaleza y del uso especificado del
puede ser empleada en la síntesis química y en las producto final y de la etapa del proceso en la cual el
primeras etapas de limpieza de los equipos emplea-
agua es empleada.
dos en los procesos farmacéuticos de manufactura a
A continuación se especifica la calidad de agua
menos que existan requerimientos técnicos especí-
requerida según el uso de la misma.
ficos o requerimientos de mayor calidad de agua.
Es el agua de alimentación definida para la produc- Agua utilizada como excipiente
ción de Agua Calidad Farmacopea Argentina. en la formulación final
El agua es el excipiente más comúnmente em-
Agua para Inyectables pleado en la fabricación de productos farmacéuticos
El Agua para Inyectables es el agua utilizada pa- y la calidad requerida depende del uso para el cual
ra la preparación de formas farmacéuticas de admi- esté definido el producto final. En esta Farmacopea
nistración parenteral y cualquier otro uso indicado
se distinguen dos grupos: el de productos medicina-
en esta Farmacopea.
les estériles y el de productos medicinales no estéri-
Durante la producción y almacenamiento del
les.
Agua para Inyectables deben tomarse las medidas
Tabla 1. Agua utilizada en la preparación de Productos Medicinales Estériles
Productos Calidad de Agua Requerida
Parenterales Agua para Inyectables
Oftálmicos Agua Purficada
Soluciones de Hemofiltración Agua para Inyectables
Soluciones de Hemodiafiltración Agua para Inyectables
Soluciones de Irrigación Agua para Inyectables
Soluciones para Diálisis Peritoneal Agua para Inyectables
Soluciones para Nebulizar Agua Purificada
Preparaciones Óticas y Nasales Agua Purificada
Preparaciones de uso dérmico Agua Purificada
1
siendo éstos adquiridos a través de proveedores
debidamente habilitados por la autoridad sanitaria.
El Farmacéutico debe además cooperar en la de-
tección y denuncia de medicamentos ilegítimos y de
medicamentos con problemas de calidad o efectivi-
dad.
Custodia, almacenamiento y conservación: el
Farmacéutico asegurará que las condiciones de
almacenamiento y conservación sean las adecuadas
en cada caso e instrumentará los mecanismos para
detectar las fechas de vencimiento previas a la dis-
pensación. Asimismo el Farmacéutico tendrá bajo
su custodia todos los productos acorde a las norma-
tivas vigentes.
Descarte, devolución, destrucción: el Farmacéu-
tico evitará la adquisición y dispensación de medi-
camentos y productos para la salud que presenten
modificaciones no indicadas expresamente en sus
rótulos y/ o prospectos. Se considera que la detec-
ción de cambios en el aspecto físico de los medica-
mentos o sus envases podría ser evidencia de una
posible inestabilidad o alteración en su composi-
ción, por lo que se debe observar:
cambios en caracteres físicos como modi-
ficaciones de color u olor, coberturas deterioradas,
cápsulas rotas, aparición de precipitados, separación
de emulsiones, polvos que no se reconstituyen ade-
cuadamente, entre otros;
modificaciones en el envase primario co-
mo pérdida del contenido del envase, deterioro de
su aspecto, adulteraciones de fecha de vencimiento,
lote, partida o rótulos.
modificaciones en el envase secundario,
como toda evidencia que permita suponer una mala
conservación, fallas de impresión, adulteraciones de
fecha de vencimiento, lote o partida, ó rótulos.
Comprobadas estas irregularidades, el Farmac-
éutico deberá abstenerse de dispensar estos medi-
camentos y notificar a la autoridad sanitaria compe-
tente sobre las anormalidades observadas o sospe-
chadas.
Deberá cumplir con los retiros del mercado in-
dicados por la autoridad sanitaria pertinentes e
instrumentará los mecanismos necesarios para la
devolución de los medicamentos, materias primas y
productos sanitarios, así como la eliminación de los
residuos peligrosos, acorde a la legislación vigente.
Preparación de medicamentos magistrales y
oficinales: el Farmacéutico es responsable de la
preparación de medicamentos magistrales y oficina-
les, dando cumplimiento a las Normas de Buenas
Prácticas de Preparación de Farmacopea Argentina.
2
1015. BUENAS PRÁCTICAS DE ALMACENAMIENTO,
DISTRIBUCIÓN Y TRANSPORTE
El presente documento tiene por objetivo limpieza, sin desprendimiento de polvo y poseer
proveer una guía general referente al protecciones para evitar el ingreso de insectos, aves y
almacenamiento, distribución y transporte de roedores.
productos farmacéuticos. En él se describen los La limpieza de los locales debe ser guiada por
procedimientos a seguir de modo de resguardar la Procedimientos Operativos Normatizados, los cuales
integridad, calidad y eficacia de los productos indiquen la frecuencia y métodos de limpieza.
farmacéuticos en todas las etapas de distribución. También debe contarse con un programa escrito en
cuanto al control de plagas, teniendo en cuenta que
ORGANIZACIÓN, PERSONAL,
los agentes empleados sean seguros y no impliquen
DOCUMENTACIÓN
riesgo de contaminación para los productos
Los establecimientos deben contar con un farmacéuticos almacenados. Deben poseerse
organigrama de las personas involucradas en el Procedimientos Operativos Normatizados para actuar
manejo de medicamentos, donde se especifique en casos de roturas o derrames, que contemplen la
las funciones y responsabilidades de cada una de adecuada protección de las personas involucradas y la
ellas. Todo el personal relacionado con las completa remoción de cualquier riesgo de
presentes actividades debe ser calificado y recibir contaminación. Todas estas operaciones deben ser
entrenamiento continuo en cuanto a las Buenas convenientemente registradas.
Prácticas de almacenamiento, distribución y Los productos deben estibarse evitando el
transporte de productos farmacéuticos. contacto directo con el piso y la incidencia de la luz
Deben definirse mediante Procedimientos solar directa. Las áreas de almacenamiento deben
Operativos Normatizados todas las tareas que poseer capacidad suficiente para permitir la estiba
directa o indirectamente puedan afectar la calidad ordenada y racional de varias categorías de
de los productos o la actividad de distribución. productos. Debe contarse con áreas segregadas y
Estos procedimientos deben ser aprobados, claramente identificadas para la estiba de productos
fechados y firmados por las personas autorizadas. rechazados, devueltos, vencidos y retiros del
1- BUENAS PRÁCTICAS DE mercado.
ALMACENAMIENTO Los productos que presenten especial riesgo de
explosión o incendio (aerosoles, líquidos
Las Buenas Prácticas de Almacenamiento son combustibles, etc) deben estibarse en áreas exclusivas
aplicables en todas las circunstancias donde se sujetas a medidas apropiadas de seguridad.
almacenen productos farmacéuticos a lo largo de Los psicotrópicos y estupefacientes deben
la cadena de abastecimiento: desde su elaboración almacenarse de acuerdo a lo establecido en la
hasta la dispensación al público. normativa vigente.
En Consideraciones Generales, el apartado Los equipos frigoríficos deben tener capacidad
Condiciones de Almacenamiento proporciona las suficiente para permitir la circulación de frío entre los
definiciones referentes a las temperaturas de diversos embalajes, contar con un sistema de alarma
almacenamiento. confiable que indique rápidamente cualquier tipo de
Monitoreo de las condiciones de anomalía en su funcionamiento y en lo posible poseer
almacenamiento. Las mediciones de temperatura una red alternativa de energía.
deben ser efectuadas y registradas de manera
constante y segura con equipos debidamente 2- BUENAS PRÁCTICAS DE DISTRIBUCIÓN Y
calibrados. TRANSPORTE
Tipo de
fabricación Etapas de aplicación (señaladas en gris) de esta guía
elaboración
Producción del Introducción del material
Elaboración Producción de Aislación y Procesamiento físico y
material de de partida del IFA en el
química intermediario (s) purificación envasado
partida del IFA proceso
Introducción del
Recolección de
IFA de origen Corte, mezcla y/o material de Aislación y Procesamiento físico y
órganos, fluidos
animal procesamiento inicial partida del IFA purificación envasado
y tejidos
en el proceso
Introducción del
IFA de origen Recolección de la material de Aislación y Procesamiento físico y
Corte y extracción inicial
vegetal planta partida del IFA purificación envasado
en el proceso
17.12 - Los agentes, corredores, comerciantes, 18.3 - El término “fermentaciones clásicas” se refiere
distribuidores, y reacondicionadores deberán llevar a procesos que utilizan microorganismos tal como existen
registros de los reclamos y Retiro del mercado según se en la naturaleza y/o modificados por métodos
especifica en la sección 15. convencionales (por ejemplo, irradiación o mutagénesis
dirigida) para producir IFAs. Estos IFAs normalmente
17.13 - Si la situación lo justifica, los agentes, son de bajo peso molecular como antibióticos,
corredores, comerciantes, distribuidores, y re- aminoácidos, vitaminas y carbohidratos.
acondicionadores deberán evaluar el reclamo a fin de
determinar alguna posible acción a iniciar ya sea hacia 18.4 - La producción de IFAs o intermediarios a partir
otros clientes que pudieran haber recibido el mismo IFAs, de cultivos celulares o fermentación involucra procesos
o hacia las autoridades regulatorias, o ambos. La biológicos tal como el cultivo de las células y la
investigación sobre la causa del reclamo será llevada a extracción o la purificación de material a partir de los
cabo y documentada por la parte que corresponda. organismos vivos. Nótese que puede ser que involucre
otros pasos adicionales que forman parte del proceso de
17.14 Cuando se transfiere un reclamo al elaborador elaboración, como modificaciones fisicoquímicas. Los
original, el registro que llevan los agentes, corredores, materiales de partida usados (medios de cultivo, buffers)
comerciantes, distribuidores, y re-acondicionadores pueden ser una fuente potencial de contaminantes
deberá incluir la respuesta recibida por parte el biológicos. Dependiendo de la fuente, del método de
elaborador, así como la fecha y la información provista. preparación y del uso que se le dará al IFAs o
Manejo de las Devoluciones intermediario, puede ser necesario realizar controles de
carga biológica, contaminación viral y/o endotoxinas
17.15 - Las devoluciones deberán manejarse como se durante la elaboración, y monitorear el proceso en las
detalla en la sección 14 “Devoluciones”. Los agentes, etapas apropiadas.
corredores, comerciantes, distribuidores, y re-
acondicionadores deberán llevar registro documentado de 18.5 - Deberán establecerse controles adecuados en
las devoluciones de IFAs e intermediarios. todas las etapas de elaboración a fin de asegurar la calidad
del IFAs o intermediario. Mientras que esta guía se aplica
18.- GUÍA ESPECÍFICA PARA IFAS al proceso a partir del paso de cultivo o fermentación, los
FABRICADAS POR CULTIVO/FERMENTACIÓN pasos previos (como el desarrollo del banco celular)
CELULAR deberán llevarse a cabo bajo los apropiados controles del
Introducción proceso. Esta guía tendrá aplicación a partir del momento
en que un vial de células es retirado del banco celular para
18.1 - Esta sección apunta a los controles específicos a
ser usado en elaboración.
realizarse sobre IFAs o intermediarios elaborados por
cultivo celular o fermentación, utilizando organismos 18.6 - Deberán realizarse controles ambientales y del
naturales o recombinantes, lo cual no ha sido equipamiento a fin de minimizar todo riesgo de
adecuadamente cubierto en secciones anteriores. No contaminación. El criterio de aceptación para la calidad
pretende ser tomada como una sección aislada, en general del medio ambiente y la frecuencia de su monitoreo
las normas BPF de las secciones previas son aplicables en dependerá de la etapa de producción y de las condiciones
en que se lleva a cabo (Sistema cerrado, abierto o u otro ambiente controlado similar.
contenido). 18.16 - El personal deberá estar vestido
18.7 - En general, los controles del proceso deben adecuadamente, y tomará precauciones especiales en el
tener en cuenta: manipuleo de los cultivos.
Mantenimiento del Banco de Células de 18.17 - Se deberán monitorear los parámetros
trabajo (cuando corresponda). operativos críticos (temperatura, pH, velocidad de
Inoculación y expansión adecuadas del agitación, adición de gases, presión) a fin de asegurar la
cultivo. consistencia con el proceso establecido. Otros parámetros
Control de los parámetros operativos críticos a monitorear cuando correspondan serán: crecimiento
durante el cultivo o la fermentación. celular, viabilidad y productividad. Los parámetros
Monitoreo del proceso en relación con el críticos podrán variar de un proceso a otro, y para la
crecimiento celular, la viabilidad y la fermentación clásica ciertos parámetros pueden no
productividad, cuando estos correspondan. necesitar monitoreo (como viabilidad celular).
Implementar procedimientos de extracción y
18.18 - El equipamiento para cultivo celular deberá
purificación que remuevan células, desechos ser limpiado y esterilizado después de cada uso. El
celulares y componentes del medio, a fin de equipamiento para fermentación, cuando sea apropiado
proteger el IFAs de alteraciones de la calidad
deberá ser limpiado y sanitizado o esterilizado.
y de toda contaminación, principalmente
microbiológica. 18.19 - Cuando sea apropiado, el medio de cultivo
Monitoreo de la carga biológica y, cuando sea deberá ser esterilizado antes de ser usado, a fin de
necesario, de niveles de endotoxinas, en las proteger la calidad del IFAs.
etapas apropiadas de producción. 18.20 - Deberán existir procedimientos adecuados a
La seguridad viral aplicable es la descripta en fin de detectar contaminaciones, y establcer las acciones a
la ICH Guideline Q5A (Calidad de Productos tomar en dicho caso. Deberá incluir procedimientos para
Biotecnológicos) determinar el impacto de la contaminación sobre el
18.8 - Cuando sea apropiado, deberá demostrarse la producto, y para descontaminar el equipo y retornar a las
remoción de componentes del medio, proteínas de la condiciones de uso para lotes sucesivos. Los
célula huésped, impurezas relacionadas con el proceso o microorganismos extraños detectados durante la
con el producto, y otros contaminantes. fermentación deberán ser identificados , y evaluado su
efecto sobre la calidad del producto. El resultado de esta
Mantenimiento del Banco Celular y Registros evaluación se tendrá en consideración para decidir el
18.9 - El acceso al banco celular deberá limitarse a destino del producto elaborado.
personal autorizado. 18.21 - Deberán llevarse registros de los eventos de
18.10 - El banco celular deberá mantenerse bajo contaminación.
condiciones de almacenamiento designadas para mantener
18.22 - Los equipamientos multiproductos (que se
la viabilidad y evitar la contaminación.
utilizan en varias elaboraciones distintas) deberán sufrir
18.11 - Deben llevarse registros del uso de los viales evaluaciones adicionales tras la limpieza realizada para
del banco celular y de las condiciones de cambiar de producto, a fin de minimizar el riesgo de
almacenamiento. contaminación cruzada.
18.12 - Cuando corresponda, el banco celular deberá Extracción, Aislamiento y Purificación
ser periódicamente monitoreado a fin de determinar su
18.23 - Los pasos de extracción, ya sean para la
aptitud para su uso.
remoción de células o componentes celulares, como para
18.13 - Para una más completa discusión acerca del la recolección de componentes celulares tras la disrupción
banco celular ver la ICH Guideline Q5A (Calidad de celular, debe llevarse a cabo en equipos y áreas
Productos Biotecnológicos). designadas a fin de minimizar el riesgo de contaminación.
Cultivo Celular y Fermentación 18.24 - Los procedimientos de extracción y
18.14 - uando sea necesaria la adición aséptica de purificación que remueven o inactivan el microorganismo
productor, o desechos celulares, o componentes del medio
sustratos celulares, medio de cultivo, buffers o gases,
de cultivo deben ser adecuados de forma de asegurar el
deberá usarse de ser posible un Sistema contenido o
mantenimiento de la calidad del IFAs o intermediario
cerrado. Si la inoculación inicial o transferencias o
elaborado.
adiciones posteriores se realizan en recipientes abiertos,
deberán existir procedimientos y controles a fin de 18.25 - Todos los equipamientos deberán ser
minimizar el riesgo de contaminación. adecuadamente limpiados y sanitizados después de su
uso. Sin embargo podrán elaborarse varios lotes sucesivos
18.15 - Cuando la calidad del IFAs puede afectarse
sin limpiar entre ellos si se demuestra que esto no
por contaminación microbiana, la manipulación con
recipientes abiertos deberá realizarse en un flujo laminar compromete la calidad del IFAs.
18.26 - Si se están utilizando Sistemas abiertos, la 19.5 - Alguna de las funciones de testeo comúnmente
purificación deberá realizarse bajo condiciones llevadas a cabo por la o las unidades de calidad puede ser
ambientales apropiadas a fin de preservar la calidad del realizada dentro de otras unidades organizacionales.
producto.
19.6 - Las mediciones de calidad deberían incluir un
18.27 - Si se utilizan equipamientos multiproductos sistema para el control de materias primas, materiales de
puede ser necesario implementar controles adicionales. envasado, intermediarios, e IFAs.
Etapas de Remoción o Inactivación Viral 19.7 - Todos los problemas de procesamiento y
calidad deberán ser evaluados.
18.28 - Para mayor información ver la ICH Guideline
Q5A (Calidad de Productos Biotecnológicos). 19.8 - El etiquetado de IFAs destinados al uso en
ensayos clínicos deberá ser adecuadamente controlado y
18.29 - Las etapas de remoción o inactivación viral
se deberá identificar el material como destinado a uso en
son pasos críticos en algunos procesos y deben llevarse a
investigación
cabo dentro de sus parámetros validados.
18.30 - Deberán tomarse las precauciones pertinentes Equipamiento e Instalaciones
para prevenir la contaminación viral desde los pasos 19.9 - Durante todas las fases del desarrollo clínico,
previos a la remoción/inactivación hacia los pasos incluyendo el uso de instalaciones de pequeña escala o
posteriores. Por ese motivo, los procesos en Sistemas laboratorios para fabricar lotes de IFAs para utilizar en
abiertos deberán realizarse en áreas separadas y tener ensayos clínicos, los procedimientos deberán realizarse
diferentes unidades de ventilación o acondicionamiento asegurando que el equipo se encuentra calibrado, limpio y
del aire. es adecuado para el uso propuesto.
18.31 - No es común que se utilice el mismo equipo 19.10 - Los procedimientos para el uso de
en diferentes pasos de la purificación, sin embargo si esto instalaciones deberán asegurar que los materiales son
ocurriera, dicho equipo deberá ser adecuadamente manipulados de forma que minimice el riesgo de
limpiado y sanitizado antes de su reutilización. Deberán contaminación y de contaminación cruzada.
tomarse las precauciones apropiadas para prevenir
Control de Materiales de Partida
potenciales transferencias de virus desde pasos previos.
19.11 - Los materiales de partida utilizados en la
19. IFAs PARA USO EN ENSAYOS CLINICOS producción de IFAs para uso en ensayos clínicos deberán
Generalidades ser evaluados, o ya recibidos con certificados de análisis
del proveedor y sujetos a ensayos de identidad. Cuando
19.1 - No todos los controles de las secciones previas
un material es considerado riesgoso, el análisis del
de esta guía son adecuados para la fabricación de un
proveedor debería ser suficiente.
nuevo IFA que se usará en investigación durante su
desarrollo. 19.12 - En algunas instancias, la aptitud de la materia
prima puede ser determinada antes de su uso, basándose
19.2 - Los controles usados en la fabricación de IFAs
en la aceptabilidad de las mismas mediante reacciones en
para usar en ensayos clínicos deberán ser consistentes
pequeña escala (ej testeo de uso) más que sobre controles
con la etapa de desarrollo del producto droga que
analíticos exclusivamente.
incorporará al IFA. Los procedimientos de proceso y
testeo deberán ser flexibles para facilitar cambios a Producción
medida que aumenta el conocimiento del proceso y del
19.13 - La producción de IFAs para uso en ensayos
testeo clínico de un producto droga progresando desde las
clínicos deberá ser documentada en los libros de
etapas pre-clínicas hasta las etapas clínicas. Cuando el
laboratorio, registros de lotes, o por otro medio apropiado.
desarrollo de la droga alcanza la etapa en la que el IFA es Estos documentos deberán incluir información sobre el
producido para usarlo en productos drogas destinado a uso de los materiales de producción, equipamiento,
ensayos clínicos, los fabricantes deberán asegurar que los
proceso, y observaciones científicas.
IFAs son fabricados en instalaciones aptas, utilizando
procedimientos apropiados de producción y de control 19.14 - Los rendimientos esperados pueden ser más
para asegurar la calidad del IFA. variables y menos definidos que los rendimientos
esperados utilizados en los procesos comerciales. No se
Calidad prevén investigaciones sobre las variaciones de
19.3 - Se deberán aplicar conceptos apropiados de rendimiento.
BPF en la fabricación de IFAs para uso en ensayos
Validación
clínicos con un mecanismo adecuado de aprobación para
cada lote. 19.15 - Un proceso de validación para la producción
de IFAs a ser utilizados en ensayos clínicos es
19.4 - Una unidad de calidad independiente de la normalmente inapropiado cuando se produce un solo lote
producción deberá establecerse para la aprobación o de IFAs o cuando el cambio del proceso durante el
rechazo de cada lote de IFAs para usar en los ensayos
desarrollo del IFAs hace difícil o inexacta la replicación
clínicos
de un lote. La combinación de controles, calibración, y
donde sea apropiado, un equipo calificado, aseguran la Auxiliares de proceso - Materiales, excluyendo
calidad del IFAs durante esta fase del desarrollo solventes, utilizados como ayuda en la fabricación de un
intermediario o IFA, que no participan en si mismos en
19.16 - Los procesos de validación deberán ser
una reacción química o biológica (ej. ayuda de filtrado,
conducidos de acuerdo con la Sección 12 como cuando
carbón activado, etc.)
los lotes son producidos para uso comercial, aun cuando
tales lotes sean producidos en pequeña escala o escala Calibración - La demostración que produce un
piloto. instrumento o dispositivo particular, dentro de limites
específicos, por comparación con aquellos producidos por
Cambios
un Estándar de Referencia o sustancia detectable, a través
19.17 - Son previsibles los cambios durante el de un rango apropiado de mediciones
desarrollo, en la medida en que se gana conocimiento y la
Calificación o aptitud - Acción de probar y
escala de producción aumenta. Cada cambio en la
documentar que los equipos y sistemas auxiliares están
producción, especificaciones o procedimientos de ensayo
instalados adecuadamente, trabajan correctamente, y
deberá ser registrado adecuadamente.
efectivamente conducen a los resultados esperados. La
Controles de Laboratorio calificación o aptitud es parte de la validación, pero las
19.18 - En tanto los métodos analíticos destinados a etapas individuales de aptitud por si solas no constituyen
evaluar un lote de IFA para ensayos clínicos no puedan un proceso de validación.
aun ser validados, deberán ser científicamente aptos. Carga biológica - El nivel y tipo (sea objetable o no)
19.19 - Debe establecerse un sistema para guardar de microorganismos que pueden estar presentes en las
muestras de retención de todos los lotes. Este sistema materias primas, materiales de partida IFAs,
debe asegurar que una cantidad suficiente de cada intermediarios o IFAs. La carga biológica puede no ser
muestra de retención queda durante un período de tiempo considerada contaminación a menos que los niveles hayan
apropiado después de la aprobación, terminación o excedido o se hayan detectado organismos objetables
discontinuación de un producto. definidos.
19.20 - La fecha de vencimiento y re-evaluación tal Contaminación - La introducción indeseada de
como se define en la sección “Fechas de re-evaluación y impurezas de naturaleza química o microbiológica, o de
vencimiento” es pertinente para los IFAs ya existentes una sustancia extraña, dentro de un material de partida,
utilizados en ensayos clínicos. Para IFAs nuevos, la intermediario, o IFAs durante la producción, muestreo,
Sección “Fechas de re-evaluación y vencimiento” embalaje o re embalaje, almacenamiento o transporte
normalmente no se aplicará en las etapas iniciales de los Contaminación cruzada - Contaminación de un
ensayos clínicos. material o producto con otro material o producto
Documentación Control de calidad (QC) - Evaluar o testear que se
19.21 - Debe ponerse en práctica un sistema para cumplan las especificaciones
asegurar que se documenta y está disponible la Control del proceso - Chequeos realizados durante la
información obtenida durante el desarrollo y la producción, a fin de monitorear y, en caso de necesitarlo,
fabricación de los IFAs a utilizar en ensayos clínicos. ajustar el proceso y/o asegurar que el intermediario o
19.22 - Se debe documentar apropiadamente el IFAs concuerda con las especificaciones.
desarrollo e implementación de los métodos analíticos Criterio de aceptación - Limites numéricos, rangos u
utilizados para respaldar la liberación de un lote de IFA otras medidas adecuadas para la aceptación de los
para ser utilizado en ensayos clínicos. resultados de testeo.
19.23 - Deberá utilizarse un sistema para resguardar Crítico - Describe un paso del proceso, la condición
los registros de producción y control y la documentación. del proceso, los requerimientos de testeo u otro parámetro
El sistema deberá asegurar que se resguarden los registros relevante o punto que debe ser controlado, dentro de un
y documentos durante un tiempo suficientemente largo criterio predeterminado, para asegurar que el IFAs
después de la aprobación, terminación o discontinuidad cumple con la especificación.
de un producto.
Cuarentena - Estado de materiales aislados
GLOSARIO físicamente o por otros medios efectivos, con decisión
IFA (Ingrediente farmacéutico activo) - Droga activa pendiente acerca de su aprobación o rechazo subsiguiente.
- Cualquier sustancia o mezcla de sustancias destinada a Departamento de calidad - Una unidad
ser usada en la fabricación de un producto medicinal y organizacional independiente de la producción, que
que, cuando es utilizada en la producción de una droga, se cumple las responsabilidades de la Garantía de calidad y
transforma en ingrediente activo del producto elaborado. del Control de calidad. Puede darse en forma separada en
Tales sustancias están destinadas a proveer actividad unidades de QA y de QC o reunidos en un solo individuo
farmacológica u otro efecto directo en el diagnóstico, o grupo, dependiendo del tamaño y la estructura de la
cura, alivio, tratamiento, o prevención de enfermedades o organización.
para influenciar sobre la estructura y función del cuerpo.
Desvío - Alejamiento de una instrucción aprobada o etapas del proceso de un IFAs que experimenta cambios
Estándar establecido. moleculares adicionales antes de que se transforme en
IFA. Los intermediarios pueden o no estar aislados
Elaboración - Todas las operaciones de recepción de
(Nota: esta guía sólo se refiere a aquellos intermediarios
materiales, producción, envasado, reenvasado, rotulado,
producidos después del punto en que la Compañía ha
re-rotulado, control de calidad, despacho, almacenaje y
definido como punto en el que comienza la producción
distribución de los IFAs y sus controles asociados.
del IFAs)
Elaborador contratado - Un elaborador que realiza
Líquidos madre - El líquido residual que resta luego
algún aspecto de la fabricación para el elaborador original
de los procesos de cristalización o aislamiento. Un
Especificación - Una lista de pruebas referidas a los líquido madre puede contener materiales no reactivos,
procedimientos analíticos, y de criterios adecuados de intermediarios, niveles del IFA y/o impurezas. Puede ser
aceptación que son límites numéricos, rangos, u otro utilizado para un proceso adicional.
criterio para el test que se describe. Establece un
Lote - Una cantidad específica de material producido
conjunto de criterios con los cuales el material debe
en un proceso o serie de procesos de forma que se espera
cumplir para ser considerado aceptable para su uso
propuesto. que sea homogéneo dentro de límites especificados. En el
“Conforme a la especificación” significa que el caso de producción continua, un lote puede corresponder
a una fracción definida de la producción. El tamaño del
material, al ser testeado de acuerdo con los
lote puede ser definido ya sea por una cantidad fija o por
procedimientos analíticos listados, concuerda con los
la suma producida en un intervalo fijo de tiempo.
criterios establecidos de aceptación.
Estándar de referencia primario - Sustancia que ha Material - Término general utilizado para denotar
materiales de partida (materiales iniciales, reactivos,
sido probada como material auténtico por un extenso
solventes) auxiliares del proceso, intermediarios, IFAs y
juego de ensayos analíticos, siendo en consecuencia de
materiales de embalaje y etiquetado
alta pureza.
Este Estándar puede ser: 1) obtenido de una fuente Material de embalaje - Todo material destinado a
oficialmente reconocida, 2) preparado por síntesis proteger un intermediario o IFAs durante el almacenaje o
independiente, 3) obtenido de material de producción de transporte.
alta calidad, existente, o 4) preparado por purificación
Material de inicio IFA - Una materia prima,
adicional de material de producción existente. intermedia o un IFAs que es utilizada en la producción de
Estándar de referencia secundario - Sustancia de otro IFAs y que es incorporada como fragmento
calidad y pureza establecidas, demostradas por estructural significativo dentro de la estructura del IFAs.
comparación de un Estándar de referencia primario, Un material de inicio IFAs puede ser un artículo
utilizada como Estándar de referencia para análisis de comercial, un material comprado a uno o más
laboratorio de rutina. proveedores bajo contrato o acuerdo marcial, o producido
domésticamente. Los materiales de inicio IFAs son
Fecha de vencimiento - La fecha colocada en el
definidos normalmente por sus propiedades y estructura
contenedor/etiqueta de un IFA, designando el tiempo
química.
durante el cual el IFAs es supuesto que el producto
permanecerá dentro de las especificaciones de su vida Materia prima - Término general utilizado para
útil, si es almacenado en las condiciones requeridas, y denotar materiales de inicio, reactivos y solventes
después de la cual no debería ser usada. destinados a ser utilizados en la producción de
intermediarios o de IFAs.
Fecha de re-evaluación - La fecha en la que el
material debería ser reexaminado para asegurar que Número de Lote - Una combinación única de
permanece apto para su uso. números, letras, y/o símbolos que identifica un lote y por
el cual puede ser determinado el historial de la producción
Firma (firmado) - Ver definición posterior de firmado
y distribución.
Firmado - El registro del individuo que llevó a cabo
Perfil de impureza - Una descripción de las
una acción particular o revisión. Este registro puede ser
impurezas identificadas y no identificadas, presentes en el
con iniciales, firma completa a mano, sello personal, o
IFAs .
firma electrónica asegurada y autenticada.
Garantía de calidad (QA) - La suma total de las Procedimiento - Descripción documentada de las
operaciones a desarrollar, las precauciones que se deben
disposiciones organizadas hechas con el objeto de
tomar y las medidas a aplicar directa o indirectamente,
asegurar que todos los IFAs son de la calidad requerida
relacionadas con la manufactura de un intermediario o
para el uso que están destinados y que los sistemas de
IFAs
calidad son constantes y mantenidos.
Producción - Todas las operaciones involucradas en
Impureza - Todo componente presente en el
la preparación de un IFAs desde la recepción de los
intermediario o IFA, que no sea la entidad deseada.
materiales a lo largo de todo el proceso y hasta el
Intermediario - El material producido durante las acondicionamiento.
Producto droga (medicinal) - La fórmula de
dosificación ya en el envase final inmediato, destinado al
mercado (referencia Q1A)
Protocolo de validación - Un plan escrito
mencionando como debe ser conducida la validación y
que define el criterio de aceptación.
Por ejemplo, el protocolo para un proceso de
manufactura identifica el equipo de procesamiento, los
rangos críticos de parámetros de proceso y de operación,
características del producto, muestras, datos del test que
deben recogerse, numero de corridas de validación, y
resultados aceptables del testeo.
Re-elaboración - Someter a un intermediario o IFA
que no conforma los Estándares o especificaciones a uno
o mas pasos del proceso, difiriendo del proceso de
manufactura establecido, para obtener un intermediario o
IFAs de calidad aceptable (ej recristalización con
diferente solvente).
Rendimiento esperado - La cantidad de material o el
porcentaje de rendimiento teóricamente esperado, en una
fase apropiada de producción basado en escalas piloto de
laboratorio previas, o en datos de fabricación.
Rendimiento teórico - La cantidad que debería ser
producida en una fase apropiada de producción, basada en
la cantidad de material utilizado, y en la ausencia de toda
pérdida o error en la producción actual
Reprocesamiento - Introducción de un intermediario
o IFAs, incluso uno que no conforme los Estándares o
especificaciones, nuevamente en el proceso y repitiendo
un paso de cristalización u otro paso de manipulación
química o física (ej: destilación, filtración, cromatografía,
molienda) que sean parte del proceso establecido de
manufactura.
A la continuación de un paso del proceso después de
que el testeo de control del proceso haya demostrado que
la etapa está incompleta, se la considerará parte de un
proceso normal, y no un Reprocesamiento.
Sistema informático - Un grupo de componentes de
hardware y su software asociado, diseñados y organizados
para cumplir una función específica o grupo de funciones.
Solvente - Líquido orgánico o inorgánico utilizado
como vehículo para la preparación de soluciones o
suspensiones en la manufactura de un intermediario o IFA
Sustancia droga - Ver IFAs(o sustancia droga).
Validación - Programa documentado que suministra
un alto grado de seguridad de que un proceso específico,
método, o sistema producirán consistentemente un
resultado que conformará con un criterio predeterminado
de aceptación.
ANEXO 1 instalación está completa con su equipo de
producción instalado y en funcionamiento pero sin
ELABORACIÓN DE MEDICAMENTOS
que esté presente el personal. La situación “en
ESTÉRILES
operación” es aquella en que la instalación está
PRINCIPIO - La elaboración de medicamentos funcionando de la forma definida de trabajo con el
estériles está sujeta a requisitos especiales para número especificado de personal en actividad.
minimizar los riesgos de contaminación microbiana, Las situaciones “en operación” y “en reposo”
de partículas y de piretógenos. Depende en gran deben definirse para cada área limpia o zona de
parte de la habilidad, formación y actitud del áreas limpias.
personal implicado. La garantía de calidad reviste Para la elaboración de medicamentos estériles
una importancia especial y esta elaboración debe pueden distinguirse 4 grados de zonas limpias:
seguir estrictamente métodos de preparación y
procedimientos establecidos y validados Grado A - La zona específica de
cuidadosamente. La esterilidad u otros aspectos de operaciones de alto riesgo como por ejemplo,
zona de llenado, bandejas de tapones, ampollas
la calidad no debe depender únicamente de un
y viales abiertos y realización de conexiones
proceso final o de los ensayos sobre producto
asépticas. Estas condiciones se consiguen
terminado.
normalmente en cabina de flujo laminar. Los
NOTA: esta normativa no establece métodos sistemas de flujo laminar deben proporcionar
detallados para la determinación de limpieza una velocidad homogénea del aire en un
microbiológica y de partículas del aire, superficies, intervalo de 0.36 – 0.54 m/s (valor orientativo)
entre otras. Con esta finalidad deben consultarse en el punto de trabajo de estas operaciones.
otros documentos como ser las normas ISO. El mantenimiento de la laminaridad debe ser
Consideraciones generales demostrado y validado.
Se puede utilizar un flujo de aire
1 - La elaboración de medicamentos estériles unidireccional y velocidades más bajas en
debe realizarse en áreas limpias en las que se aisladores cerrados y cajas de guantes.
acceda a través de esclusas independientes para el
personal y/o para equipos y materiales. Las zonas Grado B - Este es el entorno de la estación
limpias deberán mantenerse con un grado adecuado de trabajo grado A, para la preparación y
de limpieza y estarán dotadas de aire que haya llenado aséptico.
pasado a través de filtros de eficacia apropiada. Grado C y D - áreas limpias para llevar a
2 - Las diversas operaciones de preparación de cabo las etapas menos críticas de la elaboración
los materiales y accesorios, preparación del de productos estériles.
producto y llenado deberán realizarse en zonas Clasificación de áreas limpias y dispositivos
separadas dentro de la zona limpia. Las operaciones de aire limpio
de fabricación se clasifican en dos categorías: en
4 - Las áreas limpias y los dispositivos de aire
primer lugar, aquellas en que el producto se
limpio, deben clasificarse de acuerdo con ISO
esteriliza al final y, en segundo lugar, aquellas que
14.644-1. La clasificación debe diferenciarse
se realizan asépticamente en todas o algunas de sus
claramente del proceso de monitoreo ambiental
etapas.
operacional. La máxima concentración de partículas
3 - Las áreas limpias para la fabricación de ambientales permitidas para cada grado se muestra
medicamentos estériles se clasifican según las en la siguiente tabla:
características requeridas del ambiente. Cada
operación de elaboración exige un adecuado grado
de limpieza del entorno en operación para
minimizar los riesgos de contaminación microbiana
o de partículas en el producto o los materiales que
se estén manipulando.
A - fin de cumplir las condiciones “en
operación”, estas áreas zonas deben diseñarse de
forma que alcancen ciertos niveles especificados de
limpieza del aire en situación de “en reposo”. La
situación “en reposo” es aquella en que la
Número máximo permitido de partículas/m3, igual o superior al tamaño tabulado
En reposo En operación
Grado
0,5 µm 5,0 µm 0,5 µm 5,0 µm
A 3.520 20 3.520 20
B 3.520 29 352.000 2.900
C 352.000 2.900 3.520.000 29.000
D 3.520.000 29.000 No definido No definido
Notas: (a) Estos son valores promedio. aire dentro y fuera del aislador (entorno), la
(b)
Pueden exponerse placas de sanitización del aislador, el proceso de transferencia
exposición individuales por menos de 4 horas. y la integridad del aislador.
20. - Se deben establecer límites de alerta y 25 - Debe realizarse un monitoreo rutinario y se
acción apropiados para los resultados del monitoreo deben incluir ensayos de fuga del aislador y del
de partículas y microbiológico. Los procedimientos sistema guante/manga.
operativos deben indicar la acción correctiva si se
Tecnología de soplado/llenado/sellado
exceden estos límites.
26 - Las unidades de soplado/llenado/sellado
Tecnología de aislador son máquinas diseñadas específicamente, para que
21 - La utilización de la tecnología del aislador en una operación continua, se formen los envases a
para minimizar las intervenciones humanas en las partir de un granulado termoplástico, se llenan y se
áreas de procesamiento, puede dar como resultado sellan todo en una sola máquina automática. El
una reducción significativa en el riesgo de equipo de soplado/llenado/sellado utilizado para la
contaminación microbiológica, procedente del producción aséptica, que esté provisto de un chorro
ambiente para los productos elaborados eficaz de aire de grado A, puede instalarse en un
asépticamente. Existen numerosos diseños posibles entorno al menos de grado C, siempre que se utilice
de aisladores y dispositivos de transferencia. El vestimenta de grado A/B.
aislador y el entorno deben diseñarse de manera que El entorno debe cumplir con los límites
posibiliten la calidad del aire requerida para las microbiológicos y de partículas no viables “en
respectivas zonas. Los aisladores se construyen de reposo” y sólo con el límite microbiológico “en
diferentes materiales más o menos propensos a las operación”. El equipo de soplado/llenado/sellado
pinchaduras y las fugas. Los diseños de los utilizado para la elaboración de productos con
dispositivos de transferencia pueden variar desde esterilización terminal, debe instalarse en un
una puerta simple o una puerta doble, a sistemas entorno de, al menos, grado D.
completamente sellados con mecanismos de
27 - Debido a esta tecnología, se debe prestar
esterilización incorporados.
especial atención a, los siguientes puntos:
22 - La transferencia de materiales dentro y diseño y calificación del
fuera de las unidades constituye una de las mayores equipamiento,
potenciales fuentes de contaminación. Por lo validación y reproducibilidad de
general, el área dentro del aislador es el lugar donde la limpieza in situ y la esterilización in
se hacen las manipulaciones de alto riesgo, aunque situ
es reconocido que puede no existir flujo de aire La clasificación del entorno de la
laminar en la zona de trabajo de estos equipos. sala limpia en la que se encuentra el
23 - La clasificación de aire requerida para el equipo
entorno depende del diseño del aislador y de su la capacitación y vestimenta del
aplicación. Debe controlarse y para el operador
procesamiento aséptico ser, al menos, grado D. intervenciones en la zona crítica
del equipo incluyendo cualquier
24 - Los aisladores deben utilizarse solamente
ensamblaje aséptico antes del comienzo
después de una validación adecuada. La validación
de la operación de llenado.
debe considerar todos los factores críticos de la
tecnología de aislador, por ejemplo, la calidad del
Productos esterilizados en forma terminal bandejas de transporte cerradas en un ambiente de
28 - La preparación de los materiales, accesorios grado B.
y de la mayoría de los productos debe hacerse al 35 - La preparación y llenado de pomadas,
menos en un entorno de grado D para que sea cremas, suspensiones y emulsiones estériles deben
adecuadamente bajo el riesgo de contaminación hacerse en una estación de trabajo grado A con
microbiana y de partículas, para la filtración y entorno de grado B, cuando el producto esté
esterilización. Cuando el producto tenga un riesgo expuesto y no se filtre posteriormente.
elevado o inusual de contaminación microbiana
Personal
(por ejemplo, porque el producto favorezca
activamente el crecimiento microbiano o deba pasar 36 - Sólo el mínimo número de personal
mucho tiempo antes de la esterilización o sea necesario debe encontrarse presente en las áreas
preciso elaborarlo necesariamente en recipientes no limpias: esto es particularmente importante durante
cerrados), la preparación debe realizarse en un los procesamientos asépticos. En la medida de lo
ambiente de grado C. posible, las inspecciones y los controles deben
realizarse fuera de las áreas limpias.
29 - El llenado de productos con esterilización
terminal debe realizarse en un ambiente al menos de 37 - Todo el personal empleado en estas zonas
grado C. (incluido el de limpieza y mantenimiento) debe
recibir formación regular en disciplinas relativas a
30 - El llenado debe hacerse en una estación de
la correcta elaboración de productos estériles. Esta
trabajo grado A con un entorno al menos de grado
formación debe hacer referencia a la higiene y a los
C, cuando para el producto exista un riesgo inusual elementos básicos de microbiología. Cuando sea
de contaminación ambiental, por ejemplo debido a necesario el acceso de personal externo que no haya
que la operación de llenado sea lenta o los
recibido dicha formación (por ejemplo, personal
recipientes tengan boca ancha o estén expuestos
contratado de construcción o mantenimiento), se le
necesariamente durante más de unos segundos antes
prestará especial atención a su formación y
de su cierre. La preparación y llenado de pomadas, supervisión.
cremas, suspensiones y emulsiones debe realizarse
generalmente en un ambiente de grado C antes de la 38 - El personal que haya intervenido en la
esterilización final. elaboración de materiales de tejidos animales o de
cultivos de microorganismos distintos de los
Preparación aséptica utilizados en el proceso de fabricación en curso, no
31 - Después de su lavado, los materiales de deberá penetrar en las zonas de producción estéril
envasado deben manipularse en un ambiente de al salvo que hayan seguido procedimientos de entrada
menos grado D. El manipuleo de materias primas y rigurosos y claramente definidos.
materiales estériles, a menos que se los someta a 39 - Es fundamental conseguir altos niveles de
esterilización o filtración a través de un filtro que higiene personal y limpieza. El personal de
retenga microorganismos, en una etapa posterior del
elaboración de productos estériles debe recibir
proceso, debe tener lugar en una estación de trabajo
instrucciones para que comunique cualquier
grado A con un entorno grado B.
situación que pueda causar la liberación de
32 - La preparación de soluciones que deban cantidades o tipos anormales de contaminantes; es
esterilizarse por filtración durante el proceso debe deseable realizar chequeos sanitarios periódicos
hacerse en un ambiente de grado C; si no se filtran, para detectar tales situaciones. Las medidas que
la preparación de materiales y productos debe deban tomarse respecto al personal que pueda
hacerse en una estación de trabajo grado A con un suponer un riesgo microbiológico indebido deberán
entorno grado B. ser decididas por una persona competente designada
a tal efecto.
33 - La manipulación y el llenado de productos
preparados asépticamente deben hacerse en una 40 - En las áreas limpias no se deben usar
estación de trabajo grado A con un entorno grado B. relojes de pulsera, maquillaje ni joyas.
34 - La transferencia de recipientes parcialmente 41 - El cambio y el lavado de ropa se deben
tapados, como los utilizados en la liofilización, ajustar a un procedimiento escrito para minimizar la
antes de completar su cerrado, debe hacerse en una contaminación de la vestimenta de la zona limpia o
zona de grado A con entorno de grado B o bien en la introducción de contaminantes en dicha zona.
42 - La vestimenta y su calidad deben ser puede aumentar el riesgo de liberación de
adecuadas al proceso y al grado de la zona de partículas.
trabajo. Se debe llevar de forma que proteja al
Locales
producto de la contaminación.
46 - En las zonas limpias, todas las superficies
43 - A continuación se describe la vestimenta
expuestas deben ser lisas, impermeables y sin
necesaria para cada grado: fisuras, con el fin de minimizar la liberación o
Grado D - Se debe cubrir el acumulación de partículas o microorganismos y
cabello y, de corresponder la barba. Se permitir la aplicación repetida de agentes de
debe usar un traje protector general y limpieza, y desinfectantes.
calzado o cubre calzado adecuados. Se 47 - No debe haber recovecos difíciles de
deben tomar medidas para evitar la entrada limpiar y debe haber un número mínimo de repisas,
en la zona limpia de contaminación estantes, armarios y equipo, para reducir la
procedente del exterior. acumulación de polvo y facilitar la limpieza. Las
Grado C - Se debe cubrir el puertas deben diseñarse cuidadosamente para evitar
cabello y, de corresponder, la barba y el los citados recovecos difíciles de limpiar, por esta
bigote. Se debe usar un traje entero o de razón no son recomendables las puertas corredizas.
dos piezas, ceñido en las muñecas y de
cuello alto, junto con calzado o cubre 48 - Los techos falsos deben quedar sellados
calzado adecuados. Esta ropa no debe para evitar la contaminación procedente del espacio
liberar prácticamente ninguna fibra ni situado por encima de los mismos.
partícula. 49 - Las tuberías y conductos, como así también
Grado A/B - El cabello y, de otros servicios, deben instalarse de manera que no
corresponder, la barba y el bigote se deben presenten huecos ni aperturas sin sellar, ni
cubrir con una escafandra que se superficies difíciles de limpiar.
introducirá en el cuello del traje; se debe
50 - No deben existir sumideros y desagües en
utilizar una máscara facial para evitar la
las áreas de grado A/B utilizadas en la producción
emisión de gotitas. Se deben utilizar
aséptica. En otras áreas, se deben colocar sifones
guantes apropiados esterilizados de goma
entre la máquina o el sumidero y los desagües. Los
o plástico, sin polvos de talco, y se debe
desagües del suelo de las salas de menor grado de
llevar calzado esterilizado o desinfectado.
limpieza deben estar provistos de trampas o tapas
La parte inferior de los pantalones se debe
herméticas para evitar el reflujo.
introducir en el calzado y las mangas en
los guantes. La vestimenta protectora no 51 - Los vestuarios estarán diseñados como
debe liberar prácticamente ninguna fibra ni esclusas y se utilizarán para proporcionar una
partícula y debe retener las partículas separación física de las diferentes fases de cambio
producidas por el cuerpo. de ropa, para minimizar así la contaminación
microbiana y por partículas de la vestimenta
44 - La vestimenta de exterior no se debe
protectora. Los vestuarios estarán barridos de forma
introducir en los vestuarios que llevan a las salas de
eficaz por aire filtrado. La fase final del vestuario
grado B y C. Cada trabajador de las áreas de grado
deberá tener, en situación de reposo, el mismo
A/B debe recibir su vestimenta protectora limpia y
grado que la zona a la que conduzca. A veces es
esterilizada, en cada sesión de trabajo. Los guantes
recomendable utilizar vestuarios separados para la
se deben desinfectar periódicamente durante las
entrada y la salida de las zonas limpias. En general,
operaciones. Las máscaras y los guantes se deben
sólo habrá lavabos en la primera fase de los
cambiar al menos en cada sesión de trabajo.
vestuarios.
45 - La vestimenta de las áreas limpias se debe
52 - Las puertas de una esclusa no se abrirán
lavar y tratar de forma que no acumule
simultáneamente. Se debe disponer de un sistema
contaminantes adicionales que pueda liberar
de cierre interbloqueado o de un sistema de alarma
posteriormente. Estas operaciones se deben ajustar
visual y/o auditiva, a fin de evitar la apertura de
a procedimientos escritos. Es recomendable
más de una puerta a la vez.
disponer de instalaciones de lavandería
independientes para esta vestimenta. El tratamiento 53 - La entrada de aire filtrado debe mantener
inadecuado de la vestimenta deteriora las fibras y una presión positiva y un flujo de aire respecto a las
zonas adyacentes de grado menor en todas las
condiciones de trabajo y debe barrer eficazmente la construir y mantener de forma que se asegure la
zona. Las salas adyacentes de diferentes grados producción confiable de agua de calidad apropiada.
deben tener un gradiente de presión de 10-15 Estas instalaciones no deben ser operadas por
pascales (valores orientativos). Debe prestarse encima de su capacidad de diseño. El agua para
especial atención a la protección de la zona de inyectables se debe producir, almacenar y distribuir
mayor riesgo, es decir, el entorno inmediato al que de manera que se evite el desarrollo microbiano,
están expuestos el producto y los materiales y como por ejemplo, mediante circulación constante
accesorios limpios que entren en contacto con el a una temperatura superior a los 70°C.
producto. Las diferentes consideraciones 60 - Todo el equipo, como esterilizadores,
relacionadas con la entrada de aire y los
sistemas de filtración y tratamiento de aire,
diferenciales de presión pueden necesitar ser
suministro de aire y filtros de gas, sistemas de
modificadas en el caso que sea necesario contener
tratamiento, generación, almacenamiento y
ciertos materiales, por ejemplo materiales o
distribución de agua, deben ser sometidos a un plan
productos patogénicos, altamente tóxicos, de mantenimiento y validación; se debe aprobar su
radioactivos o de virus o bacterias vivos. Para uso después de haberse realizado el mantenimiento.
algunas operaciones puede ser necesaria la
descontaminación de las instalaciones y el Sanitización
tratamiento del aire que sale del área limpia. 61 - La sanitización de áreas limpias es de vital
54 - Debe demostrarse que los patrones de flujo importancia. Deben limpiarse exhaustivamente de
de aire no presentan ningún riesgo de acuerdo con un programa escrito. Donde se utilizan
contaminación, por ejemplo se debe comprobar que desinfectantes, se debe utilizar más de un tipo. Se
los flujos de aire no distribuyen partículas deben realizar controles periódicos para detectar la
generadas por personas, operaciones o máquinas a aparición de cepas resistentes.
una zona de mayor riesgo para el producto. 62 - Se deben controlar los desinfectantes y
detergentes para detectar contaminación
55 - Se debe contar con un sistema de alerta que
microbiana; las diluciones se deben conservar en
indique fallos en el suministro de aire. Se deben
envases previamente limpiados y sólo se las debe
instalar indicadores de diferencial de presión entre almacenar durante períodos definidos, a menos que
áreas donde estas diferencias son importantes. se las esterilice. Los desinfectantes y detergentes de
Dichas diferencias de presión deben registrarse
las áreas de grado A y B deben esterilizarse antes de
regularmente o, en su defecto, documentarse.
su uso.
Equipamiento 63 - La fumigación en áreas limpias puede ser
56 - Las cintas transportadoras no deben pasar útil para reducir la contaminación microbiológica
nunca a través de la separación entre una zona de de lugares inaccesibles.
grado A o B y una zona de elaboración de menor
Procesamiento
grado de limpieza de aire, salvo que la propia cinta
sea esterilizada continuamente (por ejemplo, en un 64 - Deben tomarse las precauciones tendientes
túnel de esterilización). a minimizar contaminación durante todas las etapas
del procesamiento, inclusive las etapas previas a la
57 - En la medida de lo posible, los equipos,
esterilización.
accesorios y servicios se deben diseñar e instalar, de
forma que las operaciones, el mantenimiento y las 65 - Las preparaciones de origen microbiológico
reparaciones se puedan realizar fuera del área no deben elaborarse ni llenarse en áreas utilizadas
limpia. Si es necesaria una esterilización, se debe para el procesamiento de otros productos
llevar a cabo, siempre que sea posible, después de farmacéuticos; sin embargo, las vacunas de
montar por completo todo el equipo. microorganismos muertos o de extractos
bacterianos pueden envasarse, previa inactivación,
58 - Cuando se hayan realizado operaciones de
en los mismos locales que otros productos
mantenimiento del equipo dentro del área limpia, el
farmacéuticos estériles.
área se debe limpiar, sanitizar y/o esterilizar, de
corresponder, antes de volver a iniciar el proceso, si 66 - La validación del proceso aséptico debe
no se han mantenido durante el trabajo los niveles incluir una simulación del proceso utilizando un
exigidos de limpieza o asepsia. medio de cultivo (“Media fill”). La selección del
medio de cultivo debe basarse en la forma
59 - Las instalaciones de tratamiento y los
farmacéutica del producto y en la selectividad,
sistemas de distribución de agua se deben diseñar,
claridad, concentración y aptitud para la esterilidad de lotes elaborados desde la última
esterilización del medio de cultivo. simulación del proceso exitosa.
67 - La simulación del proceso debe imitar, lo 71 - Se debe tener la precaución de que ninguna
más fielmente posible, el proceso de elaboración validación presente un riesgo para los procesos.
aséptico de rutina e incluir todos los pasos críticos
72 - Deben controlarse regularmente las fuentes
posteriores de la elaboración. Asimismo, se debe de agua, el equipo de tratamiento de agua y el agua
tener en cuenta diferentes intervenciones que se tratada, para detectar contaminación química y
sabe pueden tener lugar durante la producción
biológica y, según corresponda, de endotoxinas. Se
normal, como así también las situaciones de peor
deben conservar registros de los resultados de los
caso.
controles y de cualquier acción tomada al respecto.
68 - Los ensayos de simulación deben realizarse 73 - Las actividades en áreas limpias y,
como una validación inicial, con tres ensayos de
específicamente, cuando existen operaciones
simulación satisfactorios consecutivos por turno de
asépticas en curso, deben ser mínimas y el
trabajo y ser repetidos a intervalos definidos y
movimiento de personal debe ser controlado y
posteriores a cualquier modificación significativa
metódico, a fin de evitar el desprendimiento
del sistema HVAC, del equipamiento, del proceso o excesivo de partículas y microorganismos originado
del número de turnos de trabajo. Por lo general, los por una actividad demasiado intensa. Debido al tipo
ensayos de simulación de procesos deben repetirse
de vestimenta usada, la temperatura ambiente y la
dos veces al año por turno de trabajo y por proceso.
humedad no deben ser demasiado elevadas.
69 - La cantidad de envases utilizados para
74 - La contaminación microbiológica de la
llenado con el medio de cultivo debe ser suficiente materia prima debe ser mínima. Las
para que la evaluación sea válida. Para lotes
especificaciones deben incluir los requerimientos de
pequeños, el número de envases para el medio de
calidad microbiológica cuando la necesidad de esto
cultivo debe, ser al menos igual al tamaño del lote
se haya evidenciado mediante el control de las
del producto. El objetivo debe ser crecimiento cero mismas.
y debe aplicarse lo siguiente:
a) Cuando se llenan menos de 5.000 75 - En las áreas limpias, se debe minimizar el
unidades, no se deben detectar unidades uso de envases y materiales propensos a generar
contaminadas. fibras.
b) Cuando se llenan de 5.000 a 10.000 76 - Se deben adoptar medidas tendientes a
unidades: minimizar la contaminación por partículas del
I. Una (1) unidad contaminada producto final, cuando corresponda.
dará lugar a una investigación,
incluyendo la consideración de 77 - Después del proceso de limpieza final, los
repetir el ensayo simulado; envases, accesorios, y equipos deben manipularse
II. Dos (2) unidades contaminadas de manera que no se vuelvan a contaminar.
se consideran causa para 78 - El intervalo entre el lavado y secado y la
revalidación, posterior a una esterilización de los envases, accesorios y equipos,
investigación. así como entre su esterilización y su utilización,
c) Cuando se llenan más de 10.000 deberá ser lo más breve posible y estará sometido a
unidades: un límite de tiempo adecuado a las condiciones de
I. Una (1) unidad contaminada almacenamiento.
dará lugar a una investigación,
II. Dos (2) unidades contaminadas 79 - El tiempo que pase entre el inicio de la
se consideran causa para preparación de una solución y su esterilización o
revalidación, posterior a una filtración a través de un filtro de retención
investigación; microbiana, debe ser lo más breve posible. Debe
existir un tiempo máximo permitido establecido
70 - Para cualquier tamaño de corrida, para cada producto, teniendo en cuenta su
incidentes intermitentes de contaminación composición y el método de almacenamiento
microbiana pueden ser indicativos de bajos niveles previsto.
de contaminación que deben ser investigados. La
investigación de fallas groseras debe incluir el 80 - La carga biológica debe controlarse antes
impacto potencial en el aseguramiento de la de la esterilización. Deben existir límites de trabajo
a los que puede llegar la contaminación biológicos cuando sea pertinente. Se debe verificar
inmediatamente antes de la esterilización que están la validez del proceso a intervalos programados, al
relacionados con la eficacia del método utilizado. menos una vez por año y ante cualquier
Cuando corresponda, se debe controlar la ausencia modificación significativa efectuada al equipo. Se
de piretógenos. El ensayo de carga microbiana debe deben conservar registros de los resultados.
realizarse en cada lote, tanto para productos con
85 - Para lograr una esterilización eficaz, todo el
llenado aséptico, como para productos esterilizados
material debe ser sometido al tratamiento necesario
terminalmente. Cuando se han establecidos y el proceso debe diseñarse para garantizar que se
parámetros de esterilización de sobremuerte térmica consigue este objetivo.
(“overkill”) en productos esterilizados
terminalmente, la carga biológica puede ser 86 - Se deben establecer patrones validados de
monitoreada solamente a intervalos regulares carga para todos los procesos de esterilización.
adecuados. Para sistemas de liberación paramétrica, 87 - Los indicadores biológicos deben
el ensayo de carga biológica, debe realizarse en considerarse como un método adicional de control
cada lote y debe ser considerado como un ensayo en de la esterilización. Se los debe almacenar y utilizar
proceso. Cuando sea pertinente, se debe controlar de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se
el nivel de piretógenos. Todas las soluciones, en debe comprobar su calidad mediante controles
particular los líquidos de gran volumen para positivos. En caso de que se utilicen indicadores
perfusión, deben pasar a través de un filtro de biológicos, deben adoptarse precauciones estrictas
retención microbiana, de ser posible para evitar la transferencia de contaminación
inmediatamente antes del llenado. microbiana a partir de los mismos.
81 - Los envases, accesorios, equipos y 88 - Se debe contar con un medio inequívoco de
cualquier otro artículo necesario en un área limpia distinguir los productos que han sido esterilizados
donde se realizan operaciones asépticas deben de los que no lo han sido. Cada canasta, bandeja o
esterilizarse e introducirse al área mediante equipos elemento transportador de productos o materiales
de esterilización de doble puerta embutidos en la debe estar rotulado con el nombre del material, el
pared, o mediante un procedimiento que logre el número de lote y la indicación de si fue esterilizado
mismo objetivo de no introducir contaminación. o no. Pueden utilizarse indicadores como la cinta
Los gases no combustibles deben pasar a través de de autoclave, cuando corresponda, para indicar si
filtros de retención microbiana. un lote (o sublote) ha sido sometido o no a un
82 - Se debe validar la eficacia de cualquier proceso de esterilización, sin embargo, estos
procedimiento nuevo y la validación se debe repetir indicadores no aseguran de forma fiable que el lote
a intervalos programados en función de los sea estéril en realidad.
resultados históricos o cuando se realice algún
cambio significativo en el proceso o en el equipo. 89. Deben estar disponibles los registros de
esterilización para cada ciclo de esterilización.
Esterilización Deben ser aprobados como parte del procedimiento
83 - Se deben validar todos los procesos de de liberación de lote.
esterilización. Se debe prestar especial atención Esterilización térmica
cuando el método de esterilización adoptado no se
encuentra descripto en la edición vigente de la 90 - Cada ciclo de esterilización por calor debe
Farmacopea Argentina o cuando se utiliza para un registrarse en un gráfico de tiempo/temperatura con
producto que no es una simple solución acuosa u una escala suficientemente amplia o mediante otro
oleosa. Siempre que sea posible, la esterilización equipo adecuado que disponga de la precisión y
térmica debe ser el método de elección. En todos exactitud necesarias. La posición de las sondas
los casos el proceso de esterilización debe utilizadas para controlar y/o registrar estos datos, se
corresponderse con la habilitación de elaboración y deben haber fijado durante la validación y, de
la Autorización de Comercialización. corresponder, haber sido también comprobado con
una segunda sonda de temperatura independiente
84 - Antes de que se adopte un proceso de situada en la misma posición.
esterilización, deberá demostrarse su idoneidad para
el producto y su eficacia para lograr las condiciones 91 - También pueden utilizarse indicadores
deseadas de esterilización en todas las partes de químicos o biológicos, pero estos no deben
cada tipo de carga que deba someterse a dicho reemplazar las mediciones físicas.
proceso, mediante mediciones físicas e indicadores
92 - Se debe dejar tiempo suficiente para que el ingreso de aire no estéril. Cualquier aire que
toda la carga alcance la temperatura necesaria antes ingrese debe hacerlo a través de un filtro HEPA.
de que comience la medición del tiempo de Cuando este proceso tenga también el objetivo de
esterilización. Dicho tiempo debe determinarse para eliminar piretógenos, se deben utilizar pruebas de
cada tipo de carga a ser procesada. desafío con endotoxinas como parte de la
validación.
93 - Después de la fase de temperatura elevada
de un ciclo de esterilización térmica, se deben Esterilización por radiación
tomar recaudos para evitar que una carga
98 - La esterilización por radiación se utiliza
esterilizada se contamine durante su enfriamiento.
principalmente para la esterilizar materiales y
Cualquier líquido o gas de refrigeración en contacto
productos sensibles al calor. Numerosos productos
con el producto debe estar esterilizado, salvo que
farmacéuticos y materiales de empaque son
pueda demostrarse que no se aprobaría el uso de sensibles a la radiación, por lo que este método se
ningún envase que pudiera tener fugas. permite sólo cuando se ha confirmado
Calor húmedo experimentalmente la ausencia de efectos nocivos
sobre el producto. La irradiación ultravioleta no
94 - La temperatura y la presión se deben
utilizar para monitorear el proceso. Los constituye normalmente un método aceptable de
instrumentos para ajustar las condiciones serán esterilización.
normalmente independientes de los instrumentos de 99 - Durante el procedimiento de esterilización
control y de los gráficos de registro. Cuando se debe medirse la dosis de radiación. Con este fin, se
utilicen sistemas automáticos de ajuste y control deben utilizar indicadores dosimétricos,
para estas aplicaciones, deben estar validados para independientes de la tasa de dosis, que den una
garantizar el cumplimiento de los requisitos críticos medida cuantitativa de la dosis recibida por el
del proceso. Las fallas del sistema y del ciclo propio producto. Los dosímetros se incluirán en la
deben ser registradas por el sistema automatizado y carga en número suficiente y lo bastante próximos
ser observadas por un operador. La lectura del para garantizar que siempre haya un dosímetro en el
indicador de temperatura independiente, se debe irradiador. Cuando se utilicen dosímetros de
comparar sistemáticamente frente al registro gráfico plástico, no debe excederse el periodo de validez
durante el periodo de esterilización. fijado en su calibración. Las absorbancias de los
Si se trata de esterilizadores que tienen un dosímetros se deben leer en un corto periodo de
drenaje en el fondo de la cámara, puede ser tiempo después de su exposición a la radiación.
necesario también registrar la temperatura en esta 100 - Como control adicional, pueden utilizarse
posición, durante todo el período de esterilización. indicadores biológicos.
Cuando una fase de vacío sea parte del ciclo, deben
realizarse regularmente pruebas de ausencia de 101 - Los procedimientos de validación deben
fugas en la cámara. asegurar que se tienen en cuenta los efectos de las
variaciones en la densidad de los envases.
95 - Los elementos a esterilizar que no estén en
envases cerrados, deben envolverse en un material 102 - Los procedimientos de manipulación de
que permita la eliminación del aire y la penetración materiales deben evitar la confusión entre
del vapor, pero que a su vez, evite la materiales irradiados y no irradiados. Cada paquete
recontaminación después de la esterilización. debe llevar discos de color sensibles a la radiación
Todas las partes de la carga deben tomar contacto para distinguir entre envases que se han sometido a
con el agente esterilizador a la temperatura la radiación y los que no.
necesaria durante el tiempo necesario. 103 - La dosis de radiación total debe
96 - Se deben tomar medidas para garantizar administrarse durante de un periodo de tiempo
que el vapor utilizado para la esterilización es de la determinado previamente.
calidad adecuada y que no contiene aditivos en un Esterilización con óxido de etileno
grado que pueda provocar la contaminación del
producto o del equipo. 104 - Este método sólo debe utilizarse cuando
ningún otro método es aplicable. Durante el
Calor seco proceso de validación, debe demostrarse que no
97 - El proceso utilizado debe incluir la produce ningún efecto nocivo sobre el producto y
circulación de aire dentro de la cámara y el que las condiciones y el tiempo permitidos para la
mantenimiento de una presión positiva para evitar liberación del gas son suficientes para reducir
cualquier gas residual y los productos de reacción debe considerar el complementar el proceso de
hasta límites aceptables definidos según el tipo de filtración con alguna forma de tratamiento térmico.
producto o material. 111 - Debido a los potenciales riesgos
105 - Es fundamental el contacto directo entre el adicionales del método de filtración en comparación
gas y las células microbianas; se deben tomar con los otros procesos de esterilización, es
recaudos especiales para evitar la presencia de aconsejable realizar una segunda filtración
organismos puedan estar encerrados en materiales mediante otro filtro esterilizado que retenga
como cristales o proteínas desecadas. La naturaleza microorganismos, inmediatamente antes del
y la cantidad de los materiales de empaque pueden llenado. La última filtración estéril debe llevarse a
afectar al proceso de forma significativa. cabo lo más cerca posible del punto de llenado.
106 - Antes de la exposición al gas, la humedad 112 - Las características de liberación de fibras
y la temperatura de los materiales deben de los filtros deben ser mínimas.
equilibrarse con los valores de las mismas
113 - Se debe revisar la integridad del filtro
requeridos por el proceso. El tiempo necesario para
esterilizado antes de su uso y se debe confirmar
ello se debe ajustar teniendo en cuenta la necesidad
inmediatamente después de su uso, mediante un
de reducir el tiempo previo a la esterilización. método adecuado como la prueba de punto de
107 - Cada ciclo de esterilización debe burbuja, flujo difusivo o mantenimiento de la
monitorearse con indicadores biológicos presión. El tiempo empleado para filtrar un
apropiados, empleando el número adecuado de volumen conocido de solución a granel y la
unidades de indicadores distribuidas por toda la diferencia de presión que debe aplicarse en el filtro
carga. La información obtenida debe formar parte se deben determinar durante la validación y se debe
del registro del lote. registrar e investigar cualquier diferencia
significativa que se dé en estos parámetros durante
108 - Para cada ciclo de esterilización, se deben
la elaboración de rutina. Los resultados de estas
llevar registros del tiempo empleado en completar
el ciclo, de la presión, temperatura y humedad verificaciones se deben incluir en los registros del
dentro de la cámara durante el proceso y de la lote. Después de cada uso se debe confirmar la
integridad de los filtros críticos de las salidas de gas
concentración del gas, así como de la cantidad de
y de aire. La integridad de otros filtros se debe
gas utilizada. Deben existir registros gráficos de la
confirmarse a intervalos apropiados.
presión y la temperatura durante todo el ciclo. El
registro o registros deberán incluirse en la 114 - No se debe utilizar el mismo filtro durante
documentación del lote. más de una jornada de trabajo a menos que dicho
uso se haya validado.
109 - Después de la esterilización, la carga se
debe almacenar de forma controlada en condiciones 115 - El filtro no debe afectar al producto
de ventilación que permitan que el gas residual y reteniendo alguno de sus ingredientes o por
los productos de reacción disminuyan hasta los liberación de sustancias dentro de él.
niveles definidos. Este proceso debe ser validado.
Acabado de productos estériles
Filtración de productos que no pueden 116 - Los viales de liofilización parcialmente
esterilizarse en su envase final. tapados, deben mantenerse en todo momento bajo
110 - La sola filtración no se considera condiciones Grado A hasta que los tapones sean
suficiente cuando es posible la esterilización en el completamente insertados.
envase final. De los métodos disponibles en la
117 - Los envases deben ser cerrados mediante
actualidad, se prefiere la esterilización por vapor. Si
métodos debidamente validados. Los envases
el producto no se puede esterilizar en su envase
cerrados por fusión, por ejemplo ampollas de vidrio
final, los líquidos o soluciones se pueden filtrar, a
o plástico deben someterse a una prueba de
través de un filtro estéril de 0,22 micrones (o
integridad del 100%. Los otros envases se deben
menos) de poro nominal o con propiedades al muestrear según procedimientos operativos
menos equivalentes de retención de normalizados para la prueba de integridad.
microorganismos, pasando el producto a un
recipiente previamente esterilizado. Dichos filtros 118 - El sistema de cierre de envase de los
pueden eliminar la mayor parte de bacterias y viales llenados asépticamente no está totalmente
hongos, pero no todos los virus ni micoplasmas. Se asegurado hasta que el precinto de aluminio haya
sido engrapado en su lugar sobre el vial con tapón.
El engrapado del precinto debe realizarse tan el último elemento de una serie de medidas de
pronto como sea posible, después que se haya control mediante las que se asegura la esterilidad.
insertado el tapón. El ensayo debe validarse respecto al producto
correspondiente.
119 - Como el equipo utilizado para engrapar
los precintos de los viales puede generar grandes 126 - En aquellos casos en los que se ha
cantidades de partículas no viables, el equipo debe autorizado la liberación paramétrica, se debe prestar
ubicarse como una estación separada equipada con especial atención a la validación y el monitoreo del
una extracción de aire adecuada. proceso de elaboración en su totalidad.
120 - El engrapado de viales puede llevarse a 127 - Las muestras que se toman para el ensayo
cabo como un proceso aséptico utilizando precintos de esterilidad deben ser representativas de todo el
esterilizados o como un proceso limpio fuera del lote, deben incluir muestras tomadas de partes del
núcleo aséptico. Cuando se adopta esta última lote consideradas en mayor riesgo de
opción, los viales deben protegerse bajo contaminación. Por ejemplo:
condiciones Grado A hasta el punto de dejar el área
a) Para productos llenados asépticamente,
de procesamiento aséptico, y a partir de entonces
las muestras deben incluir envases
los viales con tapón deben protegerse con una llenados al comienzo y al final del lote
provisión de aire Grado A hasta que el precinto y después de cualquier intervención
haya sido engrapado.
significativa;
121 - Los viales con tapones perdidos o b) Para productos esterilizados
desplazados, deben ser rechazados previo al térmicamente en su envase final, se
engrapado. Cuando se requiere la intervención debe considerar tomar muestras
humana en la estación de engrapado debe utilizarse procedentes de la parte potencialmente
tecnología adecuada para prevenir el contacto más fría de la carga.
directo con los viales y para minimizar la
contaminación microbiana.
122 - Barreras de acceso restringido y
aisladores, pueden ser beneficiosos en el
aseguramiento de las condiciones requeridas y para
minimizar las intervenciones humanas directas
dentro de la operación de engrapado.
123 - En los envases cerrados al vacío se
comprobará el mantenimiento de este vacío tras un
periodo adecuado y previamente determinado.
124 - Los envases de productos parenterales
llenos deben inspeccionarse individualmente, a fin
de detectar contaminación por materia extraña u
otros defectos. Si la inspección se hace
visualmente, deberá llevarse a cabo en condiciones
adecuadas y controladas de iluminación y fondo.
Los operarios que realicen la inspección deben
someterse a controles periódicos de agudeza visual,
con anteojos, de necesitarlos y se les deben permitir
descansos frecuentes durante la jornada de trabajo.
Cuando se utilicen otros métodos de inspección, se
debe validar el proceso y el funcionamiento del
equipo se debe controlar a intervalos
preestablecidos. Los resultados deben quedar
registrados.
Control de calidad
125 - El ensayo de esterilidad aplicado al
producto terminado deberá considerarse sólo como
ANEXO 2 la elaboración de productos farmacéuticos
biológicos requiere procesos y materiales
ELABORACION DE PRODUCTOS
biológicos, tales como el cultivo de células o la
FARMACEUTICOS BIOLÓGICOS DE USO
extracción de material de organismos vivos. Estos
HUMANO
procesos biológicos pueden mostrar una
ALCANCE variabilidad inherente, de modo que la gama y la
Los métodos empleados en la elaboración de naturaleza de los subproductos son variables.
productos farmacéuticos biológicos constituyen un Además, los materiales utilizados en dichos
factor crítico para el diseño de un control procesos de cultivo proporcionan buenos sustratos
regulatorio apropiado. Por lo tanto, en rasgos para el desarrollo de contaminantes microbianos.
generales, los productos farmacéuticos biológicos
El control de los productos farmacéuticos
pueden definirse según su método de elaboración.
Los productos farmacéuticos biológicos preparados biológicos requiere, por lo general, técnicas
por los siguientes métodos de elaboración serán analíticas biológicas de mayor variabilidad que las
determinaciones físico-químicas. Por lo tanto, los
comprendidos por el alcance de este anexo1.
controles en proceso tienen gran importancia en la
1
NOTA: Los productos medicinales biológicos elaboración de productos farmacéuticos biológicos.
elaborados por estos métodos incluyen: vacunas, Las propiedades especiales de los productos
inmunosueros, antígenos, hormonas, citoquinas, farmacéuticos biológicos exigen una cuidadosa
enzimas y otros productos de fermentación consideración en cualquier código de Buena
(incluyendo anticuerpos monoclonales y productos Práctica de Fabricación y el desarrollo de este
derivados del r-DNA). anexo tiene en cuenta estos puntos.
1
Agua Balanzas
13 El agua utilizada en los ensayos debe ser de 22. Las balanzas analíticas deben ser instaladas
una calidad adecuada para el uso analítico, por lo en un local adecuado, niveladas, libre de corriente
que se deberá controlar mediante ensayos de aire, en mesadas exclusivas para las mismas y
previamente protocolizados. estables. Siempre que se pueda, deben estar
dispuestas en ambientes con temperatura
14. Esta podrá ser: deionizada, destilada,
controlada.
bidestilada, ultrapura.
15. En el caso que el centro cuente con un 23. Las balanzas deben ser acondicionadas
después de su uso. Debe haber un programa que
equipo productor de agua, debe redactar un
incluya el mantenimiento y la calibración periódica
procedimiento de manejo, mantenimiento y
(como mínimo, anualmente) con toda la
limpieza del mismo como así también de los
información registrada y archivada.
ensayos a ser realizados en el agua y la frecuencia
de realización de los ensayos. 24. En el caso de balanzas electrónicas que no
posean sistema de auto-calibración, la verificación
Pipetas
debe ser hecha diariamente, antes de su utilización,
16. El centro debe contar con procedimientos con pesas certificadas.
escritos para utilización, limpieza y conservación de
25. El registro de verificación de las balanzas
las pipetas automáticas y toda verificación de la
debe figurar como mínimo: fecha, datos de la
performance y calibraciones externas deben ser
verificación diaria (en el caso de que la balanza no
registradas y archivadas.
cuente con auto-calibración), nombre del operador
17. Los ensayos para determinar exactitud y y datos de la pesada.
precisión de las pipetas mecánicas de volumen fijo
26. Todos los registros deben ser archivados y
se deben realizar con masa de agua cada tres meses.
las pesas utilizadas en las verificaciones deben
Dicha operación debe registrarse.
certificarse anualmente.
18. En el caso de pipetas de volumen variable
27. El centro debe contar con un procedimiento
también se debe verificar y registrar la exactitud y
operativo con la información básica sobre el uso y
la precisión usando una masa de agua por lo menos
funcionamiento de la balanza, limpieza,
cada tres meses, en por lo menos tres puntos
distintos (bajo, medio y alto). mantenimiento y calibración de la misma.
Freezers y refrigeradores
Material de vidrio
19. La medida precisa del volumen es tan 28. Las muestras biológicas de los estudios de
importante en muchos métodos analíticos como la bioequivalencia deben ser conservadas y
almacenadas en freezers o refrigeradores destinados
medida de la masa. Por ello, es preciso considerar
exclusivamente a tal fin y de acceso restringido.
algunos puntos para la medición exacta de un
determinado volumen, tales como verificación, 29. Se debe controlar y registrar diariamente la
calidad, correcto uso y mantenimiento de dichos temperatura de los freezers y refrigeradores. Se
materiales. recomienda el uso de dispositivos de registro
continuo de temperatura. El lugar más adecuado
20. Se podrá verificar los volúmenes
para colocar el termómetro es la parte central
dispensados por estos materiales utilizados una
interna del equipo. Los instrumentos de medición
masa de agua, y estos controles deberán ser
documentados y archivados. deben ser calibrados en forma periódica.
30. En el caso de equipamientos que tengan
De ser necesario, el centro puede contar con
registro automático de temperatura, estos deben
materiales Clase A.
permitir una verificación diaria de la temperatura y
21. En todos los materiales de vidrio se debe los datos, impresos o anotados, deberán ser
mantener un grado de limpieza tal, que permitan el archivados.
desplazamiento uniforme del líquido. Para ello, el
31. El centro debe contar con procedimientos
centro debe contar con un procedimiento operativo
escrito para la limpieza de estos materiales de escritos que describa la operatoria y frecuencia de
vidrio. limpieza y registro de temperatura.
2
39. Debe mantenerse una planilla de stock de
columnas de extracción en fase sólida. Se debe
demostrar mediante ensayos descriptos en
pHímetro protocolos la cantidad de veces que puede
32. El procedimiento para la utilización del reutilizarse una misma columna de extracción en
aparato debe contener información básica sobre el fase sólida.
uso, cuidados de mantenimiento, limpieza y MUESTRAS BIOLÓGICAS
almacenamiento de los electrodos.
Bioseguridad
33. La eficiencia de los electrodos debe ser
verificada periódicamente. En cuanto a la 40. Todas las muestras biológicas deben
considerarse como potencialmente peligrosas y/o
calibración ésta debe ser realizada antes del uso
infecciosas y deben manejarse de acuerdo a la
usando al menos dos soluciones buffer, una con un
norma vigente.
pH por encima y otra debajo del valor que se
pretende medir. Se debe registrar dichas Transporte
calibraciones en el manual o planilla de uso del
41. Debe llevarse a cabo de acuerdo a un
equipo.
procedimiento escrito que cumpla la norma vigente.
Centrífugas Deben registrarse las condiciones de transporte y
34. El centro debe contar con un procedimiento correcta identificación.
operativo para el correcto uso, limpieza y Recepción
decontaminación de las centrifugas (balanceo,
42. Debe realizarse de acuerdo a un
capacidad máxima). procedimiento establecido, que incluya, número,
35. Se debe registrar todo mantenimiento integridad de contenedores, identificación, estado
realizado en la centrífuga sea de rutina o no. físico de las muestras y verificar que las mismas se
encuentren en las condiciones acordadas con la
Cromatógrafo líquido y otros equipos
unidad clínica. Así mismo, debe contener los
destinados a la cuantificación
criterios para rechazos de muestras.
36. Todos los equipos deben contar con un
43. A los fines de evitar confusiones y facilitar
programa escrito de mantenimiento y calibración
periódica. Todo mantenimiento debe ser registrado la trazabilidad de las muestras recibidas desde el
y la documentación archivada. centro clínico, las muestras deben ser asentadas en
un Libro de Ingreso o planilla según disponga el
37. Para el caso de las columnas respectivo procedimiento.
cromatográficas éstas deben contar con planilla de
uso donde se registre como mínimo las Almacenamiento
dimensiones, el tipo de relleno, el número de serie, 44. Debe asegurarse la identidad e integridad
las drogas analizadas y la cantidad de inyecciones durante todo el período de estabilidad. En caso de
realizadas en esa columna. De usarse una fase fallas, debe existir un procedimiento escrito de
móvil con modificadores como agentes bloqueantes contingencia que considere las acciones a seguir.
de silanoles (trietilamina u otras aminas orgánicas)
Descarte de las muestras
de apareamiento iónico (alquilsulfonatos,
alquilsulfatos, ácidos polifluorcarboxílicos, etc.), 45. El centro debe contar con un procedimiento
esta información también debe asentarse en dicha escrito sobre descontaminación de materiales y
planilla. desecho de las muestras biológicas. Se debe
archivar el comprobante de recolección y
Sistema de Extracción y/o certificados de destrucción de los residuos líquidos
Evaporación/concentración de muestras y sólidos llevados a cabo por una empresa
38. El centro debe contar con procedimientos habilitada para tal fin.
escritos que describa el correcto uso, limpieza y
MÉTODO BIOANALÍTICO
mantenimiento de rutina del equipo evaporador /
concentrado, así como los equipos de vacío o Introducción
presión positiva utilizados para extracción en fase 46. Teniendo en cuenta que los estudios de
sólida. Todo mantenimiento debe ser registrado y la bioequivalencia involucran voluntarios humanos, el
documentación archivada. centro analítico donde se cuantifiquen las muestras
3
biológicas, debe asegurar que el método componentes de la muestra. Para la selectividad, se
bioanalítico ha sido debidamente validado de deben analizar muestras “blanco” de matriz
manera de obtener resultados confiables y biológica (plasma, orina u otra matriz) obtenidas de
consistentes. por lo menos, seis fuentes distintas. Cada muestra
blanco debe ser ensayada de interferentes y se debe
47. La realización de una búsqueda bibliográfica
asegurar la selectividad comparando la respuesta
es la primera etapa para encontrar un método
del análisis con muestras en el límite de
bioanalítico. De encontrarse uno, este debe ser
ensayado en cuanto a su reproducibilidad. De no cuantificación. La respuesta de cualquier posible
hallarse un método adecuado, se debe desarrollar un pico de interferencia debe ser no mayor al 20% y
5% a la del límite de cuantificación y del estándar
método específico para la droga y/o metabolitos de
interno respectivamente
interés.
48. En el desarrollo de un método es necesario 55. Cuando se utiliza plasma como matriz
verificar toda la metodología analítica, la que biológica, se recomienda que se ensayen como
mínimo cuatro plasmas normales y al menos un
involucra, la preparación de la muestra con los
plasma lipémico y un plasma hemolizado.
procesos de extracción y/o separación, purificación,
identificación y cuantificación de la droga en la Recuperación
matriz biológica. 56. La recuperación de una droga desde una
49. Los parámetros fundamentales para la matriz biológica es la cantidad de droga obtenida
validación de un método bioanalítico son: exactitud, después de los procesos de purificación/extracción.
precisión, selectividad, sensibilidad, linealidad, 57. Los ensayos de recuperación deben ser
recuperación y estabilidad de corta y larga duración. realizados sobre muestras, de la misma matriz
El laboratorio debe contar con un procedimiento
biológica de estudio, a las cuales se les agregan
escrito que describa, de manera general, los pasos y
cantidades conocidas de la droga de interés en al
ensayos que deben realizarse para validar un
menos tres concentraciones (baja, media y alta). Se
método someten a todos los procesos de extracción y/o
50. El procedimiento para validar un método purificación y luego se comparan los resultados
particular junto con los criterios de evaluación de analíticos de las muestras con soluciones patrón de
los ensayos debe estar descripto en un protocolo de la droga en las mismas concentraciones que
validación. alcanzan los analitos en el extracto analítico final,
51. En la validación, la matriz biológica representando éstas últimas, el 100% de
recuperación.
utilizada debe ser la misma matriz objeto de
estudio. De no disponer de la matriz de estudio se 58. En el caso de utilizar estándar interno, debe
debe justificar el uso de otra matriz biológica. ensayarse la recuperación del mismo. La
52. El informe de resultados de la validación recuperación indica la eficiencia de todos los
procesos envueltos en el método analítico y debe
debe contener por lo menos: una descripción del
ser tratada dentro de un límite de variabilidad.
método analítico, una descripción de los ensayos
efectuados y los resultados más relevantes de los 59. La recuperación no necesita ser del 100%,
mismos, evidencia de la pureza e identidad de las pero la cantidad recuperada de droga y de estándar
sustancias estándar, las tablas de resultados de las interno debe ser consistente y reproducible. Cuanto
mediciones y los cálculos efectuados con las más próxima al 100 % sea la recuperación más
mismas y la totalidad de los registros instrumentales efectivo es el método de purificación/extracción.
de las mediciones (como cromatogramas o
Exactitud
espectrogramas) en formato legible.
60. La exactitud de un método analítico describe
53. Los datos instrumentales en formato
el grado de concordancia entre los resultados
electrónico deben almacenarse correctamente para
obtenidos por el método en estudio y el valor de
asegurar su integridad, de acuerdo a un referencia esperado. La exactitud se debe
procedimiento escrito establecido para tal fin. determinar por el análisis de al menos tres
Selectividad concentraciones por quintuplicado: baja (entre el
Límite Inferior de Cuantificación y 3 veces el LIC),
54. La selectividad es la propiedad de un
método bioanalítico para diferenciar y cuantificar media y alta (entre el 75% y 90% del Límite
una droga de interés en presencia de otros Superior de Cuantificación).
4
61. La concentración promedio observada debe calibración debe ser función de los valores
estar comprendida en el rango 85% al 115% del analíticos esperados en el estudio.
valor teórico esperado, excepto para el límite de 69. La curva de calibración debe consistir en
cuantificación, el cual debe estar en el rango 80% al
una muestra “blanco” (muestra procesada sin
120%.
estándar interno), una muestra cero (con estándar
Precisión interno) y al menos seis muestras que cubran el
62. La precisión de un método analítico describe rango de valores esperados incluido el límite
inferior de cuantificación. Para respuestas no
la proximidad entre las diferentes medidas
lineales se recomienda al menos 8 puntos de
individuales de una droga. Se debe determinar la
calibración incluyendo al límite inferior de
precisión intra e interdía con un mínimo de tres
cuantificación.
concentraciones (alta, media y baja) por
quintuplicado. 70. Los puntos de la curva no deben exceder en
un +/- 15% el valor nominal de concentración y no
63. El coeficiente de variación porcentual
más de un +/- 20% para el límite de cuantificación.
(CV%) de la precisión determinada a cada nivel de
concentración no debe exceder el 15% entre los 71. El valor máximo de concentración incluida
replicados, excepto para el límite de cuantificación en al calibración es el Límite Superior de
donde el CV% no debe ser mayor del 20%. Cuantificación (LSC). La capacidad de poder diluir
muestras que originalmente tengan concentraciones
Límite inferior de cuantificación
superiores al LSC debe demostrarse en la
64. Es la mínima concentración de la droga que validación por intermedio de los parámetros de
puede determinarse con precisión y exactitud precisión y exactitud, obtenidos a partir de, al
definidas. El LIC es la menor concentración menos, cinco muestras replicadas y analizadas en la
incluida en la curva de calibración. misma secuencia analítica.
La respuesta de la droga en el límite de Estabilidad
cuantificación debe ser por lo menos cinco veces
72. La estabilidad de la droga en la matriz
mayor que la respuesta del blanco.
biológica es función de las condiciones de
65. La respuesta del analito debe ser discreta y almacenamiento, propiedades químicas de la droga,
reproducible con una precisión de 20% como CV% de la matriz y del material de acondicionamiento o
o mejor y una exactitud de entre el 80% y 120% contenedor de la muestra.
respecto del valor de concentración nominal.
La estabilidad de una droga en una matriz
Calibración particular y en un material de acondicionamiento no
66. Una curva de respuesta patrón es la relación puede ser extrapolada a otras matrices, materiales
entre la respuesta del instrumento y la de acondicionamiento o condiciones de
concentración conocida de la droga. Se debe almacenamiento diferentes.
generar una curva de respuesta para cada analito de 73. Las condiciones experimentales de los
la muestra. Una cantidad suficiente de muestras ensayos de estabilidad deben reflejar las situaciones
replicadas deben ser usadas para definir a ser encontradas durante el manejo,
adecuadamente la relación entre la concentración y almacenamiento y análisis de las muestras.
la respuesta. La función de calibración debe También debe evaluarse la estabilidad de las
seleccionarse sobre la base de los resultados soluciones patrón.
obtenidos en la validación con métodos
estadísticamente apropiados. Ciclos de congelamiento – descongelamiento
67. La función de calibración definida debe ser 74. La estabilidad del analito debe ser
la misma en todas las secuencias analíticas, con el determinada después de por lo menos tres ciclos de
congelado- descongelado, en un mínimo de tres
mismo método de ajuste y/o ponderación.
alícuotas por cada concentración (baja y alta). Se
68. La curva de calibración debe ser preparada debe conservar durante 24 horas a la temperatura de
en la misma matriz biológica que las muestras ha almacenamiento pretendida y descongelada a
analizarse, adicionando a la matriz concentraciones temperatura ambiente. Una vez descongelado
conocidas de la droga. El rango de concentraciones totalmente, las muestras se deben re-congelar por
utilizado para la construcción de la curva de 12 o 24 horas en las mismas condiciones. Los ciclos
de congelamiento – descongelamiento deben ser
5
repetidos por tres veces y analizados en el tercer
ciclo.
75. Si el analito es inestable a la temperatura de
almacenamiento ensayada, se deberá analizar la
estabilidad del mismo a – 70°C con tres ciclos de
congelado- descongelado.
Estabilidad a corto plazo
76. Tres muestras de concentraciones alta y baja
deben ser descongeladas a temperatura ambiente y
mantenidas a esa temperatura durante 4 a 24 horas
(basándose en el tiempo durante el cual las muestras
a ser analizadas serán mantenidas a temperatura
ambiente) y luego analizadas.
Condiciones de análisis
77. Se debe determinar la estabilidad de las
muestras procesadas, incluyendo el tiempo de
residencia en el automuestreador. Tres muestras de
cada concentración (alta y baja) deben ser
descongeladas a temperatura ambiente y
mantenidas a la temperatura del ensayo durante el
tiempo que lleve el análisis del total de las muestras
de ese lote.
Estabilidad de la solución patrón
78. Debe ensayarse la estabilidad de la droga y
del estándar interno durante todo el tiempo de
análisis del lote de muestras, incluidas las posibles
interrupciones.
79. La estabilidad de la solución patrón de la
droga y del estándar interno debe ser ensayada por
lo menos seis horas a temperatura ambiente y
durante el tiempo de almacenamiento en freezer o
refrigerador. Los resultados se deberán comparar
con soluciones de reciente preparación.
Estabilidad a largo plazo
80. El tiempo de almacenamiento en el estudio
de estabilidad a largo plazo debe exceder el tiempo
de almacenamiento de las muestras del estudio de
bioequivalencia, teniendo en cuenta el tiempo de
almacenamiento de la primera muestra hasta el
momento del análisis de la última muestra.
81. La estabilidad a largo plazo debe ser
determinada en un mínimo de tres alícuotas de cada
concentración (alta, media y baja) con las mismas
condiciones de almacenamiento que las muestras de
estudio. Los resultados deben ser comparados con
las medidas obtenidas en muestras analizadas a
tiempo cero del estudio de estabilidad a largo plazo.
6
ANEXO 6 a) tenga la misma calidad o calidad superior
BUENAS PRÁCTICAS DE FABRICACIÓN que el gas medicinal.
DE GASES MEDICINALES b) se preparen los cilindros de acuerdo con los
PRINCIPIO - El presente anexo aborda la requisitos específicos que se fijan en esta norma.
manufactura de gases medicinales, que es un
c) exista una válvula antirretorno en la línea de
tratamiento industrial especializado que no suelen suministro de la zona de llenado de gases no
realizar las empresas farmacéuticas. No cubre la medicinales, para evitar posibles contaminaciones.
fabricación y manipulación de los gases
medicinales en hospitales. No obstante, las partes Asimismo, en casos excepcionales, se puede
pertinentes de este anexo se podrán emplear como aceptar el principio de llenado por campaña en la
base para dichas actividades. misma zona, siempre que se tomen precauciones
La fabricación de gases medicinales suele específicas y que se realice la validación necesaria.
realizarse en equipo cerrado. Por consiguiente, la 3.2. Las instalaciones deben proporcionar
contaminación del producto por el entorno es espacio suficiente para las operaciones de
mínima. Sin embargo, puede haber riesgo de producción, llenado, control y almacenamiento de
contaminación cruzada con otros gases. forma que se evite el riesgo de mezcla o confusión.
La fabricación de gases medicinales debe Las instalaciones deben estar limpias y ordenadas
respetar las exigencias de las Buenas Prácticas de para favorecer el trabajo y el almacenamiento en
Fabricación para Elaboradores, Importadores / condiciones adecuadas.
Exportadores de Medicamentos, junto con los
Anexos aplicables, las normas de Farmacopeas y las 3.3. Las áreas de llenado deben tener un tamaño
siguientes directrices detalladas. suficiente y una disposición adecuada que
proporcionen:
PERSONAL
a) zonas separadas, identificadas para los
1. El Responsable Técnico responsable de la diferentes gases medicinales
liberación de los gases medicinales debe tener un
conocimiento minucioso de la producción y el b) identificación y segregación claras de los
control de dichos gases. recipientes vacíos y los que se encuentran en
distintas fases de procesamiento (p. ej. «en espera
2. Todo el personal que participe en la de llenado» y «lleno», «en cuarentena», «aprobado»
fabricación de los gases medicinales debe y «rechazado»).
comprender las exigencias de las Buenas Prácticas
de Fabricación aplicables a los Gases Medicinales y El método utilizado para conseguir estos
ser consciente de los aspectos de importancia crítica diferentes niveles de segregación dependerá de la
y de los riesgos potenciales para los pacientes que naturaleza, magnitud y complejidad de toda la
se derivan de los medicamentos en forma de gas. operación en su conjunto, pero se podrán usar, con
las debidas precauciones, marcas en el suelo,
INSTALACIONES Y EQUIPO tabiques, separaciones, barreras, etiquetas y señales,
3 Instalaciones u otros medios adecuados.
3.1. Los gases medicinales se deben llenar en 3.4. Para evitar la eventual contaminación por
zonas separadas de los gases no medicinales y los fisuras de cañerías, se deben realizar pruebas
recipientes de uso industrial no deben ser utilizados periódicas de estanqueidad en las líneas de
en el proceso de llenado de gases medicinales. No abastecimiento.
se debe producir ningún intercambio de recipientes 4. Equipos
entre ambas zonas.
4.1. Todo el equipo de fabricación y análisis se
No se permite usar los mismos recursos en la debe calificar y calibrar a intervalos regulares
cadena de llenado de cilindros de gases medicinales adecuados.
y no medicinales. No obstante, en casos
excepcionales, puede aceptarse el llenado de 4.2. Es necesario garantizar que se introduce el
cilindros de gases medicinales y no medicinales, al gas correcto en el recipiente adecuado.
mismo tiempo en la misma línea, aunque en zonas No debe haber interconexiones entre conductos
diferentes, siempre que el gas utilizado para fines por los que circulen gases diferentes, excepto para
no medicinales: procesos validados de llenado automatizado. Las
conexiones de llenado deben corresponder
únicamente a la válvula del gas o de la mezcla de las operaciones de llenado correspondientes a cada
gases en particular, de forma que solamente puedan recipiente. Según corresponda, debe indicarse lo
conectarse los recipientes correctos. siguiente:
El uso de válvulas distribuidoras y de a) denominación del producto;
conexiones a la válvula del recipiente debe estar
b) fecha y hora de las operaciones de llenado;
regulado por normativas nacionales. De no existir
normativa nacional se aceptará normativa c) referencia a la línea de llenado utilizada;
internacional reconocida. d) equipo utilizado;
La concordancia entre los diferentes gases o e) denominación y referencia a la partida o lote
mezclas de gases y las válvulas de conexión y especificación del gas, o de cada gas de una
constarán en un procedimiento escrito para cada mezcla;
planta de llenado, estando a disposición del
personal que trabaje con ellos. f) operaciones efectuadas previas al llenado
(ver el punto 8.5);
4.3. Las operaciones de mantenimiento y
reparación no deben afectar a la calidad de los gases g) cantidad y tamaño de recipientes antes y
medicinales. después del llenado;
4.4. Debe evitarse el llenado de gases no h) nombre de la persona que realiza la
medicinales en zonas y con equipos destinados a la operación de llenado;
producción de gases medicinales. Se pueden aceptar i) iniciales de los operarios en cada fase
excepciones a esta regla, si el gas empleado para significativa (liberación de línea, recepción de
fines no medicinales tiene al menos la misma envases, eliminación del contenido residual de los
calidad que el gas medicinal, se cumplan las Buenas recipientes, etc.);
Prácticas de Fabricación, y
j) parámetros clave que son necesarios para
a) se preparan los envases de acuerdo con los garantizar el llenado correcto en condiciones
requisitos específicos para recipientes medicinales normatizadas;
b) existe un método validado que impida el k) resultados de los ensayos de control de
reflujo en la línea de suministro de la zona de calidad y, si el equipo de ensayo se calibra antes de
llenado de gases no medicinales, a fin de evitar la cada ensayo, especificación del gas de referencia y
contaminación del gas medicinal. resultados de la comprobación de calibración;
4.5. Los tanques de almacenamiento y las l) resultados de las comprobaciones apropiadas
cisternas deben estar dedicados a un único gas con para garantizar que los recipientes han sido
una calidad bien definida. No obstante, el gas llenados;
medicinal líquido puede ser almacenado o
transportado en los mismos tanques que el gas de la m) una muestra de la etiqueta de trazabilidad;
misma naturaleza no destinado a fines medicinales, n) detalles sobre cualquier problema o evento
siempre que este último sea al menos de la misma no habitual y autorización firmada para cualquier
calidad que el gas medicinal y existan recursos que desvío de las instrucciones de llenado;
impidan la contaminación del gas al realizar las
o) para indicar el visto bueno, fecha y firma del
descargas.
supervisor responsable de la operación de llenado;
4.6. En el caso que las cisternas deban ser
p) liberación o rechazo del lote firmada por el
usadas para el transporte de otro gas medicinal se
Responsable Técnico.
debe realizar una purga de la cisterna con el nuevo
gas hasta que los registros de análisis se encuentren PRODUCCIÓN
dentro de las especificaciones, debiéndose incluir el 6. Todos los procesos de fabricación deben
análisis y especificaciones de contenido para el gas ejecutarse de acuerdo a un procedimiento escrito y
anterior. todas las fases críticas deben estar validadas.
DOCUMENTACIÓN 7. Producción a granel
5 Los datos incluidos en los protocolos de cada 7.1. Los gases medicinales a granel se pueden
lote de producto terminado, deben garantizar, que preparar mediante síntesis química u obtener de
puedan seguirse todos los aspectos significativos de recursos naturales aplicando, en caso necesario,
métodos de purificación (por ejemplo, en plantas de conexiones flexibles, las mangueras y los
separación de aire) Estos gases se consideran conectores.
graneles farmacéuticos. 7.11. Las remesas de gas pueden incorporarse a
7.2. Debe estar disponible la documentación que tanques de almacenamiento de producto a granel
especifique la pureza, otros componentes y posibles que contengan el mismo gas procedente de
impurezas en la materia prima y en las fases de transferencias anteriores. Los resultados de una
purificación, según corresponda. Asimismo, deben muestra deben mostrar que la calidad del gas que
estar disponibles diagramas de flujo de cada uno de ingresa es aceptable. Esta muestra se tomará:
los diferentes procesos.
a) de la nueva remesa de gas antes de agregarla
7.3. Todas las etapas de separación y al tanque; o bien,
purificación deben estar diseñadas para su b) del tanque a granel después de la
funcionamiento con un nivel óptimo de eficacia.
transferencia y homogeneizado.
Por ejemplo, las impurezas que puedan afectar
negativamente a una etapa de purificación deben ser 7.12. Los gases medicinales a granel se deben
eliminadas antes de alcanzar dicha etapa. definir como un lote, se controlarán de conformidad
con las monografías pertinentes de la Farmacopea y
7.4. Se debe validar la eficacia de las etapas de
se liberarán para el envasado.
separación y purificación; estas etapas se deben
controlar de conformidad con los resultados de la 8. Llenado y etiquetado
validación. En caso necesario, se debe controlar el 8.1. Para el llenado de gases medicinales, se
proceso utilizando análisis continuos. El debe definir el lote.
mantenimiento y la sustitución de los componentes
fungibles del equipo, como los filtros de 8.2. Los recipientes para gases medicinales
purificación, se debe basar en los resultados del deben cumplir las especificaciones técnicas que se
control y la validación. indiquen en normas nacionales. De no existir norma
nacional se aceptarán normas internacionales
7.5. Cuando aplique, deben documentarse los reconocidas. Las válvulas de salida de los envases
límites de los diversos parámetros, por ejemplo deben estar dotadas de componentes que garanticen
temperaturas, presiones y caudales. El control de inviolabilidad hasta su utilización. Los cilindros
proceso incluirá la medición de estos parámetros. tendrán preferiblemente válvulas de retención
7.6. Los sistemas informáticos utilizados para mínima a fin de ofrecer protección adecuada contra
controlar o verificar los procesos deben estar la contaminación.
validados. 8.3. Las válvulas distribuidoras para llenado de
7.7. En los procesos continuos, debe gases medicinales, así como los recipientes, deben
documentarse una definición de lote y relacionarse estar dedicados a un único gas medicinal o a una
con el análisis del gas a granel. determinada mezcla de gases medicinales (véase
también el punto 4.2). Debe existir un sistema que
7.8. La calidad y las impurezas deben garantice la trazabilidad de los recipientes y
controlarse continuamente durante la producción válvulas.
del gas.
8.4. Para la limpieza y la purga del equipo de
7.9. Se debe controlar la calidad microbiológica
llenado y de los conductos, se deben seguir
del agua utilizada para el enfriamiento durante la procedimientos escritos. Esto cobra especial
compresión del aire cuando entre en contacto con el importancia tras el mantenimiento o después de
gas medicinal.
haberse roto la integridad del sistema. Se debe
7.10. Todas las operaciones de transferencia de comprobar la ausencia de contaminantes antes de
gases medicinales en estado líquido y gaseoso, permitir el uso de la línea y se deben conservar
incluidos los controles previos a la misma, a partir protocolos de incidencias.
del almacenamiento inicial, deben realizarse de
8.5. Los cilindros se deben someter a una
acuerdo con un procedimiento escrito diseñado para
inspección visual interna, cuando:
evitar cualquier contaminación. La línea de
transferencia debe estar equipada con una válvula a) son nuevos
de retención u otra alternativa adecuada. Se debe b) se les han realizado ensayos de revisión
prestar especial atención a la purga de las periódica, presión hidrostática o equivalentes.
Después de colocar la válvula, ésta debe a) venteo y evacuación del recipiente [al menos
mantenerse en la posición de cerrada para evitar la hasta una presión absoluta residual de 150 mbar] o
entrada de cualquier tipo de contaminación en el bien,
cilindro.
b) venteo y purga mediante métodos validados
8.6. Antes del llenado se deben hacer las (presurización parcial hasta un mínimo de 7 bar y
siguientes comprobaciones: después vaciado)
a) constatar la presión residual (>3 a 5 bar) para En el caso de cilindros equipados con válvulas
asegurarse de que el cilindro no se haya vaciado por de presión (positiva) residual, una evacuación al
completo vacío a 150 mbar es suficiente, cuando la presión es
b) los cilindros sin presión residual deben ser positiva. Como alternativa, se puede hacer un
apartados y se les deben aplicar medidas análisis completo del gas remanente en cada
recipiente.
adicionales para garantizar que no están
contaminados con agua u otras impurezas. Estas Los recipientes criogénicos se prepararán al
medidas deben incluir la inspección visual y la menos por venteo.
limpieza con métodos validados cuando esté 8.8. Se deben hacer controles apropiados para
justificada
garantizar el llenado de los recipientes. Una
c) ensayo de olor para asegurar ausencia de indicación de que los cilindros se están llenando
contaminación adecuadamente puede ser comprobar que su
d) prueba de martillo que indique ausencia de superficie exterior está caliente, al tocarlo
ligeramente durante el llenado.
defectos en la pared del cilindro
8.9. Cada recipiente debe llevar una etiqueta y
e) comprobación de que se han eliminado todas
las etiquetas de trazabilidad y otras un código de color. El número de lote y la fecha de
llenado y la fecha de caducidad podrán indicarse en
f) etiquetas si están dañadas una segunda etiqueta, adherida al recipiente en
g) inspección visual externa de cada válvula y forma firme, segura y en lugar bien visible.
recipiente para descartar deformaciones, CONTROL DE CALIDAD
quemaduras, residuos, otros daños y contaminación
9. El agua utilizada para el ensayo de presión
con aceite o grasa. Los envases se deben limpiar,
hidrostática debe tener como mínimo la calidad de
ensayar y mantener de la manera apropiada
agua potable y se debe someter a análisis rutinarios
h) verificación de cada conexión a la válvula fisicoquímicos y de contaminación microbiológica.
del cilindro o recipiente criogénico para determinar
10. Cada gas medicinal se debe analizar y
si corresponde al gas medicinal de que se trate
liberar de acuerdo con las especificaciones de la
i) comprobación de la «fecha de código de Farmacopea para garantizar su conformidad
ensayo» del cilindro para verificar que el ensayo de continua.
presión hidrostática o equivalente se ha realizado y
11. El gas a granel debe ser liberado para el
todavía es válido, como exigen las directrices
llenado (véase el punto 7.12).
nacionales. De no existir norma nacional se
aceptarán normas internacionales reconocidas 12. Si se trata de un solo gas medicinal
envasado por medio de una válvula distribuidora
j) comprobación de que cada recipiente lleva su
múltiple, se debe realizar el control de calidad
código de color de acuerdo con la norma nacional y
completo según la Farmacopea en al menos un
está correctamente pintado y rotulado
cilindro del lote.
8.7. Los cilindros que se hayan devuelto para ser
13. Si se trata de un solo gas medicinal
rellenados se deben preparar cuidadosamente para
envasado en cilindros uno a uno mediante
minimizar el riesgo de contaminación. En el caso de
gases comprimidos, se debe obtener un nivel teórico operaciones de llenado individuales, se debe
máximo de impureza de 500 ppm v/v para una realizar el control de calidad completo según la
Farmacopea en al menos un cilindro por cada ciclo
presión de llenado de 200 bar (y niveles
ininterrumpido de llenado. Ejemplo de un ciclo
equivalentes para otras presiones de llenado).
ininterrumpido de operación de llenado es la
Para eliminar cualquier resto de gas de todos los producción de un turno de trabajo que utilice el
cilindros, se podrán preparar de la siguiente manera: mismo personal, equipo y lote de gas a granel.
14. Si se trata de un gas medicinal producido 21. Los recipientes llenos se deben mantener en
mediante la mezcla de dos o más gases diferentes cuarentena hasta que sean liberados por el Director
en cilindros: Técnico.
a) desde la misma válvula distribuidora, en al 22. Los recipientes llenos deben ser
menos un cilindro del lote se debe identificar el gas almacenados bajo techo y no deben ser sometidos a
balance de la mezcla y se deben analizar las temperaturas extremas. Los depósitos deben ser
impurezas pertinentes, y en todos los cilindros del apropiados al fin al que se destinan; deben estar
lote se deben identificar y cuantificar los demás limpios, secos, bien ventilados y sin materiales
gases. incompatibles, para garantizar que los recipientes
permanecen limpios hasta el momento en que son
b) individualmente, en al menos un cilindro del
expendidos.
lote se debe identificar el gas balance, y en cada
uno de ellos se deben identificar y cuantificar los 23. Los depósitos se deben organizar de manera
demás gases y las impurezas pertinentes. que permitan la separación de los distintos gases y
de los recipientes llenos y vacíos, así como la
15. Cuando se mezclen gases en línea antes del
rotación de las existencias respetando la expedición
llenado (p. ej. óxido nitroso / oxígeno) se debe
realizar un análisis continuo de la mezcla de en el mismo orden que el ingreso.
llenado. 24. Los recipientes llenos deben estar
protegidos de condiciones atmosféricas adversas
16. Cuando se llene un cilindro con más de un
durante el transporte. Se deben aplicar condiciones
gas, el proceso de llenado debe garantizar que los
gases están correctamente mezclados en cada específicas para el almacenamiento y transporte de
cilindro y que la mezcla es totalmente homogénea. cilindros que contienen mezclas de gas en las que se
produzca separación de fases por congelación.
17. Se debe controlar cada cilindro lleno
utilizando un método adecuado a fin de descartar GLOSARIO
fugas antes de instalar el indicador de A continuación se incluyen las definiciones de
inviolabilidad. En el cilindro muestreado y términos relacionados con la fabricación de Gases
analizado, la búsqueda de fugas se debe realizar Medicinales que no se ofrecen en el glosario de la
después del análisis. Norma de Buenas Prácticas de Fabricación en
18. Si se trata de gas criogénico envasado en vigor, pero que se utilizan en el presente Anexo.
recipientes criogénicos para su entrega a pacientes Batería - Un conjunto de cilindros unidos en
domiciliarios o centros de salud, se debe realizar en una misma estructura e interconectados por una
cada el control de calidad según la Farmacopea y de válvula distribuidora, transportados y utilizados
funcionalidad. como si fueran una sola unidad.
19. Los recipientes criogénicos conservados por Cilindro - Recipiente a presión, transportable,
usuarios y rellenados con el gas medicinal in situ a con capacidad no superior a 150 litros de agua. En
partir de tanques móviles dedicados no estarán el presente documento, el término cilindro incluye
obligados a someterse a muestreo después del también baterías, según corresponda.
llenado, siempre que la operación de transferencia
Cisterna - Recipiente fijado sobre un vehículo
se realice utilizando un procedimiento validado, se
para el transporte de gas líquido o criogénico.
encuentre asegurada la fidelidad del usuario a la
empresa proveedora y la compañía que hace el Ensayo de presión hidrostática - Ensayo
llenado expida un certificado de análisis de una realizado por motivos de seguridad tal como exigen
muestra tomada del tanque móvil. Los recipientes las directrices nacionales para garantizar que los
criogénicos que conservan los usuarios se deben cilindros o tanques son aptos para soportar altas
analizar periódicamente para confirmar que su presiones.
contenido cumple las exigencias de la Farmacopea. Evacuar - Extraer el gas residual de un
Cuando corresponda se realizará el control de recipiente haciendo el vacío en su interior.
funcionalidad.
Gas - Sustancia o mezcla de sustancias
20. No es necesario conservar muestras de completamente gaseosas a 1,013 bar (101,325 kPa)
archivo, a menos que se especifique lo contrario. y +15 º C o cuya presión de vapor supere los 3 bar
ALMACENAMIENTO Y LIBERACIÓN (300 kPa) a +50 º C (ISO 10286).
Gas a granel - Gas destinado a un uso Válvula de retención de presión mínima -
medicinal que ha pasado por todas las fases de Válvula provista de un sistema antirretorno que
producción excepto el acondicionamiento final. mantiene una presión definida (aproximadamente 3
a 5 bar por encima de la presión atmosférica) para
Gas comprimido - Gas que, cuando se
impedir la contaminación durante el uso.
acondiciona a presión, alcanza un estado
completamente gaseoso a –50 º C (ISO 10286). Válvula distribuidora - Equipo o aparato
Gas criogénico - Gas que se transforma en diseñado para permitir el vaciado y llenado
simultáneo de uno o varios recipientes de gas.
líquido a 1,013 bar a temperaturas inferiores a –150
Incluye rampas, líneas, etc.
º C.
Gas líquido - Gas que, al ser acondicionado a Venteo - Reducción de la presión hasta alcanzar
presión, es parcialmente líquido (gas sobre un la presión atmosférica.
líquido) a –50 º C. Zona - Parte de las instalaciones dedicada
específicamente a la fabricación de gases
Gas medicinal - Gas o mezcla de gases
destinado a su administración a pacientes con fines medicinales. También llamada Área.
terapéuticos, diagnósticos o profilácticos con una
acción farmacológica y clasificado como
medicamento.
Impureza residual teórica máxima - Impureza
gaseosa procedente de una posible
retrocontaminación y que permanece tras el
pretratamiento de los cilindros antes del llenado. El
cálculo de la impureza teórica máxima solamente
tiene importancia para los gases comprimidos y
presupone que éstos actúan como gases perfectos.
Planta de separación de aire - Las plantas de
separación de aire toman el aire atmosférico y,
mediante procesos de purificación, limpieza,
compresión, enfriamiento, licuefacción y
destilación, lo separan en los gases oxígeno,
nitrógeno y argón.
Purga - Vaciado y limpieza de un cilindro:
a) por venteo y evacuación, o bien
b)por venteo, presurización parcial con el gas
de que se trate y nuevo venteo.
Recipiente - Recipientes criogénicos, tanques,
cisternas, cilindros, baterías, o cualquier otro envase
que esté en contacto directo con el gas medicinal.
Recipiente criogénico - Recipiente estático o
móvil con aislamiento térmico diseñado para
contener gases líquidos o criogénicos. El gas se
extrae en forma gaseosa o líquida.
Tanque - Recipiente estático para el
almacenamiento de gas líquido o criogénico.
Válvula - Dispositivo utilizado para abrir y
cerrar recipientes a presión.
Válvula de retención - Válvula que permite el
flujo únicamente en un sentido. También llamada
Válvula Antirretorno.
ANEXO 7 entrenamiento adecuado acerca de los cuidados y
responsabilidades referidas a la higiene.
BUENAS PRÁCTICAS DE FABRICACIÓN DE
PRODUCTOS FITOTERÁPICOS 3.2. El personal debe estar debidamente
protegido del contacto con elementos tóxicos y
1. Consideraciones generales
materiales vegetales potencialmente alergénicos por
1.1. Los lineamientos expuestos en este anexo medio de una indumentaria adecuada.
están dirigidas a su aplicación en Productos
3.3. Se debe prestar especial atención a la
Fitoterápicos.
limpieza y buen mantenimiento de las áreas de
1.2. Los elaboradores de Productos Fitoterápicos producción y depósito, particularmente cuando se
deberán ajustarse a estas prácticas y a las expuestas genera polvo.
en el cuerpo principal de las Buenas Prácticas de
Fabricación para Elaboradores, Importadores y 4. Personal y entrenamiento
Exportadores de Medicamentos. 4.1. El personal involucrado en el proceso de
1.3. Contrariamente a los productos elaboración o en el control de calidad, debe estar
bajo la autoridad de una persona entrenada y con la
farmacéuticos convencionales, que están fabricados
suficiente experiencia en el área especifica de
generalmente a partir de materias primas sintéticas
proceso y control de calidad de materias primas y
por medio de técnicas y procedimientos
productos fitoterápicos. Lo mismo se aplica para la
reproducibles de fabricación, los productos
fitoterápicos están preparados a partir de material persona autorizada.
de origen vegetal que puede estar sujeto a 4.2. Con el fin de asegurar una alta calidad en
contaminación y deterioro, de modo que estos los productos fitoterápicos, el personal debe tener
pueden variar en su composición y características. un adecuado nivel de entrenamiento en áreas como
1.4. El control de las materias primas, el botánica, fitoquímica y farmacognosia. Se llevarán
registros del entrenamiento y periódicamente se
almacenamiento y el proceso de manufactura asume
evaluará la efectividad de los programas de
particular importancia debido a la naturaleza a
entrenamiento realizados.
menudo compleja y variable de muchos productos
fitoterápicos, al número de principios activos y a la 5. Autoinspecciones
poca cantidad de ellos que se encuentran definidos.
5.1. El equipo de autoinspección debe consistir
A tal efecto, debe aplicarse un adecuado sistema de
en personas expertas en sus campos. Al menos un
aseguramiento de la calidad en la elaboración y el
miembro del equipo debe poseer particular
control de calidad de los productos fitoterápicos.
experiencia en drogas vegetales y en los procesos
2. Calificación y validación que se realizan sobre las mismas en la producción
de preparados de drogas vegetales y medicamentos
2.1. La calificación de equipamiento crítico, la
fitoterápicos.
validación de procesos y el control de cambios son
particularmente importantes en la producción de 6. Reclamos y retiros de productos
medicamentos fitoterápicos, de los cuales a menudo
6.1. La persona responsable del manejo de
no se conocen los constituyentes responsables de la
quejas y reclamos, debe poseer experiencia en áreas
actividad terapéutica. En este caso, la
específicas de control de calidad de materiales
homogeneidad del proceso de producción asegura
vegetales y productos fitoterápicos. Debe tomarse
constancia de calidad, eficacia y seguridad lote a especial atención para establecer si el reclamo fue
lote. Ver Anexo 15 Validación y Calificación. causado por adulteración.
3. Sanitización e higiene 6.2. Los medicamentos fitoterápicos retirados
3.1. Durante el cultivo, cosecha, recolección y del mercado deben ser segregados en un área
procesado las materias primas son expuestas a un segura, que cumpla los requerimientos
gran número de contaminantes, en especial especificados en el subtítulo “Áreas de depósito”,
microbiológicos. En relación a reducir esta hasta que se decida su destino final mediante un
exposición, es requisito que el personal encargado procedimiento previamente escrito.
del manipuleo del material vegetal y productos 7. INSTALACIONES
fitoterápicos, tenga un alto grado de higiene
personal así como también que haya recibido un Áreas de Depósito
7.1 Debido a que las materias primas de origen método de limpieza, debido a que estos incrementan
vegetal y los preparados de drogas vegetales son el riesgo de contaminación.
fácilmente degradables, atractivos para ciertos 7.9 Debe existir un área destinada para la
animales y sensibles a la contaminación
limpieza y almacenamiento de los equipos y
microbiana, el correcto almacenamiento de los
utensilios, separada de las áreas de producción.
mismos asume especial importancia.
7.10 Las partes de los equipos de producción
7.2 Las materias primas vegetales se deben que entran en contacto con el producto no deben ser
almacenar en áreas separadas. El depósito debe
reactivas, ni absorbentes, ni ceder ningún tipo de
estar bien ventilado y equipado de manera de
material, que pueda influir en la calidad del
proteger contra el ingreso de insectos y animales,
producto. Preferentemente, se utilizará
especialmente roedores. Se deben tomar medidas
equipamiento sin componentes de madera, con la
eficaces para limitar la diseminación de finalidad de prevenir la contaminación.
microorganismos y/o insectos introducidos con las
materias primas y para prevenir la contaminación 8. DOCUMENTACIÓN
cruzada. Especificaciones para Materias Primas
7.3 Los envases se deben situar de tal manera 8.1 Solo puede ser alcanzada una consistente
que permitan la libre circulación de aire y faciliten calidad en los productos fitoterápicos, si las
la limpieza. A tal efecto los contenedores deben ser especificaciones de las materias primas son
almacenados separados del suelo y separados entre definidas de manera rigurosa y detallada. Por esta
sí con el fin de facilitar la limpieza e inspección. razón, además de lo descripto en Guía general de
7.4 Para minimizar el riesgo de contaminación, Buenas Prácticas de Fabricación y Control, las
no debe existir contacto directo entre los materiales especificaciones para las materias primas deben
y las estanterías o pallets especialmente si estos son incluir lo siguiente:
de madera. Nombre botánico (si es apropiado, el nombre de
7.5 El almacenamiento de plantas, extractos, autores de la clasificación).
tinturas y otras preparaciones de drogas vegetales Detalles del origen de la planta (país de origen, y
puede requerir condiciones especiales de humedad si es aplicable métodos de cultivo, época de
y temperatura o protección contra la luz; debe cosecha, procedimientos de recolección, cantidad
asegurarse que estas condiciones son controladas y de pesticidas utilizados y fecha, etc.)
monitoreadas.
Describir si se utiliza la planta entera o que
Áreas de Producción
parte/s de ella.
7.6 Con el propósito de facilitar la limpieza y
Si la materia prima adquirida es desecada, el
evitar la contaminación cruzada, deben tomarse
método de secado debe estar especificado.
precauciones especiales durante el muestreo,
pesada, y procesos de producción. Se debe contar Descripción de la materia prima basado en la
con instalaciones dedicadas y/o sistemas de inspección macroscópica y microscópica.
extracción de polvo.
La identificación de la materia prima, que debe
7.7 Los recipientes para desechos, claramente incluir, cuando sea apropiado, la identificación de
rotulados, deben permanecer tapados hasta su los componentes activos o de los marcadores
vaciado y lavado que se realizará diariamente. conocidos. A los fines de identificación puede ser
Equipamiento utilizado un ejemplar autentico de la especie a
analizar.
7.8 La limpieza del equipamiento utilizado en la
producción de medicamentos fitoterápicos es Valoración de componentes con actividad
particularmente importante dada la cantidad de terapéutica conocida o marcadores. Deben
polvo y material vegetal generados, lo cual puede especificarse los límites de aceptación.
crear condiciones favorables para el desarrollo de Determinación de posible contaminación con
microorganismos. La utilización de aspiradoras de pesticidas y límites aceptables para tal
polvo y limpieza húmeda son los métodos de contaminación.
elección. Por el contrario, el uso de aire
comprimido y/o cepillado debe eliminarse como Resultados de análisis para la determinación de
metales pesados y posibles contaminantes,
especificando los límites de aceptación, como contaminación radiactiva (en especial para
también materiales extraños y adulteraciones. materias primas que han sido irradiadas). Deben
especificarse los límites de aceptación.
Resultados de análisis para contaminación
microbiana, incluyendo micotoxinas, y
Otros análisis (tamaño de partícula, índice de Cantidad: (a) 125 mg de extracto etanólico seco
hinchamiento, solventes residuales en preparados (8:1) o 125 mg de extracto etanolico, equivalente a
de drogas vegetales, etc.). 1000 mg de Hojas de Sen; o (b) 100-130 mg de
extracto etanólico (8:1), correspondiendo a mg de
8.2 Cualquier tratamiento utilizado para reducir
glucósidos hidroxiantracénicos, calculados como
la contaminación microbiana o la eliminación de
Senósido B.
insectos debe ser documentado. Se debe incluir en
la documentación detalles del proceso, de los Otros ingredientes: Dextrina 20-50 mg.
análisis para determinar el grado de contaminación Especificaciones para Productos Terminados
y de los límites aceptados para los residuos.
8.6 Los análisis de control de calidad y las
8.3 La expresión cualitativa y cuantitativa de las especificaciones de producto terminado deben ser
sustancias activas en las materias primas y en las tales que permitan la determinación cualitativa y
preparaciones debe realizarse de las siguientes cuantitativa de los ingredientes activos. Si se
maneras: conoce la actividad terapéutica de los componentes,
8.3.1 Materia Prima: estos deben especificarse y determinarse
cuantitativamente. Cuando esto no es posible, las
(a) debe ser indicada la cantidad de droga
especificaciones deben estar basadas en la
vegetal; o
determinación de marcadores.
(b) la cantidad de droga vegetal se puede
8.7 Si el producto terminado o las preparaciones
expresar como un rango, correspondiendo a una
contienen varias materias primas, y la
cantidad definida de componentes con actividad
determinación de los componentes activos
terapéutica conocida.
individuales no es posible, puede ser determinado el
Ejemplo: contenido combinado de varios componentes
Nombre del Ingrediente activo: Hojas de Sen. activos. Debe justificarse la necesidad de tal
procedimiento.
Cantidad: (a) 900 mg.; o (b) 830-1000 mg,
correspondiendo a 25 mg de glucósidos 8.8 Las especificaciones para productos
hidroxiantracénicos calculados como Senósido B. terminados deben incluir lo siguiente:
(a) debe ser indicada la cantidad equivalente o el Uniformidad de peso, desintegración, dureza,
cociente entre la cantidad de droga vegetal y la friabilidad (para comprimidos y cápsulas),
preparación (esto no se aplica a los aceites viscosidad (para fluidos).
esenciales o fijos) o, Humedad (en caso de formas farmacéuticas
(b) la cantidad de preparación se puede expresar sólidas).
como un rango, correspondiendo a una cantidad Características organolépticas.
definida de componentes con actividad terapéutica
conocida. Ver ejemplo en 8.5.1. Identificación.
8.4 Debe indicarse la composición de cualquier Valoración de componentes activos o
solvente o mezcla de solventes utilizados, como marcadores.
también el estado físico del extracto. Impurezas provenientes de degradación
8.5 Si cualquier otra sustancia o mezcla de (identificadas o no, si es apropiado).
sustancias son agregadas durante el proceso de 8.9 Las instrucciones de proceso deben
fabricación de la preparación, estas deben estar enumerar las operaciones que se realizarán sobre las
descriptas como “otros ingredientes”. materias primas, tales como secado, molienda,
8.5.1 Ejemplo: tamizado, etc. incluyendo el control de parámetros
críticos como pueden ser temperatura, y métodos
Nombre del principio activo: Hojas de Sen.
para controlar el tamaño de fragmentos o partículas, considerablemente alta, el muestreo estadístico debe
entre otros. ser llevado a cabo por una persona particularmente
8.10 Las instrucciones de procedimientos experimentada. Cada contenedor debe ser
identificado por su propia documentación.
utilizados para disminuir la contaminación
microbiana o la eliminación de insectos en las Estudios de Estabilidad
materias primas deben estar disponibles. Las 10.6 No será suficiente determinar la estabilidad
mismas deben incluir los detalles del proceso junto de los componentes con actividad terapéutica
con métodos para determinar los residuos de los
conocida o los marcadores, puesto que las materias
agentes utilizados con sus límites de aceptación.
primas de origen vegetal o las preparaciones de
9. PRODUCCIÓN drogas vegetales se miran en su totalidad como un
9.1. Lotes de materias primas provenientes de principio activo. Por lo tanto, debe demostrarse lo
más acertadamente posible (ej. Por comparación de
diferentes zonas geográficas pueden ser mezclados
perfiles cromatográficos) que las otras sustancias
siempre y cuando se demuestre que la mezcla será
presentes son estables y que su contenido como
homogénea microscópicamente,
proporción del conjunto sigue siendo constante. Es
macroscópicamente y químicamente, entre otras.
Este procedimiento debe estar documentado. importante la observación de las características
organolépticas y físicas de las muestras a analizar
9.2. Todos los lotes deben estar previamente ya que pueden ser modificadas por la presencia o
aprobados por control de calidad. Los lotes que se ausencia de diversas sustancias que se encuentran
encuentran fuera de especificación no pueden ser por debajo de los límites de detección.
mezclados con otros.
10.7 En los productos compuestos por varias
10. CONTROL DE CALIDAD materias primas, y cuando no es posible determinar
10.1. El personal dedicado a esta actividad debe la estabilidad de cada componente en forma
tener particular experiencia en productos de origen individual, esta podrá ser determinada mediante la
vegetal para llevar a cabo los análisis de comparación de perfiles cromatográficos, métodos
identificación y el reconocimiento de presencia de valoración, y otros ensayos fisicoquímicos.
fúngica, de heterogeneidad, y de adulteraciones, etc. GLOSARIO
sobre las materias primas.
Constituyentes con Actividad Terapéutica
Muestras de Referencia y Estándares Conocida - Sustancias o grupos de sustancias
10.2 En el caso de productos fitoterápicos, un químicamente definidas de las cuales se conoce que
estándar de referencia puede ser un ejemplo son responsables o contribuyen a la actividad
botánico de una planta, una muestra de una terapéutica de preparados de drogas vegetales o
preparación de una droga vegetal (ej. Extracto productos Fitoterápicos.
conocido), una sustancia químicamente definida, un Droga Vegetal - Plantas enteras o sus partes,
constituyente con actividad terapéutica conocida, molidas o pulverizadas (flores, frutos, semillas,
sustancias marcadores o impurezas conocidas. tubérculos, cortezas, etc.) frescas o secas, así como
10.3 El laboratorio de control de calidad debe los jugos, resinas, gomas, látex, aceites esenciales o
poseer ejemplares auténticos de las especies fijos y otros componentes similares, que se emplean
vegetales, utilizadas en la elaboración, con el fin de puras o mezcladas en la elaboración de
realizar pruebas comparativas. Es importante, que medicamentos fitoterápicos.
se cuente con ejemplares utilizados generalmente en Materia Prima - Droga vegetal o su
las adulteraciones, ya que en ocasiones, la molienda preparación, con o sin actividad terapéutica,
y el mezclado reducen considerablemente la empleada en la fabricación de medicamentos
probabilidad de reconocimiento de las mismas. fitoterápicos, excluyendo los materiales de envase.
10.4 Si el medicamento fitoterápico no está Marcador - Constituyente químicamente
descripto en una farmacopea, puede ser utilizada definido de la droga vegetal, con o sin actividad
una muestra de herbario estandarizada de varias terapéutica, de interés para propósitos de control,
plantas enteras o partes de ella. que puede servir para calcular la cantidad de droga
Muestreo vegetal o de sus preparaciones en el producto final.
Estos deben determinarse cuantitativamente en las
10.5 Debido al hecho de que las materias primas materias primas.
son, en general, agregados de plantas individuales y
por tal motivo la heterogeneidad es
Medicamentos Fitoterápicos - Los
medicamentos definidos de acuerdo con el Artículo
1º inciso a) del Decreto Nº 150/92, pero que no
reúnen los requisitos establecidos para las
especialidades medicinales o farmacéuticas
definidas en el inciso d) del Artículo 1º de dicha
norma, y que contengan como principio activo
drogas vegetales puras y/o mezclas definidas de
éstas y/o preparados de drogas vegetales,
tradicionalmente usadas con fines medicinales y
que no contengan sustancias activas químicamente
definidas o sus mezclas aun cuando fuesen
constituyentes aislados de plantas, salvo en los
casos que así se justifiquen.
Nombre Científico - Nombre en latín
actualizado de una droga vegetal que permite
ubicarla taxonomicamente según normas
internacionales reconocidas. Debe incluir Género,
especie y autor. Cuando corresponda debe incluir
Familia y taxa menores.
Preparados de Drogas Vegetales - Productos
obtenidos a partir de drogas vegetales (tinturas,
extractos, digeridos, pulverizados u otros) donde se
involucren procedimientos tales como extracción,
destilación, purificación, secado, etc. Cada
preparado se considerará en su totalidad como un
principio activo. Los jugos, resinas, gomas, látex,
aceites esenciales o fijos serán considerados como
drogas vegetales de acuerdo al la definición (Art. 2°
de la Resolución 144/98). Se excluyen de esta
definición a los constituyentes aislados
químicamente definidos.
ANEXO 8 b) el sistema de aseguramiento de la calidad del
fabricante del material de partida;
MUESTREO DE MATERIALES DE PARTIDA
Y DE ACONDICIONAMIENTO c) las condiciones de fabricación en las que se
producen y controlan los materiales de partida;
PRINCIPIO - El muestreo es una operación
importante en la que sólo se toma una pequeña d) la naturaleza del material de partida y del
fracción de un lote. No pueden obtenerse medicamento en el que se lo utilizará.
conclusiones válidas basándose únicamente en
Bajo estas premisas, es posible que pueda
ensayos que se han realizado en muestras no
aceptarse un procedimiento validado que exima del
representativas. Por lo tanto, el muestreo constituye
ensayo de identidad de cada envase entrante de
una parte esencial del sistema de Aseguramiento de materia prima en los siguientes casos:
la Calidad.
e) materiales de partida que provienen de un
NOTA: el muestreo se trata en el Capítulo 6 de
elaborador o planta mono producto
la Norma de BPF (ítem 6.11 a 6.14). Este Anexo
complementario proporciona indicaciones f) materiales de partida que provienen
adicionales a la Norma sobre el muestreo de los directamente del elaborador y en envase sellado de
materiales de partida y los de acondicionamiento. un fabricante del que existe un historial de
cumplimiento y a quien el comprador (el elaborador
PERSONAL
del medicamento) le realiza auditorias regulares al
1. El personal que toma muestras debe recibir sistema de Aseguramiento de Calidad
capacitación inicial y continua en las disciplinas
Es improbable que un procedimiento pueda ser
pertinentes a la correcta toma de muestras. Dicha
satisfactoriamente validado en el caso de:
capacitación debe incluir:
g) materiales de partida suministrados por
a) planes de muestreo,
intermediarios, como ser agentes de venta (brokers),
b) procedimientos escritos de muestreo, donde el origen de elaboración es desconocido o no
c) técnicas y equipamiento para el muestreo, auditado por el elaborador del medicamento
h) materiales de partida destinados a ser
d) los riesgos de contaminación cruzada,
utilizados en productos parenterales
e) las precauciones a tomarse con respecto a
4. Puede evaluarse la calidad de un lote de
sustancias inestables y/o estériles,
material de partida tomando y ensayando una
f) la importancia de la evaluación del aspecto muestra representativa. A tales efectos pueden
visual de los materiales, envases y rótulos, utilizarse las muestras tomadas para el ensayo de
g) la importancia de registrar cualquier identidad. El número de muestras tomadas para la
circunstancia inesperada o inusual. preparación de una muestra representativa se debe
determinar estadísticamente y especificar en un plan
MATERIALES DE PARTIDA de muestreo. También debe definirse el número de
2. Normalmente, sólo puede asegurarse la muestras individuales que pueden mezclarse para
identidad de un lote completo de material de partida conformar una muestra compuesta teniendo en
si se toman muestras individuales de todos los cuenta: la naturaleza del material, el conocimiento
envases y se realiza un ensayo de identidad en cada del proveedor y la homogeneidad de la muestra
muestra. Se permite tomar muestras sólo de una compuesta.
proporción de los envases en los casos en que se MATERIAL DE ACONDICIONAMIENTO
haya establecido un procedimiento validado para
asegurar que ningún envase aislado de material de 5. El plan de muestreo de los materiales de
partida sea identificado incorrectamente en su acondicionamiento debe tener en cuenta al menos
rótulo. los siguientes puntos: la cantidad recibida, la
calidad requerida, la naturaleza del material (por ej.,
3. Dicha validación debe tener en cuenta al materiales de acondicionamiento primario y/o
menos los siguientes aspectos: materiales impresos), los métodos de producción y
a) naturaleza y calificación del elaborador, del el conocimiento del sistema de Aseguramiento de la
proveedor y del transporte y su conocimiento de los Calidad del fabricante de los materiales de
requerimientos de BPF de la industria farmacéutica; acondicionamiento basado en auditorias.
Debe determinarse estadísticamente el número
de muestras a tomar el cual deberá especificarse en
un plan de muestreo.
ANEXO 9 5. Debe verificarse la calidad de los materiales
recibidos en tanques a granel antes de transferirlos
ELABORACIÓN DE LÍQUIDOS Y
a los tanques de almacenamiento.
SEMISÓLIDOS
PRINCIPIO - Los líquidos y los semisólidos 6. Debe tomarse precauciones cuando se
transfieran materiales a través de tuberías a fin de
(cremas, pomadas, ungüentos, entre otros) pueden
garantizar que llegan al destino correcto.
ser particularmente susceptibles tanto a la
contaminación microbiana como de otros tipos 7. Los materiales que puedan desprender fibras
durante la elaboración. Por ello, deben adoptarse u otros contaminantes, como el cartón o las
medidas especiales para evitar cualquier tipo de tarimas de madera no deben ingresar a las áreas en
contaminación. las que existan productos o recipientes limpios
expuestos.
NOTA: la elaboración de líquidos y
semisólidos debe realizarse de acuerdo con la 8. Durante el llenado deben tomarse recaudos
Norma de BPF descripta y cuando corresponda para mantener la homogeneidad de mezclas,
con las otras normativas complementarias. El suspensiones, entre otros. Los procesos de mezcla
presente Anexo sólo enfatiza puntos específicos y llenado deben validarse. Debe prestarse especial
para la elaboración de este tipo de formas atención al inicio de un proceso de llenado,
farmacéuticas. después de interrupciones y al final del proceso, a
fin de asegurar la homogeneidad del producto.
LOCALES Y EQUIPAMIENTO
9. Cuando un producto terminado no es
1. Se recomienda el uso de sistemas cerrados
de procesamiento y de transferencia a fin de inmediatamente acondicionado debe especificarse
proteger el producto de la contaminación. Las y respetarse el período máximo de
almacenamiento así como las condiciones del
áreas de producción en las que se encuentran
mismo.
expuestos los productos o envases limpios
abiertos deben ser efectivamente ventiladas con
aire filtrado.
2. Los tanques, contenedores, tuberías y
bombas deben diseñarse e instalarse de manera tal
que puedan limpiarse fácilmente y de ser
necesario, sanitizarse. El diseño del equipamiento
debe minimizar, en particular, la cantidad de
puntos muertos o sitios en donde puedan
acumularse residuos y permitir el desarrollo
microbiano.
3. De ser posible, el uso de equipos de vidrio
debe evitarse. El acero inoxidable de alta calidad
debe ser el material de preferentemente elegido
para aquellas partes que están en contacto con el
producto, en la medida que el producto no se vea
afectado.
PRODUCCIÓN
4. Debe especificarse y
controlarse/monitorearse la calidad química y
microbiológica del agua utilizada en producción.
Se debe tener cuidado en el mantenimiento de los
sistemas de agua a los efectos de evitar el riesgo
de desarrollo microbiano. Después de una
sanitización química de los sistemas de agua, debe
implementarse un procedimiento de enjuague
validado a fin de asegurar que el agente
sanitizante ha sido eliminado de manera efectiva.
ANEXO 10 que la mayor parte de los componentes
ELABORACION DE MEDICAMENTOS farmacéuticos. Las especificaciones, el muestreo y
PARA INHALACIÓN EN AEROSOL los ensayos de control deben ser apropiados para este
PRESURIZADO CON DOSIFICADOR fin. Es de especial importancia auditar el sistema de
Aseguramiento de la Calidad del fabricante de las
PRINCIPIO - La elaboración de
válvulas.
medicamentos para inhalación en aerosoles
presurizados con válvulas dosificadoras requiere 5. Todos los fluidos (por ej. propelentes líquidos o
de ciertos recaudos especiales dada la particular gaseosos) deben filtrarse para eliminar las partículas
naturaleza de esta forma farmacéutica. Debe mayores a 0,2 micrones. De ser posible, debe
desarrollarse bajo condiciones que minimicen la realizarse la filtración inmediatamente antes del
contaminación microbiana y por partículas. Es de llenado.
vital importancia asegurar la calidad de los 6. Los envases y las válvulas deben limpiarse
componentes de las válvulas y en el caso de utilizando un procedimiento validado apropiado al
suspensiones también es esencial la uniformidad.
uso del producto a fin de asegurar la ausencia de
NOTA: la elaboración de aerosoles debe cualquier contaminante como adyuvantes de
realizarse de acuerdo con la Norma de BPF fabricación (por ej. lubricantes) o contaminantes
descripta y cuando corresponda con las otras microbiológicos indebidos. Después de la limpieza
normativas complementarias. El presente Anexo las válvulas deben conservarse en recipientes limpios
sólo enfatiza puntos específicos para la y cerrados y deben tomarse precauciones para no
elaboración de este tipo de formas farmacéuticas. introducir contaminación en el manipuleo posterior,
por ej. en la toma de muestras. Los envases deben
CONSIDERACIONES GENERALES
llegar limpios a la línea de llenado, o bien limpiarse
1. En la actualidad existen dos métodos en línea inmediatamente antes del llenado.
comunes de elaboración y llenado, a saber:
7. Deben tomarse precauciones para asegurar la
a) sistema de dos disparos (llenado uniformidad de las suspensiones en el punto del
a presión): el ingrediente activo es llenado y durante todo el proceso de llenado.
suspendido en un propelente de alto punto
8. Cuando se emplea un proceso de llenado de dos
de ebullición, la dosis se llena en el envase,
disparos, es necesario asegurar que ambos disparos
se engrampa la válvula y a través del
vástago de la válvula se inyecta el sean del peso adecuado a fin de lograr la composición
propelente de punto de ebullición más bajo correcta. Para este propósito, es aconsejable la
verificación del 100 % del peso en cada etapa.
para conformar el producto terminado. La
suspensión del ingrediente activo en el 9. Debe asegurarse la ausencia de pérdidas
propelente se mantiene fría para reducir la indebidas (fugas) mediante controles posteriores al
pérdida por evaporación. llenado. Cualquier ensayo para detectar pérdidas debe
realizarse de tal manera que evite la contaminación
b) proceso de un disparo (llenado
microbiana o la humedad residual.
en frío): el principio activo se suspende en
una mezcla de propelentes y se mantiene a
alta presión y/o a baja temperatura. Luego,
se llena el envase directamente con la
suspensión en un disparo.
LOCALES Y EQUIPAMIENTO
2. La elaboración y el llenado deben realizarse,
en la medida de lo posible, en un sistema cerrado.
3. En los casos en donde haya exposición de
productos o envases y sus accesorios limpios, el
área debe contar con aire filtrado, cumpliendo con
los requisitos de un ambiente de al menos Grado
D e ingreso a través de esclusas.
PRODUCCIÓN Y CONTROL DE CALIDAD
4. Las válvulas dosificadoras para aerosoles
constituyen una pieza de ingeniería más compleja
ANEXO 11 los rasgos principales sobre la forma que se utiliza
SISTEMAS INFORMÁTICOS la computadora y de la interacción de éste con otros
PRINCIPIO - La incorporación de sistemas sistemas y procedimientos.
informáticos dentro de los sistemas de 5. El conjunto de programas (software) es un
elaboración, incluyendo el almacenamiento, la componente crítico de un sistema informático. El
distribución y el control de calidad no altera la usuario de tales programas debe tomar todas las
necesidad de observar los principios medidas razonables para garantizar que han sido
fundamentales establecidos en otras partes de la elaborados de acuerdo con el sistema de
normativa. En los casos en que un sistema Aseguramiento de la Calidad.
informático reemplaza una operación manual,
6. Cuando corresponda, el sistema debe incluir
no se debe producir una disminución en la
una verificación automática de la entrada y
calidad del producto o en el aseguramiento de la tratamiento correcto de los datos.
calidad. Se debe tener en cuenta el riesgo de
perder aspectos del sistema anterior al reducir la 7. Antes de comenzar a utilizar un sistema que
participación humana. utilice una computadora, se debe comprobar
detalladamente y confirmar que es capaz de
PERSONAL conseguir los resultados deseados. Si va a sustituir
1. Es esencial que exista una estrecha a un sistema manual, ambos deben funcionar en
cooperación entre el personal responsable y el paralelo durante algún tiempo, como parte de su
personal relacionado con los sistemas ensayo y validación.
informáticos. Las personas que ocupen puestos 8. Los datos deben ser ingresados o
de responsabilidad deben contar con la modificados sólo por personas autorizadas para
capacitación adecuada para gestionar y usar
hacerlo. Entre los métodos adecuados para evitar la
sistemas que utilizan computadoras, dentro de
introducción no autorizada de datos se incluye la
su campo de responsabilidad. Esto debe incluir
utilización de claves, tarjetas codificadas, códigos
la garantía de que se dispone de una experiencia personales y acceso restringido a las computadoras
adecuada y de que se utiliza esta experiencia terminales. Debe establecerse un procedimiento
para aconsejar en aspectos de diseño,
definido para la emisión, cancelación y
validación, instalación y operación del sistema
modificación de la autorización para introducir y
informático.
modificar datos, incluyendo el cambio de
VALIDACIÓN contraseñas personales. Se deben considerar
sistemas que permitan el registro de intentos de
2. El alcance de la validación necesaria
acceso por personas no autorizadas.
dependerá de cierto número de factores entre los
que se puede señalar el uso al que vaya a 9. Cuando se ingresan datos críticos
destinarse el sistema, si la validación es manualmente (por ejemplo el peso y el número de
prospectiva o retrospectiva, y si se incorporan o lote de una materia prima durante la dispensación),
no nuevos elementos. Se debe considerar la debe verificarse de manera adicional la exactitud
validación como parte del ciclo completo de del registro que se está realizando. Dicha
vida de un sistema informático. Este ciclo verificación puede efectuarse por un segundo
comprende las etapas de planificación, operador o un medio electrónico validado.
especificación, programación, ensayo, puesta en 10. El sistema debe registrar la identidad de los
marcha, documentación, operación, monitoreo y
operadores que ingresen o confirmen datos críticos.
cambios.
La capacidad para modificar datos críticos debe
SISTEMA restringirse a personas designadas. Cualquier
alteración de un registro de datos críticos debe estar
3. Se debe prestar atención a la ubicación del
autorizada y debe registrarse junto con el motivo
equipamiento en condiciones adecuadas, en las
del cambio. Se debe considerar que el sistema cree
que no puedan interferir con el sistema factores
un registro completo de todas las entradas y
extraños.
modificaciones (“registro de auditoría”).
4. Se debe elaborar y mantener actualizada
11. Las alteraciones en un sistema o programa
una descripción por escrito detallada del sistema
informático se deben realizar únicamente, de
(incluyendo diagramas según corresponda). Se
acuerdo con un procedimiento definido, que debe
deben describir los principios, objetivos,
medidas de seguridad y alcance del sistema y incluir la posibilidad de validar, controlar, aprobar
e implementar el cambio. Esta alteración sólo se
debe llevar a cabo con el consentimiento previo
de la persona responsable de la parte del sistema
en cuestión y se debe registrar dicha alteración.
Cualquier modificación significativa debe
validarse.
12. A los efectos de auditar la calidad, debe
ser posible obtener copias impresas fieles de los
datos almacenados electrónicamente.
13. Los datos se deben proteger por medios
físicos o electrónicos contra daños intencionales
o accidentales, de acuerdo con el ítem 4.9 del
Capítulo 1 de la presente Normativa. Se debe
verificar que los datos almacenados sean
accesibles, duraderos y exactos. Si se proponen
cambios en los equipos de computación o sus
programas, se deben implementar las
verificaciones antes mencionadas con una
frecuencia adecuada para el medio de
almacenamiento que se utilice.
14. Se deben proteger los datos mediante
una copia de seguridad (“back-up”) a intervalos
regulares. Los datos resultantes deben
almacenarse tanto tiempo como sea necesario en
un lugar separado y seguro.
15. Debe disponerse de soluciones
alternativas apropiadas para los sistemas que
necesiten ser operados en caso de avería. El
tiempo necesario para poner en marcha el
sistema alternativo debe estar relacionado con la
posible urgencia con que sea necesario
utilizarlo. Por ejemplo, la información necesaria
para efectuar un retiro, debe estar disponible lo
antes posible.
16. Se deben definir y validar los
procedimientos a seguir, en caso de falla o
interrupción del sistema. Se debe registrar
cualquier falla y las acciones correctivas
tomadas en consecuencia.
17. Se debe establecer un procedimiento
para registrar y analizar los errores y para
permitir que se tomen las acciones correctivas.
18. En caso de contratar empresas externas
para proporcionar un servicio informático, debe
existir un acuerdo formal que incluya una
delimitación clara de responsabilidad de dichas
empresas (ver Capítulo 7).
19. Cuando la liberación de un lote para la
venta o distribución se realiza mediante un
sistema informático, el sistema debe ser capaz
de reconocer que sólo la persona autorizada
puede liberar los lotes y debe identificar y
registrar claramente a la persona que los libera.
ANEXO 12 ejemplo por el contenedor más alejado de la fuente
de irradiación).
USO DE LA RADIACIÓN IONIZANTE EN
LA ELABORACIÓN DE 3. La dosis requerida, incluyendo los límites
MEDICAMENTOS justificados, se especificarán en la autorización de
comercialización del producto.
PRINCIPIO - La radiación ionizante puede
utilizarse en el proceso de elaboración con DOSIMETRÍA
diferentes finalidades, incluyendo la reducción
4. La dosimetría se define como la medición de
de la carga microbiológica y esterilización de
la dosis absorbida mediante el uso de dosímetros.
materiales de partida, de acondicionamiento o
Tanto la comprensión como el correcto uso de la
productos y el tratamiento de hemoderivados. técnica son esenciales para la validación, puesta a
Si la Autoridad Sanitaria no ha aprobado, punto y control del proceso.
para el producto terminado, el tratamiento de
radiación ionizante, el mismo no puede 5. Cada lote de dosímetro de rutina, empleados
utilizarse para subsanar deficiencias de BPF en durante el proceso, debe ser calibrado usando un
las etapas de producción. estándar nacional o internacional. El período de
Existen dos tipos de procesos de irradiación: validez de la calibración se debe especificar y
irradiación Gamma mediante una fuente justificar. Se deben adherir etiquetas de
radiactiva e irradiación con Electrones de alta identificación con estos datos a los mismos.
energía (radiación Beta) mediante un acelerador. 6. Se debe utilizar el mismo instrumento para
Irradiación Gamma - Se pueden emplear establecer la curva de calibración de los dosímetros
dos modos de procesamiento diferentes: de rutina y para medir el cambio en sus
absorbancias después de la irradiación. Si se
(i) Modo por lote: se disponen los
utilizara un instrumento diferente, se debe
productos en puntos fijos alrededor de la fuente establecer la absorbancia absoluta de cada uno de
de radiación. Mientras se los expone no se ellos.
pueden realizar actividades de carga o descarga.
7. Dependiendo del tipo de dosímetro
(ii) Modo continuo: un sistema automático
empleado, se deben tener en cuenta posibles causas
transporta los productos a la celda de radiación, de inexactitud, incluyendo el cambio en el
los hace atravesar la fuente de radiación contenido de humedad, el de temperatura, el tiempo
expuesta con una trayectoria definida y a una
transcurrido entre la irradiación y la medición y el
velocidad adecuada y luego los extrae de la
valor de la dosis.
celda.
8. La longitud de onda del instrumento utilizado
Irradiación de electrones - Los productos para medir el cambio en la absorbancia de los
son transportados pasando por un haz, continuo
dosímetros y el utilizado para medir su amplitud
o por pulsos de electrones de alta energía
deben encontrarse sujetos a verificaciones regulares
(radiación Beta). El haz, con movimientos
de calibración a intervalos establecidos, en función
oscilantes hacia delante y atrás, impacta sobre el
de su estabilidad, fin y uso.
material a su paso.
VALIDACIÓN DEL PROCESO
RESPONSABILIDADES
9. La validación es la acción de demostrar que
1. El tratamiento mediante irradiación lo el proceso alcanza los resultados esperados, por
puede llevar a cabo el elaborador farmacéutico o ejemplo, la absorción del producto de una dosis pre
un operador de una instalación de radiación
determinada.
contratada (“elaborador contratado”), para lo
que ambos deben poseer la habilitación de 10. La validación debe incluir el mapeo de la
elaboración correspondiente. dosis para establecer la distribución de las dosis
absorbidas por los productos ubicados según un
2. El elaborador farmacéutico tiene la
patrón de carga definido dentro de los contenedores
responsabilidad de la calidad del producto
de irradiación.
incluyendo el logro del objetivo de la
irradiación. El operador contratado de la 11. La especificación del proceso de irradiación
instalación de irradiación tiene la debe incluir, al menos, lo siguiente:
responsabilidad de asegurar que la dosis de a) los detalles del acondicionamiento del
radiación, requerida por el elaborador, sea producto;
recibida por todos los contenedores (por
b) los patrones de carga del producto Irradiadores Gamma
dentro del contenedor de irradiación. Se debe
Diseño
tener especial recaudo si se mezclan productos
diferentes dentro de un mismo contenedor, ya 14. La dosis recibida por una parte en particular
que un producto más denso puede absorber de un contenedor de irradiación, desde cualquier
menos dosis o bien impedir que el producto punto específico de la fuente o irradiador depende
cercano al mismo reciba la dosis principalmente de los siguientes factores:
correspondiente. Por lo tanto, se debe a) la actividad y geometría de la fuente;
especificar y validar cada mezcla de producto.
b) la distancia desde la fuente hasta el
c) El patrón de carga de los contenedores contenedor;
de irradiación alrededor de la fuente (modo por
lote) o la trayectoria a través de la celda (modo c) la duración de la irradiación controlada
continuo); por el temporizador o la velocidad de la cinta
transportadora;
d) los límites máximos y mínimos de la
dosis absorbida en el producto [y dosimetría de d) la composición y densidad del material,
rutina asociada]; incluyendo otros productos, entre la fuente y la
parte a tratar del contenedor.
e) los límites máximos y mínimos de las
dosis absorbidas en el contenedor de irradiación 15. Además, la dosis absorbida total depende de
y dosimetría de rutina asociada para monitorear la trayectoria de los contenedores a través del
esta dosis absorbida; irradiador continuo o del patrón de carga en un
irradiador de lote y del número de ciclos de
f) otros parámetros de proceso, exposición.
incluyendo la tasa de dosis, tiempo máximo de
exposición, número de exposiciones, entre 16. Para un irradiador continuo con una
otros. trayectoria fija o para un irradiador de lote con un
patrón de carga fijo, con una potencia de fuente
Cuando la irradiación se aplica mediante determinada y tipo de producto dado, el parámetro
contrato, al menos los puntos (d) y (e) de la clave de planta controlado por el operador es la
especificación del proceso de irradiación deben velocidad del transportador o el tiempo prefijado
indicarse en el mismo. (temporizador).
PUESTA A PUNTO DE LA PLANTA Mapeo de dosis
Condiciones Generales 17. Para el procedimiento de mapeo de dosis, el
La puesta a punto es el ejercicio de obtener y proceso puede ser realizado con contenedores de
documentar evidencia de que la planta de irradiación en los que se ubican productos placebos
irradiación funciona de acuerdo con los límites o productos representativos de densidad uniforme.
predeterminados cuando se la opere en Los dosímetros se deben colocar en por lo menos
correspondencia con la especificación del tres contenedores de irradiación que serán
proceso. En el contexto de este anexo, los expuestos al irradiador, rodeados por contenedores
límites predeterminados son las dosis máximas cargados en forma similar o productos placebos. Si
y mínimas diseñadas para ser absorbidas por el los productos no se encuentran ubicados
contenedor de irradiación. No se permite una uniformemente, se deben colocar dosímetros en un
variación en la operación de la planta que número mayor de contenedores.
pudiera ocasionar la aplicación de una dosis al 18. La ubicación de los dosímetros depende del
contenedor fuera de esos límites, sin el tamaño del contenedor de irradiación. Por ejemplo,
conocimiento del operador. para contenedores de hasta 1 x 1 x 0,5 m, es
13. La puesta a punto debe incluir los apropiada una rejilla tridimensional de 20cm en
siguientes elementos: todo el contenedor incluyendo las superficies
exteriores. Si se conocen, por ensayos previos, los
a) diseño, sitios de impacto en donde se obtienen las dosis de
b) mapeo de la dosis, irradiación mínimas y máximas, se pueden eliminar
algunos dosímetros de las posiciones de dosis
c) documentación,
promedio y se los puede reubicar formando una
d) requerimiento de verificación de la rejilla de 10cm en las áreas de dosis extrema.
puesta a punto.
19. Los resultados de este procedimiento Mapeo de la dosis
proporcionan (para un determinado conjunto de 25. Para el procedimiento de mapeo de la dosis,
parámetros de funcionamiento de la planta, se deben colocar los dosímetros entre capas de
densidad del producto y patrón de carga) los
placas homogéneas absorbentes que conformen los
datos de dosis mínimas y máximas absorbidas
productos placebos o entre capas de productos
por el producto y por la superficie del
representativos de densidad uniforme, de manera
contenedor.
que puedan realizarse al menos diez mediciones
20. Se deben utilizar dosímetros de dentro del rango máximo de los electrones.
referencia para la realización del procedimiento Asimismo, se deben tener en cuenta los puntos 18 a
de mapeo de la dosis debido a su mayor 21.
precisión. Los dosímetros de rutina están
26. Los parámetros del irradiador deben
permitidos cuando se colocan dosímetros de mantenerse constantes, monitoreados y registrados
referencia al lado de los mismos en las durante el mapeo de la dosis. Se deben conservar
posiciones previstas de dosis mínima y máxima
los registros, como así también, los resultados de la
y en la posición de monitoreo de rutina en cada
dosimetría y otros registros generados.
uno de los contenedores de irradiación
replicados. Los valores observados de las dosis Verificación de la puesta a punto
tendrán una incertidumbre aleatoria asociada 27. La puesta a punto se debe verificar cuando
que puede estimarse sobre la base de las existe un cambio en el proceso o en el irradiador
variaciones en las mediciones replicadas. que pudiere afectar la distribución de dosis al
21. La dosis mínima necesaria para asegurar contenedor de irradiación (por ej. cambio barras
que todos los contenedores de irradiación radiactivas). El alcance de la verificación depende
reciban al menos la dosis mínima requerida, de la dimensión del cambio en el irradiador o la
debe ser establecida teniendo en cuenta la carga que haya tenido lugar. En caso de duda, se
variabilidad aleatoria de los dosímetros de debe realizar una nueva puesta a punto.
rutina utilizados. LOCALES
22. Los parámetros del irradiador se deben 28. Los locales deben ser diseñados y operados
mantener constantes, monitoreados y registrados para segregar los contenedores irradiados de los no
durante el mapeo de la dosis. Se deben irradiados, a fin de evitar su contaminación
conservar estos registros como así también, los cruzada. Cuando los materiales se manejen dentro
resultados de la dosimetría y otros registros de contenedores de irradiación cerrados, no es
generados. necesario separar los materiales farmacéuticos de
Irradiadores de haz de electrones los no farmacéuticos, siempre y cuando no exista
Diseño ningún riesgo de contaminación entre ellos.
23. La dosis absorbida por una porción de un Se debe excluir cualquier posibilidad de
producto irradiado depende principalmente de contaminación de los productos con los núcleos
los siguientes factores: radiactivos de la fuente.
a) las características del haz que incluyen PROCESAMIENTO
energía del electrón, corriente del haz promedio, 29. Los contenedores de irradiación se deben
amplitud y uniformidad del barrido; acondicionar de acuerdo con su patrón o patrones
b) la velocidad del transportador; de carga específicos establecidos durante la
validación.
c) la composición y densidad del
producto; 30. Durante el proceso, se debe monitorear la
dosis de radiación aplicada a los contenedores de
d) la composición, densidad y espesor del
irradiación utilizando procedimientos de dosimetría
material entre la ventana de salida y la parte
validados. La relación entre esta dosis y la dosis
tratada del producto;
absorbida por el producto dentro del contenedor se
e) la distancia entre la ventana de salida y debe establecer previamente durante la validación
el contenedor. del proceso y la puesta a punto de la planta.
24. Los parámetros clave controlados por el 31. Los indicadores de radiación se pueden
operador son las características del haz y la utilizar como ayuda para diferenciar los
velocidad del transportador. contenedores irradiados de los no irradiados. No se
deben utilizar como único medio de etiquetas adheridos en los instrumentos de
diferenciación o como indicadores de un medición.
proceso satisfactorio.
Irradiadores de haz de electrones
32. El proceso de utilizar cargas diferentes
40. Se debe colocar un dosímetro en cada
de contenedores dentro de la celda de
contenedor.
irradiación sólo se puede realizar cuando existen
datos fidedignos, ya sea de los ensayos de la 41. Debe existir un registro continuo de la
puesta a punto u otra evidencia, de que la dosis corriente promedio del haz, la energía del electrón,
de radiación recibida por cada contenedor la amplitud de barrido y la velocidad del
individual se encuentra dentro de los límites transportador. Dichas variables, exceptuando la
especificados. velocidad del transportador, se necesitan controlar
dentro de los límites establecidos durante la puesta
33. Cuando la dosis de radiación requerida
a punto, puesto que son pasibles de un cambio
deba ser aplicada, según el diseño, durante más
instantáneo.
de una exposición o paso a través de la fuente,
se debe contar con el consentimiento del titular DOCUMENTACIÓN
de la autorización de comercialización y se debe 42. Las cantidades de contenedores recibidos,
convenir un período de tiempo predeterminado irradiados y despachados debe ser conciliadas entre
para hacerlo. Las interrupciones no planificadas sí y con la documentación relacionada. Cualquier
durante la irradiación, sobretodo si debido a discrepancia se debe informar y resolver.
ellas el proceso de irradiación se extiende más
allá del período acordado, se deben notificar al 43. El operador de la planta de irradiación debe
titular de la autorización de la comercialización. certificar por escrito el rango de dosis recibida por
cada contenedor irradiado dentro de un lote o
34. Los productos no irradiados se deben entrega.
separar de los irradiados en todo momento. Los
métodos para hacerlo incluyen el uso de 44. Los registros de procesos y controles para
indicadores de radiación (punto 31) y el cada lote de irradiación deben ser verificados y
adecuado diseño de los locales (punto 28). firmados por la persona responsable designada y se
deben conservar. El método y lugar de
Irradiadores Gamma conservación debe ser convenido entre el operador
35. Para el modo de procesamiento continuo, de la planta y el titular de la autorización de
los dosímetros se deben colocar de tal manera comercialización.
que al menos dos queden expuestos a la 45. La documentación asociada con la
radiación todo el tiempo. validación y la puesta a punto de la planta se debe
36. Para los modos por lotes, al menos dos conservar hasta un año después de la fecha de
dosímetros se deben ubicar en las posiciones vencimiento o, al menos, cinco años después de la
predeterminadas de dosis mínima. liberación del último producto procesado por la
planta, según sea el tiempo mayor.
37. Para el proceso continuo, debe existir un
indicador de la posición correcta de la fuente y MONITOREO MICROBIOLÓGICO
un interbloqueador entre la posición de la fuente 46. El monitoreo microbiológico es
y el movimiento del transportador. La velocidad responsabilidad del elaborador farmacéutico. Puede
del transportador se debe controlar y registrar comprender el monitoreo ambiental del lugar donde
continuamente. se elabora el producto y un monitoreo pre-
38. Para el proceso por lotes, se debe irradiación del mismo, conforme lo especifique la
controlar y registrar el movimiento de la fuente autorización de comercialización.
y los tiempos de exposición para cada lote.
39. Para una determinada dosis deseada, el
temporizador o la velocidad del transportador
requieren el ajuste en función de la vida útil de
la fuente (decaimiento o uso de fuente
adicional). Se debe registrar y respetar el
período de validez del temporizador o la
velocidad. Estos datos deben encontrarse en
ANEXO 13 La mayor complejidad en las operaciones de
ELABORACION DE PRODUCTOS elaboración hace necesario un sistema de
FARMACEUTICOS DE INVESTIGACION calidad altamente efectivo.
El anexo también incluye pautas sobre la
PRINCIPIO - Los productos farmacéuticos
realización de pedidos, el envío y la devolución
de investigación deben elaborarse en
de insumos clínicos, que se encuentran
cumplimiento con los principios y directivas
detalladas en la Norma de Buenas Prácticas de relacionadas y son complementarias a las
Fabricación de Medicamentos. Cuando normas sobre Buenas Prácticas Clínicas.
corresponda, deben tenerse en cuenta además,
otras normativas vigentes, aplicables a la etapa
de desarrollo del producto. Los procedimientos
deben ser flexibles a fin de adecuarse a los
cambios a medida que avanza el conocimiento
del proceso y deben ser apropiados para cada
etapa de desarrollo del producto.
En los ensayos clínicos puede existir un
riesgo adicional para los sujetos participantes,
en comparación con los pacientes tratados con
productos comercializados. La aplicación de la
Norma de BPF en la elaboración de productos
farmacéuticos en investigación tiene la finalidad
de asegurar que los sujetos del ensayo no sean
expuestos a ningún riesgo y que los resultados
de los ensayos clínicos no se vean afectados por
una seguridad, calidad o eficacia insuficientes,
derivadas de una elaboración inadecuada. De la
misma manera, se pretende asegurar que exista
consistencia entre lotes del mismo producto
farmacéutico en investigación utilizado en el
mismo o en diferentes ensayos clínicos y que
los cambios durante el desarrollo de un producto
farmacéutico en investigación se registren y
justifiquen adecuadamente
La elaboración de productos farmacéuticos
en investigación conlleva una mayor
complejidad en comparación con los productos
comercializados, debido a: la inexistencia de
procedimientos sistemáticos, la variedad de
diseños de ensayos clínicos y, en consecuencia,
los diferentes diseños de acondicionamiento, la
necesidad, con frecuencia, de ensayos aleatorios
y ciegos y el mayor riesgo de contaminación
cruzada, confusión de productos y mezcla.
Además, puede existir un conocimiento parcial
sobre la actividad y toxicidad del producto y
puede no disponerse de la completa validación
del proceso o, bien pueden utilizarse productos
comercializados que hayan sido
reacondicionados o modificados de alguna
manera.
Estos desafíos requieren personal con un
amplio conocimiento y formación en la
aplicación de las normas de BPF en productos
farmacéuticos en investigación. Asimismo, se
requiere la cooperación de los patrocinadores
del ensayo, quienes asumen la responsabilidad
total de todos los aspectos del ensayo clínico,
incluyendo la calidad del producto farmacéutico
en investigación.
NOTA: los sujetos participantes de un Ensayo clínico - Cualquier investigación en
ensayo pueden recibir productos que no sean los humanos con el fin de descubrir o verificar los
del ensayo sino placebos o comparadores. efectos clínicos, farmacológicos y/u otros
Dichos productos pueden utilizarse como farmacodinámicos de un producto de
medicación de rescate o soporte para investigación y/o de identificar cualquier
prevención, diagnóstico o tratamiento y/o ser reacción adversa a un producto en investigación
necesarios para asegurar que el sujeto reciba y/o estudiar la absorción, distribución,
atención médica adecuada. Asimismo, pueden metabolismo y excreción de uno o más
utilizarse de acuerdo con el protocolo para productos farmacéuticos de investigación con el
inducir una respuesta fisiológica. Estos objeto de determinar su seguridad y/o eficacia.
productos no se hayan comprendidos en la
Envase primario - Envase u otra forma de
definición de productos farmacéuticos en
acondicionamiento que se encuentre en contacto
investigación y pueden ser suministrados por el directo con el producto farmacéutico ya sea de
patrocinador o el investigador. El patrocinador investigación o no.
debe asegurar que cumplen con la notificación /
solicitud de autorización para realizar el ensayo Envío - Operación de acondicionamiento
y que son de la calidad apropiada para los fines para envío y transporte los productos
del mismo, teniendo en cuenta el origen de los farmacéuticos para ensayos clínicos.
materiales, sean o no objeto de una autorización Investigador - Persona responsable de la
de comercialización y hayan sido realización del ensayo clínico en el sitio donde
reacondicionados o no. Se recomienda el se lleva a cabo. Si un ensayo es conducido por
asesoramiento y la participación de la Persona un equipo de individuos en el sitio de
Autorizada en la tarea en cuestión. investigación, el investigador es el líder
GLOSARIO responsable del equipo y también puede recibir
el nombre de investigador principal.
Archivo de Especificación de Producto -
Archivo de referencia que contiene o refiere a Patrocinador - Individuo, empresa,
los archivos que contienen toda la información institución u organización responsable de la
necesaria para redactar instrucciones escritas iniciación, administración y/o financiamiento de
detalladas sobre el procesamiento, un ensayo clínico.
acondicionamiento, ensayos de control de Pedido/Orden - Instrucción de procesar,
calidad, liberación de lotes y envío de un acondicionar y/o enviar un cierto número de
producto farmacéutico en investigación. unidades de producto/s farmacéutico/s de
Ciego / Enmascaramiento - Procedimiento investigación.
en el que uno o más participantes del ensayo Producto comparador - Producto de
carecen de información sobre la asignación o investigación o comercializado (es decir de
asignaciones del tratamiento. El ciego simple se control activo), o placebo, utilizado como
refiere, por lo general, a que el o los sujetos no referencia en un ensayo clínico.
tienen el conocimiento y el doble ciego significa
que sujeto/s, investigador/es, monitor/es y en Producto farmacéutico de investigación -
algunos casos, analista/s de datos desconocen Forma farmacéutica de una sustancia activa o
la/s asignación/es del tratamiento. En relación al placebo que se evalúa o utiliza como referencia
producto farmacéutico de investigación, ciego en un ensayo clínico, incluyendo un producto
significa el enmascaramiento deliberado de la con autorización de comercialización cuando se
identidad del producto, de acuerdo con las lo utiliza o prepara (formulado o acondicionado)
instrucciones del patrocinador. El de forma diferente a la autorizada o cuando se lo
desenmascaramiento significa la revelación de utiliza en una indicación no autorizada o, bien,
la identidad de los productos objeto del ciego. cuando se lo emplea para obtener mayor
información sobre la forma autorizada.
Código de Randomización - Listado que
identifica el tratamiento asignado a cada sujeto Randomización - Proceso de asignación de
resultante del proceso de randomización. los sujetos del ensayo a grupos de tratamiento o
control, utilizando un elemento de aleatoriedad
Elaborador/Importador de Productos para determinar las asignaciones, a fin de
Farmacéuticos de Investigación - Cualquier reducir el sesgo.
titular de una habilitación de elaboración /
importación. GESTIÓN DE CALIDAD
Empaque/Acondicionamiento secundario - 1. El sistema de calidad, diseñado,
Estuche en que se coloca el envase de implementado y comprobado por el elaborador
acondicionamiento primario. o el importador debe ser descriptos en
procedimientos escritos disponibles para el
patrocinador, teniendo en cuenta los principios debe tener en cuenta cualquier implicancia en la
de las Normas de BPF y las normativas calidad del producto como la estabilidad y la
aplicables a los productos farmacéuticos de bioequivalencia.
investigación.
7. Debe registrarse la justificación de las
2. Las especificaciones del producto y las modificaciones (cambios) y se deben investigar
instrucciones de elaboración pueden y documentar las consecuencias de una
modificarse durante el desarrollo, pero se debe modificación en la calidad de un producto y en
mantenerse un absoluto control y trazabilidad los ensayos clínicos en curso.
sobre dichas modificaciones.
Orden
PERSONAL 8. El pedido debe solicitar el procesamiento
3. Todo el personal involucrado con y/o el acondicionamiento de un cierto número
productos farmacéuticos de investigación debe de unidades y/o su envío y debe ser entregado al
recibir la capacitación adecuada en los elaborador por el patrocinador o en su
requerimientos específicos de ese tipo de representación. Debe ser por escrito (aunque se
producto. podrá transmitir por medios electrónicos) y lo
suficientemente preciso y detallado para evitar
4. El responsable técnico debe ser, en
toda ambigüedad. Debe ser formalmente
particular, responsable de asegurar que los
autorizado y debe referirse al Archivo de
sistemas implementados cumplan con los
requerimientos del presente Anexo y, por lo Especificación de Producto y al protocolo de
tanto, debe poseer un amplio conocimiento de ensayo clínico pertinente, según corresponda.
los procesos de desarrollo farmacéutico y Archivo de Especificación de Producto
procedimientos de ensayos clínicos. 9. El Archivo de Especificación de Producto
LOCALES Y EQUIPAMIENTO (ver glosario) debe actualizarse continuamente
según el avance del desarrollo del producto,
5. Es posible que no se comprenda
asegurando la trazabilidad a las versiones
plenamente la toxicidad, la actividad y el
potencial sensibilizante de los productos anteriores. Debe incluir o hacer referencia a los
farmacéuticos de investigación, razón por la siguientes documentos:
cual, se incrementa la necesidad de minimizar a) especificaciones y métodos analíticos
todos los riesgos de contaminación cruzada. El de los materiales de partida, materiales de
diseño del equipamiento y los locales, los acondicionamiento, producto intermedio, a
métodos de inspección / evaluación y los límites granel y terminado.
de aceptación a ser utilizados después de la
b) métodos de elaboración.
limpieza deben contemplar la naturaleza de
estos riesgos. Cuando corresponda, debe c) controles en proceso y métodos de
considerarse el trabajo en campaña. Asimismo, ensayo.
se debe tener en cuenta la solubilidad del d) copia del rótulo aprobado.
producto en las decisiones concernientes a la
elección del agente de limpieza. e) protocolos de los ensayos clínicos
pertinentes y códigos de randomización, según
DOCUMENTACIÓN corresponda.
Especificaciones e instrucciones f) acuerdos técnicos correspondientes con
6. Las especificaciones (de la materia prima, los contratantes, según corresponda.
materiales de acondicionamiento, productos g) datos de estabilidad.
intermedios, a granel y productos terminados),
las fórmulas maestras de elaboración y las h) condiciones de almacenamiento y
instrucciones de fabricación y envío.
acondicionamiento deben ser suficientemente Este listado no es exclusivo ni completo, los
claras y basadas en los conocimientos contenidos varían según el producto y la etapa
actualizados. Se las deberá reevaluar del desarrollo. La información debe ser la base
periódicamente durante el desarrollo y para la evaluación de la aptitud para la
actualizarse conforme sea necesario. Cada certificación y liberación de un lote en particular
nueva versión debe tener en cuenta los últimos por parte de la Persona Autorizada y debe, por
datos, la tecnología utilizada en el momento, los tanto, encontrarse disponible para dicha
requerimientos regulatorios y de farmacopeas y persona. Cuando diferentes etapas de
debe permitir la trazabilidad al documento elaboración se llevan a cabo en sitios diferentes,
anterior. Todas las modificaciones deben bajo la responsabilidad de distintas Personas
efectuarse según un procedimiento escrito, que Autorizadas, se acepta conservar archivos
separados limitados a la información pertinente entre diferentes lotes de materiales de
de las actividades de los sitios respectivos. acondicionamiento.
Fórmula Maestra e Instrucciones de Operaciones de elaboración
Fabricación 16. Durante el desarrollo se deben identificar
10. Para cada operación de elaboración o los parámetros críticos y deben utilizarse
suministro deben existir instrucciones escritas fundamentalmente los controles en proceso para
claras y apropiadas, como así también registros mantener el proceso bajo control. Pueden
escritos. Cuando una operación no es repetitiva, deducirse parámetros de producción y los
puede no ser necesario elaborar la fórmula controles en proceso provisorios a partir de la
maestra ni las instrucciones de fabricación. Los experiencia previa, incluyendo la obtenida de un
registros son de vital importancia para la trabajo de desarrollo anterior. Se requiere una
preparación de la versión final de los cuidadosa consideración por parte del personal
documentos a utilizar en la elaboración de clave, a fin de formular las instrucciones
rutina, una vez otorgada la autorización de necesarias y adaptarlas continuamente a la
comercialización. experiencia obtenida en la producción. Los
11. La información contenida en el Archivo parámetros identificados y controlados deben
ser justificados en base al conocimiento
de Especificación de Producto debe utilizarse
disponible en el momento.
para elaborar las instrucciones escritas
detalladas sobre la fabricación/procesamiento, 17. Los procesos de producción para los
acondicionamiento, ensayos de control de productos farmacéuticos de investigación
calidad y condiciones de almacenamiento y pueden no estar validados en el mismo grado
envío. que para la producción de rutina, sin embargo,
se deben calificar los locales y el equipamiento.
Instrucciones de Acondicionamiento
Para los productos estériles, la validación de los
12. Por lo general, los productos procesos de esterilización debe cumplir con el
farmacéuticos en investigación se acondicionan mismo estándar que de los medicamentos
de manera individual para cada sujeto autorizados para la comercialización.
participante del ensayo clínico. El número de Asimismo, cuando corresponda, se debe
unidades a ser acondicionadas debe demostrar la inactivación/eliminación de un
especificarse antes del inicio de las operaciones virus u otras impurezas de origen biológico, a
de acondicionamiento, incluyendo también las los efectos de garantizar la seguridad de los
unidades necesarias para realizar el control de productos biotecnológicos, siguiendo los
calidad y las muestras de retención a conservar. principios científicos y técnicas definidos en las
Se deben realizar las conciliaciones necesarias normas concernientes a esta materia.
para asegurar que cada etapa de procesamiento
se ajusta a la cantidad correcta de cada 18. La validación de los procesos asépticos
presenta especiales problemas cuando el tamaño
producto.
del lote es pequeño; en estos casos, el número
Registros de elaboración, control y de unidades llenadas debe ser el máximo
acondicionamiento número llenado en la producción. De ser
13. Los registros de lotes deben ser lo posible, y por otra parte compatible con la
suficientemente detallados para que pueda operación simulada, se debe llenar un número
reconstruirse de manera exacta la secuencia de mayor de unidades con medios de cultivo, para
las operaciones. Dichos registros deben proporcionar mayor nivel de confianza en los
contener todas las observaciones pertinentes que resultados obtenidos. Por lo general, el llenado y
justifiquen los procedimientos utilizados, sellado son operaciones manuales o
cualquier modificación efectuada, que aumente semiautomáticas hecho que representan grandes
el conocimiento del producto y mejore las desafíos para la esterilidad exigiendo mayor
operaciones de elaboración. atención a la capacitación del personal y la
validación de la técnica aséptica con cada
14. Los registros de lote se deben conservar operario que intervenga.
al menos hasta dos años después de que haya
sido registrado el producto. Principios aplicables al producto
comparador
PRODUCCIÓN
19. Si se modifica un producto, se debe
Materiales de acondicionamiento disponer de datos (por ej. estabilidad, disolución
15. Las especificaciones y las pruebas de comparativa, biodisponibilidad) para demostrar
control de calidad deben incluir medidas de que tales cambios no alteran significativamente
protección contra el desenmascaramiento las características de calidad originales del
accidental causado por cambios en el aspecto producto.
20. La fecha de vencimiento establecida para de la línea, controles en proceso realizado por
el producto comparador en su envase original personal adecuadamente capacitado.
puede no ser aplicable al producto cuando éste
25. El acondicionamiento debe garantizar
se haya reacondicionado en un envase diferente,
que el producto farmacéutico de investigación
ya que quizás, no ofrezca protección equivalente
permanezca en buena condición durante el
o no sea compatible con el producto. El
transporte y almacenamiento en destinos
patrocinador o alguien en su representación intermedios. Cualquier apertura o alteración en
debe determinar una fecha límite de uso el empaque externo durante el transporte debe
teniendo en cuenta la naturaleza del producto,
ser fácilmente detectable.
las características del envase y las condiciones
de almacenamiento a las que pueda ser sometida Rotulado
la unidad. Dicha fecha debe justificarse y nunca 26. La tabla 1 resume el contenido de los
ser posterior a la fecha de vencimiento del puntos 26 a 30 que se describen a continuación.
envase original. Debe existir compatibilidad La siguiente información se debe incluir en los
entre la fecha de vencimiento y la duración del rótulos, a menos que su ausencia sea
ensayo clínico. debidamente justificada, por ej. si se utiliza un
Operaciones de enmascaramiento sistema de randomización electrónico
centralizado:
21. En los casos en los que se enmascaran
los productos se deben implementar sistemas a) nombre, domicilio y número de teléfono
que aseguren que el enmascaramiento se ha del patrocinador, organización de investigación
logreado y mantenido, al tiempo que permita contratada o investigador (el contacto principal
cuando sea necesario, la identificación de para dar información sobre el producto, ensayo
productos enmascarados, incluyendo los clínico y desenmascaramiento de emergencia);
números de lotes de los productos antes de la b) forma farmacéutica, vía de
operación de enmascaramiento. Asimismo, debe administración, cantidad de unidades de dosis y
ser posible la rápida identificación de los en el caso de ensayos abiertos, nombre /
productos en caso de emergencia. identificador y concentración / potencia;
Código de randomización c) el número de lote o código para
22. Los procedimientos deben describir la identificar el contenido y la operación de
generación, seguridad, distribución, acondicionamiento;
manipulación y conservación de los códigos de d) código de referencia del ensayo que
randomización utilizados en el permita la identificación del ensayo, sitio de
acondicionamiento de los productos de ensayo, investigador y patrocinador, si no figura
investigación, como así también, los en otro lugar;
mecanismos de decodificación. Se deben llevar
los registros adecuados correspondientes. e) número de identificación / tratamiento
del sujeto participante del ensayo y, de
Acondicionamiento corresponder, número de visita;
23. Durante el acondicionamiento de f) nombre del investigador (si no está
productos farmacéuticos de investigación, puede incluido en a) ó d));
ser necesario manipular diferentes productos en
la misma línea de acondicionamiento al mismo g) instrucciones de uso (se puede hacer
tiempo. Se debe minimizar el riesgo de mezcla y referencia al prospecto u otro documento
confusión de productos mediante el uso de explicativo destinado al sujeto participante del
procedimientos adecuados y/o equipamiento ensayo o a la persona que administre el
especializado según corresponda, como así producto);
también, mediante la capacitación específica del h) la frase “Para ensayo clínico
personal. únicamente” o similar;
24. Probablemente, el acondicionamiento y i) condiciones de almacenamiento;
el rotulado de los productos farmacéuticos de
investigación sean más complejos y propensos a j) período de uso (fecha límite de uso, de
errores (también más difíciles de detectar) que vencimiento o de reanálisis según corresponda),
los de productos comercializados, en especial, en formato mes / año y de manera tal que evite
cuando se utilizan productos enmascarados de la ambigüedad.
aspecto similar. Se deben intensificar los k) frase “mantener fuera del alcance de
recaudos para evitar el rotulado erróneo, como los niños” excepto cuando el producto se utilice
por ej. la conciliación de rótulos, la liberación en ensayos en los que los sujetos participantes
no lo llevan a su casa.
27. No es necesario que el domicilio y el para las formas de dosis sólidas orales),
número de teléfono del contacto principal de cantidad de unidades de dosis y en el caso de
información sobre el producto, el ensayo clínico ensayos abiertos, el nombre/identificador y
y desenmascaramiento de emergencia se concentración / potencia;
exhiban en el rótulo, siempre y cuando el sujeto
c) número de lote o código para
participante haya recibido un prospecto o tarjeta
identificar el contenido y la operación de
que proporcione estos datos y se lo haya acondicionamiento;
convenientemente instruido para que lo
conserve consigo permanentemente. d) código de referencia del ensayo que
permita la identificación del ensayo, sitio,
28. Los detalles deben figurar en el idioma
investigador y patrocinador, de no encontrarse
oficial del país. Los detalles enumerados en el en otro lugar;
ítem 26 deben visualizarse en el envase primario
y en el secundario (con excepción de envases e) número de identificación/tratamiento
primarios descriptos en los puntos 29 y 30). En del sujeto participante del ensayo y, de
la tabla 1 se resumen los requerimientos corresponder, número de visita.
relacionados con los contenidos de los rótulos 31. Se pueden incluir símbolos o
del envase primario y del secundario. Pueden pictogramas para aportar mayor claridad a la
incluirse la información en otros idiomas. información antes mencionada. Además, puede
29. Cuando el producto se proporcione al incluirse información adicional, advertencias
sujeto del ensayo o a la persona que administre y/o instrucciones de uso.
la medicación dentro de un envase primario 32. Para los ensayos clínicos con ciertas
junto con su envase secundario debiendo ambos características debe añadirse la siguiente
permanecer juntos, y siendo que el información al envase original, pero sin
acondicionamiento secundario posee los detalles superponerse con los del rótulo original:
enumerados en el punto 26, se debe incluir la
siguiente información en el rótulo del envase i) nombre del patrocinador, organización de
primario (o cualquier dispositivo de dosificación investigación o investigador contratados;
sellado que contenga el envase primario): ii) código de referencia del ensayo que
a) nombre del patrocinador, organización permita la identificación del sitio del ensayo,
de investigación o investigador contratados; investigador y sujeto del ensayo.
b) forma farmacéutica, vía de 33. De ser necesaria la modificación de la
administración (puede excluirse para las formas fecha límite de uso, se debe colocar un rótulo
farmacéuticas sólidas orales), cantidad de adicional al producto farmacéutico de
unidades de dosis y en el caso de ensayos investigación. Este rótulo adicional debe
abiertos, el nombre / identificador y especificar la nueva fecha y repetir el número de
concentración / potencia; lote. Puede colocarse sobre la antigua fecha
límite de uso, sin embargo, por razones de
c) el número de lote o código para control de calidad, no puede colocarse sobre el
identificar el contenido y la operación de número de lote original. Esta operación debe
acondicionamiento; realizarse en un sitio de elaboración
d) código de referencia del ensayo que debidamente habilitado. Sin embargo, cuando
permita la identificación del ensayo, sitio de esté justificado, podrá realizarse en el mismo
ensayo, investigador y patrocinador, de no sitio de investigación por o bajo la supervisión
encontrarse en otro lugar; del farmacéutico del sitio del ensayo clínico.
Cuando esto no sea posible, podrá efectuarse
e) número de identificación / tratamiento
mediante un monitor del ensayo clínico
del sujeto participante del ensayo y, de debidamente capacitado. La operación debe
corresponder, número de visita; llevarse a cabo en cumplimiento de los
30. Si el envase primario es un blíster o son principios de las BPF, procedimientos
unidades pequeñas como ser ampollas en los operativos estándar y específicos,
que los detalles enumerados en el punto 26 no contemplados, de corresponder, en el contrato.
se pueden exhibir, dicha información debe La operación debe ser verificada por una
figurar en un rótulo del envase externo segunda persona. Este rotulado adicional debe
(secundario). Sin embargo, el envase primario ser debidamente documentada tanto en la
debe contener la siguiente información: documentación del ensayo como en el registro
de lote.
a) nombre del patrocinador, organización
de investigación o investigador contratados;
b) vía de administración (puede excluirse
CONTROL DE CALIDAD f) informes de estabilidad
34. Como los procesos quizá no están g) la fuente y verificación de las
estandarizados o completamente validados, los condiciones de almacenamiento, distribución y
controles sobre el producto cobran mayor transporte
importancia en garantizar que cada lote cumple h) informes de auditorías concernientes al
con sus especificaciones. sistema de calidad del elaborador
35. El control de calidad debe ser realizado
i) documentación que certifique que el
de acuerdo con el Archivo de Especificación de
elaborador está autorizado a elaborar productos
Producto y de acuerdo con la información farmacéuticos de investigación o comparadores
requerida. Se debe verificar y registrar la para exportación expedida por las autoridades
efectividad del enmascaramiento.
competentes del país exportador
36. Se deben conservar muestras de cada
j) si fuera necesario, los requerimientos
lote del producto farmacéutico de investigación, regulatorios para autorización de
incluyendo el producto enmascarado por el comercialización, estándares de BPF aplicables
período requerido, por lo menos dos años
y cualquier verificación oficial del
después de registrado el producto.
cumplimiento con las BPF
37. Debe conservarse muestras de retención k) todos los otros factores de los que el
de cada etapa de acondicionamiento/fase del Responsable Técnico tiene conocimiento y que
ensayo, hasta que se haya preparado el informe
son importantes a la calidad del lote.
del clínico para poder identificar el producto en
cada una de las fases, si es necesario, y como El grado de importancia de los elementos
parte de una investigación en el caso de que los arriba mencionados se ve afectada por el país de
resultados del ensayo clínico no sean origen del producto, el elaborador y el estado de
consistentes comercialización del producto (con o sin
autorización de comercialización en el país de
LIBERACIÓN DE LOTES
origen) y su etapa de desarrollo.
38. La liberación de productos farmacéuticos
El patrocinador debe garantizar que los
en investigación no debe ocurrir hasta que el
elementos tenidos en cuenta por el Responsable
Responsable Técnico haya certificado que los
Técnico cuando certifica el lote sean
requerimientos pertinentes se han cumplido. El
concordantes con la documentación requerida.
Responsable Técnico debe tener en cuenta los
elementos enumerados en el punto 39 según 40. En los casos en que los productos
corresponda. farmacéuticos de investigación se elaboran y
acondicionan en sitios diferentes, bajo la
39. La evaluación de cada lote para su
supervisión de distintos responsables técnicos,
certificación antes de la liberación puede incluir se deben seguir las recomendaciones según
lo siguiente, según corresponda: corresponda.
a) registro de lote, incluyendo los
41. Las actividades de acondicionamiento y
informes de control de calidad, informes de los
rotulado, pueden desarrollarse en el sitio de
controles en proceso y de liberación que investigación por o bajo la supervisión de un
demuestren que el producto cumple con el farmacéutico de ensayos clínicos u otro
archivo de especificación del producto, la orden,
profesional de la salud, según lo contemplen la
el protocolo y el código de randomización.
normativa específica vigente. Sin embargo, el
Dichos registros deben incluir todos los desvíos
patrocinador es responsable de asegurar que la
o modificaciones planificadas y cualquier actividad sea debidamente documentada y
verificación o ensayo adicional subsiguiente y desarrollada en cumplimiento con los principios
debe ser completado y avalado por el personal
de las BPF y debe recurrir al asesoramiento del
autorizado a tal efecto, de acuerdo con el
Responsable Técnico en este aspecto.
sistema de calidad;
ENVÍO
b) condiciones de producción;
42. El envío de los productos debe realizarse
c) el estado de validación de las
de acuerdo con las instrucciones proporcionadas
instalaciones, procesos y métodos;
por o en representación del patrocinador en la
d) la evaluación de los empaques orden de envío.
terminados
43. Los productos farmacéuticos de
e) los resultados de cualquier análisis o investigación deben permanecer bajo el control
ensayo desarrollados después de la importación, del patrocinador hasta que se haya completado
si correspondiera el procedimiento de liberación de dos pasos:
certificación del Responsable Técnico y dicha recuperación. El investigador y el monitor
liberación después de haber cumplido los deben comprender sus obligaciones en el
requerimientos correspondientes. El procedimiento de recuperación.
patrocinador debe garantizar que los mismos
50. El patrocinador debe asegurar que el
son coincidentes con los detalles contemplados
proveedor de cualquier comparador o
por el Responsable Técnico. Ambas
medicación a ser utilizada en el ensayo clínico
liberaciones deben registrarse y conservarse en posea un sistema para comunicar al
los archivos del ensayo principales mantenidos patrocinador la necesidad de retirar cualquier
por el patrocinador o alguien en su
producto suministrado.
representación.
Devoluciones
44. Antes que los productos farmacéuticos
de investigación se envíen al sitio de 51. Los productos farmacéuticos de
investigación, el personal responsable investigación se deben devolver de acuerdo con
correspondiente debe disponer de los las condiciones acordadas y definidas por el
procedimientos de decodificación. patrocinador, especificadas en procedimientos
escritos aprobados.
45. El elaborador o importador debe llevar
un inventario detallado de los envíos efectuados. 52. Los productos farmacéuticos de
En particular, debe mencionar la identificación investigación devueltos deben identificarse
de los destinatarios. claramente y se deben almacenar en un área
exclusiva debidamente controlada. Se deben
46. El envío de productos farmacéuticos de llevar registros de los medicamentos devueltos.
investigación de un sitio de investigación a otro
debe ser una excepción. Dichos traslados deben DESTRUCCIÓN
realizarse bajo procedimientos operativos 53. El patrocinador es responsable de la
estándar. El historial del producto mientras se destrucción de los productos farmacéuticos de
encuentra fuera del control del elaborador, investigación no utilizados y/o devueltos. Por lo
obtenida a través de, por ejemplo, informes de tanto, los productos farmacéuticos de
monitoreo del ensayo y registro de las investigación no se deben destruir sin la previa
condiciones de almacenamiento en el sitio autorización escrita del patrocinador.
original del ensayo, debe revisarse como parte
de la evaluación de la aptitud del producto para 54. En cada sitio y período de ensayo, el
el transporte; asimismo, se debe recurrir al patrocinador o alguien en su representación
asesoramiento del Responsable Técnico. De ser debe registrar, conciliar y verificar las
necesario re-etiquetar el producto, se debe cantidades de producto entregadas, utilizadas y
devolver al elaborador u otro elaborador recuperadas. La destrucción de los productos
autorizado y recertificación de una persona farmacéuticos de investigación no utilizados se
autorizada. Se deben conservar registros y debe realizar en función de un sitio o período de
asegurar la total trazabilidad. ensayo determinados, solamente después de
haber investigado y explicado
RECLAMOS satisfactoriamente cualquier discrepancia y de
48. El elaborador o importador y el haber aceptado además la conciliación. Se debe
patrocinador (de ser diferentes) deben analizar desarrollar el registro de las operaciones de
conjuntamente las conclusiones de cualquier destrucción de manera tal que se incluyan todas
investigación desarrollada en relación con un las operaciones. El patrocinador debe conservar
reclamo que pueda surgir de la calidad de un dichos registros.
producto. Este análisis debe involucrar al 55. El patrocinador debe recibir un
Responsable Técnico y a los responsables del certificado fechado o manifiesto de destrucción
ensayo clínico pertinente, a fin de evaluar de los productos farmacéuticos de investigación
cualquier impacto potencial sobre el ensayo, el involucrados. Tales documentos deben
desarrollo del producto y en los sujetos. claramente identificar o permitir la trazabilidad
RETIROS DE PRODUCTO Y a los lotes y/o números de pacientes
DEVOLUCIONES involucrados y las cantidades reales destruidas.
Retiros de productos
49. El patrocinador y el elaborador o
importador (en caso de diferir) deben acordar
los procedimientos para recuperar los productos
farmacéuticos de investigación y deben registrar
Tabla 1. RESUMEN DE LOS DETALLES DEL ROTULADO (§26 A 30)
a) nombre, domicilio y número de teléfono del patrocinador, organización de investigación
contratada o investigador (el contacto principal para información sobre el producto, ensayo clínico y
desenmascaramiento de emergencia);
b) forma farmacéutica, vía de administración, cantidad de unidades de dosis y en el caso de
ensayos abiertos, nombre/identificador y concentración / potencia;
c) el número de lote o código para identificar el contenido y la operación de acondicionamiento;
d) código de referencia del ensayo que permita la identificación del ensayo, sitio, investigador y
patrocinador, de no encontrarse en otro lugar;
e) número de identificación/tratamiento del sujeto participante del ensayo y, de corresponder,
número de visita;
f) nombre del investigador (si no está incluido en a) ó d));
g) instrucciones de uso (se puede hacer referencia a un prospecto u otro documento destinado al
sujeto del ensayo o a la persona que administre el producto);
h) la frase “para ensayo clínico únicamente” o similar;
i) condiciones de almacenamiento;
j) período de uso (fecha límite de uso, de vencimiento o de re análisis según corresponda), en
formato mes/año y de manera tal que evite la ambigüedad.
k) La frase “mantener fuera del alcance de los niños” excepto cuando el producto se utilice en
ensayos en los que los sujetos no lo llevan a su casa.
1
El domicilio y número de teléfono del contacto principal para información sobre el producto, ensayo
clínico y desemascaramiento de emergencia no necesita aparecer en la etiqueta cuando se ha dado un
prospecto o una tarjeta que proporcionan estos detalles y se han dado instrucciones para mantenerlos
siempre.
2
El domicilio y número de teléfono del contacto principal para información sobre el producto, ensayo
clínico y desemascaramiento no necesita estar incluido
3
La ruta de la administración se puede excluir para la dosis sólida oral
4
La forma farmacéutica de dosificación y la cantidad de unidades de la dosificación pueden ser
omitidas
5
Cuando el envase externo lleva los detalles enumerados en el punto 26
ANEXO 14 Componentes sanguíneos - Componentes
terapéuticos de la sangre (glóbulos rojos,
ELABORACION DE PRODUCTOS
glóbulos blancos, plasma, plaquetas), que se
DERIVADOS DE SANGRE Y PLASMA
pueden preparar mediante centrifugación,
HUMANO
filtración y freezado utilizando una metodología
PRINCIPIO - Los productos medicinales de banco de sangre convencional.
biológicos derivados de sangre o plasma
Medicamento derivado de la Sangre o
humano (hemoderivados), pueden tener como
plasma-hemoderivado - Medicamento basado
materiales de partida células o fluidos
incluyendo sangre y plasma. Los en componentes de la sangre los cuales son
hemoderivados poseen ciertas características preparados de forma industrial por
establecimientos públicos o privados.
que surgen de la naturaleza biológica del
material del que proceden. Por ejemplo, este GESTIÓN DE CALIDAD
material de origen puede estar contaminado por 1. El Aseguramiento de la Calidad deberá
agentes transmisores de enfermedades, en
comprender todas las etapas previas a la
especial los virus. La seguridad de estos
obtención del producto terminado, desde la
productos depende del control de los materiales
extracción (incluyendo la selección del donante,
de partida y su origen, como así también, de los
las bolsas de sangre, las soluciones
procesos de elaboración subsiguientes, anticoagulantes y los reactivos y equipos usados
incluyendo la remoción e inactivación del virus. en los ensayos serológicos) hasta el
A menos que se especifique lo contrario, los almacenamiento, transporte, procesamiento,
capítulos generales de las BPF aplican a los control de calidad y distribución del producto
productos derivados de sangre y plasma terminado, todo en cumplimiento de los textos
humano. De igual manera, también aplican mencionados en el Principio del comienzo de
algunos de los anexos, por ej. elaboración de este Anexo.
medicamentos estériles, el uso de radiación
2. La sangre o el plasma extraído como
ionizante en la elaboración de medicamentos,
material de origen para la elaboración de
elaboración de medicamentos biológicos y
medicamentos se debe recolectar en
sistemas informaticos. establecimientos destinados a tal fin y los deben
Dado que la calidad del producto final se ve analizar laboratorios sujetos a inspección y
afectada por todas las etapas de la fabricación, habilitados por la autoridad competente.
incluyendo la recolección de sangre o plasma,
3. Los procedimientos para determinar la
todas las operaciones deben desarrollarse de idoneidad de los individuos como donantes de
acuerdo con un apropiado sistema de
sangre y plasma, utilizados como material de
Aseguramiento de la Calidad y las normas de
origen en la elaboración de medicamentos y los
Buenas Prácticas de Fabricación vigentes.
resultados de los análisis de sus donaciones,
El elaborador debe tomar las medidas deben ser documentados por el centro de
necesarias para evitar la transmisión de extracción y deben encontrarse disponibles para
enfermedades infecciosas y se deben aplicar los el elaborador del medicamento.
requerimientos y estándares de las monografías
4. El monitoreo de la calidad de los
de la Farmacopea Argentina (u otras
hemoderivados se debe desarrollar de tal
farmacopeas internacionalmente reconocidas) manera que se pueda detectar cualquier desvío
sobre el plasma humano para fraccionamiento y de las especificaciones de calidad.
de los productos medicinales derivados de
sangre o plasma. 5. Los hemoderivados devueltos sin utilizar
no se deben comercializarse nuevamente: (ver
Lo establecido en este anexo se aplica a también punto 5.65 de la guía de BPF
medicamentos derivados de sangre y plasma principal).
humano. No comprenden los componentes
utilizados en la medicina transfusional. Sin LOCALES Y EQUIPAMIENTO
embargo, gran parte de los lineamientos aquí 6. Los locales utilizados para la extracción
dispuestos, pueden aplicarse a dichos de sangre o plasma deben poseer dimensiones,
componentes y las autoridades competentes construcción y ubicación adecuadas a fin de
pueden exigir su cumplimiento. facilitar su correcto funcionamiento, limpieza y
GLOSARIO mantenimiento. La extracción, el procesamiento
y el análisis de la sangre y el plasma no deben
Sangre - Toda la sangre extraída de un solo
realizarse en la misma área. Deben existir
donante y procesada ya sea para transfusión o
instalaciones apropiadas para realizar
posterior elaboración.
entrevistas a los donantes en privado.
7. El equipamiento de elaboración, 1. se descubre que el donante no cumplía
extracción y análisis se debe diseñar, calificar y con el criterio sanitario requerido para los
mantener para cumplir con su fin pretendido y donantes;
no deben presentar ningún riesgo. Se debe
2. una donación posterior de un donante
efectuar y registrar el mantenimiento y previamente calificado como negativo en
calibración de acuerdo con procedimientos función de marcadores virales en ocasiones
establecidos.
anteriores, resultó positiva para cualquiera de
8. En la preparación de hemoderivados se los marcadores virales;
deben utilizar procedimientos de inactivación o 3. se descubre que el análisis de
remoción viral y se deben tomar las medidas marcadores virales no se efectuó de acuerdo con
necesarias para evitar la contaminación cruzada
los procedimientos operativos;
de los productos tratados con los no tratados; los
locales y el material utilizado para los productos 4. el donante ha desarrollado una
tratados deben ser específicos y distintos de los enfermedad infecciosa causada por un agente
utilizados para los productos no tratados. potencialmente transmisible por productos
derivados de plasma (VHB, VHC, VHA y otros
RECOLECCIÓN DE SANGRE Y
virus de hepatitis no-A, no-B, no-C, VIH 1 y 2 y
PLASMA
otros agentes según el conocimiento
9. Debe existir un contrato entre el disponible);
elaborador de hemoderivados y el centro de
5. el donante desarrolla la enfermedad de
donación o el organismo encargado de la
Creutzfeldt-Jakob (ECJ ó VECJ);
extracción de la sangre o del plasma.
6. el receptor de la sangre o un
10. Se debe identificar cada donante de
componente de la misma desarrolla una
forma inequívoca en la recepción y nuevamente
infección con posterioridad a una transfusión /
en el momento de la extracción.
infusión que implica o se puede atribuir al
11. Se debe definir y demostrar la eficacia donante.
del método de desinfección de la piel del
Los procedimientos a seguir en el caso de
donante. Este método debe ser manteniendo.
cualquiera de los acontecimientos anteriormente
12. Se debe comprobar por segunda vez por descriptos deben estar establecidos en
separado los rótulos de cada donación, para procedimientos operativos estándar. La
asegurar que el rótulo de las bolsas de sangre, investigación retrospectiva debe consistir en
tubos de toma de muestra y registros de rastrear las donaciones anteriores efectuadas al
donación sean idénticos. menos seis meses antes de la última donación
13. Las bolsas de sangre y los sistemas de negativa. En cualquiera de los casos anteriores,
aféresis deben ser inspeccionados para siempre se deberá realizar una reevaluación de
la documentación del lote. Debe considerarse la
determinar daño o contaminación antes de ser
necesidad de retirar el lote en cuestión, teniendo
utilizados para recolectar sangre o plasma. Debe
en cuenta criterios tales como el del agente
registrarse el número de lote de las bolsas de
transmisible implicado, el tamaño de la mezcla
sangre y de los sistemas de aféresis, a fin de
asegurar la trazabilidad. de plasmas, el período entre la donación y la
seroconversión, la naturaleza del producto y su
TRAZABILIDAD Y MEDIDAS POST método de elaboración. Cuando existan indicios
RECOLECCIÓN de que una donación parte de una mezcla de
14. Aún respetando totalmente la plasma estaba infectada con VIH o hepatitis A,
confidencialidad, debe existir un sistema que B o C, se debe informar a la autoridad sanitaria
permita el rastreo bidireccional de cada competente, responsable de la autorización del
donación, desde el donante hasta el producto producto farmacéutico y la compañía debe
terminado y viceversa, incluyendo el cliente informar sobre la conveniencia en continuar la
(hospital o profesional de la salud). Por lo elaboración con la mezcla de plasma implicada
general, es responsabilidad del cliente o de la posibilidad de retiro del producto o
identificar al receptor. productos del mercado.
CONSIDERACIONES GLOSARIO
GENERALES
Agentes quimioterápicos antineoplásicos: son
activos capaces de dañar células malignas afectando
Los medicamentos citostáticos actúan alterando también a las células normales del organismo por lo
la capacidad de división celular en forma no selec- que se los denomina agentes citotóxicos y dado que
tiva, afectando las células tumorales y también poseen la propiedad de inhibir el crecimiento de
interfiriendo en los circuitos bioquímicos de las tumores malignos, por analogía se los llama ci-
células normales, en especial en los tejidos con tostáticos.
mayor recambio celular, como por ejemplo, piel, Carcinogénico: es toda aquella sustancia que
medula ósea, epitelio del tracto gastrointestinal, pueda producir cáncer .
folículos pilosos y estructuras embrionarias. Citotóxico: es todo aquel agente que tenga capa-
La eficacia de la terapia oncológica con fárma- cidad de producir genotoxicidad, oncogenicidad y
cos plantea diversos inconvenientes tal como la mutagenicidad.
toxicidad elevada que se manifiesta incluso cuando Desinfección: este término suele usarse para de-
la aplicación terapéutica es correcta y puede condu- signar los resultados de la aplicación de agentes
cir a consecuencias graves si se verifican errores en químicos sobre objetos inanimados con el fin de
la dosis, o en el proceso de reconstitución y admi- eliminar los microorganismos incluyendo formas
nistración o contaminación por manipuladores. esporuladas.
La mayoría de los tratamientos farmacológicos Dispensación: es el acto farmacéutico asociado
consisten en una terapéutica combinada con efecto a la entrega y distribución de los medicamentos con
sinérgico de los distintos principios activos citostá- las consecuentes prestaciones específicas, como
ticos, con diferente toxicidad, dosis limitante y son: el análisis de la orden médica, información
menor posibilidad de resistencias. para su correcta utilización y preparación de las
Los medicamentos que se utilizan para el trata- dosis que se deben administrar.
miento del cáncer pueden ser indicados con fines En este acto, el farmacéutico informa y orienta
curativos, paliativos, o como coadyuvantes de otras al paciente, enfermera o médico, sobre el uso ade-
terapias. cuado de dicho medicamento. Son elementos im-
Los pacientes con tratamiento oncológico pue- portantes de esta orientación, entre otros, el énfasis
den recibir medicación citostática en tres modalida- en el cumplimiento del régimen de dosificación, la
des diferentes de internación: hospitalizado, en influencia de los alimentos, la interacción con otros
internación ambulatoria (Servicio Hospital de Día) medicamentos, el reconocimiento de reacciones
y en internación domiciliaria. Esto dependerá del adversas potenciales y las condiciones de conserva-
estado general del paciente, de las patologías con- ción del producto.
comitantes y del tipo de medicación a recibir, y Distribución: es el sistema implementado para
tratándose de internación domiciliaria, de las condi- la entrega intrahospitalaria de los medicamentos
ciones culturales y socioeconómicas. requeridos por las unidades de internación u otros
Las unidades de reconstitución de citostáticos servicios del hospital para su posterior administra-
de los servicios de Farmacia Hospitalaria y los ción al paciente.
centros prestadores de Servicios de Farmacia Hos- Dispositivos médicos (material descartable):
pitalaria, son las responsables de proveer las mez- instrumento, aparato, implemento, máquina, arte-
clas intravenosas de los medicamentos utilizados en facto, implante u otro artículo similar o relacionado,
el tratamiento de cáncer para los tres tipos de inter- incluidos los componentes, partes o accesorios de
nación, prevenir la contaminación del medio am- éstos.
biente durante la reconstitución y proteger al per- Dosificación / posología: describe la dosis de un
sonal de salud durante la manipulación de princi- medicamento, los intervalos entre las administra-
pios activos citostáticos. ciones y la duración del tratamiento. No debe con-
fundirse con el término dosis.
Dosificación, régimen de: se define como la correcta y duración del tratamiento. En el caso de
magnitud de las dosis administradas de un medica- pacientes ambulatorios, el acto de prescripción se
mento, el número de ellas y los intervalos de admi- traduce en la elaboración de una receta médica; en
nistración. los pacientes hospitalizados, la prescripción es
Dosis: cantidad total de medicamento que se consignada en la historia clínica.
administra de una sola vez o total de las cantidades Reconstitución: es la adición del disolvente so-
fraccionarias administradas durante un período bre un producto en polvo o liofilizado, para lograr
determinado. su disolución.
Dosis, intervalo de: tiempo que transcurre entre Relación riesgo/beneficio: esta relación se apli-
una y otra administración de medicamentos en un ca al uso de un medicamento, está basada en los
régimen de dosificación de dosis múltiples. datos de eficacia y seguridad, además del uso po-
Dosis Terapéutica: es la que produce el efecto tencial indebido, severidad y evolución de una
deseado en el paciente; dosis mínima es la menor enfermedad, etc. El concepto puede ser aplicado a
dosis que produce el efecto terapéutico y dosis un solo medicamento o en comparaciones entre dos
máxima es la mayor dosis que puede ser tolerada o más medicamentos usados en la misma condición.
sin aparición de efectos adversos o tóxicos. Los Vida útil: es el intervalo de tiempo durante el
límites de dosis terapéuticas están dadas por la dosis cual se espera que un medicamento almacenado
máxima y dosis mínima e indican el margen de correctamente satisfaga las especificaciones prees-
utilización de las drogas. tablecidas.
Dosis Tóxica: es la que produce efectos inde-
seables o peligrosos. PREPARACIÓN DE CITOSTÁTICOS
Establecimiento asistencial: son establecimien- ENDOVENOSOS
tos con internación ya sean públicos o privados.
Esterilización: proceso por el cual se eliminan o PERSONAL
se destruyen todas las formas viables de microorga-
Selección del personal
nismos, basado en una función de probabilidad.
Farmacia hospitalaria: es una especialidad far- El personal debe ser seleccionado y previamente
macéutica que se ocupa de la selección, prepara- entrenado en la técnica de preparación y manejo de
ción, adquisición, control, dispensación, informa- citostáticos.
ción de medicamentos y otras actividades orienta- No podrán ingresar al área personal con proce-
das a conseguir una utilización apropiada, segura y sos infecciosos ni personal dedicado a otras tareas
costo-efectiva de los medicamentos y productos de riesgo ocupacional, como por ejemplo, técnicos
sanitarios, en beneficio de los pacientes atendidos radiólogos.
en los establecimientos asistenciales. Las mujeres que amamantan o embarazadas no
Farmacovigilancia: identificación y valoración deben trabajar con relación a la manipulación de
de los efectos del uso, agudo y crónico, de los tra- estos fármacos.
tamientos farmacológicos en el conjunto de una Exámenes de salud para el personal
población o en subgrupos de pacientes expuestos a
tratamientos específicos. Se debe distinguir entre Uno de los aspectos relacionados con este tema,
monitorización y farmacovigilancia. es el riesgo a que está expuesto el personal sanitario
que debe manipular citostáticos. Éste ha sido un
Forma farmacéutica: es la forma del producto
motivo de preocupación creciente en los últimos
farmacéutico completo. (Por ejemplo. comprimido,
años que tiene su origen en la abundante evidencia
cápsula, supositorio, etc.).
Filtro HEPA: filtro de alta eficiencia de partícu- científica internacional que indica que la exposición
las de aire compuesto por pliegues de filtros medios crónica y masiva con estos activos, puede causar
efectos mutagénicos, carcinogénicos y teratogéni-
separados por lámina o papel corrugado o hoja de
cos. Estos efectos nombrados precedentemente sólo
aluminio en el que el flujo directo del aire es forza-
se producen en casos de exposiciones muy altas y
do a través del filtro en un flujo paralelo uniforme.
no existe evidencia de que ocurran en el caso de
Los filtros HEPA retienen el 99,99 % de las partícu-
las mayores a 0,3 micrones de diámetro. niveles bajos exposición. Sin embargo, debe consti-
Mutagénico: agente químico o físico que induce tuir un llamado de atención sobre los posibles peli-
gros que enfrentan los profesionales relacionados a
o incrementa mutaciones genéticas por cambios
la manipulación de citostáticos.
causados en el ADN.
Existen pocas dudas de que los trabajadores ex-
Prescripción: es el acto de expresar qué medi-
puestos a agentes citotóxicos al preparar y adminis-
camento debe recibir el paciente, la dosificación
trar las dosis terapéuticas para ser utilizados en la sar irritación local en caso de citotóxicos irritan-
quimioterapia de pacientes con cáncer, pueden tes y ulceración con posterior necrosis de la zo-
absorber cantidades mensurables de los mismos. La na en el caso de activos vesicantes, como por
absorción se puede realizar por piel, mucosas o ejemplo, antraciclinas.
pulmones. Adicionalmente, es objeto de controver- Sistémicos
sia los daños que puede causar la absorción invo- Son los que se producen tras un largo
luntaria de pequeñas cantidades de estos agentes. período de tiempo por repetidas exposiciones a
bajas dosis. En este caso es más difícil demos-
Distintas variables determinan la posibilidad de trar la relación causa-efecto por las dificultades
intoxicación de los individuos con respecto a estos que plantea su estudio.
activos:
Características de los Principios Activos El servicio de Higiene y Medicina Laboral de-
El riesgo potencial depende de las propiedades berá ser informado de todos los accidentes debidos
fisicoquímicas de los fármacos. No todos los ci- a manipulación de agentes citotóxicos.
tostáticos son igualmente agresivos. Según diferen- El riesgo demostrado de estos agentes de produ-
tes estudios realizados tienen mayor potencial car- cir los efectos previamente mencionados, unido al
cinogénico y teratogénico los agentes alquilantes y hecho de que estas sustancias pueden ser absorbidas
los derivados de la vinca, considerándose los menos como consecuencia de exposiciones profesionales,
agresivos los antimetabolitos. justifica la adopción de controles periódicos de
Susceptibilidad del individuo salud sugiriéndose su realización por lo menos una
Las distintas generalidades relacionadas con es- vez al año.
tas variables son la edad, el sexo, el origen étnico, Deben existir registros de los resultados de los
etc. exámenes de salud a los que es sometido el personal
Cofactores en el ámbito del sector.
Tales como hábitos alimentarios o hábitos de
vida, como el fumar, pueden alterar la susceptibili- INSTALACIONES
dad del individuo a los efectos de estos fármacos.
Es recomendable que el servicio de reconstitu-
Número de exposiciones
ción y formulación de citostáticos esté compuesto
Tiene que ver con la magnitud de la expo-
por los siguientes sectores:
sición o la suma acumulada de las mismas.
Vestuario general para el acceso exclusivo
Vías de exposición y efectos del personal del servicio o personas autori-
zadas.
Vías de exposición
Pasillo interno que se comunique con la
Ingestión
oficina técnica, depósitos, sector de prepa-
Se puede producir por el consumo de
ración de materiales y el vestuario especí-
alimentos o bebidas, o el uso de cigarrillos o
fico.
cosméticos contaminados. Depósito de medicamentos.
Inhalatoria Depósito de materiales.
Por las partículas aerosolizadas que se
Sector de preparación de materiales.
forman durante el proceso de reconstitución y
Vestuario específico que comunique el pa-
preparación de las dosis terapéuticas, ya sea al
sillo interno con el área de preparación de
retirar la aguja del vial, al romper una ampolla, soluciones.
etc. Sector de preparación de soluciones, donde
Absorción dérmica
se efectuará la reconstitución y / o formula-
Por contacto con derrames por ruptura
ción de citostáticos.
de ampollas o contaminación de los equipos du-
Sector de almacenamiento de soluciones
rante la manipulación, administración, limpieza
terminadas.
rutinaria o eliminación de los desechos.
Características edilicias de cada sector:
Efectos
Locales Vestuario general
Son los que se producen como conse- Deberá ser de acceso restricto, y se instaurará
cuencia de derrames o accidentes que ponen al un sistema de registro de control de ingreso.
citostático en contacto con la piel o las mucosas. En el mismo, el personal se quitará la ropa de
Según las características del activo pueden cau- calle y se colocará ropa diferenciada del resto de los
sectores para tener acceso a los sectores de depósito Sector de almacenamiento de soluciones termi-
de materiales, depósito de medicamentos, sector de nadas
preparación de materiales y sector de almacena- En este sector se reciben, almacenan y distribu-
miento de soluciones terminadas. yen las soluciones terminadas.
Debe poseer una superficie de apoyo de dimen-
Pasillo interno siones adecuadas para disponer en forma ordenada
Su función es comunicar los diferentes sectores dichas soluciones, ya rotuladas dentro del sector de
de acceso común y servir de ingreso a través de un preparación de soluciones, de modo de evitar con-
vestuario específico al área restringida (área de fusiones.
preparación de soluciones). Deberá estar equipado con una heladera de ser
necesario, una selladora térmica de plásticos para el
Depósito de materiales cierre hermético del envase protector de la mezcla
Deberá ser de acceso restricto. preparada o bolsas plásticas con sistemas de auto
Poseerá estanterías metálicas o armarios donde sellado.
almacenar los materiales que se utilizarán en las
tareas de reconstitución durante un período no ma- Sector de preparación de soluciones
yor a una semana. Vestuario específico: es recomendable que cons-
te de dos etapas, en la primera de las cuales el per-
Depósito de medicamentos sonal que ingrese al sector de preparación de mate-
Deberá cumplir con lo especificado para el de- riales se quitará la ropa de circulación, en la segun-
pósito de materiales. En caso de utilizarse medica- da etapa se colocará la ropa estéril incluyendo, cofia
mentos que requieran refrigeración deberá contar o escafandra, cubrebotas y se lavará las manos con
con una heladera de capacidad adecuada al volumen solución jabonosa desinfectante, colocándose un
de los medicamentos a almacenar. primer par de guantes quirúrgicos sin talco ubicados
Deberá controlarse y registrarse periódicamente por encima del puño y protección respiratoria si
la temperatura a fin de verificar que la misma con- fuese necesario. Luego pasará al área de prepara-
diga con la necesaria para los productos allí alma- ción donde se colocará el segundo par de guantes.
cenados. El personal, al salir del área de preparación, de-
berá disponer la vestimenta utilizada de forma de
Sector de preparación de materiales ser inactivada previo a la salida del sector de prepa-
Se utilizará para la desinfección externa de los ración para ser luego lavada, secada y esterilizada
medicamentos y envases a introducir al sector de por procedimientos específicos.
preparación. Es recomendable que este vestuario cuente con
Deberá contar con una pileta con provisión de un sistema de duchas para ser utilizadas por el per-
agua fría y caliente, y con sifón sanitario. sonal después de retirarse la ropa específica del área
Se comunicará con el pasillo interno o con el de preparación y antes de colocarse la de circula-
depósito y con el sector de preparación de solucio- ción general.
nes mediante pasa bandejas con doble puerta y Los materiales constructivos y los detalles de
sistema de enclavamiento que impida la apertura terminación deben ser similares a los ya descriptos
simultánea de las mismas. para los sectores de preparación de materiales.
Todas las superficies de trabajo serán lisas y li- Area de preparación: es el local donde se efec-
bres de discontinuidades. Deberán ser de materiales tuará la reconstitución y/o formulación de los ci-
resistentes a los productos de trabajo y a los desin- tostáticos.
fectantes de rutina e inactivantes de uso en caso de El mismo deberá poseer la amplitud necesaria
derrames. para asegurar el movimiento del personal y los
El piso y paredes estarán construidos con mate- materiales, y facilitar las tareas de limpieza y des-
riales que presenten superficies lisas y libres de contaminación de todas las superficies.
discontinuidades, y recubiertos por materiales que Las características referentes a superficies de
resistan el tránsito y los agentes desinfectantes. trabajo, piso, paredes y encuentros cóncavos entre
Los encuentros cóncavos entre piso, paredes y piso, paredes y cielorraso deberán ser las mismas
cielorraso deberán ser redondeados con un radio de que las descriptas para Sector de preparación de
curvatura no inferior a los 5 cm para facilitar su materiales.
limpieza. El sistema de ventilación asegurará una tempe-
El sistema de ventilación asegurará una tempe- ratura ambiente de 20 ± 2°C, y el local cumplirá
ratura de 20 ± 2°C.
con un nivel de limpieza clase D o mejor (clase de realizar modificaciones en el área, reparaciones o
10.000). servicios técnicos de mantenimiento en cabinas de
La inyección se realizará mediante filtros HEPA flujo laminar o cualquier otro cambio significativo.
terminales, que serán verificados en forma periódi- Se establecerán niveles de alerta y acción, con
ca por personal especializado. exhaustiva revisión para determinar causales, y
El aire podrá recircularse sólo si no se generan medidas correctivas, aplicadas de manera rigurosa
gases o vapores tóxicos, inflamables o explosivos para volver a los niveles preestablecidos.
dentro del sector. No se recirculará el aire a otros Controles al personal
sectores.
Determinación de las destrezas del personal
Si el aire o parte de él debe expulsarse al exte-
Método: para este fin se prepararán equipos de
rior, se hará mediante filtros HEPA colocados en
entrenamiento que deberán contar con ampollas
las bocas de extracción del local (en forma previa al
conteniendo una solución fluorescente incolora a la
motoventilador de extracción) y con un sistema de
luz visible. Se procederá a realizar una simulación
cambio que evite la exposición del operador a los
de trasvasamiento de contenidos y operaciones de
productos allí retenidos.
llenado aséptico observando, luego de finalizada la
Este local poseerá una presión diferencial nega-
tarea, la superficie de la cabina o lugar de simula-
tiva de 15 a 25 Pa respecto del vestuario.
ción con luz ultravioleta. En caso de no cumplirse el
El sistema de iluminación deberá ser de tipo es-
estándar de calidad interno se procederá a un nuevo
tanco y quedar a ras del cielorraso.
entrenamiento del personal. Se deberá establecer un
Todas las acometidas de servicios deberán ser
monitoreo cada seis meses registrándose los datos
selladas en su punto de ingreso al sector, a fin de
obtenidos.
evitar la entrada de contaminantes.
Los residuos peligrosos se deben descartar en
envases plásticos de cierre hermético y luego en EQUIPAMIENTO
bolsas rojas de 50 a 100 m para su posterior inci- El equipamiento necesario para la Reconstitu-
neración. ción de medicamentos citostáticos incluye equipos
Las operaciones que involucren citostáticos de- de aire unidireccional vertical o Cabinas de se-
berán ser realizadas dentro de gabinetes de seguri- guridad biológica de Clase II .
dad biológica clase II del tipo adecuado, siendo de Los gabinetes de seguridad biológica Clase II
extracción total (tipo B2) si durante las operaciones son equipos que se distinguen por poseer una aber-
se generan gases o vapores peligrosos. tura anterior, por la que el operador introduce sus
En caso contrario, será suficiente con un gabine- manos y antebrazos para manipular objetos en su
te clase II tipo A/B3. interior.
Los mismos deberán ser construidos de acuerdo En estos equipos se combinan dos necesidades o
a la normativa vigente, y deberán ser reverificados características: se protege al producto del operador
por personal especializado en forma periódica. y del ambiente, y se protege al operador y al am-
Controles ambientales biente del producto.
Controles de partículas Si bien todos los gabinetes de seguridad biológi-
Se deberá efectuar un control de la cantidad de ca Clase II poseen un flujo laminar vertical, hay que
partículas inertes y tamaño de las mismas por medio considerar que existen equipos de flujo laminar
de instrumental electrónico. Dicho control debe vertical para protección del producto que no prote-
efectuarse, al menos, una vez al año y toda vez que gen ni al operador ni al ambiente.
dentro del área se produzcan modificaciones signi- Los gabinetes de seguridad biológica Clase II ti-
ficativas. po B3 poseen un filtro HEPA de inyección ubicado
en la cara superior de la zona de trabajo, que envía
Controles microbiológicos aire en flujo unidireccional sobre la superficie de
Los controles ambientales se realizarán por cap- trabajo. La velocidad de aire de esta cortina no debe
tación espontánea mediante placas de Petri o capta- ser, en ningún punto, inferior a los 0,50 m/s. El aire
ción forzada para determinar la biocarga del área. aspirado se distribuye un 70 % hacia el filtro HEPA
Los controles de superficies planas se harán me- de inyección recirculando internamente, mientras
diante placas de impresión y los de superficies que el 30 %, que es el mismo caudal aspirado desde
irregulares (manijas de puertas y aberturas) median- el exterior, es expulsado al exterior del ambiente a
te hisopado de las mismas. través de un segundo filtro HEPA de extracción.
Estos controles deberán ser efectuados como
mínimo cada seis meses o inmediatamente después
SANEAMIENTO otro contenedor de material apropiado (que no libe-
La limpieza del área y equipos debe ser realiza- re partículas).
da por personal calificado perteneciente a la unidad, Se deberá llevar un informe escrito de las pres-
cripciones médicas que se reciban y deberán ser
con una frecuencia diaria, previo al inicio de las
interpretadas por el profesional farmacéutico del
actividades y al finalizar la jornada de trabajo o
servicio.
cuando se requiera de acuerdo a las manipulaciones
El farmacéutico debe validar la prescripción,
realizadas.
Dada la índole de trabajo realizado en la zona de cuando se observe alguna diferencia en la dosis,
cabinas de flujo laminar de la Unidad de Reconsti- inestabilidad por el tipo de solvente indicado o falta
de algún dato del paciente se comunicará con el
tución de Citostáticos y el riesgo que puede impli-
médico tratante.
car para los pacientes la acumulación de partículas,
Se confeccionará una Planilla de Registro por
la limpieza de dicha zona se hará de acuerdo a
paciente donde conste número de historia clínica,
Normas que se establezcan en el sector para dar
cumplimiento a los indicadores de calidad preesta- nombre del médico, datos de filiación del paciente,
blecidos verificando que la misma sea efectiva. Se diagnóstico, ubicación dentro de la institución o el
domicilio (si se trata de un paciente ambulatorio),
deberá contar con los registros correspondientes.
nombre genérico del medicamento a preparar, dosis,
vehículo, volumen total, vía de administración,
PROCEDIMIENTOS DE MANIPULACIÓN protocolo de indicación médica y día del ciclo.
Se entiende como manejo de citostáticos al con- A partir de la prescripción médica se confeccio-
junto de operaciones que incluyen desde la recep- nará una Orden de Preparación que deberá incluir,
ción del medicamento hasta la eliminación de los además de los datos mencionados anteriormente, las
residuos. La manipulación debe realizarse de modo dosis del medicamento en las unidades correspon-
de asegurar la protección al paciente, al ambiente y dientes (g, mg, UI, etc.), el solvente para la recons-
al personal de salud encargado de la preparación de titución (si se trata de un frasco ampolla con liofili-
estos fármacos. zado o polvo), el volumen a utilizar de esa reconsti-
tución y el volumen total en ml y tipo de solvente
Comprende las siguientes operaciones para hacer la dilución. También se deben registrar,
Recepción y almacenamiento de medica- tanto en la Orden de Preparación, para información
mentos del farmacéutico, como en el rótulo, para comuni-
Control farmacéutico de la indicación cación a enfermería, las alertas de incompatibilida-
médica des, estabilidad, condiciones de conservación, ritmo
Generación de la orden de preparación, re- de infusión, fecha y horario de caducidad, y otras
constitución de citostáticos y preparación observaciones.
de la dosis terapéutica Se recomienda redactar un manual de procedi-
Dispensación y distribución mientos donde se contemplen todas las operaciones
Recomendaciones para la administración. que se realizan en el servicio.
Los viales deben ser venteados con una aguja
La recepción de medicamentos citostáticos se para eliminar presiones que pudieran provocar
realizará siguiendo el mismo procedimiento que proyecciones del activo o aerosoles hacia el opera-
para otras especialidades medicinales (en lo referen- dor. Para evitar sobrepresiones en la etapa de re-
te al aspecto, integridad del envase, caducidad, etc.) constitución de los viales con el objeto de reducir el
Para su almacenamiento se deberá reservar un riesgo de formación de aerosoles, se recomienda
sector especial separado para este tipo de fármacos utilizar agujas con filtro de venteo o la técnica de
y contar con un refrigerador , de ser necesario. Los presión negativa introduciendo dentro del vial un
envases deberán disponerse de forma tal que se volumen de aire idéntico al volumen del liquido a
prevenga su ruptura por causas accidentales. Se extraer. Colocar una gasa estéril alrededor de la
tendrán en cuenta las características de cada medi- aguja y sobre el tapón del vial cuando se retira la
camento: termolábiles, fotosensibles, etc. solución de citostático del mismo. Las proyecciones
de medicamentos citostáticos hacia las paredes o el
El material deberá ser almacenado en el depósi- filtro de la cabina de flujo laminar puede provocar
to correspondiente, limpio y cuando corresponda, su deterioro y riesgo de toxicidad. El volumen final
estéril. en la jeringa se mide antes de retirar la aguja del
Cuando el material sea recibido en cajas, las vial, con el fin de no descartar medicación al medio
mismas deberán ser eliminadas y reemplazadas por ambiente. Las jeringas y los recipientes que contie-
nen las soluciones deben ser rotuladas de inmediato. El profesional farmacéutico es responsable de la
Las jeringas y agujas usadas deben ser descartadas distribución y dispensación de los medicamentos
en un dispositivo dispuesto para ese fin no reutili- citostáticos preparados:
zable. Todos los elementos utilizados deben ser Se deberán entregar corroborando nombre
desechados en bolsas rojas reservadas para tal fin. del paciente y número de cama o habitación
Se debe registrar inmediatamente las preparaciones y servicio, dispuestos dentro de un envase
efectuadas, indicando cantidad preparada, datos del herméticamente cerrado y rotulado.
paciente y técnico responsable en un libro habilita- Se confeccionará un listado global diario de
do a tal fin. los pacientes que reciben tratamiento y de
los medicamentos citostáticos preparados.
ESTABILIDAD Estos listados servirán como control de dis-
pensación y serán firmados por la enferme-
Se recomienda consultar bibliografía específica ra o auxiliar que los reciba.
y confeccionar protocolos de estabilidad y compati- Se recomienda que el producto terminado
bilidad de los medicamentos citostáticos. sea entregado con el dispositivo médico
adecuado.
CONTROL DE CALIDAD
Se deberá establecer un programa de control pe- ADMINISTRACIÓN
riódico referente a la identificación del principio La administración estará a cargo del personal de
activo y las dosis. enfermería calificado.
La reconstitución de fármacos citostáticos puede El farmacéutico especializado en oncología, tra-
ocasionar errores de medicación que impliquen bajará en forma conjunta con el equipo de salud
graves consecuencias para los pacientes debido a su para lograr la administración óptima del medica-
estrecho margen terapéutico. En el proceso global mento al paciente.
de tratamiento con quimioterapia existen distintos Se enumerarán a continuación algunas reco-
pasos en los cuales se puede producir un error po- mendaciones generales para la administración por
tencial. Por este motivo, es necesario establecer parte del personal de enfermería y sobre el manejo
estrategias para reducir la probabilidad de que esto de las excretas.
último ocurra. La preparación es uno de los puntos
más críticos de todo el proceso, y por tanto resulta
imprescindible la implementación de controles de Recomendaciones para la administración de
calidad para reducir la probabilidad de que se pro- citostáticos
duzca un error. Se han establecido diferentes siste- Utilizar guantes estériles y descartarlos
mas para controlar la calidad de los preparados: después de cada uso.
control de volúmenes, control de viales utilizados, Utilizar barbijo para protección de pacien-
control de pesada y controles de rótulo. No obstan- tes inmunocomprometidos.
te, no existe hasta el momento ningún método infa- Usar camisolín de mangas largas con puños
lible para detectar errores de dosificación. elastizados, tener en cuenta que los guantes
Inspección visual deben ir por debajo del puño del camisolín.
Se deberá inspeccionar cambio de coloración, Controlar la administración, para detectar
presencia de partículas visibles, turbidez, formación posibles extravasaciones.
de gas, integridad del envase y del cierre. La orina y heces de estos pacientes deben
manipularse con sumo cuidado y usando
guantes.
Control de rótulo
En el proceso de preparación, además de esta-
blecer medidas para disminuir errores de dosifica- BIOSEGURIDAD
ción con el rotulado de los viales previo a su prepa-
Exposición accidental
ración, también es importante establecer un control
Después de una exposición sin contacto con la
de etiquetado previo a la dispensación por compa-
piel, se deben quitar los guantes y prendas contami-
ración del rótulo con la prescripción y la orden de
nadas, lavar las manos y colocar guantes nuevos. Si
preparación. el citostático tomara contacto directo con la piel del
manipulador se recomienda seguir las indicaciones
DISTRIBUCIÓN Y DISPENSACIÓN descriptas en la Tabla . Si el área afectada está
lacerada o irritada es conveniente consultar inme-
diatamente al médico. En el caso de producirse un Protocolo de actuación en caso de derrames
corte con aguja o con vidrio hay que lavar la zona Barbijo de baja porosidad
con abundante agua tibia y jabón, y consultar inme- Anteojos protectores
diatamente al médico. Doble par de guantes, de polivinilo o neo-
Derrames preno
Pueden producirse derrames por accidente, du- Botas o cubre calzados
rante la preparación, administración o transporte de Pala para recolectar restos de material y vi-
los medicamentos citotóxicos. Todo el personal drios
implicado en la limpieza de un derrame debe llevar Doble bolsa descartable para restos de ci-
material protector (barbijo de baja porosidad, doble tostáticos
guante y camisolín). El material conteniendo el Paños y gasas absorbentes
agente citotóxico, se considerará contaminado y por Escobilla recolectora
tanto, se colocará en una bolsa, de polietileno color Kit de neutralizantes químicos
rojo de no menos de 100 µm de espesor, para su Sachet de agua
destrucción.
Desechos
El equipo para derrames estará convenientemen- Los desechos deben colocarse en recipientes de
te acondicionado e identificado en un lugar fácil- paredes rígidas para su posterior incineración.
mente accesible. Nunca deberán arrojarse medicamentos ni dese-
chos citostáticos a la red cloacal o desagües.
Composición:
[NOTA: en todos los casos de contacto con citostáticos se recomienda consultar rápidamente al servicio de Medi-
cina Laboral.]
Farmaco Acción en la piel Norma de actuación en caso de contacto con la Piel
Sumergir 10´ en buffer fosfato , luego lavar con agua y
Actinomicina - D Vesicante
jabón
Amsacrina Vesicante Lavar con agua y jabón
Bleomicina Tóxico local , Alegógeno Lavar enérgicamente con agua y jabón
Carboplatino No Irritante Lavar con agua
Lavar con agua . Si aparece irritación aplicar solución de
Carmustina Vesicante
CO3HNa
Ciclofosfamida Irritante Lavar con agua
Cisplatino Potencial alergénico Lavar con abundante agua
Citarabina Irritante Lavar con abundante agua y jabón
Dacarbazina Irritante Lavar con agua y jabón
Daunorubicina Irritante - Vesicante Lavar rápidamente con agua y jabón
Doxorubicina Irritante - Vesicante Lavado abundante con agua y jabón
Epirubicina Irritante - Vesicante Lavado abundante con agua y jabón
Etopósido Irritante Lavar con abundante agua
Fluorouracilo Inflamación en la piel Lavar con agua
Idarubicina Irritante - Vesicante Lavado abundante con agua y jabón
Ifosfamida Irritante Lavar con agua
Irinotecan No Irritante Lavar con agua
L - Asparaginasa No Irritante Lavar con agua
Mecloretamina Vesicante Lavar rápidamente con agua y jabón
Melfalán Vesicante Lavar rápidamente con agua y jabón
Metotrexato No Vesicante Lavado con abundante agua
Lavar con CO3HNa 1M , luego con abundante agua y
Mitomicina Vesicante
jabón
Mitoxantrona Irritante Lavar con agua
Oxaliplatino No Irritante Lavar con agua
Paclitaxel Irritante Lavar con abundante agua
Tenipósido Irritante Lavar con abundante agua
Thiotepa No Irritante Lavar con agua
Vinblastina Irritante - Vesicante Lavar con abundante agua
Vincristina Irritante - Vesicante Lavar con abundante agua
Vindesina Irritante - Vesicante Lavar con abundante agua
1027. BUENAS PRÁCTICAS DE PREPARACIÓN DE
MEDICAMENTOS MAGISTRALES
ALCANCE Y DEFINICIONES parte de éste de las Buenas Prácticas de Preparación
de Medicamentos Magistrales.
Buenas Prácticas de Preparación de
medicamentos magistrales: es el conjunto de CAPÍTULO 2º
normas y procedimientos que contribuyen a
LOS PREPARADOS MAGISTRALES
asegurar la calidad de los medicamentos
Para la preparación de cada medicamento
magistrales.
magistral es necesario contar con la receta
Medicamento magistral: es todo medicamento correspondiente, la cual deberá estar completa en
prescripto en una receta magistral para un paciente todas sus partes y contener toda la información
individualizado, posteriormente preparado, necesaria para llevar a cabo la preparación y rotular
envasado y rotulado por un Farmacéutico en el adecuadamente la misma, correspondiendo al
laboratorio de su Farmacia y dispensado en la Director Técnico completar la fórmula con los
misma. excipientes adecuados, debiendo respetar las dosis
Receta magistral: la receta magistral debe habituales y máximas recomendadas para los
indicar claramente la composición cuali-cuantitativa principios activos.
de los principios activos, utilizando los nombres La preparación del medicamento magistral debe
establecidos en la Farmacopea Argentina o la registrarse en el libro recetario.
Denominación Común Internacional (DCI) de la Por la propia naturaleza de estos medicamentos
OMS. Sólo se aceptan sinonimias contempladas en y el conocimiento específico que dispone el
la Farmacopea Argentina. Debe respetar las dosis Farmacéutico que lo prepara, es de su competencia
habituales y máximas, indicadas en la Farmacopea proveer al paciente la información necesaria para su
o, en su ausencia en bibliografía internacional de correcta utilización y conservación.
referencia.
CAPÍTULO 3o
Debe indicar la vía e indicaciones de
administración, los datos completos del profesional LABORATORIOS
prescriptor, los datos del paciente y la fecha de 3-1 Consideraciones generales
emisión. La preparación y el control de los preparados
magistrales deben efectuarse en laboratorios que
forman parte de la estructura edilicia de la Farmacia
CAPÍTULO 1o y estar emplazados en salas totalmente
PERSONAL independientes del lugar de atención al público,
La preparación de medicamentos magistrales separados del depósito y aislados de otras
puede ser efectuada por el Farmacéutico Director dependencias de la Farmacia.
Técnico o por los Farmacéuticos Auxiliares. La Todas las áreas de la Farmacia destinadas a las
Farmacia debe estar debidamente habilitada a tal preparaciones magistrales deben contar con
efecto por la Autoridad Sanitaria jurisdiccional espacios adecuados para la disposición ordenada de
competente. los equipos y materiales, y deben poseer
El Director Técnico es el responsable de la condiciones de temperatura y humedad apropiadas.
calidad y seguridad de los preparados magistrales, 3-2 Instalaciones
siendo por ello responsable del origen, la calidad y Para la preparación de medicamentos
la pureza de los principios activos, excipientes, magistrales la Farmacia debe disponer de un
envases y otros materiales que utilice, del diseño laboratorio general, destinado a la preparación de
galénico, de la preparación de los productos y del formas farmacéuticas no estériles, al
aseguramiento de su calidad. fraccionamiento de materias primas y excipientes y
El Director Técnico debe organizar las tareas al aseguramiento de la calidad, pudiendo contar con
relacionadas con la preparación de medicamentos otros laboratorios especiales.
magistrales, debiendo precisar por escrito las 3-3 Características
funciones de los Farmacéuticos Auxiliares y del El laboratorio debe contar con buena
resto del personal, y supervisar su cumplimiento. iluminación, adecuada renovación de aire y mallas
El Director Técnico debe asegurar la aptitud de metálicas en todas las aberturas de ventilación e
todo el personal involucrado en la preparación de instrumentos para medir la temperatura y humedad
medicamentos magistrales y el cumplimiento por del ambiente de trabajo. Sus pisos, paredes y
techos deben ser lisos con bordes sanitarios y las La Farmacia debe poseer procedimientos
mesas de trabajo deben ser lisas, impermeables y operativos estandarizados para el uso de cada uno
resistentes a agentes químicos. de sus equipos, para la preparación de
Los laboratorios especiales deben cumplir con medicamentos magistrales de uso corriente y para
requisitos adicionales que los hagan aptos para la las actividades de limpieza, disposición de residuos,
actividad a desarrollar. higiene y seguridad.
3-4 Materiales y Equipos La Farmacia debe contar con registros
Deben ser acordes con el tipo de medicamentos individuales de entrenamiento y calificación del
a preparar, suficientes en cantidad y calidad y personal.
apropiadamente acondicionados e instalados. En los En la Farmacia se deben almacenar los registros
equipos que requieren calibración, ésta debe de mantenimiento y calificación de equipos, y los
realizarse con la periodicidad adecuada y su registros que permitan verificar el cumplimiento de
calibración debe verificarse y documentarse las actividades de limpieza, disposición de residuos,
regularmente. higiene y seguridad.
3-5 Higiene y Seguridad En la Farmacia se debe llevar todo libro oficial
La Farmacia debe contar con directrices escritas que asegure y avale el debido cumplimiento de las
sobre higiene y seguridad, las cuales deben ser regulaciones vigentes.
acordes con el tipo de medicamento a preparar y 4-3 Materias primas, envases y materiales de
exhibirse en lugar visible del laboratorio. El acondicionamiento
Director Técnico es responsable de generar, Todos los materiales que ingresan a la Farmacia
documentar, hacer cumplir y llevar un registro del para ser empleados en la preparación, envasado y
cumplimiento de dichas directrices. acondicionamiento de medicamentos deben contar
3-6 Limpieza con una ficha individual de registro que incluya la
La Farmacia debe contar con procedimientos de fecha de ingreso.
limpieza del área de preparación de medicamentos Toda materia prima y excipiente que ingresa a la
magistrales acordes con el tipo de preparaciones Farmacia debe contar con su correspondiente
que se realicen. El Director Técnico es el certificado de análisis del proveedor firmado por su
responsable de generar y documentar dichos Director Técnico; caso contrario, el Director
procedimientos y de asegurar y documentar Técnico de la Farmacia deberá realizar los controles
debidamente su cumplimiento. pertinentes.
3-7 Residuos La documentación correspondiente a todos los
La Farmacia deberá contar con mecanismos materiales utilizados en la preparación de los
para el manejo interno y la disposición de residuos medicamentos magistrales debe ser debidamente
considerados peligrosos. El Director Técnico es archivada.
responsable de generar e implementar los
CAPÍTULO 5º
procedimientos apropiados y necesarios para tal fin
y de asegurar y documentar debidamente su MATERIAS PRIMAS, ENVASES Y
cumplimiento. MATERIAL DE ACONDICIONAMIENTO
La calidad de las materias primas, envases y
CAPÍTULO 4º materiales de acondicionamiento inciden en la
DOCUMENTACIÓN calidad del producto final, por lo que el
4-1 General Farmacéutico debe tener especial cuidado en todos
La documentación constituye una parte los aspectos del manejo de los mismos.
fundamental del sistema de aseguramiento de la 5-1 Materias primas
calidad. Son aceptables los registros Sólo pueden ser empleadas aquellas materias
computarizados y los producidos mediante primas, principios activos y excipientes, codificadas
microfilmación. en la Farmacopea Argentina o descriptas en textos
Toda la documentación referida a materias de reconocida jerarquía.
primas y excipientes debe utilizar los nombres Todas las materias primas que ingresan a la
oficiales de la FA o la Denominación Común Farmacia deben ser puestas en cuarentena,
Internacional (DCI) para sustancias no codificadas. debidamente rotuladas y en una ubicación especial,
4-2 Manuales, procedimientos y registros hasta tanto se haya verificado su identidad con la
La Farmacia debe contar con un manual documentación que respalda su calidad. El Director
operativo general y manuales de uso, Técnico es responsable de la realización de todo
mantenimiento y calificación de sus equipos. esfuerzo razonable en procura de la identificación
de toda materia prima que ingresa a la Farmacia. El establecida en la presente Farmacopea o en la
período de cuarentena finaliza con la aceptación o bibliografía internacional de referencia.
rechazo de la materia prima.
Las materias primas rechazadas deben ser 6-2 Preparación del medicamento magistral
almacenadas separadamente, hasta su disposición Debe hacerse en una zona de trabajo limpia y
como residuo o devolución al proveedor. libre de cualquier producto, material o documento
Toda materia prima que haya superado la fecha ajeno a la preparación, debiendo estar asegurada
de reválida o reanálisis, (ver 1040. Estudios de previamente la provisión de todos los elementos y
Estabilidad) debe ser puesta en cuarentena hasta documentación necesarios como así la limpieza y el
tanto se determine analíticamente su aptitud y una adecuado funcionamiento de los equipos a utilizar.
nueva fecha de reanálisis; en caso de no ser apta 6-3 Vencimiento del medicamento magistral
debe almacenarse separadamente para su Los preparados magistrales se realizan para una
disposición como residuo. administración a plazo definido y corto, por lo que
La utilización, en casos debidamente deben poseer fechas de vencimiento asignadas
justificados, de una especialidad medicinal como acordes al período de tratamiento.
materia prima, para la preparación de un 6-4 Rotulado
medicamento magistral, quedará a criterio del Los medicamentos magistrales deben estar
Director Técnico. debidamente rotulados (ver Consideraciones
5-2 Rotulado Generales) para asegurar su correcta identificación,
Todo envase de materia prima o excipiente debe haciendo constar en el rótulo la composición cuali-
contener todos los datos que permitan su correcta cuantitativa de sus principios activos, la
identificación, debiendo consignarse de manera composición cualitativa de sus excipientes, su
obligatoria su nombre, proveedor, número de lote o forma farmacéutica y su vía de administración,
partida, fecha de reanálisis y número de registro. posología y condiciones de conservación, fecha de
5-3 Almacenamiento preparación y vencimiento, y su número de registro
Las materias primas deben ser almacenadas bajo en el libro recetario, como así datos del paciente,
condiciones apropiadas, que aseguren su estabilidad del médico que lo prescribió, la Farmacia donde se
durante su período de vida útil. (ver preparó y su Director Técnico.
Consideraciones Generales)
CAPÍTULO 7º
5-4 Envases
El medicamento magistral debe ser envasado en ASEGURAMIENTO DE CALIDAD
envase apto (ver Consideraciones Generales, 420. Se debe poner especial énfasis en asegurar la
Envases primarios de plástico y 430. Envases de calidad de todos los pasos de la preparación,
vidrio), de acuerdo a las propiedades físicas y documentando apropiadamente cada uno.
químicas del preparado farmacéutico, de modo de Para las diferentes formas farmacéuticas, se
evitar se alteren la calidad, la concentración o la exigen los siguientes ensayos:
pureza de la preparación. Se debe considerar la 7-1 Cápsulas y comprimidos
posible interacción de los productos activos con el Aspecto
envase. Control de peso
CAPÍTULO 6º Prueba de desintegración
7-2 Polvos
PREPARACIÓN Aspecto
6-1 Diseño de la fórmula Control de peso
La correcta preparación de una fórmula Reconstitución: en el caso que sea aplicable.
magistral comienza con el diseño de la misma, tras 7-3 Inyectables en ampollas y viales
la recepción de la receta magistral. Aspecto y examen de partículas por observación
La fórmula debe evaluarse para determinar la visual.
factibilidad de su preparación y debe emplearse un pH del inyectable.
diseño galénico que tenga en cuenta el Control de cierre de las ampollas.
comportamiento fisicoquímico de sus componentes, Control de contenido.
sus posibles incompatibilidades y las eventuales Control de esterilidad, para inyectables
interacciones con el envase. obtenidos por llenado aséptico.
Para el ajuste de la fórmula cuantitativa se debe Validación de procesos de esterilización para
tener en cuenta la expresión correcta de la dosis inyectables obtenidos por esterilización final.
Control de endotoxinas bacterianas. Se debe
realizar para aquellos preparados que por la
naturaleza de sus componentes, por el volumen de
administración, o por las particularidades del
tratamiento, así lo justifiquen.
7-4 Cremas, geles, ungüentos y pastas
Aspecto
pH
Control de contenido.
7-5 Supositorios y óvulos
Aspecto y homogeneidad por examen visual
Control de peso
Tiempo de fusión o Prueba de Disgregación
7-6 Soluciones, suspensiones y emulsiones
(orales y tópicas)
Aspecto
pH
Hermeticidad del cierre
Control de contenido
7-7 Observaciones
Los preparados no inyectables estériles deben
cumplir con el ensayo de esterilidad o la validación
del proceso de esterilización según corresponda.
Los colirios deben cumplir las condiciones de
inyectables con excepción de endotoxinas
bacterianas.
CAPÍTULO 8o
FUENTES DE INFORMACIÓN
La Farmacia debe disponer de la última edición
de la FA, recomendándose además otros códigos y
textos actualizados de reconocida jerarquía, que
provean una razonable cobertura de información
específica.
Deberá contemplar disponer de los medios
apropiados para acceder a bases de datos y centros
de información sobre medicamentos que provean
información farmacéutica y farmacoterapéutica
actualizada y pertinente que contribuyan a
garantizar la calidad y seguridad de los
medicamentos.
CAPÍTULO 9°
Las Farmacias que preparan medicamentos
magistrales, además de cumplir las Buenas
Prácticas de Preparación de medicamentos
magistrales establecidas en esta farmacopea,
deberán cumplimentar los requerimientos legales
establecidos por la Autoridad Sanitaria
jurisdiccional competente para este tipo de
actividades.
1030. CRIADEROS DE POLLOS LIBRES DE PATÓGENOS
ESPECIFICADOS PARA LA PRODUCCIÓN Y CONTROL DE
CALIDAD DE LAS VACUNAS
Ver 1030. Criaderos de pollos libres de patógenos especificados para la producción y control de calidad
de las vacunas en Apartado de Vacunas en Volumen III.
1035. EQUIVALENCIA ENTRE MEDICAMENTOS
La seguridad, eficacia y calidad de los produc- Definiciones
tos multifuente se sustenta fundamentalmente
Alternativa farmacéutica
sobre dos pilares: los estudios de equivalencia in
Los productos son alternativas farmacéuticas
vivo y/o in vitro y las Buenas Prácticas de Manu-
si ellos contienen la misma cantidad molar de
factura.
principio activo, pero difieren en la forma far-
Los estudios de equivalencia permiten carac- macéutica (por ejemplo comprimidos, cápsulas) o
terizar el comportamiento de una preparación en la forma química (por ejemplo sal, éster). Las
farmacéutica multifuente con respecto a una pre-
alternativas farmacéuticas proveen la misma
paración de referencia de manera de obtener una
cantidad de porción activa por la misma vía de
predicción confiable de sus efectos y garantizar la
administración, pero no son equivalentes farmac-
equivalencia terapéutica.
éuticos. Ellos pueden o no ser equivalentes terap-
Los estudios de equivalencia in vivo involu- éuticos.
cran estudios farmacocinéticos, farmacodinámi-
cos o ensayos clínicos comparativos, mientras Alto riesgo sanitario
que los estudios de equivalencia in vitro se llevan Es la probabilidad de aparición de complica-
a cabo mediante la comparación de los perfiles de ciones amenazantes de la enfermedad para la vida
disolución entre el producto multifuente y el o para la integridad psicofísica de la persona y/o
producto de referencia. de reacciones adversas graves (muerte, hospitali-
La demostración de equivalencia requiere de zación del paciente, prolongación de la hospitali-
estudios in vivo, por ejemplo para principios zación, discapacidad significativa o persistente,
activos de alto riesgo sanitario y estrecho rango incapacidad o amenaza de muerte), cuando la
terapéutico, o de estudios de equivalencia in vitro, concentración sanguínea del principio activo no
para aquellos principios activos que cumplen se encuentra dentro de la ventana terapéutica.
determinados requisitos de solubilidad y permabi- Biodisponibilidad
lidad, de acuerdo con el Sistema de clasificación En sentido amplio, velocidad y cantidad con
biofarmacéutica y además poseen amplio margen la cual el principio activo es absorbido desde la
terapéutico. forma farmacéutica y se encuentra disponible en
Otro de los requisitos sumamente importantes forma inalterada en el/los sitio/s de acción. En la
de los productos multifuente involucra los proce- mayoría de los casos no es posible medir la con-
dimientos y prácticas empleadas en la manufactu- centración de principio activo en el/los sitio/s de
ra, almacenamiento y distribución de esos pro- acción. No obstante, se considera que la concen-
ductos los cuales deben llevarse a cabo de acuer- tración del principio activo en la circulación ge-
do a los estándares de las Buenas Prácticas de neral se encuentran en equilibrio con la concen-
Manufactura de manera de asegurar la calidad, tración en el/los sitio/s de acción. La Biodisponi-
seguridad y eficacia de los mismos durante todo bilidad puede, entonces, ser definida como la
su período de vida útil. velocidad y cantidad (tasa y grado de disponibili-
Para algunos productos, por ejemplo las for- dad) con la cual el principio activo es absorbido
mulaciones parenterales de compuestos altamente desde la forma farmacéutica y se encuentra dis-
solubles en agua, la seguridad y eficacia es ade- ponible en forma inalterada en la circulación
cuadamente garantizada por la implementación de general. Se asume, en consecuencia, que en un
las Buenas Prácticas de Manufactura, por el cum- mismo individuo, una concentración plasmática
plimiento de los estándares de calidad y por las esencialmente similar en el curso del tiempo,
especificaciones de Farmacopea. Para otra clase resultará en una concentración esencialmente
de productos, incluyendo muchos de origen bio- similar en el sitio de acción.
lógico, tales como vacunas, suero animal, produc-
tos derivados de sangre y plasma humano y pro- Bioequivalencia
ductos elaborados por biotecnología, se plantean Dos productos farmacéuticos son bioequiva-
otras consideraciones que no están incluidas en lentes si son equivalentes farmacéuticos o alterna-
este capítulo. tivas farmacéuticas y su biodisponibilidad (tasa y
Por último, resulta de fundamental importan- grado de disponibilidad), después de su adminis-
cia que los productos de referencia empleados en tración en la misma dosis molar, es semejante a
los estudios comparativos (in vivo e in vitro) sean tal punto que cabe prever que sus efectos serán
válidos y confiables, sustentando dichas cualida- esencialmente los mismos. La Bioequivalencia se
des con el aporte de datos que garanticen la cali- focaliza sobre la equivalencia de la liberación de
dad, seguridad y eficacia del producto seleccio- principio activo desde el producto y la subsi-
nado. guiente absorción en la circulación sistémica.
Equivalencia farmacéutica
Dos especialidades medicinales son equiva- documentadas, o el que la autoridad sanitaria
lentes farmacéuticos si contienen la misma canti- determine para cada caso.
dad molar de principio activo en la misma forma
Producto innovador
farmacéutica, están destinados a ser administra-
Generalmente el producto farmacéutico inno-
dos por la misma vía y cumplen con estándares de
vador es aquél que fue autorizado por primera vez
calidad idénticos o comparables. Sin embargo, la
en su país de origen, sobre la base de documenta-
equivalencia farmacéutica no necesariamente
ción de calidad, seguridad y eficacia.
implica equivalencia terapéutica ya que diferen-
cias en los excipientes, en el proceso de elabora- Productos multifuente
ción, u otras pueden determinar disparidades en el Productos farmacéuticos de fuentes múltiples
comportamiento de los productos. (diferentes productores) son equivalentes farmac-
éuticos o alternativas farmacéuticas que pueden o
Equivalencia terapéutica no haber demostrado equivalencia terapéutica.
Dos productos son terapéuticamente equiva- Los productos farmacéuticos de fuentes múltiples,
lentes si ellos son equivalentes farmacéuticos o
que hayan demostrado equivalencia in vivo o in
alternativas farmacéuticas y después de la admi-
vitro, se consideran terapéuticamente equivalen-
nistración en la misma dosis molar, sus efectos,
tes al producto de referencia.
con respecto a eficacia y seguridad, serán esen-
cialmente los mismos cuando sean administrados Sistema de clasificación biofarmacéutica
a pacientes por la misma vía de administración Es un marco científico para clasificar princi-
bajo las condiciones especificadas en el prospec- pios activos sobre la base de su solubilidad acuo-
to. La equivalencia terapéutica puede ser demos- sa y su permeabilidad intestinal. Cuando se cum-
trada por estudios adecuados de equivalencia, plen determinados criterios de solubilidad, per-
sean estos farmacocinéticos, farmacodinámicos, meabilidad y velocidad de disolución del medi-
clínicos o in-vitro. camento el Sistema de Clasificación Biofarmac-
éutica, (aplicable sólo a la forma farmacéutica
Estrecho rango terapéutico sólida oral de liberación inmediata), puede ser
Son aquellas principio activos que presentan
usado como una herramienta para justificar la
alguna de las características siguientes: demostración de equivalencia mediante estudios
a) La relación entre la dosis letal media DL50 in vitro (bioexcepciones).
y la dosis efectiva media DE50 es menor de 2.
b) La relación entre la mínima concentración
tóxica y la mínima concentración efectiva es
menor de 2.
c) El uso seguro y efectivo del producto que
contiene el principio activo en cuestión requiere
una cuidadosa dosificación y monitoreo del pa-
ciente.
Estudios de equivalencia
Son estudios que permiten inferir la equiva-
lencia terapéutica entre el producto multifuente y
el producto de referencia, empleando metodología
in vivo o in vitro.
Estudios de equivalencia in vitro
Estudios de disolución in-vitro para obtener la
similaridad de los perfiles de disolución entre el
producto multifuente y el producto de referencia
en tres medios diferentes: pH 1,2; pH 4,5 y pH
6,8.
Producto de referencia
El producto de referencia es normalmente el
producto innovador para el cual la seguridad,
eficacia y calidad han sido establecidas. Cuando
el producto innovador no se encuentre disponible
localmente, o bien se encuentre disponible pero
no haya demostrado su equivalencia terapéutica
con el producto innovador registrado en el país
de origen, el líder del mercado puede ser utilizado
como producto de referencia cuando su eficacia,
seguridad y calidad hayan sido establecidas y
1040. ESTUDIOS DE ESTABILIDAD
Los estudios de estabilidad se efectúan para Degradación forzada - Estos estudios se llevan a
determinar el periodo de tiempo y las condiciones de cabo para obtener datos sobre los productos y
almacenamiento en las cuales las materias primas y las mecanismos de descomposición de la sustancia y
preparaciones oficiales se mantienen dentro de las verificar la aptitud de los métodos analíticos
especificaciones sobre identidad, potencia, calidad y propuestos. Su naturaleza depende del tipo de
pureza, establecidas en las monografías de esta sustancia y producto farmacéutico. Los ensayos
Farmacopea. pueden realizarse sobre un único lote de material e
La estabilidad de los productos farmacéuticos, en incluir el efecto de temperaturas superiores a las
su envase primario final, debe ser demostrada condiciones elegidas para el estudio acelerado, por ej.,
mediante el empleo de métodos apropiados. Los en incrementos de 10 °C (50, 60, etc.), el efecto de la
procedimientos analíticos empleados deben permitir humedad (por ej., 75 % o mayor), oxidación y
determinar la sustancia en presencia de sus productos fotólisis y su susceptibilidad a la hidrólisis a distintos
de degradación. Deben considerarse los cambios en valores de pH.
sus propiedades físicas a lo largo del tiempo. Escala piloto - Procedimiento representativo del
La estabilidad de una sustancia o un producto que se aplica en escala de producción.
farmacéutico puede verse afectada por las condiciones
de almacenamiento (temperatura, luz, aire y Lote piloto - Lote producido para fines
humedad), así como por su interacción con el envase. experimentales, generalmente de menor tamaño que el
Las condiciones bajo las que se ha fijado la fecha de lote de producción. Puede elaborarse para destinarlo
vencimiento deben figurar en el rótulo. Estas a estudios de estabilidad, desarrollo, etc.
condiciones de almacenamiento deben mantenerse Estudio de estabilidad acelerado - Estudio
durante la distribución de la sustancia o producto diseñado para aumentar la velocidad de degradación
farmacéutico, es decir desde el momento de la entrega química o cambios en las propiedades físicas de una
por parte del elaborador hasta la fecha de sustancia o un producto farmacéutico, empleando
vencimiento. condiciones de almacenamiento extremas. Estos
El mundo se halla dividido en cuatro Zonas estudios tienen como objeto determinar los
climáticas. Los estudios de estabilidad deben parámetros cinéticos de los procesos de degradación o
orientarse para la región donde serán destinados predecir la vida útil del producto farmacéutico en
considerando la zona climática estipulada; nuestro condiciones normales de almacenamiento. Los
país se encuentra en Zona II. resultados de los estudios acelerados deben ser
OBJETIVO complementados por los estudios de estabilidad de
larga duración. Estos datos pueden también
El propósito de un estudio de estabilidad es emplearse para evaluar efectos químicos a largo plazo
establecer el periodo de tiempo en el cual las en condiciones no aceleradas y para evaluar el
propiedades de las sustancias y/o productos impacto de desviaciones de corta duración de las
farmacéuticos se mantienen dentro de sus condiciones de almacenamiento declaradas en el
especificaciones bajo la influencia de una variedad de rótulo, como las que pueden ocurrir durante el
factores ambientales tales como temperatura, transporte y distribución. Los resultados de estudios
humedad y luz, los demás componentes de la acelerados no siempre predicen los cambios físicos.
formulación y sus envases, permitiendo determinar las
condiciones de almacenamiento, periodos de Estudio de larga duración (en tiempo real) -
reanálisis y un periodo de vida útil. Estudio diseñado para la evaluación de las
características de estabilidad física, química, biológica
DEFINICIONES y microbiológica de un producto farmacéutico o una
Datos primarios de estabilidad - Son los datos sustancia bajo las condiciones de almacenamiento
analíticos obtenidos de la sustancia o el producto recomendadas, que cubre todo el periodo de vida útil
farmacéutico en estudio, almacenado en el envase o el periodo de reanálisis propuesto.
primario definitivo bajo condiciones de Fecha de reanálisis - Fecha en que se debe
almacenamiento fijadas, que permiten fijar la realizar un nuevo análisis para verificar que la
frecuencia de los controles o el periodo de vida útil sustancia o producto farmacéutico es aún apropiado
propuesto. para su uso.
Fecha de vencimiento - Fecha proporcionada por estudios adicionales en condiciones intermedias (por
el elaborador; se basa en los estudios de estabilidad ej., 30 2 °C / 60 5 % HR). Un cambio
del producto farmacéutico después de la cual el significativo a 40 °C / 75 % HR o a 30 °C / 60 % HR
mismo no debe emplearse. El producto debe cumplir se define como la falta de cumplimiento de las
durante todo este periodo con las especificaciones especificaciones.
dadas en esta Farmacopea. Los datos (de estudios acelerados o en condiciones
intermedias) pueden emplearse para evaluar el
Zonas climáticas - Se refiere al concepto de
impacto de las variaciones en las condiciones de
dividir al mundo en cuatro zonas para las cuales se
almacenamiento declaradas en el rótulo, que pueden
definen las condiciones climáticas que prevalecen.
producirse durante la distribución y el
ESTUDIOS DE ESTABILIDAD SOBRE almacenamiento.
SUSTANCIAS
Frecuencia de los ensayos - Para los estudios de
Procedimientos y criterios - Los ensayos deben larga duración, la frecuencia de ensayo debe ser
cubrir todas las características que puedan modificarse suficiente para establecer las características de
durante el almacenamiento, además de aquéllas que estabilidad de la sustancia. Para estudios de
tengan influencia sobre la identidad, potencia, calidad sustancias con un periodo de reanálisis de por lo
y pureza de la sustancia. menos 12 meses, en el ensayo de larga duración se
Los estudios de estabilidad deben cubrir las establece un ensayo cada 3 meses durante el primer
características físicas, químicas y microbiológicas de año, cada 6 meses durante el segundo año y luego
la sustancia. Deben aplicarse métodos indicadores de anualmente. Se recomienda, para los estudios
estabilidad validados. acelerados de 6 meses, un mínimo de tres puntos que
Los estudios de estabilidad acelerados se llevan a incluyan los puntos inicial y final.
cabo sobre un lote piloto y, el de larga duración, sobre
Envases - Los envases que se utilicen en los
por lo menos tres lotes pilotos debiendo cubrir un
estudios de estabilidad de larga duración deben ser
mínimo de 12 meses.
iguales a los envases a utilizar para la distribución de
Especificaciones - Los límites de aceptación la sustancia. En el caso de envases de gran capacidad,
deben definirse a partir del material empleado en los pueden emplearse envases de las mismas
ensayos preclínicos, clínicos o los utilizados en el características pero de menor tamaño.
desarrollo del producto. Se deben incluir límites Evaluación - El grado de variabilidad de los lotes
máximos individuales y totales para productos de individuales compromete las extrapolaciones que
degradación e impurezas. deban hacerse sobre los futuros lotes de producción
En la Tabla se indican las condiciones de estudios con respecto al cumplimiento de las especificaciones
de larga duración, acelerados y tiempos mínimos. En hasta la fecha de reanálisis.
caso de que se exija el estudio de estabilidad de una Una aproximación aceptable para los atributos
sustancia, debe presentarse un estudio de larga cuantificables, que disminuyen con el tiempo, consiste
duración de no menos de doce meses sobre por lo en determinar el tiempo en el cual el límite inferior del
menos tres lotes y se deben tomar, luego de la intervalo de confianza (p = 95 %) para la curva de
presentación hecha para el registro, los datos que degradación media se intercepte con el límite inferior
cubran todo el periodo que se solicita para el del intervalo de aceptación. Si se trata de una
reanálisis, para remitirlos a la Autoridad Sanitaria si propiedad cuantificable que aumenta con el tiempo, se
es que ésta lo solicita. El estudio de estabilidad determina el tiempo al cual el límite superior del
acelerado es optativo. intervalo de confianza (p = 95 %) para la curva de
Condiciones de almacenamiento durante el degradación media se intercepte con el límite superior
estudio - La duración del estudio y las condiciones del intervalo de aceptación. Si el análisis muestra que
de almacenamiento deben ser suficientes para cubrir la variabilidad lote a lote es pequeña, resulta
la distribución, almacenamiento y periodo de uso ventajoso combinar los datos en una estimación total;
subsiguiente de la sustancia. La aplicación de las ésto puede realizarse aplicando ensayos estadísticos
mismas condiciones de almacenamiento empleadas apropiados. Si no es apropiado combinar datos de
para el estudio del producto farmacéutico facilita la varios lotes, el periodo de reanálisis puede
evaluación y revisión comparativa de los resultados. determinarse a partir del lote que se mantenga dentro
Cuando se producen cambios significativos de las especificaciones del tiempo menor.
durante los 6 meses de almacenamiento bajo las La naturaleza de las degradaciones determina la
condiciones del estudio acelerado, deben realizarse necesidad de una transformación de los datos para el
análisis de regresión lineal. Comúnmente, la relación Los ensayos a realizar durante el estudio deben
puede ser representada por una función lineal, cubrir no solamente la estabilidad química y biológica
cuadrática o cúbica sobre una escala aritmética o sino también los cambios en las propiedades físicas y
logarítmica. Es aconsejable emplear métodos características organolépticas, atributos
estadísticos para ensayar la bondad del ajuste de los microbiológicos y ensayos funcionales. Deben
datos sobre todos los lotes y lotes combinados determinarse además, el mantenimiento de la
(cuando corresponda) de las curvas o rectas obtenidas. concentración y eficacia de los conservantes mediante
En algunos casos, es posible extrapolar los datos ensayos y valoraciones apropiadas.
del estudio de larga duración más allá del periodo de
Especificaciones - Los criterios de aceptación del
observación, para extender el periodo de reanálisis,
periodo de vida útil deben determinarse considerando
particularmente cuando los datos del estudio
toda la información de estabilidad disponible.
acelerado apoyan esta posibilidad, la bondad del
Cuando corresponda, se deben incluir los límites
ajuste de cualquier modelo matemático, el tamaño del
máximos para los productos de degradación y para
lote, la existencia de otros datos de estabilidad, el
otras determinaciones, por ejemplo límites máximos o
conocimiento del mecanismo de degradación, etc. En
mínimos para tamaño de partícula o velocidad de
estos casos se supone que las características cinéticas
disolución.
de la degradación permanecen invariables más allá de
En la Tabla se indican las condiciones y tiempos
los datos observados, esta circunstancia debe
mínimos de estudios de larga duración y acelerados.
demostrarse al justificar cualquier extrapolación.
Los estudios de larga duración son obligatorios.
Rotulado - Sobre la base de la evaluación de la Deben tener un mínimo de doce meses de duración
estabilidad de la sustancia, debe establecerse un para su presentación para el registro aunque deben
intervalo de temperaturas de almacenamiento de continuarse hasta cubrir el periodo de vida útil
acuerdo con los requisitos establecidos. Cuando propuesto y quedar a disposición de la Autoridad
corresponda, deben establecerse requisitos específicos Sanitaria. El estudio de estabilidad acelerado y los de
particularmente para sustancias que no admiten el condición intermedia son optativos, pero pueden
congelamiento. emplearse para evaluar el efecto de periodos cortos de
Como resultado de la información obtenida a no cumplimiento de las condiciones de
partir del estudio de estabilidad, debe indicarse la almacenamiento fijadas (por ej., durante la
fecha de reanálisis. distribución).
Puede ser necesario aplicar consideraciones
ESTUDIOS DE ESTABILIDAD SOBRE
especiales para los productos que cambien física o
PRODUCTOS FARMACÉUTICOS
químicamente a bajas temperaturas, por ej., las
Procedimientos y criterios - El diseño del suspensiones o emulsiones que pueden sedimentar o
programa de estabilidad para un producto separarse, los aceites y las preparaciones semisólidas
farmacéutico debe hacerse sobre la base de la que pueden aumentar su viscosidad. Cuando se
información obtenida durante los estudios de emplean bajas temperaturas, el ensayo acelerado de
preformulación y formulación. Se deben estimar los seis meses deberá efectuarse a una temperatura por lo
cambios que pueden ocurrir durante el menos 15 °C por encima de la temperatura designada
almacenamiento y sobre esta base seleccionar las para el estudio de larga duración, junto con
variables de la formulación a estudiar durante el condiciones apropiadas de humedad relativa para esa
ensayo. La información de estabilidad tanto en los temperatura. Por ej., para un producto que debe ser
estudios de estabilidad acelerado como en los de larga almacenado bajo refrigeración, el ensayo acelerado
duración debe obtenerse sobre tres lotes piloto de la deberá realizarse a 25 2 °C / 60 5 % HR.
misma formulación y concentración en los envases
primarios definitivos. Cuando sea posible, los lotes Condiciones de almacenamiento durante el
del producto deben elaborarse empleando lotes estudio - La duración del estudio y las condiciones
diferentes de sustancia. de almacenamiento deben ser suficientes para cubrir
Los ensayos deben cubrir todos los atributos que la distribución, almacenamiento y periodo de uso
puedan modificarse durante el almacenamiento y subsiguiente (por ej., la reconstitución o la dilución
aquéllos que tengan influencia sobre la calidad, según se indique en el rótulo). En el caso de
seguridad y eficacia. Los procedimientos analíticos productos que deben ser reconstituidos para su
deben validarse y ser indicadores de la estabilidad. administración, se deben establecer las condiciones de
La necesidad y el grado de las repeticiones dependen almacenamiento y las correspondientes fechas de
de los resultados de los estudios de validación. vencimiento para el producto antes y después de
reconstituido.
El almacenamiento bajo condiciones de Evaluación - Debe adoptarse un enfoque
humedades relativas altas se aplica particularmente a sistemático para la presentación y la evaluación de la
productos farmacéuticos sólidos. Para productos tales información de estabilidad que debe cubrir, según
como soluciones, suspensiones, etc., contenidos en corresponda, características físicas, químicas,
envases diseñados para proveer una barrera biológicas y microbiológicas, incluyendo propiedades
permanente a la pérdida de agua, el almacenamiento particulares del producto farmacéutico (por ej.
específico bajo condiciones de humedad relativa alta velocidad de disolución para las formas sólidas de uso
no es necesario, pero debe aplicarse el mismo oral).
intervalo de temperaturas. La humedad relativa baja El grado de variabilidad de los lotes individuales
(por ej., 10 a 20 % HR) puede afectar adversamente a compromete en cierta medida las extrapolaciones que
productos envasados en envases semipermeables (por deban hacerse sobre los futuros lotes de producción
ej., soluciones en bolsas plásticas, gotas nasales en con respecto al cumplimiento de las especificaciones
envases plásticos pequeños, etc.) y debe considerarse hasta la fecha de vencimiento.
la realización del ensayo bajo tales condiciones. Un enfoque aceptable para los atributos
Cuando se producen cambios significativos cuantificables que se supone deben disminuir con el
durante el estudio acelerado, deben realizarse estudios tiempo, consiste en determinar el tiempo al cual el
adicionales en condiciones intermedias (por ej., límite inferior del intervalo de confianza (p = 95 %)
30 2 °C / 60 5 % HR. Un cambio significativo en para la curva de degradación media intercepte el
un estudio acelerado puede definirse como: límite inferior del intervalo de aceptación. Para los
1. una pérdida del 5 % de potencia del valor atributos que aumentan con el tiempo, se determina el
inicial de valoración de un lote; tiempo al cual el límite superior del mismo intervalo
2. cualquier producto de degradación que exceda de confianza intercepte el límite superior del intervalo
los límites establecidos; de aceptación. Si el análisis muestra que la
3. el producto excede sus límites de pH; variabilidad lote a lote es pequeña, es ventajoso
4. los resultados del ensayo de disolución están combinar los datos en una estimación total, y ésto
fuera de los límites especificados; puede realizarse aplicando ensayos estadísticos
5. el producto no cumple con las especificaciones apropiados. Si no es apropiado combinar datos de
de apariencia y propiedades físicas como color, se varios lotes, la vida útil puede determinarse a partir
produce separación de fases, suspendibilidad, dureza, del lote que se haya mantenido dentro de las
etc. especificaciones durante el menor tiempo.
La naturaleza de las degradaciones determinará la
Frecuencia de los ensayos - La frecuencia de los
necesidad de la transformación de los datos para el
ensayos debe ser suficiente para establecer las
análisis de regresión lineal. Comúnmente, la relación
características de estabilidad del producto.
puede ser representada por una función lineal,
Para estudios de larga duración, se establece un
cuadrática o cúbica sobre una escala aritmética o
ensayo cada 3 meses durante el primer año, cada
logarítmica. Es aconsejable emplear métodos
6 meses durante el segundo año y luego anualmente.
estadísticos para probar la bondad del ajuste de los
Los estudios acelerados deben ensayarse en un
datos sobre todos los lotes y lotes combinados
mínimo de tres tiempos, incluyendo los puntos
(cuando corresponda) de las rectas o curvas obtenidas.
iniciales y finales.
En caso de omitir el análisis estadístico, debe
Envases - El estudio debe efectuarse en el envase proveerse una justificación detallada de tal decisión.
primario definitivo.
Tabla.
TIPO DE ESTUDIO TEMPERATURA HUMEDAD TIEMPOS MÍNIMOS
Ensayo biológico para identidad y potencia - de masa debe comportase como una constante
Los métodos para determinar la potencia de acotada dentro de límites claramente especificados
productos biológicos obtenidos por técnicas de y autorizados. La actividad expresada por unidad
ADN recombinante son de fundamental de masa se denomina actividad específica y
importancia, pues miden la actividad del producto. constituye un parámetro de identidad y/o pureza.
La actividad biológica, expresada en unidades Esencialmente hay dos métodos para cuantificar
internacionales, debe conservar una estricta relación la actividad: Análisis empleando un modelo animal
directa con la masa del producto. Esto significa que y Análisis basados en cultivos de células. Para
el efecto biológico medido (actividad) por unidad medir la masa se realizan Análisis fisicoquímicos.
Cada uno de estos métodos es de frecuente
aplicación en el control de calidad de productos
biológicos.
Análisis empleando un modelo animal - Los
análisis biomiméticos en modelos animales han sido
empleados rutinariamente, desde hace mucho
tiempo, en el control de calidad de productos
biológicos. A pesar de su larga historia, tienen una
serie de desventajas como la necesidad de un gran
número de animales de características definidas,
contar con instalaciones apropiadas y personal
debidamente capacitado para el manejo de los
animales, largo tiempo de análisis (días semanas).
Se emplean en aquellos casos donde los análisis
basados en cultivos de células o en métodos
fisicoquímicos no dan resultados más confiables
que los biomiméticos. Se podrán emplear métodos
fisicoquímicos cuando se especifique en la
monografía correspondiente.
La ventaja esencial de este tipo de métodos
reside en que son los únicos capaces de reflejar
fielmente la integridad y apropiada disponibilidad
de la molécula biológica para expresar el efecto
deseado.
Análisis basados en cultivo de células (in vitro)
- Los análisis basados en cultivo de células proveen
información sobre el efecto del producto biológico
en un sistema vivo, pero pueden dar menos
información sobre el estado conformacional de la
molécula (integridad y reconocimiento por
receptores específicos) que cuando se utilizan
animales. El hecho que estos métodos puedan ser
automatizados y que puedan ser repetidos un gran
número de veces permite obtener resultados
reproducibles.
Los bioanálisis basados en cultivo de células
pueden ser divididos en dos grupos:
a) Los que necesitan cultivos primarios, de
origen humano o animal.
b) Los que requieren líneas celulares en cultivo
continuo, como por ej., la medición del efecto de
citoquinas, ya sea promoviendo la actividad celular
o bien inhibiendo la actividad o secreción de otras
citoquinas.
Análisis por métodos fisicoquímicos - Este
grupo de análisis no se basa en un modelo vivo sino
que, generalmente, tienen en cuenta la acción
química de un producto biológico. Estos métodos
son comparativamente simples, rápidos, precisos y
exactos. Otra ventaja de este tipo de análisis, por su
precisión y exactitud, es que pueden ser empleados
para proveer resultados confiables de la estabilidad
del producto. La principal desventaja de estos
métodos es que pueden ser insensibles a cambios en
la molécula, con la lógica divergencia con la
actividad en sistemas biológicos.
1125. SUSTRATOS CELULARES PARA LA PRODUCCIÓN DE
VACUNAS DE USO HUMANO
Ver 1125. Sustratos celulares para la producción de Vacunas de Uso Humano en Apartado de Vacunas
en Volumen III.
1130. VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS
Las buenas prácticas de fabricación y control pureza conocida (como por ej., una Sustancia de
requieren que los métodos analíticos empleados referencia) o por comparación de los resultados del
para evaluar las especificaciones establecidas sean método analítico propuesto con los de otro método
apropiados. cuya exactitud haya sido establecida.
En el caso de la valoración de una sustancia en
PRESENTACIONES DE MÉTODOS
un producto farmacéutico, la exactitud puede
ANALÍTICOS
determinarse mediante la aplicación del método
Las presentaciones de métodos analíticos analítico a mezclas preparadas con todos los
nuevos o revisados deben contener suficiente componentes del producto a las cuales se les ha
información para permitir la evaluación de los agregado cantidades conocidas del analito dentro
procedimientos propuestos. La información puede del intervalo del método.
variar según el tipo de valoración empleada. Sin Si no es posible obtener muestras de todos los
embargo, en la mayoría de los casos una componentes del producto, puede ser aceptable
presentación constará de las siguientes secciones. agregar cantidades conocidas del analito al producto
Justificación - Esta sección debe identificar la o comparar los resultados obtenidos con un segundo
necesidad y las ventajas del método propuesto. método cuya exactitud haya sido establecida.
Para métodos revisados, debe proporcionarse una En el caso del análisis cuantitativo de
comparación de las limitaciones del método vigente impurezas, la exactitud debe evaluarse sobre
en los libros oficiales y las ventajas ofrecidas por el muestras (sustancia o producto farmacéutico) a las
método propuesto. que se les han agregado cantidades conocidas de
Método analítico propuesto - Esta sección debe impurezas. Si es imposible obtener muestras de las
contener la descripción completa y suficientemente impurezas y/o los productos de degradación, es
detallada del método analítico para permitir que aceptable comparar los resultados obtenidos por un
personas capacitadas puedan repetirlo. La método independiente (método farmacopeico u otro
redacción debe incluir todos los parámetros método analítico validado). En ausencia de otra
operativos importantes e indicaciones específicas, información, puede ser necesario calcular la
como por ej., la preparación de reactivos, las cantidad de impureza comparando su respuesta con
condiciones de aptitud del sistema, descripción de la respuesta de la sustancia, en estos casos debe
los blancos empleados, precauciones y fórmulas emplearse el factor de respuesta si se conoce.
para calcular los resultados. La exactitud debe evaluarse empleando un
Datos - Esta sección debe proporcionar mínimo de nueve determinaciones sobre un mínimo
documentación detallada y completa de la de tres niveles de concentración que cubran el
validación del método, incluyendo datos intervalo especificado (como por ej., tres
experimentales y cálculos que fundamenten cada concentraciones/ tres repeticiones completas del
uno de los atributos estudiados. método). La exactitud se calcula como el
ATRIBUTOS ANALÍTICOS porcentaje de recuperación obtenido a partir de la
valoración de una cantidad agregada conocida de
La validación de un método analítico es el analito en la muestra, o como la diferencia entre la
proceso por el cual se establece, por medio de media y el valor aceptado como verdadero junto
estudios de laboratorio, que un método es apropiado con los intervalos de confianza.
para el uso propuesto. A continuación se definen
cada uno de los atributos necesarios para validar un Precisión
método analítico junto con una breve descripción de Definición - La precisión de un método
cómo deben determinarse. analítico es el grado de concordancia entre los
resultados del ensayo individual cuando el método
Exactitud se aplica repetidamente a varias alícuotas de una
Definición - La exactitud de un método muestra homogénea. La precisión de un método
analítico es la proximidad entre el resultado analítico, generalmente se expresa como la
obtenido y el valor real. La exactitud debe desviación estándar o desviación estándar relativa
establecerse en todo el intervalo especificado para (coeficiente de variación) de una serie de
el método analítico. mediciones. La precisión puede ser considerada en
Determinación - En el caso de la valoración de tres niveles: repetibilidad, precisión intermedia y
una sustancia, la exactitud puede determinarse por reproducibilidad. La repetibilidad expresa la
la aplicación del método analítico a una muestra de precisión bajo las mismas condiciones operativas en
un intervalo de tiempo corto. La precisión En el caso del análisis de impurezas, la
intermedia expresa las variaciones intralaboratorio: especificidad puede establecerse por el agregado de
diferentes días, diferentes analistas, diferentes cantidades apropiadas de impurezas a la sustancia o
equipos, etc. La reproducibilidad expresa la al producto farmacéutico y demostrando que estas
precisión entre laboratorios (estudios impurezas son determinadas con la precisión y
colaborativos). exactitud necesarias.
Determinación - La precisión de un método En el caso de una valoración, se debe demostrar
analítico se determina mediante el análisis de un que el método no se ve afectado por la presencia de
número suficiente de alícuotas de una muestra impurezas o excipientes. En la práctica, esto puede
homogénea, lo que permite un cálculo realizarse agregando, a la sustancia o al producto
estadísticamente válido de la desviación estándar o farmacéutico, cantidades apropiadas de impurezas o
la desviación estándar relativa. En este contexto, excipientes y demostrando que el resultado de la
las valoraciones son análisis independientes que se valoración no se ve afectado por la presencia de
llevan a cabo siguiendo el procedimiento analítico estos materiales extraños. Si no se dispone de los
completo desde la preparación de la muestra hasta productos de degradación o impurezas, la
el resultado final del ensayo. especificidad puede ser demostrada por
La repetibilidad puede evaluarse empleando un comparación de los resultados del ensayo con
mínimo de nueve determinaciones que cubran el muestras que contienen impurezas o productos de
intervalo especificado para el método (como por ej., degradación a través de un segundo método
tres concentraciones/tres repeticiones de cada una) independiente (como por ej., métodos
o un mínimo de seis determinaciones al 100 % del farmacopeicos u otro método analítico validado).
valor declarado. Estas comparaciones deberían incluir muestras
almacenadas bajo condiciones exigentes: luz, calor,
Especificidad
humedad, hidrólisis ácido base y oxidación. En el
Definición - La especificidad es la capacidad de
un método para evaluar inequívocamente al analito caso de valoraciones los dos resultados deberían
en presencia de los componentes que pueden estar compararse. En el caso de ensayos cromatográficos
para impurezas deberían compararse los perfiles
presentes, tales como impurezas, productos de
cromatográficos.
degradación, componentes de la matriz, etc. La
Para métodos cromatográficos instrumentales,
falta de especificidad de un método analítico puede
deben desarrollarse cromatogramas para demostrar
ser compensada por otros procedimientos analíticos.
Para ensayos de identificación esta definición la especificidad. Los ensayos de pureza de pico
implica asegurar la identidad del analito, para (como por ej., empleando arreglo de diodos o
espectrometría de masa) pueden ser útiles para
ensayos de pureza implica asegurar que el método
demostrar que el pico cromatográfico del analito no
permita una exacta determinación del contenido de
incluye a otro componente.
impurezas, es decir las sustancias relacionadas,
límite de metales pesados, límite de impurezas Límite de detección
orgánicas volátiles, de productos de degradación, Definición - El límite de detección es la
etc. Para valoraciones asegurar un resultado que concentración más baja de analito que puede
permita establecer el contenido o potencia del detectarse, pero no necesariamente cuantificarse, en
analito en una muestra. una muestra bajo las condiciones experimentales
Determinación - En el caso del análisis establecidas.
cualitativo (ensayos de identificación) debe Determinación - Existen diversas maneras para
demostrarse la capacidad de discriminar entre determinar el límite de detección, dependiendo de
sustancias de estructuras estrechamente que se trate de un método no instrumental o
relacionadas que pudieran estar presentes. La instrumental. Pueden emplearse otras
discriminación del método puede ser confirmada aproximaciones a las presentadas a continuación.
mediante la obtención de resultados positivos Para métodos no instrumentales, el límite de
(como por ej., por comparación con una Sustancia detección es generalmente determinado por el
de referencia), a partir de muestras que contienen el análisis de muestras con concentraciones conocidas
analito, junto con resultados negativos, a partir de de analito y estableciendo el mínimo nivel al cual el
muestras que no contienen el analito. Además, el analito puede ser detectado en forma confiable.
ensayo de identificación puede aplicarse a Este procedimiento puede emplearse también para
materiales estructuralmente parecidos o métodos instrumentales.
estrechamente relacionados al analito, para En el caso de métodos instrumentales que
confirmar que no se obtiene una respuesta positiva. exhiben ruido de fondo, puede emplearse una
aproximación basada en la comparación de las directamente proporcionales a la concentración de
señales medidas con muestras que contienen analito dentro de un intervalo dado.
pequeñas cantidades conocidas de analito con En algunos casos puede ser necesaria la
muestras blanco y determinando la relación señal- aplicación de transformaciones matemáticas para
ruido. Una relación señal ruido de 3:1 ó 2:1 se obtener una recta.
considera generalmente aceptable para estimar el Intervalo - Se refiere al intervalo de
límite de detección. concentraciones de analito que pueden ser
Otras aproximaciones se basan en la determinadas con precisión, exactitud y linealidad.
determinación de la pendiente de la recta de Normalmente, el intervalo se expresa con las
calibración y la desviación estándar de la respuesta. mismas unidades que los resultados del ensayo.
Cualquiera sea el método empleado, el límite de Determinación de linealidad e intervalo - La
detección debería ser luego confirmado por medio linealidad debe establecerse a lo largo del intervalo
del análisis de un número apropiado de muestras del método analítico. Se debe establecer por medio
con concentraciones cercanas o en el límite de de un método estadístico apropiado (como por ej.,
detección propuesto. cálculo de regresión por cuadrados mínimos). En
algunos casos, para obtener la proporcionalidad
Límite de cuantificación
entre los resultados y las concentraciones, los datos
Definición - El límite de cuantificación es la
deben ser sometidos a una transformación
menor concentración de analito que puede
matemática antes del análisis de regresión. Los
determinarse con precisión y exactitud en una
muestra, bajo las condiciones experimentales datos obtenidos a partir de la mejor recta pueden ser
establecidas. El límite de cuantificación se expresa útiles para estimar matemáticamente el grado de
linealidad. Deben informarse el coeficiente de
en las mismas unidades de concentración empleadas
correlación, la ordenada al origen y la pendiente de
para el analito de la muestra.
la recta de regresión.
Determinación - Existen diversas maneras para
determinar el límite de cuantificación, dependiendo El intervalo del método es validado al
de que se trate de un método no instrumental o comprobar que el método analítico es preciso,
exacto y lineal, cuando es aplicado a muestras que
instrumental. Pueden emplearse otras
contienen el analito en los extremos del intervalo
aproximaciones a las presentadas a continuación.
así como dentro del mismo.
Para métodos no instrumentales, el límite de
Para establecer la linealidad se deben investigar
cuantificación es generalmente determinado por el
análisis de muestras con concentraciones conocidas un mínimo de cinco concentraciones. También se
de analito y estableciendo el mínimo nivel al cual el recomienda considerar los siguientes intervalos:
Para la valoración de una sustancia (o un
analito puede ser cuantificado con precisión y
producto farmacéutico): de 80 a 120 % de la
exactitud. Este procedimiento puede emplearse
concentración de ensayo.
también para métodos instrumentales.
Para la determinación de una impureza: de 50 a
En el caso de métodos instrumentales que
exhiben ruido de fondo, puede emplearse una 120 % de la especificación.
aproximación basada en la comparación de las Para la determinación de uniformidad de
contenido: un mínimo de 70 a 130 % de la
señales medidas con muestras que contienen
concentración de ensayo a menos que se justifique
pequeñas cantidades conocidas de analito con
otro intervalo de acuerdo a la naturaleza de la forma
muestras blanco y determinando la relación señal-
ruido. Una relación señal ruido de 10:1 se farmacéutica.
considera generalmente aceptable para estimar el Para ensayos de disolución: ± 20 % del intervalo
especificado (como por ej., si la especificación para
límite de cuantificación.
un producto de liberación prolongada cubre una
Otras aproximaciones se basan en la
región de 20 %, después de 1 hora, hasta 90 %
determinación de la pendiente de la recta de
luego de 24 horas, el intervalo validado debe ser de
calibración y la desviación estándar de la respuesta.
Cualquiera sea el método empleado, el límite de 0 a 110 % del valor declarado).
cuantificación debe ser confirmado por medio del Robustez
análisis de un número apropiado de muestras con Definición - La robustez de un método analítico
concentraciones cercanas o en el límite de es una medida de su capacidad de no verse afectado
cuantificación propuesto. por variaciones pequeñas, pero deliberadas, en los
parámetros del método y proporciona una
Linealidad e intervalo
indicación de su confiabilidad. Ejemplos de
Linealidad - La linealidad de un método
variaciones que deben estudiarse durante la
analítico es su capacidad de producir resultados
evaluación de la robustez de un método son: principios activos (incluyendo conservantes) en
diferentes instrumentos, diferentes lotes de productos farmacéuticos.
reactivos, diferentes tiempos de valoración, CATEGORÍA II - Incluye los métodos
diferentes temperaturas de valoración, diferentes analíticos empleados para la determinación de
columnas cromatográficas (distintos lotes o impurezas en las materias primas o productos de
proveedores), etc. La robustez se expresa degradación en los productos farmacéuticos. Estos
normalmente como la falta de influencia de las métodos incluyen valoraciones cuantitativas y
variables operativas y del entorno sobre los ensayos límites.
resultados del ensayo. CATEGORÍA III - Incluye métodos analíticos
Determinación - La robustez de un método para la determinación de las características de
analítico se determina mediante el análisis de desempeño (como por ej., disolución, liberación de
alícuotas a partir de lotes homogéneos empleando principios activos).
condiciones operativas y ambientales diferentes CATEGORÍA IV - Incluye ensayos de
pero que están dentro de los parámetros identificación.
especificados en la valoración. El grado de Para cada categoría de análisis, se necesita
reproducibilidad de los resultados del ensayo es
diferente información analítica. En la Tabla se
luego determinado como una función de las
indican los elementos que normalmente se
variables de la valoración. Esta reproducibilidad
requieren para cada una de estas categorías.
puede compararse con la precisión de la valoración
Las valoraciones y ensayos generales ya
bajo condiciones normales para obtener de una establecidos (por ej., método volumétrico para la
medida de la robustez del método analítico. determinación de agua, ensayo de endotoxinas
DATOS REQUERIDOS PARA LA bacterianas) deben también validarse para
VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO comprobar su exactitud (y ausencia de posibles
Los métodos analíticos descritos en esta interferencias) cuando se emplea para un producto o
materia prima nuevos.
Farmacopea varían desde determinaciones
La validez de un método analítico puede
analíticas complejas hasta la evaluación subjetiva
comprobarse sólo mediante estudios de laboratorio.
de ciertas características, para los cuales se
En consecuencia, la documentación que avale tales
requieren diferentes esquemas de validación. Las
categorías de métodos analíticos más comunes son estudios es un requisito básico para determinar si un
las siguientes: método es apropiado para una aplicación
determinada. Cualquier método analítico propuesto
CATEGORÍA I - Incluye los métodos
debe estar acompañado de la documentación
analíticos para la cuantificación de los componentes
necesaria.
mayoritarios de las materias primas o de los
ANMAT
Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica
INAME
Instituto Nacional de Medicamentos
FARMACOPEA
ARGENTINA
OCTAVA EDICIÓN
Presidente de la Nación
Dra. Cristina Fernández de Kirchner
OCTAVA EDICIÓN
VOLUMEN
II
COMISIÓN PERMANENTE
FARMACOPEA ARGENTINA
SECRETARÍA TÉCNICA:
VOCALES:
ÍNDICE GENERAL
FARMACOPEA ARGENTINA
Aguas y Soluciones Parenterales
Coordinador: Farm. Silvetti, Alfredo. Ensayos Farmacotécnicos I
Farm. Achilli, Estela; Ing. Bichman, Mario; Farm. Coordinador: Dr. Meneghini, Alejandro; Farm.
Colombari, Daniel; Bioq. Chiesa, Carlos; Dr. Dal Suarez, Marcelo.
Bo, Héctor; Ing. D' Ambrosio, Cristina; Lic. Duda, Lic. Bava, Adriana; Dra. Calandri, Daniela; Farm.
Guillermo; Dr. Fiore, Esteban; Farm. Goin, José Castaña Eduardo; Dr. Chiaramonte, Eduardo; Dra.
Alberto; Ing. Gomez Copello; Farm. Menéndez Simionato, Laura; Dra. Vidal, Noelia.
Viviana; Farm. Mochetto, Rodolfo; Farm. Neder,
Jorge; Dra. Nista, Liliana; Lic. Petracca, Antonia; Ensayos Farmacotécnicos II
Farm. Ploder, Peter; Farm. Puebla, Ignacio; Farm. Coordinador: Dr. Allemandi, Daniel; Dra.
Stampone, Patricia; Farm. Szyszkowsky, Juiz Olivera, M. Eugenia.
Rubén; Lic. Vedoya, Gabriela Silvia. Dr. Ciccioli, Enrique; Farm. Fasanella, Marta;
Farm. Giornelli, Gabriela; Dra. Lavaselli, Susana;
Biodisponibilidad, Bioequivalencia y Farm. Lloret, M. Antonia; Bioq. Luna, Julio; Lic.
Equivalencia Farmacéutica Martinez, Juan L.; Dr. Nacucchio, Marcelo; Dr.
Coordinador: Dr. Pesce, Guido. Porta, Raúl.
Dra. Bignone, Inés; Dr. Bolaños, Ricardo; Dr.
Bramuglia, Guillermo; Dr. De Leone, Héctor; Farm. Ensayos Farmacotécnicos III
Giarcovich, Silvia; Dra. Niselman, Ada Viviana; Coordinador: Farm. Montes de Oca, Federico;
Farm. Rey, Andrea; Dr. Seoane, Martín; Farm. Farm. Zubata, Patricia.
Steeman, Gabriela; Bioq. y Farm. Viñas, María Dra. Bruno, Claudia; Farm. Roberto, Mónica; Farm.
Alicia. Sakson, Mario; Dra. Sanpedro, Pura; Dra. Sedeño,
Cristina; Dra. Szeliga, María; Lic. Vega, Julio
Biotecnología César.
Coordinador: Dra. Dabsys, Susana.
Dr. Cascone; Dr. Corley, Esteban; Dr. Criscuolo, Estabilidad y Envases
Marcelo; Lic. García Franco, Susana; Dra. Coordinador: Lic. Spinetto, Marta.
Giampaolo, Beatriz; Farm. Goyogana, Francisco; Ing. Ariosti, Alejandro; Dra. Blanco, Mirta; Dra.
Dr. Iglesias, Sergio; Lic. Mammarella, Carlos; Lic. Briñon, Margarita; Lic. Gorisknik, Adriana; Farm.
Ostroswski, Héctor; Bioq. Pardo, Verónica; Farm. Gruc, Olga Alejandra; Farm. Mandrile, Alejandra;
Pesce, Graciela; Lic. Praturlon, María L.;Dr. Dra. Nudelman, Norma; Dra. Ortiz, Cristina; Farm.
Seigelchifer, Mauricio. Pilatti, Carina; Ing. Riera, Mónica; Lic. Sánchez,
Eduardo; Farm. Tamasi, Diego.
Colorantes, Excipientes y Aditivos
Coordinador: Lic. Ciura, Juan M. Emilio. Farmacia Hospitalaria
Dra. Brunet, Noemí; Bioq. Bustos, Mónica; Dr. Coordinador: Dra. Elías, Mónica; Farm y Bioq.
Corseti, Héctor; Dra. Dabbene, Viviana; Dr. Fernandez, María Cristina.
Dobrecky, José; Dr. Ferrari, Jorge; Dr. Jacobi, Bioq. Bernal Castro, Federico; Dra. Bernavei,
Carlos; Dra. Rivas, Viviana; Dr. Rubio García, Alicia; Farm. Buontempo, Fabian; Bioq. Drunday,
Rodolfo; Lic. Taschetti, Mabel; Farm. Trokán, Fabian; Lic. Fernández, Farm. Fillinger, Ester,
Francisco; Lic. Vallese, María Cristina. María Laura; Farm. García, Angélica; Farm.
Hermida, Miguel; Farm. Iglesias, Fabiana; Dr.
Controles Toxicológicos Lagomarsino, Eduardo; Farm. y Bioq. Mato,
Coordinador: Dr. Roses, Otmaro E. Gabriel; Lic. Melero, Marcia; Farm. Menéndez,
Dr. Araldi, Héctor; Bioq. Bindstein, Edith; Dra. Ana María; Dr. Montemerlo, Hugo; Dra. Pita
Bulgach, Delia; Dra. Fulginiti, Ana Susana; Dra. Martin de Portela, María Luz; Farm. Raviolo,
Gruñeiro, Elena; Dra. López, Clara; Dra. Pazos, Rodolfo; Farm. Rodríguez, Luis A.; Dra.
Liliana; Dr. Pico, José Carlos; Dra. Salseduc, Slobodianik de Gurevich, Haydeé; Dra. Soifer,
Marta. Graciela.
Farmacia Oficinal Área de Sangre y hemoderivados.
Coordinadores: Farm. Ruggieri, José; Farm. Coordinador: Bioq. Rossi, Marina.
Mendez, Raquel. Dra. Barravecchia de Dehó, Martha; Dra. Caminos,
Farm. Alvárez, Jorgelina; Farm. Andiñach, Guido; Andrea; Bioq. y Farm. Drucaroff, María Alejandra;
Farm. Callegari, Fernando; Farm. Ferrero, Horacio; Lic. Oliva, Liliana; Dra. Sobrero, Cecilia; Dr.
Farm. Fitanovich, Nora; Farm. Fridman, Gerardo; Zarzur, Jorge.
Farm. Garcia, Roberto; Farm. Gatica, Karina; Farm. Área de Sueros y vacunas. Coordinador:
Gomez, Juan; Farm. Gonzalez, Ana María; Farm. Dra. Perez, Analia.
Julián, Silvia; Farm. Kleinlein, Patricia; Farm. Dra. Brero, María Luisa; Bioq. y Farm. Copello,
López de Souza, María del Carmen; Farm. Lopez, Cecilia; Dr. Dokmetjian, José; Dr. García, Salvador;
Guillermo; Farm. Maino, Héctor; Farm. Mollardo, Dra. Manghi, Marcela; Farm. Pombo, María Luz;
María Teresa; Farm. Moreno, Patricia; Farm. Nadal, Dra. Rodríguez, María Eugenia, Dr. Yantorno,
Ana María; Farm. Paura, Andrea; Farm. Perez Osvaldo.
González, Rocio; Farm. Policelli, Gabriela; Farm.
Quijano, Rubén Darío; Farm. Quiroga, Eduardo; Productos Médicos
Farm. Rencoret, María Mercedes; Farm. Salas, Coordinadores: Dra. Sager de Agostini, Helga.
Vivian; Farm. Tokumoto, Fernanda; Farm. Torres, Farm. Carbone, Nora; Farm. y Bioq. Benitez,
Hugo; Farm. Uema, Sonia; Farm. Valverde, Javier. Sergio; Farm. Costanzo, Ricardo; Farm. Gonzalez,
María Celeste; Farm. Graña, Nora; Farm. Iervasi,
Gases Medicinales Liliana; Farm. Metz, Rita; Farm. Mosconi, Andrea;
Coordinador: Dr. Marceca, Ernesto. Farm. y Bioq. Olivera de O’ Connell, Lucía; Farm.
Farm. Arcos, Marcelo; Farm. Bernaus, Carlos; Peralta, Laura; Ing. Saba, Fernando; Dra.
Farm. Fischer, Alfredo; Farm. Tourville, Antonio; Staravijosky, Alejandra.
Dra. Zavala, Estela.
Química Analítica de Medicamentos 1
Medicamentos Fitoterápicos Coordinador: Lic. Larrinaga, Alicia.
Coordinador: Dra. Ferraro, Graciela. Lic. Abelaira, Sara; Lic. Avancini Noceti,
Dra. Agnese, Alicia; Dr. Amat, Aníbal; Dr. Constanza; Lic. Chiarelli, Silvia; Lic. Diez, María
Cabrera, José Luis; Dra. Debenedetti, Silvia; Dra. Ester; Dra. Dominguez, Silvia; Farm. González,
Flores, María Luján; Dra. Gattuso, Martha; Dra. Soledad; Farm. Lynch, Josefina; Lic. Ponce,
Gattuso, Susana; Dr. Gurni, Alberto; Dra. Lopez, Claudia; Lic. Pozzo, María del Carmen; Dr. Rivas,
Paula; Dra. Nadinic, Elena; Farm. Padula, Laura Z.; Raúl; Dra. Safierowicz, Rosa; Farm. Varela López,
Dra. Rizzo, Inés; Dr. Rondina, Rubén; Lic. Ramón; Farm. Vessuri, María.
Schvarzberg, Nora; Dr. Skliar, Mario; Dra.
Spegazzini, Etile; Dr. Wagner, Marcelo; Lic. Química Analítica de Medicamentos 2
Zeichen, Rita. Coordinador: Dra. Carducci, Clyde.
Dra. Castellano, Patricia; Lic. Centrone, Claudio;
Microbiología Farm. Faroppa, María; Farm. Fernández Otero,
Coordinador: Lic. Horacio Frade; Dr. D’Aquino, Germán; Dra. Hoyos de Rossi, María; Dra. Longhi,
Miguel. Marcela; Dra. Lucangioli, Silvia; Dra. Palacios de
Dra. Albesa de Eraso, Inés; Farm. Arakaki, Regina; Ortiz, Sara; Bioq. Robles, Juan.
Farm. Balanian, Silvia Gladys; Dra. Belixán,
Norma; Farm. Calvete, Javier; Lic. Cerra, Hector; Química Analítica de Medicamentos 3
Dra. Franco, Mirta; Dr. Gutkin, Gabriel; Lic. Coordinador: Lic. Ercolano, Irma.
Lagomarsino, Monica; Dra. Torno, Graciela; Farm. Dra. Alassia de Torres, Liliana; Dr. Blanc, José;
Raffo Palma, Martha; Farm. Salazar, Germán; Dr. Farm. Cereijo, María Inés; Farm. y Bioq. Ceresole,
Sordelli, Daniel; Bioq. Teves, Sergio; Farm. Vivas, Rita; Dra. Circón de Vidal, Noemí; Farm. Fariña,
Ariel. Mirta; Farm. Gabor, Juliana; Dr. Laba, Raul; Farm.
Menéndez, Viviana; Dra. Segall, Adriana; Dra.
Productos Biológicos Serrao, Rosa; Lic. Zinni, Elvira.
Coordinador: Bioq. Albertengo, María Elisa.
Bioq. Esnaola, María Margarita; Bioq. Fraga, Química Analítica de Medicamentos 4
Griselda; Farm. Francinelli, Luisa; Dra. Coordinador: Dra. Pinet, Ana María.
Gorzalczany, Susana; Bioq. Mondelo, Nélida; Dra. Barros, Carmen; Lic. Luque, Graciela; Dr.
Farm. Nisenbaum, Isaac. Marinaro, Bautista; Farm. Palacios, Marcelo Luis;
Dra. Piñeyro, Luisa; Dr. Quatrocchi, Oscar; Farm.
Rosasco, María Ana; Farm. Rodríguez, Eduardo; Revisores Técnicos
Dr. Sprandeo, Norma; Dr. Sproviero, Jorge; Dra. Farm. Compagnucci, María Eugenia; Gear,
Stagnaro, Stella Maris. Jorgelina; Bioq. Martinez, Andrea Verónica;
Martinez, Valeria Soledad.
Radiofármacos
Coordinador: Dr. Caro, Ricardo y Bioq. Aprea, Agradecimientos
Patricia. Dra. Silvia Boni, Farm. Patricia Zubata, Dra. Silvia
Farm. Aletti, Sabrina; Dra. Bergoc, Rosa; Dr. Lavaselli, Farm. Soledad Risso Patrón y Sra.
Boccio, José; Dr. Cañelas, Carlos; Bioq. Samson, Giovanna Sibay Nughes por su colaboración en el
José Cembal; Dr. Duran, Adrián; Dra. Fraga de capítulo 1050. Formas Farmacéuticas.
Suarez, Amanda; Lic. Furnari, Juan Carlos; Farm. Farm. Mónica Cordera y Farm. Isabel E. Rivadulla
Nicolini, Jorge; Dra. Rutty, Gisela; Farm. por su colaboración en el capítulo 1015. Buenas
Zubillaga, Marcela. prácticas de almacenamiento, distribución y
transporte.
Secretaría Técnica Lic. Ana María Chan y María José Arrechea por su
Farm. Assalone, Melina Isabel; Farm. Dal Mas, colaboración en el capítulo 345. Ensayo de
Melina Andrea; Farm. De Angelis, María Celeste. Salmonella/fracción microsomal (Test de Ames)
para detección de mutagenicidad.
A los Laboratorios que colaboraron en la presente
Edición.
MONOGRAFÍAS
MATERIA PRIMA
ACETAZOLAMIDA sulfato que el que corresponde a 0,20 ml de ácido
sulfúrico 0,020 N (0,04 %).
Límite de selenio <610>
O O
S
H No más de 0,003 %; determinado sobre 200 mg de
S N CH3
H2N Acetazolamida.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
Agregar 3 ml de agua a 0,03 ml de Acético Gla-
cial y neutralizar con una solución de hidróxido de
sodio al 8,5 % p/v. Debe responder a los ensayos
para Acetato <410>.
Determinación de la temperatura de solidifi-
cación <180>
No debe ser menor de 15,6 °C.
Límite de residuo no volátil
Debe cumplir con el requisito cuando se ensaya
según se indica en Límite de residuo no volátil en
Ácido acético.
Cloruro
Diluir 1,0 ml de Ácido Acético Glacial con
20 ml de agua y agregar 5 gotas de nitrato de pla-
ta (SR): no debe producir opalescencia.
Sulfato
Diluir 1,0 ml de Ácido Acético Glacial con
10 ml de agua y agregar 1 ml de cloruro de ba-
rio (SR): no debe producir turbidez.
Límite de metales pesados <590>
Al residuo obtenido en Límite de residuo no
volátil, agregar 20 ml de ácido clorhídrico 0,1 N,
calentar suavemente hasta completar la disolución,
diluir con agua a 250 ml y emplear 20 ml de la
solución: el límite es 5 ppm.
ACETILCISTEÍNA Determinación del residuo de ignición <270>
Realizar el ensayo sobre 2 g de Acetilcisteína.
Calentar sobre una placa calefactora hasta carboni-
OH zar completamente, enfriar, agregar 1 ml de ácido
O H
sulfúrico y calentar suavemente hasta que comience
N CH3 el desprendimiento de humo. Someter a ignición a
600 °C hasta que se consuma el residuo carbonoso.
HS
H
O
El residuo no debe ser mayor de 0,5 %.
Límite de metales pesados <590>
Método II. Agregar, gota a gota, 2 ml de ácido
C5H9NO3S PM: 163,2 616-91-1 nítrico para humedecer la muestra [Precaución -
Definición - Acetilcisteína es N-Acetil- Tomar las precauciones necesarias ya que se puede
L-cisteína. Debe contener no menos de 98,0 por producir una explosión] y proceder según se indica
ciento y no más de 102,0 por ciento de C5H9NO3S, para Solución muestra: no más de 0,001 %.
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir
Impurezas orgánicas volátiles <520>
con las siguientes especificaciones. Método I.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco.
Fácilmente soluble en agua y alcohol; prácticamen- VALORACIÓN
te insoluble en cloroformo y éter. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Sustancia de referencia - Acetilcisteí- para cromatografía de líquidos con un detector
na SR-FA. ultravioleta ajustado a 214 nm y una columna de
30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
CONSERVACIÓN por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
En envases de cierre perfecto. caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml por minu-
to.
ENSAYOS Fase móvil - Disolver 6,8 g de fosfato mono-
Identificación básico de potasio en 1 litro de agua. Filtrar y des-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. gasificar. Ajustar a pH 3,0 con ácido fosfórico.
B - Determinación del punto de fusión <260> Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
Entre 104 y 110 °C. ma en 100. Cromatografía).
Diluyente - Solución de bisulfito de sodio 1 en
Determinación de la rotación óptica <170>
2.000, recientemente preparada.
Rotación específica: Entre +21° y +27°.
Solución del estándar interno - Disolver
Solución muestra: transferir 1,25 g de Acetilcis-
1,000 g de DL-fenilalanina en 200 ml de Diluyente.
teína a un matraz aforado de 25 ml y mezclar con
Preparación estándar - Disolver una cantidad
1 ml de solución de edetato disódico 1 en 100.
exactamente pesada de Acetilcisteína SR-FA en
Agregar 7,5 ml de solución de hidróxido de sodio
Diluyente para obtener una solución de aproxima-
1 en 25 y mezclar hasta disolver. Completar a vo-
damente 10 mg por ml. Transferir 10,0 ml de esta
lumen con solución reguladora de pH 7,0, prepara-
solución y 10,0 ml de Solución del estándar interno
da mezclando 29,5 ml de hidróxido de sodio 1 N,
a un matraz aforado de 200 ml, completar a volu-
50 ml de fosfato monobásico de potasio 1 M y
men con Diluyente y mezclar para obtener una
cantidad suficiente de agua para obtener 100 ml.
solución de aproximadamente 0,5 mg por ml.
[NOTA: emplear un medidor de pH para ajustar a
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
pH 7,0 ± 0,1, mediante el agregado, según sea nece-
dedor de 1,000 g de Acetilcisteína y transferir a un
sario, de cualquiera de las dos soluciones].
matraz aforado de 100 ml. Disolver en Diluyente,
Determinación del pH <250> completar a volumen con el mismo solvente y mez-
Entre 2,0 y 2,8, determinado sobre una solución clar. Transferir 10,0 ml de esta solución y 10,0 ml
al 1 %. de Solución del estándar interno a un matraz afora-
do de 200 ml, completar a volumen con Diluyente y
Pérdida por secado <680> mezclar.
Secar a una presión de aproximadamente
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
50 mm Hg, a 70 °C durante 4 horas: no debe perder Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
más de 1,0 % de su peso. las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de ace-
tilcisteína y DL-fenilalanina no debe ser menor de
6; los tiempos de retención relativos deben ser
aproximadamente 0,5 para acetilcisteína y 1,0 para
DL-fenilalanina; la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
5 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C5H9NO3S en la porción de Acetilcis-
teína en ensayo.
ACETONA potasio 0,10 N: el color de permanganato de la
mezcla debe perdurar durante 15 minutos.
O
VALORACIÓN
H3C CH3 Sistema cromatográfico - Emplear un cromató-
grafo de gases equipado con un detector de ioniza-
C3H6O PM: 58,1 67-64-1 ción a la llama y una columna de 1,8 m × 3 mm con
un soporte constituido por un copolímero de estire-
Definición - Acetona es 2-Propanona. Debe
no-divinilbenceno con grupos aromáticos -O y -N,
contener no menos de 99,0 por ciento de C3H6O,
con un área superficial nominal de 400 a 600 m2 por
calculado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir
g y un diámetro de poro promedio de 0,0076 µm.
con las siguientes especificaciones.
La temperatura de la columna se debe aumentar a
Caracteres generales - Líquido volátil, trans- razón de 8 °C por minuto desde 110 hasta 220 °C.
parente, incoloro, móvil y de olor característico. Se debe emplear helio como gas transportador.
Una solución 1 en 2 debe ser neutra al tornasol. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
Miscible con agua, alcohol, éter, cloroformo y con aproximadamente 0,5 µl de Acetona y registrar el
la mayoría de los aceites volátiles. cromatograma. Calcular el porcentaje de C3H6O en
la porción de Acetona anhidra en ensayo. [NOTA:
Precaución - Muy inflamable.
no se debe aplicar ninguna corrección en cuanto al
contenido de agua, ya que el detector de ionización
CONSERVACIÓN
a la llama no responde al agua].
En envases de cierre perfecto, lejos del fuego.
ENSAYOS
Identificación
A - A 1 ml de Acetona agregar 3 ml de hidróxi-
do de sodio diluido y 0,3 ml de una solución de
25 mg de nitroprusiato de sodio por ml. Se debe
producir un intenso color rojo que vira a violeta al
agregar 3,5 ml de ácido acético.
B - Preparar una solución de acetona en alcohol
al 50 % v/v 1 en 10. A 10 ml de esta solución agre-
gar 1 ml de una solución de 10 mg de nitrobenzal-
dehído por ml de esta misma solución y 0,5 ml de
hidróxido de sodio concentrado. Dejar reposar
durante 2 minutos y acidificar con ácido acético. Se
debe producir color azul verdoso.
Determinación de la densidad relativa <160>
No debe ser mayor de 0,789.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. Emplear el re-
activo del Método b. Realizar la determinación
sobre 10 ml de Acetona, empleando 20 ml de una
mezcla de 2-cloroetanol y cloroformo (1:1) o piri-
dina como solvente. No debe contener más de
0,3 %.
Límite de residuo no volátil
Transferir 100 ml de Acetona a una cápsula de
porcelana, previamente pesada, evaporar en un baño
de vapor y secar a 105 °C durante 1 hora: el residuo
no debe ser mayor de 2 mg (0,004 %).
Sustancias fácilmente oxidables
En un recipiente con tapa de vidrio, mezclar
20 ml de Acetona con 0,10 ml de permanganato de
ACICLOVIR VALORACIÓN Y LÍMITE DE GUANINA
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para
O
cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta
ajustado a 254 nm y una columna de 25 cm 4,6 mm
N con fase estacionaria constituida por octadecilsilano
HN
OH
químicamente unido a partículas porosas de sílice de
3 a 10 µm de diámetro. El caudal debe ser aproxima-
H2N N N
damente 3 ml por minuto.
O
Fase móvil - Ácido acético glacial en agua (1 en
1.000). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes nece-
C8H11N5O3 PM: 225,2 59277-89-3 sarios (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatograf-
ía).
Definición - Aciclovir es 9-[(2-
Solución de aptitud del sistema I - Disolver canti-
Hidroxietoxi)metil]guanina. Debe contener no menos
dades exactamente pesadas de Aciclovir SR-FA y de
de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de
guanina en hidróxido de sodio 0,1 N y diluir cuantita-
C8H11N5O3, calculado sobre la sustancia anhidra y
tivamente y en etapas, si fuera necesario, con agua,
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
para obtener una solución de aproximadamente
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco o 0,1 mg por ml de cada una.
casi blanco. Funde a temperaturas superiores a los Solución de aptitud del sistema II - Disolver una
250 ºC, con descomposición. Soluble en soluciones porción exactamente pesada de guanina en hidróxido
diluidas de ácidos minerales e hidróxidos alcalinos; de sodio 0,1 N y diluir cuantitativamente y en etapas,
poco soluble en agua; insoluble en alcohol. si fuera necesario, con agua para obtener una solución
de aproximadamente 0,7 µg por ml.
Sustancia de referencia - Aciclovir SR-FA.
Preparación estándar de guanina - Pesar exac-
CONSERVACIÓN tamente alrededor de 8,75 mg de guanina, transferir a
En envases inactínicos de cierre perfecto. En un un matraz aforado de 500 ml, disolver en 50 ml de
sitio seco. hidróxido de sodio 0,1 N, completar a volumen con
agua y mezclar. Transferir 2,0 ml de esta solución a
ENSAYOS un matraz aforado de 50 ml, completar a volumen con
Identificación hidróxido de sodio 0,01 N y mezclar para obtener
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. una solución de aproximadamente 0,7 µg por ml.
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en Preparación estándar - Pesar exactamente alre-
Valoración y límite de guanina. El tiempo de reten- dedor de 25 mg de Aciclovir SR-FA, transferir a un
ción del pico principal en el cromatograma obtenido a matraz aforado de 50 ml, disolver en 5 ml de hidróxi-
partir de la Preparación muestra se debe correspon- do de sodio 0,1 N, completar a volumen con agua y
der con el obtenido en la Preparación estándar. mezclar. Transferir 10,0 ml de esta solución a un
matraz aforado de 50 ml, completar a volumen con
Determinación de agua <120>
hidróxido de sodio 0,01 N y mezclar para obtener una
Titulación volumétrica directa. No más de 6,0 %.
solución de aproximadamente 0,1 mg por ml.
Impurezas comunes <510> Preparación muestra - Pesar exactamente alrede-
Solución muestra: emplear dimetilsulfóxido como dor de 100 mg de Aciclovir, transferir a un matraz
solvente. aforado de 200 ml, disolver en 20 ml de hidróxido de
Solución estándar: emplear dimetilsulfóxido como sodio 0,1 N, completar a volumen con agua y mezclar.
solvente. Transferir 10,0 ml de esta solución a un matraz afo-
Fase móvil: cloroformo, metanol e hidróxido de rado de 50 ml, completar a volumen con hidróxido de
amonio (80:20:2). sodio 0,01 N y mezclar.
Volumen de aplicación: 5 µl. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Revelador: 1. Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema I y
Límite: 1 %. registrar las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la resolución R entre los picos de
Impurezas orgánicas volátiles <520>
aciclovir y guanina no debe ser menor de 2,0; el factor
Método III.
de asimetría no debe ser mayor de 2,0; y la desviación
Solvente: dimetilsulfóxido.
estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
ser mayor de 2,0 %. Cromatografiar la Solución de
aptitud del sistema II y registrar las respuestas de los
picos según se indica en Procedimiento: la desviación
estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar, la Preparación
estándar de guanina y la Preparación muestra, regis-
trar los cromatogramas y medir las respuestas de to-
dos los picos.
Calcular la cantidad en porcentaje de guanina en la
porción de Aciclovir en ensayo. No debe contener
más de 0,7 % de guanina.
Calcular la cantidad de C8H11N5O3 en la porción
de Aciclovir en ensayo.
ADRENALINA Límite de adrenalona
Disolver 50,0 mg de Adrenalina en ácido
clorhídrico 0,01 M y diluir hasta 25,0 ml con el
H OH
H mismo solvente. La absorbancia de la solución
N
CH3 medida a 310 nm no debe ser mayor de 0,10 (ver
470. Espectroscopia ultravioleta y visible).
HO Límite de noradrenalina
Fase estacionaria - Emplear una placa para
OH cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
C9H13NO3 PM: 183,2 51-43-4 grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
Sinonimia - Epinefrina. de espesor.
Fase móvil - Cloruro de metileno, acetona y
Definición - Adrenalina es (R)-4-[1-Hidroxi- ácido fórmico anhidro (50:50:0,5).
2-(metilamino)-etil-1,2-bencenodiol. Debe conte- Solución muestra - Disolver 250 mg de Adrena-
ner no menos de 97,0 por ciento y no más de 100,5 lina en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
por ciento de C9H13NO3, calculado sobre la sustan- [NOTA: preparar la solución inmediatamente antes
cia seca y debe cumplir con las siguientes especifi- de emplear].
caciones. Solución estándar A - Disolver 12,5 mg de Tar-
Caracteres generales - Gránulos o polvo mi- trato Ácido de Adrenalina SR-FA en agua y diluir
crocristalino de color blanco. Por exposición a la hasta 10 ml con el mismo solvente. [NOTA: prepa-
luz y al aire se oscurece gradualmente. Con ácidos rar la solución inmediatamente antes de emplear].
forma sales fácilmente solubles en agua; la base se Solución estándar B - Diluir 2 ml de la Solu-
recupera por adición de amoníaco o carbonatos ción estándar A a 10 ml con agua.
alcalinos. Sus soluciones son alcalinas al tornasol. Solución estándar C - Mezclar 2 ml de Solución
Muy poco soluble en agua y alcohol; insoluble en muestra y 2 ml de Solución estándar B.
éter, cloroformo y en aceites fijos y volátiles. Revelador - Metanol, etilendiamina y solución
de ferricianuro de potasio al 5 % (8:2:2).
Sustancia de referencia - Tartrato Ácido de Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Adrenalina SR-FA. placa, en bandas de 20 mm por 2 mm, 6 µl de Solu-
CONSERVACIÓN ción muestra, 6 µl de Solución estándar A, 6 µl de
Solución estándar B y 12 µl de Solución estándar
En envases inactínicos de cierre perfecto. C. Dejar secar las aplicaciones y pulverizar sobre
ENSAYOS las bandas con una solución saturada de bicarbonato
de sodio. Dejar secar la placa al aire y pulverizar
Identificación
sobre las bandas dos veces con anhídrido acético,
A 5 ml de solución reguladora de ftalato ácido
secando entre las dos pulverizaciones. Calentar a
pH 4,0 (ver Soluciones reguladoras en Reactivos y
50 ºC durante 90 minutos y desarrollar los cromato-
soluciones) agregar 0,5 ml de una solución de
gramas hasta que el frente del solvente haya reco-
Adrenalina 1 en 1.000 ligeramente ácida y 1,0 ml
rrido aproximadamente tres cuartas partes de la
de iodo 0,1 N. Mezclar y dejar reposar durante
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
5 minutos. Agregar 2 ml de solución de tiosulfato
marcar el frente del solvente y dejar secar al aire.
de sodio 1 en 40: se debe desarrollar un color rojo
Pulverizar sobre la placa con Revelador, calentar a
intenso.
60 ºC durante 10 minutos y examinar bajo luz ultra-
Determinación de la rotación óptica <170> violeta a 254 y 366 nm: en el cromatograma obteni-
Rotación específica: Entre -50,0° y -53,5°. do a partir de la Solución muestra, ninguna banda
Solución muestra: 20 mg por ml, en ácido entre las dos bandas de mayor intensidad, debe ser
clorhídrico 0,6 N. más intensa que la banda correspondiente a la obte-
Pérdida por secado <680> nida con la Solución estándar B (1,0 %). El ensayo
Secar al vacío sobre gel de sílice durante sólo es válido si el cromatograma obtenido con la
18 horas: no debe perder más de 2,0 % de su peso. Solución estándar C presenta las dos manchas más
intensas completamente separadas y entre ellas hay
Determinación del residuo de ignición <270> una banda que se corresponde con la de la Solución
Inapreciable; determinado sobre 100 mg. estándar A.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 300 mg de
Adrenalina y disolver en 50 ml de ácido acético
glacial, calentando ligeramente si fuera necesario
para favorecer la disolución. Agregar cristal violeta
(SR) y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV).
Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
18,32 mg de C9H13NO3.
ADRENALINA, TARTRATO C - 0,2 ml del filtrado obtenido en el ensayo de
Identificación A debe responder al ensayo para
ÁCIDO DE Tartrato en <410>.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Al-
bendazol, disolver en 3 ml de ácido fórmico anhidro
y agregar 40 ml de ácido acético glacial. Titular
con ácido perclórico 0,1 N (SV), determinando el
punto final potenciométricamente. Realizar una
determinación con un blanco y hacer las correccio-
nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
ácido perclórico 0,1 N equivale a 26,53 mg de
C12H15N3O2S.
ALCANFOR mente la parte superior y descender gradualmente
hacia la parte inferior del tubo hasta completar la
H3C incineración. Disolver el residuo obtenido en 25 ml
CH3 de agua caliente, acidificar con ácido nítrico, filtrar
y recolectar el filtrado en un tubo de comparación.
Lavar el tubo de ensayo y el filtro con dos porcio-
nes de 10 ml de agua caliente y agregar el lavado a
la solución filtrada. Agregar 0,5 ml de nitrato de
CH3 plata 0,1 N, diluir con agua a 50 ml y mezclar. Si la
O
solución desarrolla turbidez, esta no debe ser mayor
C10H16O PM: 152,2 76-22-2 a la producida por un control preparado de la misma
Definición - Alcanfor es manera empleando 0,05 ml de ácido clorhídri-
1,7,7-Trimetilbiciclo[2.2.1]heptan-2-ona, es obteni- co 0,02 N (350 ppm).
do de Cinnamomum camphora (Linneo) Nees et ROTULADO
Ebermaier (Fam. Lauraceae) (Alcanfor Natural) o
producido por síntesis (Alcanfor Sintético) y debe Indicar en el rótulo si Alcanfor es obtenido en
cumplir con las siguientes especificaciones. forma natural o preparado sintéticamente.
H3C OH
ROTULADO
Cuando en el rótulo se declare la cantidad equi-
valente de Hidróxido de Aluminio Desecado, se
debe entender que cada mg de Hidróxido de Alumi-
nio Desecado equivale a 0,765 mg de Al(OH)3.
AMANTADINA, Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
CLORHIDRATO DE para cromatografía de gases con un detector de
ionización a la llama, una columna de sílice fundida
de 30 m × 0,53 mm con fase estacionaria
NH2 constituida por 5 % de fenil polisiloxano 95 % de
metil polisiloxano de 1 µm y un sistema de
inyección de flujo dividido. Emplear helio como
HCl gas transportador con un caudal de
aproximadamente 4 ml por minuto y un caudal de
compensación de 200 ml por minuto, con un flujo
dividido en la proporción 50:1. Mantener el
inyector y el detector aproximadamente a 220 y
300 °C, respectivamente. Equilibrar la columna a
C10H17N . HCl PM: 187,7 665-66-7 aproximadamente 70 °C durante 5 minutos y luego
Definición - Clorhidrato de Amantadina es incrementar linealmente a razón de 10 °C por
Clorhidrato de 1-adamantanamina. Debe contener minuto hasta 250 °C durante al menos 17 minutos.
no menos de 98,5 por ciento y no más de 101,0 por Solución del estándar interno - Pesar
ciento de C10H17N . HCl, calculado sobre la exactamente alrededor de 500 mg de adamantano,
sustancia anhidra y debe cumplir con las siguientes transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver
especificaciones. con diclorometano, completar a volumen con el
mismo solvente y mezclar.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Solución estándar - Pesar exactamente
o casi blanco. Fácilmente soluble en agua; soluble alrededor de 10 mg de Clorhidrato de
en alcohol y cloroformo. Amantadina SR-FA y transferir a una ampolla de
Sustancia de referencia - Clorhidrato de decantación. Agregar 20 ml de hidróxido de
Amantadina SR-FA. sodio 5,0 N y 18 ml de diclorometano y agitar
durante 10 minutos. Descartar la fase acuosa, secar
CONSERVACIÓN la fase orgánica agitando por rotación con sulfato de
En envases bien cerrados. sodio anhidro y dejar reposar durante unos minutos
para asegurar que el agua remanente ha sido
ENSAYOS removida. Filtrar, recolectar el filtrado en un
matraz aforado de 20 ml, agregar 0,2 ml de
Identificación Solución del estándar interno y completar a
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. volumen con diclorometano.
B - Disolver 2,5 g de Clorhidrato de Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Amantadina en agua libre de dióxido de carbono y de 1,0 g de Clorhidrato de Amantadina, transferir a
diluir a 25 ml con el mismo solvente. Transferir una ampolla de decantación. Agregar 20 ml de
1 ml de esta solución a un recipiente apropiado: hidróxido de sodio 5,0 N y 18 ml de diclorometano
debe responder a los ensayos para Cloruro <410>. y agitar durante 10 minutos. Descartar la fase
Determinación del pH <250> acuosa, secar la fase orgánica agitando por rotación
Entre 3,0 y 5,5; determinado sobre una solución con sulfato de sodio anhidro y dejar reposar durante
1 en 5. unos minutos para asegurar que el agua remanente
ha sido removida. Filtrar, recolectar el filtrado en
Transparencia de la solución un matraz aforado de 20 ml, agregar 0,2 ml de
Disolver 2 g de Clorhidrato de Amantadina en Solución del estándar interno y completar a
10 ml de agua: la solución debe ser transparente y volumen con diclorometano.
casi incolora. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Determinación de agua <120> Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
Titulación volumétrica directa. No más de respuestas de los picos según se indica en
0,5 %. Procedimiento: los tiempos de retención relativos
deben ser aproximadamente de 0,7 para
Límite de metales pesados <590> adamantano y 1,0 para la clorhidrato de
Método I. Emplear 1 ml de ácido acético 1 N en amantadina; la resolución R entre los picos de
preparación de la Solución muestra. No más de adamantano y clorhidrato de amantadina no debe
0,001 %. ser menor de 20; la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas determinada a partir de
los cocientes de las respuestas de los picos de
amantadina y adamantano no debe ser mayor de
5,0%.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
2 µl) de la Solución estándar y la Solución muestra
registrar los cromatogramas y medir las respuestas
de todos los picos. Calcular el porcentaje de cada
impureza en la porción de Clorhidrato de
Amantadina en ensayo, relacionando la respuesta
del pico de cada impureza individual y la del
estándar interno obtenidas a partir de la Solución
muestra con las respuestas de los picos de
amantadina y de adamantano obtenidos a partir de
la Solución estándar. No debe contener más de
0,3 % de cualquier impureza individual y no más de
1,0 % de impurezas totales.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 150 mg de
Clorhidrato de Amantadina, disolver en una mezcla
de 50 ml de alcohol y 5 ml de ácido clorhídrico
0,1 N y agitar. Titular con hidróxido de sodio
0,1 N (SV), determinando el punto final
potenciométricamente (ver 780. Volumetría). Leer
el volumen agregado entre los dos puntos de
inflexión. Cada ml de hidróxido de sodio 0,1 N
equivale a 18,77 mg de C10H17N . HCl.
AMIKACINA Sustancias relacionadas
[NOTA: mantener la temperatura de todas las
OH preparaciones en ensayo a aproximadamente
O
10 °C].
NH2
O
Sistema cromatográfico y Fase móvil - Proce-
NH2
OH O NH der según se indica en Valoración.
NH2
OH
H OH Solución muestra - Disolver 100 mg de Amika-
O OH cina en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
OH Transferir 0,2 ml de esta solución a un recipiente de
O NH2
OH vidrio con tapa esmerilada y completar a 2,0 ml con
OH
una solución de ácido 2,4,6-trinitrobenceno sulfóni-
co al 1 %. Agregar 3 ml de piridina, tapar y agitar
enérgicamente durante 30 segundos. Calentar en un
C22H43N5O13 PM: 585,6 37517-28-5 baño de agua a 75 ºC durante 45 minutos. Enfriar
en agua fría durante 2 minutos y agregar 2 ml de
Definición - Amikacina es (S)-O-3-Amino-3- ácido acético glacial. Agitar durante 30 segundos.
deoxi-α-D-glucopiranosil-(1 6)-O-[6-amino-6- Solución estándar A - Disolver 10,0 mg de Im-
deoxi-α-D-glucopiranosil-(1 4)]-N1-(4-amino-2- pureza A de Amikacina SR-FA en agua y diluir a
hidroxi-1-oxobutil)-2-deoxi-D-estreptamina. Debe 100,0 ml con el mismo solvente. Proceder según se
contener no menos de 96,5 por ciento y no más de indica para Solución muestra comenzando donde
102,5 por ciento de C22H43N5O13, calculada sobre la dice “Transferir 0,2 ml de esta solución...”.
sustancia anhidra y debe cumplir con las siguientes Solución estándar B - Disolver 5,0 mg de Ami-
especificaciones. kacina SR-FA y 5 mg de Impureza A de Amikaci-
Caracteres generales - Polvo blanco o casi na SR-FA en agua y diluir a 50,0 ml con el mismo
blanco. Moderadamente soluble en agua; poco solvente. Proceder según se indica para Solución
soluble en metanol; prácticamente insoluble en muestra comenzando donde dice “Transferir 0,2 ml
acetona y alcohol. de esta solución...”.
Blanco - Proceder según se indica para Solu-
Sustancias de referencia - Amikacina SR-FA. ción muestra comenzando donde dice “Transferir
Impureza A de Amikacina SR-FA: 4-O-(3-amino-3- 0,2 ml de esta solución...”. pero empleando 0,2 ml
desoxi-α-D-glucopiranosil)-6-O-(6-amino-6-desoxi- de agua.
α-D-glucopiranosil)-1-N-[(2S)-4-amino-2- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
hidroxibutanoil]-2-desoxi-L-estreptamina. Cromatografiar la Solución estándar B y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
CONSERVACIÓN cedimiento: la resolución R entre los picos de ami-
En envases de cierre perfecto. kacina e impureza A de amikacina no debe ser
menor de 3,5.
ENSAYOS
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Identificación cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 20 µl) de la Solución muestra, la Solución están-
Determinación del pH <250> dar A y el Blanco. Cromatografíar la Solución
Entre 9,5 y 11,5; determinado sobre una solu- muestra durante cuatro veces el tiempo de retención
ción al 1 %, en agua libre de dióxido de carbono. de amikacina y registrar las respuestas de todos los
picos: en el cromatograma obtenido a partir de la
Determinación de agua <120> Solución muestra, la respuesta del pico correspon-
Titulación volumétrica directa. No más de diente a impureza A de amikacina no debe ser ma-
8,5 %. yor a la respuesta del pico principal obtenido con la
Determinación de la rotación óptica <170> Solución estándar A (1 %); a excepción del pico
Rotación específica: Entre +97º y +105º, calcu- principal y el pico correspondiente a impureza A de
lada sobre la sustancia anhidra. amikacina, la respuesta de ningún pico debe ser
Solución muestra: Disolver 0,5 g de Amikacina mayor que la mitad de la respuesta del pico princi-
en agua y diluir a 25 ml con el mismo solvente. pal en el cromatograma obtenido con la Solución
estándar A (0,5 %); la suma de las respuestas de
Determinación del residuo de ignición <270> todos los picos no debe ser mayor a 1,5 veces la
No más de 0,5 %. respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
ción estándar A (1,5 %). Ignorar cualquier pico
debido al Blanco y cualquier pico con una respuesta
menor a 0,1 vez la respuesta del pico principal
obtenido con la Solución estándar A.
VALORACIÓN
[NOTA: mantener la temperatura de todas las
preparaciones en ensayo a aproximadamente
10 °C].
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 340 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. La tempera-
tura de la columna se debe mantener a 30ºC. El
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
to.
Fase móvil - Metanol y una solución de fosfato
monobásico de potasio al 0,27 %, ajustada a pH 6,5
con hidróxido de potasio al 2,2 % (70:30). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación muestra - Disolver 50,0 mg de
Amikacina en agua y diluir a 50,0 ml con el mismo
solvente. Proceder según se indica para Solución
muestra en Sustancias relacionadas comenzando
donde dice “Transferir 0,2 ml de esta solución...”.
Preparación estándar - Disolver 50,0 mg de
Amikacina SR-FA en agua y diluir a 50,0 ml con el
mismo solvente. Proceder según se indica para
Solución muestra en Sustancias relacionadas co-
menzando donde dice “Transferir 0,2 ml de esta
solución...”.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar seis veces
y registrar las respuestas de los picos según se indi-
ca en Procedimiento: la desviación estándar relativa
para el pico de amikacina no debe ser mayor de
2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C22H43N5O13 en la porción de Amikaci-
na en ensayo.
AMILORIDA, No más de 0,1 %.
Límite de metales pesados <590>
CLORHIDRATO DE Método II. No más de 0,002 %.
Pureza cromatográfica
O NH
Fase estacionaria - Emplear una placa para
Cl N cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
N NH2 grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
H
. HCl . 2H2O grafía de 0,25 mm de espesor, previamente lavada
H2N N NH2 con metanol.
Fase móvil - Tetrahidrofurano e hidróxido de
amonio 3 N (15:2).
C6H8ClN7O . HCl . 2H2O PM: 302,1 17440-83-4 Diluyente - Metanol y cloroformo (4:1).
Definición - Clorhidrato de Amilorida es Clor- Soluciones estándar - Preparar una serie de so-
hidrato de N-amidino-3,5-diamino-6-clo- luciones A, B, C, D, E y F de Clorhidrato de Amilo-
ropirazincarboxamida dihidrato. Debe contener no rida SR-FA en Diluyente según se indica a conti-
menos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por nuación:
ciento de C6H8ClN7O . HCl, calculado sobre la Solución Concentración % con respecto
sustancia anhidra y debe cumplir con las siguientes estándar µg por ml a la muestra
especificaciones. A 4.000 100
Caracteres generales - Polvo amarillo o amari- B 40 1
llo verdoso, inodoro o prácticamente inodoro. C 20 0,5
Fácilmente soluble en dimetilsulfóxido; moderada- D 8 0,2
mente soluble en metanol; poco soluble en agua; E 4 0,1
insoluble en acetato de etilo, acetona, cloroformo y F 2 0,05
éter. Solución muestra - Preparar una solución de
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Ami- Clorhidrato de Amilorida en Diluyente de aproxi-
lorida SR-FA. madamente 4 mg por ml.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
CONSERVACIÓN placa 5 µl de cada una de las Soluciones estándar A,
B, C, D, E y F y 5 µl de la Solución muestra. Dejar
En envases bien cerrados.
secar las aplicaciones con una corriente de nitróge-
no y desarrollar los cromatogramas hasta que el
ENSAYOS
frente del solvente haya recorrido aproximadamente
Identificación tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
B - Absorción ultravioleta <470> vente y dejar secar al aire. Examinar la placa bajo
Concentración: Preparar una solución de luz ultravioleta a 366 nm: el valor de Rf de la man-
Clorhidrato de Amilorida que contenga 600 µg por cha principal en el cromatograma obtenido a partir
ml en agua. Diluir con ácido clorhídrico 0,1 N de la Solución muestra debe ser similar al obtenido
hasta obtener una solución de aproximadamente con la Solución estándar A. Estimar la intensidad
9,6 µg por ml. de cualquier mancha secundaria observada en el
C - Una solución de Clorhidrato de Amilorida cromatograma de la Solución muestra comparando
debe responder a los ensayos para Cloruro <410>. con las manchas principales en los cromatogramas
Acidez de las Soluciones estándar B, C, D, E y F: la suma
Disolver 1,0 g de Clorhidrato de Amilorida en de las intensidades de cualquier mancha secundaria
100 ml de una mezcla de metanol y agua (1:1) y no debe ser mayor que la intensidad de la mancha
titular con hidróxido de sodio 0,1 N, determinando principal obtenida con la Solución estándar B
el punto final potenciométricamente: deben consu- (1 %).
mirse no más de 0,30 ml (0,1 % como HCl). Impurezas orgánicas volátiles <520>
Determinación de agua <120> Método III.
Titulación volumétrica directa. Debe contener Solvente: dimetilsulfóxido.
entre 11,0 y 13,0 % determinado sobre 200 mg.
Determinación del residuo de ignición <270>
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de
Clorhidrato de Amilorida, disolver en una mezcla
de 5 ml de ácido clorhídrico 0,01 N y 50 ml de
alcohol y titular con hidróxido de sodio 0,1 N (SV)
determinando el punto final potenciométricamente
(ver 780. Volumetría). Leer el volumen agregado
entre los dos puntos de inflexión. Cada ml de
hidróxido de sodio 0,1 N equivale a 26,61 mg de
C6H8ClN7O . HCl.
AMINOCAPROICO,
ÁCIDO
O
H2N
OH
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Clor-
hidrato de Amitriptilina, disolver en 30 ml de ácido
acético glacial, calentar suavemente, si fuera nece-
sario. Enfriar, agregar 10 ml de acetato mercúri-
co (SR), agregar cristal violeta (SR) y titular con
ácido perclórico 0,1 N (SV) hasta punto final verde.
Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
31,39 mg de C20H23N . HCl.
AMLODIPINA Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
BESILATO DE grafía), recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
H de espesor.
H3C N NH2
O Fase móvil - Emplear la fase superior de una
O O CH3
SO3H
mezcla de Metil isobutil cetona, agua y ácido acéti-
H3C
O O
co glacial (50:25:25).
Cl
Solución muestra A - Disolver 140 mg de Besi-
lato de Amlodipina en metanol y diluir a 2 ml con
el mismo solvente.
Solución muestra B - Diluir 1 ml de Solución
muestra A a 10 ml con metanol.
C20H25ClN2O5 . C6H6O3S PM: 567,1 Solución estándar A - Disolver 70 mg de Besi-
111470-99-6 lato de Amlodipina SR-FA en 1 ml de metanol.
Definición - Besilato de Amlodipina es Bence- Solución estándar B - Diluir 1 ml de Solución
nosulfonato de 3-etil-5-metil-(4RS)-2- estándar A a 10 ml con metanol.
[(aminoetoxi)metil]-4-(2-clorofenil)-6-metil-1,4- Solución estándar C - Diluir 3 ml de Solución
dihidropiridina-3,5-dicarboxilato. Debe contener muestra B a 100 ml con metanol.
no menos de 97,0 por ciento y no más de 102,0 por Solución estándar D - Diluir 1 ml de la Solu-
ciento de C20H25ClN2O5 . C6H6O3S, calculado sobre ción muestra B a 100 ml con metanol.
la sustancia anhidra y debe cumplir con las siguien- Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
tes especificaciones. placa 10 µl de cada solución. Dejar secar las apli-
Caracteres generales - Polvo blanco o casi caciones y desarrollar los cromatogramas hasta que
blanco. Fácilmente soluble en metanol; moderada- el frente del solvente haya recorrido aproximada-
mente soluble en alcohol; poco soluble en agua y en mente tres cuartas partes de la longitud de la placa.
2-propanol. Retirar la placa de la cámara, marcar el frente del
solvente y secar durante 15 minutos a 80 °C. Exa-
Sustancia de referencia - Besilato de Amlodi-
minar la placa bajo luz ultravioleta a 254 nm y a
pina SR-FA.
366 nm: a excepción de la mancha principal en el
CONSERVACIÓN cromatograma obtenido con la Solución muestra A,
ninguna mancha debe ser más intensa que la man-
En envases inactínicos de cierre perfecto. cha principal obtenida con la Solución estándar C
ENSAYOS (0,3 %) y como máximo dos manchas pueden ser
más intensas que la mancha principal obtenida con
Identificación la Solución estándar D (0,1 %). El ensayo solo es
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. válido si el cromatograma obtenido con la Solución
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en estándar A presenta dos manchas completamente
Valaoración. El tiempo de retención del pico co- separadas con valores de Rf de aproximadamente
rrespondiente a besilato de amlodipina en el croma- 0,18 y 0,22.
tograma obtenido a partir de la Solución muestra se
debe corresponder con el obtenido con la Solución ENSAYO B
estándar. Sistema cromatográfico, Fase móvil, Solución
de resolución y Aptitud del sistema - Proceder
Determinación de la rotación óptica <170> según se indica en Valoración.
Rotación específica: Entre -0,10° y +0,10°. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Solución muestra: 10 mg por ml, en metanol. de 50 mg de Besilato de Amlodipina, disolver en
Determinación de agua <120> Fase móvil y diluir a 50 ml con Fase móvil.
Titulación volumétrica directa. No más de Solución estándar - Diluir 3 ml de la Solución
0,5 %, calculado sobre 3 g. muestra a 100 ml con Fase móvil y diluir 5 ml de
esta solución a 50 ml con el mismo solvente.
Determinación del residuo de ignición <270> Procedimiento - Cromatografiar la Solución
No más de 0,2 %. muestra y la Solución estándar. Registrar los cro-
Sustancias relacionadas matogramas durante tres veces el tiempo de reten-
ENSAYO A ción del pico de amlodipina. En el cromatograma
obtenido con la Solución muestra, dos veces la
respuesta del pico correspondiente a impureza D no cantidad de C20H25ClN2O5 . C6H6O3S en la porción
debe ser mayor que la respuesta del pico principal de Besilato de Amlodipina en ensayo.
obtenido con la Solución estándar (0,3 %); la suma
de las respuestas de todos los picos, a excepción del
pico principal y el pico correspondiente a impureza
D, no debe ser mayor que la respuesta del pico
principal obtenido con la Solución estándar
(0,3 %). Ignorar cualquier pico correspondiente a
bencenosulfonato (tiempo de retención relativo 0,2)
y cualquier pico con una respuesta menor a 0,1
veces la respuesta del pico principal obtenido con la
Solución estándar (0,03 %).
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 237 nm y una columna de
15 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Solución de trietilamina - Disolver 7,0 ml de
trietilamina en 1 litro de agua y ajustar a
pH 3,0 ± 0,1 con ácido fosfórico.
Fase móvil - Solución de trietilamina, metanol
y acetonitrilo (50:35:15). Filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
ma en 100. Cromatografía).
Solución de resolución - Disolver 5 mg de Besi-
lato de Amlodipina en 5 ml de peróxido de hidró-
geno al 30 %. Calentar a 70 °C durante 45 minutos.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 50 mg de Besilato de Amlodipina, disolver
en Fase móvil y diluir a 50 ml con Fase móvil.
Diluir 5 ml de esta solución a 100 ml con Fase
móvil.
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 50 mg de Besilato de Amlodipi-
na SR-FA, disolver en Fase móvil y diluir a 50 ml
con Fase móvil. Diluir 5 ml de esta solución a
100 ml con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución según se
indica en Procedimiento: la resolución R entre los
picos correspondientes a amlodipina y 3-Etil-5-
metil-2-[(2-aminoetoxi)metil]-4-(2-clorofenil)-6-
metilpiridina-3,5-dicarboxilato) (impureza D de
amlodipina) no debe ser menor de 4,5. Los tiempos
de retención relativos deben ser 0,5 para impureza
D y 1,0 para amlodipina.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación muestra y la Preparación
estándar, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
AMODIAQUINA Solución estándar A - Transferir 20 mg de
Clorhidrato de Amodiaquina SR-FA a un tubo de
Cl N ensayo con tapón de vidrio, agregar 1,0 ml de cloro-
formo saturado con hidróxido de amonio y agitar
vigorosamente durante 2 minutos. Dejar depositar
HN
los sólidos y transferir el líquido a otro tubo de
N CH3 ensayo.
Solución estándar B - Diluir 1 ml de Solución
OH CH3
estándar A a 200 ml con cloroformo saturado con
hidróxido de amonio.
C20H22ClN3O PM: 355,9 86-42-0 Solución muestra - Disolver 150 mg de Amo-
Definición - Amodiaquina es 4-[(7-Cloro- diaquina en 10 ml de cloroformo saturado de
4-quinolinil)amino]-2-[(dietilamino)metil]fenol. hidróxido de amonio.
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
más de 103,0 por ciento de C20H22ClN3O, calculado placa 10 µl de la Solución muestra y 10 l de las
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las Soluciones estándar A y B. Dejar secar las aplica-
siguientes especificaciones. ciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el
frente de solvente haya recorrido aproximadamente
Caracteres generales - Polvo amarillo pálido o tres cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar
amarillo claro. Inodoro. Moderadamente soluble la placa de la cámara, marcar el frente de solvente y
en ácido clorhídrico 1 N; poco soluble en alcohol; dejar secar. Examinar la placa bajo luz ultravioleta
prácticamente insoluble en agua. a 254 nm: el valor de Rf de la mancha principal en
Sustancia de referencia - Clorhidrato de el cromatograma obtenido a partir de la Solución
Amodiaquina SR-FA. muestra debe ser similar al obtenido con la Solución
estándar B y ninguna mancha secundaria en el
CONSERVACIÓN
cromatograma obtenido a partir de la Solución
En envases de cierre perfecto. muestra debe ser mayor en tamaño o intensidad que
ENSAYOS la mancha principal obtenida con la Solución están-
dar B.
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Impurezas orgánicas volátiles <520>
Preparar el estándar del siguiente modo: disolver Método III.
20 mg de Clorhidrato de Amodiaquina SR-FA en Solvente: Dimetil sulfóxido.
10 ml de agua en una ampolla de decantación, agre- VALORACIÓN
gar 1 ml de hidróxido de amonio y extraer con una
Preparación estándar - Preparar una solución
porción de 25 ml de cloroformo. Evaporar el ex-
que contenga 15 µg de Clorhidrato de Amodiaquina
tracto clorofórmico y secar el residuo a 105 ºC
SR-FA por ml en ácido clorhídrico 0,1 N.
durante 2 horas.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
B - Absorción ultravioleta <470>
dedor 300 mg de Amodiaquina, transferir a un ma-
Solvente: Ácido clorhídrico 0,1 N.
traz aforado de 200 ml, completar a volumen con
Concentración: 10 µg por ml.
ácido clorhídrico 0,1 N y mezclar. Transferir
Determinación de agua <120> 10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
Titulación volumétrica directa. No más de 1 litro, completar a volumen con ácido clorhídrico
0,5 %. 0,1 N y mezclar.
Determinación del residuo de ignición <270> Procedimiento - Determinar las absorbancias de la
No más de 0,2 % Preparación muestra y la Preparación estándar,
con un espectrofotómetro, en celdas de 1 cm, a la
Pureza cromatográfica longitud de onda de máxima absorción, aproxima-
Fase estacionaria - Emplear una placa para damente 342 nm, empleando ácido clorhídri-
cromatografía en placa delgada (ver 100. Cromato- co 0,1 N como blanco. Calcular la cantidad de
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- C20H22ClN3O en la porción de Amodiaquina en
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm ensayo.
de espesor.
Fase móvil - Cloroformo saturado con hidróxi-
do de amonio y alcohol absoluto (9:1).
AMONÍACO, SOLUCIÓN de tal manera que se obtenga una columna de líquido
de aproximadamente 20 cm, tapar y enfriar a una
CONCENTRADA temperatura de 10 C o menor. Pesar exactamente un
NH3 PM: 17,0 7664-41-7 erlenmeyer de 125 ml con un tapón de vidrio que
contenga 50 ml de ácido sulfúrico 1 N (SV). Colocar
Definición - Solución Concentrada de Amoníaco una pipeta graduada de 10 ml en el recipiente de So-
es una solución de NH3, debe contener no menos de lución Concentrada de Amoníaco, dejar que el líquido
27,0 por ciento y no más de 31,0 por ciento peso en suba por la pipeta sin succionar, retirar la pipeta, secar
peso de NH3. [NOTA: en exposición al aire libera exteriormente y descartar los dos primeros ml de
amoníaco rápidamente.] Solución Concentrada de Amoníaco. Sostener la
Caracteres generales - Líquido límpido, incolo- pipeta apenas por encima de la superficie del ácido
ro, muy cáustico. Miscible con agua y alcohol. Den- sulfúrico 1 N (SV) en el erlenmeyer y transferir 2 ml
sidad relativa comprendida entre 0,910 y 0,892 a de Solución Concentrada de Amoníaco. Tapar, mez-
20 °C. clar y pesar nuevamente para obtener el peso de la
sustancia en ensayo. Titular el exceso de ácido con
CONSERVACIÓN hidróxido de sodio 1 N (SV), empleando rojo de meti-
En envases de cierre perfecto, a una temperatura lo (SR) como indicador (ver Titulación residual en
no mayor de 25 C. 780. Volumetria). Cada ml de ácido sulfúrico 1 N
equivale a 17,03 mg de NH3.
ENSAYOS
Precaución: Solución Concentrada de Amonía-
co es cáustico y sus vapores son irritantes, evitar su
contacto de ojos y mucosas. Enfriar el envase antes
de abrir y cubrir la tapa con un paño o material simi-
lar.
Identificación
Sostener una varilla de vidrio humedecida con
ácido clorhídrico cerca de la superficie de Solución
Concentrada de Amoníaco : se deben producir gases
densos y blancos.
Límite de metales pesados <590>
Evaporar 1,7 ml de Solución Concentrada de
Amoníaco en un baño de vapor hasta sequedad, agre-
gar 1 ml de ácido clorhídrico 3 N y evaporar hasta
sequedad. Disolver el residuo obtenido en 2 ml de
ácido acético 1 N y diluir con agua a 25 ml. El límite
es 0,0013 %.
Límite de residuo no volátil
Evaporar hasta sequedad 10 ml de Solución Con-
centrada de Amoníaco en una cápsula de porcelana o
de platino, previamente pesada y secar a 105 C du-
rante 1 hora: el peso del residuo no debe ser mayor de
5 mg (0,05 %).
Sustancias fácilmente oxidables
A una mezcla de 4,0 ml de Solución Concentrada
de Amoníaco y 6 ml de agua, agregar un ligero exceso
de ácido sulfúrico 2 N y 0,10 ml de permanganato de
potasio 0,1 N: la coloración rosada no debe desapare-
cer completamente durante 10 minutos.
VALORACIÓN
Transferir rápidamente una porción de Solución
Concentrada de Amoníaco a un recipiente de vidrio,
AMONIO, Amonio a un pesafiltro, previamente pesado y con
10 ml de agua y pesar. Transferir a un erlenmeyer,
CARBONATO DE agregar 50 ml de ácido sulfúrico 1 N (SV), disolver,
10361-29-2 agregar rojo de metilo (SR) y titular el exceso de
ácido con hidróxido de sodio 1 N (SV). Cada ml de
Definición - Carbonato de Amonio es una mezcla ácido sulfúrico 1 N equivale a 17,03 mg de NH3.
de bicarbonato de amonio (NH4HCO3) y carbamato
de amonio (NH2COONH4) en proporciones variables.
Debe contener no menos de 30,0 por ciento y no más
de 34,0 por ciento de NH3 y debe cumplir con las
siguientes especificaciones.
Caracteres generales - Polvo blanco o masas
translucidas o blancas con un fuerte olor a amoníaco.
Sus soluciones son alcalinas frente al tornasol. Por
exposición al aire, pierde amoníaco y dióxido de car-
bono, convirtiéndose finalmente en terrones friables
esponjosos o en un polvo blanco de bicarbonato de
amonio. Se descompone en agua caliente. Fácilmente
soluble en agua.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto, a una
temperatura no mayor de 30 C.
ENSAYOS
Identificación
A - Calentar una porción de Carbonato de Amo-
nio: se debe volatilizar sin carbonización y el vapor
debe ser alcalino frente al papel de tornasol humede-
cido.
B - Una solución de Carbonato de Amonio 1 en
20 debe producir efervescencia con el agregado de
ácidos.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de cloruro y sulfato <560>
Cloruro - Una porción de 2,0 g de Carbonato de
Amonio no debe contener más cloruro que el corres-
pondiente a 0,10 ml de ácido clorhídrico 0,020 N
(0,0035 %).
Sulfato - Una porción de 2,0 g de Carbonato de
Amonio no debe contener más sulfato que el corres-
pondiente a 0,10 ml de ácido sulfúrico 0,020 N
(0,005 %).
Límite de metales pesados <590>
Reducir a polvo grueso y volatilizar 2 g de Carbo-
nato de Amonio en un baño de vapor. Agregar 1 ml
de ácido clorhídrico 3 N y evaporar hasta sequedad.
Disolver el residuo obtenido en 2 ml de ácido acético
1 N y diluir con agua a 25 ml. El límite es 0,001 %.
VALORACIÓN
Transferir aproximadamente 2 g de Carbonato de
AMOXICILINA Cuando en el rótulo se indique que la Amoxici-
lina es estéril, no debe contener más de
0,25 Unidades de Endotoxina por mg de Amoxicili-
O na.
NaO
HO H Ensayos de esterilidad <370>
O O
N CH3 Cuando en el rótulo se indique que la Amoxici-
. 3H2O lina es estéril, debe cumplir con los requisitos según
N CH3
H2N H
H S se indica en Método de transferencia directa, ex-
H H cepto que se debe emplear Medio Tioglicolato que
contenga una solución de Polisorbato 80 (1 en 200)
con suficiente penicilinasa estéril para inactivar la
C16H19N3O5S . 3H2O PM: 419,5 61336-70-7 amoxicilina en cada tubo y Caldo Digerido de Ca-
Anhidra PM: 365,4 26787-78-0 seína-Soja que contenga una solución de Polisorba-
to 80 (1 en 200) con suficiente penicilinasa estéril
Definición - Amoxicilina es el Trihidrato del para inactivar la amoxicilina en cada tubo; agitar
ácido [2S-[2,5,6 (S*)]]-6-[[amino(4-hidroxife- por rotación una vez al día.
nil)acetil]amino]-3,3-dimetil-7-oxo-4-tia-1-azabi-
ciclo[3.2.0] heptano-2-carboxílico. Debe contener VALORACIÓN
no menos de 95,0 por ciento y no más de 100,5 por [NOTA: emplear las soluciones dentro de las
ciento de C16H19N3O5S, calculado sobre la sustancia seis horas de preparadas.]
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi- Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
caciones. para cromatografía de líquidos con un detector
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
prácticamente inodoro. Soluble en soluciones di- 25 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
luidas de ácidos minerales e hidróxidos alcalinos; octadecilsilano químicamente unido a partículas
poco soluble en agua y metanol; insoluble en ben- porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
ceno, cloroformo y tetracloruro de carbono. caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml por minu-
to.
Sustancia de referencia - Amoxicilina SR-FA. Diluyente - Disolver 13,6 g de fosfato mono-
CONSERVACIÓN básico de potasio en 2 litros de agua y ajustar a pH
5,0 ± 0,1 con solución de hidróxido de potasio al
En envases de cierre perfecto, a temperatura 45 % p/p.
ambiente controlada. Fase móvil - Diluyente y acetonitrilo (96:4).
ENSAYOS Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
Identificación (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Preparación estándar - Disolver cuantitativa-
mente con Diluyente una cantidad exactamente
Determinación del pH <250> pesada de Amoxicilina SR-FA, para obtener una
Entre 3,5 y 6,0, determinado sobre una solución
solución de aproximadamente 1,2 mg por ml.
de aproximadamente 2 mg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Cristalinidad dedor de 240 mg de Amoxicilina, transferir a un
Colocar partículas de Amoxicilina en aceite mi- matraz aforado de 200 ml, disolver y completar a
neral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la volumen con Diluyente.
mezcla empleando un microscopio óptico con luz Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
polarizada: las partículas deben presentar birrefrin- Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
gencia y posiciones de extinción cuando se gira la las respuestas de los picos según se indica en Pro-
platina del microscopio. cedimiento: el factor de capacidad k' debe estar
comprendido entre 1,1 y 2,8; la eficiencia de la
Determinación de agua <120>
columna no debe ser menor de 1.700 platos teóri-
Titulación volumétrica directa. Entre 11,5 y
cos; el factor de asimetría no debe ser mayor de 2,5;
14,5 %.
la desviación estándar relativa para inyecciones
Límite de dimetilanilina <570> repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Debe cumplir con los requisitos. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C16H19N3O5S en la porción de Amoxici-
lina en ensayo.
ROTULADO
Cuando la Amoxicilina esté destinada a la pre-
paración de formas farmaceúticas de administración
parenteral, indicar en el rótulo que es estéril y
apirógena.
AMOXICILINA SÓDICA Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico, Solución A, Solución
O
B, Preparación estándar A, Preparación estándar
NaO B, Preparación de aptitud del sistema y Aptitud del
HO H sistema - Proceder según se indica en Valoración.
O O
N CH3 Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
lución A y Solución B. Programar el cromatógrafo
N CH3 del siguiente modo:
H S
H2N H
H H
Tiempo Solución A Solución B Etapa
(min) (%v/v) (%v/v)
C16H18N3NaO5S PM: 387,4
0-25 92 0 8 100 gradiente
Definición - Amoxicilina Sódica es la Sal sódi- lineal
ca del ácido [2S-[2 ,5 ,6 (S )]]-6-[[amino
(4-hidroxifenil)acetil]amino]-3,3-dimetil-7-oxo- 25-40 0 100 isocrático
4-tia-1-azabiciclo[3.2.0]heptano-2-carboxílico. 40-55 92 8 reequilibración
Debe contener no menos de 89,0 por ciento y no
más de 100,5 por ciento de C 16H18N3NaO5S, calcu- Solución estándar A - Transferir 2,0 ml de Pre-
lado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con paración estándar A a un matraz aforado de 20,0 ml
las siguientes especificaciones. y completar a volumen con Solución A. Transferir
Caracteres generales - Polvo blanco o casi 5,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
blanco. Muy higroscópico. Muy soluble en agua; 20 ml y completar a volumen con Solución A.
moderadamente soluble en alcohol; muy poco solu- Solución estándar B - A 200 mg de Amoxicili-
ble en acetona. na SR-FA agregar 1,0 ml de agua. Agitar y ajustar
a pH 8,5 mediante el agregado gota a gota de solu-
Sustancia de referencia - Amoxicilina SR-FA. ción de hidróxido de sodio al 8,5 %. Dejar reposar
CONSERVACIÓN a temperatura ambiente durante 4 horas y diluir
0,5 ml de esta solución a 50,0 ml con Solución A.
En envases de cierre perfecto. Solución muestra - Disolver 30,0 mg de
ENSAYOS Amoxicilina Sódica en Solución A y diluir a 20,0 ml
con la misma solución. [NOTA: preparar inmedia-
Identificación tamente antes de su uso].
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Disolver 250 mg de Amoxicilina Sódica en 5 ml de cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
agua, agregar 0,5 ml de ácido acético al 12 % p/v, 50 µl) de la Solución estándar A y la Solución
agitar por rotación y dejar en reposo durante muestra, eluir isocráticamente hasta el pico de
10 minutos en un baño de hielo. Filtrar, lavar el amoxicilina e inmediatamente luego de la elución
residuo con 2 ó 3 ml de una mezcla de acetona y de este pico comenzar el gradiente lineal según se
agua (9:1) y secar a 60 °C durante 30 minutos. indica en Fase móvil. [NOTA: si la composición de
B - Debe responder a los ensayos para Sodio Fase móvil se ha ajustado para lograr la resolución
<410>. requerida en Aptitud del sistema, esta composición
Determinación del pH <250> ajustada se aplicará a tiempo cero]. Registrar las
Entre 8,0 y 10,0, determinado sobre una solu- repuestas de todos los picos. Inyectar en el cro-
ción de aproximadamente 0,1 g por ml, en agua matógrafo aproximadamente 50 µl de Solución A y
libre de dióxido de carbono. emplear el mismo programa de elución para obtener
un blanco. Inyectar en el cromatógrafo aproxima-
Determinación de la rotación óptica <170> damente 50 µl de Solución estándar B, registrar los
Rotación específica: Entre +240° y +290°, cal- cromatogramas y medir las respuestas de todos los
culada sobre la sustancia anhidra. picos: los tres picos principales eluidos luego del
Solución muestra: Disolver 62,5 mg de Amoxi- pico de amoxicilina corresponden a amoxicilina
cilina Sódica en una solución de hidrogenoftalato dicetopiperazina, dímero de amoxicilina y trímero
de potasio al 0,4 % y diluir a 25 ml con el mismo de amoxicilina y sus tiempos de retención relativos
solvente. al pico de amoxicilina deben ser aproximadamente
Determinación de agua <120> 3,4; 4,1 y 4,5, respectivamente. En el cromatogra-
Titulación volumétrica directa. No más de 3 %, ma obtenido a partir de la Solución muestra, el pico
determinado sobre 400 mg. correspondiente al dímero de amoxicilina no debe
ser mayor de tres veces la respuesta del pico princi- rado de 50 ml y completar a volumen con Solu-
pal obtenido con la Solución estándar A (3 %); a ción A.
excepción del pico principal y el pico correspon- Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
diente al dímero de amoxicilina, la respuesta de dedor de 30,0 mg de Amoxicilina Sódica, transferir
ningún pico debe ser mayor a dos veces la respuesta a un matraz aforado de 50 ml, disolver en Solución
del pico principal obtenido con la Solución estándar A y completar a volumen con Solución A.
A (2 %); y la suma de las respuestas de todos los Solución de aptitud del sistema - Disolver
picos, a excepción del pico principal, no debe ser 4,0 mg de Cefadroxilo en Solución A y diluir a
mayor de nueve veces la respuesta del pico princi- 50 ml con Solución A. A 5,0 ml de esta solución
pal obtenido con la Solución estándar A (9 %). agregar 5,0 ml de Preparación estándar A y diluir a
Descartar cualquier pico con una respuesta menor a 100 ml con Solución A.
0,1 veces la respuesta del pico principal obtenido Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
con la Solución estándar A. Cromatografiar la Preparación de aptitud del siste-
Límite de metales pesados <590> ma y registrar las respuestas de los picos según se
Método VI. No más de 0,002 %. Preparar la indica en Procedimiento: la resolución R entre los
picos de amoxicilina y cefadroxilo debe ser mayor
Solución estándar empleando 2 ml de Solución
de 2,0; el factor de capacidad para el pico de
estándar de plomo (10 ppm).
amoxicilina debe ser entre 1,3 y 2,5. Cromatogra-
Límite de dimetilanilina <570> fiar la Preparación estándar B y registrar las res-
Debe cumplir con los requisitos. puestas de los picos según se indica en Procedi-
Ensayos de esterilidad <370> miento: cromatografiar la Preparación estándar A y
Cuando en el rótulo se indique que la Amoxici- registrar las respuestas de los picos según se indica
lina Sódica es estéril, debe cumplir con los requisi- en Procedimiento: la desviación estándar relativa
tos. para el pico principal debe ser menor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Cuando en el rótulo se indique que la Amoxici- 50 µl) de la Preparación estándar A y la Prepara-
lina Sódica es estéril, no debe contener más de ción muestra, registrar los cromatogramas y medir
0,25 Unidades de Endotoxina por mg de Amoxicili- las respuestas de los picos principales. Calcular el
na Sódica. porcentaje de C16H18N3NaO5S en la porción de
VALORACIÓN Amoxicilina Sódica en ensayo, multiplicando el
porcentaje de amoxicilina por 1,060.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector ROTULADO
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de Cuando la Amoxicilina Sódica esté destinada a
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida la preparación de formas farmacéuticas de adminis-
por octadecilsilano químicamente unido a partículas tración parenteral, indicar en el rótulo que debe
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal cumplir con los ensayos para Endotoxinas bacteria-
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto. nas y Esterilidad.
Solución A - Solución de fosfato diácido de po-
tasio 0,2 M al 25 % v/v, ajustada a pH 5,0 con
hidróxido de sodio al 8,5 %, y acetonitrilo (99:1).
Solución B - Solución de fosfato diácido de po-
tasio 0,2 M al 25 % v/v, ajustada a pH 5,0 con
hidróxido de sodio al 8,5 %, y acetonitrilo (80:20).
Fase móvil - Solución A y Solución B (92:8).
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar A - Pesar exactamente al-
rededor de 30 mg de Amoxicilina SR-FA, transferir
a un matraz aforado de 50 ml, disolver en Solución
A y completar a volumen con Solución A.
Preparación estándar B - Transferir 1,0 ml de
Preparación estándar A a un matraz aforado de
20,0 ml y completar a volumen con Solución A.
Transferir 1,0 ml de esta solución a un matraz afo-
Determinación del pH <250>
AMPICILINA Entre 3,5 y 6,0, determinado sobre una solución
con una concentración de aproximadamente 10 mg
O por ml.
HO
H Determinación de agua <120>
O O Titulación volumétrica directa. Cuando en el
N CH3
rótulo se indique que la Ampicilina es anhidra, no
N CH3
más de 2,0 %. Cuando en el rótulo se indique que
H S
H2N H la Ampicilina es trihidrato, debe contener entre 12,0
H H
y 15,0 %.
Límite de dimetilanilina <570>
C16H19N3O4S PM: 349,4 69-53-4 Debe cumplir con los requisitos.
Trihidrato PM: 403,5 7177-48-2 Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Definición - Ampicilina es Ácido Cuando en el rótulo se indique que la Ampicili-
[2S-[2 ,5 ,6 (S )]]-6-[(aminofenilacetil)amino]- na es estéril, no debe contener más de
3,3-dimetil-7-oxo-4-tia-1-azabiciclo [3.2.0]- 0,15 Unidades de Endotoxina por mg de Ampicili-
heptano-2-carboxílico. Es anhidra o contiene tres na.
moléculas de agua de hidratación. Debe contener Ensayos de esterilidad <370>
no menos de 96,0 por ciento y no más de 100,5 Cuando en el rótulo se indique que la Ampicili-
por ciento de C16H19N3O4S, calculado sobre la sus- na es estéril, debe cumplir con los requisitos según
tancia anhidra y debe cumplir con las siguientes se indica en Método de filtración por membrana,
especificaciones. excepto que deben disolverse 6 g en 800 ml de
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, Solución D que contenga suficiente penicilinasa
prácticamente inodoro. Soluble en soluciones di- estéril para inactivar la ampicilina y agitar por rota-
luidas de ácidos minerales e hidróxidos alcalinos; ción el recipiente hasta disolver completamente
poco soluble en agua y metanol; insoluble en ben- antes de filtrar.
ceno, cloroformo y tetracloruro de carbono. VALORACIÓN
Presenta polimorfismo.
[NOTA: preparar las soluciones en el momento
Sustancias de referencia - Ampicilina SR-FA. de su uso.]
Ampicilina Trihidrato SR-FA. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
CONSERVACIÓN para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm con una columna de
En envases de cierre perfecto. 15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
ENSAYOS por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 a 10 µm de diámetro. El
Identificación caudal debe ser aproximadamente 1,3 ml por minu-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. to.
Cuando la muestra corresponde a la forma trihidra- Fase móvil - Agua, acetonitrilo, fosfato mono-
to, tanto ésta como la Ampicilina Trihidrato SR-FA básico de potasio 1 M y ácido acético 1 N
no deben secarse. (909:80:10:1). Filtrar y desgasificar. Hacer los
B - Transferir 2 mg de Ampicilina a un tubo de ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
vidrio. Humedecer con 0,05 ml de agua y agregar Cromatografía).
2 ml de una solución preparada mezclando 2 ml de Diluyente - Mezclar 10 ml de fosfato mono-
ácido sulfúrico con 100 ml de solución de formal- básico de potasio 1 M y 1 ml de ácido acético 1 N,
dehído. Mezclar agitando por rotación. La solu- diluir con agua a 1 litro y mezclar.
ción debe ser prácticamente incolora. Colocar el Preparación estándar - Disolver una cantidad
tubo en un baño de agua durante 1 minuto: se debe exactamente pesada de Ampicilina SR-FA en Dilu-
desarrollar un color amarillo oscuro. yente para obtener una solución de aproximadamen-
Determinación de la rotación óptica <170> te 1 mg por ml. Agitar y sonicar, si fuera necesario,
Rotación específica: Entre +280 ° y +305 °. hasta disolver.
Solución muestra: Disolver 62,5 mg de Ampici- Preparación muestra - Transferir una cantidad
lina en agua y diluir a 25 ml con el mismo solvente. exactamente pesada de Ampicilina, equivalente a
100 mg de ampicilina anhidra, a un matraz aforado
de 100 ml. Agregar aproximadamente 75 ml de
Diluyente, agitar y sonicar, si fuera necesario, hasta
disolver completamente. Completar a volumen con
Diluyente y mezclar.
Solución de resolución - Disolver Cafeína en la
Preparación estándar para obtener una solución de
aproximadamente 0,12 mg por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de cafeí-
na y ampicilina no debe ser menor de 2,0; los tiem-
pos de retención relativos deben ser aproximada-
mente 0,5 para ampicilina y 1,0 para cafeína. Cro-
matografiar la Preparación estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: el factor de capacidad k' no debe ser mayor
de 2,5; el factor de asimetría no debe ser mayor de
1,4; la desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C16H19N3O4S en la porción de Ampici-
lina en ensayo.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si la Ampicilina es anhidra o
trihidrato. La cantidad de Ampicilina indicada en el
rótulo de cualquier preparación que la contenga, se
debe expresar como Ampicilina anhidra
(C16H19N3O4S). Cuando la Ampicilina esté desti-
nada a la preparación de formas farmacéuticas in-
yectables, indicar en el rótulo que es estéril.
AMPICILINA SÓDICA ción estándar y la Solución muestra del siguiente
modo:
Solución del estándar interno - Disolver 75 mg
O de N,N-dietilanilina en 25 ml de ácido clorhídrico
NaO 1 N y diluir con agua para obtener una solución de
H aproximadamente 30 µg por ml.
O O
N CH3 Solución estándar - Pesar exactamente alrede-
dor de 50,0 mg de N,N-dimetilanilina, transferir a
N CH3 un matraz aforado de 50 ml, agregar 25 ml de ácido
H S
H2N H clorhídrico 1 N, agitar por rotación para disolver,
H H
completar a volumen con agua y mezclar. Transfe-
rir 2,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
C16H18N3NaO4S PM: 371,4 69-52-3 100 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Definición - Ampicilina Sódica es la Sal mono- Transferir 1,0 ml de esta solución a un tubo de
centrífuga, agregar 1,0 ml de hidróxido de sodio
sódica del ácido [2S-[2 ,5 ,6 (S )]]-6-
1,25 N, 1,0 ml de Solución del estándar interno y
[(aminofenilacetil)amino]-3,3-dimetil-7-oxo-4-tia-
1,0 ml de ciclohexano, agitar vigorosamente duran-
1-azabiciclo[3.2.0]heptano-2-carboxílico. Debe
te 1 minuto y centrifugar. Emplear el líquido so-
contener no menos de 91,0 por ciento y no más de
brenadante transparente.
100,5 por ciento de ampicilina (C16H19N3O4S),
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
calculado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir
de 1,0 g de Ampicilina Sódica, transferir a un tubo
con las siguientes especificaciones.
de centrífuga, agregar 2 ml de hidróxido de sodio
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco 1,25 N, agitar por rotación hasta disolver, agregar
o casi blanco. Inodoro e higroscópico. Muy solu- 1,0 ml de Solución del estándar interno y 1,0 ml de
ble en agua, en soluciones de glucosa y en solución ciclohexano, agitar vigorosamente durante 1 minuto
isotónica de cloruro de sodio. y centrifugar. Emplear el líquido sobrenadante
Presenta polimorfismo. transparente.
Sustancias de referencia - Ampicilina SR-FA. Límite de cloruro de metileno
Ampicilina Sódica SR-FA. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
CONSERVACIÓN para cromatografía de gases con un detector de
ionización a la llama y una columna de vidrio de
En envases de cierre perfecto. 1,5 m × 4 mm con fase estacionaria constituida por
ENSAYOS tierra de diatomeas para cromatografía de gases
impregnada con un 10 % p/p de polietilenglicol
Identificación 1.000. Mantener la columna, el inyector y el detec-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. tor aproximadamente a 60, 100 y 150 °C, respecti-
B - Debe responder a los ensayos para Sodio vamente. Emplear nitrógeno como gas transporta-
<410>. dor con un caudal de aproximadamente 40 ml por
Determinación del pH <250> minuto.
Entre 8,0 y 10,0, determinado sobre una solu- Solución del estándar interno - Disolver 1,0 ml
ción de aproximadamente 10,0 mg por ml. de cloruro de etileno en agua y diluir a 500 ml con
el mismo solvente.
Cristalinidad Solución estándar - Disolver 1,0 ml de cloruro
Colocar partículas de Ampicilina Sódica en de metileno en agua y diluir a 500 ml con el mismo
aceite mineral, sobre un portaobjetos. Examinar la solvente. A 1 ml de esta solución, agregar 1,0 ml
mezcla empleando un microscopio óptico con luz de Solución del estándar interno y diluir a 10 ml
polarizada: las partículas deben presentar birrefrin- con el mismo solvente.
gencia y posiciones de extinción cuando se gira la Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
platina del microscopio. de 1,0 g de Ampicilina Sódica, disolver en agua,
Determinación de agua <120> agregar 1,0 ml de Solución del estándar interno y
Titulación volumétrica directa. No más de diluir a 10 ml con el mismo solvente.
2,0 %. Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Límite de dimetilanilina <570> 1 l) de la Solución estándar y la Solución muestra,
Debe cumplir con los requisitos del ensayo. registrar los cromatogramas y medir las respuestas
Preparar la Solución del estándar interno, la Solu-
de todos los picos. Calcular el porcentaje de cloru-
ro de metileno considerando que su densidad a
20 °C es 1,325 g por ml. El límite es 0,2 % p/p.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indique que Ampicilina
Sódica es estéril, no debe contener más de
0,15 Unidades de Endotoxinas por mg de Ampicili-
na.
Ensayos de esterilidad <370>
Cuando en el rótulo se indique que Ampicilina
Sódica es estéril, debe cumplir con los requisitos.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico, Fase móvil, Diluyente,
Solución estándar, Solución de resolución y Aptitud
del sistema - Proceder según se indica en Valora-
ción en Ampicilina.
Preparación muestra - [NOTA: la Ampicilina
Sódica es higroscópica. Reducir al mínimo su ex-
posición a la atmósfera y pesar rápidamente].
Transferir una cantidad exactamente pesada de
Ampicilina Sódica, equivalente a 100 mg de ampi-
cilina anhidra, a un matraz aforado de 100 ml, di-
solver en Diluyente, completar a volumen con Dilu-
yente y mezclar. Emplear esta solución inmediata-
mente después de preparada.
Procedimiento - Proceder según se indica en Pro-
cedimiento para Valoración de Ampicilina. Calcu-
lar la cantidad de ampicilina (C16H19N3O4S) en la
porción de Ampicilina Sódica en ensayo.
ROTULADO
Cuando la Ampicilina Sódica esté destinada pa-
ra la preparación de formas farmacéuticas inyecta-
bles, indicar en el rótulo que es estéril.
ANFOTERICINA B tudes de onda que el de la Solución estándar de
Anfotericina B empleada en Límite de anfoterici-
OH
OH
na A.
H3C OH
Pérdida por secado <680>
O OH OH OH OH O OH
OH
CH3 Pesar exactamente alrededor 100 mg de Anfote-
H
O ricina B, secar al vacío en un pesafiltro provisto de
H3C OH NH2
una tapa con perforación capilar, a una presión no
O
H3C
mayor de 5 mm Hg, a 60 °C durante 3 horas: no
O OH debe perder más de 5,0 % de su peso.
C47H73NO17 PM: 924,1 1397-89-3 Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,5 %; el residuo carbonizado se de-
Sinonimia - Amfotericina B be humedecer con 2 ml de ácido nítrico y 5 gotas de
Definición – Anfotericina B es el Ácido [1R- ácido sulfúrico. [NOTA: la Anfotericina B destina-
(1R*,3S*,5R*,6R*,9R*,11R*,15S*,16R*,17R*,18S* da a la preparación de cremas dermatológicas, lo-
,19E,21E,23E,25E,27E,29E,31E,33R*,35S*,36R*, ciones, ungüentos, suspensiones orales y cápsulas,
37S*)]-33-[(3-amino-3,6-dideoxi--D-manopirano- debe proporcionar un residuo no mayor de 3,0 %].
sil)oxi]-1,3,5,6,9,11,17,37-octahidroxi-15,16,18- Límite de anfotericina A
trimetil-13-oxo-14,39-dioxabiciclo[33.3.1] nona- Solución estándar de nistatina - Pesar exacta-
triaconta-19,21,23,25,27,29,31-heptaeno-36-carbo- mente alrededor de 20 mg de Nistatina SR-FA,
xílico. Debe tener una potencia de no menos de transferir a un matraz aforado de 200 ml. Disolver
750 µg de C47H73NO17 por mg, calculada sobre la en 40,0 ml de dimetilsulfóxido, completar a volu-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes men con metanol y mezclar. Transferir 4,0 ml de
especificaciones. esta solución a un matraz aforado de 50 ml, comple-
Caracteres generales - Polvo amarillo a ana- tar a volumen con metanol y mezclar.
ranjado; inodoro o prácticamente inodoro. Soluble Solución estándar de Anfotericina B - Pesar
en dimetilformamida, dimetilsulfóxido; poco solu- exactamente alrededor de 50 mg de Anfoterici-
ble en metanol; insoluble en agua, alcohol absoluto, na B SR-FA y transferir a un matraz aforado de
éter, tolueno y propilenglicol. 50 ml. Disolver en 10,0 ml de dimetilsulfóxido,
completar a volumen con metanol y mezclar.
Sustancias de referencia - Anfoterici- Transferir 4,0 ml de esta solución a un matraz afo-
na B SR-FA. Nistatina SR-FA. rado de 50 ml, completar a volumen con metanol y
CONSERVACIÓN mezclar. [NOTA: preparar esta solución en el día
de su uso].
En envases inactínicos de cierre perfecto, en un
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
sitio frío.
de 50 mg de Anfotericina B y transferir a un matraz
ENSAYOS aforado de 50 ml. Disolver en 10,0 ml de dimetil-
Identificación sulfóxido, completar a volumen con metanol y
Absorción ultravioleta <470> mezclar. Transferir 4,0 ml de esta solución a un
Intervalo espectral 1: 240 a 320 nm. matraz aforado de 50 ml, completar a volumen con
Solución 1: Preparar según se indica para Solu- metanol y mezclar.
ción muestra en Límite de anfotericina A. Procedimiento - Determinar concomitantemente
El espectro de absorción ultravioleta de la Solu- las absorbancias de la Solución estándar de nistati-
ción 1 debe presentar máximos a las mismas longi- na, la Solución estándar de Anfotericina B y la
tudes de onda que el de la Solución estándar de Solución muestra en celdas de 1 cm, a 304 y
Anfotericina B empleada en Límite de anfotericina 282 nm, con un espectrofotómetro apropiado, em-
A, excepto una banda extra que puede aparecer pleando una solución 1 en 62,5 de dimetilsulfóxido
aproximadamente a 304 nm en el espectro de esta en metanol como blanco. Calcular el porcentaje de
solución. anfotericina A en ensayo, por la fórmula siguiente:
25PN AB 2 8 2 AM 3 0 4 AB 3 0 4 AM 2 8 2
Intervalo espectral 2: 320 a 400 nm.
Solución 2: Preparar según se indica para Solu-
ción muestra en Límite de anfotericina A y diluir
AB 2 8 2 AN 3 0 4 AB 3 0 4 AN 2 8 2 PM
con 9 volúmenes de metanol. en la cual PN es el peso en mg de Nistatina SR-FA
El espectro de absorción ultravioleta de la Solu- empleada para preparar la Solución estándar de
ción 2 debe presentar máximos a las mismas longi- nistatina, AB282 y AB304 son las absorbancias de la
Solución estándar de Anfotericina B a 282 y
304 nm, respectivamente, AN282 y AN304 son las ab-
sorbancias de la Solución estándar de nistatina a
282 y 304 nm, respectivamente, AM282 y AM304 son
las absorbancias de la Solución muestra a 282 y
304 nm, respectivamente y PM es el peso en mg de
Anfotericina B empleado para preparar la Solución
muestra. No debe contener más de 5 %, calculado
sobre la sustancia seca. [NOTA: cuando en el rótu-
lo se indique que Anfotericina B está destinada a la
preparación de cremas dermatológicas, lociones,
ungüentos, suspensiones orales o cápsulas, no debe
contener más de 15 % de anfotericina A, calculado
sobre la sustancia seca].
VALORACIÓN
Proceder según se indica para Anfotericina B en
<770>. Valoración microbiológica de antibióticos.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si Anfotericina B está desti-
nada para las preparaciones dermatológicas u orales
o preparaciones parenterales.
ASCÓRBICO, ÁCIDO Ascórbico y disolver en una mezcla de 100 ml de
agua y 25 ml de ácido sulfúrico 2 N. Agregar 3 ml de
H almidón (SR) y titular inmediatamente con iodo
OH 0,1 N (SV). Realizar una determinación con un blan-
OH co y hacer las correcciones necesarias (ver 780. Vo-
O
O lumetría). Cada ml de iodo 0,1 N equivale a 8,81 mg
de C6H8O6.
H
HO OH
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Una solución de Ácido Ascórbico 1 en 50 re-
duce el tartrato cúprico alcalino (SR) lentamente a
temperatura ambiente y rápidamente con calentamien-
to.
Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre +20,5 y +21,5
[NOTA: la medición debe realizarse de inmediato
luego de preparada la solución.]
Solución muestra: 100 mg por ml, en agua.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límites de metales pesados <590>
Disolver 1,0 g de Ácido Ascórbico en 25 ml de
agua: no más de 0,002 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método II.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 400 mg de Ácido
ASPIRINA Límite de cloruro y sulfato <560>
Cloruro - Calentar a ebullición 1,5 g de Aspirina
con 75 ml de agua durante 5 minutos. Enfriar, agre-
HO O
gar agua suficiente para restaurar el volumen original
y filtrar. Una porción de 25 ml del filtrado no debe
H3C O contener más cloruro que el que corresponde a
0,10 ml de ácido clorhídrico 0,020 N (0,014 %).
O Límite de metales pesados <590>
Disolver 2 g de Aspirina en 25 ml de acetona y
agregar 1 ml de agua. Agregar 1,2 ml de tioacetami-
C9H8O4 PM: 180,2 50-78-2
da-glicerina básica (SR) y 2 ml de Solución regulado-
Sinonimia - Ácido Acetil Salicílico. ra de acetato pH 3,5 y dejar en reposo durante
Definición - Aspirina es Ácido 5 minutos: el color producido no debe ser más oscuro
2-(acetiloxi)benzoico. Debe contener no menos de que el de un control preparado con 25 ml de acetona y
99,5 por ciento y no más de 100,5 por ciento de 2 ml de Solución estándar de plomo (10 ppm) tratado
C9H8O4, calculado sobre la sustancia seca y debe de la misma manera (0,001 %).
cumplir con las siguientes especificaciones. Límite de Sulfato
Disolver 6,0 g de Aspirina en 37 ml de acetona y
Caracteres generales - Cristales blancos,
agregar 3 ml de agua. Titular potenciométricamente
comúnmente tabulares o agujas, o polvo cristalino
con perclorato de plomo 0,02 M, preparado mediante
blanco. Inodoro o de olor suave. Estable al aire seco,
la disolución de 9,20 g de perclorato de plomo en
en aire húmedo se hidroliza gradualmente en ácido
agua hasta obtener 1 litro, empleando un medidor de
salicílico y acético. Fácilmente soluble en alcohol;
pH capaz de tener una reproducibilidad mínima de
soluble en cloroformo y éter; moderadamente soluble
en éter absoluto; poco soluble en agua. 0,1 mV (ver 250. Determinación del pH). Emplear
un sistema de electrodos formado por un electrodo
Sustancia de referencia - Aspirina SR-FA. específico para plomo y un electrodo de referencia de
plata-cloruro de plata con manga de vidrio que con-
CONSERVACIÓN tenga una cantidad suficiente de una solución de per-
clorato de tetraetilamonio en ácido acético glacial
En envases de cierre perfecto.
(1 en 44) (ver 780. Volumetría). No deben consumir-
ENSAYOS se más de 1,25 ml de perclorato de plomo 0,02 M
(0,04 %) [NOTA: luego de usar, enjuagar con agua el
Identificación electrodo específico para plomo, vaciar el electrodo
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. de referencia, enjuagar con agua, luego con metanol y
B - Calentar una porción de Aspirina con agua dejar secar.]
durante varios minutos, enfriar y agregar 1 ó 2 gotas
de cloruro férrico (SR): se debe producir color rojo- Límite de ácido salicílico libre
violáceo. Preparar 25 ml de una solución al 10 % de Aspiri-
na en alcohol. Tomar dos tubos de Nessler, y a cada
Pérdida por secado <680> uno agregar 48 ml de agua y 1 ml de una solución
Secar sobre gel de sílice durante 5 horas: no debe diluida de sulfato férrico amónico recientemente pre-
perder más de 0,5 % de su peso. parada mediante el agregado de 1 ml de ácido clorhí-
Ensayo de sustancias fácilmente carboniza- drico 1 N a 2 ml de sulfato férrico amónico (SR) y
bles <350> diluida con agua a 100 ml. Transferir a un tubo 1 ml
Disolver 500 mg de Aspirina en 5 ml de ácido de una solución estándar de Ácido Salicílico en agua
sulfúrico (SR): el color de la solución no debe ser más de aproximadamente 0,10 mg de Ácido Salicílico por
intenso que el de la Solución de comparación Q. ml. Transferir al segundo tubo 1 ml de la solución de
Aspirina al 10 %. Mezclar el contenido de cada tubo:
Determinación del residuo de ignición <270> luego de 30 segundos el color en el segundo tubo no
No más de 0,05 %. debe ser más intenso que el que presenta el primer
Sustancias insolubles en carbonato de sodio tubo que contiene Ácido Salicílico (0,1 %).
Una solución de 500 mg de Aspirina en 10 ml de Impurezas orgánicas volátiles <520>
carbonato de sodio (SR) caliente debe ser transparen- Metodo II.
te.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 1,5 g de Aspirina,
transferir a un erlenmeyer, agregar 50,0 ml de
hidróxido de sodio 0,5 N (SV) y calentar a ebullición
suavemente la mezcla durante 10 minutos. Agregar
fenolftaleína (SR) y titular el hidróxido de sodio en
exceso con ácido sulfúrico 0,5 N (SV). Realizar una
determinación con un blanco y hacer las correcciones
necesarias (ver Titulaciones residuales en
780. Volumetría). Cada ml de hidróxido de sodio
0,5 N equivale a 45,04 mg de C9H8O4.
ATENOLOL caudal debe ser aproximadamente 0,6 ml por minu-
to.
Fase Móvil - Disolver 1,1 g de
OH
H 1-heptanosulfonato de sodio y 0,71 g de fosfato
O N CH3 dibásico de sodio anhidro en 700 ml de agua.
O Agregar 2 ml de dibutilamina y ajustar a pH 3,0 con
CH3 ácido fosfórico 0,8 M. Agregar 300 ml de metanol
H2N y mezclar. Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
C14H22N2O3 PM: 266,3 29122-68-7 tografía).
Definición - Atenolol es 2-[p-[2-Hidroxi-3- Solución muestra - Transferir 10 mg de Ateno-
(isopropilamino)propoxi]fenil]acetamida. Debe lol a un matraz aforado de 100 ml, disolver, com-
contener no menos de 98,0 por ciento y no más de pletar a volumen con Fase móvil y mezclar.
102,0 por ciento de C14H22N2O3, calculado sobre la Solución muestra diluida - Transferir 0,50 ml
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes de la Solución muestra a un matraz aforado de
especificaciones. 100 ml, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Caracteres generales - Polvo blanco o casi Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
blanco. Soluble en etanol; moderadamente soluble Cromatografiar la Solución muestra diluida y regis-
en agua; poco soluble en cloruro de metileno; trar las respuestas de los picos según se indica en
prácticamente insoluble en éter. Procedimiento: la eficiencia de la columna no debe
Sustancia de referencia - Atenolol SR-FA. ser menor de 5.000 platos teóricos; el factor de
asimetría no debe ser mayor de 2,0; la desviación
CONSERVACIÓN estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
ser mayor de 2,0 %.
En envases bien cerrados.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
ENSAYOS
50 µl) de la Solución muestra y la Solución muestra
Identificación diluida, registrar los cromatogramas y medir las
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. respuestas de todos los picos. [NOTA: cromatogra-
B - Absorción ultravioleta <470> fiar la Solución muestra durante 6 veces el tiempo
Solvente: metanol. de retención del pico de atenolol]. Calcular el por-
Concentración: 50 µg por ml. centaje de cada impureza en la porción de Atenolo
Determinación del punto de fusión <260> en ensayo. No debe contener más de 0,25 % de
Método I. Entre 152,0 y 156,5 °C. cualquier impureza individual y la suma de todas
las impurezas no debe ser mayor de 0,5 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C hasta peso constante: no debe VALORACIÓN
perder más de 0,5 % de su peso. Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Ate-
Determinación del residuo de ignición <270> nolol, disolver en 80 ml de ácido acético glacial y
No más de 0,2 %. titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determi-
nando el punto final potenciométricamente. Reali-
Límite de cloruro y sulfato <560> zar una determinación con un blanco y hacer las
Cloruro - Una porción de 1,0 g de Atenolol di- correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
suelta en 100 ml de ácido nítrico 0,15 N y tratada Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
con 1 ml de nitrato de plata (SR) no debe presentar 26,63 mg de C14H22N2O3.
más turbidez que 1,4 ml de ácido clorhídri-
co 0,020 N en 100 ml de ácido nítrico
0,15 N (0,1 %).
Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 226 nm y una columna de
30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
ATROPINA, SULFATO DE Disolver 1,0 g de Sulfato de Atropina en 20 ml
de agua, agregar 1 gota de rojo de metilo (SR) y
titular con hidróxido de sodio 0,020 N: no debe
CH3 consumirse más de 0,30 ml para cambiar al amari-
N
llo.
Determinación de agua <120>
H OH Titulación volumétrica directa. No más de
H2SO4 . H2O
4,0 %.
O
Determinación del residuo de ignición <270>
O No más de 0,2 %.
2 Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
(C17H23NO3)2 . H2SO4 . H2O PM: 694,9 5908-99-6 Otros alcaloides
Anhidro PM: 676,8 55-48-1 Disolver 150 mg de Sulfato de Atropina en
10 ml de agua. A 5 ml de esta solución, agregar
Definición - Sulfato de Atropina es Sulfato de unas pocas gotas de cloruro platínico (SR): no se
1 H, 5 H-tropan-3 -ol (±)-tropato (éster), mono- debe formar precipitado. A los 5 ml restantes,
hidrato. Debe contener no menos de 99,0 por cien- agregar 2 ml de hidróxido de amonio 6 N y agitar
to y no más de 101,0 por ciento de vigorosamente: puede desarrollar una leve opales-
(C17H23NO3)2 . H2SO4, calculado sobre la sustancia cencia pero no se debe producir turbidez.
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi-
caciones. VALORACIÓN
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Sul-
o cristales incoloros. Inodoro, eflorescente al aire fato de Atropina, disolver en 50 ml de ácido acético
seco. Sensible a la luz. Muy soluble en agua; glacial y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV),
fácilmente soluble en alcohol y glicerina; insoluble determinando el punto final potenciométricamente
en éter. (ver 780.Volumetría). Realizar una determinación
con un blanco y hacer las correcciones necesarias.
Sustancia de referencia - Sulfato de Atropi- Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
na SR-FA. 67,68 mg de (C17H23NO3)2 . H2SO4.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Una solución de Sulfato de Atropina 1 en 20
debe responder a los ensayos para Sulfato <410>.
Determinación del punto de fusión <260>
Método I. No debe ser menor a 187 °C , deter-
minado luego de secar a 120 °C durante 4 horas.
[NOTA: el Sulfato de Atropina anhidro es
higroscópico, realizar la determinación inmediata-
mente luego de secar].
Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación angular: la rotación observada, en
grados, multiplicada por 200 y dividida por la lon-
gitud en mm del tubo empleado, se debe encontrar
entre - 0,60° y + 0,05° (límite de hiosciamina).
Solución muestra: 1,0 g en 20 ml de agua.
Acidez
AZATIOPRINA celulosa microcristalina para cromatografía, de
0,25 mm de espesor.
NO2 Fase móvil - Alcohol butílico, previamente sa-
N turado con hidróxido de amonio 6 N.
Solución estándar A - Preparar una solución de
N S Azatioprina SR-FA en hidróxido de amonio 6 N de
H3C aproximadamente 20 mg por ml.
HN N
Solución estándar B - Preparar una solución de
mercaptopurina en hidróxido de amonio 6 N de
N N
aproximadamente 200 µg por ml.
C9H7N7O2S PM: 277,3 446-86-6 Solución muestra - Preparar una solución de
Azatioprina en hidróxido de amonio 6 N de
Definición - Azatioprina es 6-[(1-Metil-4-nitro- aproximadamente 20 mg por ml.
1H-imidazol-5-il)tio]-1H-purina. Debe contener no Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
menos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por placa 5 µl de las Soluciones estándar A y B y 5 µl
ciento de C9H7N7O2S, calculado sobre la sustancia de la Solución muestra. Dejar secar las aplicacio-
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
ciones. frente del solvente haya recorrido aproximadamente
Caracteres generales - Polvo amarillo pálido, tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
inodoro. Soluble en soluciones diluidas de hidróxi- rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
dos alcalinos; moderadamente soluble en ácidos vente y secar al aire. Examinar bajo luz ultravioleta
minerales diluidos; muy poco soluble en cloroformo a 254 y 366 nm: ninguna mancha secundaria en el
y alcohol; prácticamente insoluble en agua. cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra debe ser más intensa que la obtenida con la
Sustancia de referencia - Azatioprina SR-FA. Solución estándar B (1,0 %).
CONSERVACIÓN Impurezas orgánicas volátiles <520>
En envases inactínicos de cierre perfecto Método II.
Solvente: dimetilsulfóxido.
ENSAYOS
VALORACIÓN
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Aza-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en tioprina, disolver en 25 ml de dimetilformamida y
Límite de mercaptopurina. El valor de Rf de la titular con hidróxido de tetrabutilamonio 0,1 N (SV)
mancha principal en el cromatograma obtenido a determinando el punto final potenciométricamente.
partir de la Solución muestra se debe corresponder Realizar una determinación con un blanco y hacer
con el obtenido con la Solución estándar A. las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de hidróxido de tetrabutilamonio 0,1 N
Acidez o alcalinidad equivale a 27,73 mg de C9H7N7O2S.
Agitar 2,0 g de Azatioprina con 100 ml de agua
durante 15 minutos y filtrar: 20,0 ml del filtrado
deben consumir para su neutralización no más de
0,10 ml de ácido clorhídrico 0,020 N o no más de
0,10 ml de hidróxido de sodio 0,020 N, empleando
rojo de metilo (SR) como indicador.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a 105 °C durante 5 horas: no debe
perder más de 1,0 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de mercaptopurina
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en placa delgada (ver
100. Cromatografía) recubierta con una capa de
AZITROMICINA gencia y posiciones de extinción cuando se gira la
platina del microscopio
H3C
Determinación del pH <250>
N
H3C CH3 Entre 9,0 y 11,0.
HO OH Solución muestra: preparar una solución de Azi-
H3C OH CH3
tromicina en metanol de aproximadamente 4 mg
H3C O
O
N(CH3) 2
2 H2O por ml. Diluir un volumen de esta solución con un
CH3
O
O O CH3 OH volumen igual de agua para obtener una solución de
CH3
OCH3
aproximadamente 2 mg de Azitromicina por ml.
O OH
CH3
CH3
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. Entre 4,0 y
5,0 %.
C38H72N2O12 . 2H2O PM: 785,0 117772-70-0
Anhidro PM: 749,0 83905-01-5 Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,3 %; humedecer el residuo carbo-
Definición - Azitromicina es [2R-(2R*, nizado con 2 ml de ácido nítrico y 5 gotas de ácido
3S*,4R*,5R*,8R*,10R*,11R*,12S*,13S*,14R*)]- sulfúrico.
13-[(2,6-Dideoxi-3-C-metil-3-O-metil-α-L-ribo-
hexopiranosil)oxi]-2-etil-3,4,10-trihidroxi-3,5,6,8, Límite de metales pesados <590>
10,12,14-heptametil-11-[[3,4,6-trideoxi-3-(dimetil- Método II. No más de 0,0025 %.
amino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-1-oxa -6-azaci-
clopentadecan-15-ona. Debe contener el equivalen- VALORACIÓN
te a no menos de 94,5 por ciento y no más de 103
por ciento de C38H72N2O12, calculado sobre la sus- Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
tancia anhidra y debe cumplir con las siguientes para cromatografía de líquidos con un detector
especificaciones. ultravioleta ajustado a 210 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco. por grupos nitrilo químicamente unidos a partículas
de sílice porosas de 3 a 10 µm de diámetro. El
Sustancia de referencia - Azitromicina Di- caudal debe ser aproximadamente 0,5 ml por minu-
hidrato SR-FA. to.
Fase móvil - Pesar 2,6 g de fosfato monobásico
CONSERVACIÓN de potasio y disolver en 300 ml de agua. Ajustar a
En envases de cierre perfecto. pH 7,5 con hidróxido de sodio o ácido fosfórico.
Agregar con agitación constante 600 ml de metanol
ENSAYOS y por último 100 ml de acetonitrilo [NOTA: es
importante respetar el orden de agregado de los
Identificación componentes]. Mezclar. Filtrar y desgasificar.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en ma en 100. Cromatografía).
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- Preparación estándar - Pesar exactamente al-
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- rededor de 30 mg de Azitromicina Dihidrato SR-FA
paración muestra se debe corresponder con el obte- y transferir a un matraz aforado de 50 ml. Disolver
nido en la Preparación estándar. en Fase móvil, completar a volumen con Fase móvil
y mezclar.
Determinación de la rotación óptica <170>
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Rotación específica: Entre -45° y -49°, determi-
dedor de 30 mg de Azitromicina y transferir a un
nada a 20 °C.
matraz aforado de 50 ml. Disolver en Fase móvil,
Solución muestra: 20 mg por ml, en alcohol ab-
completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
soluto.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cristalinidad Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
Colocar partículas de Azitromicina en aceite las respuestas de los picos según se indica en Pro-
mineral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar cedimiento: el tiempo de retención para el pico de
la mezcla empleando un microscopio óptico con luz azitromicina debe ser aproximadamente 12 minu-
polarizada: las partículas deben presentar birrefrin-
tos; la desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C38H72N2O12 en la porción de Azitromi-
cina en ensayo.
AZUL DE METILENO producción de abundantes vapores. Enfriar nueva-
mente, lavar las paredes del matraz y calentar hasta
la producción de vapores. Enfriar, diluir con agua a
CH3 - CH3
Cl
+
52 ml y agregar 3 ml de ácido clorhídrico: la solu-
N S N
H3C CH3 3 H2O
ción resultante debe cumplir con el ensayo, excepto
que debe omitirse el agregado de 20 ml de ácido
N sulfúrico 7 N especificado en Procedimiento. El
límite es 8 ppm.
C16H18ClN3S . 3H2O PM: 373,9 7220-79-3 Cobre y cinc
Anhidro PM: 319,9 61-73-4 Calcinar 1,0 g de Azul de Metileno a la menor
temperatura posible en un crisol de porcelana hasta
Sinonimias - Cloruro de Metiltioninio. Azul que todo el carbono se oxide. Enfriar el residuo,
básico 9 trihidrato C.I. agregar 15 ml de ácido nítrico 2 N y calentar a
Definición - Azul de Metileno es Cloruro de ebullición durante 5 minutos. Enfriar, filtrar la
3,7-bis(dimetilamino)fenotiazin-5-ium. Debe con- solución enfriada y lavar el residuo con 10 ml de
tener no menos de 98,0 por ciento y no más de agua. Al filtrado y lavado combinados agregar un
103,0 por ciento de C16H18ClN3S, calculado sobre la exceso de hidróxido de amonio 6 N, filtrar y trans-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes ferir a un matraz aforado de 50 ml. Lavar el preci-
especificaciones. pitado con porciones pequeñas de agua, agregar los
lavados al filtrado, completar a volumen con agua y
Caracteres generales - Cristales o polvo crista- mezclar. A 25 ml de esta solución, agregar 10 ml
lino de color verde oscuro, con brillo bronceado. de sulfuro de hidrógeno (SR): no se debe producir
Estable al aire. Soluble en agua y cloroformo; turbidez dentro de los 5 minutos (ausencia de cinc).
moderadamente soluble en alcohol. Sus soluciones Cualquier color oscuro producido no debe ser ma-
en agua o en alcohol son de color azul profundo. yor que el de un control preparado calentando a
Sustancia de referencia - Azul de Metile- ebullición una cantidad de sulfato cúprico, equiva-
no SR-FA. lente a 200 µg de cobre, con 15 ml de ácido nítrico
2 N durante 5 minutos y tratando esta solución
CONSERVACIÓN según se indico anteriormente, comenzando donde
En envases bien cerrados. dice: “Enfriar, filtrar la solución enfriada...”
(0,02 % de cobre).
ENSAYOS Pureza cromatográfica
Identificación Fase estacionaria - Emplear una placa para
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
B - Disolver 10 mg de Azul de Metileno en grafía) recubierta con gel de sílice octadecilsilani-
100 ml de agua. Calentar 10 ml de esta solución zado para cromatografía, de 0,25 mm de espesor.
con 1 ml de ácido acético y 0,1 g de polvo de cinc: Fase móvil - Emplear la fase superior de una
la solución debe decolorarse. Filtrar y exponer al mezcla de agua, n-butanol y ácido acético glacial
aire: la solución debe colorearse nuevamente. (10:8:2).
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
Pérdida por secado <680> tamente pesada de Azul de Metileno SR-FA en
Secar a 75 °C, a una presión no mayor de metanol para obtener una solución de aproximada-
5 mm Hg durante 4 horas: debe perder entre 8,0 y mente 100 µg por ml.
18,0 % de su peso. Solución estándar diluida - Diluir una porción
Determinación del residuo de ignición <270> de Solución estándar cuantitativamente con meta-
No más de 1,2 %. nol para obtener una solución de aproximadamente
10 µg por ml.
Límite de arsénico <540> Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
Método I. Preparar la Solución muestra mez- tamente pesada de Azul de Metileno en metanol
clando 0,375 g con 10 ml de agua en el matraz para obtener una solución de aproximadamente
generador de arsina. Agregar 15 ml de ácido nítrico 1,0 mg por ml.
y 5 ml de ácido perclórico, mezclar y calentar con Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
cuidado hasta la producción de abundantes vapores placa 5 µl de la Solución muestra, 5 µl de Solución
de ácido perclórico. Enfriar, lavar las paredes del estándar y 5 µl de Solución estándar diluida. Dejar
matraz con agua y nuevamente calentar hasta la secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogra-
mas hasta que el frente del solvente haya recorrido
aproximadamente tres cuartas partes de la longitud
de la placa. Retirar la placa de la cámara, dejar que
el solvente se evapore y examinar la placa: el valor
de Rf de la mancha principal en el cromatograma
obtenido a partir de la Solución muestra debe ser
similar al obtenido con la Solución estándar, y si
estuviesen presentes otras manchas en el cromato-
grama obtenido a partir de la Solución muestra, una
de ellas no debe ser mayor en tamaño o intensidad a
la mancha principal obtenida a partir de la Solución
estándar (10,0 %) y no debe haber más de dos
manchas adicionales, ninguna de las cuales debe ser
mayor en tamaño o intensidad a la mancha principal
obtenida con la Solución estándar diluida (1,0 %).
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
VALORACIÓN
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Azul de Metileno, transferir a
un matraz aforado de 250 ml, disolver con alcohol
diluido, completar a volumen con el mismo solven-
te y mezclar. Transferir 5,0 ml de esta solución a
un matraz aforado de 100 ml, completar a volumen
con alcohol diluido y mezclar. Transferir 5,0 ml de
esta solución a un matraz aforado de 50 ml, comple-
tar a volumen con alcohol diluido y mezclar. Esta
solución contiene aproximadamente 2 µg por ml.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Azul de Metileno SR-FA en
alcohol diluido y proceder según se indica para
Preparación muestra para obtener una solución de
aproximadamente 2 µg por ml.
Procedimiento - Determinar concomitantemen-
te las absorbancias de la Preparación muestra y la
Preparación estándar, en celdas de 1 cm a la longi-
tud de onda de máxima absorción, aproximadamen-
te 663 nm, con un espectrofotómetro, empleando
alcohol diluido como blanco. Calcular la cantidad
de C16H18ClN3S en la porción de Azul de Metileno
en ensayo.
BACITRACINA muestra se debe corresponder con el obtenido con
la Solución estándar.
1405-87-4 Determinación del pH <250>
Entre 5,5 y 7,5, determinado sobre una solución
Definición - Bacitracina es un polipéptido pro- de aproximadamente 10.000 Unidades de Bacitraci-
ducido por el crecimiento de un organismo del na por ml.
grupo licheniformis de Bacillus subtilis (Bacillace-
ae). Debe tener una potencia de no menos de Pérdida por secado <680>
40 Unidades de Bacitracina por mg. Secar al vacío aproximadamente 100 mg a una
presión no mayor de 5 mm Hg, a 60 °C durante
Caracteres generales - Polvo blanco o casi 3 horas: no debe perder más de 5,0 % de su peso.
blanco, higroscópico. En solución, a temperatura
ambiente, se degrada rápidamente. Se inactiva en Ensayos de esterilidad <370>
presencia de sales de metales pesados. Fácilmente Cuando en el rótulo se indique que Bacitracina
soluble en agua; soluble en alcohol, metanol y ácido es estéril, debe cumplir con los requisitos según se
acético glacial; sus soluciones en solventes orgáni- indica en Método de filtración por membrana.
cos presentan usualmente residuos insolubles; inso- Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
luble en acetona, cloroformo y éter. Cuando en el rótulo se indique que Bacitracina
Sustancia de referencia - Bacitracina está destinada a la preparación de formas farmacéu-
Cinc SR-FA. ticas de administración parenteral, no debe contener
más de 0,01 mg de Endotoxina por mg de Bacitra-
CONSERVACIÓN cina.
En envases de cierre perfecto, en un sitio fresco. VALORACIÓN
ENSAYOS Proceder según se indica para Bacitracina en
<770>. Valoración microbiológica de antibióticos.
Identificación
Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. ROTULADO
Fase estacionaria - Emplear una placa para
Indicar en el rótulo el número de Unidades de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Bacitracina por miligramo y que no se puede asegu-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
rar la potencia más allá de los 60 días después de
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
abierto el envase. Cuando Bacitracina esté destina-
de espesor.
da a la preparación de formas farmacéuticas de
Fase móvil - Alcohol butílico, ácido acético
administración parenteral indicar en el rótulo que es
glacial, agua, piridina y alcohol (60:15:10:6:5).
estéril.
Solución estándar - Preparar una solución de
Bacitracina Cinc SR-FA en solución de edetato
disódico (1 en 100) de aproximadamente 6,0 mg
por ml.
Solución muestra - Preparar una solución de
Bacitracina en solución de edetato disódico (1 en
100) de aproximadamente 6,0 mg por ml.
Revelador - Emplear una solución 1 en 100 de
ninhidrina en una mezcla de alcohol butílico y piri-
dina (99:1).
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 1 µl de la Solución muestra y 1 µl de la Solu-
ción estándar. Dejar secar las aplicaciones y des-
arrollar los cromatogramas hasta que el frente del
solvente haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tas partes de la longitud de la placa. Retirar la placa
de la cámara, marcar el frente del solvente y dejar
evaporar. Pulverizar sobre la placa con Revelador y
calentar aproximadamente a 110 °C durante 5 mi-
nutos: el valor de Rf de la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
BACITRACINA CINC Espectrofotometría de absorción y emisión atómi-
ca), equipado con una lámpara de cinc de cátodo
hueco y una llama de aire-acetileno, empleando
Bacitracina cinc, complejo. 1405-89-6 ácido clorhídrico 0,001 N como blanco. Graficar
Definición - La Bacitracina cinc es la sal de las absorbancias de las Soluciones estándar en
cinc de un tipo de bacitracina o una mezcla de dos o función de la concentración en µg por ml de cinc y
más sales. Tiene una potencia de no menos de trazar la línea recta que mejor se ajuste a los puntos
40 Unidades de Bacitracina por mg. Contiene no trazados. A partir del gráfico obtenido, determinar
menos de 2,0 por ciento y no más de 10,0 por ciento la concentración en µg por ml de cinc en la Solu-
de cinc (Zn), calculado sobre la sustancia seca y ción muestra. Calcular el contenido de cinc en
cumple con las siguientes especificaciones. porcentaje en la porción de Bacitracina Cinc en
ensayo.
Caracteres generales - Polvo blanco o gris
amarillento claro, higroscópico. Es inodoro o posee Pérdida por secado <680>
un leve olor. Moderadamente soluble en agua. Secar al vacío aproximadamente 100 mg a
Sustancia de referencia - Bacitracina 60 C durante 3 horas: no debe perder más de 5,0 %
Cinc SR-FA. de su peso.
ROTULADO
Cuando la Bencilpenicilina Potásica esté desti-
nada a la preparación de formas farmacéuticas in-
yectables, indicar en el rótulo que es estéril.
BENCILPENICILINA Determinación del pH <250>
Entre 5,0 y 7,5, determinado sobre una solución
PROCAÍNA de 50 mg de Bencilpenicilina Procaína en 15 ml de
agua libre de dióxido de carbono.
O
Determinación de la rotación óptica <170>
HO H
O O Rotación específica: Entre +165° y +180 º, de-
N CH3 terminado sobre la sustancia anhidra.
N
H
S
CH3 Solución muestra: Disolver 250 mg de Bencil-
H H penicilina Procaína en una mezcla de acetona y
.H2O agua (3:2) y diluir a 25 ml con la misma mezcla de
CH3 solventes.
O
O
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indique que la Bencilpe-
NaO H
O O nicilina Sódica es estéril no debe contener más de
N CH3 0,01 Unidades de Endotoxina por cada
N CH3
100 Unidades de Bencilpenicilina.
S
H Ensayos de esterilidad <370>
H H
Cuando en el rótulo se indique que la Bencilpe-
nicilina Sódica es estéril, debe cumplir con los
C16H17N2NaO4S PM: 356,4 69-57-8 requisitos cuando se ensaya según se indica en
Sinonimia - Penicilina G Sódica. Método de filtración por membrana.
Definición - Bencilpenicilina Sódica es la Sal VALORACIÓN
monosódica del ácido [2S-(2,5,6)]-3,3-dimetil-
7-oxo-6-[(fenilacetil)amino]-4-tia-1-azabiciclo [NOTA: preparar las soluciones inmediatamente
[3.2.0]heptano-2-carboxílico. Es producida por el antes de usar].
crecimiento de ciertas cepas de Penicillum notatum Sistema cromatográfico, Fase móvil Solución de
u organismos relacionados, u obtenidas por otros resolución Preparación estándar y Aptitud del
medios. Debe contener no menos de 96,0 por cien- sistema - Proceder según se indica en Valoración
to y no más de 102,0 por ciento de C16H17NaN2O4S, en Bencilpenicilina Potásica.
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
con las siguientes especificaciones. dedor de 5 mg de Bencilpenicilina Sódica, transferir
a un matraz aforado de 50 ml y completar a volu-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco men con agua.
o casi blanco. Muy soluble en agua; prácticamente Procedimiento - Proceder según se indica en la
insoluble en aceites grasos y parafina líquida. Valoración de Bencilpenicilina Potásica Calcular
Sustancias de referencia - Bencilpenicilina el contenido en porcentaje de C16H17N2NaO4S en la
Potásica SR-FA. Bencilpenicilina Sódica SR-FA. porción de Bencilpenicilina Sódica en ensayo.
CONSERVACIÓN ROTULADO
En envases de cierre hermético. Cuando la Bencilpenicilina Sódica esté destina-
da a la preparación de formas farmacéuticas inyec-
ENSAYOS tables, indicar en el rótulo que es estéril.
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Debe responder a los ensayos para So-
dio <410>.
Determinación del pH <250>
Entre 5,5 y 7,5, determinado sobre una solución
de aproximadamente 100 mg por ml en agua libre
de dióxido de carbono.
Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre +285° y +310 º, de-
terminado sobre la sustancia seca.
Solución muestra: Disolver 500 mg de Bencil-
penicilina Sódica en agua libre de dióxido de car-
bono y diluir a 25 ml con el mismo solvente.
Absorbancia de la solución
Disolver 90 mg de Bencilpenicilina Sódica y
proceder según se indica en Absorbancia de la
solución para Bencilpenicilina Potásica.
BENZALCONIO, solución de Cloruro de Benzalconio al 1 %.
D - Disolver 1 g de Cloruro de Benzalconio en
CLORURO DE agua libre de dióxido de carbono y diluir a 100 ml con
8001-54-5 el mismo solvente. A 2 ml de la solución obtenida,
agregar 1 ml de ácido nítrico diluido. Se debe formar
Definición - Cloruro de Benzalconio es una mez- un precipitado blanco que se disuelve al agregar 5 ml
cla de cloruros de alquilbencildimetilamonio y sus de alcohol. La solución obtenida debe responder a los
sustituyentes alquilo presentan una longitud de cadena ensayos para Cloruro <410>.
comprendida entre C8 y C18. Cloruro de Benzalconio
debe contener no menos de 95,0 por ciento y no más Acidez o alcalinidad
del equivalente a 104,0 por ciento de cloruros de Disolver 1 g de Cloruro de Benzalconio en agua
alquilbencildimetilamonio, calculados como libre de dióxido de carbono y diluir a 100 ml con el
C22H40ClN, con un peso molecular de 354,0, calcula- mismo solvente. A 50 ml de esta solución, agregar
do sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las 0,1 ml de púrpura de bromocresol (SR). No se deben
siguientes especificaciones. consumir más de 0,1 ml de ácido clorhídrico 0,1 N o
hidróxido de sodio 0,1 N para virar el color del indi-
Caracteres generales - Polvo blanco o blanco cador.
amarillento, o fragmentos gelatinosos blanco amari-
llentos. Higroscópico, jabonoso al tacto. Forma una Determinación de agua <120>
masa fundida límpida al calentar. En disolución acuo- Titulación volumétrica directa. No más de 10 %,
sa produce abundante espuma al agitar. Muy soluble determinado sobre 300 mg de Cloruro de Benzalco-
en agua y alcohol. nio.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml por minu-
to.
Fase móvil - Metanol y fosfato monobásico de
potasio 0,07 M (3:2). Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
100. Cromatografía).
Preparación estándar - Transferir una cantidad
exactamente pesada de Fosfato Sódico de Betame-
tasona SR-FA a un matraz aforado de 100 ml.
Disolver en una mezcla de metanol y agua (3:2) y
diluir cuantitativamente y en etapas, si fuera necesa-
rio, con la misma mezcla para obtener una solución
de aproximadamente 0,17 mg de Fosfato Sódico de
Betametasona por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 34 mg de Fosfato Sódico de Betametaso-
na, transferir a un matraz aforado de 200 ml, com-
pletar a volumen con una mezcla de metanol y agua
(3:2) y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: el factor de asimetría no debe ser mayor
de 2; la desviación estándar relativa para inyeccio-
nes repetidas no debe ser mayor de 3,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación muestra y la Preparación
estándar, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C22H28FNa2O8P en la porción de Fosfato
Sódico de Betametasona.
BETAMETASONA, No más de 0,2 %, empleando un crisol de plati-
no.
VALERATO DE Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
O para cromatografía de líquidos con un detector
H3C O ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
O 15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
H CH3 OH
OH por octadecilsilano químicamente unido a partículas
H porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
CH3 H caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
CH3 to.
F H Fase móvil - Acetonitrilo, agua y ácido acético
glacial (550:450:1). Filtrar y desgasificar. Hacer
O los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
100. Cromatografía ).
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
C27H37FO6 PM: 476,6 2152-44-5
de 4 mg de Valerato de Betametasona y transferir a
Definición - Valerato de Betametasona es un matraz aforado de 10 ml. Completar a volumen
17-Valerato de (11,16)-9-fluoro-11,17,21-trihi- con Fase móvil y mezclar.
droxi-16-metilpregna-1,4-dien-3,20-diona. Debe Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
contener no menos de 97,0 por ciento y no más de Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
103,0 por ciento de C27H37FO6, calculado sobre la respuestas de los picos según se indica en Procedi-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes miento: la resolución R entre el valerato de betame-
especificaciones. tasona y cualquier impureza no debe ser menor de
1,5; la eficiencia de la columna no debe ser menor
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
de 9.000 platos teóricos.
o casi blanco. Inodoro. Fácilmente soluble en
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
acetona y cloroformo; soluble en alcohol; modera-
aproximadamente 10 µl de la Solución muestra,
damente soluble en benceno y éter; prácticamente
registrar el cromatograma y medir las respuestas de
insoluble en agua.
todos los picos. Calcular el porcentaje de cada
Presenta polimorfismo.
impureza en la porción de Valerato de Betametaso-
Sustancia de referencia - Valerato de Betame- na en ensayo, en relación a la sumatoria de las res-
tasona SR-FA. puestas de todos los picos. No debe contener más
de 1,0 % de cada impureza individual y la suma de
CONSERVACIÓN
todas la impurezas no debe ser mayor de 2,0 %.
En envases de cierre perfecto.
VALORACIÓN
ENSAYOS
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Identificación para cromatografía de líquidos con un detector
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en 30 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- octadecilsilano químicamente unido a partículas
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
paración muestra se debe corresponder con el obte- caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minu-
nido en la Preparación estándar. to.
Fase móvil - Acetonitrilo y agua (3:2). Filtrar y
Determinación de la rotación óptica <170> desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Rotación específica: Entre +75° y +82°. Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano. Diluyente - Ácido acético glacial en metanol
Pérdida por secado <680> (1 en 1.000).
Secar 200 mg de Valerato de Betametasona a Preparación estándar - Pesar exactamente al-
105 °C durante 3 horas: no debe perder más de rededor de 20 mg de Valerato de Betametaso-
0,5 % de su peso. na SR-FA y transferir a un matraz aforado de
100 ml. Agregar Diluyente, sonicar hasta disolu-
Determinación del residuo de ignición <270>
ción y completar a volumen con Diluyente.
Preparación muestra - Proceder según se indica
para la Preparación estándar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C27H37FO6 en la porción de Valerato de
Betametasona en ensayo.
BEZAFIBRATO placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
secar a 120 °C durante 15 minutos. Examinar la
placa bajo luz ultravioleta a 254 nm: el valor de Rf
O CO2H
de la mancha principal en el cromatograma obteni-
O
H3C CH3 do a partir de la Solución muestra se debe corres-
N ponder con obtenido con la Solución estándar.
H
Cl
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Absorción ultravioleta <470>
Pesar exactamente alrededor de 180 mg de Bi-
perideno y transferir a un matraz aforado de 200 ml.
Agregar 1 ml de ácido láctico, completar a volumen
con agua y mezclar. Las absortividades, calculadas
sobre la sustancia seca, a la longitud de onda de
máxima absorción, aproximadamente 257 nm, no
deben diferir en más de 3,0 %.
C - Disolver 20 mg de Biperideno en 5 ml de
ácido fosfórico: se debe desarrollar color verde.
D - Disolver 200 mg de Biperideno en 80 ml de
agua con 0,5 ml de ácido clorhídrico 3 N, calentan-
do, si fuera necesario para favorecer la disolución, y
enfriar. A 5 ml de esta solución agregar 1 gota de
ácido clorhídrico y varias gotas de cloruro mercúri-
co (SR): se debe formar un precipitado blanco. A
una segunda porción de 5 ml de la solución original,
agregar bromo (SR) gota a gota: se debe formar un
precipitado amarillo que se debe disolver por agita-
ción y luego de agregar más gotas de bromo (SR):
se debe formar un precipitado permanente.
Determinación del punto de fusión <260>
BIPERIDENO, Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
CLORHIDRATO DE más de 0,5 % de su peso.
Impurezas comunes <510>
Proceder según se indica en Impurezas comunes
en Biperideno.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
ClH Método II.
OH
N
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de
Clorhidrato de Biperideno y disolver en 80 ml de
ácido acético glacial, calentando ligeramente, si
C21H29NO . HCl PM: 347,9 1235-82-1 fuera necesario, para favorecer la disolución. En-
Definición - Clorhidrato de Biperideno es friar, agregar 1 gota de cristal violeta (SR), 10 ml de
Clorhidrato de -Biciclo[2.2.1] hept-5-en-2-il- acetato mercúrico (SR) y titular con ácido perclóri-
-fenil-1-piperidinopropanol. Debe contener no co 0,1 N (SV) hasta punto final azul. Realizar una
menos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por determinación con un blanco y hacer las correccio-
ciento de C21H29NO . HCl, calculado sobre la sus- nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
tancia seca y debe cumplir con las siguiente especi- ácido perclórico 0,1 N equivale a 34,79 mg de
ficaciones. C21H29NO . HCl.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: metanol.
Concentración: 1 mg por ml.
Las absortividades a 257 nm, calculadas
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
3,0 %.
C - Debe cumplir con el ensayo de Identifica-
ción C en Biperideno.
D - A 5 ml de una solución de Clorhidrato de
Biperideno 1 en 500, agregar bromo (SR) gota a
gota: se debe formar un precipitado amarillo que se
disuelve por agitación. El agregado de una mayor
cantidad de bromo (SR) debe producir un precipita-
do que no se disuelve por agitación.
E - Una porción de 5 ml de una solución de
Clorhidrato de Biperideno 1 en 500 debe responder
a los ensayos para Cloruro <410>.
BISACODILO Solución muestra A - Disolver 20 mg de Bisa-
codilo en acetona y diluir hasta 10 ml con el mismo
solvente.
Solución muestra B - Diluir 1 ml de Solución
N muestra A hasta 10 ml con acetona.
Solución estándar A - Disolver 20 mg de Bisa-
O
codilo SR-FA en acetona y diluir hasta 10 ml con el
O
mismo solvente.
H3C O O CH3 Solución estándar B - Diluir 1 ml de Solución
muestra A hasta 100 ml con acetona.
Solución estándar C - Diluir 5 ml de Solución
C22H19NO4 PM: 361,4 603-50-9 estándar B hasta 10 ml con acetona.
Definición - Bisacodilo es Diacetato de 4,4'-(2- Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
piridilmetilen)bisfenol. Debe contener no menos placa 10 l de las Soluciones muestra A y B y 10 l
de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de de las Soluciones estándar A, B y C. Dejar secar las
C22H19NO4, calculado sobre la sustancia seca y aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
debe cumplir con las siguientes especificaciones. que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
damente mitad de la longitud de la placa. Retirar la
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco placa de la cámara, marcar el frente del solvente,
o casi blanco. Soluble en cloroformo; moderada- dejar secar al aire, calentar entre 100 y 105 °C si
mente soluble en alcohol y metanol; poco soluble fuera necesario. Examinar la placa bajo luz ultra-
en éter; prácticamente insoluble en agua. violeta, a 254 nm: la mancha principal en el croma-
Sustancia de referencia - Bisacodilo SR-FA. tograma obtenida a partir de la Solución muestra A
no debe ser más intensa que la obtenida con la So-
CONSERVACIÓN lución estándar B (1,0 %) y solamente una de las
En envases de cierre perfecto. manchas secundarias debe ser más intensa que la
obtenida con la Solución estándar C (0,5 %).
ENSAYOS
Límite de metales pesados <590>
Precaución - Evitar la inhalación y el contacto Método II. No más de 0,001 %.
con los ojos, la piel y las mucosas.
VALORACIÓN
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En solución. Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Bi-
En una celda de 1,0 mm, determinado sobre una sacodilo, disolver en 70 ml de ácido acético glacial,
solución de cloroformo, previamente secado, agregar 3 gotas de p-naftolbenceína (SR) y titular
1 en 200. con ácido perclórico 0,1 N (SV). Realizar una
B - Absorción ultravioleta <470> determinación con un blanco y hacer las correccio-
Solvente: ácido clorhídrico 0,05 N. nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
Concentración: 20 µg por ml. ácido perclórico 0,1 N equivale a 36,14 mg de
Las absortividades a 263 nm, calculadas sobre la C22H19NO4.
sustancia seca, no deben diferir en más de 3,0 %.
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 131 y 135 °C.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - Xileno y metil etil cetona (50:50).
BLEOMICINA, Soluciones estándar - Transferir 5,0 ml de So-
lución madre de cobre a un matraz aforado de
SULFATO DE 100 ml, completar a volumen con Ácido nítrico
diluido y mezclar. Transferir 3,0; 9,0 y 15,0 ml,
O NH2 NH2 R respectivamente, de esta solución a tres matraces
O
H
N
NH2
aforados de 100 ml, completar a volumen el conte-
H
O
N
nido de cada matraz con Ácido nítrico diluido y
N N S
CH3
H
N
H
O
mezclar. Estas Soluciones estándar contienen 1,5;
O HO
H2N
H
O NH N
4,5 y 7,5 µg de cobre por ml, respectivamente.
CH3 O
HN
N
H
CH3 HO CH3 S Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
H
O
N de 75 mg de Sulfato de Bleomicina y disolver en
. x H2SO4
HO OH
O N
10,0 ml de Ácido nítrico diluido.
O H
OH A2: R= NH(CH2)3S (CH2)
+ Procedimiento - Determinar las absorbancias de las
OH
O
OH B2: R= NH(CH2)3NH C NH2 Soluciones estándar y la Solución muestra en la
OH
O NH línea de emisión del cobre a 324,8 nm, con un es-
O NH2 pectrofotómetro de absorción atómica (ver
440. Espectrofotometría de absorción y emisión
9041-93-4 atómica), equipado con una lámpara de cobre de
cátodo hueco y una llama de aire-acetileno, emple-
Definición - Sulfato de Bleomicina es el Sulfa- ando Ácido nítrico diluido como blanco. . Graficar
to de una mezcla de glicopéptidos citotóxicos bási- las absorbancias de las Soluciones estándar en
cos producidos mediante el crecimiento de Strepto- función de la concentración en µg por ml de cobre y
mices verticillus o producidos por otros medios. trazar la línea recta que mejor se ajuste a los puntos
Debe tener una potencia de no menos de 1,5 y no trazados. A partir del gráfico obtenido, determinar
más de 2,0 Unidades de Bleomicina por mg y debe la concentración C en µg de cobre por ml en la
cumplir con las siguientes especificaciones. Solución muestra. Calcular el porcentaje de cobre
Caracteres generales - Polvo amorfo blanco o en la porción de Sulfato de Bleomicina en ensayo.
blanco amarillento. Muy higroscópico. Muy solu- No debe contener más de 0,1 %.
ble en agua; poco soluble en etanol; prácticamente Contenido de bleomicinas
insoluble en acetona y éter. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Sustancia de referencia - Sulfato de Bleomici- para cromatografía de líquidos con un detector
na SR-FA. ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
CONSERVACIÓN
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Envases de cierre perfecto. Si la sustancia es porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
estéril, conservar entre 2 y 8 ºC. caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minu-
ENSAYOS to.
Fase móvil - Disolver 960 mg de
Identificación 1-pentanosulfonato de sodio en 1 litro de ácido
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. acético 0,08 N desaireado, agregar 1,86 g de edetato
B - Debe responder a los ensayos para Sulfa- disódico y ajustar a pH 4,3 con hidróxido de amo-
to <410>. nio. Filtrar y desgasificar. Emplear un gradiente
Determinación del pH <250> lineal de 10 a 40 % de metanol mezclado con esta
Entre 4,5 y 6,0, determinado sobre una solución solución con un tiempo de mezclado de gradiente
de aproximadamente 10 Unidades de Bleomicina de 60 minutos y dejar que la cromatografía proceda
por ml. con la mezcla final durante 20 minutos adicionales
o hasta que eluya la desmetilbleomicina A2.
Contenido de cobre Solución muestra - Disolver Sulfato de Bleomi-
Ácido nítrico diluido - Diluir 20 ml de ácido cina en agua desgasificada para obtener una solu-
nítrico a 2 litros con agua. ción de aproximadamente 2,5 Unidades de Bleomi-
Solución madre de cobre - Transferir 1,0 g de cina por ml. [NOTA: conservar esta solución en un
cobre a un matraz aforado de 1 litro, disolver en refrigerador hasta el momento de su uso].
20 ml de ácido nítrico, completar a volumen con Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Ácido nítrico diluido y mezclar. Conservar en un Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
recipiente de polietileno. Esta solución contiene respuestas de los picos según se indica en Procedi-
1,0 mg de cobre por ml.
miento: el orden de elución debe ser el siguiente, ROTULADO
ácido bleomicínico, bleomicina A2 (primer pico Cuando Sulfato de Bleomicina esté destinado a
principal), bleomicina A5, bleomicina B2 (segundo la preparación de formas farmacéuticas inyectables,
pico principal), bleomicina B4 y desmetilbleomicina
indicar en el rótulo que es estéril.
A2.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
10 l de la Solución muestra, registrar los cromato-
gramas hasta que eluya el pico correspondiente a
desmetilbleomicina A2 y medir las respuestas de
todos los picos. Calcular el contenido porcentual de
bleomicina A2, bleomicina B2 y bleomicina B4 en la
porción de Sulfato de Bleomicina en ensayo, por la
fórmula siguiente:
100rb/rt
en la cual rb es la respuesta del pico correspondiente
al componente de bleomicina considerado y rt es la
suma de las respuestas de todos los picos: debe
contener entre 55 y 70 % de bleomicina A2; entre
25 y 32 % de bleomicina B2; y no debe contener
más de 1 % de bleomicina B4; la suma de los por-
centajes de bleomicina A2 y bleomicina B2 no debe
ser menor de 90 %.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a una presión no mayor de
5 mm Hg, a 60 ºC durante 3 horas: no debe perder
más de 6,0 % de su peso.
Ensayos de esterilidad <370>
Cuando en el rótulo se indique que el Sulfato de
Bleomicina es estéril, debe cumplir con los requisi-
tos según se indica en Método de filtración por
membrana.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indique que el Sulfato de
Bleomicina es estéril, no debe contener más de
10,0 Unidades de Endotoxina por Unidad de Bleo-
micina.
VALORACIÓN
Preparación muestra - Pesar exactamente una
porción de Sulfato de Bleomicina, disolver en Solu-
ción reguladora Nº 16 y diluir cuantitativamente
con Solución reguladora Nº 16 para obtener una
solución de concentración adecuada.
Procedimiento - Proceder según se indica en
770. Valoración microbiológica de antibióticos,
empleando un volumen exactamente medido de la
Preparación muestra diluida cuantitativamente y en
etapas con Solución reguladora Nº 16 para obtener
una Dilución muestra de una concentración consi-
derada igual a la dosis media del estándar.
BÓRICO, ÁCIDO
H3BO3 PM: 61,8 10043-35-3
Definición - Ácido Bórico debe contener no
menos de 99,5 por ciento y no más de 100,5 por
ciento de H3BO3, calculado sobre la sustancia seca
y debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales - Polvo blanco cristalino,
escamas brillantes incoloras, untuosas al tacto o
cristales blancos. Fácilmente soluble en agua en
ebullición y glicerina; soluble en agua y alcohol.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Debe responder a los ensayos para Borato
<410>.
B - Disolver 3,3 g de Ácido Bórico en 80 ml de
agua a ebullición, enfriar y diluir a 100 ml con agua
libre de dióxido de carbono. A 10 ml de la solución
obtenida, agregar 0,1 ml de rojo de metilo (SR1): la
solución debe ser ácida.
Sustancias insolubles
Disolver 1 g de Ácido Bórico en 30 ml de agua:
la solución debe ser límpida.
Pérdida por secado <680>
Secar sobre gel de sílice durante 5 horas: no de-
be perder más de 0,5 % de su peso.
Límite de metales pesados <590>
Método I. Disolver 1 g de Ácido Bórico en
23 ml de agua y agregar 2 ml de ácido acético 1 N.
El límite es 20 ppm.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 2,0 g de Ácido
Bórico, disolver en 100 ml de una mezcla de agua y
glicerina (50:50), previamente neutralizada con
fenolftaleína (SR) y titular con hidróxido de so-
dio 1 N hasta coloración rosada. Agregar 50 ml de
glicerina, previamente neutralizada con fenolftaleí-
na (SR) y continuar la titulación hasta coloración
rosada. Realizar una determinación con un blanco
y hacer las correcciones necesarias (ver 780. Volu-
metría). Cada ml de hidróxido de sodio 1 N equi-
vale a 61,8 mg de H3BO3.
ROTULADO
Indicar en el rótulo “Sólo para uso externo”.
BROMAZEPAM Solución muestra - Disolver 50 mg de Broma-
zepam en Diluyente y diluir a 5 ml con el mismo
solvente.
H O Solución muestra diluida - Diluir 1 ml de la So-
N
lución muestra a 20 ml con Diluyente. Transferir
2 ml de esta solución a un matraz aforado de 50 ml
y completar a volumen con Diluyente.
Br N Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 5 µl de Solución muestra y 5 µl de Solución
muestra diluida. Desarrollar los cromatogramas
N hasta que el frente del solvente haya recorrido
aproximadamente tres cuartas partes de la longitud
de la placa. Secar la placa en una corriente de aire
durante 20 minutos y examinar bajo luz ultravioleta,
C14H10BrN3O PM: 316,2 1812-30-2 a 254 nm. A excepción de la mancha principal en
Definición - Bromazepam es 7-Bromo-1,3- el cromatograma obtenido a partir de la Solución
dihidro-5-(2-piridinil)-1H-1,4-benzodiazepin-2-ona. muestra, cualquier mancha no debe ser más intensa
Debe contener no menos de 99,0 por ciento y no que la mancha obtenida con la Solución muestra
más de 101,0 por ciento de C14H10BrN3O, calculado diluida (0,2 %).
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- VALORACIÓN
guientes especificaciones.
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Bromazepam, disolver en 20 ml de ácido acético
o amarillento. Moderadamente soluble en alcohol y glacial y agregar 50 ml de anhídrido acético. Titu-
cloruro de metileno; prácticamente insoluble en lar con ácido perclórico 0,1 N (SV) determinando el
agua. punto final potenciométricamente. Realizar una
Sustancias de referencia - Bromaze- determinación con un blanco y hacer las correccio-
pam SR-FA. nes necesarias (ver 780. Volumetría) Cada ml de
ácido perclórico 0,1 N equivale a 31,62 mg de
CONSERVACIÓN
C14H10BrN3O.
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
Pérdida por secado <680>
Secar a 80 ºC a una presión no mayor de
20 mm Hg durante 4 horas: no debe perder más de
0,2 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Sustancias relacionadas
[NOTA: preparar las soluciones inmediatamente
antes de su uso y realizar el ensayo evitando la luz
directa.]
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - Éter de petróleo, cloruro de meti-
leno, alcohol y trietilamina (70:20:5:5).
Diluyente - Cloruro de metileno y meta-
nol (9:1).
BUDESONIDA estándar A y B, registrar los cromatogramas durante
1,5 veces el tiempo de retención del pico de epíme-
ro B (el primero de los dos picos principales) y
O
OH
medir las respuestas de todos los picos. A excep-
O CH3 ción de los picos correspondientes a los epímeros A
H CH3
OH y B en el cromatograma obtenido a partir de la
O Solución muestra, la respuesta de ningún pico debe
CH3 H ser mayor que la suma de las respuestas de los picos
H
de los epímeros Ay B en el cromatograma obtenido
H H
con la Solución estándar B (0,5 %) y la suma de las
O respuestas de todos los picos secundarios picos no
debe ser mayor que la suma de las respuestas de los
C25H34O6 PM: 430,5 51333-22-3 picos de los epímeros A y B en el cromatograma
obtenido con la Solución estándar A (1,5 %). Igno-
Definición - Budesonida es (11,16)- rar cualquier pico con una respuesta menor a 0,1
16,17-[Butilidenbis(oxi)]-11,21-dihidroxipregna- veces la suma de las respuestas de los picos de los
1,4-dieno-3,20-diona. Debe contener no menos de epímeros A y B en el cromatograma obtenido con la
98,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de una Solución estándar B.
mezcla de los epímeros C22-S (epímero A) y C22-R
Límite de epímero A
(epímero B) de Budesonida (C25H34O6), calculado
Sistema cromatográfico, Fase móvil, Prepara-
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si-
ción estándar, Preparación muestra y Aptitud del
guientes especificaciones.
sistema - Proceder según se indica en Valoración.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
o casi blanco. Fácilmente soluble en cloruro de 20 l de la Preparación muestra y proceder según
metileno; moderadamente soluble en alcohol; se indica en Valoración. El contenido de epímero
prácticamente insoluble en agua. A (respuesta del segundo pico) debe estar compren-
Sustancia de referencia - Budesonida SR-FA. dido entre 40 y 51 % la suma de las respuestas de
los picos de los dos epímeros de Budesonida.
CONSERVACIÓN
Contenido de metanol
En envases de cierre perfecto. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
ENSAYOS para cromatografía de gases con un inyector de
espacio libre superior, un detector de ionización a la
Identificación llama y una columna capilar de sílice fundida de
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 30 m × 0,32 mm recubierta con fase estacionaria
Pureza cromatográfica constituida por polietilenglicol 20.000 de 1 µm de
[NOTA: proteger las soluciones de la luz duran- espesor. La temperatura de equilibrio debe ser
te todo el ensayo]. 80 ºC; el tiempo de equilibrio 30 minutos; la tempe-
Sistema cromatográfico, Fase móvil y Aptitud ratura de la línea de transferencia 85 ºC; el tiempo
del sistema - Proceder según se indica en Valora- de presurización 10 segundos y el tiempo de inyec-
ción. ción 10 segundos. Mantener el inyector y detector
Solución muestra - Proceder según se indica pa- aproximadamente a 250 y 300 ºC, respectivamente.
ra Preparación muestra en Valoración. Mantener la columna a 50 ºC durante 5 minutos y
Solución estándar A - Transferir 15,0 ml de la programar un aumento a razón de 30 ºC por minuto
Solución muestra a un matraz aforado de 100 ml y hasta 220 ºC, manteniéndo a esta temperatura du-
completar a volumen con Fase móvil. Transferir rante 2 minutos. Emplear nitrógeno como gas
1 ml de esta solución a un matraz aforado de 10 ml transportador a una presión de 55 Kpa.
y completar a volumen con Fase móvil. Solución estándar - Pesar exactamente alrede-
Solución estándar B - Transferir 5,0 ml de la dor de 500 mg de metanol, transferir a un matraz
Solución muestra a un matraz aforado de 100 ml y aforado de 100 ml, completar a volumen con dime-
completar a volumen con Fase móvil. Transferir tilacetamida y mezclar.
1 ml de esta solución a un matraz aforado de 10 ml Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
y completar a volumen con Fase móvil. de 2,0 g de Budesonida, disolver en dimetilacetami-
Procedimiento - Inyectar por separado en el da, diluir a 20 ml con el mismo solvente y mezclar.
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente Procedimiento - Inyectar por separado en el
20 µl) de la Solución muestra y las Soluciones cromatógrafo volúmenes iguales de la Solución
estándar y la Solución muestra, registrar los croma- retención del epímero B es aproximadamente 16
togramas y medir las respuestas de los picos princi- minutos. Calcular el porcentaje de C25H34O6 en la
pales. Calcular el contenido de metanol presente en porción de Budesonida en ensayo a partir de la
la porción de Budesonida en ensayo. No debe con- suma de las respuestas de los picos de los dos epí-
tener más de 0,1 %. meros.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 ºC hasta peso constante: no debe
perder más de 0,5 % de su peso.
VALORACIÓN
[NOTA: proteger las soluciones de la luz duran-
te todo el ensayo.]
Sistema Cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 240 nm y una columna de
12 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1,5 ml por minuto.
Solución reguladora de fosfato - A 900 ml de
una solución de fosfato monobásico de potasio al
0,4 %, agregar 100 ml de una solución de ácido
fosfórico al 0,25 %. Ajustar el pH, si fuera necesa-
rio, aproximadamente a 3,2 ± 0,1.
Fase móvil - Solución reguladora de fosfato y
acetonitrilo (68:32). Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
100. Cromatografía).
Preparación estándar - Pesar exactamente alre-
dedor de 25,0 mg de Budesonida SR-FA, transferir
a un matraz aforado de 50 ml, disolver en 15 ml de
acetonitrilo y completar a volumen con Solución
reguladora de fosfato.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 25,0 mg de Budesonida, transferir a un
matraz aforado de 50 ml, disolver en 15 ml de ace-
tonitrilo y completar a volumen con Solución regu-
ladora de fosfato. Dejar reposar durante al menos
15 minutos antes de su uso.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos corres-
pondientes al epímero A y al epímero B no debe ser
menor de 1,5; el número de platos teóricos determi-
nado a partir del pico del epímero B no debe ser
menor de 4.000; el factor de asimetría para el pico
del epímero B no debe ser mayor de 1,5; la desvia-
ción estándar relativa para inyecciones repetidas, de
la suma de las respuestas de los picos de los dos
epímeros, no debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. El tiempo de
BUPIVACAÍNA, 6 N y extraer con 10 ml de éter: la fase acuosa debe
responder a los ensayos para Cloruro <410>.
CLORHIDRATO DE Determinación del pH <250>
Entre 4,5 y 6,0, determinado sobre una solución
CH3 1 en 100.
H
N
N Determinación de agua <120>
. HCl . H2O Titulación volumétrica directa. Entre 4,0 y
O
H3C H3C 6,0 %.
Determinación del residuo de ignición <270>
C18H28N2O . HCl . H2O PM: 342,9 14252-80-3 No más de 0,1 %.
Anhidro PM: 324,9 18010-40-7 Límite de metales pesados <590>
Definición - Clorhidrato de Bupivacaína es Método II. No más de 0,001 %.
Monoclorhidrato de (±)-1-butil-2',6'- Solventes residuales
pipecoloxilidida monohidrato. Debe contener no Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
menos de 98,5 por ciento y no más de 101,5 por para cromatografía de gases equipado con un detec-
ciento de C18H28N2O . HCl, calculado sobre la sus- tor de ionización a la llama y una columna de
tancia anhidra y debe cumplir con las siguientes 2 m × 6 mm con fase estacionaria constituida por
especificaciones. copolímero de etilvinilbenceno y divinilbenceno
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, con un área superficial nominal de 500 a 600 m2 por
inodoro. Funde aproximadamente a 248 °C, con g y un diámetro de poro promedio de 0,0075 µm.
descomposición. Fácilmente soluble en agua y Mantener el inyector, la columna y el detector
alcohol; poco soluble en acetona y cloroformo. aproximadamente a 200, 175 y 280 °C, respectiva-
mente. Se debe emplear nitrógeno como gas trans-
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Bupi- portador con un caudal de aproximadamente 40 ml
vacaína SR-FA. por minuto.
Solución estándar de alcohol - Transferir
CONSERVACIÓN 2,0 ml de alcohol absoluto a un matraz aforado de
En envases inactínicos bien cerrados. 100 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Transferir 2,0 ml de esta solución a un matraz afo-
ENSAYOS
rado de 50 ml, completar a volumen con agua y
Identificación mezclar. La solución resultante contiene 0,08 % de
A - Absorción infrarroja <460>. En solución. alcohol.
Transferir 230 mg de Clorhidrato de Bupivacaína a Solución estándar de alcohol isopropílico -
una ampolla de decantación, disolver con 15 ml de Transferir 2,0 ml de alcohol isopropílico a un ma-
agua, agregar 1 ml de hidróxido de amonio 6 N y traz aforado de 1 litro, completar a volumen con
extraer con tres porciones de 30 ml de cloroformo. agua y mezclar. Transferir 2,0 ml de esta solución a
Evaporar el cloroformo a temperatura ambiente con un matraz aforado de 100 ml, completar a volumen
una corriente de nitrógeno y secar el residuo al con agua y mezclar. La solución resultante contie-
vacío. Agregar 2 ml de cloroformo al residuo y ne 0,004 % de alcohol isopropílico.
disolver: el espectro de absorción infrarroja de la Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
solución obtenida debe presentar máximos sólo a dedor de 1,0 g de Clorhidrato de Bupivacaína,
las mismas longitudes de onda que el de una prepa- transferir a un matraz aforado de 25 ml, completar a
ración similar de Clorhidrato de Bupivacaí- volumen con agua y mezclar.
na SR-FA, tratada del mismo modo. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
B - Absorción ultravioleta <470> volúmenes iguales (aproximadamente 5 µl) de la
Solvente: ácido clorhídrico 0,1 N. Preparación muestra, la Solución estándar de alco-
Concentración: 500 µg por ml. hol y la Solución estándar de alcohol isopropílico.
Las absortividades a 271 nm, calculadas sobre la Registrar los cromatogramas y medir las respuestas
sustancia anhidra, no debe diferir en más de 3,0 %. del pico de alcohol y del pico de alcohol isopropíli-
C - Transferir 50 mg de Clorhidrato de Bupiva- co en cada cromatograma. Determinar el porcentaje
caína a una ampolla de decantación, disolver con de alcohol por la fórmula siguiente:
10 ml de agua, alcalinizar con hidróxido de amonio
2(rM/rE)
y determinar el porcentaje de alcohol isopropílico, sidad de la mancha principal obtenida a partir de la
por la fórmula siguiente: Solución estándar diluida (2,0 %).
0,1(rM/rE)
VALORACIÓN
en las cuales rM y rE son las respuestas de los picos
Pesar exactamente alrededor de 600 mg de
de las respectivas sustancias en la Preparación Clorhidrato de Bupivacaína, transferir a un erlen-
muestra, la Solución estándar de alcohol y en la meyer de 250 ml y disolver en 20 ml de ácido acéti-
Solución estándar de alcohol isopropílico, respecti-
co glacial. Agregar 10 ml de acetato mercúri-
vamente. La suma del contenido de alcohol y de
co (SR), 3 gotas de cristal violeta (SR) y titular con
alcohol isopropílico no debe ser mayor de 2 %.
ácido perclórico 0,1 N (SV) hasta punto final de
Pureza cromatográfica color verde. Realizar una determinación con un
Fase estacionaria - Emplear una placa para blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- Volumetría). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- equivale a 32,49 mg de C18H28N2O . HCl.
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - n-hexano e isopropilamina (97:3).
Diluyente - Cloroformo e isopropilamina
(99:1).
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
tamente pesada de Clorhidrato de Bupivacaí-
na SR-FA en Diluyente para obtener una solución
de aproximadamente 20,0 mg por ml.
Solución estándar diluida - Diluir una porción
de Solución estándar cuantitativamente en Diluyen-
te hasta obtener una Solución estándar diluida de
aproximadamente 100 µg por ml.
Solución muestra - Disolver una cantidad apro-
piada de Clorhidrato de Bupivacaína en Diluyente
para obtener una solución de aproximadamente
20,0 mg por ml.
Revelador - Ácido sulfúrico 7 N.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 10 µl de la Solución muestra, 10 µl de la
Solución estándar y 10 µl de la Solución estándar
diluida. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y secar con
aire caliente. Colocar la placa en una cámara cerra-
da que contenga 1 g de iodo distribuido en una capa
fina y dejar en reposo durante aproximadamente
5 minutos. Retirar la placa de la cámara y pulveri-
zarla con Revelador. Examinar el cromatograma: el
valor de Rf de la mancha principal en el cromato-
grama obtenido a partir de la Solución muestra se
debe corresponder con el obtenido con la Solución
estándar. A excepción de la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra, ninguna mancha debe ser mayor en tama-
ño e intensidad a la mancha principal obtenida con
la Solución estándar diluida (0,5 %). La suma de
todas las manchas obtenidas a partir de la Solución
muestra no debe ser mayor a cuatro veces la inten-
BUSULFANO Método V.
Solvente: dimetilsulfóxido.
O O
VALORACIÓN
S O CH3 Pesar exactamente alrededor de 80 mg de Busul-
H3C O S fano, transferir a un erlenmeyer de 250 ml, disolver
O O en aproximadamente 30 ml de agua y agitar por
rotación. Agregar fenolftaleína (SR) y neutralizar
con hidróxido de sodio 0,05 N. Conectar el erlen-
C6H14O6S2 PM: 246,3 55-98-1 meyer a un refrigerante y calentar a ebullición sua-
Definición - Busulfano es Dimetanosulfonato ve durante no menos de 30 minutos, agregando
de 1,4-butanodiol. Debe contener no menos de agua ocasionalmente para mantener el volumen.
98,0 por ciento y no más de 100,5 por ciento de Enfriar hasta temperatura ambiente, agregar fenolf-
C6H14O6S2, calculado sobre la sustancia seca y debe taleína (SR) y titular con hidróxido de sodio
cumplir con las siguientes especificaciones. 0,05 N (SV). Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco.
Volumetría). Cada ml de hidróxido de sodio 0,05 N
Moderadamente soluble en acetona; poco soluble en
equivale a 6,158 mg de C6H14O6S2.
alcohol; muy poco soluble en agua.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Precaución - Evitar la inhalación y el contacto
con los ojos, la piel y las mucosas.
Identificación
A - Fundir aproximadamente 100 mg de Busul-
fano con 100 mg de nitrato de potasio y 250 mg de
hidróxido de potasio. Enfriar, disolver el residuo en
agua, acidificar con ácido clorhídrico 3 N y agregar
unas gotas de cloruro de bario (SR): debe presentar
un precipitado blanco.
B - A 100 mg de Busulfano agregar 10 ml de
agua y 5 ml de hidróxido de sodio 1 N. Calentar
hasta obtener una solución transparente: se debe
percibir el olor característico de ácido metanosulfó-
nico.
C - Enfriar la solución obtenida en el ensayo de
Identificación B y separar en dos porciones iguales.
A una porción agregar 1 gota de permanganato de
potasio (SR): el color púrpura debe virar al violeta,
luego al azul y finalmente al verde esmeralda.
Acidificar la segunda porción de la solución con
ácido sulfúrico 2 N y agregar 1 gota de permanga-
nato de potasio (SR): no debe desaparecer el color
del permanganato.
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 115 y 118 °C.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a 60 ºC hasta peso constante: no
debe perder más de 2,0 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
BUTILHIDROXIANISOL Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
OH cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
CH3 grafía, de 0,25 mm de espesor.
H3CO Fase móvil - Cloruro de metileno.
H3C CH3 Solución estándar A - Disolver 25 mg de Butil-
hidroxianisol SR-FA en cloruro de metileno y diluir
C11H16O2 PM: 180,3 25013-16-5 a 10 ml con el mismo solvente.
Definición - Butilhidroxianisol es Solución estándar B - Diluir 1 ml de Solución
2-(1,1-Dimetiletil)-4-metoxifenol. Debe contener estándar A a 20 ml con cloruro de metileno.
no más de 10 por ciento de C11H16O2 y debe cum- Solución estándar C - Transferir 50 mg de
plir con las siguientes especificaciones. hidroquinona a un matraz aforado de 100 ml, disol-
ver en 5 ml de alcohol y completar a volumen con
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco,
cloruro de metileno. Diluir 1 ml de esta solución a
amarillento o ligeramente rosado. Se disuelve en
10 ml con cloruro de metileno.
soluciones diluidas de hidróxidos alcalinos. Muy
Solución muestra A - Disolver 250 mg de Bu-
soluble en cloruro de metileno; fácilmente soluble
tilhidroxianisol en cloruro de metileno y diluir a
en alcohol y aceites vegetales; prácticamente inso-
10 ml con el mismo solvente.
luble en agua.
Solución muestra B - Diluir 1 ml de Solución
Sustancia de referencia - Butilhidroxiani- muestra A a 10 ml con cloruro de metileno.
sol SR-FA. Revelador - Agua, cloruro férrico al 10,5 % y
CONSERVACIÓN ferricianuro de potasio al 5% (70:20:10).
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
En envases inactínicos bien cerrados. placa 5 µl de las Soluciones estándar A, B y C, y
ENSAYOS 5 µl de las Soluciones muestra A y B. Dejar secar
las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas
Identificación hasta que el frente del solvente haya recorrido
A - Examinar los cromatogramas obtenidos en aproximadamente 10 cm de la longitud de la placa.
Sustancias relacionadas. La mancha principal en el Secar la placa bajo una corriente de aire y pulveri-
comatograma obtenido a partir de la Solución mues- zar sobre la placa con Revelador: cualquier mancha
tra B se debe corresponder en color, tamaño y valor azul violeta con un valor de Rf de aproximadamente
de Rf a la obtenida con la Solución estándar A. 0,35 (correspondiente a
B - Disolver 2,5 g de Butilhidroxianisol en al- 3-(1,1-dimetiletil)-4-metoxi-fenol) en el cromato-
cohol y diluir a 25 ml con el mismo solvente. A grama obtenido a partir de la Solución muestra A,
0,5 ml de esta solución agregar 10 ml de una solu- no debe ser más intensa que la mancha principal
ción de 1 mg de aminopirazolona por ml de Solu- obtenida con la Solución estándar A (10 %); cual-
ción reguladora alcalina de borato pH 9,0 (ver quier mancha correspondiente a hidroquinona no
Soluciones reguladoras en Reactivos y Soluciones). debe ser más intensa que la mancha principal obte-
Agregar 1 ml de una solución de ferricianuro de nida con la Solución estándar C (0,2 %); y cual-
potasio al 5 % y mezclar. Agregar 10 ml de cloruro quier mancha, excepto la mancha principal y las
de metileno, agitar vigorosamente y dejar separar correspondientes a 3-(1,1-dimetiletil)-4-metoxifenol
las fases: la fase orgánica debe ser de color rojo. e hidroquinona, no debe ser más intensa que la
C - Disolver 10 mg de Butilhidroxianisol en mancha principal obtenida con la Solución estándar
2 ml de alcohol, agregar 1 ml de una solución de B (0,5 %).
propionato de testosterona al 0,1 % en alcohol y
2 ml de hidróxido de sodio diluido. Calentar en un
baño de agua a 80 °C durante 10 minutos y dejar
enfriar: se debe desarrollar color rojo.
Límite de metales pesados <590>
Método VI. Preparar la Solución estándar em-
pleando 1 ml de Solución estándar de plomo
(10 ppm). El límite es 10 ppm.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
BUTILHIDROXITOLUENO Solución muestra - Disolver 200 mg de Butil-
hidroxitolueno en metanol y diluir a 10 ml con el
H3C CH3 mismo solvente.
H3C Solución estándar - Diluir 1 ml de la Solución
OH muestra a 200 ml con metanol.
Revelador - Agua, cloruro férrico al 10,5 % y
CH3 ferricianuro de potasio al 5% (70:20:10).
H3C
CH3
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
H3C
placa 10 µl de la Solución estándar y 10 µl de la
C15H24O PM: 220,4 128-37-0 Solución muestra. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
Definición - Butilhidroxitolueno es del solvente haya recorrido aproximadamente
2,6-bis(1,1-Dimetiletil)-4-metoxifenol y debe cum- 10 cm de la longitud de la placa. Secar la placa
plir con las siguientes especificaciones. bajo una corriente de aire y pulverizar sobre la
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, placa con Revelador: cualquier mancha en el cro-
o blanco amarillento. Muy soluble en acetona; matograma obtenido a partir de la Solución mues-
fácilmente soluble en alcohol y aceites vegetales; tra, a excepción de la mancha principal, no debe ser
prácticamente insoluble en agua. más intensa que la mancha obtenida con la Solución
estándar (0,5 %).
Sustancia de referencia - Butilhidroxitolue-
no SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Disolver 500 mg de Butilhidroxitolueno en
alcohol absoluto y diluir a 100 ml con el mismo
solvente. Diluir 1 ml de esta solución a 100 ml con
alcohol absoluto y examinar entre 230 y 300 nm
(ver 470. Espectrofotometría ultravioleta y visible):
esta solución debe presentar un máximo de absor-
ción a 278 nm y el coeficiente de extinción especí-
fico debe estar comprendido entre 80 y 90 en el
máximo de absorción.
C - Disolver 10 mg de Butilhidroxitolueno en
2 ml de alcohol, agregar 1 ml de una solución de
propionato de testosterona al 0,1 % en alcohol y
2 ml de hidróxido de sodio diluido. Calentar en un
baño de agua a 80 °C durante 10 minutos y dejar
enfriar: se debe desarrollar color azul.
Determinación de la temperatura de solidifi-
cación <180>
Debe estar comprendida entre 69 y 70 °C.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Cloruro de metileno.
BUTILPARABENO Solución muestra B - Transferir 1 ml de Solu-
ción muestra A a un matraz aforado de 10 ml, com-
O pletar a volumen con acetona y mezclar.
Solución estándar A - Transferir 0,5 ml de So-
O CH3
lución muestra A a un matraz aforado de 100 ml,
HO completar a volumen con acetona y mezclar.
Solución estándar B - Pesar exactamente alre-
C11H14O3 PM: 194,2 94-26-8
dedor de 10 mg de Butilparabeno SR-FA, transferir
Definición - Butilparabeno es el Éster butílico a un matraz aforado de 10 ml, completar a volumen
del ácido 4-hidroxibenzoico. Debe contener no con acetona y mezclar.
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por Solución estándar C - Pesar exactamente alre-
ciento de C11H14O3 y debe cumplir con las siguien- dedor de 10 mg de Propilparabeno, transferir a un
tes especificaciones. matraz aforado de 10 ml, agregar 1 ml de Solución
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco muestra A, completar a volumen con acetona y
o cristales incoloros, pequeños. Fácilmente soluble mezclar.
en acetona, alcohol, éter y propilenglicol; muy poco Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
soluble en agua y glicerina. placa 2 µl de las Soluciones muestra A y B, y 2 µl
de las Soluciones estándar A, B y C. Dejar secar las
Sustancia de referencia - Butilparabe- aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
no SR-FA. que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
CONSERVACIÓN damente tres cuartas partes de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el fren-
En envases bien cerrados. te del solvente y dejar secar. Examinar bajo luz
ENSAYOS ultravioleta a 254 nm. En el cromatograma obteni-
do con la Solución muestra A, cualquier mancha
Identificación secundaria no debe ser mayor en tamaño e intensi-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. dad a la mancha principal obtenida con la Solución
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en estándar A (0,5 %). El ensayo solo es válido si el
Pureza Cromatográfica. La mancha principal en el cromatograma obtenido con la Solución estándar C
cromatograma obtenido a partir de la Solución presenta dos manchas claramente separadas.
muestra B debe ser similar en tamaño y valor de Rf
a la mancha principal obtenida con la Solución Impurezas orgánicas volátiles <520>
estándar B. Método II.
Color de la solución VALORACIÓN
Proceder según se indica en Color de la solu- Pesar exactamente alrededor de 1 g de Butilpa-
ción en Metilparabeno. rabeno, transferir a un recipiente adecuado, agregar
Acidez 20,0 ml de hidróxido de sodio 1 N (SV) y calentar a
Proceder según se indica en Acidez en Metilpa- 70 °C durante 1 hora. Enfriar rápidamente en un
rabeno. baño de hielo. Titular a temperatura ambiente el
exceso de hidróxido de sodio con ácido sulfúrico
Determinación del punto de fusión <260> 1 N (SV), continuando la titulación hasta el segun-
Entre 68 y 71 ºC. do punto de inflexión y determinar el punto final
Determinación del residuo de ignición <270> potenciométricamente. Realizar una determinación
No más de 0,1 %. con un blanco y hacer las correcciones necesarias
(ver Titulación residual en 780. Volumetría). Cada
Pureza cromatográfica
ml de hidróxido de sodio 1 N equivale a 194,2 mg
Fase estacionaria - Emplear una placa para
de C11H14O3.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía), recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - Metanol, agua y ácido acético gla-
cial (70:30:1).
Solución muestra A - Preparar una solución de
Butilparabeno en acetona que contenga 10 mg
por ml.
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
CAFEÍNA de espesor.
Fase móvil - Cloroformo, acetona y amoníaco
O CH3
concentrado (40:30:30).
H3C N Diluyente - Cloroformo y metanol (6:4).
N
Solución muestra - Disolver 200 mg de Cafeína
N en Diluyente y diluir a 10 ml con el mismo solven-
O N
te.
CH3 Solución estándar - Diluir 0,5 ml de la Solución
muestra a 100 ml con Diluyente.
C8H10N4O2 PM: 194,2 58-08-2 Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Monohidrato PM: 212,2 5743-12-4 placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de la
Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y
Definición - Cafeína es desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
3,7-Dihidro-1,3,7-trimetil-1H-purina-2,6-diona. Es del solvente haya recorrido aproximadamente tres
anhidra o contiene una molécula de agua de hidra- cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
tación. Debe contener no menos de 98,5 por ciento placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
y no más de 101,5 por ciento de C8H10N4O2, calcu- dejar secar al aire. Examinar la placa bajo luz ul-
lado sobre la sustancia seca y debe cumplir con las travioleta a 254 nm: a excepción de la mancha prin-
siguientes especificaciones. cipal en el cromatograma obtenido a partir de la
Caracteres generales - Polvo blanco o agujas Solución muestra, ninguna mancha debe ser más
brillantes blancas. Inodoro. Sus soluciones son intensa que la mancha principal obtenida con la
neutras al tornasol. El hidrato es eflorescente al Solución estándar (0,5 %).
aire. Fácilmente soluble en cloroformo; modera- Determinación del residuo de ignición <270>
damente soluble en agua y alcohol; poco soluble en No más de 0,1 %.
éter.
Ensayo de sustancias fácilmente carboniza-
Presenta polimorfismo.
bles <350>
Sustancia de referencia - Cafeína SR-FA. Disolver 0,5 g de Cafeína en 5 ml de ácido
CONSERVACIÓN sulfúrico (SR): la solución no debe desarrollar más
color que la Solución de comparación D.
En envases bien cerrados.
Límite de metales pesados <590>
ENSAYOS Método II. No más de 0,001 %.
Identificación Pérdida por secado <680>
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. Secar a 80 ºC durante 4 horas: la forma anhidra
B - Disolver aproximadamente 5 mg de Cafeína no debe perder más de 0,5 % y la forma hidratada
en 1 ml de ácido clorhídrico en una cápsula de no más de 8,5 % de su peso.
porcelana, agregar 50 mg de clorato de potasio y
evaporar en un baño de vapor hasta sequedad. Impurezas orgánicas volátiles <520>
Invertir la cápsula sobre un recipiente que contenga Método I.
unas gotas de hidróxido de amonio 6 N: el residuo VALORACIÓN
debe desarrollar un color púrpura que desaparece
con el agregado de una solución de un álcali fijo. Pesar exactamente alrededor de 170 mg de Ca-
feína y disolver en 5 ml de ácido acético glacial,
Determinación del punto de fusión <260> calentando suavemente si fuera necesario. Dejar
Entre 235 y 239 ºC, luego de secar la muestra a enfriar, agregar 10 ml de anhídrido acético y 20 ml
80 ºC durante 4 horas. de tolueno y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV),
Otros alcaloides determinando el punto final potenciométricamente.
A 5 ml de una solución de Cafeína 1 en 50, Realizar una determinación con un blanco y hacer
agregar iodomercuriato de potasio (SR): no se debe las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
formar precipitado. Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
19,42 mg de C8H10N4O2.
Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para ROTULADO
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Indicar en el rótulo si es anhidra o monohidrato.
CALAMINA Plomo
A 1,0 g de Calamina agregar 15 ml de agua, agi-
Definición - Calamina es óxido de cinc con una tar, agregar 3 ml de ácido acético glacial y calentar
pequeña proporción de óxido férrico. Debe conte- en un baño de vapor hasta disolución. Filtrar y
ner una vez sometida a ignición, no menos de agregar 5 gotas de cromato de potasio (SR): no se
98,0 por ciento y no más de 100,5 por ciento de debe producir turbidez.
óxido de cinc (ZnO).
Límite de arsénico <540>
Caracteres generales - Polvo rosado. Inodoro. Método I. No más de 8 ppm.
Soluble casi completamente en ácidos minerales;
Pérdida por calcinación <670>
insoluble en agua.
Pesar exactamente alrededor de 2,0 g de Cala-
CONSERVACIÓN mina, calcinar a 500 °C hasta peso constante: no
En envases bien cerrados. debe perder más de 2,0 % de su peso.
VALORACIÓN
Proceder según se indica para Valoración en
Fosfato Dibásico de Calcio, empleando aproxima-
damente 150 mg de Fosfato Tribásico de Calcio
exactamente pesados, en lugar de Fosfato Dibásico
de Calcio. Cada ml de edetato disódico 0,05 M
equivale a 2,004 mg de Ca.
aproximadamente 50 ml de ácido sulfúrico 2 N,
CALCIO, GLUCONATO DE agregar 1,0 g de sulfato cérico, agitar por rotación
HO H HO H hasta disolver, completar a volumen con ácido
HO H H OH O
O sulfúrico 2 N y mezclar.
HO Ca OH
O Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
HO H H OH
H OH H OH
O placa 5 µl de la Solución muestra y 5 µl de la Solu-
ción estándar. Dejar secar las aplicaciones y des-
C12H22CaO14 PM: 430,4 299-28-5 arrollar los cromatogramas hasta que el frente del
solvente haya recorrido aproximadamente tres cuar-
Monohidrato PM: 448,4
tas partes de la longitud de la placa. Retirar la placa
Definición - Gluconato de Calcio es la Sal de la cámara y secar a 110 °C durante 20 minutos.
cálcica del ácido D-glucónico (2:1). Es anhidro o Dejar enfriar, pulverizar sobre la placa con Revela-
contiene una molécula de agua de hidratación. La dor y calentar la placa a 110 °C durante 10 minutos:
forma anhidra debe contener no menos de 98,0 por la mancha principal en el cromatograma obtenido a
ciento y no más de 102,0 por ciento de partir de la Solución muestra se debe corresponder
C12H22CaO14, calculado sobre la sustancia seca. La en color, tamaño y valor de Rf a la obtenida con la
forma monohidrato debe contener no menos de 98,5 Solución estándar.
por ciento y no más de 102,0 por ciento de
C12H22CaO14 . H2O. Gluconato de Calcio debe Sustancias reductoras
cumplir con las siguientes especificaciones. Transferir 1,0 g de Gluconato de Calcio a un er-
lenmeyer de 250 ml, disolver en 20 ml de agua
Caracteres generales - Polvo cristalino o caliente, enfriar y agregar 25 ml de citrato cúprico
gránulos blancos. Inodoro. Estable al aire. Sus alcalino (SR). Cubrir la boca del erlenmeyer, calen-
soluciones son neutras al tornasol. Fácilmente tar a ebullición suavemente durante 5 minutos,
soluble en agua a ebullición; moderada y lentamen- exactamente medidos, y enfriar rápidamente a tem-
te soluble en agua; insoluble en alcohol. peratura ambiente. Agregar 25 ml de ácido acético
Sustancia de referencia - Gluconato de Pota- 0,6 N, 10,0 ml de iodo 0,1 N (SV) y 10 ml de ácido
sio SR-FA. clorhídrico 3 N. Titular con tiosulfato de sodio
0,1 N (SV), agregando 3 ml de almidón (SR) cerca
CONSERVACIÓN del punto final. Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
En envases bien cerrados.
Volumetría). Cada ml de tiosulfato de sodio 0,1 N
equivale a 2,7 mg de sustancias reductoras (1,0 %
ENSAYOS
como glucosa).
Identificación
A - Una solución de Gluconato de Calcio Límite de arsénico <540>
Método I. Disolver 1,0 g de Gluconato de Cal-
1 en 50 debe responder a los ensayos para Cal-
cio <410>. cio en una mezcla de 10 ml de ácido clorhídrico y
20 ml de agua y diluir con agua a 55 ml: debe cum-
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica.
Fase estacionaria - Emplear una placa para plir con los requisitos del ensayo, excepto que debe
omitirse el agregado de 20 ml de ácido sulfúrico
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
7 N indicado en Procedimiento. El límite es 3 ppm.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía. Límite de cloruro y sulfato <560>
Fase móvil - Alcohol, agua, hidróxido de amo- Cloruro - Una porción de 1,0 g de Gluconato de
nio y acetato de etilo (50:30:10:10). Calcio no debe presentar más cloruro que el que
Solución muestra - Disolver una porción de corresponde a 1 ml de ácido clorhídrico 0,020 N
Gluconato de Calcio en agua para obtener una solu- (0,07 %).
ción de aproximadamente 10 mg por ml, calentar en Sulfato - Una porción de 2,0 g de Gluconato de
un baño de agua a 60 °C si fuera necesario. Calcio disuelta en agua a ebullición no debe presen-
Solución estándar - Disolver una cantidad de tar más sulfato que el que corresponde a 1 ml de
Gluconato de Potasio SR-FA en agua para obtener ácido sulfúrico 0,020 N (0,05 %).
una solución de aproximadamente 10 mg por ml,
Límite de metales pesados <590>
calentar en un baño de agua a 60 °C si fuera necesa-
Método II. No más de 0,002 %.
rio.
Revelador - Transferir 2,5 g de molibdato de Pérdida por secado <680>
amonio a un matraz aforado de 100 ml, disolver en
Secar a 105 °C durante 16 horas: la forma an-
hidra no debe perder más de 3,0 % de su peso; la
forma monohidrato no debe perder más de 2,0 % de
su peso.
Control higiénico de productos no obligato-
riamente estériles <90>
No debe contener más de 103 microorganismos
aerobios viables, determinados por recuento en
placa.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 800 mg de Glu-
conato de Calcio y disolver en 150 ml de agua que
contenga 2 ml de ácido clorhídrico 3 N. Mientras
se agita, preferentemente con un agitador magnéti-
co, agregar aproximadamente 30 ml de edetato
disódico 0,05 M (SV) desde una bureta de 50 ml.
Agregar 15 ml de hidróxido de sodio 1 N y 300 mg
de azul de hidroxinaftol y continuar la titulación
hasta punto final color azul. Realizar una determi-
nación con un blanco y hacer las correciones nece-
sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de edetato
disódico 0,05 M equivale a 21,52 mg de
C12H22CaO14.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si Gluconato de Calcio es
anhidro o monohidrato. La cantidad de Gluconato
de Calcio indicada en el rótulo de cualquier prepa-
ración que la contenga se debe expresar como Glu-
conato de Calcio anhidro. Indicar en el rótulo que
Gluconato de Calcio está destinado a la preparación
de formas farmacéuticas orales.
CALCIO, GLUCONATO DE Límite de fosfato
Solución muestra - A 10,0 g de Gluconato de
CALIDAD INYECTABLE Calcio Calidad Inyectable agregar 90 ml de agua
caliente (entre 70 y 80 °C) y llevar a ebullición,
HO H HO H
HO H H OH O agitando por rotación, durante 10 segundos para
O
HO Ca OH obtener una solución transparente. Diluir 1 ml de
O esta solución con agua para obtener 100 ml.
O HO H H OH
H OH H OH Solución estándar - Diluir 1,0 ml de una solu-
ción que contenga 0,716 mg de fosfato monobásico
C12H22CaO14 PM: 430,4 299-28-5
de potasio por ml con agua para obtener 100 ml. A
Monohidrato PM: 448,4 2,0 ml de esta solución agregar 98 ml de agua.
Definición - Gluconato de Calcio Calidad In- Procedimiento - Agregar 4 ml de ácido sulfo-
yectable es la Sal cálcica del ácido D-glucónico molíbdico (SR) a la Solución muestra y a la Solu-
(2:1). Es anhidro o contiene una molécula de agua ción estándar, respectivamente y mezclar. A ambas
de hidratación. La forma anhidra debe contener no soluciones agregar 0,1 ml de una mezcla reciente-
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por mente preparada de ácido clorhídrico 3 N y cloruro
ciento de C12H22CaO14, calculado sobre la sustancia estañoso concentrado (SR) (10:1) y mezclar. Des-
seca. La forma monohidrato debe contener no pués de 10 minutos el color que se observa en la
menos de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por Solución muestra no debe ser más intenso que el
ciento de C12H22CaO14 . H2O. Gluconato de Calcio obtenido con la Solución estándar (0,01 %).
Calidad Inyectable debe cumplir con las siguientes Límite de oxalato
especificaciones. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Caracteres generales - Polvo cristalino o para cromatografía de líquidos con un detector de
gránulos blancos. Inodoro. Estable al aire. Sus conductancia, una guardacolumna de 5 cm × 4 mm
soluciones son neutras al tornasol. Fácilmente con fase estacionaria de intercambio aniónico fuerte
soluble en agua a ebullición; moderada y lentamen- de 15 µm, una columna de 25 cm × 4 mm con la
te soluble en agua; insoluble en alcohol. misma fase estacionaria y una columna supresora
de aniones de tipo micromembrana, conectada en
Sustancia de referencia - Gluconato de Pota- serie con la guardacolumna y la columna. La co-
sio SR-FA. lumna supresora de aniones está provista de una
micromembrana que separa la Fase móvil de la
CONSERVACIÓN Solución regeneradora que fluye en contracorriente
En envases bien cerrados. respecto a la Fase móvil, con un caudal de aproxi-
madamente 7 ml por minuto. Equilibrar el sistema
ENSAYOS durante aproximadamente 15 minutos con Fase
móvil, empleando un caudal de aproximadamente
Identificación
2 ml por minuto.
A - Proceder según se indica en Identificación
Fase móvil - Preparar una solución de bicarbo-
A para Gluconato de Calcio.
nato de sodio y carbonato de sodio en agua de
B - Proceder según se indica en Identificación B
aproximadamente 0,0017 M y 0,0018 M, respecti-
para Gluconato de Calcio.
vamente. Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
Límite de magnesio y metales alcalinos necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
Disolver 1,0 g de Gluconato de Calcio Calidad tografía).
Inyectable en 100 ml de agua hirviendo, agregar Solución regeneradora - Solución de ácido
10 ml de cloruro de amonio (SR), 1 ml de hidróxido sulfúrico 0,0125 M en agua.
de amonio y 50 ml de oxalato de amonio (SR) ca- Diluyente - Diluir 1 ml de ácido clorhídrico en
lentado entre 70 y 80 °C. Dejar reposar durante agua para obtener un volumen de 1.200 ml.
4 horas, diluir con agua a 200 ml y filtrar. Evaporar Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
hasta sequedad 100 ml del filtrado y someter a tamente pesada de oxalato de sodio en Diluyente
ignición hasta peso constante. El peso del residuo para obtener una solución de aproximadamente
no debe ser mayor de 2 mg (0,4 %). 1,5 µg por ml.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Sustancias reductoras
de 500 mg de Gluconato de Calcio Calidad Inyecta-
Proceder según se indica en Sustancias reducto-
ras para Gluconato de Calcio. ble, transferir a un matraz aforado de 25 ml, disol-
ver en Diluyente, sonicar si fuera necesario, com- vapores. Agregar 0,5 ml de peróxido de hidrógeno
pletar a volumen con el mismo solvente y mezclar. al 30 % y calentar nuevamente hasta que se liberen
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía ) - vapores. Repetir este proceso hasta que el volumen
Cromatografiar la Solución estándar y registrar las se reduzca aproximadamente a 5 ml. Enfriar, agre-
respuestas de los picos según se indica en Procedi- gar 1,0 ml de ácido perclórico y calentar a ebulli-
miento: la eficiencia de la columna determinada a ción. [Precaución - No calentar por encima de
partir del pico de gluconato de calcio no debe ser 190 °C o evaporar hasta sequedad debido al peli-
menor de 2.500 platos teóricos, el factor de asimetr- gro de explosión]. Transferir esta solución a un
ía no debe ser mayor de 1,2; la desviación estándar matraz aforado de 25 ml, completar a volumen con
relativa para inyecciones repetidas no debe ser ácido clorhídrico 2 N y mezclar.
mayor de 2,0 %. Solución blanco - Proceder según se indica en
Procedimiento - Inyectar por separado en el Solución muestra pero empleando 0,34 g de cloruro
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente de calcio, cuyo contenido de hierro debe ser inferior
50 µl) de la Solución estándar y la Solución mues- a 5 ppm, en lugar de Gluconato de Calcio.
tra, registrar los cromatogramas y medir las res- Procedimiento - Determinar concomitantemen-
puestas de los picos principales. Calcular el por- te las absorbancias de las Soluciones estándar y la
centaje de oxalato en la porción de Gluconato de Solución muestra en la línea de emisión del hierro a
Calcio Calidad Inyectable en ensayo por la fórmula 248,3 nm, con un espectrofotómetro de absorción
siguiente: atómica (ver 440. Espectrofotometría de absorción
y emisión atómica) equipado con una lámpara de
(88,0/134,0)0,005C(rM/rE)
hierro de cátodo hueco y una llama de aire-
en la cual 88,0 y 134,0 son los pesos moleculares de acetileno, emplear la Solución blanco como blanco
oxalato y de oxalato de sodio, respectivamente, C es y hacer las correcciones por interferencia del deute-
la concentración en µg por ml de oxalato de sodio rio. Graficar las absorbancias de las Soluciones
en la Solución estándar, y rM y rE son las respuestas estándar en función de la concentración en µg por
de los picos de oxalato en la Solución muestra y la ml de hierro y calcular la ecuación recta que mejor
Solución estándar, respectivamente: no debe conte- ajuste. Determinar la concentración C en µg por ml
ner más de 0,01 %. de hierro en la Solución muestra. Calcular la con-
centración de hierro en ppm en la porción de Glu-
Límite de arsénico <540>
conato de Calcio Calidad Inyectable en ensayo,
Proceder según se indica en Límite de arsénico
multiplicando C por 25. El límite es 5 ppm.
para Gluconato de Calcio.
Límite de metales pesados <590>
Límite de cloruro y sulfato <560>
Método II. No más de 0,001 %.
Cloruro - Una porción de 1,0 g de Gluconato de
Calcio Calidad Inyectableno debe presentar más Pérdida por secado <680>
cloruro que el que corresponde a 0,07 ml de ácido Proceder según se indica en Perdida por secado
clorhídrico 0,020 N (0,005 %). para Gluconato de Calcio: la forma anhidra no debe
Sulfato - Una porción de 2,0 g de Gluconato de perder más de 3,0 % de su peso; la forma mono-
Calcio Calidad Inyectable disuelta en agua a ebulli- hidrato no debe perder más de 1,0 % de su peso.
ción no debe presentar más sulfato que el que co-
Control higiénico de productos no obligato-
rresponde a 0,1 ml de ácido sulfúrico 0,020 N
riamente estériles <90>
(0,005 %).
No debe contener más de 103 microorganismos
Límite de hierro <580> aerobios viables, determinados por recuento en
Soluciones estándar - Transferir 2,0, 4,0 y placa y debe cumplir con el ensayo para Escheri-
10,0 ml de Solución estándar de hierro (10 ppm) chia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococ-
(ver 580. Límite de hierro) a sendos matraces afo- cus aureus.
rados de 100 ml, cada uno conteniendo 1,37 g de
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
cloruro de calcio, cuyo contenido de hierro debe ser
No debe contener más de 167 Unidades de En-
inferior a 5 ppm, completar a volumen con ácido
dotoxina por gramo de Gluconato de Calcio Calidad
clorhídrico 2 N y mezclar. Estas soluciones contie-
Inyectable.
nen 0,2; 0,4 y 1,0 µg de hierro por ml cada una.
Solución muestra - Transferir 1,0 g de Glucona- Impurezas orgánicas volátiles <520>
to de Calcio Calidad Inyectable a un erlenmeyer de Método I.
cuarzo de 100 ml, agregar 20 ml de ácido nítrico
12 N y calentar a ebullición hasta que se liberen
VALORACIÓN
Proceder según se indica en Valoración para
Gluconato de Calcio.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si Gluconato de Calcio Cali-
dad Inyectable es anhidro o monohidrato. La canti-
dad de Gluconato de Calcio Calidad Inyectable
indicada en el rótulo de cualquier preparación que
la contenga se debe expresar como Gluconato de
Calcio anhidro. Indicar en el rótulo que Gluconato
de Calcio Calidad Inyectable está destinado a la
preparación de formas farmacéuticas inyectables.
mezclar y filtrar. Transferir 50 ml del filtrado a un
CALCIO, ÓXIDO DE recipiente apropiado, agregar 0,5 ml de ácido sulfú-
CaO PM: 56,1 1305-78-8 rico, evaporar hasta sequedad y calentar el residuo
Definición - Óxido de Calcio debe contener no obtenido a 600 °C hasta peso constante: el peso del
menos de 98,0 por ciento de CaO, luego de ser residuo no debe ser mayor de 15 mg.
incinerado hasta peso constante y debe cumplir con Determinación del residuo de ignición <270>
las siguientes especificaciones. No más de 10,0 %, determinado a 900 °C.
Caracteres generales - Masas blancas duras. VALORACIÓN
En contacto con el aire, absorbe lentamente dióxido
Pesar exactamente alrededor de 700 mg de Óxi-
de carbono y humedad. Muy poco soluble en agua
do de Calcio, previamente sometido a ignición a
en ebullición; prácticamente insoluble en alcohol.
900 °C hasta peso constante y enfriado en deseca-
CONSERVACIÓN dor, disolver en una mezcla de 50 ml de agua y 8 ml
En envases de cierre perfecto. de ácido clorhídrico diluido (1 en 3) con ayuda de
calor. Enfriar, diluir con agua a 250 ml y transferir
ENSAYOS 10 ml de esta solución a un erlenmeyer. Agregar
Identificación 50 ml de agua, 2 ml de hidróxido de potasio 8 M y
A - Humedecer una porción de Óxido de Calcio 100 mg de una mezcla de 500 mg de ácido 2-
con agua: se debe generar calor y se debe obtener hidroxi-1-(2’-hidroxi-4’-sulfo-1’naftilazo)-3-
un polvo blanco. Al polvo obtenido, agregar cinco naftoico y 50 g de sulfato de sodio anhidro, previa-
veces su masa en agua: la mezcla obtenida debe ser mente triturada hasta que sea homogénea, como
alcalina. indicador. Titular con edetato disódico 0,02 M
B - Disolver 1 g de Óxido de Calcio en 20 ml (SV) hasta que el color púrpura rojizo de la solu-
de agua con la ayuda de unas gotas de ácido acéti- ción vire al azul. Realizar una determinación con
co: la solución obtenida debe responder a los ensa- un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
yos para Calcio <410>. 780. Volumetría). Cada ml de edetato disódico
0,02 M (SV) equivale a 1,12 mg de CaO.
Sustancias insolubles en ácido
Desintegrar 5 g de Óxido de Calcio con una pe-
queña cantidad de agua, agregar 100 ml de agua,
agregar gota a gota ácido clorhídrico con agitación
hasta que la solución sea ácida. Agregar 1 ml de
ácido clorhídrico, calentar a ebullición esta solución
durante 5 minutos, enfriar y filtrar a través de un
embudo filtrante de vidrio con placa de porosidad 4.
Lavar el residuo obtenido con agua hirviendo hasta
que no se produzca turbidez frente al agregado de
nitrato de plata (SR), secar a 105 °C hasta peso
constante: el peso del residuo no debe ser mayor de
10,0 mg.
Carbonato
Desintegrar 1,0 g de Óxido de Calcio con una
pequeña cantidad de agua, agregar 50 ml de agua y
mezclar. Dejar reposar, eliminar el sobrenadante y
agregar un exceso de ácido clorhídrico diluido al
residuo obtenido: no se debe producir efervescen-
cia.
Magnesio y metales alcalinos
Disolver 1,0 g de Óxido de Calcio en 75 ml de
agua con la ayuda de unas gotas de ácido clorhídri-
co, agregar 1 ml de ácido clorhídrico y calentar a
ebullición durante 1 ó 2 minutos. Neutralizar con
amoníaco (SR), agregar en gotas un exceso de oxa-
lato de amonio (SR) y calentar en un baño de agua
durante 2 horas. Enfriar, diluir con agua a 200 ml,
Disolver 500 mg de Sacarato de Calcio en 10 ml
CALCIO, SACARATO DE de agua mediante el agregado de 2 ml de ácido
clorhídrico y calentar a ebullición durante 2 minu-
HO H H OH O tos. Enfriar la solución, agregar 15 ml de carbonato
2+ - de sodio (SR), dejar reposar durante 5 minutos y
Ca O . 4H2O
O- filtrar. Agregar 5 ml de filtrado a 2 ml de tartrato
O
cúprico alcalino (SR) y calentar a ebullición durante
H OH H OH un minuto: no se debe formar un precipitado rojo
C6H8CaO8.4H2O PM: 320,3 5793-89-5 inmediatamente.
Determinación del residuo de ignición <270> Pesar exactamente alrededor de 150 mg de Cap-
No más de 0,2 %. topril, transferir a un erlenmeyer y disolver en
30 ml de agua. Titular con iodo 0,05 M determi-
Límite de metales pesados <590> nando el punto final potenciométricamente
Método II. No más de 0,003 %. (ver 780. Volumetría). Emplear un electrodo com-
Sustancias relacionadas binado de platino. Cada ml de iodo 0,05 M equiva-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo le a 21,73 mg de C9H15NO3S.
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 220 nm y una columna de
12,5 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida
por octilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Metanol, agua y ácido fosfórico
(50:50:0,05). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajus-
tes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cromatografía).
Límite de cloruro y sulfato <560>
CARBAMAZEPINA Cloruro - Calentar a ebullición 1,0 g de Carba-
O NH2 mazepina con 20,0 ml de agua durante 10 minutos,
enfriar, ajustar nuevamente el volumen y filtrar: una
N
porción de 10,0 ml del filtrado no debe contener
más cloruro que el que corresponde a 0,10 ml de
ácido clorhídrico 0,020 N (0,014 %).
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,001 %.
C15H12N2O PM: 236,3 298-46-4 Pureza cromatográfica
Definición - Carbamazepina es 5H- Sistema cromatográfico, Fase móvil y Solución
Dibenzo[b,f]azepina-5-carboxamida. Debe conte- de resolución - Preparar según se indica en Valora-
ner no menos de 98,0 por ciento y no más de ción.
102,0 por ciento de C15H12N2O, calculado sobre la Solución estándar - Disolver cantidades exac-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes tamente pesadas de Carbamazepina SR-FA, 10,11-
especificaciones. dihidrocarbamazepina e iminoestilbeno en metanol
para obtener una solución de aproximadamente
Caracteres generales - Polvo blanco o casi
0,02 mg por ml de cada uno. Transferir 5,0 ml de
blanco. Soluble en acetona y alcohol; prácticamen-
esta solución a un matraz aforado de 100 ml, com-
te insoluble en agua.
pletar a volumen con una mezcla de metanol y agua
Presenta polimorfismo.
(50:50) y mezclar.
Sustancia de referencia - Carbamazepi- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
na SR-FA. de 100 mg de Carbamazepina, transferir a un ma-
CONSERVACIÓN traz aforado de 50 ml, disolver y completar a volu-
men con metanol. Transferir 25,0 ml de esta solu-
En envases de cierre perfecto. ción a un matraz aforado de 50 ml, agregar aproxi-
ENSAYOS madamente 20,0 ml de agua y agitar. Dejar que la
mezcla se enfríe a temperatura ambiente y comple-
Identificación tar a volumen con agua.
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
B - Punto de fusión <260>. Entre 189 y Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
193 °C. las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Acidez cedimiento: la resolución R entre 10,11-dihidrocar-
A 40,0 ml de agua agregar 2,0 g de Carbamaze- bamazepina y carbamazepina no debe ser menor de
pina, mezclar durante 15 minutos y filtrar. A una 1,70; la desviación estándar relativa para inyeccio-
alícuota de 10,0 ml de la solución filtrada, agregar nes repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
1 gota de fenolftaleína (SR) y titular con hidróxido Procedimiento - Inyectar por separado en el
de sodio 0,01 N (SV) desde una bureta de 10 ml. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Realizar una determinación con un blanco y hacer 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría). tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
No debe consumirse más de 1,0 ml de hidróxido de puestas de los picos. Calcular las cantidades en mg
sodio 0,010 N por cada gramo de Carbamazepina. de 10,11-dihidrocarbamazepina e iminoestilbeno en
la porción de Carbamazepina en ensayo por la
Alcalinidad fórmula siguiente:
A una alícuota de 10,0 ml de la solución prepa-
rada en Acidez, agregar 1 gota de rojo de meti- 100C(ri /rE)
lo (SR) y titular con ácido clorhídrico 0,01 N (SV) en la cual C es la concentración en mg por ml de
desde una bureta de 10 ml. Realizar una determina- 10,11-dihidrocarbamazepina o iminoestilbeno en la
ción con un blanco y hacer las correcciones necesa- Solución estándar y ri y rE son las respuestas de los
rias (ver 780. Volumetría). No debe consumirse picos de 10,11-dihidrocarbamazepina o iminoestil-
más de 1,0 ml de ácido clorhídrico 0,010 N por beno en la Solución muestra y la Solución estándar,
cada gramo de Carbamazepina. respectivamente. Calcular las cantidades en mg de
Determinación del residuo de ignición <270> todas las otras impurezas presentes en la porción de
No más de 0,1 %, determinado sobre 2,0 g. Carbamazepina en ensayo por la fórmula siguiente:
100C(ri /rE) Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
en la cual ri es la respuesta del pico de cualquier
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
otra impureza y rE es la respuesta del pico de car-
cedimiento: la resolución R entre los picos de
bamazepina obtenido en la Solución estándar: no
10,11-dihidrocarbamazepina y carbamazepina no
debe contener más de 0,2 % de cualquier impureza
debe ser menor de 1,70. Cromatografiar la Prepa-
individual y la suma de impurezas totales (incluidos
ración estándar y registrar las respuestas de los
10,11-dihidrocarbamazepina e iminoestilbeno) no
picos según se indica en Procedimiento: la desvia-
debe ser mayor de 0,5 %.
ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
Pérdida por secado <680> debe ser mayor de 2,0 %.
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder Procedimiento - Inyectar por separado en el
más de 0,5 % de su peso. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Impurezas orgánicas volátiles <520> 15 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
Método III. muestra, registrar los cromatogramas y medir las
Solvente: dimetilsulfóxido. respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C15H12N2O en la porción de Carbama-
VALORACIÓN zepina en ensayo.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por grupos nitrilo unidos químicamente a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 0,75 ml por mi-
nuto.
Fase móvil - Agua, metanol y tetrahidrofurano
(85:12:3), preparar 1 litro. Agregar 0,22 ml de
ácido fórmico, mezclar y agregar 0,5 ml de trietila-
mina. Mezclar. Filtrar y desgasificar. Hacer los
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cromatografía).
Diluyente - Metanol y agua (1:1).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Carbamazepina SR-FA en
metanol y diluir cuantitativamente con el mismo
solvente para obtener una solución de aproximada-
mente 0,5 mg por ml. Transferir 5 ml de esta solu-
ción a un matraz aforado de 50 ml y completar a
volumen con Diluyente.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 25 mg de Carbamazepina, transferir a un
matraz aforado de 50 ml, disolver y completar a
volumen con metanol. Transferir 5,0 ml de esta
solución a un matraz aforado de 50 ml, disolver y
completar a volumen con Diluyente.
Solución de resolución - Disolver en metanol
cantidades exactamente pesadas de Carbamazepi-
na SR-FA y 10,11-dihidrocarbamazepina y diluir
cuantitativamente y en etapas, si fuera necesario,
con metanol para obtener una solución de aproxi-
madamente 0,1 y 0,5 mg por ml, respectivamente.
Transferir 5,0 ml de esta solución a un matraz afo-
rado de 50 ml y completar a volumen con Diluyen-
te.
CARBIDOPA Límite de metildopa y 3-O-metilcarbidopa
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
O
ultravioleta ajustado a 282 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
OH por octilsilano químicamente unido a partículas
H3C NHNH2 H2O
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
HO debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Solución de fosfato - Disolver 14 g de fosfato
OH monobásico de potasio en 1 litro de agua y mezclar.
Fase móvil - Solución de fosfato y metanol
C10H14N2O4 . H2O PM: 244,2 38821-49-7 (98:2). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
Anhidra PM: 226,2 28860-95-9 necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
tografía).
Definición - Carbidopa es el Monohidrato del Solución estándar - Transferir una porción
ácido (-)-L--Hidrazino-3,4-dihidroxi-- exactamente pesada de Metilcarbidopa SR-FA a un
metilhidrocinámico. Debe contener no menos de matraz aforado de 10 ml, disolver en ácido clorhí-
98,5 por ciento y no más de 101,0 por ciento de drico 0,1 M, agregar 0,5 mg de Metildopa SR-FA y
C10H14N2O4, calculado sobre la sustancia seca y completar a volumen con el mismo solvente.
debe cumplir con las siguientes especificaciones. Solución de resolución - Pesar exactamente al-
Caracteres generales - Polvo blanco o casi rededor de 5 mg de Carbidopa SR-FA y 5 mg de
blanco. Inodoro. Fácilmente soluble en ácido Metildopa SR-FA, transferir a un matraz aforado de
clorhídrico 3 N; poco soluble en agua y metanol; 10 ml, disolver en ácido clorhídrico 0,1 M y com-
prácticamente insoluble en alcohol, acetona, cloro- pletar a volumen con el mismo solvente.
formo y éter. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 100 mg de Carbidopa, transferir a un matraz
Sustancias de referencia - Carbidopa SR-FA. aforado de 10 ml, disolver con ácido clorhídrico
Metildopa SR-FA. 3-O-Metilcarbidopa SR-FA. 0,1 M, completar a volumen con el mismo solvente
y mezclar.
CONSERVACIÓN Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
En envases inactínicos bien cerrados. Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
ENSAYOS cedimiento: la resolución R entre los picos de metil-
Identificación dopa y carbidopa no debe ser menor de 4,0.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Procedimiento - Inyectar por separado en el
B - Pesar 50 mg de Carbidopa, transferir a un cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
matraz de 100 ml, disolver y completar a volumen 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
con una solución de 8,5 g de ácido clorhídrico por tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
litro en metanol. Transferir 10 ml de esta solución puestas de los picos principales. La respuesta para
a un matraz aforado de 100 ml y completar a volu- cualquier impureza individual obtenida a partir del
men con el mismo solvente. Examinar entre 230 y cromatograma de la Solución muestra no debe ser
350 nm. (ver 470. Espectrofotometría ultravioleta y mayor a la respuesta del pico principal obtenida con
visible): la solución debe presentar un máximo de la Solución estándar (0,5 %).
absorción a 283 nm y la absorbancia específica Límite de metales pesados <590>
debe estar comprendida entre 135 y 150 en el Método II. No más de 0,002 %.
máximo de absorción.
Pérdida por secado <680>
Determinación de la rotación óptica <170> Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Carbi-
Rotación específica: Entre -22,5° y -26,5°, cal- dopa, calentar en una estufa al vacío a 105 °C y a
culada como la sustancia seca. una presión no mayor a 5 mm Hg, hasta peso cons-
Solución muestra: 10 mg por ml, en una solu- tante. Enfriar y pesar: debe perder entre 6,9 y 7,9 %
ción de cloruro de aluminio 2 en 3 previamente de su peso.
filtrada y luego ajustada a pH 1,5 con hidróxido de
Impurezas orgánicas volátiles <520>
sodio 0,25 N.
Método II.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 150 mg de Car-
bidopa y disolver en 75 ml de ácido acético glacial,
calentando suavemente si fuera necesario. Dejar
enfriar y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV),
determinando el punto final potenciométricamente.
Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
22,62 mg de C10H14N2O4.
CARBÓN ACTIVADO Componentes no carbonizables
Calentar a ebullición 250 mg de Carbón Activa-
Definición - Carbón Activado se obtiene a par- do con 10 ml de hidróxido de sodio 1 N durante
tir de materia vegetal mediante procesos de carbo- 5 segundos y filtrar: el filtrado debe ser incoloro.
nización destinados a conferir un poder de adsor-
Límite de cloruro y sulfato<560>
ción elevado.
Cloruro - Una porción de 10 ml del filtrado ob-
Caracteres generales - Polvo fino negro y li- tenido en el ensayo de Reacción no debe presentar
bre de grumos. Inodoro más cloruro que el que contiene 1,5 ml de ácido
clorhídrico 0,020 N (0,2 %).
CONSERVACIÓN Sulfato - Una porción de 10 ml del filtrado ob-
En envases bien cerrados. tenido en el ensayo de Reacción no debe presentar
más sulfato que el que contiene 1,0 ml de ácido
ENSAYOS sulfúrico 0,020 N (0,2 %).
Reacción Límite de metales pesados <590>
Calentar a ebullición 3,0 g de Carbón Activado Calentar a ebullición 1,0 g de Carbón Activado
con 60 ml de agua durante 5 minutos. Dejar enfriar, con una mezcla de 20 ml de ácido clorhídrico 3 N y
restaurar el volumen original agregando agua y 5 ml de bromo (SR) durante 5 minutos, filtrar y
filtrar: el filtrado debe ser incoloro y neutro frente lavar el carbón y el filtro con 50 ml de agua hir-
al tornasol. [NOTA: retener una porción del filtra- viendo. Evaporar hasta sequedad el filtrado y los
do para el ensayo de Límite de cloruro y sulfato]. lavados y agregar al residuo 1 ml de ácido clorhí-
drico 1 N, 20 ml de agua y 5 ml de ácido sulfuroso.
Determinación del residuo de ignición <270>
Calentar a ebullición la solución hasta expulsar todo
No más de 4,0 %, determinado sobre 0,50 g.
el dióxido de azufre, filtrar si fuera necesario y
Sustancias solubles en ácido diluir con agua a 50 ml. A 20 ml de esta solución
Calentar a ebullición 1,0 g de Carbón Activado agregar agua hasta obtener 25 ml: el límite es
con una mezcla de 20 ml de agua y 5 ml de ácido 0,005 %.
clorhídrico durante 5 minutos, filtrar en un crisol de
Pérdida por secado <680>
porcelana previamente pesado y lavar el residuo
Secar a 120 °C durante 4 horas: no debe perder
con 10 ml de agua caliente. Al filtrado y los lava-
más de 15,0 % de su peso.
dos combinados agregar 1 ml de ácido sulfúrico,
evaporar hasta sequedad y someter a ignición hasta Control higiénico de productos no obligato-
peso constante: el residuo no debe pesar más de riamente estériles <90>
35 mg (3,5 %). Debe cumplir con los requisitos del ensayo para
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Sulfuro
A 500 mg de Carbón Activado agregar 20 ml de PODER ADSORBENTE
agua y 5 ml de ácido clorhídrico y calentar a ebulli- Pesar exactamente alrededor de 300 mg de
ción suave: los vapores no deben oscurecer un papel Carbón Activado, transferir a un matraz aforado de
humedecido con acetato de plomo (SR). 100 ml con tapón esmerilado y agregar 25 ml de
Compuestos de cianógeno una solución recién preparada de fenazona al 1 %.
A 5,0 g de Carbón Activado agregar 50 ml de Agitar durante 15 minutos, filtrar y descartar los
agua y 2 g de ácido tartárico, transferir a un balón primeros 5 ml del filtrado. Agregar 1,0 g de bromu-
conectado a un refrigerante provisto de uniones ro de potasio y 20 ml de ácido clorhídrico diluido y
esmeriladas cuyo extremo se sumerge debajo de la titular con bromato de potasio 0,0167 M, emplean-
superficie de una mezcla de 2 ml de hidróxido de do 0,1 ml de rojo de metilo (SR) como indicador,
sodio 1 N y 10 ml de agua, contenidos en un matraz hasta que el color rojo desaparezca [NOTA: cerca
colocado en un baño de hielo. Calentar a ebullición del punto final agregar 1 gota cada 15 segundos].
la mezcla en el balón y destilar aproximadamente Realizar una determinación con un blanco, emple-
25 ml. Diluir el destilado con agua a 50 ml y mez- ando 10 ml de la solución de fenazona al 1 %.
clar. A 25 ml del destilado diluido agregar 12 gotas Calcular la cantidad de fenazona adsorbida por cada
de sulfato ferroso (SR), calentar la mezcla hasta 100 g de Carbón Activado, por la fórmula siguiente:
casi ebullición, enfriar y agregar 1 ml de ácido 2,353(a-b)/m
clorhídrico: no se debe producir color azul.
en la cual a es el número de ml de bromato de pota-
sio 0,0167 M empleados en la titulación del blanco,
b es el número de ml de bromato de potasio
0,0167 M empleados en la titulación del Carbón
Activado y m es la cantidad en gramos de Carbón
Activado empleado en la titulación. No menos de
40 g de fenazona debe ser adsorbida por 100 g de
Carbón Activado, calculados con respecto a la sus-
tancia seca.
Cada ml de ácido clorhídrico 1 N equivale a 52,99 mg
CARBONATO SÓDICO de Na2CO3.
Na2CO3 PM: 106,0 497-19-8
ROTULADO
Monohidrato PM: 124,0 5968-11-6
Indicar en el rótulo si Carbonato Sódico es anhidro
Definición - Carbonato Sódico es anhidro o con- o hidratado.
tiene una molécula de agua de hidratación. Debe con-
tener no menos de 99,5 por ciento y no más de 100,5
por ciento de Na2CO3, calculado sobre la sustancia
seca y debe cumplir con las siguientes especificacio-
nes.
Caracteres generales - Polvo cristalino o granu-
lar o cristales incoloros o blancos. Estable al aire en
condiciones normales. Al exponer al aire seco a una
temperatura mayor de 50 °C, la sal hidratada fluoresce
y a 100 °C, se torna anhidra. Fácilmente soluble en
agua; muy soluble en agua a ebullición.
CONSERVACIÓN
En envases bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Debe responder a los ensayos para Sodio
<410>.
B - Debe responder a los ensayos para Carbonato
<410>.
Pérdida por secado <680>
Pesar exactamente alrededor de 2 g de Carbonato
Sódico, secar a 300 C durante 4 horas: la forma an-
hidra no debe perder más de 0,5 % de su peso y la
forma hidratada entre 12,0 % y 15,0 %.
Límite de metales pesados <590>
Disolver 2,0 g de Carbonato Sódico en 10 ml de
agua, agregar 1 gota de fenolftaleína (SR) y neutrali-
zar agregando ácido clorhídrico gota a gota. Calentar
la solución obtenida a ebullición y neutralizar nueva-
mente agregando ácido clorhídrico gota a gota. En-
friar y diluir con agua a 25 ml. El límite es 0,001 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
VALORACIÓN
Transferir la porción de Carbonato Sódico seco
obtenido en Pérdida por secado a un erlenmeyer con
la ayuda de 50 ml de agua, agregar 4 gotas de rojo de
metilo (SR). Titular con ácido clorhídrico 1 N (SV),
agregando el ácido lentamente y con agitación cons-
tante, hasta que la solución se torne ligeramente rosa-
da. Calentar la solución obtenida a ebullición, enfriar
y continuar la titulación. Calentar nuevamente a ebu-
llición y volver a titular, si es necesario, hasta que el
color rosa pálido no cambie por la ebullición continua.
CARBONATO SÓDICO Carbonato Sódico Hidrogenado y 1 ml de naranja de
HIDROGENADO metilo (SR). Luego de disolver el Carbonato Sódico
Hidrogenado, agregar ácido sulfúrico 6 N hasta que la
NaHCO3 PM: 84,0 144-55-8 solución se torne rosada. Emplear esta solución para
llenar el reservorio del aparato.
Sinonimia - Bicarbonato de Sodio. Procedimiento - Agregar 25 ml de Solución satu-
Definición - Carbonato Sódico Hidrogenado debe rada de Carbonato Sódico Hidrogenado al matraz de
contener no menos de 99,0 por ciento y no más de 50 ml, y purgar el sistema dejando que el dióxido de
100,5 por ciento de NaHCO3, calculado sobre la sus- carbono humedecido entre a través del brazo lateral.
tancia seca y debe cumplir con las siguientes especifi- Cerrar la entrada de dióxido de carbono, la llave del
caciones. sistema de venteo y agitar la Solución saturada de
Carbonato Sódico Hidrogenado hasta que no se ob-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco.
serve absorción de dióxido de carbono adicional en
Estable al aire seco, pero se descompone lentamente
lecturas sucesivas de la bureta. Mantener la presión
en aire húmedo. Sus soluciones recientemente prepa-
atmosférica en el aparato ajustando la Solución de
radas con agua fría, sin agitación, son alcalinas al
desplazamiento al mismo nivel en el reservorio y en la
tornasol. La alcalinidad aumenta con el tiempo o
bureta, observando la lectura de la bureta. Abrir la
cuando la solución se agita o se calienta. Soluble en
llave del sistema de venteo e introducir nuevamente
agua; insoluble en alcohol.
dióxido de carbono humedecido a través del brazo
CONSERVACIÓN lateral del matraz. Cerrar la entrada de dióxido de
En envases bien cerrados. carbono, la llave del sistema de venteo y agitar vigoro-
samente la Solución saturada de Carbonato Sódico
ENSAYOS Hidrogenado hasta que no se observe absorción de
Identificación dióxido de carbono adicional. Repetir el procedimien-
Una solución de Carbonato Sódico Hidrogenado to de absorción de dióxido de carbono donde dice
debe responder a los ensayos para Sodio <410> y para “Abrir la llave del sistema de venteo...” hasta no
Bicarbonato <410>. observar un cambio mayor de 0,2 ml en la lectura de la
bureta. Suspender la agitación, introducir nuevamente
Carbonato dióxido de carbono humedecido a través del brazo
Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Carbona- lateral del matraz, retirar el tapón del matraz. Pesar
to Sódico Hidrogenado, disolver sin agitación en exactamente alrededor de 10 g de Carbonato Sódico
20 ml de agua a una temperatura que no exceda 5 C. Hidrogenado y agregar rápidamente al matraz, colocar
Agregar 2,0 ml de ácido clorhídrico 0,10 N y 2 gotas el tapón, continuar el flujo de dióxido de carbono
de fenolftaleína (SR): se debe observar inmediatamen- humedecido durante 30 segundos, luego cerrar la
te apenas un color rosado débil. entrada de dióxido de carbono y la llave del sistema de
Cuando en el rótulo se indique que el carbonato venteo. Agitar vigorosamente la solución en el matraz
sódico hidrogenado esté destinado a emplearse en hasta que cese la absorción de dióxido de carbono,
hemodiálisis se debe proceder del siguiente modo. observando el volumen absorbido en la lectura de la
Aparato (ver Figura) - Consiste en un matraz de bureta. Restaurar la presión atmosférica en el aparato
50 ml con un brazo lateral, conectado a una fuente de mediante la nivelación de la Solución de desplaza-
dióxido de carbono, humedecido por burbujeo a través miento en el reservorio y en la bureta, detener la agita-
de una solución saturada de Carbonato Sódico Hidro- ción. Abrir la llave del sistema de venteo y pasar
genado, con un tapón a través del cual se coloca un dióxido de carbono humedecido a través del sistema.
tubo de salida, conectado mediante un tubo en “T” a Cerrar la entrada de dióxido de carbono y la llave del
una llave del sistema de venteo y a una bureta de nivel sistema de venteo y agitar vigorosamente la solución
con un reservorio. en el matraz hasta que cese la absorción de dióxido de
Reactivos carbono. Determinar el volumen total V en ml de
Solución saturada de Carbonato Sódico Hidroge- dióxido de carbono absorbido luego de agregar la
nado - Pesar alrededor de 20 g de Carbonato Sódico muestra al matraz y calcular el porcentaje de carbona-
Hidrogenado, mezclar con 100 ml de agua y dejar to en la porción de Carbonato Sódico Hidrogenado en
sedimentar los cristales no disueltos. Emplear la solu- ensayo, por la fórmula siguiente:
ción sobrenadante.
Solución de desplazamiento - Pesar exactamente 273V(6.001P)/[22.400(273 + T)(760M)]
alrededor de 100 g de cloruro de sodio, disolver en en la cual P es la presión atmosférica en mm de Hg; T
350 ml de agua, agregar aproximadamente 1 g de es la temperatura ambiente; y M es la cantidad en g de
Carbonato Sódico Hidrogenado empleada. [NOTA: vaso de precipitados de 250 ml que contenga 20 ml de
mantener la temperatura constante durante la medición agua; agregar cuidadosamente 20 ml de ácido clorhí-
del volumen de dióxido de carbono absorbido.] No drico, calentando si fuera necesario para completar la
debe contener más de 0,23 % de carbonato. reacción. Transferir esta solución a un matraz aforado
de 1 litro que contenga 10 g de cloruro de potasio,
completar a volumen con agua y mezclar. Transferir
10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml que contenga 1 g de cloruro de potasio, com-
pletar a volumen con agua y mezclar. Transferir
10,0 ml de esta solución a un segundo matraz aforado
de 100 ml, completar a volumen con Solución de
cloruro de potasio y mezclar. Esta solución debe
contener 10,0 µg de Mg por ml. Transferir porciones
de 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de esta solución a sendos
matraces aforados de 100 ml (cada uno conteniendo
6 ml de ácido clorhídrico 6 N), completar a volumen
con Solución de cloruro de potasio y mezclar. Estas
Soluciones estándar de magnesio deben contener 0,2;
0,3; 0,4 y 0,5 µg de Mg por ml, respectivamente.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 3,0 g de Carbonato Sódico Hidrogenado, transferir
a un matraz aforado de 100 ml, agregar 6 ml de ácido
Figura - Aparato para la determinación clorhídrico 6 N y 1 g de cloruro de potasio, completar
del carbonato.
a volumen con agua y mezclar.
Calcio y magnesio Procedimiento para calcio - Determinar las ab-
Cuando en el rótulo indique que el carbonato sorbancias de las Soluciones estándar de calcio y la
sódico hidrogenado esté destinado a emplearse en Solución muestra en la línea de emisión del calcio a
hemodiálisis se debe proceder del siguiente modo. 422,7 nm empleando un equipo para espectrofoto-
[NOTA: las Soluciones estándar y la Solución metría de absorción atómica (ver 440. Espectrofoto-
muestra pueden modificarse, si fuera necesario, para metría de absorción y emisión atómica) con una
obtener soluciones de concentraciones apropiadas lámpara de calcio de cátodo hueco y una llama de
para el intervalo lineal o de trabajo del aparato.] óxido nitroso-acetileno, empleando Solución de cloru-
Solución de cloruro de potasio - Pesar exacta- ro de potasio como blanco. Graficar las absorbancias
mente alrededor de 10 g de cloruro de potasio en de las Soluciones estándar de calcio en función del
1.000 ml de ácido clorhídrico 0,36 N. contenido de calcio en µg por ml trazando la línea
Soluciones estándar de calcio - Pesar exactamen- recta que mejor se ajuste a los cuatro valores grafica-
te alrededor de 249,7 mg de carbonato de calcio, dos. A partir del gráfico obtenido determinar la canti-
previamente secado a 300 C durante 3 horas y enfriar dad en µg de Ca por ml de Solución muestra. Calcu-
en un desecador durante 2 horas, transferir a un ma- lar el porcentaje de Ca en la porción de Carbonato
traz aforado de 100 ml. Disolver en 6 ml de ácido Sódico Hidrogenado empleada dividiendo este valor
clorhídrico 6 N, agregar 1 g de cloruro de potasio, por 300: el límite es de 0,01 %.
completar a volumen con agua y mezclar. Transferir Procedimiento para magnesio - Determinar con
10,0 ml de esta solución a un segundo matraz aforado las absorbancias de las Soluciones estándar de magne-
de 100 ml, completar a volumen con Solución de sio y la Solución muestra en la línea de emisión del
cloruro de potasio y mezclar. Esta solución debe magnesio a 285,2 nm empleando un equipo para es-
contener 100 µg de Ca por ml. Transferir 2,0; 3,0; 4,0 pectrofotometría de absorción atómica (ver 440. Es-
y 5,0 ml de esta solución a sendos matraces aforados pectrofotometría de absorción y emisión atómica) con
de 100 ml (cada uno conteniendo 6 ml de ácido una lámpara de magnesio de cátodo hueco y una llama
clorhídrico 6 N), completar a volumen con Solución reductora de aire-acetileno, empleando Solución de
de cloruro de potasio y mezclar. Estas Soluciones cloruro de potasio como blanco. Graficar las absor-
estándar de calcio deben contener 2,0; 3,0; 4,0 y bancias de las Soluciones estándar de magnesio en
5,0 μg de Ca por ml, respectivamente. función del contenido de magnesio en g por ml tra-
Soluciones estándar de magnesio - Pesar exacta- zando la línea recta que mejor se ajuste a los cuatro
mente alrededor de 1,0 g de magnesio, transferir a un valores graficados. A partir del gráfico obtenido de-
terminar la cantidad en g de Mg por ml de Solución agregar 1 ml de bromo (SR), evaporar a sequedad y
muestra. Calcular el porcentaje de Mg en la porción enfriar. Disolver el residuo en 10 ml de ácido clorhí-
de Carbonato Sódico Hidrogenado empleada dividien- drico 3 N, evaporar a sequedad y enfriar. Disolver el
do este valor por 300: el límite es 0,004 %. residuo en 5 ml de ácido clorhídrico 3 N, evaporar a
sequedad y enfriar. Disolver el residuo en 10 ml de
Cobre
agua y ajustar a pH 2 con ácido clorhídrico 3 N o
Cuando en el rótulo se indique que el carbonato
hidróxido de amonio 6 N. Si fuera necesario filtrar la
sódico hidrogenado esté destinado a emplearse en
solución y lavar el filtrado con dos porciones
hemodiálisis se debe proceder del siguiente modo.
de 2 ml de agua. Diluir a 20 ml con agua.
[NOTA: las Soluciones estándar y la Solución
Solución estándar - A 30 ml de ácido sulfúrico
muestra pueden modificarse, si fuera necesario, para
0,020 N agregar 1 ml de ácido clorhídrico 0,06 N y
obtener soluciones, de concentraciones apropiadas al
diluir a 20 ml con agua.
intervalo lineal o de trabajo del instrumento.]
Procedimiento - Agregar 1 ml de cloruro de ba-
Ácido nítrico diluido - Diluir 40 ml de ácido nítri-
rio (SR) a la Solución muestra y la Solución estándar,
co a 1.000 ml con agua.
mezclar y dejar reposar durante 30 minutos. La turbi-
Solución estándar - Pesar exactamente alrededor
dez de la Solución muestra debe ser menos intensa
de 1,0 g de cobre, transferir a un matraz aforado de
que la obtenida con la Solución estándar: no debe
1 litro, disolver en 20 ml de ácido nítrico, completar a
contener más de 0,015 %.
volumen con ácido nítrico 0,2 N y mezclar. Transferir
10,0 ml de esta solución a un segundo matraz aforado Sustancias insolubles
de 1 litro, completar a volumen con ácido nítrico Pesar exactamente alrededor de 1 g de Carbonato
0,2 N y mezclar. Esta solución debe contener 10,0 g Sódico Hidrogenado, disolver en 20 ml de agua: la
de cobre por ml. Almacenar en un envase de polietile- disolución debe ser completa y la solución resultante
no. debe ser límpida.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor Determinación de aluminio <140>
de 5,0 g de Carbonato Sódico Hidrogenado, transferir Cuando en el rótulo se indique que el carbonato
a un matraz aforado de plástico de 100 ml y agregar sódico hidrogenado esté destinado a emplearse en
cuidadosamente 4 ml de ácido nítrico. Sonicar duran- hemodiálisis se debe proceder del siguiente modo.
te 30 minutos, completar a volumen con agua y mez- Preparación muestra - Pesar exactamente alrede-
clar. dor de 1,0 g de Carbonato Sódico Hidrogenado,
Solución mezcla - Agregar 20 µl de Solución transferir a un matraz aforado de plástico de 100 ml y
estándar a 10,0 ml de Solución muestra y mezclar. agregar con cuidado 4 ml de ácido nítrico. Sonicar
Esta solución debe contener 0,02 µg de Cu por ml. durante 30 minutos, completar a volumen con agua y
Procedimiento - Determinar las absorbancias de la mezclar. No debe contener más 2 µg por gramo.
Solución muestra y la Solución mezcla en la línea de
emisión del cobre a 324,7 nm empleando un equipo Límite de amoníaco
para espectrofotometría de absorción atómica (ver Pesar exactamente alrededor de 1 g de Carbonato
440. Espectrofotometría de absorción y emisión ató- Sódico Hidrogenado y calentar en un tubo de ensayo:
mica) con una lámpara de cobre de cátodo hueco y un no se debe desarrollar olor a amoníaco.
horno eléctrico, empleando Ácido nítrico diluido Límite de materia orgánica
como blanco. Graficar las absorbancias de la Solución Cuando en el rótulo se indique que el carbonato
muestra y la Solución mezcla en función del contenido sódico hidrogenado esté destinado a emplearse en
de Cu agregado en µg por ml, trazar la línea que con- hemodiálisis se debe proceder del siguiente modo.
tenga los dos puntos y extrapolar hasta que intercepte Solución de sulfato de plata - Pesar exactamente
el eje de las concentraciones. Determinar la cantidad, alrededor de 22 g de sulfato de plata en 2 litros de
en el punto de intersección en µg de Cu por ml de la ácido sulfúrico.
Solución muestra. Calcular la cantidad de Cu en la Solución indicadora - Pesar exactamente alrede-
porción de Carbonato Sódico Hidrogenado en ensayo dor de 1,485 g de 1,10-fenantrolina y 695 mg de sulfa-
multiplicando este valor por 20: el límite es 1 g por to ferroso y disolver en agua para obtener 100 ml de
ml. solución.
Límite de compuestos azufrados Solución estándar - Pesar exactamente alrededor
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 850,3 mg de biftalato de potasio, ligeramente moli-
de 2,0 g de Carbonato Sódico Hidrogenado, disolver do y secado a 120 C durante 2 horas, transferir a un
en 20 ml de agua, evaporar a ebullición hasta 5 ml, matraz aforado de 1 litro, diluir a volumen con agua y
mezclar. Transferir 6,0 ml de esta solución a un ma-
traz aforado de 100 ml, diluir a volumen con agua y Límite de cloruro y sulfato <560>
mezclar. Esta solución debe contener el equivalente a Cloruro - Una porción de 0,35 g no debe contener
0,06 mg de materia orgánica por ml. Transferir más cloruro que el correspondiente a 1,48 ml de ácido
40,0 ml de esta solución a un balón de 500 ml. clorhídrico 0,0010 N (0,015 %).
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Límite de hierro <580>
de 20 g de Carbonato Sódico Hidrogenado, transferir
Cuando en el rótulo se indique que el carbonato
a un balón de 500 ml. Agregar 20 ml de agua y agitar
sódico hidrogenado esté destinado a emplearse en
por rotación. Con precaución, agregar 20 ml de ácido
hemodiálisis se debe proceder del siguiente modo.
sulfúrico y mezclar por rotación. [Precaución: reali-
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
zar esta operación bajo campana].
de 2,0 g de Carbonato Sódico Hidrogenado, transferir
Blanco - Agregar 40 ml de agua a un balón de
a un vaso de precipitados, y neutralizar con ácido
500 ml.
clorhídrico, observando el volumen de ácido consumi-
Procedimiento - Proceder con la Solución están-
do. Transferir la solución así obtenida a un matraz
dar, la Preparación muestra y el Blanco del siguiente
aforado de 25 ml con la ayuda de agua.
modo: agregar 1 g de sulfato mercúrico y aproxima-
Solución estándar - Transferir 1,0 ml de Solución
damente 5 perlas de vidrio, enfriar el balón en un baño
estándar de hierro a un matraz aforado de 25 ml y
de hielo y agregar 5 ml de Solución de sulfato de
agregar el mismo volumen de ácido clorhídrico em-
plata. Mientras se mezcla suavemente por rotación en
pleado para la Solución muestra.
el balón en el baño de hielo, agregar 25,0 ml de di-
Solución blanco - Agregar el mismo volumen de
cromato de potasio 0,025 N (SV) y lentamente 70 ml
ácido clorhídrico empleado para la Solución muestra a
de Solución de sulfato de plata. Adosar al balón un
un tercer matraz aforado de 25 ml.
refrigerante y calentar a reflujo durante 2 horas. Dejar
Procedimiento - Agregar 50 mg de persulfato de
enfriar el balón durante 10 minutos y lavar el refrige-
amonio y 2 ml de Solución de tiocianato de amonio a
rante con 50 ml de agua, recogiendo los líquidos de
cada uno de los matraces con la Solución estándar, la
lavado en el balón. Agregar agua hasta obtener un
Solución muestra y la Solución blanco, diluir a volu-
volumen de aproximadamente 350 ml. Agregar
men con agua y mezclar. Determinar las absorbancias
3 gotas de Solución indicadora y titular, a temperatu-
de la Solución estándar y la Solución muestra a la
ra ambiente, con sulfato férrico amónico 0,07 N (SV)
longitud de onda de máxima absorción aproximada-
hasta que la solución cambie de azul verdoso a pardo
mente 480 nm empleando un equipo para espectrofo-
rojizo. Calcular la cantidad en mg de materia orgáni-
tometría, emplear la Solución blanco para llevar a
ca en la Preparación estándar, por la fórmula siguien-
cero la lectura del aparato: la absorbancia de la Solu-
te:
ción muestra no debe ser mayor que la de la Solución
8N(VB - VE)
estándar: no debe contener más de 5 g por g.
en la cual N es la normalidad del sulfato férrico amóni-
Límite de metales pesados <590>
co (SV); VB y VE son los volúmenes en ml de sulfato
Pesar exactamente alrededor de 4,0 g de Carbona-
férrico amónico 0,07 N (SV) consumido por el Blanco
to Sódico Hidrogenado y mezclar con 5 ml de agua y
y la Preparación estándar, respectivamente. El siste-
19 ml de ácido clorhídrico 3 N, calentar a ebullición y
ma debe contener entre 2,328 y 2,424 mg. Calcular la
mantener la temperatura durante 1 minuto. Agregar
cantidad en mg de materia orgánica en la porción de
1 gota de fenolftaleína (SR), luego agregar suficiente
Carbonato Sódico Hidrogenado en ensayo, por la
hidróxido de amonio 6 N gota a gota, hasta obtener un
fórmula siguiente:
color rosado débil. Enfriar y diluir con agua a 25 ml:
8N(VB - VD) el límite es 5 g por g.
en la cual VD es el volumen en ml de sulfato férrico Pérdida por secado <680>
amónico 0,07 N (SV) consumido por la Preparación Pesar exactamente alrededor de 4 g de Carbonato
muestra: el límite es 0,01 %. Sódico Hidrogenado, secar sobre gel de sílice durante
Límite de arsénico <540> 4 horas: no debe perder más de 0,25 % de su peso.
Método I. Impurezas orgánicas volátiles <520>
Preparación muestra - Pesar exactamente alrede- Método II.
dor de 1,5 g de Carbonato Sódico Hidrogenado, di- VALORACIÓN
solver en 20 ml de ácido sulfúrico 7 N y agregar 35 ml
de agua. Omitir el agregado de 20 ml de ácido sulfú- Pesar exactamente alrededor de 3 g de Carbonato
rico 7 N especificado en Procedimiento. El límite es Sódico Hidrogenado, mezclar con 100 ml de agua,
2 g por ml. agregar rojo de metilo (SR) y titular con ácido clorhí-
drico 1 N (SV). Agitando constantemente, agregar el
ácido lentamente hasta que la solución se torne débil-
mente rosada. Calentar la solución hasta ebullición,
enfriar y continuar la titulación hasta que el color
rosado débil no desaparezca luego del calentamiento a
ebullición. Cada ml de ácido clorhídrico 1 N equivale
a 84,01 mg de NaHCO3.
ROTULADO
Indicar en el rótulo cuando el Carbonato Sódico
Hidrogenado esté destinado a emplearse en hemodiáli-
sis.
Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Carbo-
CARBOPLATINO platino, transferir a un vaso de precipitados de
O
150 ml, agregar 100 ml de agua y disolver agitando
con una barra magnética durante 30 minutos. Fil-
O NH3
trar al vacío, a un crisol previamente pesado. Lavar
Pt el vaso de precipitados con agua y transferir los
O NH3 líquidos de lavado al crisol. Secar a 130 ± 10 °C
hasta peso constante: el residuo no debe ser mayor
O
de 0,5 %.
C6H12N2O4Pt PM: 371,2 41575-94-4 Límite de ácido 1,1-ciclobutanodicarboxílico
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Definición - Carboplatino es (SP-4-2)-
para cromatografía de líquidos con un detector
Diamino[1,1-ciclobutanodicarboxilato (2-)-O,O’]
ultravioleta ajustado a 220 nm y una columna de
platino. Debe contener no menos de 98,0 por ciento
30 cm 4,0 mm con fase estacionaria constituida
y no más de 102,0 por ciento de C6H12N2O4Pt, cal-
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
culado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
con las siguientes especificaciones.
caudal debe ser aproximadamente 2,0 ml por minu-
Caracteres generales - Polvo cristalino incolo- to.
ro. Moderadamente soluble en agua; muy poco Reactivo A - Disolver 8,5 g de sulfato ácido de
soluble en acetona y alcohol. Funde aproximada- tetrabutilamonio en 80 ml de agua. Agregar 3,4 ml
mente a 200 °C, con descomposición. de ácido fosfórico y ajustar a pH 7,55 con hidróxido
Sustancia de referencia - Carboplati- de sodio 10 N.
no SR-FA. Fase móvil - Agregar 20 ml de Reactivo A a una
mezcla de 880 ml de agua y 100 ml de acetonitrilo y
CONSERVACIÓN mezclar. Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
En envases inactínicos de cierre perfecto. necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
tografía).
Precaución - Evitar el contacto con la piel y Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
mucosas. Carboplatino es citotóxico. tamente pesada de ácido 1,1-ciclobutanodicar-
ENSAYOS boxílico en Fase móvil para obtener una solución de
aproximadamente 0,5 mg por ml. Transferir 2,0 ml
Identificación
de esta solución a un matraz aforado de 200 ml,
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
Cristalinidad Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Colocar partículas de Carboplatino en aceite mi- de 50 mg de Carboplatino, transferir a un matraz
neral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la aforado de 50 ml, disolver en Fase móvil, completar
mezcla empleando un microscopio óptico con luz a volumen con Fase móvil y mezclar.
polarizada: las partículas deben presentar birrefrin- Solución de aptitud del sistema - Mezclar
gencia y posiciones de extinción cuando se gira la 1,0 ml de la Solución estándar con 1,0 ml de la
platina del microscopio. Preparación estándar, preparada según se indica en
Determinación del pH <250> Valoración.
Entre 5,0 y 7,0; determinado sobre una solución Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
de aproximadamente 10 mg por ml. Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
registrar las respuestas de los picos según se indica
Determinación de agua <120> en Procedimiento: los tiempos de retención relati-
Titulación volumétrica directa. No más de vos deben ser aproximadamente 0,65 para carbopla-
0,5 %. Emplear formamida anhidra como solvente. tino y 1,0 para ácido 1,1-ciclobutanodicarboxílico;
Transmitancia la eficiencia de la columna determinada a partir del
Preparar una solución de Carboplatino de pico del ácido 1,1-ciclobutanodicarboxílico no debe
aproximadamente 10 mg por ml. Determinar el ser menor de 1.500 platos teóricos; la resolución R
porcentaje de transmitancia (ver 470. Espectrofoto- entre los picos de carboplatino y ácido
metría ultravioleta y visible) en celdas de 1 cm a 1,1-ciclobutanodicarboxílico no debe ser menor de
440 nm, empleando agua como blanco: la transmi- 2,5; la desviación estándar relativa para inyecciones
tancia no debe ser menor de 97 %. repetidas no debe ser mayor de 10 %.
Materia insoluble en agua
Procedimiento - Inyectar por separado en el filtro con agua caliente. Colocar el vaso de precipi-
cromatógrafo, volúmenes iguales (aproximadamen- tados con el filtrado y los líquidos de lavado combi-
te 100 µl) de la Solución estándar y la Solución nados sobre una placa calefactora y evaporar hasta
muestra, registrar los cromatogramas y medir las un volumen de aproximadamente 300 ml. Colocar
respuestas de los picos del ácido 1,1-ciclobuta- una varilla de vidrio en el vaso de precipitados y
nodicarboxílico. Calcular el porcentaje de ácido calentar la solución hasta ebullición. Agregar len-
1,1-ciclobutanodicarboxílico en la porción de Car- tamente en el centro del vaso de precipitados, gota a
boplatino en ensayo, en relación a las respuestas de gota, 10,0 ml de hidrato de hidracina al 85 %.
los picos de ácido 1,1-ciclobutanodicarboxílico [Precaución - La hidracina es tóxica.] Agregar
obtenidos a partir de la Solución muestra y la Solu- 2 gotas de hidróxido de sodio 10 N, calentar a ebu-
ción estándar. No debe contener más de 0,5 %. llición durante 10 minutos para coagular el precipi-
tado, enfriar y filtrar a través de papel de filtro
Pureza cromatográfica
cuantitativo, de porosidad media y libre de cenizas.
Sistema cromatográfico, Fase móvil y Aptitud
Lavar el vaso de precipitados con agua caliente y
del sistema - Proceder según se indica en Valora-
verter los líquidos de lavado sobre el filtro. Limpiar
ción.
el vaso de precipitados y la varilla de agitación con
Solución estándar - Diluir cuantitativamente un
pequeños trozos de la misma clase de papel em-
volumen de la Preparación estándar, preparada
pleado para esta filtración y colocar éstos y el filtro
según se indica en Valoración, con agua para obte-
que contiene el precipitado en un crisol de porcela-
ner una solución de aproximadamente 2,5 µg de
na, previamente calcinado hasta peso constante.
Carboplatino SR-FA por ml.
Secar sobre una placa calefactora cubierta con un
Solución muestra - Emplear la Preparación
aislante, aumentar lentamente la temperatura hasta
muestra según se indica en Valoración.
carbonizar y someter a ignición durante 1 hora a
Procedimiento - Inyectar por separado en el
800 °C. Enfriar en un desecador y pesar nuevamen-
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
te: el peso del platino obtenido se debe encontrar
10 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
entre 52,0 y 53,0 % del Carboplatino en ensayo,
tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
calculado sobre la sustancia anhidra.
puestas de todos los picos. La suma de las respues-
tas de todos los picos, a excepción de las de carbo- VALORACIÓN
platino y ácido 1,1-ciclobutanodicarboxílico, obte- Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
nidas a partir de la Solución muestra no debe ser para cromatografía de líquidos con un detector
mayor de 2 veces la respuesta del pico de carbopla- ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
tino obtenida con la Solución estándar y ningún
30 cm 4,0 mm con fase estacionaria constituida
pico debe presentar una respuesta mayor que la del
por una capa monomolecular de aminopropilsilano
pico de carboplatino obtenido con la Solución
químicamente unido a un soporte de gel de sílice
estándar. No debe contener más de 0,25 % de
totalmente poroso, de 10 µm de diámetro. El cau-
ninguna impureza individual y la suma de todas las
dal debe ser aproximadamente 2,0 ml por minuto.
impurezas no debe ser mayor de 0,5 %.
Fase móvil - Acetonitrilo y agua (87:13). Fil-
Contenido de platino trar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
[NOTA: limpiar perfectamente todo el material Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
de vidrio con ácido nítrico y enjuagar con agua para Preparación estándar - Disolver una cantidad
impedir la formación de un espejo de platino]. exactamente pesada de Carboplatino SR-FA en
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Carbo- agua y diluir con agua para obtener una solución de
platino, transferir a un vaso de precipitados de aproximadamente 1 mg por ml. [NOTA: emplear
600 ml, agregar 400 ml de agua y disolver lenta- esta solución dentro de las 2 horas de preparada].
mente con calentamiento hasta casi ebullición, Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
sobre una placa calefactora con aislante, agitando dedor de 50 mg de Carboplatino, transferir a un
con frecuencia con una varilla de vidrio. Cuando la matraz aforado de 50 ml, disolver y completar a
disolución sea completa, retirar el aislante y calen- volumen con agua y mezclar. [NOTA: emplear esta
tar a ebullición durante aproximadamente solución dentro de las 2 horas de preparada].
10 minutos. Retirar el vaso de precipitados de la Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
placa calefactora, dejar enfriar durante 1 minuto sin Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
agitar y filtrar a través de papel de filtro cuantittati- las respuestas de los picos según se indica en Pro-
vo de porosidad fina, recolectando el filtrado en un cedimiento: el factor de capacidad no debe ser me-
vaso de precipitados de 600 ml, completando la nor de 3,0; la eficiencia de la columna no debe ser
transferencia al filtro con agua caliente. Lavar el menor de 2.500 platos teóricos, el factor de asimetr-
ía no debe ser mayor de 2,5; la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 1,2 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C6H12N2O4Pt en la porción de Carbo-
platino en ensayo.
Cloruro - Agitar 0,80 g de Carboximetilcelulo-
CARBOXIMETILCELULOSA sa Cálcica con 50 ml de agua, disolver en 10 ml de
CÁLCICA <PDG> hidróxido de sodio 1 N y agregar agua hasta 100 ml
(Solución muestra). Calentar 20 ml de Solución
muestra con 10 ml de ácido nítrico 2 N en baño de
Definición - Carboximetilcelulosa Cálcica es la
agua hasta obtener un precipitado floculado, dejar
Sal de calcio del éter policarboximetilado de la
enfriar, centrifugar y remover el sobrenadante.
celulosa y debe cumplir con las siguientes especifi-
Lavar el precipitado con tres porciones de 10 ml de
caciones.
agua centrifugando cada vez. Combinar los sobre-
Caracteres generales - Polvo blanco o blanco- nadantes y los líquidos de lavado, completar con
amarillento. Higroscópico. Prácticamente insolu- agua hasta 100 ml y mezclar: 25 ml de esta solución
ble en acetona, alcohol, cloroformo y éter. Se hin- no debe contener más cloruro que el que correspon-
cha con agua para formar una suspensión. El pH de de a 0,20 ml de ácido clorhídrico 0,020 N (0,36 %).
una suspensión obtenido por agitación de 1 g con Sulfato - A 1 ml de ácido clorhídrico agregar
100 ml de agua esta comprendido entre 4,5 y 6,0. 10 ml de la Solución muestra preparada en Cloruro,
CONSERVACIÓN calentar en un baño de agua hasta obtener un preci-
pitado floculado, dejar enfriar, centrifugar y remo-
En envases de cierre perfecto. ver el sobrenadante. Lavar el precipitado con tres
ENSAYOS porciones de 10 ml de agua centrifugando cada vez.
Combinar los sobrenadantes y los líquidos de lava-
Identificación do, completar con agua hasta 100 ml y mezclar:
A - Agitar completamente 100 mg de Carboxi- 25 ml de esta solución no debe presentar más sulfa-
metilcelulosa Cálcica con 10 ml de agua, agregar to que el que corresponde a 0,21 ml de ácido sulfú-
2 ml de hidróxido de sodio 1 N y dejar reposar rico 0,020 N (1,0 %).
durante 10 minutos [NOTA: conservar esta solución
para los ensayos de Identificación B y C]. Transfe- Límite de metales pesados <590>
rir 1 ml de esta solución a un matraz de 5 ml y Método II. No más de 0,001 %, agregando 1 ml
completar a volumen con agua. A una gota de la de una solución de clorhidrato de hidroxilamina al
solución así obtenida agregar 0,5 ml de ácido cro- 20 % a la solución del residuo.
motrópico (SR) y calentar en un baño de agua du- Pérdida por secado <680>
rante 10 minutos: debe desarrollar color rojo- Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder
púrpura. más de 10,0 % de su peso.
B - Agitar 5 ml de la solución preparada en el
ensayo de Identificación A con 10 ml de acetona: se
debe formar un precipitado floculado blanco.
C - Agitar 5 ml de la solución preparada en el
ensayo de Identificación A con 1 ml de cloruro
férrico (SR): se debe formar un precipitado flocula-
do pardo.
D - Someter a ignición 1 g de Carboximetilce-
lulosa Cálcica, disolver el residuo en una mezcla de
agua y ácido acético 6 N (10:5) y filtrar si fuera
necesario. Calentar a ebullición, dejar enfriar y
neutralizar con hidróxido de amonio 6 N: la solu-
ción así obtenida debe responder a los ensayos para
Calcio <410>.
Alcalinidad
Agitar 1,0 g de Carboximetilcelulosa Cálcica
con 50 ml de agua recientemente hervida y enfriada
y agregar 2 gotas de fenolftaleína (SR): no se debe
desarrollar color rojo.
Determinación del residuo de ignición <270>
Entre 10,0 y 20,0 % determinado entre 450 y
550 °C. [NOTA: secar previamente la muestra.]
Límite de cloruro y sulfato <560>
ni más de 120,0 % de lo indicada en el rótulo. La
CARBOXIMETILCELULOSA viscosidad de soluciones menores de 2 % de con-
SÓDICA centración no debe ser menos de 75,0 % ni más de
140,0 % de lo indicada en el rótulo.
9004-32-4
Pérdida por secado <680>
Definición - Carboximetilcelulosa Sódica es la
Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
Sal sódica del éter policarboximetilado de la celulo-
más de 10,0 % de su peso.
sa. Debe contener no menos de 6,5 por ciento y no
más de 9,5 por ciento de sodio, calculado sobre la Determinación del pH <250>
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes Preparar una solución de Carboximetilcelulosa
especificaciones. Sódica al 1 %: el pH debe estar comprendido entre
6,5 y 8,5.
Caracteres generales - Polvo o gránulos blan-
cos o blanco-amarillentos. Higroscópico. Fácil- Impurezas orgánicas volátiles <560>
mente dispersable en agua para formar una solución Método I.
coloidal. Insoluble en alcohol, éter y mayoría de Límite de metales pesados <590>
solventes orgánicos Método II. Emplear 1,0 g de Carboximetilcelu-
CONSERVACIÓN losa Sódica. El límite es 20 ppm.
En envases de cierre perfecto. VALORACIÓN
ENSAYOS Pesar exactamente alrededor de500 mg de Car-
boximetilcelulosa Sódica, transferir a un recipiente
Identificación
apropiado, agregar 80 ml de ácido acético glacial y
A - Agregar 1 g de Carboximetilcelulosa Sódi-
calentar en un baño a ebullición durante 2 horas.
ca a 50 ml de agua en agitación constante y conti-
Dejar enfriar a temperatura ambiente y titular con
nuar la agitación hasta obtener una solución trans-
ácido perclórico 0,1 N (SV) determinado el punto
parente [NOTA: conservar esta solución para el
final potenciómetricamente. Realizar una determi-
ensayo de Identificación B]. Transferir 1 ml de esta
nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
solución a un tubo de ensayo, agregar 1 ml de agua
sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
y 5 gotas de 1-naftol (SR). Inclinar el tubo y agre-
perclórico 0,1 N equivale a 2,30 mg de Na.
gar cuidadosamente 2 ml de ácido sulfúrico para
formar una fase: se debe desarrollar color rojo ROTULADO
púrpura en la interfase. Indicar en el rótulo la viscosidad de Carboxime-
B - A 5 ml de la solución obtenida en el ensayo tilcelulosa Sódica en concentraciones conocidas.
de Identificación A agregar 5 ml de cloruro de ba-
rio (SR): se debe formar un precipitado fino y blan-
co.
C - Una porción de la solución obtenida en el
ensayo de Identificación A debe responder a los
ensayos para Sodio <410>.
Determinación de la viscosidad <190>
Pesar exactamente una porción de Carboxime-
tilcelulosa Sódica, calculada sobre la sustancia seca,
para obtener 200 g de solución de carboximetilcelu-
losa de la concentración indicada en el rótulo para
este ensayo. Transferir a un recipiente apropiado y
previamente pesado, que contenga 180 ml de agua
en agitación constante, continuar la agitación hasta
obtener la porción completamente humectada y
agregar suficiente cantidad de agua hasta obtener
una mezcla de 200 g. Dejar reposar y agitar oca-
sionalmente hasta obtener para completar la solu-
ción. Ajustar a una temperatura de 25,0 ± 0,2 ºC y
determinar la viscosidad usando un viscosímetro
rotatorio. La viscosidad de soluciones de 2 % o
mayor concentración no debe ser menos de 80,0 %
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
CARMUSTINA placa 2 µl de la Solución muestra y 2 µl de las So-
luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-
O nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
frente del solvente haya recorrido aproximadamente
Cl Cl
N N tres cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar
H la placa de la cámara, marcar el frente del solvente
N y dejar secar al aire. Pulverizar sobre la placa con
O
Revelador 1 y calentar a 125 °C durante 10 minu-
tos. Dejar enfriar y pulverizar sobre la placa con
Revelador 2. Examinar la placa bajo luz ultraviole-
C5H9Cl2N3O2 PM: 214,1 154-93-8 ta a 366 nm hasta que aparezcan manchas de color
marrón oscuro: la mancha correspondiente a Impu-
Definición - Carmustina es N,N’-bis(2- reza A de Carmustina en el cromatograma obtenido
Cloroetil)-N-nitrosourea. Debe contener no menos a partir de la Solución muestra no debe ser más
de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de intensa que la obtenida con la Solución estándar A
C5H9Cl2N3O2, calculado sobre la sustancia anhidra (1 %). El ensayo sólo es válido si el cromatograma
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. obtenido con la Solución estándar B presenta dos
manchas completamente separadas.
Caracteres generales - Polvo granular, amari-
llento. Muy soluble en cloruro de metileno; fácil- Determinación de agua <120>
mente soluble en alcohol; muy poco soluble en Titulación volumétrica directa. No más de 1 %,
agua. determinado sobre 0,5 g de Carmustina.
Sustancia de referencia - Impureza A de Car- VALORACIÓN
mustina SR-FA: 1,3-bis(2-cloroetil)urea.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
CONSERVACIÓN dedor de 100 mg de Carmustina, transferir a un
matraz aforado de 100 ml, disolver en 30 ml de
En envases inactínicos de cierre perfecto, en un alcohol absoluto, completar a volumen con agua y
refrigerador. mezclar. Transferir 3,0 ml de esta solución a un
matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con
Precaución - Manipular con cuidado evitando agua y mezclar.
su inhalación y el contacto con la piel. Procedimiento - Determinar la absorbancia de
la Preparación muestra en una celda de 1 cm, a la
ENSAYOS longitud de onda de máxima absorción, aproxima-
damente 230 nm, empleando agua como blanco.
Identificación
Calcular el contenido de C5H9Cl2N3O2 empleando
Absorción infrarroja <460>. Proceder según se
270 como valor de coeficiente de extinción especí-
indica en Identificación por medio de espectros de
fica E(1%, 1 cm).
referencia.
Límite de impureza A
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Cloruro de metileno y metanol
(90:10).
Solución muestra - Disolver 100 mg de Car-
mustina en 5 ml de cloruro de metileno y mezclar.
Solución estándar A - Disolver 2 mg de Impu-
reza A de Carmustina SR-FA en 10 ml de cloruro
de metileno y mezclar.
Solución estándar B - Diluir 1 ml de la Solución
muestra a 10 ml con cloruro de metileno. A 5 ml de
esta solución agregar 5 ml de Solución estándar A.
Revelador 1 - Dietilamina.
Revelador 2 - Nitrato de plata (SR).
Solución de fosfato monobásico de potasio -
CARVEDILOL Disolver 1,77 g de fosfato monobásico de potasio
OH
en agua y diluir a 650 ml. Ajustar a pH 2,0 con
H
O
H
N
ácido fosfórico.
O Fase móvil - Solución de fosfato monobásico de
potasio y acetonitrilo (65:35). Filtrar y desgasifi-
OCH3
car. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud de
sistema en 100. Cromatografía).
HN
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 25 mg de Carvedilol, transferir a un matraz afo-
rado de 25 ml, disolver y completar a volumen con
C24H26N2O4 PM: 406,5 72956-09-3 Fase móvil.
Definición - Carvedilol es (2RS)- Solución estándar A - Transferir 1,0 ml de So-
1-(9H-Carbazol-4-iloxi)-3-[[2-(2-metoxifenoxi)etil] lución muestra a un matraz aforado de 100 ml,
amino]2-propanol. Debe contener no menos de completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
99,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de Transferir 1,0 ml de esta solución a un matraz afo-
C24H26N2O4, calculado sobre la sustancia seca y rado de 10 ml, completar a volumen con Fase móvil
debe cumplir con las siguientes especificaciones. y mezclar.
Solución estándar B - Pesar exactamente alre-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco dedor de 5 mg de Impureza C de Carvedilol SR-FA,
o casi blanco. Poco soluble en alcohol; práctica- transferir a un matraz aforado de 100 ml, disolver
mente insoluble en agua y en ácidos diluidos. Pre- en 5 ml de Solución muestra, completar a volumen
senta polimorfismo. con Fase móvil y mezclar.
Sustancia de referencia - Impureza C de Car- Solución estándar C - Transferir 1 ml de Solu-
vedilol SR-FA: (2RS)-1-[bencil[2-(2-metoxifenoxi) ción estándar B a un matraz aforado de 100 ml y
etil]amino]3-(9H-carbazol-4-iloxi)2-propanol. completar a volumen con Fase móvil. Transferir
2,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
ENSAYOS 10 ml, completar a volumen con Fase móvil y mez-
clar.
Identificación Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Absorción infrarroja <460>. Proceder según se
Cromatografiar la Solución estándar B y registrar
indica en Identificación por medio de espectros de
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
referencia. [NOTA: si el espectro obtenido presen-
cedimiento: la resolución R entre los picos de car-
ta diferencias con respecto al espectro de referencia,
vedilol y de impureza C de carvedilol no debe ser
disolver la muestra en 2-propanol, evaporar a se-
menor de 17; los tiempos de retención relativos a
quedad y registrar nuevamente el espectro emple-
carvedilol deben ser aproximadamente 0,6 para
ando el residuo].
impureza A de carvedilol [1-[[9-[2-hidroxi-
Pérdida por secado <680> 3-[[2-2(metoxifenoxi)etil] amino]propil]-
Secar en estufa entre 100 y 105 °C hasta peso 9H-carbazol-4-il]oxi]-3-[[2-(2-me-
constante: no debe perder más de 0,5 % de su peso. toxifenoxi)etil]amino]2-propanol], 3,5 para impure-
za C de carvedilol y 6,7 para impureza B de carve-
Determinación del residuo de ignición <270> dilol [1,1'-[[2-(metoxifenoxi)etil]nitrilo]bis[3-(9H-
No más de 0,1 %. carbazol-4-iloxi)2-propanol].
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Límite de metales pesados <590> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Método II. No más de 0,001 %. 20 µl) de la Solución muestra, la Solución estándar
A, la Solución estándar B y la Solución estándar C,
Sustancias relacionadas
registrar los cromatogramas y medir las respuestas
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
de los picos durante ocho veces el tiempo de reten-
para cromatografía de líquidos con un detector
ción del pico de carvedilol. Para el cálculo del
ultravioleta ajustado a 240 nm y una columna de
contenido de impureza A multiplicar la respuesta
12,5 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
del pico de la impureza A de carvedilol por 2. La
por octilsilano químicamente unido a partículas
respuesta del pico de impureza C de carvedilol no
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. Mantener a
debe ser mayor de dos veces la respuesta del pico
temperatura aproximadamente a 55 °C. El caudal
correspondiente obtenido a partir de la Solución
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
estándar C (0,02 %); la respuesta del pico de impu-
reza A de carvedilol no debe ser mayor de dos ve-
ces la respuesta del pico principal obtenido a partir
de la Solución estándar A (0,2 %); ninguna otra
impureza debe ser mayor que la respuesta del pico
principal obtenido a partir de la Solución estándar A
(0,1 %); la suma de todos los picos, excepto el pico
principal, no debe ser mayor a cinco veces la res-
puesta del pico principal obtenido con la Solución
estándar A (0,5 %). Ignorar cualquier pico con una
respuesta inferior a la del pico principal obtenido
con la Solución estándar C (0,01 %).
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 350 mg de Car-
vedilol, disolver en 60 ml de ácido acético glacial y
titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determi-
nando el punto final potenciómetricamente (ver
780. Volumetría) Realizar una determinación con
un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada
ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a 40,65 mg
de C24H26N2O4.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
CEFADROXILO grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
HO O Fase móvil - Acetato de etilo, alcohol, agua y
HO ácido fórmico (14:5:5:1).
O O CH3 Solvente - Alcohol, agua y ácido clorhídrico
N H2O
2,4 N (75:22:3).
N Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
H S
H2N H H H tamente pesada de Cefadroxilo en Solvente para
obtener una solución de aproximadamente 25 mg
por ml.
C16H17N3O5S . H2O PM: 381,4 66592-87-8 Solución estándar A - Diluir 1,0 ml de la Solu-
Hemihidrato PM: 372,4 119922-85-9 ción muestra a 100 ml con Solvente y mezclar.
Solución estándar B - Disolver cantidades exac-
Anhidro PM: 363,4 50370-12-2 tamente pesadas de ácido 7-aminodesace-
Definición - Cefadroxilo es Monohidrato de toxicefalosporánico y D--4-hidroxifenilglicina en
ácido [6R-[6α,7β(R)-7-(R*)]]-7-[[amino-(4-hi- Solvente para obtener una solución de aproximada-
droxifenil)acetil]amino]-3-metil-8-oxo-5-tia-1-aza mente 0,25 mg de cada una por ml.
biciclo[4.2.0]oct-2-eno-2-carboxílico. Debe conte- Solución de resolución - Mezclar 1,0 ml de So-
ner no menos de 950 µg y no más de 1.050 µg de lución muestra y 1,0 ml de Solución estándar B.
C16H17N3O5S, calculado sobre la sustancia anhidra Revelador - Emplear una solución preparada di-
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. solviendo 3 g de ninhidrina en 100 ml de una solu-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco ción de metabisulfito de sodio al 4,55 %.
o casi blanco. Poco soluble en agua; prácticamente Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
insoluble en alcohol, cloroformo y éter. placa 2 µl de la Solución muestra, 2 µl de las Solu-
ciones estándar A y B y 4 µl de la Solución de reso-
Sustancia de referencia - Cefadroxilo SR-FA. lución. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
CONSERVACIÓN los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
En envases de cierre perfecto. de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
ENSAYOS cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar.
Pulverizar sobre la placa con Revelador, dejar secar
Identificación y examinar los cromatogramas: ninguna mancha
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. secundaria en el cromatograma obtenido a partir de
Determinación de la rotación óptica <170> la Solución muestra que corresponda al ácido
Rotación específica: Entre +165,0° y +178,0°. 7-aminodesace-toxicefalosporánico o a D--
Solución muestra: 10 mg por ml, en agua. 4-hidroxifenilglicina debe ser más intensa que la
mancha correspondiente obtenida con la Solución
Determinación del pH <250> estándar B (1,0 %); a excepción de la mancha prin-
Entre 4,0 y 6,0, determinado sobre una suspen-
cipal y las correspondientes al ácido
sión de aproximadamente 50 mg por ml.
7-aminodesacetoxicefalosporánico o
Cristalinidad D--4-hidroxifenilglicina, ninguna mancha debe ser
Colocar partículas de Cefadroxilo en aceite mi- más intensa que la mancha principal obtenida con la
neral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la Solución estándar A (1,0 %). El ensayo sólo es
mezcla empleando un microscopio óptico de polari- válido si el cromatograma obtenido a partir de la
zación: las partículas deben presentar birrefrigencia Solución de resolución presenta tres manchas com-
y posiciones de extinción cuando se gira la platina pletamente separadas.
del microscopio.
Límite de dimetilanilina <570>
Determinación de agua <120> Debe cumplir con los requisitos.
Titulación volumétrica directa. Entre 4,2 y
VALORACIÓN
6,0 %. La forma hemihidratada debe contener entre
2,4 y 4,5 %. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
Pureza cromatográfica
ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
Fase estacionaria - Emplear una placa para
25 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml por minu-
to.
Solución reguladora de pH 5,0 - Disolver
13,6 g de fosfato monobásico de potasio en agua
para obtener 2 litros de solución. Ajustar a pH 5,0
con hidróxido de potasio 10 N y mezclar.
Fase móvil - Solución reguladora de pH 5,0 y
acetonitrilo (960:40). Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Cefadroxilo SR-FA en Solu-
ción reguladora de pH 5,0 para obtener una solu-
ción de aproximadamente 1,06 mg por ml. Esta
solución contiene el equivalente a 1.000 µg de
cefadroxilo (C16H17N3O5S) por ml. [NOTA: prepa-
rar esta solución en el día de su uso.]
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 212 mg de Cefadroxilo, transferir a un
matraz aforado de 200 ml, completar a volumen con
Solución reguladora de pH 5,0 y agitar mecánica-
mente durante 5 minutos hasta disolución. [NOTA:
preparar esta solución en el día de su uso.]
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: el factor de capacidad k' debe estar
comprendido entre 2,0 y 3,5; la eficiencia de la
columna para el pico de cefadroxilo no debe ser
menor de 1.800 platos teóricos; el factor de asimetr-
ía para el pico de cefadroxilo no debe ser mayor de
2,2; la desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C16H17N3O5S en la porción de Cefa-
droxilo en ensayo.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si Cefadroxilo es hemihidra-
to o anhidro.
gencia y posiciones de extinción cuando se gira la
CEFALEXINA platina del microscopio.
Determinación del pH <250>
HO O
Entre 4,0 y 5,5; determinado sobre una suspen-
O
sión acuosa de aproximadamente 5,0 mg por ml.
O CH3
N Determinación de agua <120>
H2O
N
Titulación volumétrica directa. Entre 4,0 y
H S 8,0 %.
H2N H H H
Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico - Proceder según se in-
C16H17N3O4S . H2O PM: 365,4 23325-78-2 dica en Valoración, excepto que el caudal debe ser
Anhidra PM: 347,4 15686-71-2 aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Solución A - Disolver 1,0 g de 1-
Definición - Cefalexina es el Ácido [6R- pentanosulfonato de sodio en una mezcla de 1 litro
[6 ,7 (R*)]]-7-[(aminofenilacetil)amino]-3-metil- de agua y 15 ml de trietilamina. Ajustar a
8-oxo-5-tia-1-azabiciclo[4.2.0]oct-2-eno-2- pH 2,5 ± 0,1 con ácido fosfórico.
carboxílico, monohidrato. Debe contener no menos Solución B - Disolver 1,0 g de 1-
de 95,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de pentanosulfonato de sodio en una mezcla de 300 ml
C16H17N3O4S, calculado sobre la sustancia anhidra de agua y 15 ml de trietilamina. Ajustar a
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. pH 2,5 ± 0,1 con ácido fosfórico, agregar 350 ml de
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco acetonitrilo, 350 ml de metanol y mezclar.
o casi blanco. Poco soluble en agua; prácticamente Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
insoluble en alcohol, cloroformo y éter. lución A y Solución B. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Sustancia de referencia - Cefalexina SR-FA. Programar el cromatógrafo del siguiente modo:
CONSERVACIÓN
Tiempo Solución A Solución B Etapa
En envases de cierre perfecto. (minutos) (%) (%)
0-1 100 0 Isocrático
ENSAYOS
1-33,3 100 0 0 100 Gradiente
Identificación lineal
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 33,3-34,3 0 100 Isocrático
B - Absorción ultravioleta <470>. El espectro
de absorción ultravioleta de una solución de Cefa- Diluyente - Disolver 18 g de fosfato monobási-
lexina 1 en 50.000 debe presentar máximos y co de potasio en 1 litro de agua.
mínimos a las mismas longitudes de onda que una Solución estándar A - Disolver una cantidad
solución similar de Cefalexina SR-FA. La absorti- exactamente pesada de Cefalexina SR-FA en Dilu-
vidad, calculada sobre la sustancia anhidra, a la yente para obtener una solución de aproximadamen-
longitud de onda de máxima absorción, aproxima- te 0,08 mg por ml.
damente 262 nm, debe estar comprendida entre 95,0 Solución estándar B - Disolver una cantidad
y 104,0 % de la de la Cefalexina SR-FA, conside- exactamente pesada de Cefalexina SR-FA en Dilu-
rando la potencia de la Sustancia de Referencia. yente para obtener una solución de aproximadamen-
te 0,16 mg por ml.
Determinación de la rotación óptica <170> Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Rotación específica: Entre +149° y +158°, sobre de 25 mg de Cefalexina, transferir a un matraz
la sustancia anhidra. aforado de 5 ml, disolver en Diluyente, completar a
Solución muestra: 5 mg por ml, en Solución re- volumen con Diluyente y mezclar.
guladora de ftalato neutralizada pH 4,4 (ver Solu- Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
ciones reguladoras en Soluciones). matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Cristalinidad 20 µl) de la Solución estándar A, la Solución están-
Colocar partículas de Cefalexina en aceite mine- dar B y la Solución muestra, registrar los cromato-
ral sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la gramas y medir las respuestas de los picos de cefa-
mezcla empleando un microscopio óptico con luz lexina en el cromatograma obtenido a partir de las
polarizada: las partículas deben presentar birrefrin- Soluciones estándar A y B y de todos los picos,
distintos al de cefalexina, en el cromatograma obte-
nido a partir de la Solución muestra. Graficar las
respuestas de los picos de cefalexina obtenidos a
partir de las Soluciones estándar A y B en función
de la concentración en mg por ml, calculada sobre
la sustancia anhidra. Hallar la ecuación de la recta
que mejor ajuste entre estos los dos puntos y el
cero. A partir de la ecuación de la recta y de las
respuestas de los picos obtenidos con la Solución
muestra, determinar la concentración en mg por ml
de cada sustancia relacionada en el cromatograma
de la Solución muestra. Calcular el porcentaje de
cada sustancia relacionada. No debe contener más
de 1,0 % de ninguna sustancia relacionada indivi-
dual; y la suma de todas las sustancias relacionadas
no debe ser mayor de 5,0 %.
Límite de dimetilanilina <570>
Cumple con los requisitos.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro, de baja
acidez. El caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml
por minuto.
Solución de fosfato - Disolver 13,6 g de fosfato
monobásico de potasio en 800 ml de agua y com-
pletar a 1 litro con el mismo solvente.
Fase móvil - Agua, Solución de fosfato, aceto-
nitrilo y metanol (83:10:5:2). Filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
ma en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 20 mg de Cefalexina SR-FA, transferir a
un matraz aforado de 100 ml, disolver en agua,
completar a volumen con el mismo solvente y mez-
clar.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor 50 mg de Cefalexina, transferir a un matraz
aforado de 250 ml, disolver en agua, completar a
volumen con el mismo solvente y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C16H17N3O4S en la porción de Cefa-
lexina en ensayo.
Determinación de agua <120>
CEFIXIMA Titulación volumétrica directa. Entre 9,0 y
COOH 12,0 %; determinada sobre 200 mg.
COOH
O O Determinación del residuo de ignición <270>
N N CH2 No más de 0,2 %; determinado sobre 1,0 g.
H
N
S Sustancias relacionadas
S H H Sistema cromatográfico, Fase móvil, Prepara-
N O
ción estándar A y Aptitud del sistema - Proceder
H2N según se indica en Valoración.
C16H15N5O7S2 . 3H2O PM: 507,5 79350-37-1 Solución estándar - Transferir 1,0 ml de la Pre-
paración estándar A a un matraz aforado de 100 ml,
Definición - Cefixima es Ácido [6R- completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
[6,7(Z)]]-7-[[(2-amino-4-tiazolil)[(carboximeto- Solución muestra - Emplear la Preparación
xi)imino]acetil]amino]-3-etenil-8-oxo-5-tia-1-azabi- muestra preparada según se indica en Valoración.
ciclo[4,2,0]octo-2-eno-2-carboxílico. Debe conte- Procedimiento - Inyectar por separado en el
ner no menos de 95,0 por ciento y no más de 101,0 cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
por ciento de C16H15N5O7S2, calculada sobre la 10 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
sustancia anhidra y debe cumplir con las siguientes tra, registrar los cromatogramas durante al menos
especificaciones. tres veces el tiempo de retención del pico principal
Caracteres generales - Polvo blanco o casi y medir la respuestas de todos los picos. En el
blanco. Ligeramente higroscópico. Soluble en cromatograma obtenido a partir de la Solución
metanol; moderadamente soluble en etanol; poco muestra, ningún pico, a excepción del pico princi-
soluble en agua; prácticamente insoluble en acetato pal, debe presentar una respuesta mayor que la
de etilo. mitad de la respuesta del pico principal obtenido
con la Solución estándar (0,5 %), la suma de las
Sustancia de referencia - Cefixima SR-FA. respuestas de todos los picos, a excepción del pico
principal, no debe ser mayor que tres veces la res-
CONSERVACIÓN puesta del pico principal obtenido con la Solución
En envases inactínicos de cierre perfecto. estándar (3,0 %). Ignorar cualquier pico con una
respuesta menor de 0,1 veces la respuesta del pico
ENSAYOS principal en el cromatograma obtenido con la Solu-
Identificación ción estándar.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
VALORACIÓN
[NOTA: si los espectros obtenidos presentan di-
ferencias, disolver por separado la sustancia en Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
ensayo y la Sustancia de referencia en metanol, para cromatografía de líquidos con un detector
evaporar hasta sequedad y registrar nuevamente los ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
espectros sobre los residuos]. 12,5 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Valoración. El tiempo de retención del pico co- porosas de sílice de 5 µm de diámetro. Mantener la
rrespondiente a cefixima en el cromatograma obte- columna aproximadamente a 40 ºC. El caudal debe
nido a partir de la Solución muestra se debe corres- ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
ponder con el obtenido con la Solución estándar. Solución de hidróxido de tetrabutilamonio - Di-
C - Pesar alrededor de 2 mg de Cefixima y co- solver 8,2 g de hidróxido de tetrabutilamonio en
locarlos en un tubo de ensayo. Humedecer con agua y diluir a 800 ml con el mismo solvente.
0,05 ml de agua y agregar 2 ml de ácido sulfúrico- Ajustar a pH 6,5 con ácido fosfórico diluido y diluir
formaldehido (SR). Mezclar por rotación: la solu- a 1 litro con agua.
ción debe presentar color amarillo. Colocar el tubo Fase móvil - Solución de hidróxido de tetrabu-
de ensayo en un baño de agua durante 1 minuto: se tilamonio y acetonitrilo (75:25). Filtrar y desgasifi-
debe desarrollar color naranja. car. Hacer los ajustes necesarios (ver 100. Croma-
tografía).
Determinación del pH <250>
Preparación estándar A - Pesar exactamente al-
Entre 2,6 y 4,1; determinado sobre una solución rededor de 25,0 mg de Cefixima SR-FA, transferir a
de Cefixima de aproximadamente 0,05 mg por ml,
un matraz aforado de 25 ml, disolver con Fase
en agua libre de dióxido de carbono.
móvil, completar a volumen con Fase móvil y mez-
clar.
Preparación estándar B - Pesar exactamente al-
rededor de 10 mg de Cefixima SR-FA y disolver en
10 ml de agua. Calentar en baño de agua durante
45 minutos, enfriar e inyectar de inmediato.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 25,0 mg de Cefixima, transferir a un ma-
traz aforado de 25 ml, disolver con Fase móvil,
completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografíar la Preparación estándar B y regis-
trar las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la resolución R entre los picos de
cefixima y el isómero E debe ser mayor de 2,0; la
desviación estándar relativa para inyecciones repe-
tidas no debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar A y la Prepara-
ción muestra, registrar los cromatogramas y medir
las respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en porcentaje de C16H15N5O7S2 en la por-
ción de Cefixima en ensayo.
Entre 4,5 y 6,5; determinado sobre una solución
CEFOTAXIMA SÓDICA 1 en 10.
NaO O Determinación de la rotación óptica <170>
O
S Rotación específica: Entre 58° y 64°.
O O
H2N N O CH3 Solución muestra: 10 mg por ml.
N N Pérdida por secado <680>
H S
N H H Secar entre 100 y 105 ºC durante 3 horas: no
OCH3
debe perder más de 3,0 % de su peso.
N
H
H H
S 5 H2O Ensayos de esterilidad <370>
O Cuando en el rótulo se indica que Ceftazidima
H3C
OH es estéril, debe cumplir con los requisitos en Méto-
H3C
do de filtración por membrana, empleando Solu-
O
ción A con el agregado de 10 g de bicarbonato de
sodio cada 1 litro de Solución A, antes de la esterili-
C22H22N6O7S2 . 5H2O PM: 636,7 78439-06-2 zación.
Anhidro PM: 546,6 Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indica que Ceftazidima
Definición - Ceftazidima es [6R-[6 ,7 (Z)]]-
es estéril, no debe contener más de 0,1 Unidades de
1-[[7-[[2-amino-4-tiazolil)[(1-carboxi-1-metiletoxi)
Endotoxina por mg de Ceftazidima.
imino]acetil]amino]-2-carboxi-8-oxo-5-tia-1-azabi-
ciclo[4.2.0]oct-2-en-3-il]metil]piridinio, pentahidra-
to. Debe contener no menos de 95,0 por ciento y no VALORACIÓN
más de 102,0 por ciento de C22H22N6O7S2, calcula- Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
do sobre la sustancia seca y debe cumplir con las para cromatografía de líquidos con un detector
siguientes especificaciones. ultravioleta ajuntado a 254 nm y una columna de
15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco por octadecilsilano químicamente unido a partículas
o casi blanco. Soluble en álcalis y dimetilsulfóxido; porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
poco soluble en dimetilformamida, metanol y agua; debe ser aproximadamente 2,0 ml por minuto.
insoluble en acetona, alcohol, cloroformo, dioxano, Solución reguladora de pH 7 - Transferir
éter, acetato de etilo y tolueno. 42,59 g de fosfato dibásico de sodio anhidro y
Sustancias de referencia - Ceftazidima Pen- 27,22 g de fosfato monobásico de potasio a un
tahidrato SR-FA. Delta 3-ceftazidima SR-FA. matraz aforado de 1 litro, disolver con agua, com-
pletar a volumen con el mismo solvente y mezclar.
CONSERVACIÓN Fase móvil - Mezclar 40 ml de acetonitrilo y
200 ml de Solución reguladora de pH 7 en un ma-
En envases inactínicos de cierre perfecto.
traz aforado de 2 litros, completar a volumen con
agua y mezclar. Filtrar y desgasificar. Hacer los
ENSAYOS ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Identificación Cromatografía).
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Preparación madre del estándar - Pesar exac-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en tamente alrededor de 29 mg de Ceftazidima SR-FA,
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- transferir a un matraz aforado de 25 ml que conten-
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- ga 2,5 ml de Solución reguladora de pH 7 y agitar
paración muestra se debe corresponder con el obte- para disolver. Completar a volumen con agua y
nido con la Preparación estándar. mezclar. [NOTA: proteger esta solución de la luz].
Preparación estándar - Inmediatamente antes
Determinación del pH <250> de la cromatografía, transferir 5,0 ml de Solución
Entre 3,0 y 4,0, determinado en una solución de madre del estándar a un matraz aforado de 50 ml,
aproximadamente 5 mg por ml. completar a volumen con agua y mezclar para obte-
Cristalinidad ner una solución de aproximadamente 100 µg de
Colocar partículas de Ceftazidima en aceite mi- Ceftazidima por ml.
neral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
mezcla empleando un microscopio óptico con luz dedor de 115 mg de Ceftazidima, transferir a un
polarizada: las partículas presentan birrenfringencia matraz aforado de 100 ml que contenga 10,0 ml de
y posiciones de extinción cuando se gira la platina Solución reguladora de pH 7 y agitar para disolver.
del microscopio. Completar a volumen con agua y mezclar. [NOTA:
proteger esta solución de la luz]. Inmediatamente
antes de la cromatografía, transferir 5,0 ml de esta
solución a un matraz aforado de 50 ml, diluir a
volumen con agua y mezclar.
Solución de resolución - Preparar una solución
de Delta 3-ceftazidima SR-FA en Solución regula-
dora de pH 7 de aproximadamente 0,1 mg por ml.
Inmediatamente antes de la cromatografía, mezclar
1 ml de esta solución con 8 ml de agua y 1 ml de
Solución madre del estándar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de cefta-
zidima y de delta-3-ceftazidima no debe ser menor
de 2,0. Cromatografiar la Preparación estándar y
registrar las respuestas según se indica en Procedi-
miento: el factor de asimetría para el pico de cefta-
zidima no debe ser menor de 0,75 ni mayor de 1,5;
la desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C22H22N6O7S2 en la porción de Ceftazi-
dima en ensayo.
ROTULADO
Cuando la Ceftazidima esté destinada a la prepa-
ración de formas farmacéuticas de administración
parenteral u otras formas farmacéuticas estériles,
indicar en el rótulo que es estéril.
Sustancias relacionadas
CEFUROXIMA Proceder según se indica para Valoración. Cal-
AXETILO cular el porcentaje de sustancias relacionadas a
partir de las respuestas de los picos obtenidos en el
O CH3 cromatograma de la Preparación muestra. La suma
de las respuestas de los picos correspondientes a los
H3C O O O
O isómeros E, localizados por comparación a iguales
O O tiempos de retención en el cromatograma obtenido
N O NH2 a partir de la Preparación estándar C, no debe ser
O N
H S
mayor de 1,0 %; la suma de las respuestas de los
N
OCH3
H H picos correspondientes a los ∆3isómeros, localiza-
dos por comparación a iguales tiempos de retención
y epímero en el cromatograma obtenido a partir de la Prepa-
ración estándar B, no debe ser mayor de 1,5 %; la
C20H22N4O10S PM: 510,5 64544-07-6 respuesta de ninguna otra impureza individual debe
Definición - Cefuroxima Axetilo es [6R- ser mayor de 0,5 % y la suma de las respuestas de
[6,7(Z)]]-3-[[(aminocarbonil)oxi]metil]-7-[[2- todos los picos no debe ser mayor de 3,0 %. Igno-
furanil(metoxiimino)acetil]amino]-8-oxo-5-tia-1- rar cualquier pico con una respuesta inferior a 0,05
azabiciclo[4.2.0]oct-2-eno-2-carboxilato-1- veces la respuesta de la suma de los dos picos prin-
acetoxietilo. Debe contener no menos de 96,0 por cipales obtenidos a partir de la Preparación están-
ciento y no más de 102,0 por ciento de una mezcla dar A.
de los diasteroisómeros amorfos de C20H22N4O10S, VALORACIÓN
calculado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir
con las siguientes especificaciones. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
Caracteres generales - Polvo amorfo blanco o ultravioleta ajustado a 278 nm y una columna de
casi blanco. Fácilmente soluble en acetona; soluble 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
en cloroformo, acetato de etilo y metanol; poco por trimetilsilano químicamente unido a partículas
soluble en alcohol absoluto; insoluble en agua y porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
éter. debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Sustancia de referencia - Cefuroxima Axeti- Solución de fosfato monobásico de amonio
lo SR-FA. 0,2 M - Disolver 23,0 g de fosfato monobásico de
amonio en 1 litro de agua.
CONSERVACIÓN Fase móvil - Solución de fosfato monobásico de
En envases inactínicos de cierre perfecto. amonio 0,2 M y metanol (62:38). Filtrar y desgasi-
ficar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
ENSAYOS sistema en 100. Cromatografía).
Identificación Preparación muestra - [NOTA: preparar inme-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. diatamente antes de su uso]. Pesar exactamente
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en alrededor de 10,0 mg Cefuroxima Axetilo y transfe-
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- rir a un matraz aforado de 50 ml, disolver en Fase
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- móvil, completar a volumen con Fase móvil y mez-
paración muestra se debe corresponder con el obte- clar.
nido en la Preparación estándar D. Preparación estándar A - Transferir 1,0 ml de
Preparación muestra a un matraz aforado de
Cristalinidad 100 ml y completar a volumen con Fase móvil.
Colocar partículas de Cefuroxima Axetilo en Preparación estándar B - Calentar a 60 ºC
aceite mineral, sobre un portaobjetos de vidrio. 5,0 ml de Preparación muestra durante 1 hora para
Examinar la mezcla empleando un microscopio obtener los ∆3isómeros.
óptico con luz polarizada: las partículas deben ser Preparación estándar C - Exponer 5,0 ml de
amorfas y no deben presentar birrefringencia o Preparación muestra a luz ultravioleta de 254 nm
posiciones de extinción cuando se gira la platina del durante 24 horas para obtener los isómeros E.
microscopio. Preparación estándar D - [NOTA: preparar
Determinación de agua <120> inmediatamente antes de su uso]. Pesar exactamen-
Titulación volumétrica directa. No más de te alrededor de 10,0 mg Cefuroxima Axetilo y trans-
1,5 %. ferir a un matraz aforado de 50 ml, disolver en Fase
móvil, completar a volumen con Fase móvil y mez-
clar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar las Preparaciones estándar A, B, C
y D y registrar las respuestas según se indica en
Procedimiento: los tiempos de retención relativos al
diastereoisómero A de cefuroxima axetilo (segundo
pico) deben ser aproximadamente 0,9 para el diaste-
reoisómero B de cefuroxima axetilo, 1,2 para los
∆3isómeros y 1,7 y 2,1 para los E isómeros; la reso-
lución R entre los picos de los diastereoisómeros A
y B en el cromatograma obtenido a partir de la
Preparación estándar D no debe ser menor de 1,5;
la resolución R entre los picos correspondientes al
diastereoisómero A y al ∆3isómeros no debe ser
menor de 1,5; la desviación estándar relativa de la
suma de los picos correspondientes a los diastere-
oisómeros A y B para seis inyecciones repetidas de
la Preparación estándar D no debe ser mayor de
2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo, volúmenes iguales (aproximadamen-
te 20 µl) de las Preparación estándar A, B, C y D y
la Preparación muestra, registrar los cromatogra-
mas y medir las respuesta de los picos principales.
Calcular la cantidad de C20H22N4O10S a partir de la
suma de las respuestas de los dos picos de los dias-
tereoisómeros, en la porción de Cefuroxima Axetilo
en ensayo, a partir de las respuestas de los picos de
cefuroxima axetilo obtenidos con la Preparación
muestra y la Preparación estándar D.
Determinación de agua <120>
CEFUROXIMA SÓDICA Titulación volumétrica directa. No más de
3,5 %.
NaO O
O Sustancias relacionadas
O O Sistema cromatográfico, Solución reguladora
N O NH2
de pH 3,4, Fase móvil, Solución de aptitud del
O N
H S
sistema y Aptitud del sistema - Proceder según se
N H H indica en Valoración.
OCH3
Solución muestra - Emplear la Preparación
muestra.
y enantiómero Solución estándar - Transferir 1,0 ml de Solu-
C16H15N4NaO8S PM: 446,4 56238-63-2 ción muestra a un matraz aforado de 100 ml, com-
pletar a volumen con agua y mezclar.
Definición - Cefuroxima Sódica es la Sal sódi- Procedimiento - Inyectar por separado en el
ca del ácido [6R-[6,7(Z)]]-3-[[(aminocarbonil) cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
oxi]metil]-7-[[2-furanil(metoxiimino)acetil]amino]- 20 µl) de la Solución muestra y la Solución están-
8-oxo-5-tia-1-azabiciclo[4.2.0]oct-2-eno-2- dar. Registrar el cromatograma de la Solución
carboxilico. Debe contener no menos de 96,0 por muestra durante al menos tres veces el tiempo de
ciento y no más de 102,0 por ciento de retención del pico de cefuroxima y medir las res-
C16H15N4NaO8S, calculado sobre la sustancia an- puestas de todos los picos. En el cromatograma
hidra y debe cumplir con las siguientes especifica- obtenido a partir de la Solución muestra, la respues-
ciones. ta del pico correspondiente a descarbamoilcefu-
Caracteres generales - Polvo blanco o amari- roxima no debe ser mayor a la respuesta del pico
llo claro. Ligeramente higroscópico. Fácilmente principal obtenido con la Solución estándar (1,0 %)
soluble en agua; soluble en metanol; muy poco y la respuesta de ninguna otra impureza individual
soluble en acetato de etilo, alcohol, cloroformo y debe ser mayor a la respuesta del pico principal
éter. obtenido con la Solución estándar (1,0 %). La
suma de las respuestas de todos los picos en el
Sustancia de referencia - Cefuroxima Sódi- cromatograma obtenido a partir de la Solución
ca SR-FA. muestra no debe ser mayor a tres veces la respuesta
CONSERVACIÓN del pico principal obtenido con la Solución están-
dar (3,0 %). Ignorar cualquier pico con una res-
En envases de cierre perfecto, a una temperatura puesta menor de 0,05 veces la respuesta del pico
no mayor de 25 ºC. principal obtenido con la Solución estándar
ENSAYOS (0,05 %).
Identificación Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Cuando en el rótulo se indique que Cefuroxima
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en Sódica es estéril, no debe contener más de 0,10 UE
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- por mg de Cefuroxima.
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre-
paración muestra se debe corresponder con el obte- Ensayos de esterilidad <370>
nido en la Preparación estándar. Cuando en el rótulo se indique que Cefuroxima
C - Debe responder a los ensayos para So- Sódica es estéril, debe cumplir con los requisitos
dio <410>. según se indica en Método de filtración por mem-
brana.
Determinación del pH <250>
Entre 5,5 y 8,5; determinado sobre una solución VALORACIÓN
preparada del siguiente modo: disolver 2,0 g de Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Cefuroxima Sódica en agua libre de dióxido de para cromatografía de líquidos con un detector
carbono y diluir a 20,0 ml con el mismo solvente. ultravioleta ajustado a 273 nm y una columna
Diluir 2,0 ml de esta solución a 20,0 ml con agua 12,5 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
libre de dióxido de carbono. por hexilsilano unido químicamente a partículas
Determinación de la rotación óptica <170> porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
Rotación específica: Entre +59º y +66º; deter- debe ser aproximadamente 1,5 ml por minuto.
minado sobre la sustancia anhidra. Solución reguladora de acetato pH 3,4 - Disol-
ver 6,01 g de ácido acético glacial y 0,68 g de ace-
tato de sodio en agua y diluir a 1 litro con el mismo
solvente.
Fase móvil - Solución reguladora de acetato
pH 3,4 y acetonitrilo (99:1). Filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
ma en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 25 mg de Cefuroxima Sódica SR-FA y
transferir a un matraz aforado de 25 ml, disolver en
agua, completar a volumen con el mismo solvente y
mezclar.
Preparación muestra – Pesar exactamente alre-
dedor de 25 mg de Cefuroxima Sódica y transferir a
un matraz aforado de 25 ml, disolver en agua, com-
pletar a volumen con el mismo solvente y mezclar.
Solución de aptitud del sistema - Calentar 20 ml
de la Preparación estándar en un baño de agua a
60 ºC durante 10 minutos. Enfriar e inyectar de
inmediato.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: la resolución R entre los picos de
cefuroxima sódica y descarbamoilcefuroxima no
debe ser menor de 2,0.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en porcentaje de C16H15N4NaO8S en la
porción de Cefuroxima Sódica en ensayo.
ROTULADO
Cuando Cefuroxima Sódica está destinada para la
preparación de formas farmacéuticas inyectables, se
debe indicar en el rótulo que es estéril.
Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
CELULOSA más de 7,0 % de su peso.
MICROCRISTALINA <PDG> Sustancias solubles en agua
Agitar 5,0 g de Celulosa Microcristalina con
HO 80 ml de agua durante 10 minutos, filtrar al vacío
con un papel de filtro apropiado y transferir el fil-
O
HO OH trado a una cápsula de evaporación previamente
OH pesada. Evaporar a sequedad en un baño de agua y
O O secar a 105 °C durante 1 hora. Enfriar en un dese-
OH cador y pesar. La diferencia entre el peso del resi-
OH
duo y el peso obtenido con un blanco no debe ser
O
H mayor de 12,5 mg (0,25 %).
OH
n/2 Sustancias solubles en éter
Proceder según se indica en Sustancias solubles
C6nH10n +2O5n + 1 9004-34-6 en éter en Celulosa polvo: la diferencia entre el
Definición - Celulosa Microcristalina es celulo- peso del residuo y el peso obtenido con un blanco
sa parcialmente depolimerizada y purificada prepa- no debe ser mayor de 5,0 mg (0,05 %).
rada a partir de -Celulosa, obtenida en forma de Determinación del residuo de ignición <270>
pulpa a partir de materiales vegetales fibrosos con No más de 0,1 %.
ácidos minerales. Celulosa Microcristalina debe
cumplir con las siguientes especificaciones. Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método II.
Caracteres generales - Polvo blanco o casi
blanco, fino o granuloso. Prácticamente insoluble Límite de metales pesados <590>
en acetona, ácidos diluidos, agua, alcohol, solución Método II. No más de 0,001 %.
de hidróxido de sodio al 5 % y tolueno. Control higiénico de productos no obligato-
CONSERVACIÓN riamente estériles <90>
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
En envases de cierre perfecto. ya según se indica en 90. Control higiénico de pro-
ENSAYOS ductos no obligatoriamente estériles en Celulosa
polvo.
Identificación
A - Debe cumplir con el ensayo de Identifica- ROTULADO
ción A en Celulosa polvo. Indicar en el rótulo el grado de polimerización.
B - Pesar exactamente alrededor de 1,3 g de Ce-
lulosa Microcristalina y proceder según se indica en
el ensayo de Identificación B en Celulosa polvo. El
grado de polimerización debe ser mayor de 350.
Conductividad <70>
A 5 g de Celulosa Microcristalina agregar 40 ml
de agua, agitar durante 20 minutos y centrifugar.
Determinar la conductividad del sobrenadante luego
de que la lectura obtenida sea estable con un con-
ductímetro previamente calibrado con una solución
de calibración estándar de cloruro de potasio de
100 S cm-1. Determinar la conductividad del agua
empleada en la preparación de la sustancia en ensa-
yo: la conductividad del sobrenadante no debe ex-
ceder a la del agua en más de 75 S cm-1.
Determinación del pH <250>
El pH del sobrenadante obtenido en el ensayo de
Conductividad debe estar comprendido entre 5,0 y
7,5.
Pérdida por secado <680>
cosímetro apropiado y calcular la viscosidad ci-
CELULOSA POLVO <PDG> nemática 2 por la siguiente fórmula:
HO t2 k2
en la cual t2 es el tiempo en segundos que tarda en
O
HO OH escurrir el volumen del líquido y k2 es la constante
OH del viscosímetro (ver Calibración de los viscosíme-
O O tros de tipo capilar en 190. Determinación de la
OH
OH viscosidad). Determinar la viscosidad relativa rel
en la porción de Celulosa Polvo en ensayo por la
O
H fórmula siguiente:
OH
n/2 1/2
C6nH10n +2O5n + 1 9004-34-6 Determinar la viscosidad intrínseca []c por medio
de la tabla correspondiente (ver Tabla de viscosidad
Definición - Celulosa Polvo es -Celulosa, pu-
intrínseca en Tablas) y calcular el grado de polime-
rificada y desintegrada mecánicamente, obtenida en
rización Gp por la fórmula siguiente:
forma de pulpa a partir de materiales vegetales
fibrosos. Celulosa Polvo debe cumplir con las 95 C
siguientes especificaciones.
P100 b / 100
Caracteres generales - Polvo blanco o casi
blanco, fino o granuloso. Poco soluble en solución en la cual P es el peso en g de la porción de Celulo-
de hidróxido de sodio al 5 %; prácticamente insolu- sa Polvo en ensayo y b es el valor obtenido en por-
ble en acetona, ácidos diluidos, agua, alcohol, to- centaje en el ensayo Pérdida por secado: el grado
lueno y en la mayoría de los solventes orgánicos. de polimerización debe ser mayor de 440.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 310 nm y una columna de
30 cm 4,0 mm con fase estacionaria constituida
por una capa monomolecular de aminopropilsilano
químicamente unido a un soporte de gel de sílice
poroso, de 10 µm de diámetro. El caudal debe ser
aproximadamente 2,0 ml por minuto.
Fase móvil - Acetato de etilo, metanol, dimetil-
formamida y agua desgasificada (25:16:5:5). Filtrar
y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Cisplatino SR-FA en dime-
tilformamida para obtener una solución de aproxi-
madamente 1 mg por ml. Emplear esta solución
dentro de la hora siguiente a su preparación.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Cisplatino, transferir a un ma-
traz aforado de 100 ml, disolver en dimetilforma-
mida, completar a volumen con el mismo solvente y
mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
la respuesta de los picos según se indica en Proce-
dimiento: la desviación estándar relativa para inyec-
ciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
40 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de Cl2H6N2Pt en la porción de Cisplatino
en ensayo.
CITARABINA 0-10 100 0 Equilibración
10-20 1000 0100 Gradiente
Lineal
NH2
20-25 0 100 Isocrático
25-30 0100 1000 Gradiente
N
Lineal
30-50 100 0 Reequilibración
O N
HO
O Solución reguladora pH 7,0 - Preparar una so-
OH lución de fosfato monobásico de sodio y fosfato
dibásico de sodio para obtener concentraciones de
OH 0,01 M de cada uno de ellos. Ajustar a pH 7,0 con
hidróxido de sodio 0,1 M o ácido fosfórico, según
C9H13N3O5 PM: 243,2 147-94-4
corresponda.
Definición - Citarabina es 4-Amino- Solución A - Solución reguladora pH 7,0 y me-
1--D-arabinofuranosil-2(1H)-pirimidinona. Debe tanol (49:1). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajus-
contener no menos de 99,0 por ciento y no más de tes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
100,5 por ciento de C9H13N3O5, calculado sobre la Cromatografía). [NOTA: preparar en el día de su
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes uso].
especificaciones. Solución B - Solución reguladora pH 7,0 y me-
tanol (7:3). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
o casi blanco. Funde aproximadamente a 215 °C.
tografía). [NOTA: preparar en el día de su uso].
Fácilmente soluble en agua; muy poco soluble en
Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
alcohol y cloruro de metileno.
lución A y Solución B según se indica en Sistema
Sustancias de referencia - Citarabina SR-FA. cromatográfico.
Uracilarabinósido SR-FA Solución de aptitud del sistema - Disolver can-
tidades apropiadas de uridina, Uracilarabinósi-
CONSERVACIÓN
do SR-FA y Citarabina SR-FA en agua para obtener
En envases inactínicos de cierre perfecto. una solución de aproximadamente 0,02; 0,02 y
ENSAYOS 5,0 mg por ml, respectivamente.
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
Identificación tamente pesada de Citarabina SR-FA en agua y
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. diluir cuantitativamente y en etapas, si fuera necesa-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en rio, con agua para obtener una solución de aproxi-
Pureza cromatográfica. El tiempo de retención del madamente 4 µg por ml.
pico correspondiente a citarabina en el cromato- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
grama obtenido a partir de la Solución muestra se de 25 mg de Citarabina, transferir a un matraz afo-
debe corresponder con el obtenido con la Solución rado de 5,0 ml, disolver y completar a volumen con
estándar. agua y mezclar. [NOTA: preparar en el día de su
Determinación de la rotación óptica <170> uso].
Rotación específica: Entre +154° y +160°, con Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
respecto a la sustancia seca. Cromatografiar la Solución aptitud del sistema y
Solución muestra: 10 mg por ml. registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: los tiempos de retención relati-
Pureza cromatográfica vos deben ser aproximadamente 0,55 para uracilo;
Sistema Cromatográfico - Emplear un equipo 1,14 para uridina; 1,62 para uracilarabinósido y 1,0
para cromatografía de líquidos con un detector para citarabina; la resolución R entre los picos de
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de citarabina y uridina no debe ser menor de 1,25.
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
por octadecilsilano químicamente unida a partículas respuestas de los picos según se indica en Procedi-
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El miento: la desviación estándar relativa para inyec-
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu- ciones repetidas no debe ser mayor de 3,0 %.
to. Programar el cromatógrafo del siguiente modo: Procedimiento - Inyectar por separado en el
Tiempo Solución A Solución B Etapa cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
(minutos) (% v/v) (% v/v) 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
tra, registrar los cromatogramas y medir las res- correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
puestas de todos los picos. Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
Calcular la cantidad en porcentaje de uracilara- 24,32 mg de C9H13N3O5.
binósido en la porción de Citarabina en ensayo, por
la fórmula siguiente:
500(C/P)(ri/1,34rE)
en la cual C es la concentración en mg por ml de
Citarabina SR-FA en la Solución estándar; P es el
peso en mg de Citarabina empleado para preparar la
Solución muestra; 1,34 es el factor de respuesta
relativo para uracilarabinósido; ri es la respuesta del
pico de uracilarabinósido en la Solución muestra y
rE es la respuesta del pico de Citarabina SR-FA en
la Solución estándar. No debe contener más de
0,30 % de uracilarabinósido.
Calcular el porcentaje de todas las otras impure-
zas en la porción de Citarabina en ensayo, por la
fórmula siguiente:
500(C/P)(ri/FrE)
en la cual ri es la respuesta del pico de cada impure-
za individual en la Solución muestra; F es el factor
de respuesta relativo, el cual es igual a 2,5 para el
pico de uracilo (con un tiempo de retención relativo
de 0,55), igual a 1,5 para los picos con tiempos de
retención relativos de 0,38; 0,43 y 1,14 e igual a 1,0
para todos los otros picos que pudieran aparecer.
Los demás términos son los definidos anteriormen-
te. No debe contener más de 0,10 % de cualquier
impureza individual y no más de 0,30 % de impure-
zas totales, incluyendo el pico de uracilarabinósido.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,5 %.
Pérdida por secado <680>
Secar alrededor de 250 mg de Citarabina exac-
tamente pesados, sobre pentóxido de fósforo a
60 °C durante 3 horas, a una presión que no exceda
los 2 mm Hg: no debe perder más de 1,0 % de su
peso.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indique que Citarabina es
estéril, no debe contener más de 0,07 Unidades de
Endotoxina por mg de Citarabina.
Ensayos de esterilidad <370>
Cuando en el rótulo se indique que Citarabina es
estéril, debe cumplir con los requisitos.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Cita-
rabina y disolver en 60 ml de ácido acético glacial.
Titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determi-
nando el punto final potenciométricamente. Reali-
zar una determinación con un blanco y hacer las
de agua y transferir el ácido a un tubo de Nessler: el
CÍTRICO color obtenido no debe ser más oscuro que el de un
ANHIDRO, ÁCIDO <PDG> volumen similar al de la Solución de comparación
K (ver 350. Sustancias fácilmente carbonizables).
HO O Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de sulfato
HO OH OH Solución estándar - A 4,5 ml de solución de
O O sulfato (10 ppm) (SL1), agregar 3 ml de solución de
cloruro de bario al 25 %, agitar y dejar reposar
durante 1 minuto. A 2,5 ml de esta suspensión
C6H8O7 PM: 192,1 77-92-9
agregar 15 ml de solución de sulfato (10 ppm) (SL)
Definición - Ácido Cítrico Anhidro es Áci- y 0,5 ml de ácido acético 5 N y mezclar.
do 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxílico. Debe Solución madre de la muestra - Disolver 2,0 g
contener no menos de 99,5 por ciento ni más de de Ácido Cítrico Anhidro en 10 ml de agua, diluir
100,5 por ciento de C6H8O7 calculado sobre la con agua a 30 ml y mezclar.
sustancia anhidra y debe cumplir con las si- Solución muestra - A 4,5 ml de solución de sul-
guientes especificaciones. fato (10 ppm) (SL1) agregar 3 ml de solución de
Caracteres generales - Polvo blanco crista- cloruro de bario al 25 %, agitar y dejar reposar
lino, cristales o gránulos incoloros. Eflorescente durante 1 minuto. A 2,5 ml de esta suspensión
en aire seco. Funde aproximadamente a 153 °C agregar 15 ml de Solución madre de la muestra y
con descomposición. Muy soluble en agua; 0,5 ml de ácido acético 5 N y mezclar.
fácilmente soluble en alcohol; moderadamente Luego de 5 minutos, si la Solución muestra pre-
soluble en éter. senta opalescencia, esta no debe ser más intensa que
la de la Solución estándar (0,015 %).
Sustancia de referencia - Ácido Cítri-
co SR-FA. Límite de metales pesados <590>
Método I. No más de 0,001 %.
CONSERVACIÓN
Límite de ácido oxálico
En envases de cierre perfecto. NOTA: preparar la Solución estándar y la So-
ENSAYOS lución muestra en forma simultánea.
Disolver 800 mg de Ácido Cítrico Anhidro en
Identificación 4 ml de agua. Agregar 3 ml de ácido clorhídrico,
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 1 g de granalla de cinc, calentar a ebullición durante
B - A una mezcla de 1 ml de ácido acético gla- 1 minuto y dejar reposar durante 2 minutos. Trans-
cial y 3 ml de piridina, agregar 5 mg de Ácido ferir el sobrenadante a un tubo de ensayo que con-
Cítrico Anhidro: se debe desarrollar color rojo. tenga 0,25 ml de solución de clorhidrato de fenil-
C - Disolver 0,5 g de Ácido Cítrico Anhidro en hidracina (1 en 100) y calentar a ebullición. Enfriar
5 ml de agua y agregar aproximadamente 7 ml de rápidamente, transferir a una probeta y agregar
hidróxido de sodio 1 N para neutralizar la solución. igual volumen de ácido clorhídrico y 0,25 ml de
Agregar 10 ml de cloruro de calcio (SR) y calentar solución de ferricianuro de potasio (1 en 20). Agi-
a ebullición: se debe formar un precipitado blanco. tar y dejar reposar durante 30 minutos. Proceder
Determinación de agua <120> del mismo modo con 4 ml de una solución de
Titulación volumétrica directa. No más de 0,10 mg de ácido oxálico por ml, equivalente a
1,0 % 0,0714 mg de ácido oxálico anhidro por ml. Luego
de 5 minutos, la Solución muestra debe presentar
Sustancias fácilmente carbonizables <350>
coloración rosada y no debe ser más intensa que la
Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Ácido
del control (0,036 %).
Cítrico Anhidro pulverizado, transferir a un tubo de
ensayo de 175 × 22 mm, previamente enjuagado Límite de aluminio
con 10 ml de ácido sulfúrico (SR) y secado. Agre- NOTA: cuando en el rótulo se indica que Ácido
gar 10 ml de ácido sulfúrico (SR), agitar hasta di- Cítrico no está destinado a la preparación de solu-
solver y sumergir en baño de agua a 90 ± 1 °C du- ciones para diálisis, puede estar exento de este re-
rante 60 ± 0,5 minutos, manteniendo el nivel del quisito.
ácido por debajo del nivel de agua durante todo el Solución reguladora de acetato - Disolver 50 g
calentamiento. Enfriar el tubo empleando corriente de acetato de amonio en 150 ml de agua, ajustar con
ácido acético glacial a pH 6,0, completar con agua a VALORACIÓN
250 ml y mezclar. Pesar exactamente alrededor de 550 mg de Áci-
Solución blanco - Preparar una mezcla de 10 ml do Cítrico Anhidro, disolver en 50 ml de agua,
de Solución reguladora de acetato y 100 ml de agregar 0,5 ml de fenolftaleína (SR1) y titular con
agua. Realizar una extracción con dos porciones de hidróxido de sodio 1 N (SV). Realizar una deter-
20 ml y una de 10 ml de una solución de 8-
minación con un blanco y hacer las correcciones
hidroxiquinolina en cloroformo al 0,5 %. Reunir necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
los extractos clorofórmicos en un matraz aforado de hidróxido de sodio 1 N equivale a 64,03 mg de
50 ml, completar a volumen con cloroformo y mez- C6H8O7.
clar.
Solución estándar de aluminio - Transferir ROTULADO
352 mg de sulfato de aluminio y potasio a un ma- Indicar en el rótulo cuando Ácido Cítrico An-
traz aforado de 100 ml, agregar una porción de agua hidro esté destinado a la preparación de formas
y agitar hasta disolver. Agregar 10 ml de ácido farmacéuticas parenterales.
sulfúrico diluido, completar a volumen con agua y
mezclar. Inmediatamente antes de su empleo,
transferir 1 ml de esta solución a un matraz aforado
de 100 ml, completar a volumen con agua y mez-
clar.
Solución estándar - Preparar una mezcla de
2,0 ml de Solución estándar de aluminio, 10 ml de
Solución reguladora de acetato y 98 ml de agua.
Realizar una extracción con dos porciones de 20 ml
y una de 10 ml de una solución de 8-
hidroxiquinolina en cloroformo al 0,5 %. Reunir
los extractos clorofórmicos en un matraz aforado de
50 ml, completar a volumen con cloroformo y mez-
clar.
Solución muestra - Disolver 20,0 g de Ácido
Cítrico Anhidro en 100 ml de agua y agregar 10 ml
de Solución reguladora de acetato. Realizar una
extracción con dos porciones de 20 ml y una de
10 ml de una solución de 8-hidroxiquinolina en
cloroformo al 0,5 %. Reunir los extractos clo-
rofórmicos en un matraz aforado de 50 ml, comple-
tar a volumen con cloroformo y mezclar.
Procedimiento - Medir la intensidad de la flou-
rescencia de la Solución estándar y de la Solución
muestra en un fluorómetro a 518 nm, empleando
una longitud de onda de excitación a 392 nm (ver
450. Espectrofotometría de fluorescencia). Emple-
ar la Solución blanco y hacer las correcciones nece-
sarias: la flourescencia de la Solución muestra no
debe ser mayor a la de la Solución estándar (0,2 g
por g).
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método II.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se declara que Ácido Cítri-
co está destinado a la preparación de formas far-
macéuticas de administración parenteral debe con-
tener no más de 0,5 Unidades de Endotoxina por
mg.
CÍTRICO MONOHIDRATO, Límite de ácido oxálico
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
ÁCIDO <PDG> ya según se indica en Límite de ácido oxálico en
Ácido Cítrico Anhidro.
HO O Límite de aluminio
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
ya según se indica en Límite de aluminio en Ácido
HO OH
Cítrico Anhidro.
OH
O O Impurezas orgánicas volátiles <520>
. H2O
Método II.
C6H10O8 PM: 210,14 77-92-9 Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
Definición - Ácido Cítrico Monohidrato es
ya según se indica en 330. Ensayo de endotoxinas
Ácido 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxílico
bacterianas en Ácido Cítrico Anhidro.
monohidratado, debe contener una molécula de
agua de hidratación. Debe contener no menos VALORACIÓN
de 99,5 por ciento ni más de 100,5 por ciento de Pesar exactamente alrededor de 550 mg de Áci-
C6H8O7 calculado sobre la sustancia anhidra y do Cítrico Monohidrato, disolver en 50 ml de agua,
debe cumplir con las siguientes especificacio- agregar 0,5 ml de fenolftaleína (SR1) y titular con
nes. hidróxido de sodio 1 N (SV). Realizar una deter-
Caracteres generales - Polvo blanco crista- minación con un blanco y hacer las correcciones
lino, cristales o gránulos incoloros. Muy soluble necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
en agua; fácilmente soluble en alcohol; modera- hidróxido de sodio 1 N equivale a 64,03 mg de
damente soluble en éter. C6H8O7.
Sustancia de referencia - Ácido Cítri- ROTULADO
co SR-FA. Indicar en el rótulo cuando Ácido Cítrico Mo-
CONSERVACIÓN nohidrato esté destinado a la preparación de formas
farmacéuticas parenterales.
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Debe cumplir con el ensayo de Identifica-
ción B en Ácido cítrico Anhidro.
C - Debe cumplir con el ensayo de Identifica-
ción C en Ácido cítrico Anhidro.
Determinación del agua <120>
Titulación volumétrica directa. Entre 7,5 % y
9,0 %.
Sustancias fácilmente carbonizables <350>
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
ya según se indica en 350. Sustancias fácilmente
carbonizables en Ácido Cítrico Anhidro.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de sulfato
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
ya según se indica en Límite de sulfato en Ácido
Cítrico Anhidro.
Límite de metales pesados <590>
Método I. No más de 0,001 %.
Entre 8,0 y 10,0, determinado sobre una suspen-
CLARITROMICINA sión 1 en 500 en una mezcla de agua y metanol
(19:1).
O
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 205 nm, una columna de
10 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. La
temperatura de la columna se debe mantener a
40 °C y el caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml
por minuto. Programar el cromatógrafo del siguien-
te modo:
Tiempo Solución A Solución B Etapa
(minutos) (%) (%)
0-32 75 40 25 60 Gradiente
lineal
32-34 40 60 Isocrático
34-36 40 75 60 25 Gradiente
lineal
36-42 75 25 Isocrático
Solución A - Disolver 4,76 g de fosfato mono-
básico de potasio en agua, ajustar a pH 4,4 con
ácido fosfórico diluido 1 en 10 o hidróxido de pota-
sio al 45 % p/v, según corresponda, y completar a
1 litro con agua. Filtrar.
Solución B - Acetonitrilo.
Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
lución A y Solución B, según se indica en Sistema
cromatográfico. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 75 mg de Claritromicina SR-FA, transfe-
rir a un matraz aforado de 50 ml, disolver con 25 ml
de acetonitrilo, completar a volumen con agua y
mezclar.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 75 mg de Claritromicina, transferir a un
matraz aforado de 50 ml, disolver con 25 ml de
100 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
CLOFAZIMINA [NOTA: preparar esta solución en el día de su uso].
Solución estándar A - Disolver una cantidad
Cl exactamente pesada de Clofazimina SR-FA en
cloruro de metileno y mezclar para obtener una
solución de aproximadamente 0,5 mg por ml.
CH3 Solución estándar B - Diluir una porción de la
Solución estándar A cuantitativamente con cloruro
N N CH3
de metileno para obtener una solución de aproxi-
madamente 0,25 mg por ml.
N N Cl Solución estándar C - Diluir una porción de la
H
Solución estándar A cuantitativamente con cloruro
de metileno para obtener una solución de aproxi-
madamente 0,1 mg por ml.
C27H22Cl2N4 PM: 473,4 2030-63-9
Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
Definición - Clofazimina es N,5-Bis(4- tamente pesada de Clofazimina en cloruro de meti-
clorofenil)-3,5-dihidro-3-[(1-metiletil)imino]-2- leno para obtener una solución de aproximadamente
fenacinamina. Debe contener no menos de 98,5 50 mg por ml.
por ciento y no más de 101,5 por ciento de Procedimiento - Exponer la placa a vapores de
C27H22Cl2N4, calculado sobre la sustancia seca y amoníaco durante 30 minutos suspendiendo la placa
debe cumplir con las siguientes especificaciones. en una cámara cromatográfica que contenga
aproximadamente 25 ml de Solución de amoníaco y
Caracteres generales - Cristales de color rojo
evitando que la placa entre en contacto con el líqui-
oscuro. Funde aproximadamente a 217 ºC, con
do. Aplicar por separado sobre la placa 5 µl de la
descomposición. Soluble en benceno y cloroformo;
Solución muestra y 5 µl de las Soluciones estándar
moderadamente soluble en acetato de etilo, acetona
A, B y C. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
y en alcohol; prácticamente insoluble en agua.
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
Presenta polimorfismo.
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
Sustancia de referencia - Clofazimina SR-FA. de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y secar al aire.
CONSERVACIÓN
Examinar la placa bajo luz ultravioleta a 254 nm:
En envases inactínicos de cierre perfecto, a tem- ninguna mancha secundaria en el cromatograma
peratura ambiente. obtenido a partir de la Solución muestra debe ser
mayor en tamaño e intensidad que la mancha prin-
ENSAYOS cipal obtenida con la Solución estándar A (0,1 %) y
Identificación la suma de las intensidades de las manchas secunda-
A - Absorción infrarroja <460>. En solución. rias en el cromatograma obtenido a partir de la
Emplear una solución al 5% en cloruro de metileno. Solución muestra no debe ser mayor de 2,0%.
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en Pérdida por secado <680>
Pureza cromatográfica. El valor de Rf de la man- Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
cha principal en el cromatograma obtenido a partir más de 0,5 % de su peso.
de la Solución muestra debe ser similar al obtenido
con la Solución estándar A. VALORACIÓN
Determinación del residuo de ignición <270> Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Clo-
No más de 0,1 %. fazimina, transferir a un erlenmeyer y disolver en
5 ml de cloroformo con la ayuda de calor si fuera
Pureza cromatográfica necesario. Agregar 20 ml de acetona y 5 ml de
Fase estacionaria - Emplear una placa para ácido acético glacial y titular con ácido perclórico
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- 0,1 N (SV). Determinar el punto final potenciomé-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- tricamente, empleando un electrodo de vidrio y un
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm electrodo de calomel con una solución saturada de
de espesor. cloruro de potasio como puente salino y gel de agar
Fase móvil - Cloruro de metileno y alcohol como soporte. Realizar una determinación con un
n-propílico (10:1). blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Solución de amoníaco - Transferir 1 ml de Volumetría). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N
hidróxido de amonio a un matraz aforado de equivale a 47,34 mg de C27H22Cl2N4.
Solución muestra - Emplear la Preparación
CLOMIFENO, CITRATO DE muestra según se indica en Valoración.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
O O
Cl N CH3 aproximadamente 50 µl de Solución muestra,
OH
CH3
O registrar el cromatograma y medir las respuestas de
OH
los picos principales. Calcular el porcentaje de
HO
O isómero Z en la porción de Citrato de Clomifeno en
HO ensayo, relacionando la respuesta del pico de
isómero Z con la suma de las respuestas de todos
los picos. No debe contener menos de 30,0 ni más
C26H28ClNO . C6H8O7 PM: 598,1 50-41-9 de 50,0 % de isómero Z.
Definición - Citrato de Clomifeno es Citrato de Sustancias relacionadas
2-[4-(2-cloro-1,2-difeniletenil)fenoxi]-N,N- Fase móvil y Solución de resolución - Proceder
dietiletanamina. Debe contener no menos de 98,0 según se indica en Valoración.
por ciento y no más de 102,0 por ciento de una Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
mezcla de los isómeros geométricos E y Z de para cromatografía de líquidos con un detector
C26H28ClNO . C6H8O7, calculado sobre la sustancia ultravioleta ajustado a 290 nm y una columna de
anhidra. Debe contener no menos de 30,0 por 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
ciento y no más de 50,0 por ciento del Isómero Z. por butilsilano químicamente unido a partículas
Debe cumplir con las siguientes especificaciones. porosas de sílice de 5 a 10 µm de diámetro. El
Caracteres generales - Polvo blanco o caudal debe ser de aproximadamente 1,0 ml por
amarillo pálido. Inodoro. Fácilmente soluble en minuto.
metanol; moderadamente soluble en alcohol; poco Solución estándar - Disolver una cantidad
soluble en agua y cloroformo; insoluble en éter. exactamente pesada de Citrato de Clomifeno SR-
FA en Fase móvil y diluir cuantitativamente y en
Sustancias de referencia - Citrato de etapas, si fuera necesario, con Fase móvil para
Clomifeno SR-FA. Impureza A de Clomifeno SR- obtener una solución de aproximadamente 1,0 µg
FA: Clorhidrato de (E,Z)-2-[4-(1,2- por ml.
difeniletenil)fenoxi]-N,N-dietiletanamina. Solución muestra - Emplear la Preparación
CONSERVACIÓN muestra según se indica en Valoración.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
En envases bien cerrados. Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
ENSAYOS
Procedimiento: los tiempos de retención relativos
Identificación deben ser aproximadamente 0,9 para la impureza A
A - Debe cumplir con los requisitos según se de clomifeno, 1,0 para el isómero Z y 1,2 para el
indica en 490. Identificación de bases orgánicas isómero E; la resolución, R entre la impureza A de
nitrogenadas. clomifeno y el isómero Z del citrato de clomifeno
B - Absorción ultravioleta <470>. no debe ser menor de 1,0; la resolución R entre el
Solvente: ácido clorhídrico 0,1 N. isómero Z y el isómero E no debe ser menor de 1,5.
Concentración: 20 µg por ml. Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
C - Una solución debe responder a los ensayos respuestas de los picos según se indica en
para Citrato <410>. Procedimiento: la eficiencia de la columna no debe
ser menor de 2.000 platos teóricos para el isómero
Determinación de agua <120>
E; el factor de asimetría para el pico del isómero E
Titulación volumétrica directa. No más de
no debe ser mayor de 3; la desviación estándar
1,0 %.
relativa de la respuesta de ambos isómeros para
Límite de metales pesados <590> inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Método II. No más de 0,002 %. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
aproximadamente 50 µl de la Solución muestra,
Contenido de isómero Z
registrar el cromatograma y medir las respuestas de
Sistema cromatográfico, Fase móvil,
los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza,
Preparación estándar, Solución de resolución y
en la porción de Citrato de Clomifeno en ensayo,
Aptitud del sistema - Proceder según se indica en
relacionando la respuesta del pico de cada impureza
Valoración.
individual con la suma de todos los picos. No debe
contener más de 2,0 % de impureza A de clomifeno 2.000 platos teóricos para el isómero E; el factor de
ni más de 0,5 % de ninguna impureza individual y asimetría para el pico del isómero E no debe ser
la suma de todas las impurezas no debe ser mayor mayor de 3; la desviación estándar relativa de la
de 2,0 %. respuesta de ambos isómeros para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Método III.
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Solvente: dimetilsulfóxido.
50 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
VALORACIÓN muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
[NOTA :emplear material de vidrio inactínico]. cantidad de Citrato de 2-[4-(2-cloro-1,2-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo difeniletenil)fenoxi]-N,N-dietiletanamina en la
para cromatografía de líquidos con un detector porción de Citrato de Clomifeno en ensayo, a partir
ultravioleta ajustado a 233 nm y una columna de de las sumas de las respuestas de los picos de los
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida isómeros E y Z en la Preparación muestra y la
por butilsilano químicamente unido a partículas Preparación estándar.
porosas de sílice de 5 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser de aproximadamente 1,0 ml por
minuto.
Fase móvil - Metanol, agua y trietilamina
(55:45:0,3). Ajustar con ácido fosfórico a pH 2,5.
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución de resolución - Disolver cantidades
exactamente pesadas de Impureza A de
Clomifeno SR-FA y de Citrato de Clomifeno SR-
FA en Fase móvil para obtener una solución de
aproximadamente 0,002 y 0,05 mg por ml,
respectivamente.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Citrato de Clomifeno SR-
FA en Fase móvil y diluir con Fase móvil
cuantitativamente y en etapas, si fuera necesario,
para obtener una solución de aproximadamente
0,05 mg por ml.
Preparación muestra - Transferir
aproximadamente 50 mg de Citrato de Clomifeno
exactamente pesados a un matraz aforado de
100 ml, disolver en Fase móvil, completar a
volumen con Fase móvil y mezclar. Transferir
10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: los tiempos de retención relativos
deben ser aproximadamente 0,9 para la impureza A
de clomifeno, 1,0 para el isómero Z y 1,2 para el
isómero E; la resolución R entre la impureza A de
clomifeno y el isómero Z no debe ser menor de 1,0;
la resolución R entre el isómero Z y el isómero E no
debe ser menor de 1,5. Cromatografiar la
Preparación estándar y registrar las respuestas de
los picos según se indica en Procedimiento: la
eficiencia de la columna no debe ser menor de
Entre 3,5 y 5,0; determinado sobre una solución
CLOMIPRAMINA, de aproximadamente 100 mg por ml en agua.
CLORHIDRATO DE Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,002 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
Pureza cromatográfica
[NOTA: preparar las soluciones en el momento
de su uso y protegerlas de la luz].
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
C19H23ClN2 . HCl PM: 351,3 17321-77-6 grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
Definición - Clorhidrato de Clomipramina es Fase móvil - Acetato de etilo, acetona y amon-
Monoclorhidrato de 3-cloro-5-[3-(dimetilamino) íaco concentrado (75:25:5).
propil]-10,11-dihidro-5H-dibenz[b,f] azepina. Debe Solución muestra A - Disolver 100 mg de Clor-
contener no menos de 99,0 por ciento y no más de hidrato de Clomipramina en metanol y diluir con el
101,0 por ciento de C19H23ClN2 . HCl, calculado mismo solvente a 5 ml.
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- Solución muestra B - Diluir 1 ml de la Solución
guientes especificaciones. muestra A con metanol a 10 ml.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Solución estándar A - Disolver 20 mg de Clor-
o ligeramente amarillo, algo higroscópico. Fácil- hidrato de Clomipramina SR-FA en metanol y di-
mente soluble en agua y cloruro de metileno; solu- luir con el mismo solvente a 10 ml.
ble en alcohol; prácticamente insoluble en éter. Solución estándar B - Disolver 20 mg de Clor-
Presenta polimorfismo. hidrato de Imipramina en metanol y diluir con el
mismo solvente a 100 ml.
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Clo- Solución estándar C - Diluir 1 ml de la Solu-
mipramina SR-FA. ción muestra B con metanol a 50 ml.
CONSERVACIÓN Solución estándar D - Diluir 1 ml de la Solu-
ción estándar B con metanol a 5 ml. A 1 ml de esta
En envases de cierre perfecto. solución, agregar 1 ml de la Solución estándar C.
ENSAYOS Revelador - Preparar una solución de dicromato
de potasio al 0,5 % en una solución de ácido sulfú-
Identificación rico al 20 %.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en placa 5 µl de las Soluciones muestra A y B y 5 µl de
Pureza cromatográfica. La mancha principal en el las Soluciones estándar A, B, C y D. Dejar secar las
cromatograma obtenido a partir de la Solución aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
muestra B se debe corresponder en valor de Rf, que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
intensidad y tamaño, a la mancha principal obtenida damente tres cuartas partes de la longitud de la
con la Solución estándar A. placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el fren-
C - Disolver 50 mg de Clorhidrato de Clomi- te del solvente y dejar secar al aire. Pulverizar
pramina en 5 ml de agua y agregar 1 ml de amonía- sobre la placa con Revelador. Examinar la placa
co (SR). Mezclar, dejar reposar durante 5 minutos inmediatamente. La mancha correspondiente a
y filtrar. Acidificar el filtrado con ácido nítrico imipramina en el cromatograma obtenido a partir de
diluido y agregar 3 gotas de nitrato de plata (SR): la Solución muestra A debe ser menos intensa que
debe responder al ensayo para Cloruro <410>. la obtenida con la Solución estándar B (1,0 %).
Determinación del punto de fusión <260> Ninguna mancha secundaria, a excepción de la
Entre 191 y 195 ºC. mancha principal y de la mancha correspondiente a
la imipramina, debe ser más intensa que la obtenida
Determinación del pH <250>
con la Solución estándar C (0,2 %). El ensayo sólo
es válido si el cromatograma obtenido con la Solu-
ción estándar D presenta dos manchas principales
completamente separadas.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de
Clorhidrato de Clomipramina, disolver en 50 ml de
alcohol y agregar 1 ml de ácido clorhídrico 0,1 N.
Titular con hidróxido de sodio 0,1 N (SV), determi-
nando el punto final potenciométricamente. Regis-
trar el volumen agregado entre los dos puntos de
inflexión. Realizar una determinación con un blan-
co y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de hidróxido de sodio
0,1 N equivale a 35,13 mg de C19H23ClN2 . HCl.
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
CLONAZEPAM to.
Solución reguladora - Pesar exactamente alre-
H O dedor de 6,6 g de fosfato dibásico de amonio an-
N
hidro, transferir a un matraz de 1 litro y disolver en
950 ml de agua. Ajustar a pH 8,0 con ácido fosfó-
rico 1 N o hidróxido de sodio 1 N, completar a
O2N N
volumen con agua y mezclar.
Fase móvil - Solución reguladora, metanol y te-
Cl trahidrofurano (48:42:10). Filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver 100. Cromatograf-
ía)
Diluyente - Agua, metanol y tetrahidrofurano
C15H10ClN3O3 PM: 315,7 1622-61-3 (48:42:10).
Solución estándar A - Transferir 1,0 ml de la
Definición - Clonazepam es 5-(2-Clorofenil)- Preparación muestra a un matraz aforado de
1,3-dihidro-7-nitro-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona. 100 ml, disolver y completar a volumen con Dilu-
Debe contener no menos de 99,0 por ciento y no yente. Transferir 1,0 ml de ésta solución a un ma-
más de 101,0 por ciento de C15H10ClN3O3, calcula- traz aforado de 10 ml y completar a volumen con el
do sobre la sustancia seca y debe cumplir con las mismo solvente.
siguientes especificaciones. Solución estándar B - Pesar exactamente alre-
Caracteres generales - Polvo amarillo claro. dedor de 5 mg de Clonazepam y 5 mg de Flunitra-
Funde aproximadamente a 239 °C. Moderadamente zepam, transferir a un matraz aforado de 100 ml,
soluble en acetona y cloroformo; poco soluble en disolver y completar a volumen con Diluyente.
alcohol y éter; insoluble en agua. Solución estándar C - Pesar exactamente alre-
dedor de 0,5 mg de Impureza B de Clonaze-
Sustancias de referencia - Clonaze- pam SR-FA, transferir a un matraz aforado de
pam SR-FA. Impureza B de Clonazepam SR-FA: 10 ml, disolver y completar a volumen con Diluyen-
3-Amino-4- (2-clorofenil)-6-nitroquinolin-2(1H)- te. Transferir 1 ml de esta solución a un matraz
ona. aforado de 100 ml, disolver y completar a volumen
con el mismo solvente.
CONSERVACIÓN
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
En envases inactínicos de cierre perfecto. de 100 mg de Clonazepam, transferir a un matraz
aforado de 20 ml y completar a volumen con Meta-
ENSAYOS nol. Transferir 1 ml de ésta solución a un matraz
Identificación aforado de 10 ml y completar a volumen con Dilu-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. yente.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Determinación del punto de fusión <260> Cromatografiar la Solución estándar B y registrar
Entre 237 y 240 °C. las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Pérdida por secado <680> cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder ben ser aproximadamente 2,1 para impureza B, 2,4
más de 0,5 % de su peso. para impureza A y 1,0 para clonazepam; la resolu-
ción R entre los picos de flunitrazepan y clonaze-
Determinación del residuo de ignición <270>
pam no debe ser menor de 1,8.
No más de 0,1 %. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Límite de metales pesados <590> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Método II. No más de 0,002 %. 10 l) de la Solución estándar A, Solución estándar
Sustancias relacionadas B y la Solución muestra, registrar los cromatogra-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo mas durante tres veces el tiempo de retención del
para cromatografía de líquidos con un detector clonazepam y medir las respuestas de todos los
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de picos. El tiempo de retención del pico principal en
15 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida el cromatograma obtenido a partir de la Solución
por octilsilano químicamente unido a partículas de muestra debe ser de aproximadamente 7 minutos.
En el cromatograma obtenido a partir de la Solución
sílice totalmente porosas de 5 m de diámetro. El
muestra, la respuesta del pico correspondientes a la
impureza A de clonazepam no debe ser mayor que
la respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
ción estándar A (0,1 %), la respuesta del pico co-
rrespondientes a la impureza B de clonazepam no
debe ser mayor que la respuesta del pico principal
obtenido con la Solución estándar C (0,1 %), y a
excepción del pico principal, la respuesta de ningún
pico debe ser mayor que la respuesta del pico prin-
cipal en el cromatograma obtenido con la Solución
estándar A (0,1 %). A excepción del pico principal,
la suma de las respuestas de todos los picos no debe
ser mayor que dos veces la respuesta del pico prin-
cipal obtenido con la Solución estándar A (0,2 %).
Ignorar cualquier pico con una respuesta 0,5 veces
menor a la del pico principal obtenido con la Solu-
ción estándar A (0,2 %).
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método III.
Solvente: Dimetilsulfóxido.
VALORACIÓN
Pesar exactamente 275 mg de Clonazepam, di-
solver en 50 ml de anhídrido acético y titular con
ácido perclórico 0,1 M (SV), determinando el punto
final potenciométricamente. Realizar una determi-
nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
perclórico 0,1 M equivale a 31,57 mg de
C15H10ClN3O3.
previamente enjuagada con ácido sulfúrico (SR) y
CLORAL, HIDRATO DE transferir la mezcla a un tubo de Nessler: el color de
la solución no debe ser más intenso que el de la
CCl3 Solución de comparación P.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
HO OH
Método I.
VALORACIÓN
C2H3Cl3O2 PM: 165,4 302-17-0
Pesar exactamente alrededor de 4,0 g de Hidrato
Definición - Hidrato de Cloral es
de Cloral, disolver en 10 ml de agua, agregar
2,2,2-tricloro-1,1-etanodiol. Debe contener no
30,0 ml de hidróxido de sodio 1 N (SV) y dejar la
menos de 99,5 por ciento y no más de 102,5 por
mezcla en reposo durante 2 minutos. Agregar unas
ciento de C2H3Cl3O2, calculado sobre la sustancia
gotas de fenolftaleína (SR) y titular el álcali residual
seca y debe cumplir con las siguientes especifica-
inmediatamente con ácido sulfúrico 1 N (SV).
ciones.
Realizar una determinación con un blanco y hacer
Caracteres generales - Cristales incoloros, las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
transparentes o blancos. Funde aproximadamente a Cada ml de hidróxido de sodio 1 N equivale a
55 °C y se volatiliza lentamente cuando se expone 165,4 mg de C2H3Cl3O2.
al aire. Muy soluble en agua y en aceites fijos;
fácilmente soluble en alcohol, cloroformo y éter.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
Preparar una solución de Hidrato de Cloral de
aproximadamente 1 mg por ml. Transferir 1 ml de
esta solución a un erlenmeyer de 125 ml y diluir a
aproximadamente 10 ml con agua. Agregar 10 ml
de solución de ioduro de 1-etilquinaldinio
15 en 1.000, previamente filtrada. Agregar 60 ml
de alcohol isopropílico, 5 ml de solución de monoe-
tanolamina 0,1 M y 15 ml de agua. Mezclar y ca-
lentar en un baño de agua a 60 °C durante
15 minutos: se debe producir una coloración azul.
Acidez
Una solución 1 en 20 de Hidrato de Cloral no
debe enrojecer inmediatamente el papel de tornasol
azul humedecido.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de cloruro y sulfato <560>
Cloruro - A una solución 1 en 10 de Hidrato de
Cloral en alcohol, agregar unas gotas de nitrato de
plata (SR): cualquier opalescencia producida no
debe ser mayor que la que corresponde a 0,10 ml de
ácido clorhídrico 0,020 N (0,007 %).
Ensayo de sustancias fácilmente carboniza-
bles <350>
Agitar 500 mg de Hidrato de Cloral con 5 ml de
ácido sulfúrico (SR) a intervalos de 5 minutos du-
rante 1 hora, en una probeta con tapón de vidrio
Fase estacionaria - Emplear una placa para
CLORAMBUCILO cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
Cl
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
N O Fase móvil - Tolueno, metanol, heptano y meti-
HO letilcetona (40:25:20:20).
Cl Solución muestra - Disolver 200 mg de Clo-
rambucilo en acetona y diluir a 10 ml con el mismo
C14H19Cl2NO2 PM: 304,2 305-03-3 solvente.
Solución estándar A - Diluir 1 ml de Solución
Definición - Clorambucilo es Ácido muestra a 50 ml con acetona.
4-[bis(2-cloroetil)amino]bencenobutanoico. Debe Solución estándar B - Diluir 25 ml de Solución
contener no menos de 98,5 por ciento y no más de estándar A a 100 ml con acetona.
101,0 por ciento de C14H19Cl2NO2, calculado sobre Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
la sustancia anhidra y debe cumplir con las siguien- placa 5 µl de la Solución muestra y 5 µl de las So-
tes especificaciones. luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-
Caracteres generales - Polvo ligeramente gra- nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
nular casi blanco. Fácilmente soluble en acetona; frente del solvente haya recorrido aproximadamente
soluble en álcalis diluidos; muy poco soluble en la mitad de la longitud de la placa. Retirar la placa
agua. de la cámara, marcar el frente del solvente y dejar
secar. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
Sustancia de referencia - Clorambuci- 254 nm: a excepción de la mancha principal en el
lo SR-FA. cromatograma obtenido a partir de la Solución
CONSERVACIÓN muestra, ninguna mancha debe ser más intensa que
la obtenida con la Solución estándar A (2,0 %) y
En envases inactínicos de cierre perfecto.
sólo una de ellas puede ser más intensa que la obte-
Precaución - Evitar la inhalación y el contacto nida con la Solución estándar B (0,5 %).
con la piel.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
ENSAYOS Método III.
Identificación Solvente: dimetilsulfóxido.
A - Absorción infrarroja <460>. En solución. VALORACIÓN
Emplear una solución de Clorambucilo 1 en 125, en
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Clo-
disulfuro de carbono y una celda de 1 mm.
rambucilo, disolver en 10 ml de acetona, agregar
B - Disolver 50 mg de Clorambucilo en 5 ml de
10 ml de agua y titular con hidróxido de sodio
acetona y diluir con agua a 10 ml. Agregar 1 gota
0,1 N (SV), empleando fenolftaleína (SR) como
de ácido nítrico al 12,5 % p/v y 4 gotas de nitrato de
indicador. Realizar una determinación con un blan-
plata (SR): no se debe observar opalescencia de
co y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
inmediato (ausencia de ion cloruro). Calentar la
Volumetría). Cada ml de hidróxido de sodio 0,1 N
solución en un baño de vapor: debe aparecer opa-
equivale a 30,42 mg de C14H19Cl2NO2.
lescencia (presencia de cloro ionizable).
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 65 y 69 °C.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
0,5 %.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Sustancias relacionadas
[NOTA: realizar todas las operaciones tan rápi-
damente como sea posible, evitando la exposición a
la luz. Preparar las soluciones inmediatamente
antes de su uso.]
CLORANFENICOL Cristalinidad
Colocar partículas de Cloranfenicol en aceite
mineral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar
H OH Cl la mezcla empleando un microscopio óptico con luz
H polarizada: las partículas deben presentar birrefrin-
N
Cl gencia y posiciones de extinción cuando se gira la
platina del microscopio.
H O
O2N OH Pureza cromatográfica
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
C11H12Cl2N2O5 PM: 323,1 56-75-7 grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
Definición - Cloranfenicol es [R-(R*,R*)]- grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
2,2-Dicloro-N-[2-hidroxi-1-(hidroximetil)-2-(4-ni- de espesor.
trofenil)etil]acetamida. Debe contener no menos de Fase móvil - Cloroformo, metanol y ácido acé-
97,0 por ciento y no más de 103,0 por ciento de tico glacial (79:14:7).
C11H12Cl2N2O5 y debe cumplir con las siguientes Solución madre del estándar - Preparar una so-
especificaciones. lución de Cloranfenicol SR-FA en metanol de
aproximadamente 10 mg por ml.
Caracteres generales - Polvo cristalino, crista- Solución estándar A - Diluir una porción de la
les, agujas o escamas alargadas blanco, blanco- Solución madre del estándar cuantitativamente con
grisáceo o blanco-amarillento. Sus soluciones son metanol para obtener una solución de aproximada-
prácticamente neutras al tornasol. La solución en mente 100 µg por ml.
etanol es dextrorrotatoria y en acetato de etilo es Solución estándar B - Diluir una porción de la
levorrotatoria. Fácilmente soluble en acetato de Solución madre del estándar cuantitativamente con
etilo, acetona, alcohol y propilenglicol; poco solu- metanol para obtener una solución de aproximada-
ble en agua. mente 50 µg por ml.
Presenta polimorfismo. Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
Sustancia de referencia - Cloranfeni- tamente pesada de Cloranfenicol en metanol para
col SR-FA. obtener una solución de aproximadamente 10 mg
por ml.
CONSERVACIÓN Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
En envases de cierre perfecto. placa 20 µl de la Solución muestra y 20 µl de las
Soluciones estándar A y B. Dejar secar las aplica-
ENSAYOS
ciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el
Identificación frente del solvente haya recorrido aproximadamente
A - Absorción infrarroja <460>. Proceder tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
según se indica en Identificación por medio de rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
espectros de referencia. vente, dejar secar al aire y examinar bajo luz ultra-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en violeta a 254 nm: a excepción de la mancha princi-
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- pal en el cromatograma obtenido a partir de la Solu-
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- ción muestra, ninguna mancha debe ser mayor en
paración muestra se debe corresponder con el obte- tamaño o intensidad a la mancha principal en el
nido con la Preparación estándar. cromatograma obtenido con la Solución estándar A
Determinación de la rotación óptica <170> (1 %); y la suma de las intensidades de todas las
Rotación específica: Entre + 17,0° y + 20,0°. manchas, con excepción de la mancha principal, no
Solución muestra: 50 mg por ml, en alcohol ab- debe ser mayor de 2 %.
soluto. [NOTA: no secar la muestra]. Ensayos de esterilidad <370>
Determinación del pH <250> Cuando en el rótulo se indique que el Cloranfe-
Entre 4,5 y 7,5, determinado sobre una suspen- nicol es estéril, debe cumplir con los requisitos
sión acuosa de aproximadamente 25 mg por ml. según se indica en Método de Filtración por mem-
brana, empleando 1 g de Cloranfenicol.
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 149 y 153 °C. Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indique que el Cloranfe-
nicol es estéril, no debe contener más de 0,2 Unida-
des de Endotoxina por mg de Cloranfenicol.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 280 nm y una columna de
10 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Agua, metanol y ácido acético
glacial (55:45:0,1). Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Cloranfenicol SR-FA en
Fase móvil y diluir cuantitativamente y en etapas, si
fuera necesario, con Fase móvil para obtener una
solución de aproximadamente 80 µg por ml. Filtrar
una porción de esta solución a través de una mem-
brana de 0,5 µm o de porosidad menor y emplear el
filtrado transparente.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 200 mg de Cloranfenicol, transferir a un
matraz aforado de 100 ml, disolver con Fase móvil,
completar a volumen con el mismo solvente y mez-
clar. Transferir 4,0 ml de esta solución a un matraz
aforado de 100 ml, completar a volumen con Fase
móvil y mezclar. Filtrar una porción de esta solu-
ción a través de una membrana de 0,5 µm o de
porosidad menor y emplear el filtrado transparente.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la eficiencia de la columna determinada
para el pico de cloranfenicol no debe ser menor de
1.800 platos teóricos; el factor de asimetría no debe
ser mayor de 2,0; la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C11H12Cl2N2O5 en la porción de Cloran-
fenicol en ensayo.
ROTULADO
Cuando el Cloranfenicol esté destinado a la pre-
paración de formas farmacéuticas inyectables, indi-
car en el rótulo que es estéril.
Solución estándar C - Disolver 10 mg de Pal-
CLORANFENICOL, mitato de Cloranfenicol en acetona y diluir a 5 ml
PALMITATO DE con el mismo solvente.
Revelador - Una solución alcóholica de dicloro-
H OH
H
Cl fluoresceína al 0,02 % y rodamina B al 0,01 %.
N
Cl
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
H O placa 4 µl de la Solución muestra y 4 µl de las So-
O2N O CH3
luciones estándar A, B y C. Desarrollar los croma-
O togramas hasta que el frente del solvente haya reco-
rrido aproximadamente tres cuartas partes de la
C27H42Cl2N2O6 PM: 561,6 530-43-8 longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
marcar el frente del solvente y dejar secar al aire.
Definición - Palmitato de Cloranfenicol es Pulverizar sobre la placa con Revelador, dejar secar
Palmitato de [R-(R*,R*)]-2,2-dicloro-N-[2-hidroxi- al aire y examinar bajo luz ultravioleta a 254 nm: el
1-(hidroximetil)-2-(4-nitrofenil)etil]acetamida. cromatograma obtenido a partir de la Solución
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no muestra debe presentar tres manchas que deben
más de 102,0 por ciento de C27H42Cl2N2O6, calcula- corresponder en valor de Rf a las manchas principa-
do sobre la sustancia seca y debe cumplir con las les en los cromatogramas obtenidos a partir de las
siguientes especificaciones. Soluciones estándar A, B y C.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, B - Disolver 200 mg de Palmitato de Cloranfe-
untuoso al tacto. Fácilmente soluble en acetona y nicol en 2 ml de piridina, agregar 2 ml de solución
cloroformo; soluble en éter; moderadamente soluble de hidroxido de potasio al 10 % y calentar en baño
en alcohol; muy poco soluble en éter de petróleo; de agua: se debe desarrollar color rojo.
insoluble en agua. Determinación del punto de fusión <260>
Presenta polimorfismo; la forma termodinámi- Entre 87 y 95 °C.
camente estable tiene una biodisponibilidad reduci-
da cuando se administra por vía oral. Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre +21° y +25°.
Sustancias de referencia - Cloranfeni- Solución muestra: 50 mg por ml, en alcohol ab-
col SR-FA. Isómero del Palmitato de Cloranfeni- soluto. [NOTA: no secar la muestra.]
col SR-FA. Dipalmitato de Cloranfenicol SR-FA.
Cristalinidad
CONSERVACIÓN Colocar partículas de Palmitato de Cloranfenicol
En envases inactínicos de cierre perfecto. en aceite mineral, sobre un portaobjetos de vidrio.
Examinar la mezcla empleando un microscopio
ENSAYOS
óptico con luz polarizada: las partículas deben pre-
Identificación sentar birrefringencia y posiciones de extinción
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. cuando se gira la platina del microscopio.
Fase estacionaria - Emplear una placa para
Acidez
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Disolver 1,0 g de Palmitato de Cloranfenicol,
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
por calentamiento a 35 °C, con 5 ml de una mezcla
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de alcohol al 80 % y éter (1:1), previamente neutra-
de espesor.
lizada empleando fenolftaleína (SR) como indica-
Fase móvil - Alcohol y acetato de amonio al
dor. Titular con hidróxido de sodio 0,1 N (SV),
10 % (70:30).
empleando fenolftaleína (SR) como indicador, hasta
Solución muestra - Disolver 50 mg de Palmita-
que agitando suavemente aparezca color rosado que
to de Cloranfenicol en una mezcla de 1 ml de
persista durante no menos de 30 segundos: no se
hidróxido de sodio 1 N y 5 ml de acetona y dejar
deben consumir más de 0,4 ml.
reposar durante 30 minutos. Agregar 1,1 ml de
ácido clorhídrico 1 N y 3 ml de acetona. Cloranfenicol libre
Solución estándar A - Disolver 10 mg de Clo- Disolver 1,0 g de Palmitato de cloranfeni-
ranfenicol SR-FA en acetona y diluir a 5 ml con el col SR-FA calentando suavemente en 80 ml de
mismo solvente. xileno. Enfriar, transferir a una ampolla de decan-
Solución estándar B - Disolver 10 mg de ácido tación y agitar con tres porciones de 15 ml de agua.
palmítico en acetona y diluir a 5 ml con el mismo Diluir los extractos acuosos combinados a 50 ml
solvente. con agua y agitar con 10 ml de tolueno. Dejar sepa-
rar las fases y descartar la orgánica. Centrifugar
una porción de la fase acuosa y medir la absorban- Pérdida por secado <680>
cia, en celdas de 1 cm, a la longitud de onda de Secar hasta peso constante sobre pentóxido de
máxima absorción, aproximadamente 278 nm, con fósforo, al vacío, a una presión no mayor de
un espectrofotómetro, empleando una solución 5 mm Hg: no debe perder más de 0,5 % de su peso.
tratada del mismo modo que la muestra pero sin el
VALORACIÓN
agregado de esta, como blanco. Calcular la canti-
dad de cloranfenicol libre en ppm por la fórmula Disolver 90,0 mg de Palmitato de Cloranfenicol
siguiente: en alcohol y diluir a 100 ml con el mismo solvente.
Diluir 10,0 ml de esta solución a 250 ml con alco-
104A/5,96 hol y medir la absorbancia de esta solución, en
en la cual A es la absorbancia de la solución en celdas de 1 cm, a la longitud de onda de máxima
ensayo: no debe contener más de 450 ppm. absorción, aproximadamente 271 nm. Calcular la
cantidad de C27H42Cl2N2O6 considerando el coefi-
Sustancias relacionadas
ciente de extinción específica E(1 %, 1 cm) igual a
Fase estacionaria - Emplear una placa para
178.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - Ciclohexano, cloroformo y meta-
nol (50:40:10).
Solución muestra - Disolver 100 mg de Palmi-
tato de Cloranfenicol en acetona y diluir a 10 ml
con el mismo solvente.
Solución estándar A - Disolver 20 mg del Isó-
mero de Palmitato de Cloranfenicol SR-FA en ace-
tona y diluir a 10 ml con el mismo solvente. Diluir
1 ml de esta solución a 10 ml con acetona.
Solución estándar B - Disolver 20 mg de Di-
palmitato de Cloranfenicol SR-FA en acetona y
diluir a 10 ml con el mismo solvente. Diluir 1 ml
de esta solución a 10 ml con acetona.
Solución estándar C - Disolver 5 mg de Cloran-
fenicol SR-FA en acetona y diluir a 10 ml con el
mismo solvente. Diluir 1 ml de esta solución a
10 ml con acetona.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de las
Soluciones estándar A, B y C. Desarrollar los cro-
matogramas hasta que el frente del solvente haya
recorrido aproximadamente tres cuartas partes de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
marcar el frente del solvente, dejar secar al aire y
examinar bajo luz ultravioleta a 254 nm: en el cro-
matograma obtenido a partir de la Solución mues-
tra, ninguna mancha correspondiente al isómero de
palmitato de cloranfenicol y al dipalmitato de clo-
ranfenicol debe ser más intensa que la mancha
correspondiente en los cromatogramas obtenidos
con las Soluciones estándar A y B (2 %) y a excep-
ción de la mancha principal y las manchas corres-
pondientes al isomero de palmitato de cloranfenicol
y dipalmitato de cloranfenicol, ninguna otra mancha
debe ser más intensa que la mancha principal en el
cromatograma obtenido con la Solución estándar C
(0,5 %).
luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-
CLORANFENICOL, nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
SUCCINATO SÓDICO DE frente del solvente haya recorrido aproximadamente
tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
H O R1 Cl rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
H vente, dejar secar al aire y examinar bajo luz ultra-
N
Cl violeta a 254 nm: las dos manchas principales en el
H cromatograma obtenido a partir de la Solución
O
muestra deben ser similares en tamaño y valor de Rf
O2N o R2
a las manchas obtenidas con la Solución estándar A
y sus posiciones deben ser diferentes a las obtenidas
Isómero 1: R1 = CO-CH2-CH2-CO2Na, R2 = H. con la Solución estándar B.
Isómero 3: R1 = H, R2 = CO-CH2-CH2-CO2Na. B - Disolver 50 mg de Succinato Sódico de
C15H15Cl2N2NaO8 PM: 445,2 982-57-0 Cloranfenicol en 1 ml de piridina. Agregar 0,5 ml
de solución de hidróxido de sodio al 8,5 % p/v y
Definición - Succinato Sódico de Cloranfenicol
1,5 ml de agua. Calentar en un baño de agua duran-
es una mezcla en cantidades variables de (2R,3R)-
te 3 minutos: se debe desarrollar color rojo. Agre-
2-[(Dicloroacetil)amino]-3-hidroxi-3-(4-nitrofenil)
gar 2 ml de ácido nítrico y enfriar en corriente de
propil butanodioato de sodio (Isómero 3) y de
agua. Agregar 1 ml de nitrato de plata (SR): se
(1R,2R)-2-[(Dicloroacetil)amino]-3-hidroxi-1-(4-
debe formar lentamente un precipitado blanco.
nitrofenil)propil butanodioato de sodio (Isómero 1).
C - Debe responder a los ensayos para So-
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no
dio <410>.
más de 102,0 por ciento de C15H15Cl2N2NaO8, cal-
culado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir Determinación de pH <250>
con las siguientes especificaciones. Entre 6,4 y 7,0, determinado sobre una solución
de 2,5 g de Succinato Sódico de Cloranfenicol en
Caracteres generales - Polvo blanco o blanco
10 ml de agua libre de dióxido de carbono.
amarillento. Higroscópico. Muy soluble en agua;
fácilmente soluble en alcohol; prácticamente inso- Determinación de la rotación óptica <170>
luble en éter. Rotación específica: Entre 5,0º y 8,0º, calcu-
lada sobre la sustancia anhidra.
Sustancias de referencia - Cloranfeni-
Solución muestra: 50 mg por ml, en agua.
col SR-FA. Succinato Sódico de Cloranfeni-
col SR-FA. Disuccinato Disódico de Cloranfeni- Determinación de agua <120>
col SR-FA. Titulación volumétrica directa. No más de
2,0 %.
CONSERVACIÓN
Cloranfenicol y disuccinato disódico de clo-
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ranfenicol
ENSAYOS Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Identificación para cromatografía de líquidos con un detector
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. ultravioleta ajustado a 275 nm y una columna de
Fase estacionaria - Emplear una placa para 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- por octadecilsilano químicamente unido a partículas
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
de espesor. Fase móvil - Agua, metanol y solución de ácido
Fase móvil - Cloroformo, metanol y ácido acé- fosfórico al 2 % (55:40:5). Filtrar y desgasificar.
tico diluido (85:14:1). Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
Solución estándar A - Disolver 20 mg de Suc- ma en 100. Cromatografía).
cinato Sódico de Cloranfenicol SR-FA en 2 ml de Solución estándar A - Disolver 10 mg de Clo-
acetona. ranfenicol SR-FA en Fase móvil y diluir a 10 ml
Solución estándar B - Disolver 20 mg de Clo- con Fase móvil (Solución a). Diluir 5 ml de esta
ranfenicol SR-FA en 2 ml de acetona. solución a 100 ml con Fase móvil.
Solución muestra - Disolver 20 mg de Succina- Solución estándar B - Disolver 10 mg de Di-
to Sódico de Cloranfenicol en 2 ml de acetona. succinato Disódico de Cloranfenicol SR-FA en
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la Fase móvil y diluir a 100 ml con Fase móvil (Solu-
placa 2 µl de la Solución muestra y 2 µl de las So-
ción b). Diluir 5 ml de esta solución a 100 ml con derando el coeficiente de extinción específica
Fase móvil. E(1%,!cm) igual a 220.
Solución de resolución - Disolver 25 mg de
ROTULADO
Succinato Sódico de Cloranfenicol en Fase móvil,
agregar 5 ml de la Solución a y 5 ml de la Solución Cuando el Succinato Sódico de Cloranfenicol
b y diluir a 100 ml con Fase móvil. esté destinado a la preparación de formas farmacéu-
Solución muestra - Disolver 25 mg de Succina- ticas parenterales, indicar en el rótulo que es estéril
to Sódico de Cloranfenicol en Fase móvil y diluir a y apiretógeno.
100 ml con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución, las Solu-
ciones estándar A y B y la Solución muestra y re-
gistrar las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: en el cromatograma obtenido con la
Solución de resolución, las señales con tiempos de
retención correspondientes a los picos principales
obtenidos a partir de las Soluciones estándar A y B
deben estar separadas de las señales con tiempo de
retención correspondientes a los dos picos principa-
les obtenidos a partir de la Solución muestra.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Solución muestra, la Solución de reso-
lución y las Soluciones estándar A y B, registrar los
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
principales. En el cromatograma obtenido a partir
de la Solución muestra, la respuesta del pico co-
rrespondiente al cloranfenicol no debe ser mayor
que la respuesta del pico principal obtenido con la
Solución estándar A (2,0 %) y la respuesta del pico
correspondiente al disuccinato disódico de cloran-
fenicol no debe ser mayor que la respuesta del pico
principal obtenido con la Solución estándar B
(2,0 %).
Ensayo de piretógenos <340>
Cuando Succinato Sódico de Cloranfenicol esté
destinado a la preparación de formas farmacéuticas
parenterales, debe cumplir con los requisitos del
ensayo. Inyectar a cada conejo 2,5 ml de una solu-
ción de aproximadamente 2 mg de Succinato Sódi-
co de Cloranfenicol por ml en Agua para Inyecta-
bles, por kilogramo de peso corporal.
Ensayos de esterilidad <370>
Cuando Succinato Sódico de Cloranfenicol esté
destinado a la preparación de formas farmacéuticas
parenterales, debe cumplir con los requisitos del
ensayo.
VALORACIÓN
Disolver 200 mg de Succinato Sódico de Clo-
ranfenicol en agua y diluir a 500 ml con el mismo
solvente. Diluir 5 ml de esta solución a 100 ml con
agua y medir la absorbancia a la longitud de onda
de máxima absorción, aproximadamente 276 nm.
Calcular el contenido de C15H15Cl2N2NaO8, consi-
10 ml, completar a volumen con cloroformo y mez-
CLORFENIRAMINA, clar.
MALEATO DE Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de la
Cl Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
del solvente haya recorrido aproximadamente tres
cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
HO OH placa de la cámara, marcar el frente del solvente,
N CH3
O O
secar al aire y examinar bajo luz ultravioleta a
N
254 nm: a excepción de la mancha principal en el
CH3 cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra, ninguna mancha debe ser más intensa que
la mancha principal obtenida con la Solución están-
C16H19ClN2 . C4H4O4 PM: 390,9 113-92-8 dar (0,2 %). [NOTA: descartar las manchas que
Definición - Maleato de Clorfeniramina es Ma- aparecen en el origen.]
leato de 2-[(p-cloro)- -[2-dimetilaminoetil] ben- Pérdida por secado <680>
cil]piridina. Debe contener no menos de 98,0 por Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
ciento y no más de 100,5 por ciento de más de 0,5 % de su peso.
C16H19ClN2 . C4H4O4, calculado sobre la sustancia
Impurezas orgánicas volátiles <520>
seca y debe cumplir con las siguientes especifica-
Método II.
ciones.
VALORACIÓN
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco,
inodoro. Sus soluciones tienen un pH entre 4 y 5. Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Ma-
Fácilmente soluble en agua; soluble en alcohol y leato de Clorfeniramina, disolver en 20 ml de ácido
cloroformo; poco soluble en éter. acético glacial, agregar 2 gotas de cristal viole-
ta (SR) y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV).
Sustancia de referencia - Maleato de Clorfeni-
Realizar una determinación con un blanco y hacer
ramina SR-FA.
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
CONSERVACIÓN Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
En envases inactínicos de cierre perfecto. 19,54 mg de C16H19ClN2 . C4H4O4.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Punto de fusión (ver 260. Determinación del
punto de fusión): entre 130 y 135 ºC.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,2 %.
Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - Ciclohexano, cloroformo y dieti-
lamina (50:40:10).
Solución muestra - Disolver 500 mg de Maleato
de Clorfeniramina en cloroformo y diluir a 10,0 ml
con el mismo solvente.
Solución estándar - Diluir 1 ml de Solución
muestra a 50 ml con cloroformo y mezclar. Trans-
ferir 1 ml de esta solución a un matraz aforado de
te pesado, que contenga aproximadamente 20 ml de
CLORHÍDRICO, ÁCIDO agua y pesar. Agregar 25 ml de agua, agregar 3 gotas
HCl PM: 36,5 7647-01-0 de rojo de metilo (SR) y titular con hidróxido de sodio
Definición - Ácido Clorhídrico debe contener no 1 N (SV). Cada ml de hidróxido de sodio 1 N equiva-
menos de 36,5 por ciento y no más de 38,0 por ciento, le a 36,46 mg de HCl.
en peso, de HCl y debe cumplir con las siguientes
especificaciones.
Caracteres generales - Líquido incoloro, fuman-
te, con olor irritante característico. Si se diluye en dos
veces su volumen de agua, el olor y los vapores des-
aparecen. Densidad relativa aproximadamente 1,19.
CONSERVACIÓN
En envases de vidrio o de un material inerte de cie-
rre perfecto a una temperatura no mayor de 30 °C.
ENSAYOS
Identificación
Debe responder a los ensayos para Cloruro <410>.
Determinación del residuo de ignición <270>
A 20 ml de Ácido Clorhídrico, agregar 2 gotas de
ácido sulfúrico, evaporar hasta sequedad y someter a
ignición: el peso del residuo no debe ser mayor de
2 mg (0,008 %).
Bromuro o ioduro, bromo o cloro libre, sulfato
y sulfito
Solución muestra - Diluir una porción de Ácido
Clorhídrico con 2 volúmenes de agua.
Bromuro y ioduro - Agregar 1 ml de cloroformo a
10 ml de la Solución muestra y agregar con cuidado,
gota a gota, agitando constantemente, una mezcla de
cloro (SR) y agua (50:50): el cloroformo no debe
desarrollar coloración amarilla, anaranjada o violeta.
Bromo o cloro libre - Agregar 1 ml de ioduro de
potasio (SR) y 1 ml de cloroformo a 10 ml de la Solu-
ción muestra y agitar: el cloroformo no debe desarro-
llar coloración violeta durante no menos de 1 minuto.
Sulfato - A una mezcla de 3 ml de la Solución
muestra y 5 ml de agua, agregar 5 gotas de cloruro de
bario (SR): no se debe producir turbidez ni precipitado
durante 1 hora.
Sulfito - A la solución obtenida en Sulfato, agre-
gar 2 gotas de iodo 0,1 N: no se debe producir turbi-
dez ni decoloración del iodo.
Límite de metales pesados <590>
Evaporar 3,4 ml de Ácido Clorhídrico, equivalente
a 4 g, en un baño de vapor hasta sequedad, agregar
2 ml de ácido acético 1 N al residuo obtenido y diluir
con agua a 25 ml: el límite es 5 ppm.
VALORACIÓN
Transferir aproximadamente 3 ml de Ácido Clorhí-
drico a un erlenmeyer con tapón de vidrio, previamen-
CLORHÍDRICO DILUIDO, VALORACIÓN
Transferir aproximadamente 10 ml de Ácido
ÁCIDO Clorhídrico Diluido a un erlenmeyer, agregar 30 ml de
Definición - Ácido Clorhídrico Diluido debe con- agua y 3 gotas de rojo de metilo (SR) y titular con
tener no menos de 9,5 por ciento y no más de 10,5 por hidróxido de sodio 1 N (SV). Cada ml de hidróxido
ciento, de HCl y debe cumplir con las siguientes espe- de sodio 1 N equivale a 36,46 mg de HCl.
cificaciones.
FORMULACIÓN
Clorhídrico, ácido .............................. 226 ml
Agua c.s.p. 1.000 ml
.........................................
Transferir la porción de ácido clorhídrico a un ma-
traz aforado de 1 litro, completar a volumen con agua
y mezclar.
Caracteres generales - Líquido incoloro. Inodo-
ro. Densidad relativa aproximadamente 1,05.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
Debe responder a los ensayos para Cloruro <410>.
Determinación del residuo de ignición <270>
A 20 ml de Ácido Clorhídrico Diluido, agregar
2 gotas de ácido sulfúrico, evaporar hasta sequedad y
someter a ignición: el peso del residuo no debe ser
mayor de 2 mg (0,008 %).
Sulfato
A 3 ml de Ácido Clorhídrico Diluido, agregar 5 ml
de agua, mezclar y agregar 5 gotas de cloruro de ba-
rio (SR): no se debe producir turbidez ni precipitado
durante 1 hora.
Sulfito
A la solución obtenida en Sulfato, agregar 2 gotas
de iodo 0,1 N: no se debe producir turbidez ni decolo-
ración de iodo.
Bromo o cloro libre
A 10 ml de Ácido Clorhídrico Diluido, agregar
1 ml de ioduro de potasio (SR) y 1 ml de cloroformo y
agitar: la fase clorofórmica no debe desarrollar color
violeta durante no menos de 1 minuto.
Límite de metales pesados <590>
A 3,8 ml de Ácido Clorhídrico Diluido, equivalente
a 4 g, agregar 5 ml de agua y 1 gota de fenolftaleí-
na (SR). Agregar hidróxido de amonio 6 N hasta que
la solución desarrolle una ligera coloración rosada.
Agregar 2 ml de ácido acético 1 N y diluir con agua a
25 ml. El límite es 5 ppm.
CLOROQUINA
H
N
N CH3
N CH3
CH3
Cl
CONSERVACIÓN
En envases bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: ácido clorhídrico diluido (1 en
1.000).
Concentración: 10 µg por ml.
Relación de absorbancias A343/A329: entre
1,00 y 1,15.
B - Punto de fusión <260>. Entre 87 y 92 °C.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,2 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
más de 2,0 % de su peso.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método III.
Solvente: dimetilsulfóxido.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Cloro-
quina, disolver en 50 ml de ácido acético glacial (SR),
agregar cristal violeta (SR) y titular con ácido percló-
rico 0,1 N (SV). Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Volumetría). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N
equivale a 15,99 mg de C18H26ClN3.
Entre 3,8 y 4,3; determinado sobre una solución
CLOROQUINA, FOSFATO DE preparada disolviendo 2,5 g de Fosfato de Cloro-
H
quina en agua libre de dióxido de carbono y diluida
N
N CH3
a 25 ml con el mismo solvente.
N CH3 Determinación de agua <120>
CH3 2 H3PO4
Titulación volumétrica directa. No más de
2,0 %.
Cl Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
C18H26ClN3 . 2H3PO4 PM: 515,9 50-63-5 cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
Definición - Fosfato de Cloroquina grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
es Fosfato de N4-(7-cloro-4-quinolinil)-N1,N1-dietil- de espesor.
1,4-pentanodiamina (2:1). Debe contener no menos Fase móvil - Cloroformo, ciclohexano y dieti-
de 98,5 por ciento y no más de 101,0 por ciento de lamina (50:40:10).
C18H26ClN3 . 2H3PO4, calculado sobre la sustancia Solución muestra - Disolver 500 mg de Fosfato
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi- de Cloroquina en agua y diluir a 10 ml con el mis-
caciones. mo solvente.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Solución estándar - Diluir 1 ml de la Solución
o casi blanco. Higroscópico. Fácilmente soluble en muestra a 100 ml con agua.
agua; muy poco soluble en alcohol, éter y metanol. Solución estándar diluida - Diluir 5 ml de la
Presenta dos formas polimórficas, una funde Solución estándar a 10 ml con agua.
aproximadamente a 195 °C y la otra a 218 °C. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 2 µl de la Solución muestra, 2 µl de la Solu-
Sustancias de referencia - Fosfato de Cloro- ción estándar y 2 µl de la Solución estándar dilui-
quina SR-FA. Sulfato de Cloroquina SR-FA. da. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los
CONSERVACIÓN cromatogramas hasta que el frente del solvente haya
recorrido aproximadamente tres cuartas partes de la
En envases inactínicos de cierre perfecto. longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
ENSAYOS marcar el frente del solvente y dejar secar al aire .
Examinar la placa bajo luz ultravioleta a 254 nm: a
Identificación
excepción de la mancha principal en el cromato-
A - Absorción infrarroja <460>. Disolver
grama obtenido a partir de la Solución muestra,
100 mg de Fosfato de Cloroquina en 10 ml de agua.
ninguna mancha debe ser mayor en tamaño o inten-
Agregar 2 ml de hidróxido de sodio al 8,5 % y
sidad que la obtenida con la Solución estándar
agitar con dos porciones de 20 ml de cloroformo.
Combinar los extractos clorofórmicos, lavar con (1,0 %) y no más de una mancha debe ser más in-
tensa que la obtenida con la Solución estándar
agua y secar sobre sulfato de sodio anhidro. Disol-
ver el residuo obtenido con 2 ml de cloroformo. diluida (0,5 %).
Comparar el espectro obtenido con una solución de Límite de metales pesados <590>
Sulfato de Cloroquina SR-FA preparada del mismo Método IV. Disolver 2 g de Fosfato de Cloro-
modo, excepto que deben pesarse 80 mg de Sulfato quina en 10 ml de agua. Agregar 5 ml de amoniaco
de Cloroquina SR-FA. concentrado y agitar con 40 ml de éter. Filtrar la
B - Disolver 100 mg de Fosfato de Cloroquina fase acuosa y neutralizar el filtrado con ácido acéti-
en agua y diluir a 100,0 ml con el mismo solvente. co glacial. Calentar en un baño de agua para elimi-
Diluir 1 ml de esta solución a 100,0 ml con agua y nar el éter, dejar enfriar y diluir a 20 ml con agua.
examinar entre 210 y 370 nm: el espectro de absor- Preparar la Solución estándar empleando Solución
ción ultravioleta de esta solución (ver 470. Espec- estándar de plomo (2 ppm). El límite es 0,002 %.
trofotometría ultravioleta y visible) debe presentar
VALORACIÓN
máximos a 220, 235, 256, 329 y 342 nm. La absor-
bancia específica a estas longitudes de onda debe Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Fos-
estar comprendida entre 600 y 660, 350 y 390, 300 fato de Cloroquina, disolver en 50 ml de ácido
y 330, 325 y 355, 360 y 390, respectivamente. acético glacial y titular con ácido perclórico
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
Determinación del pH <250> ciométricamente. Realizar una determinación con
un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
0,1 N equivale a 25,79 mg de C18H26ClN3 . 2H3PO4.
Determinación del punto de fusión <260>
CLOROQUINA, Entre 206 y 209 °C.
SULFATO DE Solución muestra: disolver 25 mg de Sulfato de
Cloroquina en 20 ml de agua y agregar 8 ml de
ácido pícrico (SR1). Lavar el precipitado con agua,
Cl N alcohol y finalmente con éter.
O
Pérdida por secado <680>
O O O
Secar a 105 °C durante 1 hora: no debe perder
S S
más de 1,0 % de su peso.
NH2 NH
Límite de 4-amino-6-cloro-1,3-bencenodisul-
fonamida
Cl N
Sistema cromatográfico, Fase móvil, Prepara-
ción estándar, Preparación muestra y Aptitud del
C7H6ClN3O4S2 PM: 295,7 58-94-6 sistema - Proceder según se indica en Valoración.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Definición - Clorotiazida es 6-Cloro-2H-
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
1,2,4-benzotiadiazina 7-sulfonamida-1,1 dioxido.
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
más de 102,0 por ciento de C7H6ClN3O4S2, calcula-
respuestas de los picos principales. Calcular la
do sobre la sustancia seca y debe cumplir con las
cantidad de 4-amino-6-cloro-1,3-
siguientes especificaciones.
bencenodisulfonamida en la porción de Clorotiazida
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco en ensayo, relacionando las respuestas de los picos
o casi blanco. Inodoro. Funde aproximadamente a de 4-amino-6-cloro-1,3-bencenodisulfonamida
340 °C, con descomposición. Fácilmente soluble obtenidos con la Preparación muestra y la Prepa-
en dimetilformamida y dimetilsulfóxido; poco solu- ración estándar. No debe contener más de 1,0 %.
ble en metanol y piridina; muy poco soluble en
Impurezas orgánicas volátiles <520>
agua; prácticamente insoluble en cloroformo y éter.
Método III.
Sustancias de referencia - Clorotiazi- Solvente: dimetilsulfóxido.
da SR-FA. 4-Amino-6-cloro-
VALORACIÓN
1,3-bencenodisulfonamida SR-FA.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
CONSERVACIÓN
para cromatografía de líquidos con un detector
En envases bien cerrados. ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
ENSAYOS 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Identificación porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minu-
[NOTA: secar previamente a 105 °C durante to.
1 hora.] Fase móvil - Fosfato monobásico de sodio
B - Absorción ultravioleta <470> 0,1 M y acetonitrilo (9:1). Ajustar a pH 3,0 0,1
Solvente: hidróxido de sodio 1 en 250. con ácido fosfórico. Filtrar y desgasificar. Hacer
Concentración: 10 µg por ml. los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
Las absortividades a 292 nm, calculadas 100. Cromatografía).
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de Preparación estándar - [NOTA: un volumen de
3,0 %. acetonitrilo que no exceda el 10 % del volumen
Determinación del residuo de ignición <270> total de la preparación puede ser empleado para
No más de 0,1 %. disolver las Sustancias de referencia]. Disolver una
cantidad exactamente pesada de Clorotiazi-
Límite de cloruro y sulfato <560> da SR-FA y 4-Amino-6-cloro-1,3-bencenodisulfo-
Cloruro - Disolver 1,0 g de Clorotiazida en una namida SR-FA en Fase móvil para obtener una
mezcla de 10 ml de agua y 10 ml de hidróxido de solución de aproximadamente 0,15 mg por ml de
sodio 1 en 10. Enfriar en un baño de hielo, agregar Clorotiazida SR-FA y 1,5 µg por ml de 4-Amino-
20 ml de agua y 5 ml de ácido nítrico: se debe for- 6-cloro-1,3-bencenodisulfonamida SR-FA.
mar un precipitado blanco. Titular potenciométri- Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
camente con nitrato de plata 0,050 N, empleando un dedor de 30 mg de Clorotiazida, transferir a un
sistema de electrodos plata-cloruro de plata: no matraz aforado de 200 ml, disolver en un pequeño
deben consumirse más de 0,28 ml (0,05 %).
volumen de acetonitrilo que no exceda el 10 % del
Límite de selenio <610> volumen total de la preparación, completar a volu-
No más de 0,003 %. men con Fase móvil y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 0,9 para 4-amino-6-cloro-
1,3-bencenodisulfonamida y 1,0 para clorotiazida;
la resolución R entre los picos de 4-amino-6-cloro-
1,3-bencenodisulfonamida y clorotiazida no debe
ser menor de 3,5; la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
1,5 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C7H6ClN3O4S2 en la porción de Cloro-
tiazida en ensayo.
vapor durante 15 minutos, destapar y evaporar
CLOROXILENOL lentamente en un baño de vapor hasta sequedad.
Humedecer el residuo con 1 gota de ácido clorhídri-
Cl co, agregar 10 ml de agua caliente y digerir durante
H3C CH3
2 minutos. Diluir con agua a aproximadamente
25 ml. Filtrar, si fuera necesario, lavar el crisol y el
filtro con 10 ml de agua, combinar el filtrado y los
lavados en un tubo de Nessler de 50 ml, agregar
2 ml de ácido clorhídrico, diluir con agua a 47 ml y
OH mezclar. No debe contener más de 0,01 %.
Pureza cromatográfica
C8H9ClO PM: 156,6 88-04-0 Sistema cromatográfico - Proceder según se in-
Definición - Cloroxilenol es 4-Cloro- dica en Valoración.
3,5-dimetil-fenol. Debe contener no menos de 98,5 Solución estándar - Disolver cuantitativamente
por ciento y no más de 103,0 por ciento de cantidades exactamente pesadas de Impureza A de
C8H9ClO, calculado sobre la sustancia anhidra y Cloroxilenol SR-FA y 3,5-dimetilfenol en cloro-
debe cumplir con las siguientes especificaciones. formo para obtener una solución de aproximada-
mente 0,08 mg de cada uno por ml.
Caracteres generales - Polvo cristalino o cris- Solución muestra - Disolver cuantitativamente
tales blancos, de olor característico. Fácilmente una cantidad exactamente pesada de Cloroxilenol
soluble en alcohol, éter, aceites fijos y en soluciones en cloroformo para obtener una solución de
de hidróxidos alcalinos; muy poco soluble en agua. aproximadamente 40,0 mg por ml.
Sustancias de referencia - Cloroxile- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
nol SR-FA. Impureza A de Cloroxilenol SR-FA: Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
2-Cloro-3,5-dimetilfenol. respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: la resolución R entre los picos de
CONSERVACIÓN 3,5-dimetilfenol y de impureza A de cloroxilenol no
En envases bien cerrados. debe ser menor de 4,5; la desviación estándar rela-
tiva para inyecciones repetidas no debe ser mayor
ENSAYOS
de 10 %.
Identificación Procedimiento - Inyectar por separado en el
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en 1 µl) de la Solución estándar y la Solución muestra,
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- registrar los cromatogramas y medir las respuestas
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- de todos los picos.
paración muestra se debe corresponder con el obte- Calcular los porcentajes de 3,5-dimetilfenol
nido con la Preparación estándar. (C8H10O) o de Impureza A de Cloroxilenol
Determinación del punto de fusión <260> (C8H9ClO) en la porción de Cloroxilenol en ensayo,
Entre 114 y 116 °C. por la fórmula siguiente:
0,2rM/rE
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de en la cual rM y rE son las respuestas de los picos de
0,5 %. 3,5-dimetilfenol o Impureza A de Cloroxilenol,
según corresponda, obtenidas a partir de la Solución
Determinación del residuo de ignición <270>
muestra y la Solución estándar, respectivamente:
No más de 0,1 %.
no debe contener más de 0,2 % de 3,5-dimetilfenol
Límite de hierro <580> ni de Impureza A de Cloroxilenol.
Transferir 0,10 g de Cloroxilenol a un crisol Calcular el porcentaje de cada impureza indivi-
apropiado, agregar 5 gotas de ácido sulfúrico y dual en la porción de Cloroxilenol en ensayo, por la
someter a ignición hasta reducción completa a ceni- fórmula siguiente:
zas. Agregar a la masa carbonizada 10 gotas de 100ri/rt
ácido sulfúrico y calentar cuidadosamente hasta que
en la cual ri es la respuesta de cada pico obtenido en
no se desprendan vapores blancos. Someter a igni-
la Solución muestra, excluyendo el pico de cloroxi-
ción, a una temperatura entre 500 y 600 °C, hasta
lenol, de 3,5-dimetilfenol y de la Impureza A de
carbonizar completamente. Enfriar, agregar 4 ml de
Cloroxilenol y rt es la suma de las respuestas de
ácido clorhídrico 6 N, tapar, digerir en un baño de
todos los picos : no debe contener más de 0,5 % de respuestas de los picos principales. Calcular la
cualquier impureza individual. cantidad de C8H9ClO en la porción de Cloroxilenol
Calcular el porcentaje total de impurezas en la en ensayo.
porción de Cloroxilenol en ensayo, por la fórmula
siguiente:
100rT/rt
en la cual rT es la suma de las respuestas de todos
los picos, excluyendo el pico de cloroxilenol y rt es
la suma de las respuestas de todos los picos, exclu-
yendo el pico del solvente, obtenidos en la Solución
muestra: no debe contener más de 1,5 % de impure-
zas totales.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de gases con un detector de
ionización a la llama y una columna de
1,8 m × 4 mm con fase estacionaria constituida por
3 % de polietilenglicol de peso molecular promedio
aproximado 15.000 sobre un soporte de tierra silí-
cea para cromatografía de gases la cual ha sido
calcinada a 900 °C mezclando tierra de diatomea
con Na2CO3 [NOTA: la tierra silícea se lava con
ácidos, luego se lava con agua hasta neutralidad
pero no se lava con bases. La tierra silícea puede
ser silanizada al tratarla con un agente como dime-
tildiclorosilano para bloquear los grupos silanoles
superficiales]. Mantener la columna, el inyector y
el detector a 210 °C. Se debe emplear nitrógeno
seco como gas transportador con un caudal de
aproximadamente 30 ml por minuto.
Solución del estándar interno - Preparar una so-
lución de p-clorofenol en cloroformo de aproxima-
damente 0,8 mg por ml.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Cloroxilenol SR-FA en
Solución del estándar interno para obtener una
solución de aproximadamente 1 mg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Cloroxilenol, transferir a un
matraz aforado de 100 ml, disolver en Solución del
estándar interno, completar a volumen y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de
p-clorofenol y cloroxilenol no debe ser menor de
2,0; el factor de asimetría para el pico de cloroxile-
nol no debe ser mayor de 1,5; la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 1,5 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
2 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
No más de 0,1 %.
CLORPROMAZINA,
CLORHIDRATO DE Otras fenotiazinas alquiladas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
S
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
Cl N de espesor.
HCl Fase móvil - [NOTA: preparar en el momento
de su uso]. Éter y acetato de etilo (50:50), saturada
CH3 con hidróxido de amonio.
N
Solución estándar - Disolver una cantidad
CH3
apropiada de Clorhidrato de Clorpromazina SR-FA
en metanol para obtener una solución de aproxima-
C17H19ClN2S . HCl PM: 355,3 69-09-0 damente 5 mg por ml.
Solución estándar diluida - Diluir una porción
Definición - Clorhidrato de Clorpromazina es
de la Solución estándar cuantitativamente y en
Monoclorhidrato de 2-cloro-N,N-dimetil-10H-
etapas con metanol para obtener una solución de
fenotiazin-10-propanamina. Debe contener no
aproximadamente 25 µg por ml.
menos de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
ciento de C17H19ClN2S . HCl, calculado sobre la
de 50 mg de Clorhidrato de Clorpromazina previa-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
mente secado, disolver en metanol, diluir a 10 ml y
especificaciones.
mezclar.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
o casi blanco, inodoro. Se oscurece por exposición placa 10 µl de la Solución estándar, 10 µl de la
prolongada a la luz y al aire. Muy soluble en agua; Solución estándar diluida y 10 µl de la Solución
fácilmente soluble en alcohol y cloroformo; insolu- muestra. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
ble en éter. los cromatogramas hasta que el solvente haya reco-
rrido aproximadamente tres cuartas partes de la
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Clor- longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
promazina SR-FA marcar el frente del solvente y dejar secar al aire
durante 20 minutos. Examinar la placa bajo luz
CONSERVACIÓN ultravioleta a 254 nm: a excepción de la mancha
En envases inactínicos de cierre perfecto. principal, ninguna mancha en el cromatograma
obtenido a partir de la Solución muestra debe ser
ENSAYOS mayor en tamaño e intensidad que la mancha prin-
cipal obtenida con la Solución estándar diluida
[NOTA: en todos los procedimientos siguientes, (0,5 %).
proteger la muestra, la Sustancia de Referencia y
sus soluciones de la luz, realizando los procedi- Pérdida por secado <680>
mientos bajo luz de baja intensidad y empleando Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
material de vidrio inactínico]. más de 0,5 % de su peso.
Identificación Impurezas orgánicas volátiles <520>
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Método I.
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en
Otras fenotiazinas alquiladas. El valor de Rf de la VALORACIÓN
mancha principal en el cromatograma obtenido a
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de
partir de la Solución muestra se debe corresponder
Clorhidrato de Clorpromazina y disolver en una
con el obtenido con la Solución estándar.
mezcla de 5 ml de ácido clorhídrico 0,1 N y 50 ml
C - Una solución de Clorhidrato de Clorproma-
de alcohol y titular con hidróxido de sodio
zina 1 en 10 debe responder a los ensayos para
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
Cloruro <410>.
ciométricamente (ver 780. Volumetría). Cada ml de
Determinación del punto de fusión <260> hidróxido de sodio 0,1 N equivale a 35,53 mg de
Entre 195 y 198 °C. C17H19ClN2S . HCl.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 400 mg de Codeí-
na, previamente secada, y disolver en 30,0 ml de ácido
sulfúrico 0,1 N (SV) con calentamiento. Enfriar y
agregar 10 ml de agua. Agregar rojo de metilo (SR) y
titular el exceso de ácido con hidróxido de sodio
0,1 N (SV). Realizar una determinación con un blan-
co y hacer las correcciones necesarias (ver 780. Titu-
laciones residuales en Volumetría). Cada ml de ácido
sulfúrico 0,1 N equivale a 29,94 mg de C18H21NO3.
gotas de nitrato de plata (SR): no se debe producir
CODEÍNA, FOSFATO DE opalescencia de inmediato.
Límite de sulfato
H
N CH3 A 10 ml de una solución de Fosfato de Codeína
1 en 100, agregar unas gotas de cloruro de ba-
H rio (SR): no se debe producir turbidez de inmediato.
H3PO4 1/2 H2O
Límite de morfina
Disolver 50 mg de ferricianuro de potasio en
H3CO O OH 10 ml de agua y agregar 1 gota de cloruro férri-
co (SR) y 1 ml de una solución de Fosfato de Co-
deína 1 en 100: no se debe producir coloración azul
C18H21NO3 . H3PO4 . ½H2O PM: 406,4 41444-62-6 de inmediato.
Anhidro PM: 397,4 52-28-8 Pureza cromatográfica
Definición - Fosfato de Codeína es Fosfato de Fase estacionaria, Fase móvil y Revelador -
(5,6)-7,8-didehidro-4,5-epoxi-3-metoxi-17- Proceder según se indica en Pureza cromatográfica
metilmorfinan-6-ol (1:1), hemihidrato. Debe con- en Codeína.
tener no menos de 99,0 por ciento y no más de Solución muestra - Preparar una solución de
101,5 por ciento de C18H21NO3 . H3PO4, calculado Fosfato de Codeína en una mezcla de ácido clorhí-
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las drico 0,01 N y alcohol absoluto (4:1) de aproxima-
siguientes especificaciones. damente 40 mg por ml.
Solución estándar A - Transferir 2,0 ml de la
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Solución muestra y diluir con una mezcla de ácido
o cristales aciculares blancos. Fotosensible. Sus clorhídrico 0,01 N y alcohol absoluto (4:1) a
soluciones son ácidas al tornasol. Muy soluble en 100 ml.
agua caliente; fácilmente soluble en agua; soluble Solución estándar B - Transferir 1,0 ml de la
en alcohol a ebullición; poco soluble en alcohol. Solución estándar A y diluir con una mezcla de
Sustancia de referencia - Fosfato de Codeí- ácido clorhídrico 0,01 N y alcohol absoluto (4:1) a
na SR-FA. 100 ml.
Revelador - Mezclar 3 ml de solución de ácido
CONSERVACIÓN cloroplatínico al 10 % con 97 ml de agua y agregar
En envases inactínicos de cierre perfecto. 100 ml de solución de ioduro de potasio al 6 %.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
ENSAYOS placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de las
Soluciones estándar A y B. Dejar secar las aplica-
Identificación ciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. frente del solvente haya recorrido aproximadamente
B - Neutralizar una solución de Fosfato de Co- tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
deína 1 en 50 con hidróxido de amonio 6 N y agre- rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
gar nitrato de plata (SR): se debe formar un precipi- vente y dejar evaporar. Pulverizar sobre la placa
tado amarillo de fosfato de plata soluble en ácido con Revelador y examinar los cromatogramas: a
nítrico 2 N y en hidróxido de amonio 6 N. excepción de la mancha principal y de cualquier
Acidez otra mancha observada en el origen, ninguna man-
Disolver 100 mg de Fosfato de Codeína en cha obtenida a partir de la Solución muestra debe
20 ml de agua y titular con hidróxido de sodio ser más intensa que la mancha principal obtenida
0,010 N a pH 5,4, empleando un medidor de pH: no con la Solución estándar A (2 %) y no más de una
se debe requerir más de 1,0 ml de hidróxido de mancha con un valor de Rf mayor que el de la man-
sodio 0,010 N. cha principal debe ser más intensa que la mancha
principal obtenida con la Solución estándar B
Determinación de agua <120>
(1 %).
Titulación volumétrica directa. No más de
3,0 %. VALORACIÓN
Límite de cloruro Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Fosfato
A 10 ml de una solución de Fosfato de Codeína de Codeína, disolver con 50 ml de ácido acético
1 en 100 acidificada con ácido nítrico, agregar unas glacial, calentando suavemente si fuera necesario
para disolver. Titular con ácido perclórico
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
ciométricamente. Realizar una determinación con
un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
0,1 N equivale a 39,74 mg de C18H21NO3 . H3PO4.
gar 2 gotas de cloruro férrico (SR): no se debe de-
COLCHICINA sarrollar color verde.
Límite de acetato de etilo
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para
cromatografía de gases con un detector de ionización
a la llama y una columna de 1,5 m 4 mm con fase
estacionaria constituida por polietilenglicol 1.000 al
10 % p/p, sobre un soporte de tierra de diatomeas
silanizada para cromatografía. Mantener la columna,
el inyector y el detector a 75, 130 y 150 C, respecti-
vamente. Emplear nitrógeno como gas transportador
C22H25NO6 PM: 399,5 64-86- con un caudal de 30 ml por minuto.
8 Solución del estándar interno - Transferir 1,0 ml
Definición - Es un alcaloide contenido en diversas de alcohol absoluto a un matraz aforado de 100 ml y
especies de Colchicum. Colchicina es completar a volumen con agua. Transferir 10,0 ml de
(S)-N-(5,6,7,9-tetrahidro-1,2,3,10-tetrametoxi-9- esta solución a un matraz aforado de 50,0 ml y com-
oxobenzo [a]heptalen-7-il)acetamida. Debe contener pletar a volumen con agua.
no menos de 94,0 por ciento y no más de 101,0 por Solución estándar - Transferir 1,0 ml de acetato
ciento de C22H25NO6, calculado sobre la sustancia de etilo a un matraz aforado de 1 litro, disolver y
anhidra, libre de solventes y debe cumplir con las completar a volumen con agua. A 1,0 ml de esta
siguientes especificaciones. solución agregar 5,0 ml de Solución del estándar
interno y diluir con agua a 10,0 ml.
Caracteres generales - Polvo cristalino o amorfo Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de color amarillo pálido a amarillo verdoso. Se oscu- de 100 mg de Colchicina y disolver en agua. Agregar
rece por acción de la luz. Fácilmente soluble en alco- 5,0 ml de Solución del estándar interno y diluir con
hol y cloroformo; soluble en agua; poco soluble en agua a 10,0 ml.
éter. Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
Sustancia de referencia - Colchicina SR-FA. matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 l) de la Solución estándar y la Solución muestra,
CONSERVACIÓN
registrar los cromatogramas y medir las respuestas de
En envases inactínicos de cierre perfecto. los picos. Calcular el porcentaje en peso de acetato de
etilo en la porción de Colchicina en ensayo, conside-
ENSAYOS
rando como densidad del mismo a 20 C, 0,901 g por
Precaución - Colchicina es extremadamente ve- ml: no debe contener más de 6,0 % p/p.
nenosa. Determinación del residuo de ignición <270>
Identificación No más de 0,1 %.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Pureza cromatográfica
[NOTA: ignorar cualquier banda de absorción que Examinar los cromatogramas obtenidos en Valora-
aparezca a 1.735 cm-1.] ción. La suma de las respuestas de todos los picos,
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en con excepción del pico de colchicina, que eluyen de-
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- ntro de un intervalo de 1,5 veces el tiempo de reten-
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- ción de colchicina, no debe ser mayor de 5,0 % de la
paración muestra se debe corresponder con el obte- suma de todas las respuestas obtenidas.
nido en la Preparación estándar.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Determinación de la rotación óptica <170> Método I. El límite de cloroformo es 100 ppm.
Rotación específica: Entre 240 y 250 , calcu-
lada sobre la sustancia anhidra y libre de solventes. VALORACIÓN
Solución muestra: 10 mg por ml, en alcohol. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para
Determinación de agua <120> cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta
Titulación volumétrica directa. No más de 2,0 %. ajustado a 254 nm y una columna de 25 cm 4,6 mm
con fase estacionaria constituida por octilsilano quími-
Límite de colchiceina camente unido a partículas porosas de sílice de 3 a
A 5 ml de una solución de Colchicina al 1 % agre-
10 µm de diámetro. El caudal debe ser aproximada-
mente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Diluir 45 ml de fosfato monobásico
de potasio 0,5 M con agua a 450 ml. Agregar
aproximadamente 530 ml de metanol, enfriar a tempe-
ratura ambiente y completar a 1 litro con metanol.
Ajustar con ácido fosfórico 0,5 M a pH 5,50 0,05 y
filtrar a través de una membrana filtrante de 0,45 µm.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema
en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Colchicina SR-FA en una
mezcla de metanol y agua (1:1) y diluir, cuantitativa-
mente y en etapas, con la misma mezcla para obtener
una solución de aproximadamente 6 µg de Colchici-
na SR-FA por ml. Esta solución es estable durante
4 meses cuando se almacena en envases de cierre
perfecto y en la oscuridad.
Preparación muestra - [NOTA: preparar en el
momento de su uso]. Pesar exactamente alrededor de
60 mg de Colchicina y transferir a un matraz aforado
de 500 ml. Disolver en una mezcla de metanol y agua
(1:1) y completar a volumen con la misma mezcla.
Transferir 5,0 ml de esta solución a un matraz aforado
de 100 ml y completar a volumen con la misma mez-
cla.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: la eficiencia de la columna no debe ser menor
de 4.500 platos teóricos; la desviación estándar relati-
va para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de todos los picos registrados durante
1,5 veces el tiempo de retención de colchicina. El
tiempo de retención para el pico de colchicina debe
estar comprendido entre 5,5 y 9,5 minutos. Calcular
la cantidad de C22H25NO6 en la porción de Colchicina
en ensayo.
Fase estacionaria - Emplear una placa para
CROMOGLICATO SÓDICO cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
O O
O O Diluyente - Agua, tetrahidrofurano libre de es-
OH tabilizantes y acetona (6:4:1).
NaO ONa
O O
Fase móvil - Cloroformo, metanol y ácido acé-
O O
tico glacial (9:9:2).
Solución estándar A - Preparar una solución de
Cromoglicato Sódico SR-FA en Diluyente de
C23H14Na2O11 PM: 512,3 15826-37-6 aproximadamente 10 mg por ml.
Solución estándar B - Diluir cuantitativamente
Sinonimia - Cromolín Sódico. un volumen de Solución estándar A con Diluyente
Definición - Cromoglicato Sódico es la Sal di- para obtener una solución de aproximadamente
sódica del ácido 5,5’-[(2-hidroxi-1,3-propanodiil) 0,05 mg por ml.
bis(oxi)]bis[4-oxo-4H-1-benzopiran-2-carboxílico]. Solución muestra - Disolver 100 mg de Cromo-
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no glicato Sódico en 10,0 ml de Diluyente.
más de 101,0 por ciento de C23H14Na2O11, calculado Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las placa 10 µl de la Solución estándar A, 10 µl de la
siguientes especificaciones. Solución estándar B y 10 µl de la Solución muestra.
Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los croma-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco. togramas hasta que el frente del solvente haya reco-
Inodoro e higroscópico. Soluble en agua; insoluble rrido aproximadamente tres cuartas partes de la
en alcohol y cloroformo. longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
Sustancia de referencia - Cromoglicato Sódi- marcar el frente del solvente y dejar secar al aire.
co SR-FA. Examinar las manchas bajo luz ultravioleta a
254 nm: el valor de Rf de la mancha principal en el
CONSERVACIÓN cromatograma obtenido a partir de la Solución
En envases inactínicos de cierre perfecto. muestra se debe corresponder con el obtenido con
la Solución estándar A. Ninguna mancha en el
ENSAYOS
cromatograma obtenido a partir de la Solución
Identificación muestra, localizada por encima de la mancha prin-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. cipal debe ser más intensa que la mancha obtenida
B - Absorción ultravioleta <470>. El espectro con la Solución estándar B (0,5 %).
de absorción ultravioleta de una solución de Cro-
moglicato Sódico en Solución reguladora de fosfato Límite de oxalato
de sodio pH 7,4 (1 en 40.000), preparada según se Disolver 100 mg de Cromoglicato Sódico en
indica en Valoración, debe presentar máximos a las 20 ml de agua, agregar 5,0 ml de salicilato de hie-
mismas longitudes de onda que una solución similar rro (SR) y diluir con agua a 50 ml. Determinar la
de Cromoglicato Sódico SR-FA. absorbancia de la solución a 480 nm empleando
agua como blanco. La absorbancia de esta solución
Acidez o alcalinidad no debe ser menor que la de una solución que con-
Disolver 1,0 g de Cromoglicato Sódico en 25 ml tenga 350 µg de ácido oxálico, preparada del mismo
de agua libre de dióxido de carbono y agregar dos modo (0,35 %).
gotas de azul de bromotimol (SR). Si la solución
fuera amarilla, no deben consumirse más de 0,25 ml Impurezas orgánicas volátiles <520>
de hidróxido de sodio 0,1 N para producir color Método I.
azul. Si la solución fuera azul, no deben consumir- Límite de metales pesados <590>
se más de 0,25 ml de ácido clorhídrico 0,1 N para Método II. No más de 0,002 %.
producir color amarillo.
VALORACIÓN
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de Solución reguladora de fosfato de sodio
10,0 %. pH 7,4 - Disolver 70 g de fosfato dibásico de sodio
anhidro en 900 ml de agua. Ajustar a pH 7,4 me-
Sustancias relacionadas diante el agregado de ácido fosfórico diluido
(1 en 10). Diluir con agua a 1 litro y mezclar.
Transferir 10 ml de esta solución a un matraz afora-
do de 100 ml, completar a volumen con agua y
mezclar.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Cromoglicato Sódi-
co SR-FA en agua para obtener una solución de
aproximadamente 250 µg por ml. Transferir 10 ml
de esta solución a un matraz aforado de 100 ml,
agregar 1 ml de Solución reguladora de fosfato de
sodio pH 7,4, completar a volumen con agua y
mezclar para obtener una solución de aproximada-
mente 25 µg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Cromoglicato Sódico, transferir
a un matraz aforado de 1 litro, disolver en aproxi-
madamente 100 ml de agua, completar a volumen
con agua y mezclar. Transferir 25 ml de esta solu-
ción en un matraz aforado de 100 ml, agregar 1 ml
de Solución reguladora de fosfato de sodio pH 7,4,
completar a volumen con agua y mezclar.
Procedimiento - Determinar concomitantemen-
te las absorbancias de la Preparación estándar y la
Preparación muestra en celdas de 1 cm, a la longi-
tud de onda de máxima absorción, aproximadamen-
te 326 nm, con un espectrofotómetro apropiado,
empleando Solución reguladora de fosfato de sodio
pH 7,4 (1 en 100) como blanco. Calcular la canti-
dad de C23H14Na2O11 en la porción de Cromoglicato
Sódico en ensayo.
Límite de metales pesados <590>
CROSCARAMELOSA Método II. No más de 0,001 %.
SÓDICA <PDG> Pérdida por secado <680>
Definición - Croscaramelosa Sódica es la Sal Secar a 105 °C durante 6 horas: no debe perder
sódica de la celulosa parcialmente más de 10,0 % de su peso.
o-carboximetilada entrecruzada y debe cumplir con Impurezas orgánicas volátiles <520>
las siguientes especificaciones. Método II.
Caracteres generales - Polvo blanco o blanco
Control higiénico de productos no obligato-
grisáceo. Moderadamente soluble en agua; prácti- riamente estériles <90>
camente insoluble en acetona, alcohol y tolueno. El recuento de microorganismos aerobios via-
CONSERVACIÓN bles totales no debe ser mayor que 103 bacterias ni
102 hongos por g determinados por recuento en
En envases bien cerrados.
placa. La sustancia en ensayo debe cumplir con el
ENSAYOS ensayo para Escherichia coli.
Identificación Grado de sustitución
A - A 1 g de Croscaramelosa Sódica agregar Pesar exactamente alrededor de 1 g de Crosca-
100 ml de solución de azul de metileno (1 en ramelosa Sódica, transferir a un matraz aforado de
250.000), mezclar y dejar sedimentar: debe absor- 500 ml y agregar 300 ml de solución de cloruro de
ber el azul de metileno y sedimentar como una sodio al 10 % y 25,0 ml de hidróxido de sodio
masa azul fibrosa. 0,1 N (SV). Tapar y dejar reposar durante 5 minu-
B - A 1 g de Croscaramelosa Sódica agregar tos con agitación intermitente. Agregar 5 gotas de
50 ml de agua y mezclar. Transferir 1 ml a un tubo púrpura de m-cresol (SR) y 15 ml de ácido clorhí-
de ensayo pequeño y agregar 1 ml de agua y 5 gotas drico 0,1 N (SV). Tapar y agitar. Si la solución es
de 1-naftol (SR). Inclinar el tubo de ensayo y cui- púrpura agregar porciones de 1 ml de ácido clorhí-
dadosamente agregar 2 ml de ácido sulfúrico por el drico 0,1 N hasta que se vuelva amarilla, agitando
lateral del tubo para formar una capa inferior: debe luego de cada agregado y titular con hidróxido de
desarrollarse una coloración rojiza-violeta en la sodio 0,1 N (SV) hasta punto final púrpura. Reali-
interfase. zar una determinación con un blanco y hacer las
C - Una solución de Croscaramelosa Sódica 1 correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
en 50 debe responder a los ensayos para So- Calcular el grado de sustitución A del ácido car-
dio <410>. boximetil de la porción de Croscaramelosa Sódica
Determinación del pH <250> en ensayo, por la fórmula siguiente:
A 1 g de Croscaramelosa Sódica agregar 100 ml 1150n/(7102 – 412n – 80R)
de agua y mezclar durante 5 minutos: el pH de la
en la cual n es el número de miliequivalentes de
dispersión debe estar comprendido entre 5,0 a 7,0.
valorante que se necesitan para neutralizar 1 g de
Determinación del residuo de ignición <270> Croscaramelosa Sódica calculada sobre la sustancia
Entre 14,0 y 28,0 % calculado sobre la sustancia seca, y R es el porcentaje de residuo de ignición de
seca determinado a 600 50 °C. Emplear suficien- la Croscaramelosa Sódica obtenido en el ensayo
te cantidad de ácido sulfúrico para humedecer todo 270. Determinación del residuo de ignición.
el residuo luego del paso inicial de carbonización y Calcular el grado de sustitución B de carboxime-
ácido sulfúrico adicional si queda una excesiva til sódico de la porción de Croscaramelosa Sódica
cantidad de material carbonizado luego de la volati- en ensayo, por la fórmula siguiente:
lización inicial completa de humos blancos.
(162 + 58A)R/(7102 – 80R)
Volumen de sedimentación
en la cual A es el grado de sustitución del ácido
Agregar 1,5 g de Croscaramelosa Sódica, en
carboximetil y R es el porcentaje de residuo de
porciones de 0,5 g, a 75 ml de agua en un recipiente
ignición de la Croscaramelosa Sódica obtenido en
cilíndrico de 100 ml, agitar vigorosamente luego de
el ensayo 270. Determinación del residuo de igni-
cada agregado y completar a volumen con agua.
ción.
Agitar nuevamente hasta que todo el polvo se haya
El grado de sustitución es la sumatoria de A y B
distribuido homogéneamente y dejar reposar duran-
y debe estar comprendido entre 0,60 y 0,85 calcula-
te 4 horas: el volumen de la masa sedimentada debe
do sobre la sustancia seca.
ser de 10,0 a 30,0 ml.
Contenido de sustancias solubles en agua durante 20 minutos para eliminar la acetona y en-
Pesar exactamente alrededor de 10 g de Crosca- friar. Agregar 5,0 ml de 2,7-naftalenodiol, mezclar,
ramelosa Sódica, transferir a un matraz aforado de agregar 15 ml adicionales y mezclar nuevamente.
800 ml de agua, completar a volumen con agua y Cubrir la boca del matraz con papel de aluminio y
agitar durante 1 minuto cada 10 minutos los prime- calentar en un baño de agua hirviendo durante
ros treinta minutos. Dejar reposar durante 1 hora y 20 minutos. Dejar enfriar, completar a volumen
centrifugar si es necesario. Decantar 200 ml del con ácido sulfúrico y mezclar.
sobrenadante aplicando vacío, recolectar 150 ml del Solución estándar - Pesar exactamente 100 mg
filtrado en un recipiente previamente pesado y pe- de ácido glicólico previamente secado en desecador
sar. Concentrar a pequeño volumen, secar a 105 °C durante la noche a temperatura ambiente, transferir
durante 4 horas y pesar. Calcular el contenido en a un matraz aforado de 100 ml, disolver en agua,
porcentaje de sustancias solubles en agua de la completar a volumen con el mismo solvente y mez-
porción de Croscaramelosa Sódica en ensayo, cal- clar. [NOTA: emplear la solución antes de los
culada sobre la sustancia seca, por la fórmula si- 30 días]. Transferir 1,0, 2,0, 3,0 y 4,0 ml de esta
guiente: solución a sendos matraces aforados de 100 ml,
agregar agua hasta completar 5 ml, agregar 5 ml de
100Ps(800 + Pm)/ PmPf(1 – 0,01R)
ácido acético glacial y completar a volumen con
en la cual Pm es el peso en g de la porción de Cros- acetona y mezclar. Transferir 2,0 ml de cada solu-
caramelosa Sódica en ensayo, Ps es el peso en g de ción a sendos matraces aforados de 25 ml, colocar
la sustancia seca, Pf es el peso en g de la sustancia en un baño de agua hirviendo durante 20 minutos
filtrada y R es el porcentaje de residuo de ignición para eliminar la acetona y enfriar. Agregar 5,0 ml
de la Croscaramelosa Sódica obtenido en el ensayo de 2,7-naftalenodiol y mezclar. Agregar 15 ml
270. Determinación del residuo de ignición: no adicionales y mezclar nuevamente. Cubrir la boca
debe encontrarse más de 10,0 %. de cada matraz con papel de aluminio y calentar en
Cloruro de sodio y glicolato de sodio un baño de agua hirviendo durante 20 minutos.
Cloruro de sodio - Pesar exactamente alrededor Dejar enfriar, completar a volumen con ácido sulfú-
de 5 g de Croscaramelosa Sódica en un recipiente rico y mezclar.
de 250 ml, agregar 50 ml de agua y 5 ml de peróxi- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
do de hidrógeno al 30 % y calentar en baño de va- de 500 mg de Croscaramelosa Sódica, transferir a
por durante 20 minutos agitando ocasionalmente un erlenmeyer, humedecer con 5 ml de ácido acéti-
para lograr hidratación total. Enfriar, agregar co glacial seguidos de 5 ml de agua y agitar para
100 ml de agua y 10 ml de ácido nítrico y titular asegurar una completa hidratación durante 15 minu-
con nitrato de plata 0,05 N (SV), determinando el tos. Agregar lentamente con agitación 50 ml de
punto final potenciométricamente empleando un acetona, 1 g de cloruro de sodio y agitar durante
electrodo indicador de plata y un electrodo de refe- algunos minutos hasta la precipitación completa de
rencia de doble unión que contenga solución de carboximetilcelulosa. Filtrar a través de un papel
nitrato de plata al 10 % en la camisa externa y una de filtro impregnado con acetona y recolectar el
solución de relleno estándar en la camisa interna y filtrado en un matraz de 100 ml. Emplear 30 ml
agitando constantemente (ver 780. Volumetría). adicionales de acetona para facilitar la transferencia
Calcular el contenido en porcentaje de cloruro de de sólidos y lavar el precipitado. Completar a vo-
sodio en la porción de Croscaramelosa Sódica en lumen y mezclar. Transferir 2,0 ml del filtrado a un
ensayo, por la fórmula siguiente: matraz aforado de 25 ml, colocar en un baño de
agua hirviendo durante 20 minutos para eliminar la
584,4VN/ (100 – R)P acetona y enfriar. Agregar 5,0 ml de
en la cual V es el volumen en ml de nitrato de plata 2,7-naftalenodiol, mezclar, agregar 15 ml adiciona-
consumido, N es la normalidad del nitrato de plata, les y mezclar nuevamente. Cubrir la boca del ma-
R es el porcentaje de residuo de ignición de la Cros- traz con papel de aluminio y calentar en un baño de
caramelosa Sódica obtenido en el 270. Determina- agua hirviendo durante 20 minutos. Dejar enfriar,
ción del residuo de ignición, P es el peso en g de la completar a volumen con ácido sulfúrico y mezclar.
porción de Croscaramelosa en ensayo. Procedimiento - Medir las absorbancias de cada
solución a 540 nm, realizar una curva de calibración
Glicolato sódico - con las absorbancias obtenidas a partir de las solu-
Solución blanco - Transferir 2 ml de una solu- ciones estándar y calcular el peso en mg de ácido
ción que contenga ácido acético glacial en acetona glicólico y el contenido en porcentaje de glicolato
al 5 %y agua en acetona al 5 % a un matraz aforado sódico en la porción de Croscaramelosa Sódica en
de 25 ml, colocar en un baño de agua hirviendo ensayo, por la fórmula siguiente:
12,9p/ (100 – R)P]
en la cual p es el peso en mg de ácido glicólico, R
es el porcentaje de residuo de ignición de la Crosca-
ramelosa Sódica obtenido en 270. Determinación
del residuo de ignición y P es el peso en g de la
porción de Croscaramelosa Sódica en ensayo.
La suma del contenido de cloruro de sodio y
glicolato sódico en porcentaje no debe ser mayor de
0,5 %.
membrana filtrante]. Transferir 50 ml del filtrado a un
CROSPOVIDONA recipiente apropiado de 100 ml, previamente pesado y
evaporar a sequedad. Secar a 110 ºC durante 3 horas:
H
C CH2 el peso del residuo obtenido no debe ser mayor de
O N 75 mg (1,50 %).
n
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 10 ppm.
(C6H9NO)n Vinilpirrolidinona
9003-39-8 Suspender 4,0 g de Crospovidona en 30 ml de
agua, agitar durante 15 minutos, centrifugar la suspen-
Definición - Crospovidona es un homopolímero sión obtenida y filtrar el sobrenadante ligeramente
sintético entrecruzado de N-Vinil-2-pirrolidinona. turbio a través de un filtro de vidrio sinterizado de
Debe contener no menos de 11,0 por ciento y no más 10 m. Agregar 50 ml de agua a la suspensión restan-
de 12,8 por ciento de nitrógeno (N), calculado sobre te, agitar, centrifugar y filtrar del mismo modo. Repe-
la sustancia anhidra y debe cumplir con las siguientes tir esta operación y juntar los filtrados. Agregar 0,5 g
especificaciones. de acetato de sodio y titular con iodo 0,1 N (SV)
Caracteres generales - Polvo de color blanco a hasta que el color del iodo no desaparezca. Agregar
blanco amarillento. Higroscópico. Insoluble en agua 3,0 ml de iodo 0,1 N (SV), dejar reposar durante
y en los solventes orgánicos comunes. 10 minutos y titular el iodo en exceso con tiosulfato de
sodio 0,1 N (SV), agregando 3 ml de almidón (SR)
Sustancia de referencia - Crospovidona SR-FA.
cerca del punto final. Realizar una determinación con
CONSERVACIÓN un blanco empleando el mismo volumen, exactamente
En envases de cierre perfecto. medido, de iodo 0,1 N (SV) que fue usado durante la
titulación y hacer las correcciones necesarias (ver
ENSAYOS Titulaciones residuales en 780. Volumetría) [NOTA:
Identificación ajustar con ácido acético el pH del blanco al pH de los
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. filtrados obtenidos a partir de la muestra]. No se debe
[NOTA: secar previamente al vacío a una temperatura consumir más de 0,72 ml de iodo, que corresponden a
de 105 ºC durante 1 hora.] no más de 0,1 % de vinilpirrolidinona.
B - Suspender 1 g de Crospovidona en 10 ml de Contenido de nitrógeno
agua, agregar 0,1 ml de iodo 0,1 N y agitar durante Proceder según se indica en Método II en 200.
30 segundos. Agregar 1 ml de almidón (SR) y agitar Determinación de nitrógeno empleando exactamente
nuevamente: no debe desarrollar color azul. alrededor de 0,1 g de Crospovidona. Omitir el uso de
Determinación del pH <250> peróxido de hidrógeno y usar 5 g de una mezcla de
Preparar una suspensión acuosa de Crospovidona polvo de sulfato de potasio, sulfato cúprico y dióxido
al 1 %: el pH debe estar comprendido entre 5,0 y 8,0. de titanio (33:1:1) en lugar de una mezcla de polvos
de sulfato de potasio y sulfato cúprico (10:1). Calen-
Determinación de agua <120> tar hasta obtener una solución verde clara transparen-
Titulación volumétrica directa. No más de 5,0 %. te, volver a calentar durante 45 minutos y proceder
Determinación del residuo de ignición <270> según se indica en Procedimiento comenzando donde
No debe perder más de 0,4 % de su peso, determi- dice “Agregar al producto de la digestión, 70 ml de
nado sobre 2 g de Crospovidona. agua…”.
Sustancias solubles en agua
Transferir 25,0 g de Crospovidona a un recipiente
de 400 ml, agregar 200 ml de agua y agitar durante
1 hora. Transferir a un matraz aforado de 250 ml con
la ayuda de agua, completar a volumen con agua y
mezclar. Dejar decantar y filtrar alrededor de 100 ml
del sobrenadante a través de una membrana filtrante
con un tamaño de poro de 0,45 m, protegida por otra
membrana con un tamaño de poro de 3 m [NOTA:
agitar durante la filtración tratando de no dañar la
Colocar partículas de Dactinomicina en aceite
DACTINOMICINA mineral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar
O la mezcla empleando un microscopio óptico con luz
H3C polarizada: las partículas deben presentar birrefrin-
Thr-D-Val-Pro gencia y posiciones de extinción cuando se gira la
MeVal Sar platina del microscopio.
O N
O Pérdida por secado <680>
H3C Secar al vacío durante 3 horas, a una presión in-
Thr-D-Val-Pro ferior a 5 mm Hg a 60 °C: no debe perder más de
5,0 % de su peso.
O NH2 MeVal Sar
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
C62H86N12O16 PM: 1.255,4 50-76-0 Debe contener menos de 100 Unidades de Endo-
toxina por mg de Dactinomicina.
Definición - Dactinomicina es Actinomicina D.
Debe contener no menos de 950 µg y no más de VALORACIÓN
1.030 µg por ciento de C62H86N12O16 por mg, calcu- [NOTA: efectuar la Preparación muestra y la
lado sobre la sustancia seca y debe cumplir con las Preparación estándar en el momento de su uso y
siguientes especificaciones. protegerlas en todo momento de la luz].
Caracteres generales - Polvo cristalino rojo Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
brillante. Higroscópico. Sensible a la luz y al ca- para cromatografía de líquidos con un detector
lor. Fácilmente soluble en alcohol; soluble en agua ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
a 10 °C y poco soluble en agua a 37 °C; muy poco 30 cm 3,9 mm con fase estacionaria constituida
soluble en éter. por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Sustancia de referencia - Dactinomici- porosas de sílice de 3 a 5 m de diámetro. El cau-
na SR-FA. dal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Acetonitrilo, acetato de so-
CONSERVACIÓN dio 0,04 M y ácido acético 0,07 M (46:25:25).
En envases inactínicos de cierre perfecto, prote- Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
gidos del calor. (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
Precaución - Prevenir su inhalación y contacto exactamente pesada de Dactinomicina SR-FA en
con la piel. Fase móvil y diluir cuantitativamente y en etapas, si
ENSAYOS fuera necesario, para obtener una solución de
aproximadamente 1,20 mg por ml.
Identificación Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
A - Absorción ultravioleta <470> dedor de 30 mg de Dactinomicina, transferir a un
Solvente: metanol matraz aforado de 25 ml, disolver y completar a
Concentración: 25 g por ml volumen con Fase móvil y mezclar.
La absortividad a 445 nm, calculada sobre Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
la sustancia seca no debe ser menor de 95,0 por Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
ciento y no mayor de 103,0 por ciento de una solu- las respuestas de los picos según se indica en Pro-
ción similar de Dactinomicina SR-FA. La relación cedimiento: el tiempo de retención para el pico de
de absorbancias a 240 y 445 nm (A240/A445) debe dactinomicina debe ser aproximadamente
estar comprendida entre 1,30 y 1,50. 25 minutos; la desviación estándar relativa para tres
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1,0 %.
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- Procedimiento - Inyectar por separado en el
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
paración muestra se debe corresponder con el obte- 20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
nido en la Preparación estándar. muestra, registrar los cromatogramas y medir las
Determinación de la rotación óptica <170> respuestas de los picos principales. Calcular la
Rotación específica: Entre -292° y -317°(a potencia de C62H86N12O16 en la porción de Dacti-
20 °C). nomicina en ensayo.
Solución muestra: 1 mg por ml, en metanol.
Cristalinidad
Diluyente - Cloroformo y metanol (9:1).
DANAZOL Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
tamente pesada de Danazol en Diluyente para obte-
CH3 OH ner una solución de aproximadamente 50 mg por
CH
ml.
CH3 H Soluciones estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Danazol SR-FA en Diluyen-
N H H te para obtener una solución de aproximadamente
O 1 mg por ml. Diluir cuantitativamente volúmenes
exactamente medidos de esta solución para obtener
C22H27NO2 PM: 337,5 17230-88-5 soluciones estándar con las siguientes concentra-
ciones:
Definición - Danazol es (17)-Pregna-2,4-dien- Solución Dilución Concentración % con respecto
20-ino[2,3-d]-isoxazol-17-ol. Debe contener no estándar (µg por ml) a la muestra
menos de 97,0 por ciento y no más de 102,0 por A 1 en 2 500 1,0
ciento de C22H27NO2, calculado sobre la sustancia B 1 en 4 250 0,5
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- C 1 en 10 100 0,2
ciones. D 1 en 20 50 0,1
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
a amarillo. Funde aproximadamente a 225 °C, con placa 5 l de las Soluciones estándar A, B, C y D y
descomposición. Fácilmente soluble en clorofor- 5 µl de la Solución muestra. Dejar secar las aplica-
mo; soluble en acetona; moderadamente soluble en ciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el
alcohol; poco soluble en éter; prácticamente insolu- frente del solvente haya recorrido aproximadamente
ble en agua y hexano. tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
Sustancia de referencia - Danazol SR-FA.
vente y dejar secar al aire. Examinar la placa bajo
CONSERVACIÓN luz ultravioleta a 254 nm y exponer a vapores de
En envases inactínicos de cierre perfecto. iodo durante 5 minutos: a excepción de la mancha
principal en el cromatograma obtenido a partir de la
ENSAYOS Solución muestra, ninguna mancha debe ser mayor
Identificación que la mancha obtenida con la Solución están-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. dar B (0,5 %) y la suma de las intensidades de todas
B - Absorción ultravioleta <470>. Emplear la las manchas secundarias no debe ser mayor que la
Preparación muestra y la Preparación estándar mancha principal obtenida con la Solución están-
según se indica en Valoración: el espectro de absor- dar A (1,0 %).
ción ultravioleta de la Preparación muestra debe Impurezas orgánicas volátiles <520>
presentar máximos a las mismas longitudes de onda Método II.
que la Preparación estándar.
VALORACIÓN
Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre +21° y +27°. Preparación estándar - Pesar exactamente una
Solución muestra: 10 mg por ml, en cloroformo. cantidad de Danazol SR-FA y disolver en alcohol
para obtener una solución de aproximadamente
Pérdida por secado <680> 20 µg por ml.
Secar a 60 °C a una presión inferior a 5 mm Hg, Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
hasta peso constante: no debe perder más de 2,0 % dedor de 100 mg de Danazol, transferir a un matraz
de su peso. aforado de 100 ml, disolver en aproximadamente
50 ml de alcohol, agitando por rotación, y comple-
Pureza cromatográfica tar a volumen con el mismo solvente. Transferir
Fase estacionaria - Emplear una placa para 2 ml de esta solución a un matraz aforado de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- 100 ml, completar a volumen con alcohol y mez-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- clar.
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm Procedimiento - Determinar las absorbancias de
de espesor. la Preparación estándar y la Preparación muestra
Fase móvil - Ciclohexano y acetato de etilo bajo luz ultravioleta (ver 470. Espectrofotometría
(7:3). ultravioleta y visible), en celdas de 1 cm, a la longi-
tud de onda de máxima absorción, aproximadamen-
te 285 nm, con un espectrofotómetro, empleando
alcohol como blanco. Calcular la cantidad en mg
de C22H27NO2 en la porción de Danazol en ensayo.
Solución estándar A con metanol para obtener una
DAPSONA solución de aproximadamente 125 µg por ml.
Solución estándar C - Diluir cuantitativamente la
O O
Solución estándar A con metanol para obtener una
S
solución de aproximadamente 62,5 µg por ml.
Solución muestra - Disolver una cantidad exacta-
H2N NH2 mente pesada de Dapsona en metanol para obtener
una solución de aproximadamente 12,5 mg por ml.
C12H12N2O2S PM: 248,3 Revelador - Emplear una solución de
80-08-0 p-dimetilaminocinamaldehído al 0,1 % en una mezcla
de ácido acético glacial y agua (50:50).
Definición - Dapsona es Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
4,4'-Sulfonilbisbencenamina. Debe contener no menos placa 4 µl de la Solución muestra y 4 µl de las Solu-
de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de ciones estándar A, B y C. Secar las aplicaciones con
C12H12N2O2S, calculado sobre la sustancia seca y debe la ayuda de una corriente de nitrógeno y desarrollar
cumplir con las siguientes especificaciones. los cromatogramas hasta que el frente del solvente
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco o haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes de
casi blanco. Fácilmente soluble en alcohol; soluble en la longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
acetona y en ácidos minerales diluidos; muy poco marcar el frente del solvente y dejar secar al aire.
soluble en agua. Pulverizar sobre la placa con Revelador y examinar las
manchas: en el cromatograma obtenido a partir de la
Sustancia de referencia - Dapsona SR-FA.
Solución muestra, ninguna mancha secundaria debe
CONSERVACIÓN ser mayor en tamaño o intensidad que la obtenida con
En envases inactínicos bien cerrados. la Solución estándar C (0,5 %) y la suma de las inten-
sidades de todas las manchas secundarias en el croma-
ENSAYOS tograma obtenido a partir de la Solución muestra no
Identificación debe ser mayor que la mancha principal obtenida con
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. la Solución estándar B (1,0 %).
B - Absorción ultravioleta <470> Pérdida por secado <680>
Solvente: metanol. Secar a 105 C durante 3 horas: no debe perder
Concentración: 5 µg por ml. más de 1,5 % de su peso.
Determinación del punto de fusión <260> Impurezas orgánicas volátiles <520>
Entre 175 y 181 C. Método III.
Determinación del residuo de ignición <270> Solvente: dimetilsulfóxido.
No más de 0,1 %. VALORACIÓN
Límite de selenio <610> Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para
No más de 0,003 %, determinado sobre una mez- cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta
cla de 100 mg de Dapsona con 100 mg de óxido de ajustado a 254 nm y una columna de 30 cm 4 mm
magnesio. con fase estacionaria constituida por partículas poro-
Pureza cromatográfica sas de sílice de 5 a 10 µm de diámetro. El caudal debe
Fase estacionaria - Emplear una placa para cro- ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
matografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) Fase móvil - Transferir 100 ml de alcohol iso-
recubierta con gel de sílice para cromatografía, de propílico, 100 ml de acetonitrilo y 100 ml de acetato
0,25 mm de espesor. de etilo a un matraz aforado de 1 litro. Completar a
Fase móvil - [NOTA: preparar en el momento de volumen con pentano, sin mezclar, luego mezclar y
su uso]. Cloroformo, acetona, alcohol n-butílico y dejar que la mezcla se enfríe a temperatura ambiente.
ácido fórmico (60:15:15:10). Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema
Solución estándar A - Disolver una cantidad exac- en 100. Cromatografía).
tamente pesada de Dapsona SR-FA en metanol para Preparación estándar - Disolver una cantidad
obtener una solución de aproximadamente 12,5 mg exactamente pesada de Dapsona SR-FA en metanol
por ml. para obtener una solución de aproximadamente
Solución estándar B - Diluir cuantitativamente la 250 µg por ml. Transferir 5,0 ml de esta solución a un
matraz aforado de 50 ml, completar a volumen con
Fase móvil y mezclar para obtener una solución de
aproximadamente 25 µg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alrede-
dor de 50 mg de Dapsona y transferir a un matraz
aforado de 200 ml. Disolver y completar a volumen
con metanol y mezclar. Transferir 5,0 ml de esta
solución a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con Fase móvil y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: la desviación estándar relativa para inyeccio-
nes repetidas no debe ser mayor de 2 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la canti-
dad de C12H12N2O2S en la porción de Dapsona en
ensayo.
No más de 0,1 %, determinado sobre 1,0 g.
DEFEROXAMINA,
Límite de cloruro y sulfato <560>
MESILATO DE Cloruro - Una porción de 1,2 g de Mesilato de
Deferoxamina no debe presentar más cloruro que el
correspondiente a 0,20 ml de ácido clorhídrico
OH
H 0,020 N (0,012 %).
O N N
NH2 O CH3 Sulfato - Una porción de 0,5 g Mesilato de De-
N
O
O N N O
feroxamina no debe presentar más sulfato que el
H
OH OH correspondiente a 0,20 ml de ácido sulfúrico
. CH3 SO3H 0,020 N (0,04 %).
Pureza cromatográfica
[NOTA: preparar las soluciones inmediatamente
C25H48N6O8 . CH4O3S PM: 656,8 138-14-7
antes de su uso y protegerlas de la luz].
Definición - Mesilato de Deferoxamina es Me- Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
tansulfonato de N´-[5-[[4-[[5-(acetilhidroxiamino) para cromatografía de líquidos con un detector
pentil]amino]-1,4-dioxobutil]hidroxiamino]pentil]- ultravioleta ajustado a 220 nm y una columna de
N-(5-aminopentil)-N-hidroxibutanodiamida. Debe 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
contener no menos de 98,0 por ciento y no más de por octadecilsilano químicamente unido a partículas
102,0 por ciento de C25H48N6O8 . CH4O3S, calcula- porosas de sílice de 10 µm de diámetro. El caudal
do sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las debe ser aproximadamente 2,0 ml por minuto.
siguientes especificaciones. Fase móvil - Disolver 1,32 g de fosfato de
Caracteres generales - Polvo blanco o casi amonio y 0,37 g de edetato disódico en 950 ml de
blanco. Fácilmente soluble en agua; poco soluble agua. Ajustar a pH 2,8 con ácido fosfórico
en metanol; muy poco soluble en alcohol; práctica- (aproximadamente entre 3 y 4 ml) y agregar 55 ml
mente insoluble en éter. de tetrahidrofurano. Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
Sustancia de referencia - Mesilato de Defe- 100. Cromatografía)
roxamina SR-FA. Solución estándar - Pesar exactamente alrede-
CONSERVACIÓN dor de 10 mg de Mesilato de Deferoxamina SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver,
En envases inactínicos de cierre perfecto, en un completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
sitio frío. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
ENSAYOS de 50 mg de Mesilato de Deferoxamina, transferir a
un matraz aforado de 50 ml, disolver, completar a
Identificación volumen con Fase móvil y mezclar.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Solución muestra diluida - Transferir 1,0 ml de
[NOTA: si los espectros obtenidos presentan dife- Solución muestra a un matraz aforado de 25 ml,
rencias, disolver la muestra y la Sustancia de refe- completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
rencia en alcohol, evaporar a sequedad y registrar Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
nuevamente los espectros empleando los residuos Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
obtenidos]. respuestas de los picos según se indica en Procedi-
B - Disolver 5 mg de Mesilato de Deferoxami- miento: la resolución R entre el pico correspondien-
na en 5 ml de agua, agregar 2 ml de una solución de te a un tiempo de retención relativo de aproxima-
fosfato tribásico de sodio 1 en 200 y mezclar. damente 0,8 y el pico principal debe ser mayor a
Agregar 10 gotas de una solución de 1,0.
-naftoquinona-4-sulfonato de sodio 1 en 40: se Procedimiento - Inyectar por separado en el
debe desarrollar un color pardo. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Determinación del pH <250> 20 µl) de la Solución muestra y la Solución muestra
Entre 4,0 y 6,0, determinado sobre una solución diluida, registrar los cromatogramas durante tres
1 en 100. veces el tiempo de retención del pico de deferoxa-
mina y medir las respuestas de todos los picos. A
Determinación de agua <120>
excepción del pico principal en el cromatograma
Titulación volumétrica directa. No más de
obtenido a partir de la Solución muestra, la respues-
2,0 %.
ta de ningún pico debe ser mayor a la del pico prin-
Determinación del residuo de ignición <270> cipal obtenido con la Solución muestra diluida
(4,0 %); la suma de todos los picos no debe ser
mayor de 1,75 veces la respuesta del pico principal
obtenido con la Solución muestra diluida (7,0 %).
Ignorar cualquier pico con una respuesta menor de
0,02 veces el pico principal obtenido con la Solu-
ción muestra diluida.
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,001 %.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indique que el Mesilato
de Deferoxamina es estéril, no debe contener más
de 0,33 Unidades de Endotoxina por mg de Mesila-
to de Deferoxamina.
Ensayos de esterilidad <370>
Cuando en el rótulo se indique que el Mesilato
de Deferoxamina es estéril, debe cumplir con los
requisitos según se indica en Método de filtración
por membrana.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Me-
silato de Deferoxamina, disolver en 25 ml de agua y
agregar 4 ml de ácido sulfúrico 0,05 M. Titular con
sulfato férrico amónico 0,1 N (SV) y, cerca del
punto final, proceder a una velocidad uniforme de
aproximadamente 0,2 ml por minuto. Determinar el
punto final potenciométricamente, empleando un
electrodo indicador de platino y un electrodo de
referencia de calomel. Cada ml de sulfato férrico
amónico 0,1 N equivale a 65,68 mg de
C25H48N6O8 . CH4O3S.
ROTULADO
Cuando el Mesilato de Deferoxamina esté desti-
nado a la preparación de formas farmacéuticas
inyectables, indicar en el rótulo que es estéril.
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
DESOXICORTICOSTERONA, debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
ACETATO DE Fase móvil - Transferir 600 ml de acetonitrilo y
350 ml de agua a un matraz aforado de 1 litro, dejar
O
equilibrar, completar a volumen con agua y mez-
CH 3 H clar. Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes nece-
O CH 3 sarios (ver Aptitud del sistema en 100. Cromato-
CH 3 grafía).
H
O Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
H H de 25 mg de Acetato de Desoxicorticosterona,
transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver y
O completar a volumen con Fase móvil.
Solución estándar A - Pesar exactamente alre-
dedor de 2 mg de Acetato de Desoxicorticostero-
C23H32O4 PM: 372,5 56-47-3
na SR-FA y 2 mg de 17-Valerato de Betametasona,
Definición - Acetato de Desoxicorticosterona transferir a un matraz aforado de 200 ml, disolver
es 21-Acetiloxi-pregn-4-eno-3,20-diona. Debe con Fase móvil y completar a volumen con Fase
contener no menos de 97,0 por ciento y no más de móvil.
103,0 por ciento de C23H32O4, calculado sobre la Solución estándar B - Transferir 1 ml de la So-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes lución muestra a un matraz aforado de 200 ml y
especificaciones. completar a volumen con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
Cromatografiar la Solución estándar A y registrar
o casi blanco. Inodoro. Estable al aire. Modera-
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
damente soluble en alcohol, acetona y dioxano;
cedimiento: la resolución R entre los picos de
poco soluble en aceites vegetales; prácticamente
17-valerato de betametasona y acetato de desoxicor-
insoluble en agua.
ticosterona no debe ser menor de 4,5.
Sustancia de referencia - Acetato de Desoxi- Procedimiento - Inyectar por separado en el
corticosterona SR-FA. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Solución muestra y la Solución están-
CONSERVACIÓN dar B, registrar los cromatogramas durante tres
En envases inactínicos bien cerrados. veces el tiempo de retención del pico principal y
medir las respuestas de todos los picos. Los tiem-
ENSAYOS pos de retención son aproximadamente 7,5 minutos
para 17-valerato de betametasona y 9,5 minutos
Identificación
para acetato de desoxicorticosterona. A excepción
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
del pico principal en el cromatograma obtenido a
B - Absorción ultravioleta <470>
partir de la Solución muestra, la suma de las res-
Solvente: alcohol.
puestas de todos los picos no debe ser mayor a la
Concentración: 10 µg por ml.
respuesta del pico principal obtenida con la Solu-
Las absortividades a 240 nm, calculadas
ción estándar B (0,5 %). Ignorar cualquier pico con
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
una respuesta menor de 0,1 veces la respuesta del
3,0 %.
pico principal en el cromatograma obtenido con la
Determinación del punto de fusión <260> Solución estándar B.
Entre 155 y 161 °C.
Pérdida por secado <680>
Determinación de la rotación óptica <170> Secar entre 100 y 105 °C sobre gel de silice du-
Rotación específica: Entre + 171 y + 179 . rante 4 horas: no debe perder más de 0,5 % de su
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano. peso.
[NOTA: no secar la muestra.]
VALORACIÓN
Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo Preparación estándar - Proceder según se indi-
para cromatografía de líquidos con un detector ca para Valoración directa en 750. Valoración de
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de esteroides; empleando Acetato de Desoxicorticoste-
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida rona SR-FA.
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Acetato de Desoxicorticoste-
ron, disolver en suficiente cantidad de alcohol para
obtener un volumen de 200 ml y mezclar. Transfe-
rir 5 ml de esta solución a un matraz aforado de
250 ml, completar a volumen con alcohol y mez-
clar. Transferir 20 ml de esta solución a un erlen-
meyer de 50 ml con tapón de vidrio.
Procedimiento - Proceder según se indica para
Valoración directa en 750. Valoración de esteroi-
des. Calcular la cantidad en mg de C23H32O4 en la
porción de Acetato de Desoxicorticosterona en
ensayo, por la fórmula siguiente:
10C(AM/AE)
en la cual C los términos son los definidos en
750. Valoración de esteroides.
Solución reguladora de formiato - Disolver
DEXAMETASONA 1,32 g de formiato de amonio en 1 litro de agua,
ajustar a pH 3,6 con ácido fórmico y mezclar.
O Fase móvil - Solución reguladora de formiato y
OH
OH
acetonitrilo (67:33). Filtrar y desgasificar. Hacer
H CH3
HO los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
H 100. Cromatografía).
H
CH3
CH3
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 180 mg de Dexametasona, transferir a un matraz
F H aforado de 100 ml, disolver y completar a volumen
con acetonitrilo y mezclar. Transferir 33 ml de esta
O solución a un matraz aforado de 100 ml, completar
a volumen con Solución reguladora de formiato y
C22H29FO5 PM: 392,5 50-02-2 mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Definición - Dexametasona es (11,16)-9- Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
Fluoro-11,17,21-trihidroxi-16-metilpregna-1,4- respuestas de los picos según se indica en Procedi-
dieno-3,20-diona. Debe contener no menos de 97,0 miento: la eficiencia de la columna no debe ser
por ciento y no más de 102,0 por ciento de menor de 5.000 platos teóricos.
C22H29FO5, calculado sobre la sustancia seca y debe Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
cumplir con las siguientes especificaciones. aproximadamente 10 µl de la Solucióm muestra,
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco registrar el cromatograma y medir las respuestas de
o casi blanco. Estable al aire. Funde aproximada- todos los picos. Calcular el porcentaje de cada
mente a 250 °C, con descomposición. Moderada- impureza en la porción de Dexametasona en ensa-
mente soluble en acetona, alcohol, dioxano y meta- yo, en relación a la suma de las respuestas de todos
nol; poco soluble en cloroformo; muy poco soluble los picos. No debe contener más de 1,0 % de cual-
en éter; prácticamente insoluble en agua. quier impureza individual y no debe contener más
de 2,0 % de impurezas totales.
Sustancia de referencia - Dexametaso-
na SR-FA. Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,2 % determinado sobre 250 mg.
CONSERVACIÓN
Pérdida por secado <680>
En envases bien cerrados.
Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
ENSAYOS más de 0,5 % de su peso.
Identificación Impurezas orgánicas volátiles <520>
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Método II.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: alcohol absoluto. VALORACIÓN
Concentración: 30 µg por ml. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Las absortividades a 239 nm, calculadas para cromatografía de líquidos con un detector
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
3,0 %. 25 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
octilsilano químicamente unido a partículas total-
Determinación de la rotación óptica <170>
mente porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro.
Rotación específica: Entre +72° y +80°.
El caudal debe ser aproximadamente 2 ml por mi-
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano.
nuto, de modo que el tiempo de retención de Dexa-
Pureza cromatográfica metasona sea aproximadamente 8 minutos.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo Fase móvil - Agua y acetonitrilo (7:3). Filtrar y
para cromatografía de líquidos con un detector desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida Preparación estándar - Preparar una solución
por grupos fenilo químicamente unidos a partículas de Dexametasona SR-FA en metanol de aproxima-
porosas de sílice de 5 a 10 µm de diámetro. El damente 7,5 mg por ml. Diluir un volumen exac-
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu- tamente medido de esta solución con Fase móvil
to. para obtener una solución de aproximadamente
0,3 mg por ml.
Preparación muestra - Proceder según se indica
en Preparación estándar, empleando 30 mg de
Dexametasona.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 3,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (entre 15 y 30 µl)
de la Preparación muestra y la Preparación están-
dar, registrar los cromatogramas y medir las res-
puestas de los picos principales. Calcular la canti-
dad de C22H29FO5 en la porción de Dexametasona
en ensayo.
matográfica en Dexametasona.
DEXAMETASONA, Fase móvil - Solución reguladora de formiato y
ACETATO DE acetonitrilo (3:2). Filtrar y desgasificar. Hacer los
ajustes necesarios (ver Aptitud de sistema en 100.
Cromatografía).
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 200 mg de Acetato de Dexametasona, transferir a
un matraz aforado de 100 ml, disolver, completar a
volumen con acetonitrilo y mezclar. Transferir 40 ml
de esta solución a un matraz aforado de 100 ml, com-
pletar a volumen con Solución reguladora de formiato
y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
C24H31FO6 PM: 434,5 1177-87-3 miento: la eficiencia de la columna no debe ser menor
Monohidrato PM: 452,5 de 5.400 platos teóricos.
55812-90-3 Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
aproximadamente 10 µl de la Solución muestra, regis-
Definición - Acetato de Dexametasona es trar el cromatograma y medir las respuestas de todos
(11,16)-9-Fluoro-11,17-dihidroxi-21-acetiloxi- los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en
16-metilpregna-1,4-dieno-3,20-diona. Debe contener la porción de Acetato de Dexametasona en ensayo, en
no menos de 97,0 por ciento y no más de 102,0 por relación a la suma de las respuestas de todos los picos.
ciento de C24H31FO6, calculado sobre la sustancia seca No debe contener más de 1,0 % de cualquier impure-
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. za individual y no más de 2,0 % de impurezas totales.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco o Límite de metales pesados <590>
casi blanco. Inodoro. Fácilmente soluble en metanol, Método II. No más de 0,002 %.
acetona y dioxano; prácticamente insoluble en agua.
Presenta polimorfismo. Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a 105 C durante 3 horas: el mono-
Sustancia de referencia - Acetato de Dexameta- hidrato debe perder entre 3,5 y 4,5 % de su peso y la
sona SR-FA. forma anhidra no más de 0,4 %.
CONSERVACIÓN Impurezas orgánicas volátiles <520>
En envases inactínicos bien cerrados. Método III.
Solvente: dimetilsulfóxido.
ENSAYOS
VALORACIÓN
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para
B - Absorción ultravioleta <470> cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta
Solvente: metanol. ajustado a 254 nm y una columna de 30 cm 3,9 mm
Concentración: 15 µg por ml. con fase estacionaria constituida por octadecilsilano
Las absortividades a 239 nm, calculadas so- químicamente unido a partículas porosas de sílice de
bre la sustancia seca, no deben diferir en más de 10 µm de diámetro. El caudal debe ser aproximada-
3,0 %. mente 2,0 ml por minuto.
Fase móvil - Agua y acetonitrilo (55:45). Filtrar y
Determinación de la rotación óptica <170> desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud
Rotación específica: Entre + 82 y + 88. del sistema en 100. Cromatografía).
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano. Solución reguladora de pH 6,0 - Transferir 3 ml
Determinación del residuo de ignición <270> de hidróxido de sodio 1 N, 138 ml de cloruro de pota-
No más de 0,1 %. sio 0,5 N y 50 ml de fosfato monobásico de potasio
0,5 M a un matraz aforado de 1 litro, completar a
Pureza cromatográfica volumen con agua y mezclar.
Sistema cromatográfico y Solución reguladora de Diluyente - Acetonitrilo y Solución reguladora de
formiato - Proceder según se indica en Pureza cro- pH 6,0 (1:1).
Preparación estándar - Pesar exactamente alre-
dedor de 25 mg de Acetato de Dexametasona SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 250 ml, agregar
100 ml de Diluyente y sonicar para obtener una solu-
ción transparente. Completar a volumen con Diluyen-
te y mezclar.
Preparación muestra - Pesar exactamente alrede-
dor 25 mg de Acetato de Dexametasona, transferir a
un matraz aforado de 250 ml, agregar 100 ml de Dilu-
yente y sonicar para obtener una solución transparen-
te. Completar a volumen con Diluyente y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: la eficiencia de la columna no debe ser menor
de 1.500 platos teóricos; el factor de asimetría no debe
ser mayor de 2,0; el factor de capacidad no debe ser
menor de 2,0; la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la canti-
dad en mg de C24H31FO6 en la porción de Acetato de
Dexametasona en ensayo, por la fórmula siguiente:
250C(rM/rE)
en la cual C es la concentración en mg por ml de Ace-
tato de Dexametasona SR-FA en la Preparación
estándar y rM y rE son las respuestas de los picos
obtenidos en la Preparación muestra y la Preparación
estándar, respectivamente.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si Acetato de Dexametasona es
anhidra o monohidrato.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
DEXAMETASONA, de 10 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona y
FOSFATO SÓDICO DE transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver y
completar a volumen con metanol y mezclar.
O Revelador - Agregar cuidadosamente y enfrian-
OH do, 20 ml ácido sulfúrico a 60 ml de alcohol. Dejar
H CH3 O ONa
HO P
enfriar y diluir a 100 ml con el mismo solvente
H ONa [NOTA: preparar en el momento de su uso].
CH3 H O Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
CH3
placa 5 µl de la Solución muestra y 5 µl de las So-
F H luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-
nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
O
frente del solvente haya recorrido aproximadamente
tres cuartas partes de la longitud de la placa. Secar
C22H28FNa2O8P PM: 516,4 2392-39-4 la placa al aire y examinar bajo luz ultravioleta a
254 nm: la mancha principal en el cromatograma
Definición - Fosfato Sódico de Dexametasona
obtenido a partir de la Solución muestra debe ser
es Sal disódica de (11 ,16 ) 9-fluoro-
similar en tamaño, intensidad y valor de Rf a la
11,17-dihidroxi-21-(fosfonooxi)-16-metilpregna-
obtenida con la Solución estándar A. Pulverizar
1,4-dieno-3,20-diona. Debe contener no menos de
sobre la placa con Revelador y calentar a 120 °C
97,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de
durante 10 minutos o hasta que las manchas aparez-
C22H28FNa2O8P, calculado sobre la sustancia an-
can. Dejar enfriar y examinar bajo luz natural y
hidra y libre de alcohol y debe cumplir con las
bajo luz ultravioleta a 366 nm: la mancha principal
siguientes especificaciones.
en el cromatograma obtenido a partir de la Solución
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco muestra se debe corresponder en tamaño, valor de
o algo amarillo. Inodoro o posee un débil olor a Rf, color a la luz natural y fluorescencia a la luz
alcohol. Excesivamente higroscópico. Fácilmente ultravioleta que la mancha principal obtenida con la
soluble en agua; poco soluble en alcohol; muy poco Solución estándar A. El ensayo solo es válido si en
soluble en dioxano; insoluble en cloroformo y éter. el cromatograma obtenido con la Solución estándar
Presenta polimorfismo. B se observan dos manchas, las cuales pueden no
Sustancias de referencia - Dexametaso- estar completamente separadas.
na SR-FA. Fosfato de Dexametasona SR-FA. B - El residuo de ignición debe responder a los
Fosfato Sódico de Dexametasona SR-FA. Fosfato ensayos para Fosfato <410> y para Sodio <410>.
Sódico de Prednisolona SR-FA. Determinación de la rotación óptica <170>
CONSERVACIÓN Rotación específica: Entre + 74° y + 82°, calcu-
lada sobre la sustancia libre de agua y alcohol.
En envases inactínicos de cierre perfecto. Solución muestra: 10 mg por ml, en agua.
ENSAYOS Determinación del pH <250>
Identificación Entre 7,5 y 10,5, determinado sobre una solu-
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. ción 1 en 100.
Fase estacionaria - Emplear una placa para Determinación de agua <120>
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- Titulación volumétrica directa. La suma de los
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- porcentajes del contenido de agua y del contenido
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de alcohol, determinado según se indica en Deter-
de espesor. minación de alcohol, no debe ser mayor de 16,0 %.
Fase móvil - Butanol, agua y ácido acético gla-
cial (60:20:20). Determinación de alcohol <130>
Solución estándar A - Pesar exactamente alre- Proceder según se indica para Método II; excep-
dedor de 20 mg de Fosfato Sódico de Dexametaso- to que se debe emplear una columna con fase esta-
na SR-FA, transferir a un matraz aforado de 20 ml, cionaria constituida por un copolímero de 4-vinil-
disolver y completar a volumen con metanol. piridina y estireno-divinilbenceno y las siguientes
Solución estándar B - Disolver 10 mg de Fosfa- modificaciones.
to Sódico de Prednisolona SR-FA en la Solución Solución del estándar interno - Transferir
estándar A y diluir a 10 ml con la misma solución. 1,0 ml de alcohol isopropílico a un matraz aforado
de 100 ml, completar a volumen con agua y mez- Solución estándar - En forma similar y en suce-
clar. sión inmediata, preparar una Solución estándar
Solución estándar - Preparar una solución empleando 5,0 ml de Solución estándar de fosfato
1 en 50 de alcohol en agua. Determinar la densidad en lugar de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexameta-
relativa a 25 °C (ver 160. Determinación de la sona.
densidad relativa) y obtener el porcentaje de Procedimiento - Determinar concomitantemen-
C2H5OH por referencia a la Tabla alcoholimétrica te las absorbancias de ambas soluciones, en celdas
en Tablas. de 1 cm a 730 nm, con un espectrofotómetro, em-
Preparación estándar - Transferir 4,0 ml de So- pleando agua como blanco. La absorbancia de la
lución estándar y 5,0 ml de Solución del estándar Solución muestra no debe ser mayor que la de la
interno a un matraz aforado de 10 ml. Completar a Solución estándar. No debe contener más de 1,0 %
volumen con agua y mezclar. Inyectar 2 µl de esta de fosfato.
solución en el cromatógrafo de gases.
Dexametasona libre
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
dedor de 500 mg de Fosfato Sódico de Dexameta-
para cromatografía de líquidos con un detector
sona, transferir a un matraz aforado de 10 ml, agre-
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
gar 5,0 ml de Solución estándar interno y mezclar
25 cm × 4,5 mm con fase estacionaria constituida
hasta disolver. Completar a volumen con agua y
por grupos fenilo químicamente unidos a partículas
mezclar. Inyectar 2 µl de esta solución en el cro-
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
matógrafo de gases.
debe ser aproximadamente 1,2 ml por minuto.
Cálculos - Calcular el porcentaje de alcohol en
Solución de trietilamina - Preparar una solución
la porción de Fosfato Sódico de Dexametasona en
que contenga 7,5 ml de trietilamina en 1 litro de
ensayo por la fórmula siguiente:
agua. Ajustar a pH 5,4 con ácido fosfórico.
4(S/P)(RM/RE) Fase móvil - Solución de trietilamina y metanol
(74:26). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
en la cual S es el porcentaje de alcohol en la Solu-
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
ción estándar, P es el peso en g de Fosfato Sódico
tografía).
de Dexametasona empleado en la Preparación
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
muestra y RM y RE son las respuestas del pico de
tamente pesada de Fosfato de Dexametaso-
alcohol, relativas al estándar interno, en la Prepara-
na SR-FA en Fase móvil para obtener una solución
ción muestra y la Preparación estándar, respecti-
de aproximadamente 0,5 mg por ml. Preparar una
vamente. El contenido de C2H5OH no debe ser
segunda solución disolviendo una cantidad exacta-
mayor de 8,0 %.
mente pesada de Dexametasona SR-FA en una
Fosfato inorgánico mezcla de metanol y agua (1:1) para obtener una
Solución estándar de fosfato - Disolver solución de aproximadamente 50 µg por ml. Trans-
143,3 mg de fosfato monobásico de potasio seco en ferir 10,0 ml de la primera solución y 1,0 ml de la
agua y diluir a 1 litro. Esta solución contiene el segunda solución a un matraz aforado de 100 ml.
equivalente a 0,10 mg de fosfato en cada ml. Completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
Reactivo para fosfato A - Disolver 5 g de mo- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
libdato de amonio en ácido sulfúrico 1 N para obte- de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona,
ner 100 ml. transferir a un matraz aforado de 100 ml y disolver
Reactivo para fosfato B - Disolver 350 mg de con Fase móvil. Completar a volumen con Fase
sulfato p-metilaminofenol en 50 ml de agua, agre- móvil y mezclar. Diluir 5,0 ml de esta solución con
gar 20 g de bisulfito de sodio, mezclar hasta disol- Fase móvil a 50,0 ml.
ver y diluir con agua a 100 ml. Solución de aptitud del sistema - Preparar una
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor solución en Fase móvil de aproximadamente 0,05 y
de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, 0,02 mg por ml de Fosfato de Dexametasona
transferir a un matraz aforado de 25 ml y disolver SR-FA y de Dexametasona SR-FA, respectivamen-
en una mezcla de 10 ml de agua y 5 ml de ácido te.
sulfúrico 2 N, calentando si fuera necesario. Agre- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
gar 1 ml de Reactivo para fosfato A y 1 ml de Reac- Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
tivo para fosfato B, completar a volumen con agua, registrar las respuestas de los picos según se indica
mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente en Procedimiento: la eficiencia de la columna de-
durante 30 minutos. terminada para el pico principal no debe ser menor
de 900 platos teóricos; el factor de asimetría para el
pico principal no debe ser mayor de 1,6; la resolu- 24-35 60 5 40 95 Gradiente
ción R entre los picos de fosfato de dexametasona y lineal
dexametasona no debe ser menor de 1,8; la desvia- 35-60 5 95 Isocrática
ción estándar relativa para inyecciones repetidas no 60-60,1 5 90 95 10 Gradiente
debe ser mayor de 1,0 %. lineal
Procedimiento - Inyectar por separado en el
60,1-65 90 10 Isocrática
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues- Solución reguladora de acetato - Disolver 7 g
tra, registrar los cromatogramas y medir las res- de acetato de amonio en 1 litro de agua, ajustar a
puestas de los picos de dexametasona. Calcular la pH 4,00 0,05 y mezclar.
cantidad de dexametasona (C22H29FO5) en la por- Solución A - Metanol, agua y Solución regula-
ción de Fosfato Sódico de Dexametasona en ensa- dora de acetato (7:7:6). Filtrar y desgasificar.
yo. No debe contener más de 1,0 %. Solución B - Metanol y Solución reguladora de
Pureza cromatográfica acetato (7:3). Filtrar y desgasificar.
Sistema cromatográfico, Solución reguladora, Fase móvil - Emplear mezclas de Solución A y
de acetato, Solución A, Solución B y Fase móvil Solución B según se indica en Sistema cromatográ-
proceder según se indica en Valoración. fico. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
Solución muestra - Emplear la Preparación sistema en 100. Cromatografía).
muestra según se indica en Valoración. Preparación estándar - Disolver una cantidad
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - exactamente pesada de Fosfato de Dexametaso-
Cromatografiar la Solución muestra y registrar las na SR-FA en Solución A para obtener una solución
respuestas de los picos según se indica en Procedi- de aproximadamente 0,92 mg por ml.
miento: la resolución R entre el pico principal y el Preparación muestra - Disolver una cantidad
de la impureza más cercana no debe ser menor de exactamente pesada de Fosfato Sódico de Dexame-
1,0; la desviación estándar relativa para inyecciones tasona en Solución A y mezclar para obtener una
repetidas no debe ser mayor de 4,0 %. solución de aproximadamente 1,0 mg por ml.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
aproximadamente 15 µl de la Solución muestra, Cromatografiar la Preparación muestra y registrar
registrar el cromatograma y medir las respuestas de las respuestas de los picos según se indica en Pro-
todos los picos. Calcular el porcentaje de cada cedimiento: la resolución R entre el pico de fosfato
impureza individual en la porción de Fosfato Sódi- de dexametasona y el de la impureza más cercana
co de Dexametasona en ensayo, en relación a la no debe ser menor de 1,0. Cromatografiar la Pre-
suma de las respuestas de todos los picos. No debe paración estándar y registrar las respuestas de los
contener más de 1,0 % de cualquier impureza indi- picos según se indica en Procedimiento: la desvia-
vidual y no más de 2,0 % de impurezas totales. ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
debe ser mayor de 2,0 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520> Procedimiento - Inyectar por separado en el
Método II. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
VALORACIÓN 15 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo respuestas de los picos principales. Calcular la
para cromatografía de líquidos con un detector cantidad de C22H28FNa2O8P en la porción de Fosfa-
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de to Sódico de Dexametasona en ensayo.
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. Mante-
ner la temperatura de la columna a aproximadamen-
te 40 °C. El caudal debe ser aproximadamente
1,0 ml por minuto. El cromatógrafo se debe pro-
gramar del siguiente modo:
Tiempo Solución A Solución B Etapa
(minutos) (%) (%)
0-3,5 90 10 Isocrática
3,5-24 90 60 10 40 Gradiente
lineal
DEXCLORFENIRAMINA, Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
MALEATO DE para cromatografía de gases con un detector de
ionización a la llama y una columna de vidrio de
Cl 1,2 m × 4 mm con 3 % de fase constituida por 50 %
de fenil silicona y 50 % de metilpolisiloxano sobre
un soporte constituido por tierra silícea para croma-
HO OH
H tografía de gases que ha sido calcinada mezclando
N CH3 O O diatomea con Na2CO3 y calcinada a 900 °C.
N
[NOTA: la tierra silícea se lava con ácido y con
CH3
álcali, luego se lava con agua hasta neutralidad. La
tierra silícea puede ser silanizada al tratarla con un
agente como dimetildiclorosilano para bloquear los
C16H19ClN2 . C4H4O4 PM: 390,9 2438-32-6 grupos silanoles superficiales]. Mantener la colum-
Definición - Maleato de Dexclorfeniramina es na, el inyector y el detector a aproximadamente
Maleato de (+)-2-[p-cloro--(2-dimetilaminoetil] 190, 250 y 250 °C, respectivamente. Se debe em-
bencil]piridina (1:1). Debe contener no menos de plear helio como gas transportador con un caudal
98,0 por ciento y no más de 100,5 por ciento de ajustado para obtener un tiempo de retención de 4 a
C16H19ClN2 . C4H4O4, secado a 65 °C durante 5 minutos para el pico principal.
4 horas y debe cumplir con las siguientes especifi- Solución muestra - Disolver aproximadamente
caciones. 200 mg de Maleato de Dexclorfeniramina en 5 ml
de cloruro de metileno y mezclar.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
inodoro. Fácilmente soluble en agua; soluble en Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
alcohol y cloroformo; poco soluble en éter y bence- respuestas de los picos según se indica en Procedi-
no. miento: el factor de asimetría para el pico de malea-
Sustancia de referencia - Maleato de Dexclor- to de dexclorfeniramina no debe ser mayor de 1,8.
feniramina SR-FA. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
aproximadamente 1 µl de la Solución muestra.
CONSERVACIÓN Registrar el cromatograma durante un tiempo total
En envases inactínicos de cierre perfecto. no inferior a dos veces el tiempo de retención del
pico de dexclorfeniramina y medir las respuestas de
ENSAYOS
los picos. A excepción de los picos del solvente y
Identificación del ácido maleico, la respuesta relativa total de
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sóli- todos los picos extraños no debe ser mayor a 2,0 %.
da.
B - Absorción ultravioleta <470> Impurezas orgánicas volátiles <520>
Solvente: agua. Método I.
Concentración: 40 µg por ml. VALORACIÓN
Determinación del punto de fusión <260> Pesar exactamente alrededor de 150 mg de Ma-
Método I. Entre 110 y 115 °C. leato de Dexclorfeniramina, disolver en 25 ml de
Determinación de la rotación óptica <170> ácido acético glacial. Titular con ácido perclórico
Rotación específica: Entre + 39,5° y + 43,0°. 0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
Solución muestra: 50 mg por ml, en dimetilfor- ciamétricamente. Realizar una determinación con
mamida. un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
Determinación del pH <250> 0,1 N equivale a 19,54 mg de C16H19ClN2 . C4H4O4.
Entre 4,0 y 5,0, determinado sobre una solución
1 en 100.
Pérdida por secado <680>
Secar a 65 °C durante 4 horas: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,2 %.
Cuando en el rótulo se indique que Dextrano 40
DEXTRANO 40 Calidad Inyectable está destinado a la preparación
CALIDAD INYECTABLE de formas farmacéuticas parenterales, debe contener
menos de 10 Unidades de Endotoxina por gramo.
Definición - Dextrano 40 Calidad Inyectable se
obtiene mediante hidrólisis controlada y fracciona- Acidez o alcalinidad
miento de los polisacáridos producidos por fermen- Disolver 5,0 g de Dextrano 40 Calidad Inyecta-
tación de la sacarosa utilizando cepas de Leuconos- ble en agua, calentando en un baño de agua y diluir
toc mesenteroides (NRRL, B-512F; NCTC, 10817). hasta 50 ml con el mismo solvente. A 10 ml de esta
Se debe preparar en condiciones que minimicen el solución, agregar 0,1 ml de fenolftaleína (SR1). La
riesgo de contaminación microbiana. Es una mez- solución debe permanecer incolora. Agregar 0,2 ml
cla de polisacáridos, principalmente del tipo de hidróxido de sodio 0,01 N: se debe observar
-1,6-glucano. Su peso molecular promedio debe color rojo. Agregar 0,4 ml de ácido clorhídrico
ser aproximadamente 40.000 y debe cumplir con las 0,01 N: la solución debe ser incolora. Agregar
siguientes especificaciones. 0,1 ml de rojo de metilo (SR1): la solución debe ser
roja o anaranjada.
Caracteres generales - Polvo blanco o casi
blanco. Muy soluble en agua; muy poco soluble en Límite de impurezas nitrogenadas
alcohol. Proceder según se indica en Límite de impurezas
Sustancias de referencia - Dextrano SR-FA. nitrogenadas en Dextrano 70 Calidad Inyectable.
Dextrano 4 para calibrado SR-FA. Dextrano 10 Solventes residuales
para calibrado SR-FA. Dextrano 40 para calibra- Proceder según se indica en Solventes residuales
do SR-FA. Dextrano 70 para calibrado SR-FA. en Dextrano 70 Calidad Inyectable.
Dextrano 250 para calibrado SR-FA. Dextrano Vo
SR-FA. Dextrano 40 para validación SR-FA. Dex- DISTRIBUCIÓN DEL PESO MOLECULAR
trano 60/70 para validación SR-FA. DE LOS DEXTRANOS
CONSERVACIÓN Proceder según se indica en Distribución del
En envases herméticos. Peso Molecular de los Dextranos en Dextrano 70
Calidad Inyectable.
ENSAYOS
El peso molecular promedio M P debe estar en-
Identificación tre 35.000 y 45.000. El peso molecular promedio
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
de la fracción superior (10 %) debe ser como
[NOTA: emplear Dextrano SR-FA como Sustancia
máximo 110.000 y el de la fracción inferior debe
de referencia]. ser como mínimo 7.000.
B - Debe cumplir con el ensayo de Distribución
del peso molecular de los dextranos.
Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre + 195 º y + 201 º.
Solución muestra: 20 mg por ml, calentar, si
fuera necesario, en un baño de agua hasta disolu-
ción.
Pérdida por secado <680>
Secar 200 mg de Dextrano 40 Calidad Inyecta-
ble en estufa a 105 °C durante 5 horas: no debe
perder más de 7,0 % de su peso.
Límite de metales pesados <590>
Método IV. Emplear 12 ml de una solución pre-
parada disolviendo 5,0 g de Dextrano 40 Calidad
Inyectable en agua, calentando en un baño de agua,
y diluida hasta 50 ml con el mismo solvente. El
límite es 0,001 %. Preparar la Solución estándar
empleando Solución estándar de plomo (1 ppm).
Ensayos de endotoxinas bacterianas <330>
de sulfato de potasio. Disolver mediante calenta-
DEXTRANO 70 CALIDAD miento y almacenar a 60 °C. [NOTA: si no fuera
INYECTABLE posible almacenar a 60 °C, preparar una menor
cantidad de Solución de sulfato el día de su uso].
Definición - Dextrano 70 Calidad Inyectable se
Indicador - Preparar una mezcla de 20 ml de
obtiene mediante hidrólisis controlada y fracciona-
una solución de verde de bromocresol al 0,1 % en
miento de los polisacáridos producidos por fermen-
alcohol y 4 ml de rojo de metilo (SR) y diluir
tación de la sacarosa utilizando ciertas cepas de
100 ml con agua.
Leuconostoc mesenteroides (NRRL, B-512F;
Procedimiento - Pesar exactamente alrededor
NCTC, 10817). Se debe preparar en condiciones
de 200 mg de Dextrano 70 Calidad Inyectable,
que minimicen el riesgo de contaminación micro-
transferir a un micro matraz de Kjeldahl. Agregar
biana. Es una mezcla de polisacáridos, principal-
4 ml de Solución de sulfato. Calentar hasta que la
mente del tipo -1,6-glucano. Su peso molecular
solución presente color verde transparente y las
promedio debe ser aproximadamente 70.000 y debe
paredes del matraz estén libres de residuos carbono-
cumplir con las siguientes especificaciones.
sos. Enfriar y transferir la solución a un balón de
Caracteres generales - Polvo blanco o casi destilación. Enjuagar el matraz de Kjeldahl tres
blanco. Muy soluble en agua; muy poco soluble en veces con 5 ml de agua, agregando los lavados a la
alcohol. solución. Agregar 15 ml de solución de hidróxido
Sustancias de referencia - Dextrano SR-FA. de sodio al 45 %, adosar al refrigerante y comenzar
Dextrano 4 para calibrado SR-FA. Dextrano 10 la destilación. Recolectar el destilado en un matraz
para calibrado SR-FA. Dextrano 40 para calibrado de 100 ml que contenga 1 ml de Indicador, mante-
SR-FA. Dextrano 70 para calibrado SR-FA. Dex- niendo el extremo del tubo colector debajo de la
trano 250 para calibrado SR-FA. Dextrano Vo superficie del líquido durante 5 minutos y por en-
SR-FA. Dextrano 40 para validación SR-FA. Dex- cima de la superficie durante 1 minuto. Al terminar
trano 60/70 para validación SR-FA. la destilación, retirar el matraz receptor y lavar el
extremo del tubo colector con agua, agregando el
CONSERVACIÓN lavado al destilado. Titular el destilado con ácido
En envases herméticos. clorhídrico 0,010 N hasta que el color cambie de
azul a violeta rojizo. Realizar una determinación
ENSAYOS con un blanco y hacer las correcciones necesarias
Identificación (ver 780. Volumetría). No deben consumirse más
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. de 0,14 ml de ácido clorhídrico 0,010 N para hacer
[NOTA: emplear Dextrano SR-FA como Sustancia virar el color del Indicador (0,01 %, como N).
de referencia]. Solventes residuales
B - Debe cumplir con el ensayo de Distribución Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
del peso molecular de los dextranos. para cromatografía de gases con un detector de
Determinación de la rotación óptica <170> ionización a la llama y una columna de
Rotación específica: Entre + 195 º y + 201 º. 1,8 m × 2,0 mm recubierta con fase estacionaria
Solución muestra: 20 mg por ml, calentar, si constituida por copolímero de etilvinilbenceno y
fuera necesario, en un baño de agua hasta disolu- divinilbenceno (125 a 150 m). Mantener la co-
ción. lumna, el inyector y el detector a aproximadamente
Acidez o alcalinidad 190, 240 y 210 ºC, respectivamente. Se debe em-
Disolver 5,0 g de Dextrano 70 Calidad Inyecta- plear nitrógeno como gas transportador con un
ble en agua, calentando en un baño de agua, y diluir caudal de aproximadamente 25 ml por minuto.
hasta 50 ml con el mismo solvente. A 10 ml de esta Solución del estándar interno - Alcohol
solución agregar 0,1 ml de fenolftaleína (SR1). La n-propílico.
solución debe permanecer incolora. Agregar 0,2 ml Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de hidróxido de sodio 0,01 M: se debe observar de 5,0 g de Dextrano 70 Calidad Inyectable, disol-
color rojo. Agregar 0,4 ml de ácido clorhídrico ver en 100 ml de agua y destilar la solución, reco-
0,01 M: la solución debe ser incolora. Agregar lectando los primeros 45 ml del destilado, agregar
0,1 ml de rojo de metilo (SR1): la solución debe ser 1 ml de una solución de aproximadamente 2,5 % de
roja o anaranjada. alcohol n-propílico, diluir hasta 50,0 ml con agua y
mezclar.
Límite de impurezas nitrogenadas Solución estándar - Mezclar 0,5 ml de una so-
Solución de sulfato - A 1 litro de ácido sulfúri- lución de alcohol absoluto de aproximadamente
co, agregar 5 g de sulfato cúprico anhidro y 500 g
2,5 %, 0,5 ml de una solución de alcohol propílico car. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
de aproximadamente 2,5 % y 0,5 ml de una solu- sistema en 100. Cromatografìa).
ción de metanol de aproximadamente 0,25 %. Di- Solución muestra - Disolver 200 mg de Dex-
luir a 25 ml con agua. trano 70 Calidad Inyectable, en Fase móvil y com-
Procedimiento - Inyectar por separado en el pletar hasta 10 ml con Fase móvil.
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente Solución marcador - Preparar una solución en
1 µl) de la Solución muestra, la Solución estándar y Fase móvil de aproximadamente 5 mg de Glucosa
la Solución del estándar interno, registrar los cro- Anhidra y 2 mg de Dextrano Vo SR-FA en 1 ml de
matogramas y medir las respuestas de los picos. En Fase móvil.
el cromatograma obtenido a partir de la Solución Soluciones de calibración - Disolver por sepa-
muestra, la respuesta de ningún pico correspondien- rado en 1 ml de Fase móvil , 15 mg de Dextrano 4
te al metanol o al alcohol absoluto debe ser mayor para calibrado SR-FA, 15 mg de Dextrano 10 para
que la respuesta del pico correspondiente en el calibrado SR-FA, 20 mg de Dextrano 40 para cali-
cromatograma obtenido con la Solución estándar brado SR-FA, 20 mg de Dextrano 70 para calibrado
(0,5 % de alcohol absoluto y 0,05 % de metanol) y SR-FA y 20 mg de Dextrano 250 para calibrado
la suma de la respuesta de todos los picos, a excep- SR-FA.
ción de los picos correspondientes al alcohol abso- Solución para validar el sistema - Disolver
luto, al metanol y al estándar interno, no debe ser 20 mg de Dextrano 40 para validación SR-FA (para
mayor que la respuesta del pico correspondiente al el análisis del dextrano 40) ó 20 mg de Dextrano
patrón interno (0,5 % calculado como n-propílico). 60/70 para validación SR-FA (para el análisis del
dextrano 60 y del dextrano 70), en 1 ml de Fase
Límite de metales pesados <590>
móvil.
Método IV. Emplear 12 ml de una solución pre-
Calibración del sistema cromatográfico
parada disolviendo 5,0 g de Dextrano 70 Calidad
Inyectar varias veces el volumen elegido de la
Inyectable en agua, calentando en un baño de agua,
Solución marcador. El cromatograma obtenido con
y diluida hasta 50 ml con el mismo solvente. El
la Solución marcador debe presentar dos picos
límite es 0,001 %. Preparar la Solución estándar
sucesivos correspondientes al Dextrano Vo a partir
empleando Solución estándar de plomo (1 ppm).
del volumen de elución correspondiente al Dextrano
Pérdida por secado <680> Vo y el volumen total Vt a partir del pico correspon-
Secar 200 mg de Dextrano 70 Calidad Inyecta- diente a la glucosa anhidra.
ble en estufa a 105 °C durante 5 horas: no debe Inyectar el volumen elegido de cada una de las
perder más de 7,0 % de su peso. Soluciones de calibración. Trazar cuidadosamente
la línea de base de cada una de los cromatogramas
Ensayos de endotoxinas bacterianas <330> obtenidos. Dividir cada cromatograma en a (al
Cuando en el rótulo se indique que Dextrano 70 menos 60) bandas verticales iguales (correspondien-
Calidad Inyectable está destinado a la preparación tes a volúmenes de elución iguales). En cada banda
de formas farmacéuticas parenterales, debe contener i, correspondiente a un volumen de elución Vi,
no más de 16 Unidades de Endotoxina por gramo. medir la altura yi que separa la línea de base del
trazo del cromatograma y calcular el coeficiente de
DISTRIBUCIÓN DEL PESO MOLECULAR distribución Ki, por la fórmula siguiente:
DE LOS DEXTRANOS
Examinar por cromatografía de exclusión (ver 100.
Vi V0 Vt V0
Cromatografía). en la cual Vo es el volumen intersticial de la colum-
Sistema Cromatográfico - Emplear un equipo na, determinado a partir del pico correspondiente al
para cromatografía de líquidos con un detector por Dextrano Vo SR-FA en el cromatograma obtenido
índice de refracción, un inyector de bucle de 100 a con la Solución marcador; Vt es el volumen total de
200 µl y tres columnas de 30 cm × 10 mm con fase la columna determinado a partir del pico correspon-
estacionaria constituida por agarosa para cromato- diente a la glucosa anhidra en el cromatograma
grafía de exclusión, o una serie de columnas de obtenido con la Solución marcador; Vi es el volu-
30 cm × 10 mm con fase estacionaria constituida men de elución de la banda i en el cromatograma
por gel poliéter hidroxilado para cromatografía. obtenido con cada una de las Soluciones de calibra-
Mantener el sistema a temperatura constante. ción.
Fase móvil - Solución acuosa de sulfato de so- Calibrado por cálculo de la curva
dio anhidro y clorobutanol de aproximadamente 7 g Calcular con la ayuda de las fórmulas (2) y (3),
y 1 g por litro, respectivamente. Filtrar y desgasifi- empleando un método apropiado, los valores de b1,
la línea de base del trazado del cromatograma en la
b2, b3, b4 y b5 que dan valores de M P que no deben
banda i; Mi es el peso molecular en la banda i.
diferir en más de un 5 % del valor declarado para
cada uno de los dextranos para calibrado, y de El ensayo solo será válido si el valor de M P
180 ± 2 para la glucosa anhidra:
para la fracción superior de dextrano (10 %) es de:
M i b5 e b4 b1Ki b2 Ki b3Ki - 110.000 a 130.000 para el Dextrano 40
2 3
validación SR-FA.
- 67.000 a 75.000 para el Dextrano 60/70 el las cuales a es el número de bandas en que se ha
para validación SR-FA. dividido el cromatograma; yi es la altura que separa
Peso molecular medio de la fracción superior la línea de base del trazado del cromatograma en la
banda i; Mi el peso molecular en la banda i.
de dextrano (10 %) - Calcular M P para la frac-
ción superior de dextrano (10 %) que eluye en la El ensayo solo será válido si el valor de M P
banda n, por la fórmula siguiente: para la fracción inferior de dextrano (10 %) es de:
n n - 6.000 a 8.500 para el Dextrano 40 para
MP = yi M i yi
i 1 i 1
(4)
-
validación SR-FA.
7.000 a 11.000 para el Dextrano 60/70
para validación SR-FA.
estando n definido por las fórmulas siguientes: Distribución del peso molecular del dextrano
en ensayo
n
a
y 0,1 yi
Inyectar el volumen elegido de la Solución
i (5)
i 1 i 1 muestra. Calcular los valores de M P que corres-
ponden respectivamente a la distribución del peso
y molecular total, a la fracción superior de dextrano
(10 %) y a la fracción inferior de dextrano (10 %)
según se indica en Validación del sistema croma-
n 1
a
i 1
y i 0,1 yi
i 1
(6) tográfico. El peso molecular promedio M P debe
estar entre 64.000 y 76.000. El peso molecular
promedio de la fracción superior (10 %) debe ser
el las cuales a es el número de bandas en que se ha
como máximo 185.000 y el de la fracción inferior
dividido el cromatograma; yi es la altura que separa
debe ser como mínimo 15.000.
DEXTROMETORFANO Límite de N,N-Dimetilanilina
Solución estándar - Transferir 50 mg de
N,N-dimetilanilina a un matraz aforado de 100 ml,
agregar 70 ml de agua, tapar perfectamente y agitar
durante 20 minutos. Completar a volumen con el
mismo solvente y mezclar. Transferir 1,0 ml de
esta solución a un matraz aforado de 100 ml, com-
pletar a volumen con agua y mezclar. Transferir
1,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
25 ml y agregar 19 ml de agua.
Solución muestra - Transferir 500 mg de Dex-
trometorfano, exactamente pesados, a un matraz
C18H25NO PM: 271,4 125-71-3 aforado de 25 ml. Agregar 19 ml de agua y 1 ml de
ácido clorhídrico 3 N. Disolver por calentamiento o
Definición - Dextrometorfano es ( )-3-Metoxi-
empleando un baño de vapor y enfriar.
17-metil-9 ,13 ,14 -morfina. Debe contener no Procedimiento - Agregar por separado a la So-
menos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por lución muestra y la Solución estándar, 2,0 ml de
ciento de C18H25NO, calculado sobre la sustancia ácido acético 1 N y 1,0 ml de nitrito de sodio
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi- 1 en 100. Completar ambos matraces a volumen y
caciones. mezclar: la Solución muestra no debe presentar una
Caracteres generales - Polvo cristalino casi coloración más intensa que la Solución están-
blanco o ligeramente amarillento. Inodoro. Fácil- dar (0,001 %).
mente soluble en cloroformo; prácticamente insolu- Límites de compuestos fenólicos
ble en agua. Disolver 10 mg de Dextrometorfano en 2 ml de
Sustancia de referencia - Dextrometorfa- ácido clorhídrico 3 N y agregar 2 gotas de cloruro
no SR-FA férrico (SR). Mezclar y agregar 2 gotas de ferricia-
nuro de potasio (SR) y observar después de 2 minu-
CONSERVACIÓN
tos: no debe desarrollarse coloración azul verdosa.
En envases de cierre perfecto.
Límite de metales pesados <590>
ENSAYOS Método II. No más de 0,002 %.
Identificación VALORACIÓN
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
Pesar exactamente alrededor de 700 mg de Dex-
B - Absorción ultravioleta <470>
trometorfano y disolver en 60 ml de ácido acético
Solvente: ácido clorhídrico diluido
glacial, calentando suavemente si fuera necesario,
(1 en 120).
para disolver. Agregar 2 gotas de cristal viole-
Concentración: 100 µg por ml.
ta (SR) y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV)
Las absortividades a 278 nm, calculadas
hasta punto final verde azulado. Realizar una de-
sobre la sustancia anhidra, no deben diferir en más
terminación con un blanco y hacer las correcciones
de 3,0 %.
necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
Determinación de la rotación óptica <170> perclórico 0,1 N equivale a 27,14 mg de C18H25NO.
Disolver una porción exactamente pesada de
Dextrometorfano en cloroformo para obtener una
solución de aproximadamente 100 mg por ml: la
rotación específica de esta solución no debe diferir
en más de 1,0 % de la obtenida con una solución de
Dextrometorfano SR-FA, tratada del mismo modo.
Determinación del punto de fusión <260>
Método I. Entre 109,5 y 112,5 °C.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
0,5 %.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Determinación del pH <250>
DEXTROMETORFANO, Entre 5,2 y 6,5, determinado sobre una solución
BROMHIDRATO DE 2 en 100.
Determinación de agua <120>
H
N CH3 Titulación volumétrica directa. Entre 3,5 y
5,5 %.
H Determinación del residuo de ignición <270>
HBr H2O
No más de 0,1 %.
Límite de N,N-Dimetilanilina
CH3O Transferir 500 mg de Bromhidrato de Dextro-
metorfano a un matraz aforado de 25 ml. Agregar
20 ml de agua y calentar en un baño de vapor hasta
C18H25NO . HBr . H2O PM: 370,3 6700-34-1 disolución. Enfriar, agregar 2 ml de ácido acético
Anhidro PM: 352,3 125-69-9 1 N y 1 ml de solución de nitrito de sodio 1 en 100,
completar a volumen con agua y mezclar. Esta
Definición - Bromhidrato de Dextrometorfano solución no debe presentar más color que el que
es Bromhidrato de ( )-3-Metoxi-17-metilmorfinan, corresponde a una solución preparada de forma
monohidrato. Debe contener no menos de 98,0 por similar con una concentración de 5 µg de
ciento y no más de 102,0 por ciento de N,N-Dimetilanilina en 25 ml (0,001 %).
C18H25NO . HBr, calculado sobre la sustancia an-
hidra y debe cumplir con las siguientes especifica- Límite de compuestos fenólicos
ciones. Disolver aproximadamente 5 mg de Bromhidra-
to de Dextrometorfano en 1 ml de agua, agregar
Caracteres generales - Cristales o polvo crista- 1 gota de ácido clorhídrico 3 N y 2 gotas de cloruro
lino casi blanco. Funde aproximadamente a férrico (SR). Mezclar, agregar 2 gotas de ferricia-
126 °C, con descomposición. Fácilmente soluble nuro de potasio (SR) y observar luego de 2 minutos:
en alcohol y cloroformo; moderadamente soluble en no se debe desarrollar color verde azulado.
agua; insoluble en éter.
VALORACIÓN
Sustancia de referencia - Bromhidrato de
Dextrometorfano SR-FA. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
CONSERVACIÓN ultravioleta ajustado a 280 nm y una columna de
En envases de cierre perfecto. 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
ENSAYOS porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
Identificación debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Fase móvil - Preparar una solución filtrada y
[NOTA: secar previamente al vacío sobre pentóxido desgasificada que contenga docusato sódico
de fósforo durante 4 horas]. 0,007 M y nitrato de amonio 0,007 M en una mez-
B - Absorción ultravioleta <470> cla de acetonitrilo y agua (70:30) y ajustar a pH 3,4
Solvente: agua. con ácido acético glacial. [NOTA: disolver el do-
Concentración: 70 µg por ml. cusato sódico en la mezcla de acetonitrilo y agua
Las absortividades a 278 nm, calculadas antes de agregar el nitrato de amonio.]
sobre la sustancia anhidra, no deben diferir en más Preparación estándar - Disolver una cantidad
de 3,0 %. exactamente pesada de Bromhidrato de Dextrome-
C - A 5 ml de una solución de Bromhidrato de torfano SR-FA en agua para obtener una solución
Dextrometorfano 1 en 200, agregar 5 gotas de ácido con una concentración de aproximadamente 1 mg
nítrico 2 N y 2 ml de nitrato de plata (SR): se debe por ml. Transferir 10,0 ml de esta solución a un
formar un precipitado color blanco amarillento. matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con
Determinación de la rotación óptica <170> Fase móvil y mezclar.
Rotación específica: Entre +28° y +30°, calcu- Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
lada sobre la sustancia anhidra. dedor de 100 mg de Bromhidrato de Dextrometor-
Solución muestra: disolver 200 mg en ácido fano, transferir a un matraz aforado de 100 ml,
clorhídrico 0,1 N y diluir a 10,0 ml con el mismo completar a volumen con agua y mezclar. Transfe-
solvente. rir 10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: el factor de asimetría para el pico prin-
cipal no debe ser mayor de 2,5; la desviación están-
dar relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C18H25NO . HBr en la porción de
Bromhidrato de Dextrometorfano en ensayo.
cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
DIATRIZOATO DE placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
MEGLUMINA dejar secar. Examinar la placa bajo luz ultravioleta
a 254 nm: el valor de Rf de la mancha principal en
O OH
el cromatograma obtenido a partir de la Solución
I I H
HO H HO H muestra se debe corresponder con el obtenido con
O N
O
H3C OH la Solución estándar.
H3C N
H
N
H
CH3
HO H H OH
B - Calentar aproximadamente 500 mg de Dia-
I trizoato de Meglumina en un crisol: se deben pro-
ducir vapores de color violeta.
C11H9I3N2O4 . C7H17NO5 PM: 809,1 131-49-7 Determinación de la rotación óptica <170>
Definición - Diatrizoato de Meglumina es Rotación específica: Entre -5,65° y -6,37°.
Solución muestra: 100 mg por ml, en agua.
1-Deoxi-1-(metilamino)-D-glucitol 3,5-bis(acetil
amino)-2,4,6-triiodobenzoato. Debe contener no Determinación del residuo de ignición <270>
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por No más de 0,1 %.
ciento de C11H9I3N2O4 . C7H17NO5, calculado sobre
Iodo y ioduro
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
Solución muestra - Transferir 2,0 g de Diatri-
especificaciones.
zoato de Meglumina a un tubo de centrífuga de
Caracteres generales - Polvo blanco, inodoro. 50 ml con tapa, diluir con agua a 24 ml y agitar para
Fácilmente soluble en agua. disolver.
Sustancias de referencia - Ácido Diatrizoi- Procedimiento - Agregar a la Solución muestra
co SR-FA. Impureza A de Ácido Diatrizoi- 5 ml de tolueno y 5 ml de ácido sulfúrico 2 N, agi-
co SR-FA: Ácido 3-acetamido-5-amino- tar y centrifugar: la fase orgánica no debe adquirir
2,4,6-triiodobenzoico. color rojo. Agregar 1 ml de solución de nitrito de
sodio 1 en 50, agitar y centrifugar: el color rojo
CONSERVACIÓN producido en la fase orgánica no debe ser más in-
tenso que el obtenido cuando se sustituye la Solu-
En envases bien cerrados. ción muestra por una mezcla de 2,0 ml de solución
de ioduro de potasio 1 en 4.000 y 22 ml de agua
ENSAYOS (0,02 % de ioduro).
Identificación Límite de metales pesados <590>
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica.
Solución estándar - Transferir 2,0 ml de Solu-
Fase estacionaria - Emplear una placa para
ción estándar de plomo (10 ppm) a un tubo de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Nessler de 50 ml, agregar 5 ml de hidróxido de
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
sodio 1 N, diluir con agua a 40 ml y mezclar.
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
Solución muestra - Disolver 1,0 g de Diatrizoa-
de espesor.
to de Meglumina en 20 ml de agua y 5 ml de
Fase móvil - Cloroformo, metanol e hidróxido
hidróxido de sodio 1 N. Transferir esta solución a
de amonio (20:10:2).
un tubo de Nessler de 50 ml, diluir con agua a
Diluyente - Solución de hidróxido de sodio en
40 ml y mezclar.
metanol (0,8 en 1.000).
Procedimiento - Agregar 10 ml de sulfuro de
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
sodio (SR) a cada uno de los tubos que contienen la
tamente pesada de Ácido Diatrizoico SR-FA en
Solución estándar y la Solución muestra, mezclar,
Diluyente para obtener una solución de aproxima-
dejar reposar durante 5 minutos y observar longitu-
damente 1 mg por ml.
dinalmente sobre una superficie blanca: el color de
Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
la Solución muestra no debe ser más oscuro que el
tamente pesada de Diatrizoato de Meglumina en de la Solución estándar (0,002 %).
Diluyente para obtener una solución de aproxima-
damente 1 mg por ml. Aminas aromáticas libres
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la Solución estándar - Disolver una cantidad de
placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de la Impureza A de Ácido Diatrizoico SR-FA en
Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y hidróxido de sodio 0,1 N, empleando 0,2 ml de
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente hidróxido de sodio 0,1 N por cada 5,0 mg de Impu-
del solvente haya recorrido aproximadamente tres reza A de Ácido Diatrizoico SR-FA. Diluir con
agua para obtener una solución de aproximadamen- juagar el erlenmeyer y el filtro, agregando los lava-
te 500 µg por ml. Transferir 1,0 ml de esta solu- dos al filtrado. Agregar 5 ml de ácido acético gla-
ción, 4 ml de agua y 10 ml de hidróxido de sodio cial y 1 ml de tetrabromofenolftaleinato de eti-
0,1 N a un matraz aforado de 50 ml. lo (SR) y titular con nitrato de plata 0,05 N (SV)
Solución muestra - Transferir 1,0 g de Diatri- hasta que el precipitado amarillo cambie a color
zoato de Meglumina a un matraz aforado de 50 ml y verde. Realizar una determinación con un blanco y
agregar 5 ml de agua y 10 ml de hidróxido de sodio hacer las correcciones necesarias (ver 780. Volu-
0,1 N. metría). Cada ml de nitrato de plata 0,05 N equiva-
Blanco - Transferir 5 ml de agua y 10 ml de le a 13,49 mg de C11H9I3N2O4 . C7H17NO5.
hidróxido de sodio 0,1 N a un matraz aforado de
50 ml.
Procedimiento - Tratar cada matraz de la si-
guiente manera. Agregar 25 ml de dimetilsulfóxi-
do, tapar y mezclar suavemente por rotación, sin
emulsionar. Enfriar en un baño de hielo en la oscu-
ridad durante 5 minutos. [NOTA: realizar el ensayo
en la oscuridad durante el máximo tiempo posible
hasta que se hayan agregado todos los reactivos].
Agregar lentamente 2 ml de ácido clorhídrico, mez-
clar y dejar reposar durante 5 minutos. Agregar
2 ml de solución de nitrito de sodio 1 en 50, mez-
clar y dejar reposar durante 5 minutos. Agregar
1 ml de solución de ácido sulfámico 2 en 25, agitar
y dejar reposar durante 5 minutos. [Precaución: se
produce una presión considerable]. Agregar 2 ml
de una solución 1 en 1.000 de diclorhidrato de
N-(1-naftil)etilendiamina en propilenglicol diluido
(7 en 10) y mezclar. Retirar los matraces del baño
de hielo y de la oscuridad y dejar reposar en un
baño de agua a una temperatura entre 22 y 25 °C
durante 10 minutos. Agitar suavemente y ocasio-
nalmente durante este periodo, aflojando el tapón
para equilibrar la presión. Completar a volumen
con agua y mezclar. Dentro de los 5 minutos poste-
riores determinar las absorbancias de la Solución
muestra y la Solución estándar en celdas de 1 cm, a
la longitud de onda de máxima absorción, aproxi-
madamente 465 nm, con un espectrofotómetro,
contra el Blanco. La absorbancia de la Solución
muestra no debe ser mayor que la de la Solución
estándar (0,05 %).
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder
más de 1,0 % de su peso.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 400 mg de Dia-
trizoato de Meglumina, transferir a un erlenmeyer
de 125 ml con tapón de vidrio, agregar 30 ml de
hidróxido de sodio 1,25 N y 500 mg de polvo de
cinc. Conectar el erlenmeyer a un refrigerante y
calentar la mezcla a reflujo durante 1 hora. Enfriar
el erlenmeyer a temperatura ambiente, lavar el
refrigerante con 20 ml de agua, desconectar el er-
lenmeyer del refrigerante y filtrar la mezcla. En-
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
DIATRIZOATO DE SODIO de 1,0 g de Diatrizoato de Sodio, transferir a un ma-
traz aforado de 50 ml y agregar 5 ml de agua y 10 ml
O ONa de hidróxido de sodio 0,1 N.
Procedimiento - Proceder según se indica en
I I Procedimiento para Aminas aromáticas libres en
O O Diatrizoato de meglumina.
Iodo y ioduro
H3C N N CH3 Solución muestra - Transferir 2,0 g de Diatrizoa-
H H
I to de Sodio a un tubo de centrífuga de 50 ml con
tapón, diluir con agua a 24 ml y agitar para disolver.
Procedimiento - Proceder según se indica en
C11H8I3N2NaO4 PM: 635,9 737-31-5 Procedimiento en para Iodo y ioduro en Diatrizoato
de Meglumina.
Sinonimia - Amidotrizoato de Sodio.
Límite de metales pesados <590>
Definición - Diatrizoato de Sodio es la Sal mo-
No más de 0,002 %.
nosódica del ácido 3,5-bis(acetilami-
Solución estándar y Procedimiento - Proceder
no)-2,4,6-triiodobenzoico. Debe contener no menos
según se indica en Límites de metales pesados en
de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de
Diatrizoato de Meglumina.
C11H8I3N2NaO4, calculado sobre la sustancia anhidra
Solución muestra - Disolver 1,0 g de Diatrizoato
y debe cumplir con las siguientes especificaciones.
de Sodio en 20 ml de agua y 5 ml de hidróxido de
Caracteres generales - Polvo blanco, inodoro. sodio 1 N, transferir la solución a un tubo de Nessler
Soluble en agua; poco soluble en alcohol; práctica- de 50 ml, diluir a 40 ml con agua y mezclar.
mente insoluble en acetona y éter.
VALORACIÓN
Sustancias de referencia - Ácido Diatrizoi-
co SR-FA. Impureza A de Ácido Diatrizoico SR-FA: Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Diatri-
Ácido 3-acetamido-5-amino-2,4,6-triiodobenzoico. zoato de Sodio y proceder según se indica para Dia-
trizoato de Meglumina comenzando donde dice
CONSERVACIÓN "transferir a un erlenmeyer de 125 ml...". Cada ml
En envases bien cerrados. de nitrato de plata 0,05 N equivale a 10,60 mg de
C11H8I3N2NaO4.
ENSAYOS
Identificación
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica.
Fase estacionaria, Fase móvil, Diluyente, Solu-
ción de estándar y Procedimiento - Proceder según
se indica en Identificación A para Diatrizoato de
Meglumina.
Solución muestra - Disolver una cantidad de Dia-
trizoato de Sodio en Diluyente para obtener una solu-
ción de aproximadamente 1 mg por ml.
B - Proceder según se indica en Identificación B
para Diatrizoato de Meglumina.
C - Debe responder al ensayo de la llama para
Sodio <410>.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
10,0 %.
Aminas aromáticas libres
Solución estándar y Blanco - Proceder según se
indica en Aminas aromáticas libres para Diatrizoato
de Meglumina.
Solución estándar y Blanco - Proceder según se
DIATRIZOICO, ÁCIDO indica en Aminas aromáticas libres para Diatrizoato
O OH de Meglumina.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
I I de 1,0 g de Ácido Diatrizoico, transferir a un matraz
O O aforado de 50 ml y agregar 12,5 ml de agua y 2,5 ml
de hidróxido de sodio 0,1 N.
H3C N N CH3
Procedimiento - Proceder según se indica en
H H Procedimiento para Aminas aromáticas libres en
I Diatrizoato de meglumina.
Iodo y ioduro
C11H9I3N2O4 PM: 613,9 117-96-5 Solución muestra - Suspender 10,0 g de Ácido
Diatrizoico en 10 ml de agua y agregar en pequeñas
Dihidrato PM: 650,0 50978-11-5 porciones, agitando, 1,5 ml de una solución de
Sinonimia - Ácido Amidotrizoico. hidróxido de sodio (2 en 5). Cuando la disolución
sea completa, ajustar a pH entre 7,0 y 7,5 con una
Definición - Ácido Diatrizoico es el Ácido solución de hidróxido de sodio (1 en 125) o ácido
3,5-bis(acetilamino)-2,4,6-triiodobenzoico. Puede clorhídrico y diluir a 20 ml con agua.
ser anhidro o contener dos moléculas de agua de Procedimiento - Proceder según se indica en
hidratación. Debe contener no menos de 98,0 por Procedimiento en para Iodo y ioduro en Diatrizoato
ciento y no más de 102,0 por ciento de C11H9I3N2O4, de Meglumina.
calculado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir
con las siguientes especificaciones. Límite de metales pesados <590>
No más de 0,002 %.
Caracteres generales - Polvo blanco, inodoro. Solución estándar y Procedimiento - Proceder
Soluble en dimetilformamida y en soluciones de según se indica en Límites de metales pesados en
hidróxidos alcalinos; muy poco soluble en agua y en Diatrizoato de Meglumina.
alcohol. Solución muestra - Transferir 2,0 ml de una
Sustancias de referencia - Ácido solución preparada según se indica en Solución
Diatrizoico SR-FA. Impureza A de Ácido muestra en Iodo y yoduro a un tubo de Nessler de
Diatrizoico SR-FA: Ácido 50 ml, agregar 5 ml de hidróxido de sodio 1 N, diluir
3-acetamido-5-amino-2,4,6-triiodobenzoico. a 40 ml con agua y mezclar.
CONSERVACIÓN VALORACIÓN
En envases bien cerrados. Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Ácido
Diatrizoico y proceder según se indica para
ENSAYOS
Diatrizoato de Meglumina comenzando donde dice
Identificación "transferir a un erlenmeyer de 125 ml...". Cada ml
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. de nitrato de plata 0,05 N equivale a 10,23 mg de
Fase estacionaria, Fase móvil, Diluyente, C11H9I3N2O4.
Solución de estándar y Procedimiento - Proceder
según se indica en Identificación A para Diatrizoato
de Meglumina.
Solución muestra - Disolver una cantidad de
Ácido Diatrizoico en Diluyente para obtener una
solución de aproximadamente 1 mg por ml.
B - Proceder según se indica en Identificación B
para Diatrizoato de Meglumina.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de 1,0 %
para la sustancia anhidra y entre 4,5 y 7,0 % para la
sustancia dihidratada.
Aminas aromáticas libres
cromatograma obtenido a partir de la Solución
DIAZEPAM muestra se debe corresponder con el obtenido con
la Solución estándar.
CH3
O
N Determinación del punto de fusión <260>
Método I. Entre 131 y 135 °C.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 150 mg de
Clorhidrato de Dopamina, disolver en 10 ml de
ácido fórmico anhidro, agregar 50 ml de anhídrido
acético y mezclar. Titular con ácido perclórico
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
ciométricamente. Realizar una determinación con
un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
0,1 N equivale a 18,96 mg de C8H11NO2 . HCl.
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
DORZOLAMIDA, 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
CLORHIDRATO DE por partículas porosas de sílice de 5 a 10 m de
diámetro. El caudal debe ser aproximadamente
O O 2,0 ml por minuto.
H O
S S Fase móvil - ter-Butil metil éter, n-heptano para
O
H3C S cromatografía, acetonitrilo y agua (63:35:2:0,2).
NH2 . HCl Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
H NH (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución muestra - Transferir aproximadamente
CH3 20 mg de Clorhidrato de Dorzolamida, exactamente
pesados, a un tubo de centrífuga de 15 ml, disolver
en 4,0 ml de hidróxido de amonio 0,5 N, agregar
C10H16N2O4S3 . HCl PM: 360,9 130693-82-2 4,0 ml de acetato de etilo y mezclar. Separar la fase
de acetato de etilo y transferir a un tubo de centrífu-
Definición - Clorhidrato de Dorzolamida es
ga de 15 ml. Agregar 4,0 ml de acetato de etilo a la
Clorhidrato de (4S-trans)-4-(Etilamino)-5,6-di- fase acuosa, mezclar, separar la fase de acetato de
hidro-6-metil-4H-tieno[2,3-b]tiopiran-2-sulfonami-
etilo y combinar con el primer extracto. Evaporar
da-7,7-dióxido. Debe contener no menos de 99,0 los extractos orgánicos combinados, hasta sequedad
por ciento y no más de 101,0 por ciento de
en un baño de agua mantenido a 50 °C, bajo co-
C10H16N2O4S3 . HCl, calculado sobre la sustancia rriente de nitrógeno. Disolver el residuo en 3,0 ml
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi-
de acetonitrilo, agregar 3 gotas de (S)-(-)-α-
caciones. metilbenzil isocianato y esperar 5 minutos para que
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco proceda la reacción, manteniendo la solución en el
o casi blanco. Soluble en agua. baño de agua a 50 °C bajo corriente de nitrógeno.
Sustancias de referencia - Clorhidrato de Dor- [NOTA: la solución debe descartarse si desarrolla
coloración]. Evaporar la mezcla hasta sequedad en
zolamida SR-FA. Impureza A de Clorhidrato de
Dorzolamida SR-FA: Clorhidrato de (4R,6R)-4- un baño de agua mantenido a 50 °C, bajo corriente
de nitrógeno. Disolver el residuo en 10 ml de una
(Etilamino)-5,6-dihidro-6-metil-4H-tieno[2,3-b]
tiopiran-2-sulfonamida-7,7-dióxido. mezcla de ter-butil metil éter, ácido acético glacial
y acetonitrilo (87:10:3) y mezclar.
CONSERVACIÓN Solución de aptitud del sistema - Transferir
En envases inactínicos bien cerrados, a una aproximadamente 18 mg de Clorhidrato de Dorzo-
temperatura entre 15 y 30 °C. lamida SR-FA y 2 mg de Impureza A de Clorhidra-
to de Dorzolamida SR-FA, exactamente pesados, a
ENSAYOS un tubo de centrífuga de 15 ml y proceder según se
Identificación indica para Solución muestra comenzando donde
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. dice “disolver en 4,0 ml de hidróxido de amonio
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en 0,5 N, agregar...”.
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
paración muestra se debe corresponder con el obte- registrar las respuestas de los picos según se indica
nido en la Preparación estándar. en Procedimiento: los tiempos de retención relati-
C - Debe responder a los ensayos para Cloru- vos deben ser aproximadamente 1,0 para dorzola-
ro <410>. mida y 1,5 para impureza A; la resolución R entre
los picos de dorzolamida e impureza A no debe ser
Determinación de agua <120> menor a 4,0; la eficiencia de la columna determina-
Titulación volumétrica directa. No más de da a partir del pico de dorzolamida no debe ser
0,5 %; determinado sobre 0,4 g. menor de 4.000 platos teóricos; el factor de asimetr-
Determinación del residuo de ignición <270> ía no debe ser mayor de 1,4; la desviación estándar
No más de 0,1 %; sometiendo la muestra a igni- relativa para inyecciones repetidas no debe ser
ción a 600 °C. mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Límite de Impureza A
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
10 l) de la Solución de aptitud del sistema y la
para cromatografía de líquidos con un detector
Solución muestra, registrar los cromatogramas y
medir las respuestas de los picos principales. Cal- Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
cular el porcentaje de Impureza A de Clorhidrato de aproximadamente 10 l de la Solución muestra,
dorzolamida en la porción de Clorhidrato de Dorzo- registrar el cromatograma y medir las respuestas de
lamida en ensayo por la fórmula siguiente: todos los picos. Calcular el porcentaje de cada
impureza individual en la porción de Clorhidrato de
100rA(rA + rE)
Dorzolamida en ensayo, en relación a la suma de las
en la cual rA es la respuesta del pico de impureza A respuestas de todos los picos. No debe contener
de dorzolamida en la Solución muestra y rE es la más de 0,1 % de ninguna impureza individual y no
respuesta del pico de clorhidrato de dorzolamida en más de 0,5 % de impurezas totales.
la Solución muestra. No debe contener más de
Límite de metales pesados <590>
0,5 % de Impureza A de Clorhidrato de Dorzolami-
Método II. No más de 0,001 %.
da.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Pureza cromatográfica Método I.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector VALORACIÓN
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de Pesar exactamente alrededor de 150 mg de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida Clorhidrato de Dorzolamida y disolver en una mez-
por octadecilsilano químicamente unido a partículas cla de 5 ml de ácido clorhídrico 0,01 N y 50 ml de
porosas de sílice de 3 a 10 m de diámetro. Mante- alcohol, sonicar si fuera necesario. Titular con
ner la columna a 35 °C. El caudal debe ser aproxi- hidróxido de sodio 0,1 N (SV), determinando el
madamente 1,5 ml por minuto. Programar el cro- punto final potenciométricamente (ver 780. Volu-
matógrafo del siguiente modo: metría). Leer el volumen agregado entre el primer
Tiempo Solución A Solución B Etapa y tercer punto de inflexión. Cada ml de hidróxido
(%) (%) de sodio 0,1 N equivale a 18,05 mg de
0-15 100 0 Isocrático C10H16N2O4S3.
15-30 100 50 0 50 Gradiente lineal
30-37 50 100 50 0 Gradiente lineal
37-44 100 0 Isocrático
Solución reguladora de fosfato - Disolver 3,7 g
de fosfato de potasio en 1 litro de agua.
Solución A - Solución reguladora de fosfato y
acetonitrilo (94:6). Filtrar y desgasificar.
Solución B - Acetonitrilo. Filtrar y desgasifi-
car.
Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
lución A y Solución B, según se indica en Sistema
cromatográfico. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 60 mg de Clorhidrato de Dorzolamida, transferir
a un matraz aforado de 100 ml y disolver en Solu-
ción A. Completar a volumen con el mismo solven-
te y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: la eficiencia de la columna determinada a
partir del pico de dorzolamida no debe ser menor de
6.500 platos teóricos; el factor de asimetría no debe
ser menor de 0,6 ni mayor de 1,2; la desviación
estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
ser mayor de 1,0 %.
Tetraciclina SR-FA en metanol y diluir a 10 ml con
DOXICICLINA el mismo solvente.
OH O OH O
OH
O Procdimiento - Aplicar por separado sobre la
NH2
placa 1 l de la Solución muestra y 1 l de las So-
H2O luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-
OH
nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
H
H
CH3 H
H
OH H N(CH3) 2
frente del solvente haya recorrido aproximadamente
tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
C22H24N2O8 . H2O PM: 462,5 17086-28-1 rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
Definición - Doxiciclina es [4S-(4,4a,5, vente, secar con una corriente de aire y examinar
5a,6,12a)]-4-(Dimetilamino)-1,4,4a,5,5a,6,11, bajo luz ultravioleta a 366 nm: en el cromatograma
12a-octahidro-3,5,10,12,12a-pentahidroxi-6-metil- obtenido a partir de la Solución muestra la mancha
1,11-dioxo-2-naftacenocarboxamida, monohidrato. principal se debe corresponder en valor de Rf, tama-
Es un producto antimicrobiano obtenido a partir de ño e intensidad a la mancha principal obtenida con
oximetaciclina o metaciclina. Debe contener no la Solución estándar A. El ensayo sólo es válido si
menos de 95,0 por ciento y no más de 100,5 por el cromatograma obtenido con la Solución estándar
ciento de C22H24N2O8, calculado sobre la sustancia B presenta dos manchas completamente separadas.
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi- B - Disolver 2 mg de Doxiciclina en 5 ml de
caciones. ácido sulfúrico: debe desarrollar color amarillo.
C - Disolver 25 mg de Doxiciclina en una mez-
Caracteres generales - Polvo cristalino amari- cla de 0,2 ml de solución de ácido nítrico al
llo. Se disuelve en soluciones diluidas de ácidos 20 % p/v y 1,8 ml de agua: no debe responder al
minerales y en soluciones de hidróxidos y carbona- ensayo para Cloruro <410>.
tos alcalinos. Muy poco soluble en alcohol; prácti-
camente insoluble en éter. Determinación del pH <250>
Entre 5,0 y 6,5, determinado sobre una suspen-
Sustancias de referencia - Hiclato de Doxici- sión de aproximadamente 10 mg por ml en agua
clina SR-FA. Clorhidrato de 6-epidoxiciclina SR- libre de dióxido de carbono.
FA. Clorhidrato de Metaciclina SR-FA. Clorhidra-
to de Tetraciclina SR-FA. Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre -113° y -130°, de-
CONSERVACIÓN terminado sobre la sustancia anhidra.
En envases inactínicos de cierre perfecto. Solución muestra: Disolver 250 mg de Doxici-
clina en una mezcla de metanol y ácido clorhídrico
ENSAYOS (95,5:0,5) y diluir a 25 ml con la misma mezcla de
Identificación solventes.
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Absorbancia de la solución
Fase estacionaria - Emplear una placa para Disolver 25 mg de Doxiciclina en una mezcla de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- metanol y ácido clorhídrico (95,5:0,5) y diluir a
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- 50 ml con la misma mezcla de solventes. Diluir
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm 2,0 ml de esta solución a 100 ml con una mezcla de
de espesor. Ajustar el pH de una solución de edeta- metanol y ácido clorhídrico 1 N (95,5:0,5). El
to de sodio al 10 % p/v, a 9,0 con hidróxido de coeficiente de extinción específica E (1 %, 1 cm) a
sodio al 42 % p/v y pulverizar uniformemente sobre 349 nm (ver 470. Espectrofotometría ultravioleta y
la placa con esta solución. Dejar secar la placa en visible), debe estar comprendido entre 325 y 363,
posición horizontal durante 1 hora y en el momento calculado sobre la sustancia anhidra. [NOTA: rea-
de su uso secar en estufa a 110 ºC durante 1 hora. lizar la medida dentro de la hora siguiente de la
Fase móvil - Cloruro de metileno, metanol y preparación].
agua (59:35:6).
Solución muestra - Disolver 5 mg de Doxicicli- Impurezas absorbentes de la luz
na en metanol y diluir a 10 ml con el mismo solven- Disolver 100 mg de Doxiciclina en una mezcla
te. de metanol y ácido clorhídrico 1 N (95,5:0,5) y
Solución estándar A - Disolver 5 mg de Hiclato diluir hasta 50,0 ml con la misma mezcla de solven-
de Doxiciclina SR-FA en metanol y diluir a 10 ml tes. La absorbancia determinada a 490 nm (ver
con el mismo solvente. 470. Espectrofotometría ultravioleta y visible) no
Solución estándar B - Disolver 5 mg de Hiclato debe ser mayor de 0,07, determinada sobre la sus-
de Doxiciclina SR-FA y 5 mg de Clorhidrato de
tancia anhidra. [NOTA: realizar la medida a la hora reguladora de pH 8,0, 50 ml de solución de bisulfa-
siguiente de la preparación de la solución]. to de tetrabutilamonio al 1,0 % p/v ajustada a
pH 8,0 con hidróxido de sodio al 8,5 % p/v y agre-
Sustancias relacionadas
gar 10 ml de una solución de edetato disódico al
Sistema cromatográfico, Fase móvil y Aptitud
4 % p/v ajustada a pH 8,0 con hidróxido de sodio al
del sistema - Proceder según se indica en Valora-
8,5 % p/v. Completar a volumen con agua y mez-
ción.
clar.
Solución muestra y Solución estándar E - Pro-
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
ceder según se indica para Preparación muestra y
dedor de 20,0 mg de Doxiciclina, transferir a un
Preparación estándar E en Valoración, respectiva-
matraz aforado de 25 ml, disolver en ácido clorhí-
mente.
drico 0,01 N y completar a volumen con el mismo
Procedimiento - Inyectar por separado en el
solvente.
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Preparación estándar A - Preparar una solución
20 l) de la Solución muestra y la Solución están-
de Hiclato de Doxiciclina SR-FA en ácido clorhí-
dar E, registrar los cromatogramas y medir las
drico 0,01 N de aproximadamente 0,8 mg por ml.
respuestas de todos los picos. En el cromatograma
Preparación estándar B - Pesar exactamente al-
obtenido a partir de la Solución muestra la respuesta
rededor de 20,0 mg de Clorhidrato de
del pico correspondiente a metaciclina o 6-
6-epidoxiciclina SR-FA, transferir a un matraz
epidoxiciclina no debe ser mayor que la respuesta
aforado de 25 ml, disolver en ácido clorhídrico
del pico correspondiente en el cromatograma obte-
0,01 N y completar a volumen con el mismo sol-
nido con la Solución estándar E (2,0 %); la respues-
vente.
ta de cualquier pico que se encuentre entre el pico
Preparación estándar C - Pesar exactamente al-
del solvente y el pico de metaciclina y la respuesta
rededor de 20,0 mg de Clorhidrato de Metacicli-
de cualquier pico que se encuentre en la cola del
na SR-FA, transferir a un matraz aforado de 25 ml,
pico principal no debe ser mayor de 25,0 % de la
disolver en ácido clorhídrico 0,01 N y completar a
respuesta del pico de 6-epidoxiciclina en el croma-
volumen con el mismo solvente.
tograma obtenido con la Solución estándar E
Preparación estándar D - Mezclar 4,0 ml de la
(0,5 %).
Preparación estándar A, 1,5 ml de la Preparación
Determinación de Agua <120> estándar B y 1,0 ml de la Preparación estándar C y
Titulación volumétrica directa. Entre 3,6 y diluir a 25,0 ml con ácido clorhídrico 0,01 N.
4,6 %, determinado sobre 200 mg de Doxiciclina. Preparación estándar E - Mezclar 2,0 ml de la
Límite de metales pesados <590> Preparación estándar B y 2,0 ml de la Preparación
Método VI. Preparar la Solución muestra a par- estándar C y diluir a 100 ml con ácido clorhídrico
tir de 0,5 g de Doxiciclina y la Solución estándar 0,01 N.
empleando 2,5 ml de Solución estándar de plomo Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
(10 ppm). El límite es 0,005 %. Cromatografiar la Preparación estándar D y regis-
trar las respuestas de los picos según se indica en
Determinación del residuo de ignición <270> Procedimiento: el ensayo sólo es válido si la resolu-
No más de 0,4 %. ción R entre el primer pico (metaciclina) y el se-
VALORACIÓN gundo pico (6-epidoxiciclina) es mayor a 1,25 y la
resolución R entre el segundo y el tercer pico (doxi-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo ciclina) es mayor a 2,0; el factor de asimetría para
para cromatografía de líquidos con un detector el tercer pico debe ser menor a 1,25. Cromatogra-
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de fiar la Preparación estándar A y registrar las res-
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida puestas de los picos según se indica en Procedi-
por copolímero de estireno-divinilbenceno de 8 a miento: la desviación estándar relativa para inyec-
10 µm. Mantener la columna a 60 ºC. El caudal ciones repetidas debe ser menor de 1,0 %.
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Solución reguladora de pH 8,0 - Transferir cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
50 ml de solución de fosfato monobásico de potasio 20 l) de la Preparación muestra y la Preparación
0,2 M a un matraz aforado de 200 ml, agregar estándar A, registrar los cromatogramas y medir las
46,8 ml de hidróxido de sodio 0,2 N y completar a respuestas de los picos principales. Calcular el
volumen con agua. contenido en porcentaje de C22H24N2O8 . H2O en la
Fase móvil - Pesar 60 g de 2-metil-2-propanol y porción de Doxiciclina en ensayo.
transferir a un matraz aforado de 1 litro con la ayu-
da de 200 ml de agua. Agregar 400 ml de Solución
Rotación específica: Entre –105º y –120º, de-
DOXICICLINA, HICLATO DE terminado sobre la sustancia anhidra.
Solución muestra: Disolver 250 mg de Hiclato
OH O OH O
OH
O
de Doxiciclina en una mezcla de metanol y ácido
NH2
HCl H3C OH H2O
clorhídrico 1 N (99:1) y diluir a 25 ml con la misma
OH mezcla de solventes. [NOTA: realizar la medida
H H
H CH3 H OH H N(CH3) 2 2 dentro de los 5 minutos siguientes de la prepara-
ción].
(C22H24N2O8 . HCl)2 . C2H6O . H2O PM: 512,9 24390-14-5 Absorbancia de la solución
Definición - Hiclato de Doxiciclina es Clor- Disolver 25 mg de Hiclato de Doxiciclina en
hidrato de [4S-(4,4a,5,5a,6,12a)]-4-(dime- una mezcla de metanol y ácido clorhídrico 1 N
tilamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahidro-3,5,10,12, (99:1) y diluir a 25 ml con la misma mezcla de
12a-pentahidroxi-6-metil-1,11-dioxo-2-naftaceno- solventes. Diluir 1,0 ml de esta solución a 100 ml
carboxamida, etanolato (2:1), monohidrato. Es un con una mezcla de metanol y ácido clorhídrico 1 N
producto antimicrobiano obtenido a partir de oxi- (99:1). El coeficiente de extinción específica E
metaciclina o metaciclina. Debe contener no menos (1%, 1 cm) a 349 nm (ver 470. Espectrofotometría
de 88,0 por ciento y no más de 94,0 por ciento de ultravioleta y visible), debe estar comprendido entre
C22H24N2O8 (doxiciclina), calculado sobre la sus- 300 y 335, calculado sobre la sustancia anhidra.
tancia anhidra y libre de alcohol y debe cumplir con [NOTA: realizar la medida dentro de la hora si-
las siguientes especificaciones. guiente de la preparación].
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 210 nm y una columna de
Entre 4,0 y 5,5; determinado sobre una solución
EPIRUBICINA, de aproximadamente 5 mg por ml en agua libre de
CLORHIDRATO DE dióxido de carbono.
O OH O
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
OH 4,0 %; determinado sobre 100 mg.
OH
Sustancias relacionadas
H . HCl Sistema cromatográfico, Fase móvil y Solución
OCH3 O OH de resolución - Proceder según se indica en Valo-
HO O
ración.
CH3
Solución muestra - Emplear la Preparación
NH2 muestra preparada según se indica en Valoración.
Solución estándar A - Diluir 1,0 ml de Solución
C27H29NO11 . HCl PM: 580,0 56390-09-1 muestra a 100 ml con Fase móvil.
Definición - Clorhidrato de Epirubicina es Solución estándar B - Disolver 10 mg de Clor-
Clorhidrato de (8S-cis)-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxi- hidrato de Doxorubicina en una mezcla de 5 ml de
-L-arabino-hexopiranosil)oxi]-7,8,9,10-tetrahidro- agua y 5 ml de ácido fosfórico al 87 % p/p. Dejar
6,8,11-trihidroxi-8-(hidroxiacetil)-1-metoxi-5,12- reposar durante 30 minutos y ajustar a pH 2,6 con
naftacenodiona. Es obtenida por transformación hidróxido de sodio al 8,0 % p/v. Agregar 15 ml de
química de una sustancia producida por Streptomy- acetonitrilo, 10 ml de metanol y mezclar.
ces peucetius. Debe contener no menos de 97,0 por Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
ciento y no más de 102,0 por ciento de Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
C27H29NO11 . HCl, calculado sobre la sustancia las respuestas de los picos según se indica en Pro-
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi- cedimiento: la resolución R entre los picos de epiru-
caciones. bicina y doxorubicina no debe ser menor de 2,0.
Cromatografiar la Solución estándar B y registrar
Caracteres generales - Polvo rojo-anaranjado.
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Soluble en agua y metanol; poco soluble en alcohol
cedimiento: [NOTA: considerar que el segundo pico
absoluto; prácticamente insoluble en acetona.
principal en el cromatograma obtenido a partir de la
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Epi- Solución estándar B corresponde a doxorubicinona]
rubicina SR-FA. el tiempo de retención para el pico de epirubicina
debe ser aproximadamente 9,5 minutos; los tiempos
CONSERVACIÓN de retención relativos al pico de epirubicina son
En envases inactínicos de cierre perfecto, en un aproximadamente los indicados en la siguiente
refrigerador. tabla:
Precaución - Evitar el contacto y su inhalación. Tiempo de
Nombre retención
ENSAYOS relativo
(8S,10S)-6,8,10,11-tetrahidroxi-8-(hidroxi-
Identificación acetil)-1-metoxi-7,8,9,10-tetrahidrotetra- 0,3
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. cen-5,12-diona (Doxorubicinona)
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en (8S,10S)-8-acetil-6,8,10,11-tetrahidroxi-1-
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- metoxi-7,8,9,10-tetrahidrotetracen-5,12- 0,4
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- diona (Daunorubicinona)
paración muestra se debe corresponder con el obte- Doxorubicina 0,8
nido en la Preparación estándar. (8S,10S)-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxi--L-
C - Disolver aproximadamente 10 mg de Clor- lyxo-hexopiranosil)oxi]-6,8,11-trihidroxi-
hidrato de Epirubicina en 0,5 ml de ácido nítrico, 8-[(1RS)-1-hidroxietil]-1-metoxi-7,8,9,10- 1,1
agregar 0,5 ml de agua y calentar a la llama durante tetrahidrotetracen-5,12-diona (dihidrodau-
norubicina) y epímero
2 minutos. Dejar enfriar y agregar 0,5 ml de nitrato
Daunorubicina 1,5
de plata al 42,5 %: se debe formar un precipitado (8S,10S)-8-acetil-10-[(3-amino-2,3,6-
blanco. trideoxi--L-arabino-hexopiranosil)oxi]-6,
1,7
Determinación del pH <250> 8,11-trihidroxi-1-metoxi-7,8,9,10-tetrahi-
drotetracen-5,12-diona (epi-daunorubicina)
8,8’-[(2R,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)- 2,1
1,3-dioxolan-2,4-diil]bis[(8S,10S)-10-[(3- Solución de resolución - Disolver 10 mg de
amino-2,3,6-trideoxi--L-arabino-hexopi- Clorhidrato de Epirubicina SR-FA y 10 mg de
ranosil)oxi]-6,8,11-trihidroxi-1-metoxi-7, Clorhidrato de Doxorubicina en Fase móvil, trans-
8,9,10-tetrahidrotetracen-5,12-diona ferir a un matraz aforado de 100 ml y completar a
(dímero de epirubicina) volumen con Fase móvil.
Procedimiento - Inyectar por separado en el Preparación estándar - Pesar exactamente al-
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente rededor de 25 mg de Clorhidrato de Epirubici-
10 l) de la Solución estándar A y la Solución na SR-FA y transferir a un matraz aforado de 25 ml.
muestra. Registrar los cromatogramas durante al Disolver en Fase móvil, completar a volumen con
menos 3,5 veces el tiempo de retención del pico de Fase móvil y mezclar.
epirubicina en la Solución muestra y medir las Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
respuestas de todos los picos. [NOTA: para el dedor de 25 mg de Clorhidrato de Epirubicina y
cálculo del contenido multiplicar la respuesta del transferir a un matraz aforado de 25 ml. Disolver
pico de doxorubicinona por 0,7]. En el cromato- en Fase móvil, completar a volumen con Fase móvil
grama obtenido a partir de la Solución muestra, la y mezclar.
respuesta del pico correspondiente a doxorubicino- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
na no debe ser mayor a la respuesta del pico princi- Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
pal obtenido con la Solución estándar A (1,0 %); la las respuestas de los picos según se indica en Pro-
respuesta del pico correspondiente a doxorubicina cedimiento: la resolución R entre los picos de epiru-
no debe ser mayor a la respuesta del pico principal bicina y doxorubicina no debe ser menor de 2,0.
obtenido con la Solución estándar A (1,0 %); nin- Procedimiento - Inyectar por separado en el
guna otra impureza individual debe ser mayor a cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
0,5 veces la respuesta del pico principal obtenido 10 l) de la Preparación estándar y la Preparación
con la Solución estándar A (0,5 %); y la suma de muestra, registrar los cromatogramas y medir las
todas las impurezas no debe ser mayor a dos veces respuestas de los picos principales. Calcular la
la respuesta del pico principal obtenido con la Solu- cantidad de C27H29NO11 . HCl en la porción de
ción estándar A (2,0 %). Ignorar cualquier pico con Clorhidrato de Epirubicina en ensayo.
una respuesta menor a 0,05 veces la respuesta del ROTULADO
pico principal obtenido con la Solución estándar A
(0,05 %). Cuando Clorhidrato de Epirubicina esté destina-
do a la preparación de formas farmacéuticas de
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330> administración parenteral indicar en el rótulo que
Cuando en el rótulo se indique que Clorhidrato está libre de endotoxinas.
de Epirubicina está destinado a la preparación de
formas farmacéuticas de administración parenteral,
no debe contener más de 1,1 Unidades de Endo-
toxinas por mg de Clorhidrato de Epirubicina.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por trimetilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 6 m de diámetro. Mantener la
columna a 35 °C. El caudal debe ser aproximada-
mente 2,5 ml por minuto.
Solución de laurilsulfato de sodio y ácido fosfó-
rico - Preparar una solución que contenga
0,37 % p/v de laurilsulfato de sodio y 2,8 % p/v de
ácido fosfórico diluido 2 M.
Fase móvil - Solución de laurilsulfato de sodio
y ácido fosfórico, acetonitrilo y metanol (54:29:17).
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
ma en 100. Cromatografía).
inferior, durante no menos de 2 horas. Sin
ERGOCALCIFEROL pulverización previa, cargar el material enfriado en
un tubo capilar, luego colocar de inmediato el tubo
H3C H H capilar cargado en un desecador al vacío y secar a
CH3 CH3 una presión que no exceda los 20 mm Hg durante
H CH3
3 horas. Inmediatamente después de retirar el
CH3
desecador, sellar a la llama el extremo abierto del
tubo y proceder lo antes posible con la
H
determinación del punto de fusión del siguiente
modo: calentar el baño hasta alcanzar una
CH2 temperatura de 10 ± 1 ºC por debajo del punto de
fusión esperado, luego introducir el tubo cargado y
HO
H calentar a una velocidad de ascenso de 3,0 ± 0,5 ºC
por minuto hasta completar la fusión. Si el tamaño
de partícula del material es demasiado grande para
C28H44O PM: 396,7 50-14-6
el capilar, enfriar previamente la muestra como se
Sinonimias - Calciferol. Vitamina D2. indicó anteriormente. Luego, aplicando la menor
presión posible, romper cuidadosamente las
Definición - Ergocalciferol es (3,5Z,7E, 22E)-
partículas a un tamaño apropiado para que entren en
9,10-Secoergosta-5,7,10(19),22-tetraen-3-ol. Debe
el capilar. Debe fundir entre 115 y 119 °C.
contener no menos de 97,0 por ciento y no más de
103,0 por ciento de C28H44O y debe cumplir con las Determinación de la rotación óptica <170>
siguientes especificaciones. Rotación específica: Entre +103° y +106°.
Solución muestra: 15 mg por ml, en alcohol.
Caracteres generales - Cristales blancos,
[NOTA: preparar la solución rápidamente,
inodoros. Se altera por exposición a la luz, al aire y
empleando Ergocalciferol de un envase que lleve
al calor. Soluble en alcohol, cloroformo, éter y en
abierto no más de 30 minutos y proceder a la
aceites grasos; insoluble en agua.
determinación dentro de los 30 minutos posteriores
Sustancias de referencia - a la preparación de la solución.]
Ergocalciferol SR-FA. Vitamina D para Aptitud
Sustancias reductoras
del Sistema de Valoración SR-FA.
A 10 ml de una solución de Ergosterol en
alcohol absoluto 1 en 100, agregar 0,5 ml de una
CONSERVACIÓN
solución de azul de tetrazolio (SR). Luego agregar
En envases inactínicos herméticos, bajo 0,5 ml de una solución de hidróxido de
nitrógeno y en un sitio fresco. tetrametilamonio (SR) en alcohol absoluto 1 en 10.
Dejar reposar la mezcla durante exactamente
ENSAYOS 5 minutos y luego agregar 1 ml de ácido acético
Identificación glacial. Preparar un blanco tratando 10 ml de
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. alcohol absoluto del mismo modo. Determinar la
Registrar el espectro entre 2 y 12 µm. absorbancia de la solución a 525 nm, con un
B - Absorción ultravioleta <470> espectrofotómetro apropiado, contra el blanco: la
Solvente: alcohol. absorbancia no debe ser mayor que la obtenida a
Concentración: 10 µg por ml. partir de una solución de aproximadamente 0,2 µg
Las absortividades a 265 nm, calculada por ml de hidroquinona en alcohol absoluto, tratado
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de de forma similar.
3,0 %. Impurezas orgánicas volátiles <520>
C - Disolver aproximadamente 0,5 mg de Método III.
Ergocalciferol en 5 ml de cloroformo, agregar Solvente: dimetilsulfóxido.
0,3 ml de anhídrido acético y 0,1 ml de ácido
sulfúrico y agitar vigorosamente: se debe producir VALORACIÓN
un color rojo brillante que rápidamente se torna
violeta y luego cambia de azul a verde. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
Determinación del punto de fusión <260> ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
Método I. Colocar la muestra en un envase 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
cerrado y enfriarla a 10 ºC o a una temperatura por partículas porosas de sílice de 5 a 10 µm de
diámetro. El caudal debe ser aproximadamente muestra, registrar los cromatogramas y medir las
1,0 ml por minuto. respuestas de los picos principales. Calcular la
Hexano deshidratado - Preparar una columna cantidad de C28H44O en la porción de Ergocalciferol
cromatográfica empacando un tubo cromatográfico en ensayo.
de 60 cm × 8 cm, con 500 g de tierra silícea para
cromatografía, con un tamaño de partícula de 50 a
250 µm, activada por secado a 150 °C durante
4 horas (ver Cromatografía de adsorción en
columna en 100. Cromatografía). Pasar 500 ml de
hexano a través de la columna y recolectar el eluido
en un recipiente con tapa de vidrio.
Fase móvil - Alcohol n-amílico en Hexano
Deshidratado (3 en 1.000). Hacer los ajustes
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cromatografía).
Solución de aptitud del sistema - Disolver
aproximadamente 250 mg de Vitamina D para
Aptitud del Sistema de Valoración SR-FA en 10 ml
de una mezcla de tolueno y Fase móvil (50:50).
Calentar esta solución a reflujo a 90 °C durante
45 minutos y enfriar. Esta solución contiene
colecalciferol, pre-colecalciferol y
trans-colecalciferol.
Preparación estándar - [NOTA: emplear
material de vidrio inactínico y preparar las
soluciones en el día de su uso]. Pesar exactamente
alrededor de 30 mg de Ergocalciferol SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 50 ml, disolver en
tolueno sin calentar, completar a volumen con
tolueno y mezclar. Transferir 10 ml de esta
solución a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con Fase móvil y mezclar para obtener una
solución de aproximadamente 120 µg por ml.
Preparación muestra - [NOTA: emplear
material de vidrio inactínico y preparar las
soluciones en el día de su uso]. Pesar exactamente
alrededor de 30 mg de Ergocalciferol, transferir a
un matraz aforado de 50 ml y proceder según se
indica para Preparación estándar, comenzando
donde dice: “disolver en tolueno sin calentar...”,
para obtener una solución de aproximadamente
120 µg por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: la resolución R entre los picos de
trans-colecalciferol y pre-colecalciferol no debe ser
menor de 1; los tiempos de retención relativos
deben ser aproximadamente 0,4 para
pre-colecalciferol, 0,5 para trans-colecalciferol y
1,0 para colecalciferol; la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 2 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (entre 5 y 10 µl)
de la Preparación estándar y la Preparación
ERGOMETRINA, Sustancias relacionadas
[NOTA: realizar todas las operaciones tan rápi-
MALEATO DE damente como sea posible y protegidas de la luz.
Preparar las Soluciones muestra y estándar en el
CH3 momento de su uso].
H CO2H Fase estacionaria - Emplear una placa para
N
. cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
H
HN N CO2H
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
OH grafía, de 0,25 mm de espesor.
H H CH3
O Fase móvil - Cloroformo, metanol y agua
(75:25:3).
Diluyente - Alcohol al 80 % v/v y amoníaco
C23H27N3O6 PM: 441,5 concentrado (9:1).
Sinonimia - Ergonovina, Maleato de Solución muestra A - Disolver 50 mg de Malea-
to de Ergometrina en Diluyente y diluir a 5 ml con
Definición - Maleato de Ergometrina es Malea- el mismo solvente.
to de [8(S)]-9,10-didehidro-N-(2-hidroxi-1- Solución muestra B - Diluir 1,0 ml de la Solu-
metiletil)-6-metilergolinocarboxamida. Debe con- ción muestra A a 10 ml con Diluyente.
tener no menos de 98,0 por ciento y no más de Solución estándar A - Disolver 10 mg de Ma-
101,0 por ciento de C23H27N3O6, calculado sobre la leato de Ergometrina SR-FA en Diluyente y diluir a
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes 10 ml con el mismo solvente.
especificaciones. Solución estándar B - Diluir 5 ml de la Solución
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco estándar A a 50 ml con Diluyente.
o casi blanco. Moderadamente soluble en agua; Solución estándar C - A 2 ml de la Solución
poco soluble en alcohol; prácticamente insoluble en estándar B agregar 2,0 ml de Diluyente.
éter. Revelador - Disolver 1 g de dimetilaminaben-
zaldehído en 50 ml de ácido clorhídrico y agregar
Sustancia de referencia - Maleato de Ergome- 50 ml de alcohol.
trina SR-FA. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
CONSERVACIÓN placa 5 µl de las Soluciones muestra A y B y 5 µl de
las Soluciones estándar A, B y C. Dejar secar las
En envases inactínicos de vidrio, herméticamen- aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
te cerrados. En sitio frío. que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
ENSAYOS damente tres cuartas partes de la longitud de la
placa. Secar la placa en una corriente de aire frío.
Identificación Pulverizar sobre la placa con Revelador y secar
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. nuevamente en una corriente de aire templado du-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en rante aproximadamente 2 minutos. En el cromato-
Sustancias relacionadas. La mancha principal en el grama obtenido a partir de la Solución muestra A,
cromatograma obtenido a partir de la Solución ninguna mancha, a excepción la mancha principal,
muestra B se debe corresponder en valor de Rf, debe ser más intensa que la mancha principal en el
color y tamaño a la mancha principal en el croma- cromatograma obtenido con la Solución estándar B
tograma obtenido con la Solución estándar A. (1,0 %); y sólo una de ellas puede ser más intensa
Determinación del pH <250> que la mancha principal en el cromatograma obte-
Entre 3,6 y 4,4, determinado sobre una solución nido con la Solución estándar C (0,5 %).
de aproximadamente 10 mg por ml. VALORACIÓN
Determinación de la rotación óptica <170> Pesar exactamente alrededor de 150 mg de Ma-
Rotación específica: Entre 50º y 56º. leato de Ergometrina y disolver en 40 ml de ácido
Solución muestra: 10 mg por ml. acético anhidro. Titular con ácido perclórico
Pérdida por secado <680> 0,05 N (SV), determinando el punto final poten-
Secar 200 mg de Maleato de Ergometrina sobre ciométricamente. Realizar una determinación con
pentóxido de difósforo a 80 ºC durante 2 horas y a un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
una presión que no exceda los 20 mm Hg: no debe 780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
perder más de 2 % de su peso. 0,05 N equivale a 22,07 mg de C23H27N3O6.
Secar al vacío a 100 °C hasta peso constante: no
ERGOTAMINA, MESILATO debe perder más de 4,0 % de su peso.
DE DIHIDRO Alcaloides relacionados
Fase estacionaria - Emplear una placa para
CH3
H
O
O OH cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
H
H N grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
N H N
O grafía de 0,25 mm de espesor.
CH3SO3H
N H
O
Fase móvil - Cloroformo y alcohol (9:1).
H CH3
HN Diluyente - Cloroformo, metanol e hidróxido de
amonio (10:10:1).
Solución madre del estándar - Preparar una so-
lución de Mesilato de Dihidroergotamina SR-FA en
C33H37N5O5 . CH4O3S PM: 679,8 6190-39-2 Diluyente de aproximadamente 20 mg por ml.
Definición - Mesilato de Dihidroergotamina es Soluciones estándar - Diluir cuantitativamente
Monometansulfonato de 9,10-dihidro-12'-hidroxi- y en etapas la Solución madre del estándar con
2'-metil-5'-(fenilmetil)-ergotaman-3',6',18-triona. Diluyente para obtener tres Soluciones estándar con
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no las siguientes concentraciones:
más de 103,0 por ciento de C33H37N5O5 . CH4O3S, Solución Concentración % con respecto
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir Estándar (mg por ml) a la muestra
con las siguientes especificaciones.
A 0,4 2,0
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco B 0,2 1,0
o casi blanco, de olor débil. Soluble en alcohol; C 0,1 0,5
poco soluble en agua y cloroformo.
Solución muestra - Preparar una solución de
Sustancia de referencia - Mesilato de Dihidro- Mesilato de Dihidroergotamina en Diluyente de
ergotamina SR-FA. aproximadamente 20 mg por ml.
Revelador - Disolver 800 mg de
CONSERVACIÓN
p-dimetilaminobenzaldehído en una mezcla fría de
En envases inactínicos bien cerrados. 80 g de alcohol y 20 g de ácido sulfúrico.
ENSAYOS Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 5 µl de la Solución muestra, 5 µl de la Solu-
Identificación ción madre del estándar y 5 µl de las Soluciones
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. estándar A, B y C. Dejar secar las aplicaciones y
B - Absorción ultravioleta <470> desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
Solvente: alcohol al 70 %. del solvente haya recorrido aproximadamente tres
Concentración: 50 µg por ml. cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
Las absortividades a 280 nm, calculadas placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de dejar que se evapore. Pulverizar sobre la placa con
3,0 %. Revelador: el valor de Rf de la mancha principal en
C - Examinar los cromatogramas obtenidos en el cromatograma obtenido a partir de la Solución
Alcaloides relacionados. El valor de Rf de la man- muestra se debe corresponder con el obtenido con
cha principal en el cromatograma obtenido a partir la Solución madre del estándar. Estimar la concen-
de la Solución muestra se debe corresponder con el tración de cualquier otra mancha en el cromatogra-
obtenido con la Solución madre del estándar. ma obtenido a partir de la Solución muestra por
Determinación de la rotación óptica <170> comparación con las manchas obtenidas con las
Rotación específica: Entre -37° y -43°, determi- Soluciones estándar A, B y C: la suma de las impu-
nado sobre la sustancia seca. rezas no debe ser mayor de 2,0 %.
Solución muestra: disolver 250 mg de Mesilato VALORACIÓN
de Dihidroergotamina en 25 ml de piridina seca.
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
Determinación del pH <250> rededor de 10 mg de Mesilato de Dihidroergotami-
Entre 4,4 y 5,4, determinado sobre una solución na SR-FA, transferir a un matraz aforado de 200 ml,
1 en 1.000. agregar 2 ml de metanol, completar a volumen con
Pérdida por secado <680> solución de ácido tartárico 1 en 100 y mezclar.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 10 mg de Mesilato de Dihidroergotamina,
transferir a un matraz aforado de 200 ml, agregar
2 ml de metanol, completar a volumen con solución
de ácido tartárico 1 en 100 y mezclar.
Procedimiento - Transferir a sendos erlenme-
yers 3,0 ml de Preparación estándar, 3,0 ml de
Preparación muestra y 3,0 ml de solución de ácido
tartárico 1 en 100 para preparar un blanco. Agregar
a cada uno 6,0 ml de p-dimetilaminobenzal-
dehído (SR), agitar y dejar reposar durante
20 minutos. Determinar concomitantemente las
absorbancias de estas soluciones obtenidas a partir
de la Preparación estándar y la Preparación mues-
tra, en celdas de 1 cm, a la longitud de onda de
máxima absorción, aproximadamente 585 nm, con
un espectrofotómetro, contra el blanco. Calcular la
cantidad de C33H37N5O5 . CH4O3S en la porción de
Mesilato de Dihidroergotamina en ensayo.
sodio y mezclar suavemente. Agregar 10 ml de
ERGOTAMINA, cloroformo, agitar vigorosamente y una vez que las
TARTRATO DE capas se hayan separado transferir la fase clorofór-
mica, a través de un filtro pequeño previamente
humedecido con cloroformo, a un matraz aforado
HO
H
N
de 50 ml. Rápidamente continuar la extracción con
O H3C O O O HO H tres porciones de 10 ml de cloroformo, pasando los
H
OH
N
N
H
HO extractos a través del mismo filtro. Colocar el ma-
H HO H
O
O
traz en un baño a 20 °C durante 10 minutos y ajus-
N
(A1/P1)(P2/A2)
en la cual A1 y A2 son las absorbancias obtenidas a
partir de las respectivas Soluciones estándar, P1 y
P2 son los pesos en mg de tiocianato de potasio
empleados para preparar las Soluciones estándar
correspondientes. El factor S no debe ser menor de
0,985 y no debe ser mayor de 1,015. Calcular el
porcentaje de tiocianato en la porción de Eritromi-
cina en ensayo, por la fórmula siguiente:
0,5(AM/PM)(58,08/97,18)[(P1/A1) + (P2/A2)]
en la cual 58,08 y 97,18 son los pesos moleculares
de tiocianato y tiocianato de potasio, respectiva-
mente, AM es la absorbancia de la Solución muestra,
PM es el peso en mg de Eritromicina empleado para
preparar la Solución muestra y los restantes térmi-
nos son los definidos anteriormente: no debe conte-
ner más de 0,3 %.
VALORACIÓN
Proceder con Eritromicina según se indica para
Eritromicina en 770. Valoración microbiológica de
antibióticos.
Fase estacionaria - Emplear una placa para
ERITROMICINA, cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
ESTEARATO DE grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
O
Solución de acetato de amonio - Preparar una
H3C CH3 solución de aproximadamente 150 g por litro y
H
H
H ajustar a pH 9,6 con amoníaco.
H3C R1
CH3 HO HO CH3
Fase móvil - Acetato de etilo, Solución de ace-
O O CH3 H tato de amonio y 2-propanol (9:8:4).
H3C H O CH3 Solución estándar A - Disolver 20 mg de Eri-
CH3 H
N O
OH O
H O tromicina A SR-FA en metanol y diluir a 10 ml con
CH3 H CH3 el mismo solvente.
O R2
Solución estándar B - Disolver 10 mg de ácido
esteárico en metanol y diluir a 10 ml con el mismo
CH3
CO2H solvente.
H3C Solución muestra - Disolver 28 mg de Estearato
C55H103NO15 PM: 1.018 643-22-1 de Eritromicina en metanol y diluir a 10 ml con el
mismo solvente.
Eritromicina FM R1 R2 Revelador 1 - Solución de diclorofluoresceína
A C55H103NO15 -OH -CH3 de aproximadamente 0,2 g por litro y solución de
B C55H103NO14 -H -CH3 rodamina B de aproximadamente 0,1 g por litro en
C C54H101NO15 -OH -H alcohol.
Revelador 2 - Anisaldehído (SR).
Definición - Estearato de Eritromicina es una Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
mezcla de octadecanoatos de eritromicina y ácido placa 5 l de la Solución muestra y 5 l de las So-
esteárico. El componente principal es el octadeca- luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-
noato de (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-6- nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
[[3-(dimetilamino)-3,4,6-tridesoxi--D-xilohexapi- frente del solvente haya recorrido aproximadamente
ranosil]oxi]-14-etil-7,12,13-trihidroxi-3,5,7,9,11, tres cuartas partes de la longitud de la placa. Dejar
13-hexametil-4-[(3-C-metil-3-O-metil-2,6-didesoxi- secar la placa al aire y pulverizar sobre la placa con
-L-ribohexapiranosil)oxi]oxaciclotetradecano- Revelador 1. Mantener la placa durante unos se-
2,10-diona (Eritromicina A). Debe contener no gundos en el vapor de un baño de agua y examinar
menos de 97,0 por ciento y no más de 103,0 por bajo luz ultravioleta a 366 nm: el cromatograma
ciento de la suma de Eritromicinas A, B y C expre- obtenido a partir de la Solución muestra debe pre-
sado como sales de estearato, calculado sobre la sentar dos manchas, una con un valor de Rf similar
sustancia anhidra y libre de ácido esteárico. Estea- a la mancha principal obtenida con la Solución
rato de Eritromicina debe cumplir con las siguientes estándar A y la otra con un valor de Rf similar a la
especificaciones. mancha principal obtenida con la Solución están-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco. dar B. Pulverizar sobre la placa con Revelador 2,
Soluble en acetona y metanol; prácticamente inso- calentar a 110 ºC durante 5 minutos y examinar
luble en agua. Sus soluciones pueden presentar bajo luz natural: la mancha coloreada obtenida a
opalescencia. partir de la Solución muestra debe ser similar en
valor de Rf, tamaño y color a la mancha principal
Sustancias de referencia - Estearato de Eri- obtenida con la Solución estándar A.
tromicina SR-FA. Eritromicina A SR-FA. Eritro-
micina B SR-FA. Eritromicina C SR-FA. Ácido esteárico libre
N-Desmetileritromicina A SR-FA. Disolver 400 mg de Estearato de Eritromicina
en 50 ml de metanol y titular con hidróxido de
CONSERVACIÓN sodio 0,1 N (SV), determinando el punto final po-
En envases de cierre perfecto. tenciométricamente. Calcular el volumen de
hidróxido de sodio 0,1 N consumido por gramo de
ENSAYOS Estearato de Eritromicina (n1 ml). Disolver 500 mg
Identificación de Estearato de Eritromicina en 30 ml de cloruro de
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. metileno. Si la solución es opalescente, filtrar y
B - Emplear la siguiente técnica cromatográfica. agitar el residuo con tres porciones de 25 ml de
cloruro de metileno. Filtrar si fuera necesario y
lavar el residuo con cloruro de metileno. Combinar por copolímero rígido, esférico de divinilbenceno y
el filtrado y los líquidos de lavado y evaporar hasta estireno, de 8 a 10 m de diámetro con un tamaño
30 ml. Agregar 50 ml de ácido acético glacial y de poro de 100 nm. Mantener la columna y al me-
titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determi- nos la tercera parte del tubo que precede a la co-
nando el punto final potenciométricamente. Calcu- lumna a 70 ºC. El caudal debe ser aproximadamen-
lar el volumen consumido de ácido perclórico 0,1 N te 2,0 ml por minuto.
por gramo de Estearato de Eritromicina (n2 ml). Fase móvil - A 50 ml de una solución de fosfato
Calcular la cantidad en porcentaje de C18H36O2 en la ácido de potasio al 3,5 % ajustada a pH 9,0 con
porción de Estearato de Eritromicina en ensayo, por ácido fosfórico diluido, agregar 400 ml de agua,
la fórmula siguiente: 165 ml de 2-metil-2-propanol y 30 ml de acetonitri-
lo y diluir a 1 litro con agua.
2,845(n1n2)
Diluyente - Transferir 20 g de fosfato dibásico
No debe contener más de 14,0 % de C18H36O2, de potasio a un matraz aforado de 1 litro, agregar
calculado sobre la sustancia anhidra. 900 ml de agua, ajustar a pH 8,0 con ácido fosfórico
Sustancias relacionadas y completar a volumen con agua.
Sistema cromatográfico, Fase móvil Diluyente, Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Preparación estándar A, Preparación estándar C y dedor de 55 mg de Estearato de Eritromicina, trans-
Aptitud del sistema - Proceder según se indica en ferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver en 5 ml
Valoración. de metanol y completar a volumen con Diluyente.
Solución muestra - Emplear la Preparación Preparación estándar A - Pesar exactamente al-
muestra preparada según se indica en Valoración. rededor de 40 mg de Eritromicina A SR-FA, trans-
Solución estándar - Diluir 3,0 ml de la Prepa- ferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver en 5 ml
ración estándar A a 100 ml con una mezcla de de metanol y completar a volumen con Diluyente.
metanol y Diluyente (1:1). Preparación estándar B - Pesar exactamente al-
Procedimiento - Inyectar por separado en el rededor de 10 mg de Eritromicina B SR-FA y
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 10 mg de Eritromicina C SR-FA, transferir a un
100 l) de la Solución estándar y la Solución mues- matraz aforado de 50 ml, disolver en 25 ml de me-
tra, registrar los cromatogramas durante al menos tanol y completar a volumen con Diluyente.
cinco veces el tiempo de retención del pico de eri- Preparación estándar C - Pesar exactamente al-
tromicina A y medir las respuestas de todos los rededor de 5 mg de N-Desmetileritromicina
picos: a excepción de los picos correspondientes a A SR-FA, transferir a un matraz aforado de 25 ml y
Eritromicina A, Eritromicina B y Eritromicina C en disolver en la Preparación estándar B. Agregar
el cromatograma obtenido a partir de la Solución 1 ml de Preparación estándar A y completar a
muestra, la respuesta de ningún pico debe ser ma- volumen con la Preparación estándar B.
yor que la respuesta del pico principal obtenida con Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
la Solución estándar (3,0 %). La suma de los con- Cromatografiar la Preparación estándar C y regis-
tenidos de Estearato de Eritromicina B y Estearato trar las respuestas de los picos según se indica en
de Eritromicina C no debe ser mayor de 5,0 %. Procedimiento: el orden de elución debe ser: N-
desmetileritromicina A, eritromicina C, eritromicina
Determinación de agua <120> A y eritromicina B; la resolución R entre los picos
Titulación volumétrica directa - No más de de N-desmetileritromicina A y eritromicina C no
4,0 %, determinada sobre 300 mg de Estearato de debe ser menor de 0,8; la resolución R entre los
Eritromicina y empleando como solvente una solu- picos de N-desmetileritromicina A y eritromicina A
ción de imidazol en metanol anhidro de aproxima- no debe ser menor de 5,5. Cromatografiar la Pre-
damente 100 g por litro. paración estándar A y registrar las respuestas de los
Determinación del residuo de ignición <270> picos según se indica en Procedimiento: la desvia-
No más de 0,5 %. ción estándar relativa para la respuesta del pico de
eritromicina A no debe ser mayor de 2,0 %.
VALORACIÓN Procedimiento - Inyectar por separado en el
[NOTA: la Preparación muestra y las Prepara- cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
ciones estándar pueden ser usadas dentro de las 100 l) de las Preparaciones estándar A y B y la
24 horas de preparadas si se conservan a 5 ºC]. Preparación muestra, registrar los cromatogramas y
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo medir las respuestas de los picos principales.
para cromatografía de líquidos con un detector Calcular la cantidad en porcentaje de Eritromi-
ultravioleta ajustado a 215 nm y una columna de cina A a partir del cromatograma obtenido con la
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida Preparación estándar A y expresar el resultado
como Estearato de Eritromicina A multiplicando el
contenido en porcentaje de Eritromicina A por
1,387.
Calcular la cantidad en porcentaje de Eritromi-
cina B y Eritromicina C a partir del cromatograma
obtenido con la Preparación estándar B y expresar
el resultado como Estearato de Eritromicina B y
Estearato de Eritromicina C multiplicando los valo-
res de Eritromicina B y Eritromicina C, según co-
rresponda, por 1,387.
ERITROMICINA, Pureza cromatográfica
Fase estacionaria - Emplear una placa para
ESTOLATO DE cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
O grafía, de 0,25 mm de espesor.
H3C CH3 Fase móvil - Cloroformo, alcohol y una solu-
HO OH
ción de acetato de amonio al 15 % previamente
H3C OH CH3 ajustada a pH 7,0 (85:15:1).
H3C O CH3 Solución estándar - Disolver 8 mg de Eritromi-
O
N CH3
C12H25OSO3H
cina SR-FA en acetona y diluir a 100 ml con el
CH3
O
O O CH3 O
CH3
mismo solvente.
OCH3
CH3 Solución muestra - Disolver 40 mg de Estolato
O OH
CH3
O de Eritromicina en acetona y diluir a 10 ml con el
CH3
mismo solvente.
Revelador - Preparar una solución mezclando
0,5 ml de p-anisaldehído, 10 ml de ácido acético
C40H71NO14 . C12H26O4S PM: 1056,4 3521-62-8 glacial, 85 ml de metanol y 5 ml de ácido sulfúrico.
Definición - Estolato de Eritromicina es Dode- Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
cil sulfato de 2'-propanoato de eritromicina. Debe placa 10 µl de la Solución estándar y 10 µl de la
tener una potencia equivalente a no menos de Solución muestra. Dejar secar las aplicaciones y
600 µg de eritromicina (C37H67NO13) por mg, calcu- desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
lada sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con del solvente haya recorrido aproximadamente tres
las siguientes especificaciones. cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, dejar secar al aire. Pulverizar sobre la placa con
inodoro. Soluble en alcohol, acetona y cloroformo; Revelador. Calentar a 110 °C durante 5 minutos y
prácticamente insoluble en agua. dejar enfriar: a excepción de la mancha principal,
Sustancias de referencia - Estolato de Eritro- ninguna mancha en el cromatograma obtenido a
micina SR-FA. Eritromicina SR-FA. partir de la Solución muestra debe ser mayor en
intensidad a la mancha obtenida con la Solución
CONSERVACIÓN
estándar (2,0 %).
En envases inactínicos de cierre perfecto.
VALORACIÓN
ENSAYOS
Proceder con Estolato de Eritromicina según se
Identificación
indica para Eritromicina en 770. Valoración micro-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
biológica de antibióticos, empleando una cantidad
B - Disolver aproximadamente 10 mg de Esto-
exactamente pesada de Estolato de Eritromicina
lato de Eritromicina en 5 ml de ácido clorhídrico al
disuelta en metanol para obtener una solución que
25 % p/v. Dejar reposar entre 10 a 20 minutos: se
contenga el equivalente a 1,0 mg de eritromicina
debe desarrollar color amarillo.
por ml. De inmediato diluir cuantitativamente con
Cristalinidad 9 volúmenes de Solución reguladora N° 3 y dejar
Colocar partículas de Estolato de Eritromicina reposar a temperatura ambiente durante 18 horas.
en aceite mineral sobre un portaobjetos de vidrio. Diluir una porción de esta solución cuantitativa-
Examinar la mezcla empleando un microscopio mente con Solución reguladora N° 3 para obtener
óptico con luz polarizada: las partículas deben pre- una Solución muestra diluida.
sentar birrefringencia y posiciones de extinción
cuando se gira la platina del microscopio.
Determinación del pH <250>
Entre 4,5 y 7,0, determinado sobre una suspen-
sión acuosa de 10 mg por ml.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
4,0 %, empleando 20 ml de metanol con 10 % de
imidazol en lugar de emplear metanol en el reci-
piente de titulación.
Determinación del pH <250>
ERITROMICINA, Entre 6,0 y 8,5, determinado sobre una suspen-
ETILSUCCINATO DE sión acuosa al 1 %.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
3,0 %, empleando 20 ml de metanol con 10 % de
imidazol en lugar de metanol en el recipiente de
titulación.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 1,0 %, luego de someter a ignición a
550 ± 50 °C. Humedecer el residuo carbonizado
con 2 ml de ácido nítrico y 5 gotas de ácido sulfúri-
co
VALORACIÓN
C43H75NO16 PM: 862,1 1264-62-6 Proceder con Etilsuccinato de Eritromicina
Definición - Etilsuccinato de Eritromicina es según se indica para Eritromicina en 770. Valora-
2'-Etil butanodioato de eritromicina. Debe tener ción microbiológica de antibióticos.
una potencia equivalente a no menos de 765 µg de ROTULADO
eritromicina (C37H67NO13) por mg, calculada sobre
la sustancia anhidra y debe cumplir con las siguien- Indicar en el rótulo si el Etilsuccinato de Eri-
tes especificaciones. tromicina es amorfo o cristalino.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
o ligeramente amarillo, inodoro. Fácilmente solu-
ble en acetona, alcohol, cloroformo, metanol y
polietilenglicol; muy poco soluble en agua.
Sustancias de referencia - Eritromici-
na SR-FA. Etilsuccinato de Eritromicina
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En solución.
Solvente: cloroformo.
Concentración: 1 en 100.
Paso óptico de la celda: 1,0 mm.
B - A aproximadamente 5 mg de Etilsuccinato
de Eritromicina, agregar 5 ml de una solución de
xantidrol al 0,02 % en una mezcla de ácido acético
y ácido clorhídrico (99:1) y calentar en un baño de
agua: se debe desarrollar color rojo.
Cristalinidad
[NOTA: cuando en el rótulo se indique que Etil-
succinato de Eritromicina es amorfo, esta exento de
este requisito]. Colocar partículas de Etilsuccinato
de Eritromicina en aceite mineral sobre un portaob-
jetos de vidrio. Examinar la mezcla empleando un
microscopio óptico con luz polarizada: las partícu-
las presentan birrefringencia y posiciones de extin-
ción cuando se gira la platina del microscopio.
Solución muestra - Disolver 30 mg de Lacto-
ERITROMICINA, bionato de Eritromicina en metanol y diluir a 10 ml
LACTOBIONATO DE con el mismo solvente.
Solución estándar A - Disolver 20 mg de Eri-
HO H H OH
tromicina A SR-FA en metanol y diluir a 10 ml con
HO CO2H O el mismo solvente.
HO
H O H OH
H3C
H
CH3
H
Solución estándar B - Disolver 10 mg de ácido
HO O H3C H OH lactobiónico en agua y diluir a 10 ml con el mismo
HO HO CH3
OH
CH3
solvente.
O H
CH3 H
H O CH3 Revelador - Permanganato de potasio al 0,5 %
OH
O
OH O
O
O
en hidróxido de sodio 1 N.
H3C H
CH3 CH3 H CH3 Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
N
placa 5 l de la Solución muestra y 5 l de las So-
O CH3
CH3
luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-
nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
frente del solvente haya recorrido tres cuartas partes
C49H89NO25 PM: 1092 3847-29-8
de la longitud de la placa. Dejar secar al aire, pul-
Definición - Lactobionato de Eritromicina es verizar sobre la placa con Revelador y calentar a
una mezcla de Ácido-4-O--D-galactopiranosil-D- 110 ºC durante 5 minutos: el cromatograma obteni-
glucónico y Eritromicina (1:1). El componente do a partir de la Solución muestra debe presentar
principal es el 4-O--D-galactopiranosil-D-gluco- dos manchas, una con un valor de Rf similar a la
nato de (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-4- mancha principal obtenida con la Solución estándar
[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-O-metil--L-ribo-hexa- A y la otra con un valor de Rf similar a la mancha
piranosil)oxi]-14-etil-7,12,13-trihidroxi-3,5,7,9,11, principal obtenida con la Solución estándar B.
13-hexametil-6-[(3,4,6-tridesoxi-3-dimetilamino-- B - Pesar alrededor de 10 mg de Lactobionato
D-xilo-hexopiranosil)oxi]-oxaciclotetradecano-2, de Eritromicina y disolver en 5 ml de ácido clorhí-
10-ona (Lactobionato de Eritromicina A). Debe drico: se debe producir color verde-amarillento.
contener no menos de 93,0 por ciento y no más de Determinación del pH <250>
100,5 por ciento de la suma de Lactobionato de Entre 6,5 y 7,5; determinado sobre una solución
Eritromicina A, B y C, calculado sobre la sustancia preparada disolviendo 0,5 g de Lactobionato de
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi- Eritromicina en agua libre de dióxido de carbono y
caciones. diluida a 25 ml con el mismo solvente.
Caracteres generales - Polvo blanco o ligera- Determinación de agua <120>
mente amarillo. Higroscópico. Fácilmente soluble Titulación volumétrica directa. No más de 5 %,
en alcohol y metanol; soluble en agua; muy poco determinada sobre 200 mg de Lactobionato de Eri-
soluble en acetona y cloruro de metileno; práctica- tromicina, empleando como solvente una solución
mente insoluble en éter. de imidazol en metanol anhidro al 10 %.
Sustancias de referencia - Eritromici- Determinación del residuo de ignición <270>
na A SR-FA. Eritromicina B SR-FA. Eritromici- No más de 0,5 %.
na C SR-FA. N-Desmetileritromicina A SR-FA.
Sustancias relacionadas
CONSERVACIÓN Sistema cromatográfico, Fase móvil, Solución
En envases herméticos. reguladora de pH 7,0, Diluyente, Preparación
estándar A, Preparación estándar C y Aptitud del
ENSAYOS
sistema - Proceder según se indica en Valoración.
Identificación Solución muestra - Emplear la Preparación
A - Emplear la siguiente técnica cromatográfica. muestra preparada según se indica en Valoración.
Fase estacionaria - Emplear una capa para Solución estándar - Diluir 3,0 ml de la Prepa-
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- ración estándar A a 100 ml con Diluyente.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Procedimiento - Inyectar por separado en el
grafía, de 0,25 mm de espesor. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Fase móvil - Metanol, agua y ácido acético gla- 100 l) de la Solución estándar y la Solución mues-
cial (90:10:3). tra, registrar los cromatogramas durante al menos
cinco veces el tiempo de retención del pico de eri-
tromicina A y medir las respuestas de todos los
picos: a excepción de los picos correspondientes a Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Eritromicina A, Eritromicina B y Eritromicina C en dedor de 60 mg de Lactobionato de Eritromicina,
el cromatograma obtenido a partir de la Solución transferir a un matraz aforado de 10 ml y disolver y
muestra, la respuesta de ningún pico debe ser ma- completar a volumen con Diluyente.
yor que la respuesta del pico principal obtenida con Preparación estándar A - Pesar exactamente al-
la Solución estándar (3,0 %). La suma de los con- rededor de 40 mg de Eritromicina A SR-FA, trans-
tenidos de Lactobionato de Eritromicina B y Lacta- ferir a un matraz aforado de 10 ml y disolver y
bionato de Eritromicina C no debe ser mayor de completar a volumen con Diluyente.
5,0 %. Preparación estándar B - Pesar exactamente al-
rededor de 10 mg Eritromicina B SR-FA y 10 mg
Ácido lactobiónico libre
de Eritromicina C SR-FA, transferir a un matraz
Disolver 400 mg de Lactobionato de Eritromici-
aforado de 50 ml y disolver y completar a volumen
na en 50 ml de agua y titular con hidróxido de sodio
con Diluyente.
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
Preparación estándar C - Pesar exactamente al-
ciométricamente. Calcular el volumen de hidróxido
rededor de 5 mg de N-
de sodio 0,1 N consumido por gramo de Lactobio-
Desmetileritromicina SR-FA, transferir a un matraz
nato de Eritromicina (n1 ml). Disolver 500 mg de
aforado de 25 ml y disolver en la Preparación
Lactabionato de Eritromicina en 40 ml de ácido
acético glacial y titular con ácido perclórico estándar B. Agregar 1,0l de Preparación estándar
A y completar a volumen con la Preparación están-
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
dar B.
ciométricamente. Calcular el volumen consumido
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
de ácido perclórico 0,1 N por gramo de Lactobiona-
Cromatografiar la Preparación estándar C y regis-
to de Eritromicina (n2 ml). Calcular la cantidad en
trar las respuestas de los picos según se indica en
porcentaje de C12H22O12 en la porción de Lactobio-
Procedimiento: el orden de elución debe ser: N-
nato de Eritromicina en ensayo, por la fórmula
desmetileritromicina A, eritromicina C, eritromicina
siguiente:
A y eritromicina B; la resolución R entre los picos
3,580(n1n2) de N-desmetileritromicina A y eritromicina C no
No debe contener más de 1,0 % de C12H22O12 debe ser menor de 0,8; la resolución R entre los
calculado sobre la sustancia anhidra. picos de N-desmetileritromicina y eritromicina A no
debe ser menor de 5,5. Cromatogrfiar la Prepara-
Ensayos de esterilidad <370> ción estándar A y registrar las respuestas de los
Cuando el Lactobionato de Eritromicina esté picos según se indica en Procedimiento: la desvia-
destinado a la preparación de formas farmacéuticas ción estándar relativa para la respuesta del pico de
parenterales, debe cumplir con los requisitos. Eritromicina A no debe ser mayor de 2,0 %.
Ensayo de piretógenos <340> Procedimiento - Inyectar por separado en el
Cuando el Lactobionato de Eritromicina esté cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
destinado a la preparación de formas farmacéuticas 100 l) de las Preparaciones estándar A y B y la
parenterales, debe cumplir con los requisitos. In- Preparación muestra, registrar los cromatogramas y
yectar a cada conejo 1,0l de una solución de medir las respuestas de los picos principales.
aproximadamente 7,4 mg de Lactobionato de Ei- Calcular la cantidad en porcentaje de Eritromi-
tromicina por ml de Agua para Inyectables (equiva- cina A a partir del cromatograma obtenido con la
lente a 5 mg de Eritromicina), por kilogramo de Preparación estándar A y expresar el resultado
peso corporal. como Lactobionato de Eritromicina A multiplican-
do el contenido en porcentaje de Eritromicina A por
VALORACIÓN 1,4877.
[NOTA: la Preparación muestra y las Prepara- Calcular la cantidad en porcentaje de Eritromi-
ciones estándar pueden ser usadas dentro de las cina B y Eritromicina C a partir del cromatograma
24 horas de preparadas si se conservan a 5 ºC]. obtenido con la Preparación estándar B y expresar
Sistema cromatográfico y Fase móvil - Proce- el resultado como Lactobionato de Eritromicina B y
der según se indica para Estearato de Eritromicina Lactobionato de Eritromicina C multiplicando los
en Valoración. valores de Eritromicina B y Eritromicina C, según
Solución reguladora de pH 7,0 - Mezclar corresponda por 1,4877.
82,4 ml de fosfato dibásico de sodio al 7,15 % con
ROTULADO
17,6 ml de ácido cítrico al 2,1 %p/v.
Diluyente - Solución reguladora de pH 7,0 y Cuando el Lactobionato de Eritromicina esté
metanol (3:1). destinado a la preparación de formas farmacéuticas
parenterales, indicar en el rótulo que es estéril y
apiretógeno.
No más de 1,0 %, humedeciendo el residuo car-
ESPECTINOMICINA, bonizado con 2 ml de ácido nítrico y 5 gotas de
CLORHIDRATO DE ácido sulfúrico.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
OH Cuando en el rótulo se indique que el Clorhidra-
H H
NH O O CH3 to de Espectinomicina es estéril o debe ser emplea-
H3C
do para la preparación de formas farmacéuticas
. 2HCl . 5H2O
HO O inyectables, no debe contener más de 0,09 Unidades
H OH de Endotoxina por mg de Espectinomicina.
NH O
H3C Ensayos de esterilidad <370>
Cuando en el rótulo se indique que el Clorhidra-
C14H24N2O7 . 2HCl . 5H2O PM: 495,35 22189-32-8 to de Espectinomicina es estéril, debe cumplir con
Definición - Clorhidrato de Espectinomicina los requisitos según se indica en Método de filtra-
ción por membrana.
es Diclorhidrato de [2R-(2, 4a, 5a, 6, 7, 8,
9, 9a, 10a)]–decahidro–4a, 7,9-trihidroxi- VALORACIÓN
2-metil–6,8–bis–(metilamino)–4H–piranol [2,3b] Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
[1,4]benzodioxin-4-ona, pentahidrato. Debe conte- para cromatografía de gases con un detector de
ner una potencia equivalente a no menos de 603 µg ionización a la llama y una columna de vidrio de
de espectinomicina (C14H24N2O7) por mg y debe 60 cm 3 mm con una fase estacionaria constituida
cumplir con las siguientes especificaciones. por 5 % de una mezcla de 5 % de fenil polisiloxano
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco y 95 % de metil polisiloxano sobre un soporte de
a castaño claro. Fácilmente soluble en agua; prácti- tierra silícea para cromatografía de gases que ha
camente insoluble en alcohol, cloroformo y éter. sido calcinada mezclando diatomea con Na2CO3 y
calcinada a 900 °C con un tamaño de malla de 80 a
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Es-
100. [NOTA: la tierra silícea se lava con ácido,
pectinomicina SR-FA.
luego se lava con agua hasta neutralidad, pero no se
CONSERVACIÓN lava con bases. La tierra silícea debe ser silanizada
En envases de cierre perfecto. al tratarla con un agente como dimetildiclorosilano
para bloquear los grupos silanoles superficiales].
ENSAYOS Mantener la columna, el inyector y el detector
Identificación aproximadamente a 190, 215 y 220 °C, respectiva-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sóli- mente. Se debe emplear helio seco como gas trans-
da. [NOTA: no secar la sustancia]. portador con una velocidad de flujo de aproxima-
B - Disolver 250 mg de Clorhidrato de Especti- damente 45 ml por minuto.
nomicina en 25 ml de agua libre de dióxido de Solución del estándar interno - Disolver trifeni-
carbono. Debe responder a los ensayos para Cloru- lantimonio en dimetilformamida para obtener una
ro <410>. solución que contenga 2 mg por ml.
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
Determinación del pH <250> rededor de 30 mg de Clorhidrato de Espectinomici-
Entre 3,8 y 5,6, determinado sobre una solución na SR-FA, transferir a un matraz aforado de 25 ml,
de aproximadamente 10 mg por ml. agregar 10 ml de Solución del estándar interno y
Cristalinidad 1 ml de hexametildisilazano y agitar intermitente-
Colocar partículas de Clorhidrato de Espectino- mente durante 1 hora.
micina en aceite mineral sobre un portaobjetos de Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
vidrio. Examinar la mezcla empleando un micros- dedor de 30 mg de Clorhidrato de Espectinomicina,
copio óptico con luz polarizada: las partículas de- transferir a un matraz aforado de 25 ml, agregar
ben presentan birrefringencia y posiciones de extin- 10 ml de Solución del estándar interno y 1 ml de
ción cuando se gira la platina del microscopio. hexametildisilazano y agitar intermitentemente
durante 1 hora.
Determinación de agua <120>
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Titulación volumétrica directa. Entre 16,0 y
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
20,0 %.
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Determinación del residuo de ignición <270> cedimiento: la resolución R entre los picos principa-
les no debe ser menor de 2,0; la desviación estándar
relativa de las respuestas relativas al estándar inter-
no, de inyecciones repetidas de la Preparación
estándar no debe ser mayor de 3,5 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
1 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en µg de C14H24N2O7 en la porción de
Clorhidrato de Espectinomicina en ensayo.
ROTULADO
Cuando Clorhidrato de Espectinomicina esté
destinado para la preparación de formas farmacéuti-
cas inyectables, en el rótulo se debe indicar que es
estéril.
máximo a 232 nm y el coeficiente de extinción
ESPIRAMICINA específico E (1%,1cm) a esa longitud de onda debe
ser aproximadamente 340.
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica.
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Emplear la fase superior de una
mezcla de acetato de etilo, una solución de acetato
de amonio de aproximadamente 0,15 g por ml ajus-
tada a pH 9,6 con hidróxido de sodio y 2-propanol
(9:8:4).
Solución estándar A - Disolver 40 mg de Espi-
ramicina SR-FA en metanol y diluir a 10 ml con el
C43H74N2O14 PM: 843,0 8025-81-8 mismo solvente.
Solución estándar B - Disolver 40 mg de Eri-
Espiramicina R FM tromicina en metanol y diluir a 10 ml con el mismo
I -H C43H74N2O14 solvente.
Solución muestra - Disolver 40 mg de Espira-
II -CO-CH3 C45H76N2O15 micina en metanol y diluir a 10 ml con el mismo
III -CO-CH2-CH3 C46H78N2O15 solvente.
Revelador - A 10,0 ml de anisaldehído agregar
Definición - La Espiramicina es un antibiótico 90 ml de alcohol, mezclar, agregar10,0 ml de ácido
macrólido cuyo principal componente debe ser sulfúrico y mezclar nuevamente.
(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[3,6-didesoxi Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
-4-O-(2,6-didesoxi-3-C-metil--L-ribo-hexo- placa 5 l de las Soluciones estándar A y B y 5 µl
piranosil)-3-dimetilamino--D-glucopiranosiloxi]- de la Solución muestra. Dejar secar las aplicacio-
4-hidroxi-9,16-dimetil-5-metoxi-7-(2-oxoetil)- nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
10-[(2,3,4,6-tetradesoxi-4-dimetilamino-D-eritro- frente del solvente haya recorrido aproximadamente
hexopiranosil)oxi]oxaciclohexadeca-11,13-dien- tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
2-ona (Espiramicina I). Contiene también Espira- rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
micina II (4-O-acetilespiramicina I) y Espiramicina vente y dejar secar al aire. Pulverizar sobre la placa
III (4-O-propanoilespiramicina I). Debe tener una con Revelador y calentar a 110 ºC durante 5 minu-
potencia de no menos de 4.100 UI por mg, calcula- tos: la mancha principal en el cromatograma obte-
da sobre la sustancia seca y debe cumplir con las nido a partir de la Solución muestra debe ser similar
siguientes especificaciones. en valor de Rf, tamaño e intensidad a la obtenida
con la Solución estándar A. Si en el cromatograma
Caracteres generales - Polvo blanco o ligera-
obtenido a partir de la Solución muestra se observan
mente amarillento, ligeramente higroscópico.
una o dos manchas con valores de Rf ligeramente
Fácilmente soluble en acetona, alcohol y metanol;
superiores a los de la mancha principal, estas man-
moderadamente soluble en éter; poco soluble en
chas deben ser similares en posición e intensidad a
agua.
las manchas secundarias obtenidas con la Solución
Sustancia de referencia - Espiramici- estándar A y deben ser diferentes de las manchas
na SR-FA. obtenidas con la Solución estándar B.
CONSERVACIÓN Determinación del pH <250>
En envases herméticos. Entre 8,5 y 10,5; determinado sobre una solu-
ción preparada disolviendo 500 mg de Espiramicina
ENSAYOS en 5 ml de metanol y diluyendo a 100,0 ml con
Identificación agua libre de dióxido de carbono.
A - Absorción ultravioleta <470> Determinación de la rotación óptica <170>
Disolver 100 mg de Espiramicina en metanol y Rotación específica: Entre - 80° y - 85°, con
diluir a 100 ml con el mismo solvente. Diluir 1 ml respecto a la sustancia seca.
de esta solución a 100 ml con metanol. Examinar Solución muestra: 20 mg por ml, en ácido acéti-
esta solución entre 220 y 350 nm: debe presentar un co al 10 %.
Sustancias relacionadas (Impureza A: (4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E, 16R)-6-
[NOTA: Preparar todas las soluciones al mo- [[3,6-dideoxi-3-(dimetilamino)--D-gluco-
mento de su uso.] piranosil]oxi]-4-hidroxi-5-metoxi-9,16-dimetil-7-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo (2-oxometil)-10-[[2,3,4,6-tetradeoxi-4-(dimetilami-
para cromatografía de líquidos con un detector no)-D-eritro-hexapiranosil]oxi]oxaciclohexadeca-
ultravioleta ajustado a 232 nm y una columna de 11,13-dien-ona), que eluye en primer lugar y la
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida espiramicina I (que eluye entre los 13 y 17 minutos)
por octilsilano químicamente unido a partículas no debe ser menor a 6,3.
porosas de sílice de 5 m de diámetro, esféricas, Procedimiento - Inyectar por separado en el
con una superficie específica de 350 m2 por g y un cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
tamaño de poro de 10 nm. El caudal debe ser 20 µl) de la Solución estándar A y la Solución
aproximadamente 0,8 ml por minuto. muestra. Cromatografiar la Solución muestra du-
Solución de hidróxido de sodio - Preparar una rante al menos tres veces el tiempo de retención del
solución de hidróxido de sodio al 8,5 %. Transferir pico de Espiramicina I. Registrar los cromatogra-
4 ml de esta solución a un matraz aforado de mas y medir las respuestas de todos los picos: a
100 ml, completar a volumen con agua y mezclar. excepción de los picos correspondientes a espirami-
Solución reguladora de pH 2,2 - Transferir cina I, II y III en el cromatograma obtenido a partir
6,7 ml de ácido fosfórico al 87 % a un matraz afo- de la Solución muestra, la respuesta de ningún pico
rado de 1 litro, agregar 50 ml de Solución de debe ser mayor que la del pico principal obtenido
hidróxido de sodio y completar a volumen con con la Solución estándar A (2,0 %). Ignorar cual-
agua. quier pico con una respuesta menor a 0,05 veces la
Fase móvil - Solución reguladora de pH 2,2 respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
conteniendo 9,3 mg de perclorato de sodio por ml y ción estándar A.
acetonitrilo (70:30). Filtrar y desgasificar. Hacer Composición
los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en Sistema cromatográfico, Solución de hidróxido
100. Cromatografía). de sodio, Solución reguladora de pH 2,2, Fase
Diluyente - Agua y acetonitrilo (7:3). móvil, Diluyente, Solución madre del estándar y
Solución madre del estándar - Disolver 25 mg Solución muestra - Proceder según se indica para
de Espiramicina SR-FA en Diluyente y diluir a Sustancias relacionadas.
100 ml con Diluyente. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Solución estándar A - Transferir 2,0 ml de So- Cromatografiar la Solución madre del estándar y
lución madre del estándar a un matraz aforado de registrar las respuestas de los picos según se indica
100 ml, diluir y completar a volumen con Diluyen- Procedimiento: la desviación estándar relativa de
te. inyecciones repetidas para el pico de espiramicina I
Solución estándar B - Transferir 5,0 ml de So- no debe ser mayor de 1,0 %.
lución madre del estándar a un matraz aforado de Procedimiento - Inyectar por separado en el
100 ml, diluir y completar a volumen con Diluyen- cromatografo volúmenes iguales (aproximadamente
te. 20 µl) de la Solución madre del estándar y la Solu-
Solución estándar C - Disolver 5 mg de Espi- ción muestra. Cromatografiar la Solución muestra
ramicina SR-FA en 25 ml de Fase móvil y calentar durante al menos tres veces el tiempo de retención
a 60 ºC en un baño de agua durante 30 minutos. del pico de espiramicina I. Registrar los cromato-
Solución muestra - Disolver 25 mg de Espira- gramas y medir las respuestas de todos los picos.
micina en Diluyente, transferir a un matraz aforado Calcular la cantidad en porcentaje de Espiramicina
de 100 ml y completar a volumen con Diluyente. I, II y III: no debe contener menos de 80,0 % de
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - Espiramicina I; no debe contener más de 5,0 % de
Cromatografiar la Solución estándar A y registrar Espiramicina II y no más de 10,0 % de Espiramici-
las respuestas de los picos según se indica en Pro- na III. La suma del contenido de Espiramicina I, II
cedimiento: Cromatografiar la Solución estándar B y III no debe ser menor de 90,0 %, calculado sobre
y registrar las respuestas de los picos según se indi- la sustancia seca.
ca en Procedimiento: el ensayo solo es válido si en
el cromatograma obtenido se observa un pico signi- Límite de metales pesados <590>
ficativo con un tiempo de retención relativo a espi- Método VI. Preparar la Solución muestra a par-
ramicina I de aproximadamente 1,1. Cromatogra- tir de 1,0 g de Espiramicina y la Solución estándar
fiar la Solución estándar C y registrar las respuestas empleando 2 ml de Solución estándar de plo-
de los picos según se indica en Procedimiento: la mo (10 ppm). No más de 0,002 %.
resolución R entre los picos de neoespiramicina I
Pérdida por secado <680>
Secar 500 mg de Espiramicina sobre pentóxido
de fósforo a 80 °C durante 6 horas a una presión
que no exceda los 5 mm Hg: no debe perder más de
3,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
VALORACIÓN
Proceder según se indica en 770. Valoración
microbiológica de antibióticos.
Determinación de la rotación óptica <170>
ESPIRONOLACTONA Rotación específica: Entre -33° y -37°.
O
Solución muestra: 10 mg por ml, en cloroformo.
H3C
O Límite de mercaptanos
Agitar 2,0 g de Espironolactona con 30 ml de
CH3 H agua y filtrar. A 15 ml del filtrado, agregar 3 ml de
H H O
almidón (SR) y titular con iodo 0,010 N empleando
una microbureta. Realizar una determinación con
O S CH3 un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
H
780. Volumetría). No se deben consumir más de
0,10 ml de iodo 0,010 N.
C24H32O4S PM: 416,6 52-01-7
Pérdida por secado <680>
Definición - Espironolactona es -Lactona del Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
ácido (7 ,17 )-7-(acetiltio)-17-hidroxi-3- más de 0,5 % de su peso.
oxopregn-4-eno-21-carboxílico. Debe contener no
Impurezas comunes <510>
menos de 97,0 por ciento y no más de 103,0 por
Solución muestra y Solución estándar: emplear
ciento de C24H32O4S, calculado sobre la sustancia
cloroformo como solvente.
seca y debe cumplir con las siguientes especifica-
Fase móvil: Acetato de butilo.
ciones.
Revelador: 5.
Caracteres generales - Polvo cristalino casi
Impurezas orgánicas volátiles <520>
blanco. Estable al aire. Fácilmente soluble en
Método III.
benceno y cloroformo; soluble en acetato de etilo y
Solvente: dimetilsulfóxido.
alcohol; poco soluble en aceites fijos y metanol;
prácticamente insoluble en agua. VALORACIÓN
Presenta polimorfismo. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Sustancia de referencia - Espironolacto- para cromatografía de líquidos con un detector
na SR-FA. ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
CONSERVACIÓN
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
En envases bien cerrados. porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
ENSAYOS caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
to.
Identificación Fase móvil - Metanol y agua (60:40). Filtrar y
A - Absorción infrarroja <460>. En solución. desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Solvente: cloroformo. Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Concentración: 1 en 20. Diluyente - Acetonitrilo y agua (1:1).
B - Absorción ultravioleta <470> Preparación estándar - Disolver una cantidad
Solvente: metanol. exactamente pesada de Espironolactona SR-FA en
Concentración: 10 µg por ml. Diluyente y diluir cuantitativamente con la misma
Las absortividades a 238 nm, calculadas mezcla para obtener una solución de aproximada-
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de mente de 0,5 mg por ml.
3,0 %. Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
C - Agregar 100 mg de Espironolactona a una dedor de 50 mg de Espironolactona, transferir a un
mezcla de 10 ml de agua y 2 ml de hidróxido de matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con
sodio 1 N, calentar la mezcla a ebullición durante Diluyente y mezclar.
3 minutos, enfriar y agregar 1 ml de ácido acético Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
glacial y 1 ml de acetato de plomo (SR): se debe Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
formar un precipitado castaño o negro de sulfuro de las respuestas de los picos según se indica en Pro-
plomo. cedimiento: el factor de asimetría no debe ser mayor
Determinación del punto de fusión <260> de 2; y la desviación estándar relativa para inyec-
Entre 198 y 209 °C, con descomposición. Oca- ciones repetidas no debe ser mayor de 1,5 %.
sionalmente puede observarse una fusión preliminar Procedimiento - Inyectar por separado en el
aproximadamente a 135 °C, seguida de re- cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
solidificación. 20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C24H32O4S en la porción de Espirono-
lactona en ensayo.
Solvente: dimetilsulfóxido.
ESTEÁRICO, ÁCIDO
VALORACIÓN
57-11-4
Sistema cromatográfico - Emplear un cromató-
Definición - Ácido Esteárico es Ácido octadeca-
grafo de gases equipado con un detector de ionización
noico. Se elabora a partir de grasas y aceites obteni-
a la llama y una columna preferentemente de vidrio, de
dos de fuentes comestibles y es una mezcla de ácido
1,5 m 3 mm, con fase estacionaria constituida por
esteárico (C18H36O2) y ácido palmítico (C16H32O2).
poliéster de succinato de dietilenglicol al 15 % sobre
Ácido Esteárico no debe contener menos de 40,0 por
un soporte formado por tierra silícea para cromato-
ciento de C18H36O2 y la suma de los dos ácidos no
grafía de gases, mezcla de tierra de diatomeas y car-
debe ser menor de 90,0 por ciento y debe cumplir con
bonato de sodio, fundida y calcinada a una temperatu-
las siguientes especificaciones. [NOTA: Ácido Esteá-
rico cuyo rótulo declara que es exclusivamente para ra de 900 C. [NOTA: la tierra silícea se lava con
uso externo, no necesita prepararse a partir de fuentes ácido y luego con agua hasta neutralidad, pero no con
comestibles.] bases]. Mantener la columna a una temperatura de
165 C y el inyector y el detector a 210 C. Emplear
Caracteres generales - Sólido cristalino, algo bri- helio como gas transportador.
llante, blanco o ligeramente amarillento, o polvo blan- Preparación estándar - Transferir aproximada-
co o amarillento. Fácilmente soluble en cloroformo y mente 50 mg de Ácido Esteárico SR-FA y aproxima-
en éter; soluble en alcohol; prácticamente insoluble en damente 50 mg de ácido palmítico a un erlenmeyer
agua. adecuado para calentar a reflujo. Agregar 5,0 ml de
Sustancia de referencia - Ácido Esteárico una solución preparada disolviendo 14 g de trifluoruro
SR-FA. de boro en 100 ml de metanol, mezclar y calentar a
reflujo durante 15 minutos o hasta disolución. Enfriar,
CONSERVACIÓN transferir la mezcla mediante la ayuda de 10 ml de éter
En envases bien cerrados. de petróleo para cromatografía a una ampolla de de-
cantación de capacidad adecuada, agregar 10 ml de
ENSAYOS
agua y 10 ml de solución saturada de cloruro de sodio.
Determinación de la temperatura de solidifica- Agitar, dejar separar las fases y descartar la capa
ción <180> acuosa inferior. Filtrar la fase etérea a través de 6 g de
No debe ser menor de 54 C. sulfato de sodio anhidro, previamente lavado con éter
de petróleo para cromatografía y transferir a un matraz
Determinación del índice de iodo <480>
apropiado.
Proceder como se indica en Método I, excepto que
Preparación muestra - Pesar exactamente alrede-
deben emplearse 35 ml de cloroformo. No más de 4.
dor de 100 mg de Ácido Esteárico y proceder según
Determinación del residuo de ignición <270> se indica en Preparación estándar comenzando donde
No más de 4 mg, determinado sobre una porción dice ”...Agregar 5,0 ml de una solución prepara-
de 4 g (0,1 %). da...”.
Límite de metales pesados <590> Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Método II. No más de 10 ppm. Cromatografiar la Preparación estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
Ácidos minerales miento: la resolución R entre los picos de palmitato de
Agitar 5 g de Ácido Esteárico fundido con un vo- metilo y de estearato de metilo no debe ser menor de
lumen igual de agua caliente durante 2 minutos, enfriar 2,0 y el coeficiente de variación de cinco inyecciones
y filtrar: la solución obtenida no debe desarrollar colo- repetidas no debe ser mayor de 1,5 % para estearato
ración rojiza por el agregado de 1 gota de naranja de de metilo y palmitato de metilo.
metilo (SR). Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
Grasa neutra o parafina matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 2 l)
Transferir 30 ml de solución de carbonato de sodio de la Preparación estándar y de la Preparación mues-
anhidro (1 en 60) a un matraz, agregar 1 g de Ácido tra, registrar los cromatogramas y medir las respuestas
Esteárico, mezclar y calentar a ebullición: la solución de los picos de los ésteres de los ácidos grasos. Cal-
resultante, mientras esté caliente, no debe presentar cular la cantidad de C18H36O2 en la porción de Ácido
más que una ligera opalescencia. Esteárico en ensayo.
Impurezas orgánicas volátiles <520> ROTULADO
Método III. Indicar en el rótulo cuando Ácido Esteárico esté
destinado exclusivamente para uso externo.
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
ESTRADIOL porosas de sílice de 5 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 2,0 ml por minu-
H OH to.
CH3
Fase móvil - 2,2,4-Trimetilpentano, cloruro de
n-butilo y metanol (45:4:1). Filtrar y desgasificar.
H
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema
en 100. Cromatografía).
H H
Diluyente - Cloruro de n-butilo y metanol (5:1).
HO Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 70 mg de Estradiol, transferir a un matraz afora-
do de 10 ml, disolver en Diluyente, mezclar vigoro-
C18H24O2 PM: 272,4 50-28-2 samente, completar a volumen con el mismo sol-
Definición - Estradiol es (17)-Estra- vente y mezclar.
1,3,5(10)-trieno-3,17-diol. Debe contener no menos Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
de 97,0 por ciento y no más de 103,0 por ciento de Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
C18H24O2, calculado sobre la sustancia anhidra y respuestas de los picos según se indica en Procedi-
debe cumplir con las siguientes especificaciones. miento: la resolución R entre los picos de estradiol y
de cualquier impureza no debe ser menor de 1,0; la
Caracteres generales - Polvo cristalino o cris- eficiencia de la columna no debe ser menor de
tales pequeños blancos o casi blancos. Higroscópi- 800 platos teóricos; el factor de asimetría no debe
co. Soluble en alcohol, acetona, dioxano, clorofor- ser mayor de 1,5; la desviación estándar relativa
mo y soluciones de hidróxidos alcalinos; modera- para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
damente soluble en aceites vegetales; prácticamente 2,0 %.
insoluble en agua. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
Sustancia de referencia - Estradiol SR-FA. aproximadamente 10 µl de la Solución muestra,
registrar el cromatograma y medir las respuestas de
CONSERVACIÓN
todos los picos. Calcular el porcentaje de cada
En envases inactínicos de cierre perfecto. impureza en la porción de Estradiol en ensayo,
ENSAYOS relacionando la respuesta del pico de cada impureza
y la suma de las respuestas de todos los picos: no
Identificación debe contener más de 0,5 % de cualquier impureza
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. y no debe contener más de 1,0 % de impurezas
B - Absorción ultravioleta <470> totales.
Solvente: alcohol.
Concentración: 50 µg por ml. VALORACIÓN
Las absortividades a 280 nm, calculadas sobre la Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
sustancia anhidra, no deben diferir en más de 3,0 %. para cromatografía de líquidos con un detector
Determinación del punto de fusión <260> ultravioleta ajustado a 205 nm y una columna de
Método I. Entre 173 y 179 ºC. [NOTA: secar 30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
sobre sílica gel durante al menos 16 hs]. por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
Determinación de la rotación óptica <170> caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
Rotación específica: Entre + 76 º y + 83 º. to.
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano. Fase móvil - Acetonitrilo y agua (55:45). Fil-
Determinación de agua <120> trar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Titulación volumétrica directa. No más de Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
3,5 %. Preparación estándar - Disolver cantidades
exactamente pesadas de Estradiol SR-FA y estrona
Pureza cromatográfica en metanol para obtener una solución de aproxima-
[NOTA: preparar las soluciones en el momento damente 0,40 mg y 0,24 mg por ml, respectivamen-
de su uso]. te. Transferir 10 ml de esta solución a un matraz
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo aforado de 200 ml. Agregar 100 ml de metanol,
para cromatografía de líquidos con un detector completar a volumen con agua y mezclar para obte-
ultravioleta ajustado a 280 nm y una columna de ner una solución de aproximadamente 20 µg de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida Estradiol SR-FA por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Estradiol, transferir a un matraz
aforado de 250 ml, completar a volumen con meta-
nol y mezclar. Transferir 10,0 ml de esta solución a
un matraz aforado de 200 ml, agregar 100 ml de
metanol, completar a volumen con agua y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de estra-
diol y la estrona no debe ser menor de 2,0; la des-
viación estándar relativa para inyecciones repetidas
no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
25 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Los tiempos de
retención relativos deben ser aproximadamente 1,3
para la estrona y 1,0 para el estradiol. Calcular la
cantidad de C18H24O2 en la porción de Estradiol en
ensayo.
Enfriar en agua helada durante 3 minutos, luego
ESTREPTOMICINA, agregar 2,0 ml de ácido clorhídrico 1,2 N y mezclar.
SULFATO DE Agregar 5 ml de Reactivo de cloruro férrico y mez-
clar: se debe producir un color violeta.
NH
B - Debe responder a los ensayos para Sulfa-
NH H
to <410>.
N NH2
H2N
H
N Determinación del pH <250>
OH OH Entre 4,5 y 7,0, determinado sobre una solución
OH de aproximadamente 200 mg de Estreptomicina por
O
O ml.
3H2SO4
CHO
Pérdida por secado <680>
H3C
OH O
Secar 100 mg en un pesafiltro provisto de perfo-
H CH3 ración capilar al vacío a una presión que no exceda
O N
H
Impurezas orgánicas volátiles <520>
O N O
Método III.
Solvente: dimetilsulfóxido.
H3C
NH VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
O para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
25 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
C12H12N2O3 PM: 232,2 50-06-6 porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
Definición - Fenobarbital es 5-Etil-5-fenil- caudal debe ser aproximadamente 2,0 ml por minu-
2,4,6(1H,3H,5H)-pirimidinotriona. Debe contener to.
no menos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por Solución reguladora de pH 4,5 - Disolver 6,6 g
ciento de C12H12N2O3, calculado sobre la sustancia de acetato de sodio trihidratado y 3,0 ml de ácido
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- acético glacial en 1 litro de agua y ajustar, si fuera
ciones. necesario, a pH 4,5 ± 0,1 con ácido acético glacial.
Fase móvil - Solución reguladora de pH 4,5 y
Caracteres generales - Polvo cristalino o cris- metanol (3:2). Filtrar y desgasificar. Hacer los
tales pequeños, brillosos, blancos. Estable al aire. ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Su solución saturada tiene un pH de aproximada- Cromatografía).
mente 5. Soluble en alcohol, éter y en soluciones Solución del estándar interno - Disolver una
de hidróxidos alcalinos y carbonatos; moderada- cantidad de Cafeína en una mezcla de metanol y
mente soluble en cloroformo; muy poco soluble en Solución reguladora de pH 4,5 (1:1) para obtener
agua. una solución de aproximadamente 125 µg por ml.
Presenta polimorfismo. Preparación estándar - Pesar exactamente al-
Sustancia de referencia - Fenobarbital SR-FA. rededor de 20 mg de Fenobarbital SR-FA y disolver
en 15,0 ml de Solución del estándar interno. Soni-
CONSERVACIÓN car si fuera necesario.
En envases de cierre perfecto. Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 20 mg de Fenobarbital, transferir a un
ENSAYOS
erlenmeyer, agregar 15,0 ml de Solución del están-
Identificación dar interno, mezclar y sonicar durante 15 minutos.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sóli- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
da. [NOTA: si se observan diferencias, disolver Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
porciones de la muestra y de la Sustancia de Refe- la respuesta de los picos según se indica en Proce-
rencia en un solvente apropiado, evaporar las solu- dimiento: los tiempos de retención relativos deben
ciones hasta sequedad y repetir el ensayo con los ser aproximadamente 0,6 para cafeína y 1,0 para
residuos.] fenobarbital; la resolución R entre el pico de feno-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en barbital y cafeína no debe ser menor de 1,2; el fac-
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- tor de asimetría para el pico de fenobarbital y de
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- cafeína no debe ser mayor de 2,0; la desviación
paración muestra se debe corresponder con el obte- estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
nido con la Preparación estándar, ambos relativos ser mayor de 2,0 %.
al estándar interno. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Determinación del punto de fusión <260> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Entre 174 y 178 °C, con un intervalo de fusión 10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
no mayor de 2 °C. muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
Determinación del residuo de ignición <270> cantidad de C12H12N2O3 en la porción de Fenobarbi-
No más de 0,15 %. tal en ensayo.
Pérdida por secado <680>
desarrollar efervescencia con ácidos y responder a
FENOBARBITAL SÓDICO los ensayos para Sodio <410>.
C - Examinar los cromatogramas obtenidos en
H Valoración. El tiempo de retención del pico princi-
O N ONa
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre-
H3C
paración muestra se debe corresponder con el obte-
N
nido con la Preparación estándar, ambos relativos
al estándar interno.
O
Claridad de la solución
Mezclar 1,0 g de Fenobarbital Sódico con 10 ml
de agua libre de dióxido de carbono: luego de
C12H11N2NaO3 PM: 254,2 57-30-7 1 minuto, la solución debe ser transparente y excen-
Definición - Fenobarbital Sódico es la Sal mo- ta de sólidos no disueltos.
nosódica de 5-etil-5-fenil-2,4,6(1H,3H,5H)-pirimi- Determinación del pH <250>
dinotriona. Debe contener no menos de 98,5 por Entre 9,2 y 10,2; determinado sobre la solución
ciento y no más de 101,0 por ciento de preparada en el ensayo para Claridad de la solu-
C12H11N2NaO3, calculado sobre la sustancia seca y ción.
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Límite de metales pesados <590>
Caracteres generales - Polvo cristalino o cris- Disolver 2,0 g de Fenobarbital Sódico en 52 ml
tales de color blanco. Inodoro e higroscópico. Sus de agua. Agregar lentamente, con agitación, 8 ml
soluciones son alcalinas frente a la fenolftaleí- de ácido clorhídrico 1 N y filtrar. Descartar los
na (SR) y poco estables. Muy soluble en agua; primeros 5 ml del filtrado. Diluir 20 ml del filtrado
soluble en alcohol; prácticamente insoluble en clo- con agua a 25 ml: el límite es 0,003 %.
roformo y éter.
Pérdida por secado <680>
Presenta polimorfismo.
Secar a 150 °C durante 4 horas: no debe perder
Sustancia de referencia - Fenobarbital SR-FA. más de 7,0 % de su peso.
CONSERVACIÓN Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
En envases de cierre perfecto.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
ENSAYOS Cuando en el rótulo se indique que el Fenobar-
Identificación bital Sódico es estéril no debe contener más de
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 0,3 Unidades de Endotoxina por mg de Fenobarbital
Disolver aproximadamente 50 mg de Fenobarbital Sódico.
Sódico en 15 ml de agua, transferir a una ampolla
Ensayos de esterilidad <370>
de decantación, agregar 2 ml de ácido clorhídrico,
Cuando en el rótulo se indique que el Fenobar-
agitar y extraer el fenobarbital liberado con cuatro
bital Sódico es estéril, debe cumplir con los requisi-
porciones de 25 ml de cloroformo. Filtrar los ex-
tos.
tractos combinados a través de una torunda de al-
godón u otro filtro apropiado a un vaso de precipi- VALORACIÓN
tados y lavar la ampolla de decantación y el filtro Sistema cromatográfico, Solución reguladora de
con varias porciones pequeñas de cloroformo. pH 4,5, Fase móvil, Solución del estándar interno,
Evaporar una porción de 50 ml de la solución clo- Preparación estándar y Aptitud del sistema - Pro-
rofórmica de fenobarbital en un baño de vapor con ceder según se indica en Valoración en Fenobarbi-
la ayuda de una corriente de aire. Agregar 10 ml de tal.
éter, evaporar nuevamente y secar el residuo a Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
105 °C durante 2 horas: el espectro de absorción dedor de 22 mg de Fenobarbital Sódico, transferir a
infrarroja de una dispersión en bromuro de potasio un erlenmeyer, agregar 15,0 ml de Solución del
del residuo así obtenido debe presentar máximos estándar interno, mezclar y sonicar durante
sólo a las mismas longitudes de onda que el de una 15 minutos.
preparación similar de Fenobarbital SR-FA. Procedimiento - Inyectar por separado en el
B - Someter a ignición aproximadamente cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
200 mg de Fenobarbital Sódico: el residuo debe 10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C12H11N2NaO3 en la porción de Feno-
barbital Sódico en ensayo.
ROTULADO
Cuando el Fenobarbital Sódico esté destinado a
la preparación de formas farmacéuticas inyectables,
indicar en el rótulo que es estéril.
FENOL Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
OH
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 2 g de Fenol,
transferir a un matraz aforado de 1 litro, completar a
volumen con agua y mezclar. Transferir 20 ml de esta
C6H6O PM: 94,1 108-95-2 solución a un matraz para iodo, agregar 30 ml de
Definición - Fenol debe contener no menos de bromo 0,1 N (SV), agregar 5 ml de ácido clorhídrico y
99,0 por ciento y no más de 100,5 por ciento de tapar inmediatamente. Agitar el matraz durante
C6H6O, calculado sobre la sustancia anhidra y debe 30 minutos, dejar reposar durante 15 minutos, agregar
cumplir con las siguientes especificaciones. Puede rápidamente 5 ml de solución de ioduro de potasio
contener un estabilizante apropiado. 1 en 5, evitando que escapen vapores de bromo y
tapar inmediatamente. Agitar vigorosamente, retirar y
Caracteres generales - Cristales aciculares, inco- enjuagar el tapón y el cuello del matraz con una canti-
loros o de color rosa pálido, sueltos o agrupados en dad pequeña de agua y recolectar el lavado dentro del
masas cristalinas. Se licua por calentamiento o por el matraz. Agregar 1 ml de cloroformo, agitar y titular el
agregado de un 10 % de agua. Punto de ebullición iodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N (SV),
aproximadamente a 182 C con vapores inflamables. agregando 3 ml de almidón (SR) cerca del punto final.
Se oscurece gradualmente por exposición al aire y a la Realizar una determinación con un blanco y hacer las
luz. Muy soluble en aceites fijos y volátiles, alcohol, correcciones necesarias (ver Titulaciones residuales
cloroformo, éter y glicerina; soluble en agua; modera- en 780. Volumetría). Cada ml de bromo 0,1 N equi-
damente soluble en vaselina. vale a 1,57 mg de C6H6O.
CONSERVACIÓN ROTULADO
En envases inactínicos de cierre perfecto. Indicar en el rótulo el nombre y cantidad de cual-
ENSAYOS quier sustancia agregada como estabilizante.
Precaución - Evitar el contacto con la piel, ya
que puede producir quemaduras graves.
Identificación
A - A una solución de Fenol agregar unas gotas
de bromo (SR): se debe formar un precipitado blanco,
que se disuelve al principio, pero se torna permanente
a medida que se agrega más reactivo.
B - A 10 ml de una solución de Fenol al 1 %
agregar 1 gota de cloruro férrico (SR): se debe produ-
cir color violeta.
Transparencia y reacción de la solución
Una solución de Fenol 1 en 15 debe ser transpa-
rente, y neutra o ácida frente al papel tornasol.
Determinación de la temperatura de solidifica-
ción <180>
No debe ser menor de 39,5 C.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de 0,5 %.
Residuo no volátil
Pesar exactamente alrededor de 5 g de Fenol, y ca-
lentar en una cápsula de porcelana, previamente pesa-
da, en un baño de vapor hasta evaporación y secar a
105 ºC durante 1 hora: el residuo no debe ser mayor
de 0,05 %.
Examinar la mezcla empleando un microscopio con
FENOXIMETILPENICILINA luz polarizada: las partículas deben presentar birre-
fringencia y posiciones de extinción cuando se gira
O la platina del microscopio.
OH H
O O Límite de ácido fenoxiacético
N CH3 Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
O para cromatografía de líquidos con un detector
N CH3
H
S ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
H H 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
C16H18N2O5S PM: 350,4 87-08-1 debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Sinonimia - Penicilina V. Diluyente - Solución reguladora de fosfato
pH 6,6 (ver Soluciones reguladoras en Soluciones).
Definición - Fenoximetilpenicilina es el Ácido Fase móvil - Agua, acetonitrilo y ácido acético
[2S-(2,5,6)] -3,3-dimetil-7-oxo-6- glacial (65:35:1). Filtrar y desgasificar. Hacer los
[(fenoxiacetil)amino]-4-tia-1-azabiciclo [3.2.0] ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
heptano-2-carboxílico. Debe contener una potencia Cromatografía).
de no menos de 1.525 y no más de 1.780 Unidades Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
de Fenoximetilpenicilina por mg y debe cumplir tamente pesada de ácido fenoxiacético en Diluyente
con las siguientes especificaciones. para obtener una solución de aproximadamente
0,1 mg por ml.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco,
inodoro. Fácilmente soluble en alcohol y acetona; Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
tamente pesada de Fenoximetilpenicilina en Dilu-
muy poco soluble en agua; insoluble en aceites
fijos. yente para obtener una solución de aproximadamen-
te 20,0 mg por ml. [NOTA: preparar esta solución
Sustancia de referencia - Fenoximetilpenicili- en el momento de su uso.]
na Potásica SR-FA. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
CONSERVACIÓN respuestas de los picos según se indica en Procedi-
En envases de cierre perfecto. miento: el factor de asimetría no debe ser mayor de
1,5; la desviación estándar relativa para inyecciones
ENSAYOS repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Identificación cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
[NOTA: no se debe secar las muestras.] tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
B - Transferir 2 mg de Fenoximetilpenicilina a puestas de los picos de ácido fenoxiacético. Calcu-
un tubo de ensayo. Humedecer con 0,05 ml de lar el porcentaje de ácido fenoxiacético en la por-
agua, agregar 2 ml de ácido sulfúrico- ción de Fenoximetilpenicilina en ensayo, a partir de
formaldehído (SR) y mezclar con agitación: la solu- las respuestas de los picos de ácido fenoxiacético
ción debe presentar un color pardo rojizo. Transfe- obtenidos con la Solución muestra y la Solución
rir el tubo de ensayo a un baño de agua durante 1 estándar. No debe contener más de 0,5 %.
minuto: se debe desarrollar un color pardo rojizo
oscuro. Límite de p-hidroxifenoximetilpenicilina
Empleando el cromatograma de la Preparación
Determinación del pH <250> muestra obtenido en Valoración, calcular el porcen-
Entre 2,5 y 4,0, determinado sobre una suspen- taje de p-hidroxifenoximetilpenicilina en la porción
sión que contenga 30 mg por ml. de Fenoximetilpenicilina en ensayo, en relación a la
Determinación de agua <120> suma de las respuestas de los picos de
Titulación volumétrica directa. No más de p-hidroxifenoximetilpenicilina y fenoximetilpenici-
2,0 %. lina. No debe contener más de 5,0 %.
Cristalinidad VALORACIÓN
Colocar partículas de Fenoximetilpenicilina en Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
aceite mineral, sobre un portaobjetos de vidrio. para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm 4 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
to.
Fase móvil - Agua, acetonitrilo y ácido acético
glacial (650:350:5,75). Filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
ma en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Fenoximetilpenicilina Potá-
sica SR-FA en Fase móvil para obtener una solu-
ción de aproximadamente 2,5 mg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 125 mg de Fenoximetilpenicilina, transfe-
rir a un matraz aforado de 50 ml, completar a volu-
men con Fase móvil y mezclar.
Solución de resolución - Preparar una solución
en Fase móvil de aproximadamente 2,5 mg de ben-
cilpenicilina potásica y 2,5 mg de Fenoximetilpeni-
cilina Potásica por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 0,8 para bencilpenicilina
y 1,0 para fenoximetilpenicilina; la eficiencia de la
columna determinada a partir del pico de fenoxime-
tilpenicilina no debe ser menor de 1.800 platos
teóricos; la resolución R entre los picos de bencil-
penicilina y fenoximetilpenicilina no debe ser me-
nor de 3,0. Cromatografiar la Preparación están-
dar y registrar las respuestas de los picos según se
indica en Procedimiento: la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos de fenoximetilpenicilina y
p-hidroxifenoximetilpenicilina con un tiempo de
retención de aproximadamente 0,4, relativo al pico
principal de fenoximetilpenicilina. Calcular la
cantidad de Unidades de Fenoximetilpenicilina por
mg en la porción de Fenoximetilpenicilina en ensa-
yo.
ROTULADO
Señalar en el rótulo cuando se indique su uso so-
lamente para administración no parenteral.
FENOXIMETILPENICILINA Límite de ácido fenoxiacético
Sistema cromatográfico, Fase móvil, Diluyente,
POTÁSICA Solución estándar y Aptitud del sistema - Proceder
según se indica en el ensayo para Límite de Ácido
O fenoxiacético en Fenoximetilpenicilina.
Solución muestra - Disolver cuantitativamente
KO H
O en Diluyente una cantidad exactamente pesada de
O
N CH3 Fenoximetilpenicilina Potásica para obtener una
O solución de aproximadamente 20,0 mg por ml.
N CH3
S [NOTA: preparar esta solución en el momento de su
H
H H uso.]
Procedimiento - Proceder según se indica en Pro-
cedimiento para el ensayo de Límite de Ácido fe-
C16H17KN2O5S PM: 388,5 132-98-9 noxiacético en Fenoximetilpenicilina. Calcular el
porcentaje de ácido fenoxiacético en la porción de
Sinonimia - Penicilina V Potásica. Fenoximetilpenicilina Potásica en ensayo, a partir
Definición - Fenoximetilpenicilina Potásica es de las respuestas de los picos de ácido fenoxiacético
la Sal monopotásica del ácido [2S-(2 ,5 ,6 )]- obtenidos con la Solución muestra y la Solución
3,3-dimetil-7-oxo-6-[(fenoxiacetil)amino]-4-tia- estándar, respectivamente. No debe contener más
1-azabiciclo [3.2.0] heptano-2-carboxílico. Debe de 0,5 %.
contener una potencia de no menos de 1.380 y no Límite de p-hidroxifenoximetilpenicilina
más de 1.610 Unidades de Fenoximetilpenicilina Calcular empleando el cromatograma de la Prepa-
por mg y debe cumplir con las siguientes especifi- ración muestra obtenido en Valoración el porcenta-
caciones. je de p-hidroxifenoximetilpenicilina en la porción
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, de Fenoximetilpenicilina Potásica en ensayo, en
inodoro. Muy soluble en agua; poco soluble en relación a la suma de las respuestas de los picos de
alcohol; insoluble en acetona. p-hidroxife-noximetilpenicilina y fenoximetilpeni-
cilina. No debe contener más de 5,0 %.
Sustancia de referencia - Fenoximetilpenicili-
na Potásica SR-FA. Pérdida por secado <680>
Secar aproximadamente 100 mg de Fenoxime-
CONSERVACIÓN tilpenicilina Potásica en un pesafiltro provisto de
una tapa con perforación capilar al vacío a 60 °C
En envases de cierre perfecto durante 3 horas: no debe perder más de 1,5 % de su
peso.
ENSAYOS
Identificación VALORACIÓN
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Sistema cromatográfico, Fase móvil, Prepara-
B - Debe responder al ensayo a la llama para ción estándar, Solución de resolución y Aptitud del
Potasio <410>. sistema - Proceder según se indica en Valoración
Determinación de la rotación óptica <170> para Fenoximetilpenicilina.
Rotación específica: Entre +220° y +235°. Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Solución muestra: 10 mg por ml, en agua libre dedor de 125 mg de Fenoximetilpenicilina Potásica,
de dióxido de carbono. transferir a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con Fase móvil y mezclar.
Determinación del pH <250>
Procedimiento - Proceder según se indica en
Entre 4,0 y 7,5, determinado sobre una solución
Procedimiento para la Valoración en Fenoximetil-
que contenga 30 mg por ml.
penicilina. Calcular la cantidad de Unidades de
Cristalinidad Fenoximetilpenicilina por mg en la porción de Fe-
Colocar partículas de Fenoximetilpenicilina noximetilpenicilina Potásica en ensayo.
Potásica en aceite mineral, sobre un portaobjetos.
Examinar la mezcla empleando un microscopio ROTULADO
óptico con luz polarizada: las partículas deben pre- Indicar en el rótulo cuando esté destinada sólo
sentar birrefringencia y posiciones de extinción para uso no parenteral.
cuando se gira la platina del microscopio.
Equilibrar la columna durante al menos
FENTANILO 30 minutos con acetonitrilo y luego con la composi-
ción inicial durante al menos 5 minutos.
Solución A - Disolver carbonato de amonio en
O N
una mezcla de agua y tetrahidrofurano (90:10) para
H3C
N obtener una solución al 0,5 %. Filtrar y desgasifi-
car.
Solución B - Acetonitrilo. Filtrar y desgasificar.
Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
lución A y Solución B según se indica en Sistema
C22H28N2O PM: 336,5 437-38-7 cromatográfico. Hacer los ajustes necesarios (ver
Definición - Fentanilo es N-Fenil-N-[1-(2- Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
feniletil)-4-piperidinil]propanamida. Debe contener Solución muestra - Disolver 100 mg de Fentani-
no menos de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por lo en metanol y diluir a 10 ml con el mismo solven-
ciento de C22H28N2O, calculado sobre la sustancia te.
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- Solución estándar A - Preparar el producto de
ciones. degradación in situ (N-fenil-1-(2-feniletil)piperidin-
4-amino) de la siguiente manera. Transferir 10 mg
Caracteres generales - Polvo blanco o casi de Fentanilo a un balón y disolver en 10 ml de ácido
blanco. Fácilmente soluble en alcohol y metanol; clorhídrico al 7,3 %. Conectar a un refrigerante y
prácticamente insoluble en agua. calentar en un baño de agua durante 4 horas y neu-
Presenta polimorfismo. tralizar con 10 ml de hidróxido de sodio al 8,5 %.
CONSERVACIÓN Evaporar a sequedad en un baño de agua, enfriar,
redisolver el residuo con 10 ml de metanol y filtrar.
En envases inactínicos bien cerrados. Solución estándar B - Diluir 1 ml de la Solución
ENSAYOS muestra a 100 ml con metanol. Diluir 5 ml de esta
Identificación solución a 20 ml con metanol.
Absorción infrarroja <460>. Proceder según en Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Identificación por medio de espectros de referencia. Cromatografiar la Solución estándar A y registrar
[NOTA: si el espectro obtenido presenta diferen- las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cias, disolver la muestra en una cantidad mínima de cedimiento: los tiempos de retención deben ser
alcohol absoluto, evaporar hasta sequedad a tempe- aproximadamente 10 minutos para fentanilo y
ratura ambiente bajo una corriente de aire y regis- 12 minutos para N-fenil-1-2-feniletil)piperidin-4-
trar nuevamente el espectro]. amino; la resolución entre los picos de fentanilo y
N-fenil-1-(2-feniletil)piperidin-4-amino no debe ser
Sustancias relacionadas
menor de 8.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Procedimiento - Inyectar por separado en el
para cromatografía de líquidos con un detector
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
ultravioleta ajustado a 220 nm y una columna de
10 l) de la Solución estándar B, la Solución mues-
10 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
tra y metanol, que será empleado como blanco.
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Registrar los cromatogramas y medir las respuestas
porosas de sílice de 3 m de diámetro. El caudal de todos los picos: a excepción del pico principal en
debe ser aproximadamente 1,5 ml por minuto. el cromatograma obtenido a partir de la Solución
Programar el cromatógrafo del siguiente modo: muestra, la respuesta de ningún pico debe ser mayor
Tiempo Solución A Solución B a la respuesta del pico principal obtenido con la
(minutos) Etapa Solución estándar B (0,25 %); la suma de las res-
(%) (%)
puestas de todos los picos, a excepción del pico
Gradiente
0-15 90 40 10 60 principal, no debe ser mayor de dos veces la res-
lineal
puesta del pico principal obtenido con la Solución
15-20 40 60 Isocrático
estándar B (0,5 %). Ignorar cualquier pico obteni-
Retorno a la
do con el blanco y cualquier pico con una respuesta
composición
20-25 90 10 menor de 0,2 veces la respuesta del pico principal
inicial del
obtenido con la Solución estándar B.
eluyente
Restablecer Pérdida por secado <680>
25 90 10
el gradiente
Secar al vacío a 50 °C: no debe perder más de
0,5 % de su peso.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Fen-
tanilo, disolver en 50 ml de una mezcla de metil etil
cetona y ácido acético glacial (7:1) y titular con
ácido perclórico 0,1 N (SV), empleando 0,2 ml de
p-naftolbenceína (SR) como indicador. Realizar
una determinación con un blanco y hacer las co-
rrecciones necesarias (ver 780. Volumetría). Cada
ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a 33,65 mg
de C22H28N2O.
tanilo. A excepción del pico principal en el croma-
FENTANILO, CITRATO DE tograma obtenido a partir de la Solución muestra, la
respuesta de ningún pico debe ser mayor a la res-
puesta del pico principal obtenido con la Solución
CO2H
O N estándar B (0,25 %); la suma de las respuestas de
CO2H todos los picos, a excepción del pico principal, no
H3C
N , OH debe ser mayor de dos veces la respuesta del pico
CO2H principal obtenido con la Solución estándar B
(0,5 %). Ignorar cualquier pico obtenido con el
blanco, cualquier pico con un tiempo de retención
relativo menor a 0,05 y cualquier pico con una
C28H36N2O8 PM: 528,6 990-73-8 respuesta menor de 0,2 veces la respuesta del pico
Definición - Citrato de Fentanilo es Citrato de N- principal obtenido con la Solución estándar B.
Fenil-N-[1-(2-feniletil)-4-piperidinil]propanamida. Pérdida por secado <680>
Debe contener no menos de 99,0 por ciento y no Secar al vacío a 60 °C: no debe perder más de
más de 101,0 por ciento de C28H36N2O8, calculado 0,5 % de su peso.
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si-
guientes especificaciones. VALORACIÓN
Caracteres generales - Polvo blanco o casi Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Ci-
blanco. Fácilmente soluble en metanol; soluble en trato de Fentanilo, disolver en 50 ml de una mezcla
agua; moderadamente soluble en alcohol. Funde de metil etil cetona y ácido acético glacial (7:1) y
aproximadamente a 152 °C, con descomposición. titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), empleando
0,2 ml de p-naftolbenceína (SR) como indicador.
Sustancia de referencia - Citrato de Fentanilo Realizar una determinación con un blanco y hacer
SR-FA las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
CONSERVACIÓN Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
52,86 mg de C28H36N2O8.
En envases inactínicos bien cerrados.
Precaución - Manipular Citrato de Fentanilo
con sumo cuidado, evitando su inhalación y el con-
tacto con la piel.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: ácido clorhídrico diluido en me-
tanol (1 en 10).
Concentración: 500 g por ml.
Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico, Solución A, Solución B,
Fase móvil y Aptitud del sistema - Proceder según
se indica en Sustancias relacionadas en Fentanilo.
Solución muestra - Proceder según se indica en
Solución muestra en Sustancias relacionadas en
Fentanilo, empleando 100 mg de Citrato de Fenta-
nilo.
Solución estándar A - Proceder según se indica
en Solución estándar A en Sustancias relacionadas
en Fentanilo, empleando 10 mg de Citrato de Fen-
tanilo.
Solución estándar B - Proceder según se indica
en Solución estándar B en Sustancias relacionadas
en Fentanilo.
Procedimiento - Proceder según se indica en
Procedimiento en Sustancias relacionadas en Fen-
y dejar reposar durante 16 horas (si se forman cris-
FERROSO, FUMARATO tales de fumarato ferroso, calentar la solución en el
baño de vapor hasta disolución). Filtrar la solución
-
CO2- Fe
2+
empleando papel de filtro libre de cenizas, lavar el
O2C
residuo con agua caliente hasta que, con la adición
de sulfuro de amonio (SR), no se forme más preci-
C4H2FeO4 PM: 169,9 141-01-5
pitado negro en el filtrado y transferir el papel que
Definición - Fumarato Ferroso es contenga el residuo a un crisol previamente pesado.
2-Butenodioato ferroso. Debe contener no menos Carbonizar el papel, sin quemarlo, y someter a
de 97,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de ignición el crisol con su contenido a una temperatu-
C4H2FeO4, calculado sobre la sustancia seca y debe ra de 600 °C hasta peso constante: cada mg de resi-
cumplir con las siguientes especificaciones. duo equivale a 0,412 mg de sulfato: no debe conte-
Caracteres generales - Polvo anaranjado rojizo ner más de 0,2 %.
a rojo pardo, inodoro. Puede contener masas blan- Límite de arsénico <540>
das que producen una superficie amarilla cuando se Método I. Transferir 2,0 g de Fumarato Ferroso
muele. Poco soluble en agua; muy poco soluble en a un vaso de precipitados, agregar 10 ml de agua y
alcohol. Se separa ácido fumárico frente al agrega- 10 ml de ácido sulfúrico y calentar hasta precipitar
do de ácido clorhídrico diluido. completamente el ácido fumárico. Dejar enfriar,
Sustancia de referencia - Ácido Fumári- agregar 30 ml de agua, filtrar y transferir el filtrado
co SR-FA. a un matraz aforado de 100 ml. Lavar el precipita-
do con agua, agregando los lavados al filtrado,
CONSERVACIÓN completar a volumen con agua y mezclar. Transfe-
En envases bien cerrados. rir 50,0 ml de esta solución al matraz generador de
arsina y diluir con agua a 55 ml: proceder según se
ENSAYOS indica en Procedimiento, excepto que se debe omi-
Identificación tir el agregado de los 20 ml de ácido sulfúrico 7 N:
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. no debe contener más de 3 ppm.
A 1,5 g de Fumarato Ferroso agregar 25 ml de ácido Límite de ión férrico
clorhídrico diluido 1 en 2, diluir con agua a 50 ml, Pesar exactamente alrededor de 2,0 g de Fuma-
calentar hasta disolución completa y enfriar. Filtrar rato Ferroso, transferir a un erlenmeyer de 250 ml
en un crisol de vidrio sinterizado de porosidad fina, con tapón de vidrio, agregar 25 ml de agua y 4 ml
lavar el precipitado con ácido clorhídrico diluido de ácido clorhídrico y calentar en una placa calefac-
3 en 100, reservando el filtrado para el ensayo de tora hasta disolución completa. Tapar y dejar en-
Identificación B, y secar el precipitado a 105 °C: la friar a temperatura ambiente. Agregar 3 g de ioduro
absorción infrarroja de una dispersión en bromuro de potasio, tapar nuevamente y agitar por rotación
de potasio del precipitado seco obtenido, debe pre- para mezclar. Dejar reposar en la oscuridad durante
sentar máximos sólo a las mismas longitudes de 5 minutos. Agregar 75 ml de agua y titular con
onda que el de una preparación similar de Ácido tiosulfato de sodio 0,1 N (SV), agregando 3 ml de
Fumárico SR-FA. almidón (SR) cerca del punto final. No se debe
B - Una porción del filtrado obtenido en el en- consumir más de 7,16 ml de tiosulfato de sodio
sayo de Identificación A debe responder al ensayo 0,1 N (2,0 %).
para Hierro <410>.
Límite de plomo
Pérdida por secado <680> [NOTA: para la preparación de todas las solu-
Secar a 105 °C durante 16 horas: no debe perder ciones acuosas y para enjuagar los materiales de
más de 1,5 % de su peso. vidrio antes de usar, emplear agua previamente
Sulfato pasada a través de una resina de intercambio iónico
Transferir 1,0 g de Fumarato Ferroso a un vaso de lecho mixto. Seleccionar todos los reactivos de
de precipitados de 250 ml, agregar 100 ml de agua y manera de tener un contenido de plomo lo más bajo
calentar en un baño de vapor, agregando ácido posible y almacenar todas las soluciones de reacti-
clorhídrico gota a gota hasta disolución completa vos en envases de vidrio al borosilicato. Lavar el
(se requerirán aproximadamente 2 ml de ácido). material de vidrio antes de usar sumergiéndolo en
Filtrar la solución si fuera necesario y diluir el fil- ácido nítrico 8 N caliente durante 30 minutos y
trado con agua a 100 ml. Calentar el filtrado a luego enjuagar con agua deionizada].
ebullición, agregar 10 ml de cloruro de bario (SR), Solución de ácido ascórbico-ioduro de sodio -
calentar en un baño de vapor durante 2 horas, tapar Transferir 20 g de ácido ascórbico y 38,5 g de iodu-
ro de sodio a un matraz aforado de 200 ml, disolver una llama de aire-acetileno, empleando
con agua, completar a volumen con el mismo sol- 4-metil-2-pentanona para llevar a cero la lectura del
vente y mezclar. instrumento. La absorbancia de la Solución blanco
Solución de óxido de trioctilfosfina - [Precau- no debe ser mayor a 20 % de la diferencia entre la
ción - Esta solución es irritante. Evitar el contacto absorbancia de la Solución estándar y la absorban-
con los ojos, la piel y la ropa. Tomar precauciones cia de la Solución blanco; la absorbancia de la Solu-
especiales para eliminar las soluciones a las que se ción muestra no debe ser mayor a la absorbancia de
agrega este reactivo]. Transferir 5,0 g de óxido de la Solución estándar (0,001 %).
trioctilfosfina a un matraz aforado de 100 ml, disol-
Límite de mercurio
ver con 4-metil-2-pentanona, completar a volumen Solución muestra - Disolver 2,0 g de Fumarato
con el mismo solvente y mezclar. Ferroso en una mezcla de 10 ml de ácido clorhídri-
Solución estándar - Transferir 5,0 ml de la So- co libre de plomo y 80 ml de agua, calentando si
lución madre de nitrato de plomo (ver 590. Límite fuera necesario para favorecer la disolución. Dejar
de metales pesados) a un matraz aforado de 100 ml,
enfriar, filtrar, si fuera necesario, y diluir hasta
completar a volumen con agua y mezclar. Transfe- 100 ml con agua.
rir 2,0 ml de esta solución a un vaso de precipitados Solución estándar de mercurio (10 ppm) - Di-
de 50 ml, agregar 6 ml de ácido nítrico y 10 ml de solver una cantidad de cloruro mercurioso que co-
ácido perclórico y evaporar bajo campana hasta
rresponda a a 0,338 g de HgCl2, en agua y comple-
sequedad. [Precaución - Agregar el ácido perclóri- tar a 250,0 ml con el mismo solvente. Inmediata-
co bajo campana]. Dejar enfriar, disolver el resi- mente antes de su uso, diluir 1,0 ml de esta solución
duo en 10 ml de ácido clorhídrico 9 N y transferir a 100,0 ml con agua.
con la ayuda de 10 ml de agua a un matraz aforado
Solución estándar - Preparar una serie de dilu-
de 50 ml. Agregar 20 ml de Solución de ácido ciones a partir de la Solución estándar de mercurio
ascórbico-ioduro de sodio y 5,0 ml de Solución de (10 ppm) y diluyendo con una solución de ácido
óxido de trioctilfosfina, agitar durante 30 segundos clorhídrico libre de plomo al 25,0 % v/v.
y dejar separar las fases. Agregar agua para llevar Procedimiento - Proceder según se indica en
la capa de solvente orgánico hasta el cuello del Método I en 440. Espectrofotometría de absorción y
matraz, agitar nuevamente y dejar separar. La capa emisión atómica. Siguiendo las instrucciones del
del solvente orgánico es la Solución estándar fabricante, introducir, separadamente, 5,0 ml de
(2,0 g de plomo por ml). Solución muestra y 5,0 ml de cada una de las Solu-
Solución blanco - Proceder según se indica para ciones estándar en el vaso del equipo de valoración
Solución estándar desde donde dice: “agregar 6 ml de mercurio en vapor frío y agregar 10 ml de agua y
de ácido nítrico y 10 ml de ácido perclórico y eva- 1 ml de cloruro estañoso (SR). Determinar la ab-
porar...”. La capa del solvente orgánico es la Solu- sorbancia de todas las soluciones a 253,7 nm, em-
ción blanco (0,0 g de plomo por ml). pleando una lámpara de cátodo hueco de mercurio
Solución muestra - Transferir 1,0 g de Fumara- como fuente de radiación. No debe contener más
to Ferroso a un vaso de precipitados de 50 ml y de 1 ppm de mercurio.
agregar 6 ml de ácido nítrico y 10 ml de ácido
perclórico. [Precaución - Agregar el ácido percló- Impurezas orgánicas volátiles <520>
rico bajo campana]. Cubrir con un vidrio de reloj Método II.
estriado y calentar bajo campana hasta sequedad. VALORACIÓN
Dejar enfriar. Disolver el residuo en 10 ml de ácido
clorhídrico 9 N y transferir con la ayuda de aproxi- Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Fu-
madamente 10 ml de agua a un matraz aforado de marato Ferroso, transferir a un erlenmeyer de
50 ml. Proceder según se indica para Solución 500 ml y agregar 25 ml de ácido clorhídrico diluido
estándar desde donde dice: “Agregar 20 ml de 2 en 5. Calentar a ebullición y agregar gota a gota
Solución de ácido ascórbico-ioduro de sodio y una solución de 5,6 g de cloruro estañoso en 50 ml
5,0 ml de...”. La capa de solvente orgánico es la de ácido clorhídrico diluido 3 en 10 hasta que el
Solución muestra. color amarillo desaparezca y luego agregar 2 gotas
Procedimiento - Determinar concomitantemen- en exceso. Enfriar la solución en un baño de hielo
te las absorbancias de la Solución blanco, la Solu- hasta que alcance la temperatura ambiente, agregar
ción estándar y la Solución muestra en la línea de 10 ml de solución de cloruro mercúrico 1 en 20 y
emisión del plomo a 283,3 nm con un espectro- dejar reposar durante 5 minutos. Agregar 200 ml de
fotómetro de absorción atómica (ver 440. Espectro- agua, 25 ml de ácido sulfúrico diluido 1 en 2 y 4 ml
fotometría de absorción y emisión atómica) equipa- de ácido fosfórico. Luego agregar 2 gotas de orto-
do con una lámpara de plomo de cátodo hueco y fenantrolina (SR) y titular con sulfato céri-
co 0,1 N (SV). Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada ml
de sulfato cérico 0,1 N equivale a 16,99 mg de
C4H2FeO4.
agua y evaporar el éter en un baño de vapor. Agre-
FERROSO, GLUCONATO gar 1 gota de ácido acético 6 N y 1 ml de solución
de acetato de calcio 1 en 20: no se debe producir
HO H HO H
HO H H OH O
O
turbidez dentro de los 5 minutos.
HO Fe OH 2 H2O
O
O HO H H OH Límite de arsénico <540>
H OH H OH
Método I. Transferir 1,0 g de Gluconato Ferro-
so a un balón de 100 ml con junta esmerilada.
C12H22FeO14 . 2H2O PM: 482,2 12389-15-0 Agregar 40 ml de ácido sulfúrico 9 N y 2 ml de
Anhidro PM: 446,1 299-29-6 solución de bromuro de potasio 3 en 10. Conectar
inmediatamente a un aparato de destilación que
Definición - Gluconato Ferroso es posea un refrigerante con agua helada y calentar
bis(D-gGluconato-O1,O2) de hierro, dihidrato. hasta disolver. Destilar, recolectar 25 ml de desti-
Debe contener no menos de 11,8 por ciento y no lado y transferir al matraz generador de arsina.
más de 12,5 por ciento de hierro (II), calculado Lavar el refrigerante y el recipiente colector varias
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- veces con porciones pequeñas de agua, agregar los
guientes especificaciones. lavados al destilado en el matraz generador de arsi-
Caracteres generales - Polvo fino o granulos na, agregar bromo (SR) hasta obtener una solución
de color gris o amarillo verdoso. Una solución ligeramente amarilla y diluir con agua a 35 ml.
1 en 20 es ácida frente al tornasol. Soluble en agua Proceder según se indica en Procedimiento: el lími-
con calentamiento suave; prácticamente insoluble te es 3 ppm.
en alcohol. Límite de hierro (III)
Sustancia de referencia - Gluconato de Pota- Pesar exactamente alrededor de 5 g de Glucona-
sio SR-FA. to Ferroso y disolver en una mezcla de 100 ml de
agua y 10 ml de ácido clorhídrico. Agregar 3 g de
CONSERVACIÓN
ioduro de potasio, agitar y dejar reposar en la oscu-
En envases inactínicos de cierre perfecto. ridad durante 5 minutos. Titular el iodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,1 N (SV), agregando 3 ml
ENSAYOS
de almidón (SR) cerca del punto final. Realizar una
Identificación determinación con un blanco y hacer las correccio-
A - Proceder según se indica en el ensayo de nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
Identificación B en Gluconato de Calcio. tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 5,585 mg de
B - Una solución de Gluconato Ferroso hierro férrico. No debe contener más de 2,0 % de
1 en 200 debe producir un precipitado azul oscuro hierro férrico.
con ferricianuro de potasio (SR).
Plomo
Pérdida por secado <680> [NOTA: para la preparación de todas las solu-
Secar entre 100 y 105 °C durante 5 horas: debe ciones acuosas y para el enjuague del material de
perder entre 7,0 y 10,5 % de su peso. Emplear vidrio antes de usar, emplear agua previamente
500 mg de muestra. procesada a través de una resina de intercambio
iónico de lecho mixto. Seleccionar todos los reacti-
Límite de cloruro y sulfato <560>
vos de manera de tener un contenido de plomo lo
Cloruro - Una porción de 1,0 g de Gluconato
más bajo posible y almacenar todas las soluciones
Ferroso no debe contener más cloruro que el que
en envases de vidrio al borosilicato. Limpiar el
corresponde a 1,0 ml de ácido clorhídrico 0,020 N
material de vidrio antes de usar con ácido nítrico
(0,07 %).
8 N calentado suavemente durante 30 minutos y
Sulfato - Una porción de 1,0 g de Gluconato Fe-
enjuagar con agua desionizada].
rroso no debe contener más sulfato que el que co-
Solución de ácido ascórbico-ioduro de sodio -
rresponde a 1,0 ml de ácido sulfúrico 0,020 N
Transferir 20 g de Ácido Ascórbico y 38,5 g de
(0,1 %).
ioduro de sodio a un matraz aforado de 200 ml,
Ácido oxálico disolver en agua, completar a volumen con el mis-
Disolver 1,0 g de Gluconato Ferroso en 10 ml mo solvente y mezclar.
de agua, agregar 2 ml de ácido clorhídrico y transfe- Solución de óxido de trioctilfosfina - [Precau-
rir a una ampolla de decantación. Extraer sucesi- ción - Esta solución es irritante. Evitar el contacto
vamente con porciones de 50 y 20 ml de éter. con los ojos, la piel y la ropa. Tomar precauciones
Combinar los extractos etéreos, agregar 10 ml de especiales para eliminar las porciones no emplea-
das de las soluciones a las cuales se agrega este Azúcares reductores
reactivo]. Transferir 5,0 g de óxido de trioctilfosfi- Disolver 500 mg de Gluconato Ferroso en 10 ml
na a un matraz aforado de 100 ml, disolver en de agua, calentar y alcalinizar con 1 ml de hidróxi-
4-metil-2-pentanona, completar a volumen con el do de amonio 6 N. Pasar sulfuro de hidrógeno
mismo solvente y mezclar. gaseoso a través de la solución para precipitar el
Solución estándar - Transferir 5,0 ml de Solu- hierro y dejar reposar durante 30 minutos para coa-
ción madre de nitrato de plomo (ver 590. Límite de gular el precipitado. Filtrar y lavar el precipitado
metales pesados) a un matraz aforado de 100 ml, con dos porciones sucesivas de 5 ml de agua. Aci-
completar a volumen con agua y mezclar. Transfe- dificar el filtrado y los lavados combinados con
rir 2,0 ml de esta solución a un matraz aforado de ácido clorhídrico y agregar 2 ml de ácido clorhídri-
50 ml, agregar 10 ml de ácido clorhídrico 9 N y co 3 N en exceso. Calentar a ebullición hasta que
aproximadamente 10 ml de agua. Agregar 20 ml de los vapores no oscurezcan el papel de acetato de
Solución de ácido ascórbico-ioduro de sodio y plomo y continuar calentando a ebullición, si fuera
5,0 ml de Solución de óxido de trioctilfosfina, agitar necesario, hasta reducir el volumen de la solución a
durante 30 segundos y dejar separar las fases. aproximadamente 10 ml. Enfriar, agregar 5 ml de
Agregar agua para llevar la fase de solvente orgáni- carbonato de sodio (SR) y 20 ml de agua, filtrar y
co hasta el cuello del matraz, agitar nuevamente y ajustar el volumen del filtrado a 100 ml. A 5 ml del
dejar separar. Emplear la fase de solvente orgánico filtrado agregar 2 ml de tartrato cúprico alcali-
como Solución estándar, la cual contiene 2,0 µg de no (SR) y calentar a ebullición durante 1 minuto: no
plomo por ml. se debe formar precipitado rojo dentro de 1 minuto.
Blanco - Transferir 10 ml de ácido clorhídrico
Impurezas orgánicas volátiles <520>
9 N y aproximadamente 10 ml de agua a un matraz
Método I.
aforado de 50 ml. Agregar 20 ml de Solución de
ácido ascórbico-ioduro de sodio y 5,0 ml de Solu- VALORACIÓN
ción de óxido de trioctilfosfina, agitar durante Disolver 500 mg de carbonato ácido de sodio
30 segundos y dejar separar las fases. Agregar agua en una mezcla de agua y ácido sulfúrico diluido
para llevar la fase de solvente orgánico hasta el (70:30). Cuando la efervescencia haya cesado,
cuello del matraz, agitar nuevamente y dejar sepa- disolver en esta solución 1,0 g de Gluconato Ferro-
rar. Emplear la fase de solvente orgánico como so con agitación suave. Titular con nitrato cérico
Blanco, la cual no contiene plomo.
amónico 0,1 M (SV), empleando 0,1 ml de ferroína
Solución muestra - Transferir 1,0 g de Glucona- como indicador. Cada ml de nitrato cérico amónico
to Ferroso, 10 ml de ácido clorhídrico 9 N, aproxi- 0,1 M equivale a 5,585 mg de hierro (II).
madamente 10 ml de agua, 20 ml de Solución de
ácido ascórbico-ioduro de sodio y 5,0 ml de Solu-
ción de óxido de trioctilfosfina a un matraz aforado
de 50 ml. Agitar durante 30 segundos y dejar sepa-
rar las fases. Agregar agua para llevar la fase de
solvente orgánico hasta el cuello del matraz, agitar
nuevamente y dejar separar. Emplear la fase de
solvente orgánico como Solución muestra.
Procedimiento - Determinar concomitantemen-
te las absorbancias de la Solución estándar, la Solu-
ción muestra y el Blanco en la línea de emisión
principal a 283,3 nm, con un espectrofotómetro de
absorción atómica apropiado (ver 440. Espectrofo-
tometría de absorción y emisión atómica) equipado
con una lámpara de plomo de cátodo hueco y una
llama de aire-acetileno, empleando 4-metil-
2-pentanona para llevar a cero la lectura del apara-
to. El ensayo sólo es válido si la absorbancia del
Blanco no es mayor de 20 % de la diferencia entre
la absorbancia de la Solución estándar y el Blanco.
La absorbancia de la Solución muestra no debe ser
mayor que la de la Solución estándar (0,001 %).
Impurezas orgánicas volátiles <520>
FERROSO, SULFATO Método II.
FeSO4 . 7H2O PM: 278,0 7782-63-0
VALORACIÓN
Anhidro PM: 151,9 7720-78-7
Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Sulfato
Definición - Sulfato Ferroso es Sulfato ferroso Ferroso, disolver en una mezcla de 25 ml de ácido
heptahidratado. Debe contener una cantidad equi- sulfúrico 2 N y 25 ml de agua recientemente hervi-
valente a no menos de 99,5 por ciento y no más de da y enfriada. Agregar ortofenantrolina (SR) y
104,5 por ciento de FeSO4 . 7H2O y debe cumplir titular inmediatamente con sulfato cérico
con las siguientes especificaciones. 0,1 N (SV). Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Caracteres generales - Cristales o gránulos de Volumetría). Cada ml de sulfato cérico 0,1 N equi-
color verde azulado pálido; inodoro y eflorescente vale a 15,19 mg de FeSO4 ó a 27,80 mg de Fe-
en aire seco. Se oxida fácilmente en aire húmedo SO4 . 7H2O.
para formar sulfato férrico básico de color amarillo
pardusco. Una solución 1 en 10 debe ser ácida
ROTULADO
frente al tornasol, teniendo un pH de aproximada-
mente 3,7. Muy soluble en agua a ebullición; Indicar en el rótulo que el Sulfato Ferroso no se
fácilmente soluble en agua; insoluble en alcohol. debe emplear si está recubierto con sulfato férrico
básico de color amarillo parduzco.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
Debe responder a los ensayos para Sales ferro-
sas <410> y Sulfato <410>.
Límite de arsénico <540>
Método I. Transferir 1,0 g de Sulfato Ferroso a
un balón de 100 ml, agregar 40 ml de ácido sulfúri-
co 9 N y 2 ml de solución de bromuro de potasio
3 en 10. Conectar de inmediato el balón a un apara-
to de destilación que posea un refrigerante enfriado
con agua helada y calentar el balón suavemente
sobre una llama pequeña hasta que el sólido se
disuelva, luego destilar hasta recolectar 25 ml de
destilado en el recipiente colector. Transferir el
destilado al generador de arsina y lavar el refrige-
rante y el recipiente colector con varias porciones
pequeñas de agua, agregando los líquidos de lavado
al generador de arsina. Agitar por rotación para
mezclar, agregar bromo (SR) hasta que la solución
sea ligeramente amarilla y diluir a 35 ml con agua.
Proceder según se indica en Procedimiento: no más
de 3 ppm.
Plomo
Empleando Sulfato Ferroso, proceder según se
indica en el ensayo para Plomo en Gluconato ferro-
so: no más de 0,001 %.
Mercurio
Debe cumplir con los requisitos del ensayo para
Mercurio en Fumarato ferroso.
recubierta con gel de sílice para cromatografía con
FITOMENADIONA indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Tolueno y ciclohexano (80:20).
O
Solución muestra A - Disolver 400 mg de Fito-
CH3
menadiona en ciclohexano y diluir a 10 ml con el
CH3 mismo solvente.
H CH3 H CH3
Solución muestra B - Diluir 1 ml de Solución
O CH3 CH3
muestra A a 10 ml con ciclohexano.
Solución estándar A - Disolver 40 mg de Fito-
C31H46O2 PM: 450,7 84-80-0 menadiona SR-FA en ciclohexano y diluir a 10 ml
Sinonimias - Fitonadiona. Vitamina K1. con el mismo solvente.
Solución estándar B - Diluir 1 ml de Solución
Definición - Fitomenadiona es [R-[R*,R*-(E)]]- muestra B a 20 ml con ciclohexano.
2-Metil-3-(3,7,11,15-tetrametil-2-hexadecenil)- Solución estándar C - Disolver 4,0 mg de mena-
1,4-naftalenodiona. Es una mezcla de diona en ciclohexano y diluir a 50 ml con el mismo
trans-fitomenadiona (isómero E), cis-fitomenadiona solvente.
(isomero Z) y trans-epoxifitomenadiona. Debe con- Revelador - Solución de ácido fosfomolibdico al
tener no más de 4,0 por ciento de trans- 10 % en alcohol absoluto.
epoxifitomenadiona y no menos de 75,0 por ciento de Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
trans-fitomenadiona. Debe contener no menos de placa 10 µl de las Soluciones muestra A y B y 10 µl
97,0 por ciento y no más de 103,0 por ciento del total las Soluciones estándar A, B y C. Dejar secar las
de los tres componentes y debe cumplir con las si- aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
guientes especificaciones. que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
Caracteres generales - Líquido transparente, damente tres cuartas partes de la longitud de la placa.
amarilo intenso, oleoso y muy viscoso. Soluble en Retirar la placa de la cámara, marcar el frente del
aceites vegetales, alcohol absoluto, cloroformo y éter; solvente, dejar secar al aire durante 5 minutos y exa-
poco soluble en alcohol; insoluble en agua. minar bajo luz ultravioleta a 254 nm. Pulverizar
sobre la placa con Revelador, calentar a 120 °C du-
Sustancias de referencia - Fitomenadio- rante 5 minutos y examinar bajo luz natural. En el
na SR-FA. Trans-epoxifitomenadiona SR-FA. cromatograma obtenido a partir de la Solución mues-
CONSERVACIÓN tra A, la mancha correspondiente a menadiona no
debe ser más intensa que la obtenida con la Solución
En envases inactínicos de cierre perfecto. estándar C (0,2 %); a excepción de la mancha princi-
ENSAYOS pal y de la mancha correspondiente a menadiona,
ninguna mancha debe ser más intensa que la mancha
[NOTA: proteger la muestra, la Sustancia de refe- obtenida con la Solución estándar B (0,5 %). Ignorar
rencia y las soluciones que las contengan de la expo- cualquier mancha por debajo de la mancha principal
sición a la luz]. que pueda no estar completamente separada de esta.
Identificación Determinación del residuo de ignición <270>
A - Absorción infrarroja <460>. En película fina. No más de 0,1 %.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: n-hexano. VALORACIÓN
Concentración: 10 µg por ml. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo pa-
Las absortividades a 248 nm no deben dife- ra cromatografía de líquidos con un detector ultravio-
rir en más de 3,0 %. leta ajustado a 254 nm y una columna de
Determinación del índice de refracción <230> 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida por
Entre 1,523 y 1,526. partículas porosas de sílice de 5 µm de diámetro, con
un tamaño de poro de 8 nm. El caudal debe ser
Reacción aproximadamente 0,4 ml por minuto.
Una solución de Fitomenadiona 1 en 20 en alco- Fase móvil - Heptano, diisopropil éter y octanol
hol absoluto debe ser neutra frente al tornasol. (1.000:3,3:0,67). Filtrar y desgasificar. Hacer los
Límite de menadiona y sustancias relacionadas ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Fase estacionaria - Emplear una placa para cro- Cromatografía).
matografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) Preparación estándar A - Pesar exactamente al-
rededor de 15 mg de Fitomenadiona SR-FA, transfe-
rir a un matraz aforado de 10 ml, disolver y comple- Aepoxi PE rMepoxi /PM rEepoxi
tar a volumen con Fase móvil.
en la cual Aepoxi es el porcentaje de
Preparación estándar B - Pesar exactamente al-
epoxi-fitomenadiona en Fitomenadiona SR-FA, rMe-
rededor de 15 mg de Fitomenadiona SR-FA y 4,0 mg
poxi y r Eepoxi son las respuestas de los picos correspon-
de Trans-epoxifitomenadiona SR-FA, transferir a un
dientes a trans-epoxifitomenadiona en la Prepara-
matraz aforado de 10 ml, disolver y completar a vo-
ción muestra y la Preparación estándar A, respecti-
lumen con Fase móvil.
vamente y los demás términos son los definidos ante-
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
riormente.
dedor de 15 mg de Fitomenadiona, transferir a un
matraz aforado de 10 ml, disolver y completar a vo-
lumen con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar B y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Proce-
dimiento: el ensayo solo es válido si el orden de elu-
ción es: trans-epoxifitomenadiona, cis-fitomenadiona
y trans-fitomenadiona. Cromatografiar la Prepara-
ción estándar A y registrar las respuestas de los picos
según se indica en Procedimiento: la resolución R
entre los picos de trans-fitomenadiona y
cis-fitomenadiona debe ser mayor de 2,5; la desvia-
ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar A y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales.
Calcular el porcentaje de trans-fitomenadiona en
la porción de Fitomenadiona en ensayo, por la fórmu-
la siguiente:
Atrans PE rMtrans /PM rEtrans
en la cual Atrans es el porcentaje de
trans-fitomenadiona en Fitomenadiona SR-FA, PE es
el peso en mg de Fitomenadiona SR-FA en la Prepa-
ración estándar A, PM es el peso en mg de Fitomena-
diona en la Preparación muestra y rMtrans y rEtrans son
las respuestas de los picos correspondientes al isóme-
ro trans en la Preparación muestra y la Preparación
estándar A, respectivamente.
Calcular el porcentaje de cis-fitomenadiona en la
porción de Fitomenadiona en ensayo, por la fórmula
siguiente:
Acis PE rMcis /PM rEcis
en la cual Acis es el porcentaje de cis-fitomenadiona
en Fitomenadiona SR-FA, rMcis y rEcis son las respues-
tas de los picos correspondientes al isómero cis en la
Preparación muestra y la Preparación estándar A,
respectivamente y los demás términos son los defini-
dos anteriormente.
Calcular el porcentaje de trans-epoxifitomena-
diona en la porción de Fitomenadiona en ensayo, por
la fórmula siguiente:
5 ml de alcohol, agregar 5 ml de agua destilada y
FLUCONAZOL mezclar. El límite es de 0,002 %.
Sustancias relacionadas
N
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
N F para cromatografía de líquidos con un detector
N ultravioleta ajustado a 260 nm y una columna de
N 15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
N N por octadecilsilano químicamente unido a partículas
OH F porosas de sílice de 5 µm de diámetro. Mantener la
temperatura de la columna aproximadamente a
C13H12F2N6O PM: 306,3 86386-73-4 40 ºC. El caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml
por minuto.
Definición - Fluconazol es Fase móvil - Solución de formato de amonio al
α-(2,4-difluorofenil)-α-(1H-1,2,4-triazol-1-ilmetil)- 0,063 % y acetonitrilo (86:14). Filtrar y desgasifi-
1H-1,2,4-triazol-1-etanol. Debe contener no menos car. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
de 99 por ciento y no más de 101,0 por ciento de sistema en 100. Cromatografía).
C13H12F2N6O, calculado sobre la sustancia seca y Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
debe cumplir con las siguientes especificaciones. de 100 mg de Fluconazol, transferir a un matraz
Caracteres generales - Polvo blanco cristalino. aforado de 10 ml, completar a volumen con Fase
Fácilmente soluble en metanol; soluble en acetona y móvil y mezclar.
alcohol; moderadamente soluble en cloroformo e Solución estándar A - Transferir 5,0 ml de So-
isopropanol; ligeramente soluble en agua; muy poco lución muestra a un matraz aforado de 100 ml y
soluble en tolueno. completar a volumen con Fase móvil. Transferir
1,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
Sustancias de referencia - Fluconazol SR-FA. 10 ml y completar a volumen con Fase móvil.
Impureza A de Fluconazol SR-FA: 2-[2-fluoro-4- Solución estándar B - Pesar exactamente alre-
(1H-1,2,4-triazol-1-il)fenil]-1,3-bis(1H-1,2,4- dedor de 5 mg de Fluconazol para identificación de
triazol-1-il)-propan-2-ol. Impureza B de Flucona- pico SR-FA(conteniendo impureza A) y transferir a
zol SR-FA: 2-(4-fluorofenil)-1,3-bis(1H-1,2,4- un matraz aforado de 10 ml, disolver y completar a
triazol-1-il)-propan-2-ol. Impureza C de Flucona- volumen con Fase móvil y mezclar.
zol SR-FA: 1,1´-(1,3-fenil-en)di(1H-1,2,4-triazol. Solución estándar C - Pesar exactamente alre-
dedor de 3 mg de Impureza B de Flucona-
CONSERVACIÓN zol SR-FA, transferir a un matraz aforado de
En envases inactínicos de cierre perfecto. Al- 100 ml, disolver y completar a volumen con Fase
macenar a temperaturas menores de 30 ºC. móvil y mezclar.
Solución estándar D - Pesar exactamente alre-
ENSAYOS
dedor de 1 mg de Impureza C de Flucona-
Identificación zol SR-FA, transferir a un matraz aforado de 10 ml,
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. disolver y completar a volumen con Fase móvil.
B - Absorción ultravioleta <470>. Transferir 1,0 ml de esta solución a un matraz afo-
Solvente: alcohol. rado de 10 ml, agregar 1 ml de Solución muestra y
Concentración: 200 µg por ml. completar a volumen con Fase móvil.
Determinación del punto de fusión <260> Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Entre 138 y 142 °C. Cromatografíar la Solución estándar D y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Pérdida por secado <680> cedimiento: la resolución R entre los picos de impu-
Secar a 105°C durante 3 horas: no debe perder reza C y fluconazol no debe ser menor de 3,0.
más de 0,5 % de su peso. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Determinación del residuo de ignición <270> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
No más de 0,1 %, determinado sobre 0,5 g de 20 µl) de la Solución muestra y las Soluciones
muestra. estándar A, B, C y D, registrar los cromatogramas
durante 3,5 veces el tiempo de retención de fluco-
Límite de hierro <580> nazol y medir las respuestas de los picos principa-
Pesar exactamente alrededor de 0,5 g de Fluco- les. El pico de fluconazol debe eluir aproximada-
nazol y transferir a un tubo de ensayo. Disolver en mente a los 11 minutos. Los tiempos de retención
relativos a fluconazol deben ser aproximadamente
0,4 para la impureza B de fluconazol, 0,5 para la
impureza A de fluconazol y 0,8 para la impureza C
de fluconazol. Calcular el porcentaje de las impu-
rezas A, B y C de fluconazol y de cualquier otra
impureza en la porción de Fluconazol en ensayo.
En el cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra el pico correspondiente a impureza A de
fluconazol no debe ser mayor a 0,8 veces la res-
puesta del pico principal obtenido en la Solución
estándar A (0,4 %); el pico correspondiente a impu-
reza B de fluconazol no debe ser mayor al pico
principal obtenido en la Solución estándar C
(0,3 %); el pico correspondiente a impureza C no
debe ser mayor al pico principal obtenido en la
Solución estándar D (0,1 %); ninguna impureza
debe ser mayor a 0,2 veces la respuesta del pico
principal en el cromatograma obtenido con la Solu-
ción estándar A (0,1 %) y la suma de todas las
impurezas no debe ser mayor a 1,2 veces la respues-
ta del pico principal en el cromatograma obtenido
con la Solución estándar A (0,6 %). Descartar
cualquier pico con una respuesta menor a 0,1 veces
la respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
ción estándar A (0,05 %).
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 125 mg de Flu-
conazol y disolver en 60 ml de ácido acético glacial.
Titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determi-
nando el punto final potenciométricamente. Reali-
zar una determinación con un blanco y hacer las
correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
15,32 mg de C13H12F2N6O.
Solución muestra - Disolver 200 mg de Deca-
FLUFENAZINA, noato de Flufenazina en metanol y diluir a 10 ml
DECANOATO DE con el mismo solvente.
Solución estándar A - Diluir 1 ml de la Solu-
ción muestra a 100 ml con metanol.
Solución estándar B - Diluir 5 ml de la Solu-
N N O
ción estándar A a 10 ml con metanol.
S N Revelador - Solución de ácido sulfúrico al
O
50 % v/v.
CF3 H3C Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 10 l de la Solución muestra y 10 l de las
Soluciones estándar A y B. Dejar secar las aplica-
C32H44F3N3O2S PM: 591,8 5002-47-1 ciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el
Definición - Decanoato de Flufenazina es De- frente del solvente haya recorrido aproximadamente
canoato de 4-[3-[2-(trifluorometil)-10-H-fenotiazin- tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
10-il]propil]-1-piperazinoetanol. Debe contener no rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
menos de 98,5 por ciento y no más de 101,5 por vente y dejar secar al aire. Examinar la placa bajo
ciento de C32H44F3N3O2S, calculado sobre la sus- luz ultravioleta a 254 nm. Pulverizar sobre la placa
tancia seca y debe cumplir con las siguientes espe- con Revelador y calentar a 100 ºC durante
cificaciones. 15 minutos. Por ambos métodos de visualización: a
excepción de la mancha principal, ninguna mancha
Caracteres generales - Líquido viscoso amari- en el cromatograma obtenido a partir de la Solución
llo pálido o sólido amarillo. Muy soluble en cloruro muestra debe ser mayor en intensidad a la mancha
de metileno, etanol y éter; fácilmente soluble en obtenida con la Solución estándar A (1,0 %) y como
metanol; prácticamente insoluble en agua. máximo una de las manchas debe ser más intensa
Sustancia de referencia - Decanoato de Flufe- que la mancha obtenida con la Solución estándar B
nazina SR-FA. (0,5 %).
CONSERVACIÓN Límite de metales pesados <590>
Método VI. Emplear 2 ml de Solución estándar
En envases inactínicos.
de plomo (10 ppm). No más de 0,002 %.
ENSAYOS
Pérdida por secado <680>
Identificación Secar a 60 ºC durante 3 horas, a una presión no
A - Absorción infrarroja <460>. Examinar el mayor de 5 mm Hg: no debe perder más de 1,0 %
Decanoato de Flufenazina en forma de discos pre- de su peso.
parados depositando 50 l de una solución de cloru- Determinación del residuo de ignición <270>
ro de metileno de aproximadamente 2,5 % en un No más de 0,1 %.
disco de bromuro de potasio. [NOTA: secar los
discos a 60 ºC durante 1 hora antes de su uso]. VALORACIÓN
B - Absorción ultravioleta <470>. Disolver Pesar exactamente alrededor de 250 mg de De-
50 mg de Decanoato de Flufenazina en metanol y canoato de Flufenazina y disolver en 30 ml de ácido
diluir a 100 ml con el mismo solvente. Diluir 1 ml acético glacial. Emplear como indicador 0,05 ml de
de esta solución a 50 ml con metanol. Examinar cristal violeta (SR) y titular con ácido perclórico
entre 230 y 350 nm. La solución debe presentar 0,1 N hasta que el color cambie de violeta a verde.
máximos de absorción a 260 y 310 nm. Realizar una determinación con un blanco (ver 780.
Sustancias relacionadas Volumetría). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N
[NOTA: preparar las soluciones inmediatamente equivale a 29,59 mg de C32H44F3N3O2S.
antes de su uso y protegidas de la luz].
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice con indicador de
fluorescencia, de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Acetona, ciclohexano y amoníaco
concentrado (80:30:5).
mancha debe ser más intensa que la obtenida con la
FLUFENAZINA, Solución estándar A (1,0 %) y como máximo una
ENANTATO DE de las manchas puede ser más intensa que la obteni-
da con la Solución estándar B (0,5 %).
Límite de metales pesados <590>
N N O Método VI. Emplear 2 ml de Solución estándar
S N de plomo (10 ppm) para preparar la Solución están-
O dar. No más de 0,002 %.
H3C
CF3 Pérdida por secado <680>
Secar a 60 ºC durante 3 horas, a una presión no
C29H38F3N3O2S PM: 549,7 2746-81-8 mayor de 5 mm Hg: no debe perder más de 1,0 %
Definición - Enantato de flufenazina es el de su peso.
Enantato de 4-[3-[2-(trifluorometil)-10-H- Determinación del residuo de ignición <270>
fenotiazin-10-il]propil]1-piperazinetilo. Debe con- No más de 0,1 %.
tener no menos de 98,5 por ciento y no más de
101,5 por ciento de C29H38F3N3O2S, calculado sobre VALORACIÓN
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes Pesar exactamente alrededor de 250 mg de
especificaciones. Enantato de Flufenazina y disolver en 30 ml de
Caracteres generales - Líquido viscoso amari- ácido acético glacial. Titular con ácido perclórico
llo pálido o sólido amarillo. Muy soluble en cloruro 0,1 N (SV) empleando 0,05 ml de cristal viole-
de metileno, etanol y éter; fácilmente soluble en ta (SR) como indicador, hasta que el color vire de
metanol; prácticamente insoluble en agua. violeta a verde. Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Sustancia de referencia - Enantato de Flufena- Volumetría). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N
zina SR-FA. equivale a 27,49 mg de C29H38F3N3O2S.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
Absorción infrarroja <460>. Examinar el Enan-
tato de Flufenazina en forma de discos preparados
depositando 50 l de una solución de cloruro de
metileno de aproximadamente 2,5 % en un disco de
bromuro de potasio. [NOTA: secar los discos a
60 ºC durante 1 hora antes de su uso].
Sustancias relacionadas
[NOTA: preparar las soluciones inmediatamente
antes de su uso y protegerlas de la luz].
Fase estacionaria, Fase móvil y Revelador -
Proceder según se indica en Sustancias relaciona-
das en Decanoato de Flufenazina.
Solución muestra - Disolver 200 mg de Enanta-
to de Flufenazina en metanol y diluir a 10 ml con el
mismo solvente.
Solución estándar A - Diluir 1 ml de la Solución
muestra a 100 ml con metanol.
Solución estándar B - Diluir 5 ml de la Solución
estándar A a 10 ml con metanol.
Procedimiento - Proceder según se indica en
Sustancias relacionadas en Decanoato de Flufena-
zina. Por ambos métodos de visualización, a ex-
cepción de la mancha principal en el cromatograma
obtenido a partir de la Solución muestra, ninguna
FLUMAZENIL Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
H3C O
ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
N 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
O por octadecilsilano totalmente encapado, química-
mente unido a partículas porosas de sílice de 5 m
F
H3C O N de diámetro. El caudal debe ser aproximadamente
N 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Transferir 800 ml de agua a un
C15H14FN3O3 PM: 303,3 78755-81-4 matraz aforado de 1 litro, ajustar a pH 2,0 con ácido
fosfórico, agregar 130 ml de metanol y 70 ml de
Definición - Flumazenil es Ácido 8-fluoro-
tetrahidrofurano. Filtrar y desgasificar. Hacer los
5,6-dihidro-5-metil-6-oxo-4H-imidazo[1,5-a][1,4]
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
benzodiazepina-3-carboxílico. Debe contener no
Cromatografía).
menos de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por
Solución muestra - Disolver 50 mg de Fluma-
ciento de C15H14FN3O3, calculado sobre la sustancia
zenil en 5,0 ml de metanol y diluir a 25 ml con Fase
seca y debe cumplir con las siguientes especifica-
móvil.
ciones.
Solución estándar A - Disolver 2 mg de Impu-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco reza B de Flumazenil SR-FA y 2 mg de Flumazenil
o casi blanco. Fácilmente soluble en cloruro de en Fase móvil y diluir a 25 ml con Fase móvil.
metileno; moderadamente soluble en metanol; muy Diluir 2,0 ml de esta solución a 25 ml con Fase
poco soluble en agua. móvil.
Sustancia de referencia - Impureza B de Flu- Solución estándar B - Diluir 10,0 ml de Solu-
mazenil SR-FA: 8-hidroxi-5-metil-6-oxo-5,6- ción muestra a 100 ml con Fase móvil. Diluir
dihidro-4H-imidazo[1,5-a][1,4]benzodiazepina-3- 1,0 ml de esta solución a 100 ml con Fase móvil.
carboxilato de etilo. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución estándar A y registrar la
CONSERVACIÓN respuesta de los picos según se indica en Procedi-
En envases bien cerrados. miento: la resolución R entre los picos de impureza
B de flumazenil y flumazenil no debe ser menor
ENSAYOS de 3,0.
Identificación Procedimiento - Inyectar por separado en el
A - Absorción infrarroja <460>. Proceder cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
según se indica en Identificación por medio de 20 l) de la Solución estándar B y la Solución
espectros de referencia. muestra, registrar los cromatogramas durante tres
B - El punto de fusión debe estar comprendido veces el tiempo de retención de flumazenil y medir
entre 198 y 202 °C (ver 260. Determinación del las respuestas de todos los picos: el tiempo de re-
punto de fusión). tención de flumazenil debe ser aproximadamente
14 minutos; los tiempos de retención relativos al
Determinación del residuo de ignición <270>
flumazenil deben ser aproximadamente 0,4 para
No más de 0,1 %; en un crisol de platino.
ácido 8-fluoro-5-metil-6-oxo-5,6-dihidro-4H-
Límite de impureza C: Dietoxi-N,N- imidazo[1,5-a][1,4]benzodiazepina-3-carboxílico
dimetilmetanamina (impureza A); 0,5 para 7-fluoro-4-metil-3,4-
Disolver 100 mg de Flumazenil en 0,5 ml de dihidro-1H-1,4-benzodiazepina-2,5-diona (impure-
cloruro de metileno y diluir a 10 ml con alcohol za D); 0,6 para 5-metil-6-oxo-5,6-dihidro-4H-
butílico. A 5,0 ml de esta solución agregar 2,0 ml imidazo[1,5-a] [1,4]benzodiazepina-3-carboxilato
de una solución de ninhidrina al 0,2 % en una mez- de etilo (impureza E); 0,7 para impureza B y 2,4
cla de alcohol butílico y ácido acético al 12 % p/v para 8-cloro-5-metil-6-oxo-5,6-dihidro-4H-imidazo
(95:5). Calentar en un baño de agua a 95 °C duran- [1,5-a][1,4]benzodiazepina-3-carboxilato de etilo.
te 15 minutos: el color azul-violeta producido en El pico correspondiente a impureza B en el croma-
esta solución no debe ser más intenso que el de un tograma obtenido a partir de la Solución muestra no
control tratado del mismo modo, empleando 5,0 ml debe ser mayor a dos veces la respuesta del pico
de una solución de dietilacetal de dimetilformamida principal obtenido con la Solución estándar B
al 0,01 % en alcohol butílico (1 %). (0,2 %); a excepción del pico principal y del pico
correspondiente a impureza B en el cromatograma
obtenido a partir de la Solución muestra, ninguna
impureza individual debe ser mayor al pico princi-
pal obtenido con la Solución estándar B (0,1 %); la
suma de las respuestas de todos los picos, a excep-
ción del pico principal, no debe ser mayor a 2 veces
la respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
ción estándar B (0,2 %). Ignorar cualquier pico con
una respuesta menor a 0,5 veces la respuesta del
pico principal obtenido con la Solución estándar B
(0,05 %).
Pérdida por secado <680>
Secar entre 100 y 105 °C: no debe perder más
de 0,5 % de su peso.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Flu-
mazenil, disolver en 50 ml de una mezcla de ácido
acético glacial y anhídrido acético (3:2) y titular con
ácido perclórico 0,1 N (SV), determinando el punto
final potenciométricamente. Realizar una determi-
nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
perclórico 0,1 N equivale a 30,33 mg de
C15H14FN3O3.
Solución muestra B - Diluir 1 ml de la Solución
FLUNITRAZEPAM muestra A a 50 ml con acetona.
Solución estándar A - Diluir 1 ml de la Solu-
CH3 ción muestra A a 20 ml con acetona. Diluir 3 ml de
O esta solución a 50 ml con el mismo solvente.
N
Solución estándar B - Disolver 8 mg de Fluni-
trazepam SR-FA en acetona y diluir a 10 ml con el
mismo solvente.
O2N N Solución estándar C - Disolver 8 mg de Fluni-
trazepam SR-FA y 8 mg de Nitrazepam en acetona
F
y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 5 µl de la Solución muestra A, 5 µl de la So-
lución muestra B, 5 µl de la Solución estándar A,
C16H12FN3O3 PM: 313,3 1622-62-4 5 µl de la Solución estándar B y 5 µl de la Solución
estándar C. Dejar secar las aplicaciones y desarro-
Definición - Flunitrazepam es
llar los cromatogramas hasta que el frente del sol-
5-(2-Fluorofenil)-1,3-dihidro-1-metil-7-nitro-2H- vente haya recorrido aproximadamente tres cuartas
1,4-benzodiazepin-2-ona. Debe contener no menos
partes de la longitud de la placa. Retirar la placa de
de 98,5 por ciento y no más de 101,5 por ciento de la cámara, marcar el frente del solvente, dejar secar
C16H12FN3O3, calculado sobre la sustancia seca y
al aire y examinar con luz ultravioleta a 254 nm: a
debe cumplir con las siguientes especificaciones. excepción de la mancha principal en el cromato-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco grama obtenido a partir de la Solución muestra A,
o amarillento. Soluble en acetona; poco soluble en ninguna mancha debe ser más intensa que la obte-
alcohol y éter; prácticamente insoluble en agua. nida con la Solución estándar A (0,3 %). El ensayo
sólo es válido si el cromatograma obtenido con la
Sustancia de referencia - Flunitraze-
pam SR-FA. Solución estándar C presenta dos manchas clara-
mente separadas.
CONSERVACIÓN Determinación del punto de fusión <260>
En envases inactínicos de cierre perfecto. Método I. Entre 168 y 172 °C.
Pérdida por secado <680>
ENSAYOS Secar entre 100 y 105 °C: no debe perder más
Identificación de 0,5 % de su peso.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Determinación del residuo de ignición <270>
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en No más de 0,1 %.
Sustancias relacionadas con luz ultravioleta a
254 nm. La mancha principal en el cromatograma VALORACIÓN
obtenido a partir de la Solución muestra B se debe
corresponder en valor de Rf y tamaño a la mancha Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Flu-
principal obtenida con la Solución estándar B. nitrazepam, disolver en 20 ml de ácido acético
glacial y agregar 50 ml de anhídrido acético. Titu-
Sustancias relacionadas lar con ácido perclórico 0,1 N (SV) determinando el
[NOTA: realizar el ensayo protegido de la luz.] punto final potenciométricamente. Realizar una
Fase estacionaria - Emplear una placa para determinación con un blanco y hacer las correccio-
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- ácido perclórico 0,1 N equivale a 31,33 mg de
grafía con indicador de fluorescencia de 0,25 mm C16H12FN3O3.
de espesor.
Fase móvil - Nitrometano y acetato de etilo
(85:15)
Solución muestra A - Disolver 200 mg de Flu-
nitrazepam en acetona y diluir a 5 ml con el mismo
solvente. Preparar esta solución en el momento de
su uso.
sodio 2,5 N y calentar en un baño de vapor hasta
FLUORESCEÍNA ebullición durante 20 minutos agitando con fre-
cuencia. Enfriar, completar a volumen con agua y
HO O OH mezclar. Diluir cuantitativamente y en etapas con
agua para obtener una solución de aproximadamen-
te 1,1 µg de diacetilfluoresceína por ml. Transferir
O 3,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
100 ml, agregar 20 ml de Diluyente, completar a
O
volumen con agua y mezclar.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
C20H12O5 PM: 332,3 2321-07-5 dedor de 90 mg de Fluoresceína, transferir a un
Definición - Fluoresceína es matraz aforado de 100 ml y disolver con 10 ml de
3´,6´-Dihidroxispiro[isobenzofuran-1(3H),9´-[9H] alcohol. Agregar 2 ml de hidróxido de sodio 2,5 N
xanten]-3-ona. Debe contener no menos de 97,0 y calentar en un baño de vapor hasta ebullición
por ciento y no más de 102,0 por ciento de durante 20 minutos agitando con frecuencia. En-
C20H12O5, calculado sobre la sustancia anhidra y friar, completar a volumen con agua y mezclar.
debe cumplir con las siguientes especificaciones. Diluir cuantitativamente y en etapas con agua para
obtener una solución de aproximadamente 0,9 µg
Caracteres generales - Polvo rojo amarillento
por ml. Transferir 3,0 ml de esta solución a un
a rojo. Soluble en hidróxidos alcalinos diluidos;
matraz aforado de 100 ml, agregar 20 ml de Dilu-
insoluble en agua.
yente, completar a volumen con agua y mezclar.
Sustancias de referencia - Diacetilfluoresceí- Procedimiento - Determinar las intensidades de
na SR-FA. Fluoresceína SR-FA. fluorescencia, con un fluorómetro, de la Prepara-
ción estándar y la Preparación muestra, a la longi-
CONSERVACIÓN
tud de onda de excitación y de emisión, 485 y
En envases de cierre perfecto. 515 nm, respectivamente. Calcular la cantidad en
ENSAYOS mg de C20H12O5 en la porción de Fluoresceína en
ensayo, por la fórmula siguiente:
Identificación
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. (332,3/416,4)(3.333C)(IM/IE)
Secar previamente sobre gel de sílice durante en la cual 332,3 y 416,4 son los pesos moleculares
16 horas. de Fluoresceína y Diacetilfluoresceína respectiva-
Determinación de agua <120> mente, C es la concentración en µg por ml de Dia-
Titulación volumétrica directa. No más de cetilfluoresceína SR-FA en la Preparación están-
1,0 %. dar, y IM e IE son los valores de fluorescencia obte-
nidos a partir de la Preparación muestra y la Pre-
Determinación de cinc paración estándar, respectivamente.
Suspender 100 mg de Fluoresceína en 10 ml de
una solución saturada de cloruro de sodio, agregar
2 ml de ácido clorhídrico 3 N, mezclar, filtrar y
agregar 1 ml de ferricianuro de potasio (SR) al
filtrado: no se debe producir turbidez.
Acriflavina
Suspender 10 mg de Fluoresceína en 5 ml de
agua, mezclar y filtrar. Agregar al filtrado unas
pocas gotas de una solución de salicilato de so-
dio 1 en 10: no se debe formar precipitado.
VALORACIÓN
Diluyente - Solución reguladora alcalina de bo-
rato pH 9,0 (ver Soluciones reguladoras en Reacti-
vos y Soluciones).
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 110 mg de Diacetilfluoresceína SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 100 ml, disolver
con 10 ml de alcohol, agregar 2 ml de hidróxido de
Disolver 10 mg de Fluoresceína Sódica en 5 ml
FLUORESCEÍNA SÓDICA de agua y agregar unas gotas de solución de salici-
lato de sodio 1 en 10: no se debe formar precipita-
O
NaO O do.
VALORACIÓN
O Pesar exactamente alrededor de 50 mg de Fluo-
resceína Sódica, transferir a un matraz aforado de
ONa
500 ml y completar a volumen con agua. Transferir
5 ml de esta solución a un matraz aforado de 200 ml
y completar a volumen con una solución reguladora
de fosfato pH 8 (ver Soluciones reguladoras en
C20H10Na2O5 PM: 376,3 518-47-8 Reactivos y Soluciones). Medir la absorbancia de la
Definición - Fluoresceína Sódica es 2-(3-Oxo- solución en el máximo a 492 nm (ver 470. Espec-
6-óxido-3H-xanten-9-il) benzoato disódico. Debe trofotometía de absorción ultravioleta y visible).
contener no menos de 95,0 por ciento y no más de Calcular el contenido de C20H10Na2O5 empleando
103,0 por ciento de C20H10Na2O5, calculado sobre la como coeficiente de extinción específica
sustancia anhidra y debe cumplir con las siguientes E(1 %, 1 cm) un valor de 2.050.
especificaciones.
Caracteres generales - Polvo rojo anaranjado.
Higroscópico e inodoro. Fácilmente soluble en
agua; moderadamente soluble en alcohol.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Una solución de Fluoresceína Sódica debe
presentar una intensa fluorescencia aunque esté
muy diluida. La fluorescencia debe desaparecer
cuando la solución se acidifica y reaparecer cuando
la solución se alcaliniza nuevamente.
B - El residuo remanente una vez sometido a
ignición debe responder a los ensayos para So-
dio <410>.
C - Transferir 1 gota de una solución de Fluo-
resceína Sódica 1 en 2.000 sobre un trozo de papel
de filtro: se debe producir una mancha amarilla y
cuando ésta se expone, estando húmeda a vapores
de bromo durante 1 minuto y luego al vapores de
amoníaco, debe adquirir una coloración rosa pro-
fundo.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
17,0 %.
Cinc
Disolver 100 mg de Fluoresceína Sódica en
10 ml de una solución saturada de cloruro de sodio,
agregar 2 ml de ácido clorhídrico 3 N, agitar, filtrar
y agregar al filtrado 1 ml de ferrocianuro de pota-
sio (SR): no se debe producir turbidez.
Acriflavina
Solución reguladora - Transferir 55 g de cloru-
FLUOROURACILO ro de sodio a un matraz aforado de 1 litro, agregar
H
500 mg de citrato de sodio, 255 g de acetato de
N O sodio y 300 ml de agua. Agitar, disolver y agregar
115 ml de ácido acético glacial. Enfriar a tempera-
NH
tura ambiente, agregar 300 ml de alcohol isopropíli-
F co, completar a volumen con agua y mezclar. El
pH de la solución resultante debe estar comprendi-
O
do entre 5,0 y 5,5.
Solución madre de la muestra - Transferir
C4H3FN2O2 PM: 130,1 51-21-8 200 mg de Fluorouracilo exactamente pesados a un
matraz aforado de 250 ml, agregar aproximadamen-
Definición - Fluorouracilo es 5-Fluoro-
te 150 ml de 1,2-dimetoxietano, agitar mecánica-
2,4(1H,3H)-pirimidinodiona. Debe contener no
mente hasta disolver, completar a volumen con el
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por
mismo solvente y mezclar.
ciento de C4H3FN2O2, calculado sobre la sustancia
Solución muestra - Transferir 15 ml de la Solu-
seca y debe cumplir con las siguientes especifica-
ción madre de la muestra a un matraz de 500 ml de
ciones.
fondo plano y provisto de una junta de vidrio esme-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco rilado, agregar 15 ml de solución de bifenilo sódico
o casi blanco, prácticamente inodoro. Se descom- a través de un embudo de vástago largo para evitar
pone aproximadamente a 282 ºC. Moderadamente salpicaduras, agitar el matraz suavemente por rota-
soluble en agua; poco soluble en alcohol; práctica- ción y cubrir con un vidrio de reloj. Dejar reposar a
mente insoluble en cloroformo y éter. temperatura ambiente durante 20 minutos, agregar
cuidadosamente 50,0 ml de alcohol isopropílico
Sustancia de referencia - Fluorouraci-
mientras se agita el matraz por rotación. Agregar
lo SR-FA.
10,0 ml de peróxido de hidrógeno al 30 % y 4,0 ml
Precaución - Tomar precauciones para evitar de hidróxido de sodio 1 N y conectar el matraz a un
la inhalación y el contacto con la piel. refrigerante, previamente enjuagado con agua y
CONSERVACIÓN alcohol isopropílico y secado. Colocar el matraz
sobre una placa calefactora, aproximadamente a
En envases inactínicos de cierre perfecto. 245 °C, y calentar a reflujo durante 1 hora. Enfriar
ENSAYOS a temperatura ambiente, enjuagar el refrigerante con
15 ml de Solución de alcohol isopropílico, transferir
Identificación el contenido a un matraz aforado de 250 ml emple-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. ando Solución de alcohol isopropílico para enjua-
B - Absorción ultravioleta <470> gar, completar a volumen con el mismo solvente y
Solvente: solución reguladora de acetato de mezclar. Transferir 15 ml de esta solución a un
pH 4,7 que contiene 8,4 g de acetato de sodio y matraz aforado de 100 ml y completar a volumen
3,35 ml de ácido acético glacial mezclado con agua con Solución reguladora.
para obtener 1 litro. Blanco del reactivo - Transferir 15 ml de
Concentración: 10 µg por ml. 1,2-dimetoxietano a un matraz de 500 ml de fondo
Las absortividades a 266 nm, calculadas plano y provisto de una junta de vidrio esmerilado y
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de proceder según se indica en Solución muestra, co-
3,0 %. menzando donde dice: “agregar 15 ml de solución
C - A 5 ml de una solución de Fluorouracilo de bifenilo sódico...”.
1 en 100, agregar 1 ml de agua de bromo (SR): debe Solución madre del estándar - Transferir
desaparecer el color del bromo. 2,211 g de fluoruro de sodio, exactamente pesados
Determinación del residuo de ignición <270> y previamente, secados a 150 °C durante 4 horas, a
No más de 0,1 %. un matraz aforado de 1 litro y disolver en aproxi-
madamente 200 ml de agua. Agregar 1 ml de solu-
Contenido de flúor ción de hidróxido de sodio 1 en 25, completar a
[NOTA: se recomienda el uso de material volumen con agua y mezclar. Cada ml de esta
plástico para contener las soluciones durante todo el solución equivale a 1 mg de fluoruro.
ensayo.] Electrodo de referencia de calomel modificado -
Solución de alcohol isopropílico - Diluir Mezclar 70 ml de una solución saturada de cloruro
295 ml de alcohol isopropílico con agua a 500 ml. de potasio, recientemente preparada, con 30 ml de
alcohol isopropílico, llenar el electrodo con el líqui- necesario, con agua para obtener una solución de
do sobrenadante transparente y dejar el electrodo aproximadamente 10 µg por ml.
sumergido en el resto de la solución durante por lo Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
menos 2 horas antes de usar. Mantener el electrodo dedor de 20 mg de Fluorouracilo, transferir a un
sumergido en la solución de alcohol isopropílico- matraz aforado de 200 ml, disolver y completar a
cloruro de potasio cuando no se emplee. volumen con agua y mezclar. Diluir cuantitativa-
Curva estándar - Diluir 10,0 ml de Solución mente un volumen exactamente medido de esta
madre del estándar con agua a 100 ml. Transferir solución con agua para obtener una solución de
0,8; 1,0; 1,2 y 1,6 ml de la solución anterior a sen- aproximadamente 10 µg por ml.
dos matraces aforados de 100 ml, respectivamente. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Agregar a cada matraz 15 ml de Blanco del reacti- Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
vo, completar a volumen con Solución reguladora y las respuestas de los picos según se indica en Pro-
mezclar. Construir la curva estándar, empleando cedimiento: la eficiencia de la columna no debe ser
estas diluciones con concentraciones de 0,8; 1,0; 1,2 menor de 2.500 platos teóricos y la desviación
y 1,6 µg por ml, respectivamente. Determinar los estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
potenciales de cada solución según se indica en ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento. Graficar la concentración de flúor, Procedimiento - Inyectar por separado en el
en mg por 100 ml, en función del potencial para cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
cada solución en papel semilogarítmico y calcular de 10 µl) de la Preparación estándar y la Prepara-
la ecuación de la recta que mejor ajuste. ción muestra, registrar los cromatogramas y medir
Procedimiento - [NOTA: para realizar las me- las respuestas de los picos principales. Calcular la
diciones, sumergir los electrodos en la solución, cantidad de C4H3FN2O2 en la porción de Fluoroura-
contenida en un vaso de precipitado de 150 ml y cilo en ensayo.
agitar durante 2 minutos antes de la lectura.] Medir
el potencial de la Solución muestra, en mV, con un
medidor de pH que tenga una reproducibilidad
mínima de ± 0,2 mV, empleando un electrodo es-
pecífico para ion fluoruro y el Electrodo de referen-
cia de calomel modificado. Determinar la cantidad
de flúor en mg por 100 ml de la Solución muestra a
partir de la ecuación obtenida en Curva estándar.
Multiplicar la cantidad por 138,9 para expresar el
resultado como porcentaje. No debe contener me-
nos de 13,9 % y no más de 15,0 % de flúor, calcu-
lado sobre la sustancia seca.
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,002 %.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío sobre pentóxido de fósforo a
80 °C durante 4 horas: no debe perder más de 0,5 %
de su peso.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
to
Fase móvil - Agua. Filtrar y desgasificar.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Fluorouracilo SR-FA en
agua y diluir cuantitativamente y en etapas, si fuera
Solución A - Metanol y agua (55:45). Filtrar y
FLUOXIMESTERONA desgasificar.
Solución B - Metanol. Filtrar y desgasificar.
OH Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
H CH3
OH CH3
lución A y Solución B. Programar el cromatógrafo
del siguiente modo:
CH3 H
Tiempo Solución A Solución B Etapa
F H (min) (%) (%)
0-20 100 60 0 40 Gradiente
O
lineal
20-40 60 0 40 100 Gradiente
C20H29FO3 PM: 336,5 76-43-7 lineal
40-45 0 100 Isocrático
Definición - Fluoximesterona es (11 ,17 )-9- 45-45,1 0 100 100 0 Gradiente
Fluoro-11,17-dihidroxi-17-metilandrost-4-en-3-ona. lineal
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no 45,1-60 100 0 Isocrático
más de 102,0 por ciento de C20H29FO3, calculado
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- Solución blanco - Emplear la Solución B.
guientes especificaciones. Solución muestra - Preparar una solución de
Fluoximesterona en Solución B de aproximadamen-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco te de 0,5 mg por ml.
o casi blanco. Funde a aproximadamente 240 °C, Solución de aptitud del sistema - Diluir cuanti-
con descomposición. Moderadamente soluble en tativamente un volumen de Solución muestra con
alcohol; poco soluble en cloroformo; prácticamente metanol para obtener una solución de aproximada-
insoluble en agua. mente 5 µg por ml.
Sustancia de referencia - Fluoximestero- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
na SR-FA. Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
CONSERVACIÓN miento: la eficiencia de la columna determinada a
En envases inactínicos bien cerrados. partir del pico de fluoximesterona no debe ser me-
nor de 15.000 platos teóricos. Cromatografiar la
ENSAYOS
Solución de aptitud del sistema y registrar las res-
Identificación puestas de los picos según se indica en Procedi-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. miento: la relación señal-ruido para el pico de
[NOTA: en caso de aparecer diferencias, disolver fluoximesterona no debe ser menor de 100.
porciones de la muestra y la Sustancia de referencia Procedimiento - Inyectar por separado en el
en alcohol absoluto, evaporar hasta sequedad y cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
repetir el ensayo sobre los residuos.] 5 µl) de la Solución blanco y la Solución muestra,
B - Absorción ultravioleta <470> registrar los cromatogramas y medir las respuestas
Solvente: alcohol. de los picos que no aparezcan en la Solución blanco
Concentración: 10 µg por ml. que tengan una respuesta igual o mayor a 0,1 % del
Las absortividades a 242 nm no deben di- pico de fluoximesterona. Calcular el porcentaje de
ferir en más de 2,5 %. cada impureza en la porción de Fluoximesterona en
Determinación de la rotación óptica <170> ensayo, en relación a la suma de las respuestas de
Rotación específica: Entre 104° y 112°. todos los picos. No debe contener más de 1,0 % de
Solución muestra: 10 mg por ml, en alcohol. cualquier impureza individual y no más de 2,0 % de
impurezas totales.
Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo Pérdida por secado <680>
para cromatografía de líquidos con un detector Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de más de 1,0 % de su peso.
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida Impurezas orgánicas volátiles <520>
por octadecilsilano químicamente unido a partículas Método III.
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. Mante- Solvente: dimetilsulfóxido.
ner la columna a aproximadamente 40 °C. El cau-
dal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm 4 mm con fase estacionaria constituida por
partículas porosas de sílice de 5 a 10 µm de diáme-
tro.
Fase móvil - Cloruro de n-butilo, agua-cloruro
de n-butilo saturado, tetrahidrofurano, metanol y
ácido acético glacial (475:475:70:35:30). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución del estándar interno - Disolver una
cantidad de Metilprednisolona en una mezcla de
cloroformo y metanol (95:5) para obtener una solu-
ción de aproximadamente 200 µg por ml.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Fluoximesterona SR-FA en
Solución del estándar interno para obtener una
solución de aproximadamente 0,25 mg por ml.
Preparación muestra - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Fluoximesterona en Solu-
ción del estándar interno para obtener una solución
de aproximadamente 0,25 mg por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de
fluoximesterona y del estándar interno no debe ser
menor de 3,0; la desviación estándar relativa de la
relación entre los picos del analito y del estándar
interno para inyecciones repetidas no debe ser ma-
yor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales de la Preparación
estándar y la Preparación muestra, registrar los
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
principales. Calcular la cantidad de C20H29FO3 en
la porción de Fluoximesterona en ensayo.
No más de 0,1 %.
FLURBIPROFENO
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,001 %.
CH3 Sustancias relacionadas
F OH Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
O ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
15 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 4 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
C15H13FO2 PM: 244,3 5104-49-4 Fase móvil - Agua, acetonitrilo y ácido acético
glacial (12:7:1). Filtrar y desgasificar. Hacer los
Definición - Flurbiprofeno es Ácido (±)
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
2-fluoro--metil[1,1'-bifenil]-4-acético. Debe con- Cromatografía).
tener no menos de 99,0 por ciento y no más de Diluyente - Agua y acetonitrilo (11:9).
100,5 por ciento de C15H13FO2, calculado sobre la Solución madre del estándar - Disolver una
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes cantidad exactamente pesada de Impureza A de
especificaciones.
Flurbiprofeno SR-FA en Diluyente para obtener una
Caracteres generales - Polvo cristalino. solución de aproximadamente 0,050 mg por ml.
Fácilmente soluble en acetona, alcohol absoluto, Solución estándar - Diluir 2,0 ml de la Solución
éter y metanol; soluble en acetonitrilo; prácticamen- madre del estándar a 10,0 ml con Diluyente y mez-
te insoluble en agua. clar.
Solución muestra - Preparar una solución de
Sustancias de referencia - Flurbiprofeno Flurbiprofeno en Diluyente para obtener una solu-
SR-FA. Impureza A de Flurbiprofeno SR-FA: ción de aproximadamente 2,0 mg por ml.
ácido 2-(4-bifenilil)propiónico. Solución de resolución - A 2,0 ml de la Solu-
CONSERVACIÓN ción madre del estándar agregar 20,0 mg de Flurbi-
profeno, diluir a 10,0 ml con Diluyente y mezclar.
En envases de cierre perfecto. Aptitud del sistema (ver 100.Cromatografía) -
ENSAYOS Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Identificación cedimiento: la desviación estándar relativa para
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1 %.
B - Absorción ultravioleta <470> Procedimiento - Inyectar por separado en el
Solvente: hidróxido de sodio 0,1 N. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Concentración: 10 µg por ml. 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
El máximo de absorbancia a 247 nm debe tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
ser aproximadamente 0,8. puestas de los picos principales. Los tiempos de
C - Calentar 0,5 ml de una solución saturada de retención relativos deben ser aproximadamente 0,9
trióxido de cromo en ácido sulfúrico dentro de un para impureza A de flurbiprofeno y 1,0 para flurbi-
baño de agua durante 5 minutos: la solución hume- profeno. Calcular el porcentaje de impureza A de
dece las paredes del tubo fácilmente y no hay resi- flurbiprofeno en la porción de Flurbiprofeno, en
duos grasos. Agregar 2 ó 3 mg de Flurbiprofeno y ensayo. No debe contener más de 0,5 % de impure-
calentar en un baño de agua durante 5 minutos: la za A de flurbiprofeno. Calcular el porcentaje de
solución no humedece fácilmente las paredes del cada impureza en la porción de Flurbiprofeno en
tubo ni se vierte con facilidad. ensayo, relacionando la respuesta del pico para cada
Determinación del punto de fusión <260> impureza y la suma de las respuestas de todos los
Entre 114 y 117 °C. picos obtenidos a partir de la Solución muestra: no
debe contener más de 1,0 %de impurezas totales.
Pérdida por secado <680>
VALORACIÓN
Secar al vacío a 60 °C hasta peso constante: no
debe perder más de 0,5 % de su peso. Pesar exactamente alrededor de 0,5 g de Flurbi-
profeno, disolver en 100 ml de alcohol, previamente
Determinación del residuo de ignición <270> neutralizado con hidróxido de sodio 0,1 N (SV)
frente a la fenolftaleína, agregar fenolftaleína (SR)
y titular con hidróxido de sodio 0,1 N (SV) hasta la
primera aparición de un color rosado claro que
persiste no menos de 30 segundos. Realizar una
determinación con un blanco y hacer las correccio-
nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
hidróxido de sodio 0,1 N equivale a 24,43 mg de
C15H13FO2.
mismo solvente. Diluir 1,0 ml de esta solución a
FLUTAMIDA 20,0 ml con Fase móvil.
H Solución estándar B - Diluir 1,0 ml de la Solu-
F3C N O ción estándar a 50,0 ml con Fase móvil. Diluir
2,0 ml de esta solución a 20,0 ml con el mismo
solvente.
O2N H3C CH3 Solución muestra - Disolver 20 mg de Flutami-
da, exactamente pesados, en Fase móvil y diluir a
C11H11F3N2O3 PM:276,2 13311-84-7 20,0 ml con el mismo solvente.
Definición - Flutamida es 2-Metil-N-[4-nitro- Aptitud del sistema - Cromatografiar la Solu-
3-(trifluorometil)fenil]propanamida. Debe contener ción estándar B y registrar las respuestas de los
no menos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por picos según se indica en Procedimiento: ajustar la
ciento de C11H11F3N2O3, calculado sobre la sustan- sensibilidad del sistema de modo tal que la respues-
cia seca y debe cumplir con las siguientes especifi- ta del pico principal obtenido con la Solución
caciones. estándar B sea al menos el 50 % de la escala com-
pleta del registrador. Cromatografiar la Solución
Caracteres generales - Polvo cristalino amari- estándar A y registrar las respuestas de los picos
llo pálido. Fácilmente soluble en acetato de etilo, según se indica en Procedimiento: los tiempos de
acetona y metanol; soluble en cloroformo y éter; retención deben se aproximadamente 19 minutos
prácticamente insoluble en agua, éter de petróleo y para flutamida y 14 minutos para impureza C de
aceites minerales. flutamida; la resolución R entre los picos de impu-
Sustancias de referencia - Flutamida SR-FA. reza C de flutamida y flutamida no debe ser menor
o-Flutamida SR-FA: 2-Metil-N-[6-nitro-3-(trifluo- de 10,5.
rometil)fenil]propanamida. Impureza C de Fluta- Procedimiento - Inyectar por separado en el
mida SR-FA: N-[4-Nitro-3-(trifluorometil)fenil] cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
acetamida. 20 µl) de la Solución estándar B y la Solución
muestra, registrar los cromatogramas durante al
CONSERVACIÓN
menos 1,5 veces el tiempo de retención del pico
En envases inactínicos de cierre perfecto. principal y medir las respuestas de todos los picos.
ENSAYOS En el cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra, la respuesta del pico correspondiente a
Identificación impureza C de flutamida (con un tiempo de reten-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. ción relativo de 0,72) no debe ser mayor que 1,5
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en veces la respuesta del pico principal obtenido con la
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- Solución estándar B (0,3 %); la respuesta de ningún
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- pico, a excepción del pico principal y el pico co-
paración muestra se debe corresponder con el obte- rrespondiente a impureza C de flutamida, no debe
nido con la Preparación estándar. ser mayor que la respuesta del pico principal obte-
Determinación del punto de fusión <260> nido con la Solución estándar B (0,2 %) y la suma
Entre 110 y 114 °C; con un intervalo de fusión de todos los picos, a excepción del pico principal,
no mayor de 2 °C. no debe ser mayor que 2,5 veces la respuesta del
pico principal obtenido con la Solución estándar B
Determinación del residuo de ignición <270> (0,5 %). Ignorar cualquier pico con una respuesta
No más de 0,1 %. menor a 0,25 veces la respuesta del pico principal
Pérdida por secado <680> obtenido con la Solución estándar B.
Secar al vacío a 60 °C durante 3 horas: no debe
perder más de 0,5 % de su peso. VALORACIÓN
Pureza cromatográfica Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Sistema cromatográfico y Fase móvil - Proce- para cromatografía de líquidos con un detector
der según se indica en Valoración, excepto que el ultravioleta ajustado a 240 nm y una columna de
caudal debe ser aproximadamente 0,5 ml por minu- 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
to. por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Solución estándar A - Disolver 2 mg de Fluta- porosas de sílice de 3 a 10 m de diámetro. Mante-
mida SR-FA y 2 mg de Impureza C de Flutami- ner la columna a 25 5 °C. El caudal debe ser
da SR-FA en Fase móvil y diluir a 50 ml con el aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Agua y acetonitrilo (1:1). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 50 mg de Flutamida, previamente secados,
y transferir a un matraz aforado de 250 ml. Agregar
50 ml de acetonitrilo y sonicar hasta disolución.
Agregar 150 ml de agua, mezclar y dejar reposar
hasta que se encuentre a temperatura ambiente.
Completar a volumen con agua y mezclar.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Flutamida SR-FA en 50 ml
de acetonitrilo y diluir cuantitativamente y en eta-
pas, si fuera necesario, para obtener una solución de
aproximadamente 0,2 mg por ml.
Solución de aptitud del sistema - Pesar exacta-
mente alrededor de 50 mg de o-Flutamida SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 50 ml y disolver
en 10 ml de acetonitrilo. Completar a volumen con
agua y mezclar. Transferir 1,0 ml de esta solución a
un matraz aforado de 100 ml, agregar 5,0 ml de la
Preparación estándar, completar a volumen con
una mezcla de agua y acetonitrilo (4:1) y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: los tiempos de retención relati-
vos deben se aproximadamente 1,4 para o-flutamida
y 1,0 para flutamida; la resolución R entre los picos
de o-flutamida y flutamida no debe ser menor de
6,0. Cromatografiar la Preparación estándar y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: el factor de asimetría no debe ser
mayor de 2,0; la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1,5 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C11H11F3N2O3 en la porción de Flutami-
da en ensayo.
Sistema cromatográfico, Solución de ácido
FÓLICO, ÁCIDO fosfórico 3 N, Solución de hidróxido de amonio 6 N,
Fase móvil, Solución del estándar interno, Solución
madre del estándar, Preparación estándar y Apti-
tud del sistema - Proceder según se indica en Valo-
ración.
Solución muestra - Emplear la Solución madre
de la muestra preparada según se indica en Valora-
ción.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
C19H19N7O6 PM: 441,4 59-30-3 aproximadamente 10 µl de la Solución muestra.
Desarrollar los cromatogramas durante al menos
Definición - Ácido Fólico es Ácido N-[4-
[[(2-amino-1,4-dihidro-6-pteridinil)metil]amino]be dos veces el tiempo de retención del ácido fólico.
Registrar los cromatogramas y medir las respuestas
nzoil]-L-glutámico. Debe contener no menos de
97,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de de todos los picos. La suma de las respuestas de
todos los picos, excepto el correspondiente al ácido
C19H19N7O6, calculado sobre la sustancia anhidra y
debe cumplir con las siguientes especificaciones. fólico, no debe ser mayor de 2,0 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Caracteres generales - Polvo cristalino amari-
llo, amarillo pardo o amarillo anaranjado, inodoro. Método II.
Soluble en ácido clorhídrico 3 N caliente, en ácido VALORACIÓN
sulfúrico 2 N caliente y en ácido clorhídrico da
[NOTA: emplear materiales de vidrio inactíni-
soluciones de color amarillo pálido. Fácilmente co].
soluble en soluciones diluidas de hidróxidos y car- Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
bonatos alcalinos; muy poco soluble en agua; inso- para cromatografía de líquidos con un detector
luble en acetona, alcohol, cloroformo y éter. ultravioleta ajustado a 280 nm y una columna de
Sustancia de referencia - Ácido Fóli- 25 cm × 4,0 mm con fase estacionaria constituida
co SR-FA. por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
CONSERVACIÓN
caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minu-
En envases inactínicos bien cerrados. to.
ENSAYOS Solución de ácido fosfórico 3 N - Disolver 9,8 g
de ácido fosfórico en 100 ml de agua.
Identificación Solución de hidróxido de amonio 6 N - Diluir
A - Absorción ultravioleta <470> 40 ml de hidróxido de amonio a 100 ml con agua.
Solvente: solución de hidróxido de sodio Fase móvil - Transferir 2,0 g de fosfato mono-
1 en 250. básico de potasio a un matraz aforado de 1 litro y
Concentración: 10 µg por ml. disolver en aproximadamente 650 ml de agua.
Relación de absorbancias: A256 / A365 entre Agregar 15,0 ml de solución de hidróxido de tetra-
2,80 y 3,00. butilamonio 0,5 M en metanol, 7,0 ml de Solución
B - Disolver 250 mg de Ácido Fólico en de ácido fosfórico 3 N y 270 ml de metanol. Enfriar
hidróxido de sodio 0,1 N y diluir a 25 ml con el a temperatura ambiente y ajustar a pH 5,0 con Solu-
mismo solvente. La rotación específica (ver 170. ción de ácido fosfórico 3 N o Solución de hidróxido
Determinación de la rotación óptica) debe ser de amonio 6 N. Completar a volumen con agua,
aproximadamente + 20°, calculada con respecto a la mezclar y filtrar. [NOTA: controlar el pH antes de
sustancia anhidra. usar.]
Determinación de agua <120> Solución del estándar interno - Disolver
Titulación volumétrica directa. Agitar el meta- aproximadamente 50 mg de metilparabeno en
nol antes, durante el agregado de la muestra y en la 1,0 ml de metanol, diluir a 25,0 ml con Fase móvil
determinación. No más de 8,5 %. y mezclar.
Solución madre del estándar - Preparar una so-
Determinación del residuo de ignición <270> lución de Ácido Fólico SR-FA en Fase móvil de
No más de 0,3 %. aproximadamente 1 mg por ml. [NOTA: para di-
Pureza cromatográfica solver el Ácido Fólico emplear 1 ml de hidróxido
[NOTA: emplear materiales de vidrio inactíni- de amonio al 10 % por cada 100 ml de la Solución
co]. madre del estándar.]
Preparación estándar - Transferir 4,0 ml de la
Solución madre del estándar a un matraz aforado de
50 ml, agregar 4,0 ml de Solución del estándar
interno, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Solución madre de la muestra - Pesar exacta-
mente alrededor de 100 mg de Ácido Fólico, trans-
ferir a un matraz aforado de 100 ml y agregar
aproximadamente 40 ml de Fase móvil y 1 ml de
hidróxido de amonio al 10 %. Completar a volu-
men con Fase móvil y mezclar.
Preparación muestra - Transferir 4,0 ml de la
Solución madre de la muestra a un matraz aforado
de 50 ml, agregar 4,0 ml de la Solución del estándar
interno, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
los cromatogramas según se indica en Procedimien-
to: la resolución R entre los picos de metilparabeno
y ácido fólico no debe ser menor de 3,6; la desvia-
ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C19H19N7O6 en la porción de Ácido
Fólico en ensayo.
Solución estándar - Disolver 25 mg de fosfono-
FOSCARNET SÓDICO formiato de trietilo en alcohol absoluto y diluir a
HEXAHIDRATO 100 ml con el mismo solvente. Diluir 1,0 ml de
esta solución a 10 ml con alcohol absoluto.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
O cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
NaO
NaO P ONa . 6 H2O 3 µl) de la Solución estándar y la Solución muestra,
registrar los cromatogramas y medir las respuestas
O de todos los picos: en el cromatograma obtenido a
partir de la Solución muestra, la respuesta del pico
CNa3O5P . 6H2O PM: 300,0 correspondiente a Impureza D de Foscarnet me-
til(dietoxifosforil)formiato no debe ser mayor a la
CNa3O5P PM: 192,0 63585-09-1
respuesta del pico obtenido con la Solución están-
dar (0,1 %).
Definición - Foscarnet Sódico Hexahidrato es
Fosfonatoformiato trisódico hexahidrato. Debe Sustancias relacionadas
contener no menos de 98,5 por ciento y no más de Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
101,0 por ciento de CNa3O5P, calculado sobre la para cromatografía de líquidos con un detector
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
especificaciones. 10 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
o casi blanco. Soluble en agua; prácticamente inso- porosas de sílice de 3 m de diámetro. El caudal
luble en alcohol. debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Solución A - Transferir 3,22 g de fosfato de so-
Sustancias de referencia - Foscarnet Sódico dio a un matraz aforado de 1 litro y disolver en
Hexahidrato SR-FA. Impureza B de Foscar- agua. Agregar 3 ml de ácido acético glacial y 6 ml
net SR-FA: (Etoxicarbonil)fosfonato sódico de de una solución de pirofosfato de sodio de aproxi-
etilo. madamente 44,61 g por litro. Completar a volumen
CONSERVACIÓN con agua y mezclar.
Solución B - Transferir 3,22 g de fosfato de so-
En envases inactínicos bien cerrados. dio a un matraz aforado de 1 litro y disolver en
ENSAYOS agua. Agregar 6,8 g de acetato de sodio y 6 ml de
una solución de pirofosfato de sodio de aproxima-
Identificación damente 44,61 g por litro. Completar a volumen
A - Absorción infrarroja <460>. En Fase sólida.
con agua y mezclar.
B - Debe responder a los ensayos para So- Fase móvil - Mezclar 700 ml de Solución A y
dio <410>.
300 ml de Solución B [NOTA: esta solución tiene
Determinación del pH <250> un pH de aproximadamente 4,4]. A 1 litro de esta
Entre 9,0 y 11,0; determinado sobre una solu- solución, agregar 0,25 g de sulfato ácido de tetra-
ción de aproximadamente 20 mg por ml. hexilamonio y 100 ml de metanol. Filtrar y desga-
sificar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud
Límite de Impureza D
del sistema en 100. Cromatografía).
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Solución muestra - Disolver 25 mg de Foscar-
para cromatografía de gases con un detector de
net Sódico Hexahidrato en Fase móvil y diluir a
ionización a la llama, un inyector de flujo dividido
10 ml con el mismo solvente.
1:20 y una columna de 25 m × 0,31 mm recubierta
Solución estándar A - Diluir 1,0 ml de Solución
con una película de 0,5 µm de una fase estacionaria
muestra a 50 ml con Fase móvil. Diluir 1,0 ml de
constituida por poli(dimetil)(difenil)(divinil)siloxa-
esta solución a 10 ml con el mismo solvente.
no. Mantener el inyector y el detector aproxima-
Solución estándar B - Disolver 5 mg de Impu-
damente a 200 y 250 °C, respectivamente. Aumen-
reza B de Foscarnet SR-FA en Fase móvil, agregar
tar la temperatura de la columna de 100 a 180 °C, a
2,0 ml de Solución muestra y diluir a 50 ml con el
razón de 10 °C por minuto. Se debe emplear helio
mismo solvente.
como gas transportador.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Solución muestra - Disolver 250 mg de Foscar-
Cromatografiar la Solución estándar B durante
net Sódico Hexahidrato en 9,0 ml de ácido acéti-
aproximadamente 2,5 veces el tiempo de retención
co 0,1 M. Agregar 1,0 ml de alcohol absoluto y
de foscarnet y registrar las respuestas de los picos
mezclar.
según se indica en Procedimiento: la resolución R la relación señal-ruido para el pico principal no
entre los picos de foscarnet e impureza B de foscar- debe ser menor de 10.
net no debe ser menor de 7,0. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Procedimiento - Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 20 µl) de la Solución muestra y la Solución están-
20 µl) de la Solución muestra y la Solución están- dar C, registrar los cromatogramas y medir las
dar A, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos: en el cromatograma
respuestas de todos los picos: a excepción del pico obtenido a partir de la Solución muestra, las res-
principal en el cromatograma obtenido a partir de la puestas de los picos correspondientes al fosfato y al
Solución muestra, la respuesta de ningún pico debe fosfito no deben ser mayores que las obtenidas con
ser mayor que la respuesta del pico principal obte- la Solución estándar C, respectivamente (0,3 %, en
nido con la Solución estándar A (0,2 %); y la suma ambos casos).
de las respuestas de todos los picos, a excepción del
Metales pesados
pico principal, no debe ser mayor que dos veces la
Solución madre de la muestra - Disolver 1,25 g
respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
de Foscarnet Sódico Hexahidrato en 12,5 ml de
ción estándar A (0,4 %). Ignorar cualquier pico con
ácido clorhídrico 1 N. Calentar en un baño de agua
un tiempo de retención relativo menor a 0,6 y cual-
durante 3 minutos y enfriar a temperatura ambiente.
quier pico con una respuesta menor a 0,2 veces la
Transferir esta solución a un vaso de precipitados y
respuesta del pico principal en la Solución están-
ajustar a pH 3,5 con amoníaco diluido. Diluir a
dar A.
25 ml con agua y mezclar.
Fosfato y fosfito Solución muestra - A 12 ml de Solución madre
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo de la muestra agregar 2,0 ml de solución reguladora
para cromatografía de líquidos con un detector de acetato pH 3,5 (ver 590. Límite de metales pesa-
ultravioleta ajustado a 290 nm (detección indirecta) dos).
y una columna de 5 cm 4,6 mm con fase estacio- Solución estándar - A 5,0 ml de Solución
naria constituida por una resina de intercambio estándar de plomo (1 ppm)(ver 590. Límite de me-
aniónico. El caudal debe ser aproximadamente tales pesados), agregar 5,0 ml de agua, 2,0 ml de
1,4 ml por minuto. solución reguladora de acetato pH 3,5 (ver 590.
Fase móvil - Transferir 102 mg de ftalato ácido Límite de metales pesados) y 2,0 ml de Solución
de potasio a un matraz aforado de 1 litro, disolver madre de la muestra.
en agua, agregar 2,5 ml de ácido nítrico 1 M y Procedimiento - Inmediatamente luego de pre-
completar a volumen con agua. Filtrar y desgasifi- parada la Solución muestra y la Solución estándar,
car. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del transferirlas a sendos tubos de Nessler que conten-
sistema en 100. Cromatografía). gan 1 gota de sulfuro de sodio (SR1): la Solución
Solución muestra - Disolver 60,0 mg de Fos- muestra no debe ser más intensamente coloreada
carnet Sódico Hexahidrato en agua y diluir a 25 ml que la Solución estándar (10 ppm).
con el mismo solvente.
Pérdida por secado <680>
Solución estándar A - Disolver 28 mg de fosfa-
Secar a 150 °C: debe perder entre 35,0 y 37,0 %
to monobásico de sodio en agua y diluir a 100 ml
de su peso.
con el mismo solvente.
Solución estándar B - Disolver 43 mg de fosfito Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
sódico en agua y diluir a 100 ml con el mismo sol- Cuando Foscarnet Sódico Hexahidrato esté des-
vente. tinado a la administración parenteral, no debe con-
Solución estándar C - Diluir 1,0 ml de Solución tener más de 83,3 Unidades de Endotoxina por mg.
estándar A y 1,0 ml de Solución estándar B a 25 ml VALORACIÓN
con agua.
Solución estándar D - Diluir 3,0 ml de Solución Pesar exactamente alrededor de 180 mg de Fos-
estándar A y 3,0 ml de Solución estándar B a 25 ml carnet Sódico Hexahidrato y disolver en 50 ml de
con agua. agua. Titular con ácido sulfúrico 0,05 M (SV),
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - determinando el punto final potenciométricamente
Cromatografiar la Solución estándar D y registrar hasta el primer punto de inflexión (ver 780. Volu-
las respuestas de los picos según se indica en Pro- metría). Cada ml de ácido sulfúrico 0,05 M equiva-
cedimiento: la resolución R entre los picos de fosfa- le a 19,20 mg de CNa3O5P.
to (primer pico) y fosfito no debe ser menor de 2,0;
Preparación estándar - Disolver una cantidad
FURAZOLIDONA exactamente pesada de Furazolidona SR-FA en
dimetilformamida para obtener una solución de
O aproximadamente 400 µg por ml. Transferir 5,0 ml
de esta solución a un matraz aforado de 250 ml,
O O
O2N completar a volumen con agua y mezclar.
N N
Procedimiento - Determinar las absorbancias de
la Preparación muestra y la Preparación estándar
bajo luz ultravioleta (ver 470. Espectrofotometría
C8H7N3O5 PM: 225,2 67-45-8 ultravioleta y visible) en celdas de 1 cm, a la longi-
Definición - Furazolidona es 3-[[(5-Nitro- tud de onda de máxima absorción, 367 nm, emple-
2-furanil)metilen]amino]-2-oxazolidinona. Debe ando una solución de dimetilformamida 1 en 50
contener no menos de 97,0 por ciento y no más de como blanco. Calcular la cantidad en mg de
103,0 por ciento de C8H7N3O5, calculado sobre la C8H7N3O5 en la porción de Furazolidona en ensayo.
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
especificaciones.
Caracteres generales - Polvo cristalino amari-
llo. Prácticamente insoluble en agua, alcohol y
tetracloruro de carbono.
Sustancia de referencia - Furazolido-
na SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto, evi-
tando la exposición directa a la luz solar.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
[NOTA: secar previamente la muestra].
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: agua
Concentración: 10 µg por ml
C - Agregar aproximadamente 50 mg de Fura-
zolidona a una mezcla recientemente preparada de
dimetilformamida e hidróxido de potasio alcoholi-
co (SR) (9:1): la solución debe tornarse púrpura,
cambiar inmediatamente a un color azul profundo y,
luego de 10 minutos, tornarse púrpura nuevamente.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,25 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 100 °C durante 1 hora: no debe perder
más de 1,0 % de su peso.
VALORACIÓN
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Furazolidona, transferir a un
matraz aforado de 250 ml, disolver y completar a
volumen con dimetilformamida y mezclar. Trans-
ferir 5,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
250 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Agregar 1 ml de una solución de clorhidrato de
FUROSEMIDA N-(1-Naftil)etilendiamina al 0,5 % p/v: se debe
producir un color rojo-violeta.
HO
Sustancias relacionadas
O
[NOTA: preparar las soluciones inmediatamente
O antes de su uso y protegerlas de la luz].
H2N S NH O Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
O
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 238 nm y una columna de
Cl
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
C12H11ClN2O5S PM: 330,7 54-31-9 porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
Definición - Furosemida es Ácido debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Disolver 200 mg de fosfato mono-
5-(aminosulfonil)-4-cloro-2-[(2-furanilmetil)amino]
benzoico. Debe contener no menos de 98,5 por básico de potasio y 250 mg de cetrimida en 70 ml
de agua. Ajustar a pH 7,0 con amoníaco y agregar
ciento y no más de 101,0 por ciento de
C12H11ClN2O5S, calculado sobre la sustancia seca y 30 ml de alcohol propílico.
Solución muestra - Disolver 50 mg de Furose-
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
mida en Fase móvil y diluir a 50 ml con la misma
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco fase.
o casi blanco. Funde aproximadamente a 210 ºC, Solución estándar A - Disolver 20 mg de Impu-
con descomposición. Se disuelve en soluciones reza A de Furosemida SR-FA en Fase móvil y diluir
diluidas de hidróxidos alcalinos. Soluble en aceto- a 20 ml con la misma fase.
na; moderadamente soluble en alcohol; práctica- Solución estándar B - Diluir una mezcla de
mente insoluble en agua y cloruro de metileno. 1,0 ml de Solución muestra y 1,0 ml de Solución
Presenta polimorfismo. estándar A a 20 ml con Fase móvil. Diluir 1,0 ml
Sustancias de referencia - Furosemida SR-FA. de esta solución a 20 ml con Fase móvil.
Impureza A de Furosemida SR-FA: Ácido 2-cloro- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
4-[(2-furilmetil)amino]-5-sulfamoilbenzoico. Cromatografiar la Solución estándar B y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
CONSERVACIÓN cedimiento: la resolución R entre los picos de impu-
En envases inactínicos de cierre perfecto. reza A de furosemida (primer pico) y furosemida
(segundo pico) no debe ser menor de 4.
ENSAYOS Procedimiento - Inyectar por separado en el
Identificación cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 20 µl) de la Solución estándar B y la Solución
B - Disolver 50 mg de Furosemida en hidróxido muestra, registrar los cromatogramas durante tres
de sodio al 0,4 % p/v y diluir a 100 ml con el mis- veces el tiempo de retención del pico principal y
mo solvente. Diluir 1 ml de esta solución a 100 ml medir la respuesta de todos los picos. A excepción
con hidróxido de sodio al 0,4 % p/v y examinar del pico principal en el cromatograma obtenido a
entre 220 y 350 nm (ver 470. Espectrofotometría partir de la Solución muestra, la respuesta de
ultravioleta y visible): la solución debe presentar ningún pico debe ser mayor que la respuesta del
tres máximos de absorción a 228, 270 y 333 nm y la primer pico obtenido con la Solución estándar B
relación entre el máximo de absorbancia a 270 nm y (0,25 %) y la suma de las respuestas de todos los
el máximo de absorbancia a 228 nm debe estar picos, a excepción del pico principal, no debe ser
comprendida entre 0,52 y 0,57. mayor que dos veces la respuesta del primer pico en
C - Disolver 25 mg de Furosemida en 10 ml de el cromatograma obtenido con la Solución estándar
alcohol. A 5 ml de esta solución agregar 10 ml de B (0,5 %). Ignorar cualquier pico con una respuesta
agua. A 0,2 ml de esta solución agregar 10 ml de menor a 0,1 vez la respuesta del primer pico en el
ácido clorhídrico al 7,3 % p/v y calentar a reflujo cromatograma obtenido con la Solución estándar B.
empleando un refrigerante durante 15 minutos. Pérdida por secado <680>
Enfriar y agregar 18 ml de hidróxido de sodio 1 N y Secar entre 100 y 105 ºC: no debe perder más de
una solución de nitrito de sodio al 0,5 % p/v. Dejar 0,5 % de su peso.
en reposo durante 3 minutos y agregar 2 ml de
solución de ácido sulfámico al 2,5 % p/v y mezclar. Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de metales pesados <590>
Método VI. Preparar la Solución muestra a par-
tir de 1,0 g de Furosemida y la Solución estándar
empleando 2 ml de Solución estándar de plomo
(10 ppm). El límite es 0,002 %.
Límite de cloruro
Solución muestra - Agregar 0,5 g de Furosemi-
da a una mezcla de 0,2 ml de ácido nítrico y 30 ml
de agua y agitar durante 5 minutos. Dejar en reposo
durante 15 minutos y filtrar.
Procedimiento - A 15 ml de Solución muestra
agregar 1 ml de ácido nítrico al 12,5 %. Transferir
esta mezcla a un tubo de Nessler que contenga 1 ml
de nitrato de plata (SR) y proteger de la luz. Proce-
der del mismo modo con control preparado a partir
de 5 ml de agua y 10 ml de solución de cloruro
(5 ppm) (SL) y examinar los tubos lateralmente
sobre fondo negro. Luego de 5 minutos, si la Solu-
ción muestra presenta opalescencia, esta no debe
ser más intensa que la del control (200 ppm).
Límite de sulfato
Solución muestra - - Agregar 1,0 g de Furose-
mida una mezcla de 0,2 ml de ácido acético y 30 ml
de agua y agitar durante 5 minutos. Dejar en reposo
durante 15 minutos y filtrar.
Procedimiento - A 1,5 ml de solución de sulfato
(10 ppm) (SL1) agregar 1 ml de cloruro de bario al
25 %, agitar y dejar reposar durante 1 minuto.
Agregar 15 ml de Solución muestra y 0,5 ml de
ácido acético. Proceder del mismo modo con unn
control preparado a partir de 15 ml de solución de
sulfato (10 ppm) (SL). Luego de 5 minutos, si la
Solución muestra presenta opalescencia, esta no
debe ser más intensa que la del control (300 ppm).
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Fu-
rosemida y disolver en 20 ml de dimetilformamida.
Titular con hidróxido de sodio 0,1 N (SV), emple-
ando 0,2 ml de azul de bromotimol (SR1) como
indicador. Realizar una determinación con un blan-
co y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Volumetría). Cada ml de hidróxido de sodio 0,1 N
equivale a 33,07 mg de C12H11ClN2O5S.
GELATINA Dióxido de azufre
Transferir 20,0 g de Gelatina a un balón de cuello
Definición - Gelatina es el producto obtenido de largo, disolver con 150 ml de agua caliente, agregar
la hidrólisis parcial del colágeno de la piel, tejido co- 5 ml de ácido fosfórico, 1 g de bicarbonato de sodio y
nectivo y huesos de animales. Gelatina obtenida a unas pocas gotas de agente antiespuma, si fuera nece-
partir de un tejido precursor por tratamiento ácido es sario. Conectar a un refrigerante dispuesto de modo
conocida como Tipo A y la obtenida por tratamiento que la extremidad inferior del mismo, cortada a bisel,
con álcali es conocida como Tipo B. Al ser usada en se apoye en el fondo de un recipiente que contenga
cápsulas y cubiertas puede ser coloreada por coloran- 50 ml de una solución de iodo 0,1 N y destilar 50 ml.
tes certificados, puede contener no más de 0,15 por Acidificar el destilado con unas pocas gotas de ácido
ciento de dióxido de azufre y puede contener una clorhídrico, agregar 2 ml de cloruro de bario (SR) y
concentración apropiada de lauril sulfato de sodio y calentar en un baño de vapor hasta que el líquido
agentes antimicrobianos. Gelatina debe cumplir con obtenido sea incoloro. Si se observa la presencia de un
las siguientes especificaciones. precipitado, filtrar y lavar el mismo, someter a ignición
Caracteres generales - Láminas, escamas o y pesar. El peso del residuo no debe ser mayor a
fragmentos, o polvo grueso a fino, ligeramente amari- 3 mg, correspondientes a no más de 0,004 % de di-
llo o ámbar y su intensidad de color varía según el óxido de azufre [NOTA: realizar la corrección del
tamaño de partícula. Estable al aire cuando está seca, sulfato presente en los 50 ml de iodo 0,1 N]. Gelatina
y puede tener descomposición microbiana al estar usada en la obtención de cápsulas o cubiertas no debe
humedecida y en solución. Gelatina Tipo A presenta contener más de 109,3 mg de sulfato de bario, corres-
un punto isoeléctrico entre pH 7 y 9; y Gelatina Tipo pondientes a no más de 0,15 % de dióxido de azufre.
B presenta un punto isoeléctrico entre pH 4,7 y 5,2. Límite de metales pesados <590>
Se hincha y se ablanda al sumergirla en agua y absorbe Método I. Al residuo obtenido en 270. Determi-
gradualmente de 5 a 10 veces su propio peso en agua. nación del residuo de ignición, agregar 2 ml de ácido
Soluble en ácido acético 6 N, agua caliente y en una clorhídrico y 0,5 ml de ácido nítrico, y evaporar en un
mezcla caliente de glicerina y agua; insoluble en acei- baño de vapor hasta sequedad. Agregar 1 ml de ácido
tes volátiles, alcohol, cloroformo y éter. clorhídrico 1 N y 15 ml de agua y calentar durante
CONSERVACIÓN algunos minutos. Filtrar y lavar con agua hasta obte-
ner 100 ml del filtrado. Diluir 8 ml de esta solución
En envases bien cerrados, en un lugar seco. hasta obtener 25 ml con agua: el límite es 50 ppm.
ENSAYOS Límite de arsénico <540>
Identificación Solución de pepsina - Transferir 0,5 g de pepsina
A - Disolver 1 g de Gelatina en 100 ml de agua a un matraz aforado de 100 ml, disolver en 80 ml de
caliente, agregar 20 ml de una mezcla de dicromato de ácido clorhídrico 0,1 N, completar a volumen con el
potasio 0,2 M y ácido clorhídrico 3 N (4:1): se debe mismo solvente y mezclar.
formar un precipitado amarillo. Solución estándar - Transferir 3,0 ml de Solución
B - Preparar una solución en agua caliente de estándar de arsénico a un generador de arsina y diluir
0,2 mg de Gelatina por ml y agregar ácido tánico a 52 ml con Solución de pepsina. Agregar 3 ml de
(SR): se debe producir turbidez. ácido clorhídrico y 4 ml de alcohol isopropílico y
mezclar.
Determinación del residuo de ignición <270> Solución muestra - Mezclar 3,75 g de gelatina con
Someter a ignición 5,0 g de Gelatina sin usar ácido 40 ml de Solución de pepsina en un generador de
sulfúrico, agregando 1,5 a 2,0 g de parafina para evitar arsina, calentar cuidadosamente a una temperatura
la formación de globos y pérdida de material, comple- comprendida entre 65 y 70 ºC durante 10 minutos y
tar la ignición en una mufla a 550 ºC durante 15 a sonicar esta solución durante 2 minutos. Repetir dos
20 horas: el peso del residuo no debe ser mayor de veces más el calentamiento y sonicado. Enfriar, lavar
2,0 %. los costados del generador de arsina con Solución de
Olores y sustancias insolubles en agua pepsina y diluir a 52 ml con la misma solución. Agre-
Preparar una solución de Gelatina 1 en 40 en agua gar 3 ml de ácido clorhídrico, 4 ml de alcohol iso-
caliente: no debe presentar olor desagradable. Obser- propílico y mezclar.
var a través de una capa de dicha solución, de 2 cm de Procedimiento - Proceder según se indica en
espesor: debe presentar una ligera opalescencia. Método I omitiendo el agregado de 20 ml de ácido
sulfúrico 7 N y de 1 ml de alcohol isopropílico a la
Solución estándar y a la Solución muestra. El límite
es 0,8 ppm.
Control higiénico de productos no obligatoria-
mente estériles <90>
El recuento de aerobios viables totales no debe ser
mayor de 103 por gramo y debe cumplir con los requi-
sitos del Ensayo para Salmonella ssp. y Escherichia
coli.
Secar al vacío a una presión que no exceda los
GENTAMICINA, 5 mm Hg, a 110 °C durante 3 horas: no debe perder
SULFATO DE más de 18,0 % de su peso.
Límite de metanol
NH2 Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
NH2 para cromatografía de gases con un detector de
H2N
OH ionización a la llama y una columna de
O 1,5 m × 4 mm con un soporte constituido por un
O O CH3
x H2SO4 copolímero de etilvinilbenceno y divinilbenceno
O OH
con un área superficial nominal de 500 a 600 m2 por
R OH
gramo y un diámetro de poro promedio de
0,0075 µm. Mantener la columna a temperatura
HN
CH3 constante entre 120 y 140 °C y el inyector y el de-
tector a temperatura constante, al menos 50 °C por
Gentamicina R encima de la temperatura de la columna. Se debe
C1A CH2NH2
emplear nitrógeno como gas transportador con un
caudal entre 30 y 40 ml por minuto.
C2 CH(CH3)NH2 Solución del estándar interno - Transferir
CH(CH3)NHCH3
2,5 ml de alcohol n-propílico a un matraz aforado
C1
de 500 ml, completar a volumen con agua y mez-
1405-41-0 clar.
Definición - Sulfato de Gentamicina es una Solución estándar - Transferir 1,25 ml de meta-
mezcla de sulfatos de sustancias antibióticas produ- nol y 1,25 ml de alcohol n-propílico a un matraz
cidas por el crecimiento de Micromonospora pur- aforado de 500 ml, completar a volumen con agua y
purea. Debe tener una potencia equivalente a no mezclar para obtener una solución que contenga
menos de 590 µg de gentamicina por mg, calculada 0,25 % de metanol y 0,25 % de alcohol n-propílico.
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- Solución control - Disolver 500 mg de Sulfato
guientes especificaciones. de Gentamicina en 2,0 ml de agua.
Solución muestra - Disolver 500 mg de Sulfato
Caracteres generales - Polvo blanco o casi de Gentamicina en 1,0 ml de Solución del estándar
blanco. Fácilmente soluble en agua; insoluble en interno, agregar 1,0 ml de agua y mezclar.
alcohol, acetona, cloroformo y éter. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Sustancia de referencia - Sulfato de Gentami- Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
cina SR-FA. respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: la resolución R entre los picos de alcohol
CONSERVACIÓN n-propílico y metanol no debe ser menor de 1,0.
En envases de cierre perfecto. Cromatografiar la Solución control y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
ENSAYOS miento: si se observa algún pico a un tiempo de
Identificación retención similar al de alcohol n-propílico, emplear
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. la respuesta de ese pico para corregir la respuesta de
B - Debe responder a los ensayos para Sulfa- los picos de alcohol n-propílico en el cromatograma
to <410>. obtenido con la Solución muestra.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Determinación de la rotación óptica <170>
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Rotación específica: Entre +107° y +121°.
2 µl) de la Solución estándar y la Solución muestra,
Solución muestra: 10 mg por ml, en agua.
registrar los cromatogramas y medir las respuestas
Determinación del pH <250> de los picos de alcohol n-propílico y de metanol.
Entre 3,5 y 5,5; determinado sobre una solución Calcular el porcentaje de metanol en la porción de
1 en 25. Sulfato de Gentamicina en ensayo, por la fórmula
siguiente:
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 1,0 %. 1,58(P/M)(RM/RE)
Pérdida por secado <680> en la cual P es el porcentaje (v/v) de metanol en la
Solución estándar, M es la cantidad en g de Sulfato
de Gentamicina empleado para preparar la Solución Procedimiento - Inyectar por separado en el
muestra, RM es el cociente entre la respuesta del cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
pico de metanol y la respuesta del pico de alcohol 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
n-propílico (corregido, si fuera necesario, restando tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
la respuesta de cualquier pico observado en el cro- puestas de los picos principales. El orden de elu-
matograma de la Solución control que aparezca al ción es: Gentamicina C1, Gentamicina C1a, Genta-
tiempo de retención del pico de alcohol n-propílico) micina C2a y Gentamicina C2. Calcular los porcen-
en el cromatograma obtenido con la Solución mues- tajes de Gentamicina C1, Gentamicina C1a, Genta-
tra y RE es el cociente entre la respuesta del pico de micina C2a y Gentamicina C2, en la porción de Sul-
metanol y la respuesta del pico de alcohol fato de Gentamicina en ensayo, por la fórmula si-
n-propílico en el cromatograma obtenido a partir de guiente:
la Solución estándar. No debe contener más de
1,0 % de metanol. 100rf /rE
Contenido de gentamicinas en la cual rf es la respuesta de cada uno de los picos
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo correspondientes a las diferentes gentamicinas y rE
para cromatografía de líquidos con un detector es la suma de las respuestas de los cuatro picos: el
ultravioleta ajustado a 330 nm y una columna de contenido de Gentamicina C1 debe estar compren-
10 cm × 5 mm con fase estacionaria constituida por dido entre 25 y 50 %, el contenido de Gentamicina
octadecilsilano químicamente unido a partículas C1a entre 10 y 35 % y la suma del contenido de
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal Gentamicina C2a y C2 entre 25 y 55 %.
debe ser aproximadamente 1,5 ml por minuto. Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Solución de o-ftalaldehído - Disolver 1,0 g de Cuando en el rótulo se indique que el Sulfato de
o-ftalaldehído en 5 ml de metanol y agregar 95 ml Gentamicina es estéril, no debe contener más de
de ácido bórico 0,4 M, ajustado a pH 10,4 con 0,71 Unidades de Endotoxina por mg de Gentami-
hidróxido de potasio 8 N, y 2 ml de ácido tioglicóli- cina.
co. Ajustar a pH 10,4 con hidróxido de potasio 8 N.
Fase móvil - Mezclar 700 ml de metanol, Ensayos de esterilidad <370>
250 ml de agua y 50 ml de ácido acético glacial. Cuando en el rótulo se indique que el Sulfato de
Disolver 5 g de 1-heptanosulfonato de sodio en esta Gentamicina es estéril debe cumplir con los requisi-
solución. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud tos.
del sistema en 100. Cromatografía). VALORACIÓN
Solución estándar - Preparar una solución de
Sulfato de Gentamicina SR-FA en agua de aproxi- Proceder según se indica en <770>. Valoración
madamente 0,65 mg por ml. Transferir 10 ml de microbiológica de antibióticos.
esta solución a un tubo de ensayo, agregar 5 ml de ROTULADO
alcohol isopropílico y 4 ml de Solución de
o-ftalaldelhído, mezclar y agregar alcohol isopropí- Cuando el Sulfato de Gentamicina esté destina-
lico para obtener 25 ml. Calentar a 60 °C en un do a la preparación de formas farmacéuticas inyec-
baño de agua durante 15 minutos y enfriar. tables, en el rótulo se debe indicar que es estéril.
Solución muestra - Proceder según se indica pa-
ra Solución estándar, empleando Sulfato de Genta-
micina.
Aptitud del sistema ( ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
miento: el factor de capacidad determinado para el
pico de Gentamicina C1 debe estar comprendido
entre 2 y 7; la eficiencia de la columna determinada
para el pico de Gentamicina C2 no debe ser menor
de 1.200 platos teóricos; la resolución R entre los
picos de Gentamicina C1 y Gentamicina C2 no debe
ser menor de 1,25; la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
2,0 %.
550 ml de acetonitrilo. Filtrar y desgasificar. Ajus-
GLIBENCLAMIDA tar a pH 5,25 ± 0,30 con ácido fosfórico o hidróxido
de sodio. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud
O O O del sistema en 100. Cromatografía).
Cl S Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
NH NH
de 10 mg de Glibenclamida y disolver con agitación
O N
en 10 ml de acetonitrilo. Agregar 4 ml de agua y
OCH3 H mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
C23H28ClN3O5S PM: 494,0 10238-21-8 Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
Sinonimia - Gliburida. miento: la eficiencia de la columna no debe ser
menor de 3.500 platos teóricos.
Definición - Glibenclamida es 5-Cloro-N-[2-[4- Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
[[[(ciclohexilamino)carbonil]amino]sulfonil]fenil] aproximadamente 20 µl de la Solución muestra,
etil]-2-metoxibenzamida. Debe contener no menos registrar el cromatograma y medir las respuestas de
de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de los picos principales. Calcular el porcentaje de
C23H28ClN3O5S, calculado sobre la sustancia seca y cada impureza en la porción de Glibenclamida en
debe cumplir con las siguientes especificaciones. ensayo, en relación a la suma de las respuestas de
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco todos los picos. No debe contener más de 1,5 % de
o casi blanco. Se disuelve en soluciones diluidas de cualquier impureza que eluya antes que glibencla-
hidróxidos alcalinos. Moderadamente soluble en mida, no debe contener más de 0,5 % de cualquier
cloruro de metileno; poco soluble en alcohol y otra impureza individual y no debe contener más de
metanol; prácticamente insoluble en agua y éter. 2,0 % de impurezas totales.
Presenta polimorfismo. Límite de metales pesados <590>
Sustancia de referencia - Glibenclami- Método II. No más de 0,002 %.
da SR-FA. Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 6 horas: no debe perder
CONSERVACIÓN más de 1,0 % de su peso.
En envases de cierre perfecto.
VALORACIÓN
ENSAYOS
Pesar exactamente alrededor de 400 mg de Gli-
Identificación
benclamida y disolver en 100 ml de alcohol, calen-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión.
tando suavemente para favorecer la disolución.
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en
Agregar 1 ml de fenolftaleína (SR) y titular con
Valoración. El tiempo de retención, relativo al
hidróxido de sodio 0,1 N (SV) hasta punto final
estándar interno, del pico principal en el cromato-
rosado. Realizar una determinación con un blanco
grama obtenido a partir de la Preparación muestra
y hacer las correcciones necesarias (ver 780. Volu-
se debe corresponder con el obtenido con la Prepa-
metría). Cada ml de hidróxido de sodio 0,1 N equi-
ración estándar.
vale a 49,40 mg de C23H28ClN3O5S.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,5 %.
Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octilsilano unido químicamente a partículas
totalmente porosas de sílice de 3 a 10 µm de diáme-
tro. El caudal debe ser aproximadamente 2,0 ml
por minuto.
Fase móvil - Disolver 2,6 g de fosfato mono-
básico de amonio en 450 ml de agua y agregar
Calentar 50 g de Glicerina en un crisol de por-
GLICERINA celana hasta ignición y dejar calcinar protegido de
la corriente de aire. Enfriar, humedecer el residuo
HO OH
obtenido con 0,5 ml de ácido sulfúrico y someter a
OH ignición hasta peso constante: el peso del residuo
obtenido no debe ser mayor de 5 mg (0,01 %).
C3H8O3 PM: 92,1 56-81-
5 Límite de cloruro y sulfato <560>
Cloruro - Una porción de 7,0 g de Glicerina
Sinonimia - Glicerol.
no debe contener más cloruro que el correspon-
Definición - Glicerina es 1,2,3-Propanotriol. diente a 0,10 ml de ácido clorhídrico 0,020 N
Debe contener no menos de 99,0 por ciento y no (0,001 %).
más de 101,0 por ciento de C3H8O3, calculado so- Sulfato - Una porción de 10 g de Glicerina no
bre la sustancia anhidra, y debe cumplir con las si- debe contener más sulfato que el correspondiente a
guientes especificaciones. 0,20 ml de ácido sulfúrico 0,020 N (aproximada-
Caracteres generales - Líquido transparente, mente 0,002 %).
incoloro, con consistencia de jarabe. Higroscópi- Límite de metales pesados <590>
co. Sus soluciones son neutras al tornasol. Misci- Mezclar 4,0 g de Glicerina con 2 ml de ácido
ble con agua y alcohol. Insoluble en aceites fijos y clorhídrico 0,1 N y diluir con agua a 25 ml. El
volátiles, cloroformo y éter. límite es 5 ppm.
Sustancia de referencia - Glicerina SR-FA. Límite de compuestos clorados
CONSERVACIÓN Pesar exactamente 5 g de Glicerina, transferir a
un balón de 100 ml, agregar 15 ml de morfolina y
En envases de cierre perfecto. calentar a reflujo durante 3 horas. Enjuagar el
ENSAYOS condensador con 10 ml de agua recolectando el
lavado dentro del balón y acidificar con ácido
Identificación nítrico. Transferir la solución obtenida a un tubo
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sóli- de comparación, agregar 0,5 ml de nitrato de plata
da. (SR), diluir con agua a 50 ml y mezclar. No se
B - Diluir una porción de la Solución muestra debe observar mayor turbidez que la de un control
y la Solución de aptitud del sistema empleadas en preparado con 0,20 ml de ácido clorhídrico
el ensayo Límite de dietilenglicol y sustancias re- 0,020 N (0,003 % de Cl) [NOTA: en la prepara-
lacionadas, con agua y cuantitativamente para ob- ción del control se debe omitir calentar a reflujo].
tener sendas soluciones de concentración 0,1 mg
por ml y proceder según se indica en Procedimien- Ésteres y ácidos grasos
to: el tiempo de retención del pico de glicerina ob- Mezclar 50 g de Glicerina con 50 ml de agua
tenido a partir de la Solución muestra diluida se recientemente hervida y 5 ml de hidróxido de so-
debe corresponder con el obtenido con la Solución dio 0,5 N (SV) y calentar a ebullición durante
de aptitud del sistema diluida. 5 minutos. Enfriar, agregar fenolftaleína (SR) y ti-
tular el exceso de hidróxido de sodio con ácido
Color clorhídrico 0,5 N (SV). Realizar una determina-
Transferir una porción de Glicerina a un tubo ción con un blanco y hacer las correcciones nece-
de comparación de 50 ml y observar el color con- sarias (ver Titulaciones residuales en 780. Volu-
tra una superficie blanca: no debe ser más oscuro metría). No se debe consumir más de 1 ml de
que la de un control preparado diluyendo 0,40 ml hidróxido de sodio 0,5 N.
de cloruro férrico (SC) a 50 ml con agua.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Determinación de la densidad relativa Método II..
<160>
No debe ser menor de 1,249. Límite de dietilenglicol y sustancias relacio-
nadas
Determinación de agua <120> Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Titulación volumétrica directa. No más de para cromatografía de gases equipado con un de-
5,0 %. tector de ionización a la llama y una columna de
Determinación del residuo de ignición vidrio de 30 m × 0,53 mm recubierta con una fase
<270> estacionaria constituida por una mezcla de 6% de
cianopropilfecil polisiloxano y 94 % de dimetilpro- en la cual rI es la respuesta de cualquier pico indi-
pilsiloxano de 3 μm de diámetro con un recubri- vidual obtenido a partir de la Solución muestra y
miento en el inyector de forma de copa invertida o rT es la suma de las respuestas de todos lo picos
espiral. Programar la temperatura equilibrando obtenidos a partir de la Solución muestra. No de-
inicialmente la columna a 100 ºC hasta el tiempo be contener más de 0,1 % de cualquier impureza
de inyección, donde se debe incrementar 7,5 º por individual a excepción del pico de dietilenglicol y
minuto hasta 220 º y mantener durante 4 minutos. no más de1,0 % de impurezas totales.
La temperatura de inyección y la del detector de-
VALORACIÓN
ben mantenerse a 220 y 250 ºC, respectivamente.
Se debe emplear helio como gas transportador y la Solución de periodato de sodio - Disolver
velocidad de flujo debe ser de 38 cm por segundo. 60 g de metaperiodato de sodio en suficiente can-
Solución de aptitud del sistema - Preparar una tidad de agua que contenga 120 ml de ácido sulfú-
solución de dietilenglicol y Glicerina SR-FA en rico y diluir a 1 litro. [NOTA: si la solución obte-
agua para obtener una solución de aproximada- nida no es límpida, filtrar a través de un filtro de
mente 0,5 mg de dietilenglicol y 0,5 mg de Gliceri- vidrio sinterizado y conservar en envases inactíni-
na SR-FA por ml. cos con tapón de vidrio.] Evaluar la aptitud de la
Solución estándar - Preparar una solución de solución según se indica a continuación. Transfe-
dietilenglicol en agua para obtener una solución de rir 10 ml de esta solución a un matraz aforado de
aproximadamente 0,05 mg por ml. 250 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Solución muestra - Pesar exactamente alrede- Transferir 50 ml de la solución obtenida a una so-
dor de 5 g de Glicerina, transferir a un matraz afo- lución de aproximadamente 550 mg de glicerina en
rado de 100 ml, completar a volumen con agua y 50 ml de agua. Dejar reposar durante 30 minutos,
mezclar. agregar 5 ml de ácido clorhídrico, 10 ml de ioduro
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - de potasio (SR) y mezclar. Dejar reposar durante
Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema 5 minutos, agregar 100 ml de agua y titular con
y registrar las respuestas de los picos según se in- tiosulfato de sodio 0,1 N con agitación constante y
dica en Procedimiento: la resolución R entre los agregando 3 ml de almidón (SR) cerca del punto
picos de dietilenglicol y glicerina no debe ser me- final. Proceder del mismo modo con un blanco
nor de 7,0. Cromatografiar la Solución estándar y preparado del mismo modo pero empleando agua
registrar las respuestas de los picos según se indica en vez de la solución de glicerina. La relación del
en Procedimiento: la desviación estándar relativa volumen de tiosulfato de sodio 0,1 N consumido
para inyecciones repetidas no debe ser mayor de para la mezcla glicerina periodato y el consumido
15 %. por el blanco debe estar comprendido entre 0,750
Procedimiento - Inyectar por separado volú- y 0,765.
menes iguales (aproximadamente 0,5 μl) de Solu- Procedimiento - Pesar exactamente alrededor
ción estándar y Solución muestra, registrar los de 400 mg de Glicerina, transferir a un erlenmeyer,
cromatogramas y medir las respuestas de todos los agregar 50 ml de agua y azul de bromotimol (SR),
picos. Calcular el porcentaje de dietilenglicol en la y acidificar con ácido sulfúrico 0,2 N hasta color
porción de Glicerina en ensayo por la fórmula si- verde o verde amarillento. Neutralizar con
guiente: hidróxido de sodio 0,05 N hasta punto final azul,
libre de coloración verdosa. Preparar un blanco
100(CE/CM)(rE/rM)
con 50 ml de agua y neutralizar de la misma mane-
en la cual CE es la concentración en mg por ml de ra. Transferir 50 ml de Solución de periodato de
dietilenglicol en la Solución estándar, CM es la sodio a sendas soluciones, mezclar, tapar con vi-
concentración en mg por ml de Glicerina en la So- drio de reloj y dejar reposar durante 30 minutos a
lución muestra y rE y rM son las respuestas de los temperatura ambiente protegidas de la luz. Agre-
picos de dietilenglicol obtenidos en la Solución gar 10 ml de una mezcla de agua y etilenglicol
estándar y Solución muestra, respectivamente. (50:50) a sendas soluciones, dejar reposar durante
No debe contener más de 0,1 % de dietilenglicol. 20 minutos y diluir con agua a 300 ml. Titular con
Calcular el porcentaje de cualquier otra impu- hidróxido de sodio 0,1 N (SV) hasta pH 8,1 ± 0,1
reza, a excepción del pico del solvente, en la por- para la sustancia en ensayo y hasta pH 6,5 ± 0,1
ción de Glicerina en ensayo por la fórmula siguien- para el blanco. Cada ml de hidróxido de sodio
te: 0,1 N, corregido por el blanco, equivale a 9,21 mg
100(rI/rT) de C3H8O3.
Solución estándar B: 0,05 mg por ml de
GLIPIZIDA Glipizida SR-FA, empleando una mezcla de
metanol y cloruro de metileno (1:1) como solvente.
O O O Fase móvil: Tolueno, acetato de etilo y ácido
N S fórmico al 96 % (5:3:2).
NH N Revelador: 1.
N Límites: no se deben observar mas de tres
H3C O N
H impurezas en el cromatograma de la Solución
muestra y ninguna debe ser mayor de 0,5 %.
C21H27N5O4S PM: 445,5 29094-61-9 VALORACIÓN
Definición - Glipizida es N-[2-[4- [NOTA: emplear material de vidrio inactínico].
[[[(ciclohexilamino)carbonil]amino]sulfonil]fenil] Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
etil]-5-metilpirazincarboxamida. Debe contener no para cromatografía de líquidos con un detector
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por ultravioleta ajustado a 225 nm y una columna de
ciento de C21H27N5O4S, calculado sobre la sustancia 15 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
seca y debe cumplir con las siguientes por octadecilsilano unido químicamente a partículas
especificaciones. totalmente porosas de sílice de 5 µm de diámetro.
El caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por
Caracteres generales - Polvo casi blanco. minuto.
Inodoro. Fácilmente soluble en dimetilformamida; Solución reguladora de fosfato - Disolver
soluble en hidróxido de sodio 0,1 N; insoluble en 13,8 g de fosfato monobásico de sodio en agua y
agua y alcoholes. diluir a 1 litro con agua. Ajustar a pH de
Sustancia de referencia - Glizipida SR-FA. 6,00 0,05 con hidróxido de sodio 2,0 N.
Fase móvil - Solución reguladora de fosfato y
CONSERVACIÓN metanol (55:45). Filtrar y desgasificar. Hacer los
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
En envases inactínicos de cierre perfecto. Cromatografía).
ENSAYOS Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Glipizida SR-FA en metanol
Identificación y diluir cuantitativamente con metanol para obtener
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. una solución de aproximadamente 0,1 mg por ml.
B - Absorción ultravioleta <470> Transferir 25,0 ml de esta solución a un matraz
Solvente: metanol. aforado de 50 ml, completar a volumen con
Concentración: 20 g por ml. Solución reguladora de fosfato y mezclar para
C - Examinar los cromatogramas obtenidos en obtener una solución de aproximadamente 0,05 mg
Valoración. El tiempo de retención del pico por ml.
principal en el cromatograma obtenido a partir de la Preparación muestra - Pesar exactamente
Preparación muestra se debe corresponder con el alrededor de 20 mg de Glipizida, transferir a un
obtenido con la Preparación estándar. matraz aforado de 200 ml, disolver y completar a
Pérdida por secado <680> volumen con metanol. Transferir 25,0 ml de esta
Secar al vacío a 100 °C durante 3 horas: no debe solución a un matraz aforado de 50 ml, completar a
perder más de 1,0 % de su peso. volumen con Solución reguladora de fosfato y
mezclar para obtener una solución de
Determinación del residuo de ignición <270> aproximadamente 0,05 mg por ml.
No más de 0,4 %. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Límite de metales pesados <590> Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
Método II. No más de 0,005 %. las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la desviación estándar relativa para
Impurezas comunes <510> inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1,0 %.
Solución muestra: Emplear una mezcla de Procedimiento - Inyectar por separado en el
metanol y cloruro de metileno (1:1) como solvente. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Solución estándar A: 0,02 mg por ml de 20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
Glipizida SR-FA, empleando una mezcla de muestra, registrar los cromatogramas y medir las
metanol y cloruro de metileno (1:1) como solvente. respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en mg de C21H27N5O4S en la porción de
Glipizida en ensayo.
del solvente haya recorrido aproximadamente tres
GLUCOSA cuartas partes de la longitud de la placa. Secar la
HO placa bajo una corriente de aire caliente, desarrollar
nuevamente los cromatogramas con Fase móvil
O renovada y secar la placa bajo una corriente de aire
OH caliente. Pulverizar sobre la placa con Revelador y
OH OH calentar a 130 °C durante 10 minutos: en el croma-
OH tograma obtenido a partir de la Solución muestra, la
mancha principal debe ser similar en color, tamaño
C6H12O6 PM: 180,2 50-99-7 y valor de Rf, a la obtenida con la Solución están-
C6H12O6 . H2O PM: 198,2 5996-10-1 dar A. El ensayo sólo es válido si el cromatograma
Sinonimia - Dextrosa. obtenido a partir de la Solución estándar B presenta
cuatro manchas claramente separadas.
Definición - Glucosa es D-(+) glucopiranosa. B - Disolver 100 mg de Glucosa en 10 ml de
Es anhidra o puede contener una molécula de agua agua, agregar 3 ml de tartrato cúprico alcalino (SR)
de hidratación. Debe cumplir con las siguientes y calentar: se debe observar un precipitado rojo.
especificaciones.
Acidez y alcalinidad
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco, Disolver 6 g de Glucosa en 25 ml de agua libre
de sabor dulce. Fácilmente soluble en agua; mode- de dióxido de carbono y agregar 0,3 ml de fenolfta-
radamente soluble en alcohol. leína (SR1): la solución debe ser incolora y no debe
Sustancia de referencia - Glucosa SR-FA. consumir más de 0,15 ml de hidróxido de sodio
0,1 N (SV) para virar el indicador a rosa.
CONSERVACIÓN
Determinación de la rotación óptica <170>
En envases de cierre perfecto. Rotación específica: entre + 52,5° y + 53,3°, de-
ENSAYOS terminada sobre la sustancia en base anhidra.
Solución muestra: pesar exactamente alrededor
Identificación de 10 g de Glucosa, disolver en 80 ml de agua,
A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. agregar 0,2 ml de amoníaco diluido, dejar reposar
Fase estacionaria - Emplear una placa para durante 30 minutos y diluir con agua a 100 ml.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Azúcares extraños, almidón soluble y dextri-
grafía, de 0,25 mm de espesor. nas
Diluyente - Metanol y agua (3:2). Disolver 1 g de Glucosa en 30 ml de alcohol al
Fase Móvil - 1,2-dicloroetano, ácido acético 90 % v/v a ebullición: el aspecto de la solución no
glacial, metanol y agua (50:25:15:10). [NOTA: debe cambiar al enfriar.
medir exactamente los volúmenes, ya que un ligero Límite de sulfitos
exceso de agua puede producir turbidez.] Solución estándar - Disolver 76 mg de metabi-
Solución estándar A - Transferir 10 mg de Glu- sulfito de sodio en agua y diluir a 50 ml con agua.
cosa SR-FA a un matraz de 20 ml, disolver y com- Transferir 5 ml a un matraz aforado de 100 ml y
pletar a volumen con Diluyente. completar a volumen con agua. Transferir 3 ml de
Solución estándar B - Transferir 10 mg de esta solución a un matraz aforado de 100 ml, agre-
Fructosa, 10 mg de Glucosa SR-FA, 10 mg de gar 4 ml de hidróxido de sodio 0,1 N y completar a
Lactosa y 10 mg de Sacarosa a un matraz aforado volumen con agua. A 10 ml de esta solución agre-
de 20 ml, disolver y completar a volumen con Dilu- gar 1 ml de ácido clorhídrico al 31 %, 2 ml de fuc-
yente. sina decolorada y 2 ml de solución de formaldehído
Solución muestra - Transferir 10 mg de Gluco- al 0,5 % v/v y dejar reposar durante 30 minutos.
sa a un matraz aforado de 20 ml, disolver y comple- Solución muestra - Disolver 5,0 g de Glucosa
tar a volumen con Diluyente. en 40 ml de agua, agregar 2 ml de hidróxido de
Revelador - Emplear una solución de 0,5 g de sodio 0,1 N y diluir a 50 ml con agua. A 10 ml de
timol en una mezcla de 5 ml de ácido sulfúrico y esta solución, agregar 1 ml de solución de ácido
95 ml de alcohol. clorhídrico al 31 %, 2 ml de fucsina decolorada y
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la 2 ml de solución de formaldehído al 0,5 % v/v y
placa 2 µl de la Solución estándar A y B, y 2 µl de dejar reposar durante 30 minutos.
la Solución muestra. Dejar secar las aplicaciones y Procedimiento - Determinar las absorbancias de
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente la Solución muestra y la Solución estándar (ver
470. Espectrofotometría ultravioleta y visible) con de calcio (10 ppm) (SL), 1 ml de ácido acético
un espectrofotómetro ajustado a 583 nm, emplean- diluido y 5 ml de agua. Luego de 15 minutos, si la
do una solución tratada del mismo modo que la Solución muestra presenta opalescencia, esta no
Solución muestra pero a partir de 10 ml de agua, debe ser más intensa que la del control (200 ppm).
como blanco. La absorbancia de la Solución mues- Límite de metales pesados <590>
tra no debe ser mayor que la de la Solución están-
Método I. Disolver 4,0 g de Glucosa en agua
dar (15 ppm de SO2). hasta 25 ml. El límite es 5 ppm.
Límite de cloruro Determinación de agua <120>
Solución muestra - Disolver 10 g de Glucosa en Titulación volumétrica directa. Cuando en el
agua y diluir con agua a 100 ml. Diluir 4 ml de la rótulo se indique que Glucosa es anhidra no debe
solución anterior a 15 ml con agua. contener más de 1,0 %, determinado sobre 0,5 g.
Procedimiento - A 15 ml de Solución muestra Cuando en el rótulo se indique que Glucosa es mo-
agregar 1 ml de ácido nítrico al 12,5 %. Transferir nohidrato debe contener entre 7,0 y 9,5 %, determi-
esta mezcla a un tubo de Nessler que contenga 1 ml nado sobre 0,5 g.
de nitrato de plata (SR) y proteger de la luz. Proce-
der del mismo modo con 15 ml de una solución Determinación del residuo de ignición <270>
control preparada agregando 5 ml de agua a 10 ml Disolver 5 g de Glucosa en 5 ml de agua, agre-
de solución de cloruro (5 ppm) (SL). Luego de gar 2 ml de ácido sulfúrico, evaporar a sequedad en
5 minutos, si la Solución muestra presenta opales- un baño de agua y someter a ignición hasta peso
cencia, esta no debe ser más intensa que la del con- constante. De ser necesario, calentar nuevamente
trol (125 ppm). con ácido sulfúrico. No debe contener más de
0,1 %.
Límite de sulfato
Solución muestra - Disolver 10 g de Glucosa en Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
agua y diluir a 100 ml con agua. Diluir 7,5 ml a Cuando la Glucosa esté destinada a la prepara-
15 ml con agua. ción de formas farmacéuticas inyectables debe
Procedimiento - A 1,5 ml de solución de sulfa- cumplir con los requisitos del ensayo. No debe
to (10 ppm) (SL1) agregar 1 ml de cloruro de bario contener más de 5,0 Unidades de Endotoxinas por
al 25 %, agitar y dejar reposar durante 1 minuto. g.
Agregar 15 ml de Solución muestra y 0,5 ml de
ácido acético. Proceder del mismo modo con 15 ml ROTULADO
de solución de sulfato (10 ppm) (SL) para obtener Indicar en el rótulo si la Glucosa es anhidra o
una solución control. Luego de 5 minutos, si la monohidrato. Indicar en el rótulo cuando la Gluco-
Solución muestra presenta opalescencia, esta no sa esté destinada a la preparación de formas far-
debe ser más intensa que la del control (200 ppm). macéuticas inyectables.
Límite de arsénico <540>
Método I. No más de 1 ppm.
Límite de bario
Disolver 10 g de Glucosa en agua y diluir a
100 ml con el mismo solvente. A una porción de
10 ml de esta solución, agregar 1 ml de ácido sulfú-
rico diluido (Solución muestra) y a otra porción
igual agregar 1 ml de agua (Solución blanco). Lue-
go de 1 hora la Solución muestra no debe presentar
mayor opalescencia que la Solución blanco.
Límite de calcio
Solución muestra - Disolver 10 g de Glucosa en
agua y diluir a 100 ml con agua. Diluir 5 ml de la
solución anterior a 15 ml con agua.
Procedimiento - A 0,2 ml de solución de cal-
cio (100 ppm) (SL1), agregar 1 ml de oxalato de
amonio al 4 %, dejar reposar 1 minuto y agregar
una mezcla de 1 ml de ácido acético diluido y 15 ml
de Solución muestra. Proceder del mismo modo
con un control preparado con 10 ml de una solución
ción a la llama y una columna de vidrio de
GRISEOFULVINA 100 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por 1 % p/p de poli[(cianopropil)metil][fenilmetil]
Cl
H3CO siloxano sobre un soporte formado por tierra silícea
H3CO O para cromatografía de gases que ha sido calcinada a
900 °C mezclando diatomea con Na2CO3 [NOTA: la
O
tierra silícea se lava con ácido y luego con agua hasta
neutralidad pero no se lava con bases]. Mantener la
OCH3
OH CH3 columna, el inyector y el detector a 250, 270 y
300 °C, respectivamente. Emplear nitrógeno como
gas transportador con un caudal entre 50 y 60 ml por
C17H17ClO6 PM: 352,8 126-07-8 minuto.
Definición - Griseofulvina es (1’S-trans)- Solución del estándar interno - Disolver 200 mg
7-Cloro-2’,4,6-trimetoxi-6’-metilespiro[benzofuran- de difenilantraceno en acetona y diluir a 100 ml con
2(3H),1’[2]ciclohexeno]-3,4’-diona. Debe contener el mismo solvente.
no menos de 97,0 por ciento y no más de 102,0 por Solución estándar - Disolver 5,0 mg de Griseo-
ciento de C17H17ClO6, calculado sobre la sustancia fulvina SR-FA en acetona, agregar 1,0 ml de Solu-
seca y debe cumplir con las siguientes especificacio- ción del estándar interno y diluir a 10 ml con aceto-
nes. na.
Solución muestra A - Disolver 100 mg de Griseo-
Caracteres generales - Polvo blanco o blanco- fulvina en acetona y diluir a 10 ml con el mismo
amarillento, cuyas partículas tienen generalmente un solvente.
tamaño de 5 m de diámetro como máximo, aunque Solución muestra B - Disolver 100 mg de Griseo-
en algunos casos pueden sobrepasar los 30 m. fulvina en acetona, agregar 1,0 ml de Solución del
Fácilmente soluble en dimetilformamida y cloruro de estándar interno y diluir a 10 ml con el mismo sol-
etileno; poco soluble en alcohol y metanol; práctica- vente.
mente insoluble en agua. Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
Presenta polimorfismo. matógrafo volúmenes iguales de la Solución estándar
Sustancia de referencia - Griseofulvina SR-FA. y las Soluciones muestra A y B, registrar los croma-
togramas durante tres veces el tiempo de retención
CONSERVACIÓN del pico de griseofulvina (aproximadamente 11 minu-
En envases de cierre perfecto. tos) y medir las respuestas de todos los picos. En el
cromatograma obtenido a partir de la Solución están-
ENSAYOS
dar determinar la relación entre las respuestas de los
Identificación picos correspondientes a griseofulvina y al estándar
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. interno. Determinar en el cromatograma obtenido a
Cristanilidad partir de la Solución muestra B la relación entre las
Colocar partículas de Griseofulvina en aceite mi- respuestas de los picos correspondientes a declorogri-
neral sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la seofulvina (cuyo tiempo de retención relativo al pico
mezcla empleando un microscopio óptico con luz de griseofulvina es aproximadamente 0,6) y al están-
polarizada: las partículas deben presentar birrefrin- dar interno. Determinar la relación entre las respues-
gencia y posiciones de extinción cuando se gira la tas de los picos correspondientes a deshidrogriseoful-
platina del microscopio. vina (cuyo tiempo de retención relativo al pico de
griseofulvina es aproximadamente 1,4) y al estándar
Determinación del punto de fusión <260> interno. Las relaciones calculadas a partir de la Solu-
Entre 217 y 224 °C. ción muestra B divididas cada una por la relación
Determinación de la rotación óptica <170> calculada a partir de la Solución estándar deben ser
Rotación específica: Entre +348° y +364°. menores de 0,6 para declorogriseofulvina y 0,15 para
Solución muestra: 10 mg por ml, en dimetilfor- deshidrogriseofulvina.
mamida. Sustancias solubles en éter de petróleo
Determinación del residuo de ignición <270> Agitar 1,0 g de Griseofulvina con 20 ml de éter de
No más de 0,2 %. petróleo. Calentar a ebullición bajo un condensador a
reflujo durante 10 minutos, enfriar, filtrar y lavar con
Sustancias relacionadas tres porciones de 15 ml de éter de petróleo. Combi-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo pa- nar los lavados y el filtrado, evaporar hasta sequedad
ra cromatografía de gases con un detector de ioniza-
en un baño de agua y secar entre 100 y 105 °C duran-
te 1 hora: el peso del residuo no debe ser mayor de
2 mg (0,2 %).
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,0025 %.
Pérdida por secado <680>
Secar 1,0 g de Griseofulvina entre 100 y 105 °C:
no debe perder más de 1,0 % de su peso.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método III.
Solvente: dimetilsulfóxido.
Ensayo de toxicidad anormal
Seleccionar cinco ratones sanos, con un peso
comprendido entre 17 y 22 g. Administrar a cada uno
de ellos, por vía oral, una suspensión que contenga
100 mg de Griseofulvina en un volumen entre 0,5 y
1 ml de agua: no debe morir ningún ratón dentro de
las 48 horas de administrada la suspensión.
VALORACIÓN
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 80,0 mg de Griseofulvina y disolver en
200 ml de alcohol absoluto. Transferir 2 ml de esta
solución a un matraz aforado de 100 ml y completar a
volumen con alcohol absoluto.
Preparación estándar - Proceder según se indica
para Preparación muestra empleando Griseofulvi-
na SR-FA
Procedimiento - Determinar las absorbancias de
la Preparación muestra y la Preparación estándar,
en celdas de 1 cm, a la longitud de onda de máxima
absorción, aproximadamente 291 nm, con un espec-
trofotómetro, empleando alcohol absoluto como
blanco. Calcular el contenido de C17H17ClO6 en la
porción de Griseofulvina en ensayo.
La absorbancia de la solución no debe ser mayor de
HALOPERIDOL 0,30.
HO
N Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a 60 °C durante 3 horas: no debe
F perder más de 0,5 % de su peso.
Cl O
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método III.
C21H23ClFNO2 PM: 375,9 52-86-8
Solvente: dimetilsulfóxido.
Definición - Haloperidol es 4-[4-(p-Clorofenil)-
4-hidroxipiperidino]-4'-fluorobutirofenona. Debe VALORACIÓN
contener no menos de 98,0 por ciento y no más de Pesar exactamente alrededor de 125 mg de
102,0 por ciento de C21H23ClFNO2, calculado sobre Haloperidol, disolver en 25 ml de ácido acético
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
glacial, agregar 3 gotas de p-naftolbenceína (SR) y
especificaciones. titular con ácido perclórico 0,05 N (SV). Realizar
Caracteres generales - Polvo microcristalino o una determinación con un blanco y hacer las co-
amorfo, blanco a débilmente amarillento. Sus solu- rrecciones necesarias (ver 780. Volumetría). Cada
ciones saturadas son neutras al tornasol. Soluble en ml de ácido perclórico 0,05 N equivale a 18,79 mg
cloroformo; moderadamente soluble en alcohol; de C21H23ClFNO2.
poco soluble en éter; prácticamente insoluble en
agua.
Sustancia de referencia - Haloperidol SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción Infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Absorción Ultravioleta <470>
Solvente: ácido clorhídrico 0,1 N y alcohol
isopropílico (1 en 9).
Concentración: 20 µg por ml.
Las absortividades a 245 nm, calculadas
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
3,0 %.
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 149 y 155 °C, determinado luego de secar
al vacío a 60 °C durante 3 horas.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de 4,4'-bis[4-(p-clorofenil)-4-hidroxi-
piperidino]-butirofenona
Transferir 50,0 mg de Haloperidol a un matraz
aforado de 50 ml, disolver en una mezcla de ácido
clorhídrico 0,1 N y alcohol isopropílico (1 en 9) y
completar a volumen con la misma mezcla de sol-
ventes. Determinar la absorbancia de esta solución
(ver 470. Espectrofotometría ultravioleta y visible)
a la longitud de onda de máxima absorción,
aproximadamente 335 nm, con un espectrofotóme-
tro, empleando una mezcla de ácido clorhídrico
0,1 N y alcohol isopropílico (1 en 9) como blanco.
Evaporar a sequedad 50 ml de Halotano en una
HALOTANO cápsula previamente pesada sobre un baño de vapor y
secar el residuo a 105 °C durante 2 horas: el peso del
CF3
residuo no debe ser mayor de 1 mg.
Cl Br Cloruro y bromuro
Agitar 25 ml de Halotano con 25 ml de agua du-
rante 5 minutos y dejar que las fases se separen com-
C2HBrClF3 PM: 197,4 151-67--7 pletamente. A 10 ml de la fase acuosa, agregar
Definición - Halotano es 2-Bromo-2-cloro-1,1,1- 1 gota de ácido nítrico y 5 gotas de nitrato de pla-
trifluoroetano. Debe contener no menos de 0,008 por ta (SR): no se debe producir opalescencia.
ciento y no más de 0,012 por ciento de timol, en Contenido de timol
peso, como estabilizante. Solución estándar de timol - Preparar una solu-
Caracteres generales - Líquido denso, incoloro, ción en hidróxido de sodio 0,25 N de aproximada-
no inflamable. Miscible con aceites fijos, alcohol, mente 0,1 mg de timol por ml.
cloroformo y éter; poco soluble en agua. Solución reguladora - Emplear solución regula-
dora alcalina de borato de pH 8,0 (ver Soluciones
Sustancia de referencia - Halotano SR-FA.
reguladoras en Soluciones).
Solución de clorimida - Disolver 100 mg de
CONSERVACIÓN
2,6-dibromoquinona-clorimida en 25 ml de alcohol
En envases inactínicos de cierre perfecto, prefe- absoluto. [NOTA: preparar esta solución en el mo-
rentemente de vidrio. Evitar la exposición al calor mento de su uso.]
excesivo y dispensarlo únicamente en el envase ori- Curva estándar de timol - Transferir a tres ma-
ginal. traces aforados de 100 ml, 1,0; 3,0 y 5,0 ml, respecti-
vamente, de Solución estándar de timol y agregar
ENSAYOS hidróxido de sodio 0,25 N para obtener un volumen
Identificación final de 5,0 ml. Transferir 5,0 ml de hidróxido de
Absorción infrarroja <460>. En solución. sodio 0,25 N a un cuarto matraz para preparar el
Solvente: disulfuro de carbono. blanco. A cada matraz, agregar 10 ml de Solución
Concentración: 1 en 25. reguladora, mezclar agitando por rotación suavemen-
te y agregar 1 ml de Solución de clorimida. Dejar en
Determinación de la densidad relativa <160> reposo durante 15 minutos exactamente medidos,
Entre 1,872 y 1,877, a 20 °C. agregar 3 ml de hidróxido de sodio 0,25 N a cada
Determinación del intervalo de destilación matraz y completar a volumen con agua. Con un
<240> espectrofotómetro, medir las absorbancias de las
Método II. No menos de 95 % destila en un in- soluciones que contienen timol contra el blanco a
tervalo de 1 °C, entre 49 y 51 °C y no menos de 590 nm. Graficar y calcular la ecuación de la recta
100 % destila entre 49 y 51 °C, aplicar un factor de que mejor ajuste.
corrección de 0,040 °C por mm Hg según sea necesa- Procedimiento - Pesar exactamente alrededor de
rio. 2 ml de Halotano, transferir a un matraz aforado de
100 ml que contenga 5 ml de hidróxido de sodio
Determinación del índice de refracción <230> 0,25 N y mezclar por rotación suave. Evaporar el
Entre 1,369 y 1,371, a 20° C. Halotano con ayuda de una corriente de nitrógeno y
Acidez o alcalinidad agregar 10 ml de Solución reguladora y 1 ml de la
Agitar 20 ml de Halotano con 20 ml de agua libre Solución de clorimida. Agitar por rotación suave-
de dióxido de carbono, durante 3 minutos y dejar que mente, dejar en reposo durante 15 minutos exacta-
las fases se separen: la fase acuosa no debe requerir mente medidos, agregar 3 ml de hidróxido de so-
más de 0,1 ml de hidróxido de sodio 0,010 N o no dio 0,25 N y completar a volumen con agua. Medir
más de 0,6 ml de ácido clorhídrico 0,010 N para la la absorbancia de la solución resultante y a partir de
neutralización, emplear púrpura de bromocresol (SR) la ecuación obtenida en Curva estándar de timol,
como indicador. calcular el porcentaje de timol en la porción de Halo-
tano en ensayo.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de Pureza cromatográfica
0,03 %. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo pa-
ra cromatografía de gases con un detector de ioniza-
Límite de residuo no volátil
ción a la llama y una columna de acero inoxidable de
3 m × 2 mm con 20 % de fase constituida por ftalato
de diisodecilo sobre un soporte constituido por tierra
silícea para cromatografía de gases que ha sido calci-
nada a 900 ºC mezclando diatomeas con Na2CO3
[NOTA: la tierra silícea se lava con ácido y luego se
lava con base. La tierra silícea puede ser silanizada
al tratarla con un agente como dimetildiclorosilano
para bloquear los grupos silanoles superficiales].
Emplear nitrógeno como gas transportador con un
caudal de aproximadamente 15 ml por minuto. Man-
tener la columna a 60 °C, el inyector y el detector
aproximadamente a 200 °C. Los tiempos de reten-
ción deben ser aproximadamente, 5 minutos para
1,1,2-tricloro-1,2,2-trifluoroetano y 13 minutos para
halotano.
Preparación estándar - Transferir 1,0 µl de
1,1,2-tricloro-1,2,2-trifluoroetano a 20,0 ml de la
muestra.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
2 µl) de la Preparación estándar y de Halotano,
registrar los cromatogramas y medir las respuestas de
los picos. A excepción del pico de halotano, la res-
puesta total de todos los picos obtenidos a partir de la
muestra no debe ser mayor a la respuesta debida al
1,1,2-tricloro-1,2,2-trifluoroetano agregado a la Pre-
paración estándar (0,005 %).
detector ultravioleta ajustado a 224 nm y una co-
HIDROCLOROTIAZIDA lumna de 10 cm × 4,6 mm con fase estacionaria
O O
constituida por octadecilsilano químicamente unido
O O
a partículas porosas de sílice de 3 µm de diámetro.
S S
H2N NH
El caudal debe ser aproximadamente 0,8 ml por
minuto.
Solución reguladora de fosfato de sodio - Di-
Cl N solver una porción de fosfato monobásico de sodio
H
en agua para obtener una solución de aproximada-
mente 38,5 g por litro. Ajustar a pH 3,2 ± 0,1 con
C7H8ClN3O4S2 PM: 297,7 58-93-5
ácido fosfórico diluido. Transferir 100 ml de esta
Definición - Hidroclorotiazida es solución a un matraz aforado de 2 litros, completar
6-Cloro-3,4-dihidro-2H-1,2,4-benzotiadiazina- a volumen con agua y filtrar.
7-sulfonamida-1,1-dióxido. Debe contener no me- Solución A - Solución reguladora de fosfato de
nos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento sodio, metanol y tetrahidrofurano (94:6:1). Desgasi-
de C7H8ClN3O4S2, calculado sobre la sustancia seca ficar.
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. Solución B - Solución reguladora de fosfato de
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco sodio, metanol y tetrahidrofurano (50:50:5). Desga-
o casi blanco, inodoro. Fácilmente soluble en solu- sificar.
ción de hidróxido de sodio, n-butilamina y dimetil- Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
formamida; moderadamente soluble en metanol; lución A y Solución B, según se indica a continua-
poco soluble en agua; insoluble en éter, cloroformo ción. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
y en ácidos minerales diluidos. sistema en 100. Cromatografía).
Sustancia de referencia - Hidroclorotiazida Tiempo Solución A Solución B Etapa
SR-FA. (minutos) (%) (%)
0-17 100 55 0 45 Gradiente
CONSERVACIÓN lineal
En envases bien cerrados. 17-30 55 45 isocrático
ENSAYOS 30-35 55 100 45 0 Gradiente
Identificación lineal
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 35-50 100 0 isocrático
La mezcla de bromuro de potasio e Hidroclorotiazi- Diluyente 1 - Acetonitrilo y metanol (50:50).
da se debe calentar previamente a 105 °C durante Diluyente 2 - Transferir 50 ml de Diluyente 1 a
2 horas. un matraz aforado de 200 ml y completar a volu-
B - Absorción ultravioleta <470> men con Solución reguladora de fosfato de sodio.
Solvente: metanol. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Concentración: 10 µg por ml. de 15 mg de Hidroclorotiazida, transferir a un ma-
Determinación del residuo de ignición <270> traz aforado de 10 ml, disolver en 2,5 ml de Dilu-
No más de 0,1 %. yente 1, sonicando si fuera necesario, y completar a
volumen con Solución reguladora de fosfato de
Límite de cloruro y sulfato <560> sodio.
Cloruro - Agitar 0,50 g de Hidroclorotiazida Solución estándar A - Transferir 15 mg de
con 40 ml de agua durante 5 minutos y filtrar: el Hidroclorotiazida SR-FA y 15 mg de Clorotiazida
filtrado no debe presentar más cloruro que el que a un matraz aforado de 100 ml, disolver en 25 ml de
corresponde a 0,25 ml de ácido clorhídrico 0,020 N Diluyente 1, sonicando si fuera necesario, y com-
(0,035 %). pletar a volumen con Solución reguladora de de
Límite de Selenio <610> fosfato de sodio. Transferir 5 ml de esta solución a
No más de 0,003 %, empleando 200 mg. un matraz aforado de 100 ml y completar a volu-
men con Diluyente 2.
Límite de metales pesados <590>
Solución estándar B - Transferir 1,0 ml de So-
Método II. No más de 0,001 %.
lución muestra a un matraz aforado de 50 ml y
Pureza cromatográfica completar a volumen con Diluyente. Diluir 5,0 ml
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo de esta solución a 20 ml con Diluyente 2.
para cromatografía de líquidos equipado con un
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución estándar A y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de hidro-
clorotiazida y de clorotiazida no debe ser menor de
2,5.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Solución muestra y las Soluciones
estándar B, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de todos los picos; los tiempos de reten-
ción deben ser aproximadamente 7 minutos para
clorotiazida y 8 minutos para hidroclorotiazida.
Calcular el porcentaje de cada impureza individual
en la porción de la Hidroclorotiazida en ensayo,
relacionando las respuestas de los picos de cada
impureza obtenido con la Solución muestra y la
respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
ción estándar B. No debe contener más de 0,5 % y
no más de 1,0 % de impurezas totales. Ignorar
cualquier pico con una respuesta menor a 0,1 veces
la respuesta del pico principal en el cromatograma
obtenido con la Solución estándar B (0,05 %).
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 1 hora: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método III.
Solvente: dimetilsulfóxido.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 120 mg de
Hidroclorotiazida y disolver en 50 ml de dimetil-
sulfóxido, calentando si fuera necesario. Titular
con hidróxido de tetrabutilamonio 0,1 N
en 2-propanol (SV), determinando el punto final
potenciométricamente. Realizar la corrección con
un blanco y hacer las correcciones necesarias. Ver
780. Volumetría. Cada ml de hidróxido de tetrabu-
tilamonio 0,1 N en 2-propanol equivale a 14,88 mg
de C7H8ClN3O4S2.
cromatógrafo se debe programar del siguiente mo-
HIDROCORTISONA, do:
ACETATO DE Tiempo Solución A Solución B Etapa
(minutos) (%) (%)
O
OH 0-5 90 10 Isocrático
H CH3
HO
O CH3 5-25 9010 1090 Gradiente
lineal
O
CH3 H 25-30 10 90 Isocrático
30-35 1090 9010 Gradiente
H H
lineal
O 35-40 90 10 Reequilibración
Solución A - Agua y acetonitrilo (80:20). Fil-
C23H32O6 PM: 404,5 50-03-3 trar y desgasificar.
Solución B - Acetonitrilo y agua (70:30). Fil-
Definición - Acetato de Hidrocortisona es
trar y desgasificar.
(11)-21-(Acetiloxi)-11,17-dihidroxi-pregn-4-eno-
Fase móvil - Emplear mezclas de Solución A y
3,20-diona. Debe contener no menos de 97,0 por
Solución B según se indica en Sistema cromatográ-
ciento y no más de 102,0 por ciento de C23H32O6,
fico. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir
sistema en 100. Cromatografía).
con las siguientes especificaciones.
Diluyente - Acetonitrilo, agua y ácido acético
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco glacial (700:300:1).
o casi blanco. Inodoro. Funde aproximadamente a Solución estándar - Disolver una cantidad
220 ºC, con descomposición. Poco soluble en alco- exactamente pesada de Acetato de Hidrocortiso-
hol y cloroformo; insoluble en agua. na SR-FA en Diluyente y diluir cuantitativamente y
Sustancia de referencia - Acetato de Hidrocor- en etapas, si fuera necesario, con Diluyente para
tisona SR-FA. obtener una solución de aproximadamente 5 µg por
ml.
CONSERVACIÓN Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 10 mg de Acetato de Hidrocortisona, transferir a
En envases inactínicos bien cerrados. un matraz aforado de 10 ml, disolver en Diluyente,
completar a volumen con el mismo solvente y mez-
ENSAYOS
clar.
Identificación Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
B - Absorción ultravioleta <470> respuestas de los picos según se indica en Procedi-
Solvente: metanol. miento: la desviación estándar relativa para inyec-
Concentración: 10 µg por ml. ciones repetidas no debe ser mayor de 5,0 %.
Las absortividades a 242 nm, calculadas Procedimiento - Inyectar por separado en el
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
2,5 %. 10 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
Determinación de la rotación óptica <170> tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
Rotación específica: Entre +158º y +165º. puestas de todos los picos. Calcular el porcentaje
Solución muestra: 5 mg por ml, en dioxano. de cada impureza en la porción de Acetato de
Hidrocortisona en ensayo, en relación al pico prin-
Determinación del residuo de ignición <270> cipal obtenido con la Solución estándar. No debe
Inapreciable, determinado sobre 100 mg. contener más de 1,0 % de cualquier impureza indi-
Pureza cromatográfica vidual y la suma de todas las impurezas no debe ser
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo mayor de 2,0 %.
para cromatografía de líquidos con un detector Pérdida por secado <680>
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de Secar al vacío a 60 °C durante 3 horas: no debe
15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida perder más de 1,0 % de su peso.
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1 ml por minuto. El
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
partículas porosas de sílice de 10 µm de diámetro.
El caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por
minuto.
Fase móvil - Cloruro de n-butilo, cloruro de
n-butilo saturado con agua, tetrahidrofurano, meta-
nol y ácido acético glacial (475:475:70:35:30).
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Acetato de Hidrocortiso-
na SR-FA en Fase móvil y diluir cuantitativamente
y en etapas, si fuera necesario, con Fase móvil para
obtener una solución de aproximadamente 0,1 mg
por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 10 mg de Acetato de Hidrocortisona,
transferir a un matraz aforado de 100 ml, completar
a volumen con Fase móvil y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: el factor de asimetría para el pico de
acetato de hidrocortisona no debe ser mayor de 2,0;
la desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C23H32O6 en la porción de Acetato de
Hidrocortisona en ensayo.
Determinación del residuo de ignición <270>
HIDROCORTISONA, No más de 0,1 %.
HEMISUCCINATO DE Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 0,8 ml por minu-
to.
Fase móvil - Agua, acetonitrilo y metanol
C25H34O8 . H2O PM: 480,6 83784-20-7 (700:285:15). Filtrar y desgasificar. Agregar 3 ml
de ácido acético glacial por litro de esta solución y
Anhidro PM: 462,5 2203-97-6 mezclar completamente. Hacer los ajustes necesa-
Definición - Hemisuccinato de Hidrocortisona rios (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatograf-
es (11 )-11,17-Dihidroxi-21-(3-carboxi- ía).
1-oxopropoxi)pregn-4-eno-3,20-diona, monohidra- Diluyente - Agua, acetonitrilo, tetrahidrofurano
to. Es anhidra o contiene una molécula de agua de y ácido acético glacial (500:250:250:1). Mezclar
hidratación. Debe contener no menos de 97,0 por completamente.
ciento y no más de 103,0 por ciento de C25H34O8, Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir tamente pesada de Hemisuccinato de Hidrocortiso-
con las siguientes especificaciones. na SR-FA en Diluyente y diluir cuantitativamente y
en etapas, si fuera necesario, con Diluyente para
Caracteres generales - Polvo blanco o casi obtener una solución de aproximadamente 6,6 µg
blanco. Higroscópico. Fácilmente soluble en ace- por ml.
tona y etanol; prácticamente insoluble en agua. Se Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
disuelve en soluciones diluidas de carbonatos alca- de 33 mg de Hemisuccinato de Hidrocortisona,
linos e hidróxidos alcalinos. transferir a un matraz aforado de 50 ml, disolver
Presenta polimorfismo. con Diluyente, completar a volumen con Diluyente
Sustancias de referencia - Hemisuccinato de y mezclar. [NOTA: se deben mantener las muestras
Hidrocortisona SR-FA. Fluorometolona SR-FA. a 5 °C o una temperatura menor durante el ensayo.]
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
CONSERVACIÓN Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedi-
En envases de cierre perfecto.
miento: la eficiencia de la columna no debe ser
menor de 5.000 platos teóricos; la desviación están-
ENSAYOS
dar relativa para inyecciones repetidas no debe ser
Identificación mayor de 5,0 %.
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
B - Absorción ultravioleta <470> aproximadamente 20 µl de la Solución muestra,
Solvente: alcohol. registrar el cromatograma y medir las respuestas de
Concentración: 20 µg por ml. todos los picos. Calcular el porcentaje de cada
Las absortividades a 242 nm, calculadas impureza en la porción de Hemisuccinato de Hidro-
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de cortisona en ensayo, en relación a la suma de las
3,0 %. respuestas de todos los picos. No debe contener
Determinación de la rotación óptica <170> más de 1,0 % de cualquier impureza y no debe
Rotación específica: Entre +124° y +134°. contener más de 2,0 % de impurezas totales. Igno-
Solución muestra: 10 mg por ml, en acetona. rar cualquier pico con una respuesta menor de
0,05 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 3 horas: la forma an- VALORACIÓN
hidra no debe perder más de 1,0 % de su peso y el
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
monohidrato no debe perder más de 4,0 % de su
para cromatografía de líquidos con un detector
peso.
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
por partículas porosas de sílice de 5 a 10 µm de
diámetro. El caudal debe ser aproximadamente
1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Cloruro de butilo, cloruro de buti-
lo saturado con agua, tetrahidrofurano, metanol y
ácido acético glacial (95:95:14:7:6). Filtrar y des-
gasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud
del sistema en 100. Cromatografía).
Solución del estándar interno - Preparar una so-
lución de Fluorometolona SR-FA en tetrahidrofura-
no de aproximadamente 3 mg por ml.
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 30 mg de Hemisuccinato de Hidrocorti-
sona SR-FA, transferir a un matraz aforado de
50 ml y agregar 5,0 ml de Solución del estándar
interno. Completar a volumen con cloroformo que
contenga 3 % de ácido acético glacial y mezclar
hasta disolver.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 30 mg de Hemisuccinato de Hidrocortiso-
na y proceder según se indica en Preparación
estándar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de hemi-
succinato de hidrocortisona y del estándar interno
no debe ser menor de 2,0; la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C25H34O8 en la porción de Hemisucci-
nato de Hidrocortisona en ensayo.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si el Hemisuccinato de
Hidrocortisona es anhidro o monohidrato.
Las absortividades a 242 nm, calculadas
HIDROCORTISONA, sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
SUCCINATO SÓDICO DE 3,0 %.
C - Debe responder al ensayo de la llama para
O O Sodio <410>.
OH
H CH3 O
HO ONa
Determinación de la rotación óptica <170>
O
Rotación específica:Entre +140° y +150°.
CH3 H
Solución muestra: 10 mg por ml, en alcohol.
H H
Contenido de sodio
O Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Succi-
nato Sódico de Hidrocortisona, disolver calentando
C25H33NaO8 PM: 484,5 125-04-2 suavemente, en 75 ml de ácido acético glacial.
Agregar 20 ml de dioxano, luego agregar cristal
Definición - Succinato Sódico de Hidrocortiso- violeta (SR) y titular con ácido perclórico
na es la Sal monosódica de (11ß)-11,17-dihidroxi- 0,1 N (SV). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N
21-(3-carboxi-1-oxopropoxi)pregn-4-eno- equivale a 2,299 mg de sodio. Debe contener entre
3,20-diona. Debe contener no menos de 97,0 por 4,60 y 4,84 % de sodio, calculado sobre la sustancia
ciento y no más de 102,0 por ciento de esteroides seca.
totales, calculados como C25H33NaO8, sobre la
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes Pérdida por secado <680>
especificaciones. Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
más de 2,0 % de su peso.
Caracteres generales - Sólido amorfo blanco o
casi blanco. Inodoro e higroscópico. Muy soluble VALORACIÓN
en agua y alcohol; muy poco soluble en acetona;
Preparación estándar - Proceder según se indi-
insoluble en cloroformo.
ca en Preparación estándar en 750. Valoración de
Sustancia de referencia - Hemisuccinato de esteroides empleando Hemisuccinato de Hidrocorti-
Hidrocortisona SR-FA. sona SR-FA, pero diluir la solución con alcohol
para obtener una concentración de 12,5 µg por ml.
CONSERVACIÓN Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
En envases inactínicos de cierre perfecto. dedor de 100 mg de Succinato Sódico de Hidrocor-
tisona, disolver con cantidad suficiente de alcohol
ENSAYOS para obtener un volumen de 200,0 ml y mezclar.
Transferir 5 ml de esta solución a un matraz aforado
Identificación de 200 ml, completar a volumen con alcohol y
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. mezclar. Transferir 20 ml de la solución resultante
Disolver 100 mg de Succinato Sódico de Hidrocor- a un erlenmeyer de 50 ml provisto de un tapón de
tisona en aproximadamente 10 ml de agua. Inme- vidrio.
diatamente después, agregar 1 ml de ácido clorhí- Procedimiento - A cada uno de los erlenmeyers
drico 3 N. Agitar brevemente; decantar de inmedia- que contienen la Preparación muestra y la Prepa-
to la fase acuosa y lavar el precipitado con dos ración estándar, respectivamente y a otro erlenme-
porciones adicionales de 10 ml de agua, retirando yer similar que contenga 20,0 ml de alcohol para
cada vez el agua por decantación. Retirar tanta preparar el blanco, agregar 2,0 ml de una solución
agua como sea posible, esparcir el precipitado en un preparada disolviendo 50 mg de azul de tetrazolio
recipiente apropiado y secar al vacío aproximada- en 10 ml de alcohol y mezclar. Luego agregar a
mente a 60 °C durante 3 horas: el espectro de ab- cada erlenmeyer 4,0 ml de una solución 1 en 10 de
sorción infrarroja de una dispersión del precipitado hidróxido de tetrametilamonio (SR) en alcohol,
obtenido en aceite mineral debe exhibir máximos mezclar, dejar en reposo en la oscuridad durante
sólo a las mismas longitudes de onda que el de una 90 minutos, agregar 1,0 ml de ácido acético glacial,
preparación similar de Hemisuccinato de Hidrocor- mezclar y proceder según se indica en Procedimien-
tisona SR-FA. to en 750. Valoración de esteroides, comenzando
B - Absorción ultravioleta <470> donde dice: “Determinar las absorbancias...”.
Solvente: metanol. Calcular la cantidad en mg de C25H33NaO8 en la
Concentración: 20 µg por ml. porción de Succinato Sódico de Hidrocortisona en
ensayo, por la fórmula siguiente:
8,38C(AM/AE)
en la cual C es la concentración de Hemisuccinato
de Hidrocortisona SR-FA en la Preparación están-
dar y AM y AE son las absorbancias de las solucio-
nes obtenidas a partir de la Preparación muestra y
la Preparación estándar, respectivamente.
Solución del estándar interno - Preparar una so-
HIDROCORTISONA, lución de benzoato de etilo en metanol de aproxi-
VALERATO DE madamente 2,0 mg por ml.
Preparación estándar - [NOTA: preparar in-
mediatamente antes de su uso]. Disolver una canti-
dad exactamente pesada de Valerato de Hidrocorti-
sona SR-FA en metanol para obtener una solución
de aproximadamente 0,5 mg por ml. Transferir
10 ml de esta solución y 10 ml de Solución del
estándar interno a un matraz aforado de 50 ml.
Completar a volumen con metanol y mezclar para
obtener una solución de aproximadamente 100 µg
de valerato de hidrocortisona por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
C26H38O6 PM: 446,6 57524-89-7
dedor de 100 mg de Valerato de Hidrocortisona y
Definición - Valerato de Hidrocortisona es transferir a un matraz aforado de 100 ml. Disolver
(11)-11,21-Dihidroxi-17-[(1-oxopentil)oxi]pregn- y completar a volumen con metanol y mezclar.
4-eno-3,20-diona. Debe contener no menos de 97,0 Transferir 5 ml de esta solución y 10 ml de Solución
por ciento y no más de 102,0 por ciento de del estándar interno a un matraz aforado de 50 ml.
C26H38O6, calculado sobre la sustancia seca y debe Completar a volumen con metanol y mezclar.
cumplir con las siguientes especificaciones. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Sustancia de referencia - Valerato de Hidro- Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
cortisona SR-FA. las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
CONSERVACIÓN ben ser aproximadamente 0,8 para benzoato de etilo
y 1,0 para valerato de hidrocortisona; la resolución
En envases bien cerrados. R entre los picos de valerato de hidrocortisona y
benzoato de etilo no debe ser menor de 3,0; la des-
ENSAYOS viación estándar relativa para inyecciones repetidas
Identificación no debe ser mayor de 2,0 %.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Procedimiento - Inyectar por separado en el
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- 10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
pal en el cromatograma obtenido a partir de la muestra, registrar los cromatogramas y medir las
Preparación muestra se debe corresponder con el respuestas de los picos principales. Calcular la
obtenido con la Preparación estándar. cantidad de C26H38O6 en la porción de Valerato de
Hidrocortisona en ensayo, relacionando las respues-
Determinación de la rotación óptica <170>
tas de los picos de valerato de hidrocortisona y del
Rotación específica: Entre + 37° y + 43°.
estándar interno en la Preparación muestra y la
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano.
Preparación estándar.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
más de 1,0 % de su peso.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
to.
Fase móvil - Agua y acetonitrilo (55:45). Fil-
trar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
una solución de aproximadamente 2,5 mg por ml y
HIDROCORTISONA homogeneizar.
Solución estándar - Diluir 1 ml de Solución
O muestra a 100 ml con Fase móvil.
OH
H CH3 OH Solución de resolución - Disolver cantidades
HO
exactamente pesadas de Hidrocortisona SR-FA y
CH3 H Prednisolona en Fase móvil para obtener una solu-
ción de aproximadamente 20 µg de cada una por
H H ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
O
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
C21H30O5 PM: 362,5 50-23-7 cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
Definición - Hidrocortisona es (11)11,17,21- ben ser aproximadamente 1,0 para prednisolona y
Trihidroxi-pregn-4-eno-3,20-diona. Debe contener 1,5 para hidrocortisona; la resolución R entre los
no menos de 97,0 por ciento y no más de 102,0 por picos de hidrocortisona y del estándar interno no
ciento de C21H30O5, calculado sobre la sustancia debe ser menor de 2,2.
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- Procedimiento - Inyectar por separado en el
ciones. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Solución estándar, la Solución muestra,
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco la Solución de resolución y Fase móvil como blan-
o casi blanco, inodoro. Funde aproximadamente a co, registrar los cromatogramas y medir las respues-
215 ºC, con descomposición. Moderadamente tas de todos los picos. Cromatografiar la Solución
soluble en acetona y alcohol; poco soluble en cloro- muestra durante aproximadamente cuatro veces el
formo; muy poco soluble en agua y éter. tiempo de retención del pico principal. A excep-
Presenta polimorfismo. ción del pico principal en el cromatograma obtenido
Sustancias de referencia - Hidrocortiso- a partir de la Solución muestra, la respuesta de
na SR-FA. ningún pico debe ser mayor que la mitad del pico
principal obtenido con la Solución estándar (0,5 %)
CONSERVACIÓN y la suma de las respuestas de todos los picos, a
excepción del pico principal, no debe ser mayor que
En envases bien cerrados.
1,5 veces la respuesta del pico principal obtenido
con la Solución estándar (1,5 %). Ignorar la res-
ENSAYOS
puesta de cualquier pico en el cromatograma obte-
Identificación nido a partir del blanco y cualquier pico con una
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. respuesta menor de 0,05 veces la respuesta del pico
B - Absorción ultravioleta <470> principal obtenido con la Solución estándar.
Solvente: metanol.
Concentración: 10 µg por ml. Pérdida por secado <680>
Las absortividades a 242 nm, calculadas Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de más de 1,0 % de su peso.
2,5 %. Impurezas orgánicas volátiles <520>
Determinación de rotación óptica <170> Método II.
Rotación específica: Entre + 150º y + 156º.
VALORACIÓN
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Determinación del residuo de ignición <270>
para cromatografía de líquidos con un detector
Inapreciable, determinado sobre 100 mg.
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
Pureza cromatográfica 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
Sistema cromatográfico y Fase móvil - Proce- por partículas de octadecilsilano totalmente ligada,
der según se indica en Valoración. de 5 µm de diámetro. Mantener la columna
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor aproximadamente a 45 °C. El caudal debe ser
de 25 mg de Hidrocortisona, transferir a un matraz aproximadamente 1,0 ml por minuto.
aforado de 10 ml y disolver en 2 ml de tetrahidrofu- Fase móvil - Transferir 220 ml de tetrahidrofu-
rano. Completar a volumen con agua para obtener rano a un matraz de 1 litro, agregar 700 ml de agua,
mezclar y dejar equilibrar. Completar a volumen
con agua y mezclar nuevamente. Filtrar y desgasi-
ficar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Hidrocortisona SR-FA en
metanol para obtener una solución de aproximada-
mente 0,1 mg por ml.
Preparación muestra - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Hidrocortisona en metanol
para obtener una solución de aproximadamente
0,1 mg por ml.
Solución de resolución - Disolver cantidades
exactamente pesadas de Hidrocortisona SR-FA y
Prednisolona en metanol para obtener una solución
de aproximadamente 20 µg de cada una por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografíar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de hidro-
cortisona y prednisolona no debe ser menor de 2,2;
la desviación estándar relativa para inyecciones
repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales de la Preparación
estándar y la Preparación muestra, registrar los
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
principales. Calcular la cantidad en mg de
C21H30O5 en la porción de Hidrocortisona en ensa-
yo.
HIDROXICLOROQUINA, VALORACIÓN
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
SULFATO DE dedor de 100 mg de Sulfato de Hidroxicloroquina,
Cl disolver en 5 ml de agua y diluir cuantitativamente
y en etapas con ácido clorhídrico diluido 1 en 100
H para obtener una solución de aproximadamente
N H2SO4
N CH3 10 µg por ml.
CH3 OH Preparación estándar - Proceder según se indi-
N
ca en Preparación muestra empleando Sulfato de
Hidroxicloroquina SR-FA.
C18H26ClN3O . H2SO4 PM: 434,0 747-36-4 Procedimiento - Determinar concomitantemen-
Definición - Sulfato de Hidroxicloroquina es te las absorbancias de ambas soluciones en celdas
Sulfato de (±)-2-[[4-[(7-cloro-4-quinolinil)ami- de 1 cm a la longitud de onda de máxima absorción,
no]pentil]etilamino]etanol (1:1). Debe contener no 343 nm, (ver 470. Espectrofotometría ultravioleta
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por y visible) empleando ácido clorhídrico diluido
ciento de C18H26ClN3O . H2SO4, calculado sobre la 1 en 100 como blanco. Calcular la cantidad de
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes C18H26ClN3O . H2SO4 en la porción de Sulfato de
especificaciones. Hidroxicloroquina en ensayo.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción ultravioleta <470>.
Solvente: ácido clorhídrico diluido
1 en 100.
Concentración: 10 µg por ml.
B - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
C - Una solución de Sulfato de Hidroxicloro-
quina 1 en 100 debe responder a los ensayos para
Sulfato <410>.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
más de 2,0 % de su peso.
Impurezas comunes <510>
Solución muestra y Solución estándar: emplear
una solución al 10 % de agua en metanol como
solvente.
Fase móvil: alcohol, agua e hidróxido de amo-
nio (80:16:4).
Revelador: 1.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
(9 en 10), agitar y calentar en un baño de agua du-
HIDROXIPROPIL rante exactamente 3 minutos. Inmediatamente
METILCELULOSA <PDG> enfriar en un baño de hielo, agregar cuidadosamente
0,6 ml de una solución preparada disolviendo 2 g de
9004-65-3
ninhidrina en 1 litro de una mezcla de butanol y
Definición - Hidroxipropilmetilcelulosa es el ácido acético diluido (95:5). Agitar y dejar reposar
Éter 2-hidroxipropilmetílico de la celulosa, es una a 25 ºC: se debe desarrollar inmediatamente un
mezcla de ésteres metílicos e hidroxipropílicos de la color rojo que cambia a púrpura durante los siguien-
celulosa. Debe contener grupos metoxilos (-OCH3) tes 100 minutos.
e hidroxipropoxilos (-OCH2CHOHCH3) dentro de D - Transferir entre 2 y 3 ml de la solución ob-
las especificaciones de la tabla siguiente para los tenida en Identificación B a un vidrio de reloj y
diferentes tipos de Hidroxipropilmetilcelulosa, dejar evaporar el agua: se debe formar una capa
calculado sobre la sustancia seca, clara y continua.
Metoxilos E - Agregar exactamente 50 ml de la solución
Hidroxipropoxilos obtenida en Identificación B a 50 ml de agua, colo-
Tipo de (%) (%) car un termómetro, agitar empleando un agitador
sustitución
Mínimo Máximo Mínimo Máximo magnético y comenzar a calentar a razón de 2 a 5 ºC
1.828 16,5 20,0 23,0 32,0 por minuto. Determinar la temperatura a la cual
empieza a aumentar la turbidez: la temperatura de
2.208 19,0 24,0 4,0 12,0 floculación debe ser mayor a 50 ºC.
2.906 27,0 30,0 4,0 7,5 Determinación de la viscosidad <190>
2.910 28,0 30,0 7,0 12,0 Cuando en el rótulo se indica que la viscosidad
es menor a 600 mPa.s.
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. Solución muestra - Pesar exactamente una por-
ción de Hidroxipropilmetilcelulosa equivalente a
Caracteres generales - Polvo o gránulos blan-
4,0 g de Hidroxipropilmetilcelulosa, calculada sobre
cos, blanco-amarillentos o blanco-grisáceos.
la sustancia seca. Transferir a un recipiente de boca
Higroscópico después de ser secado. Prácticamente
ancha, agregar agua caliente hasta obtener un peso
insoluble en acetona, agua caliente, alcohol, éter y
total de 200 g. Tapar, agitar a 400 50 rpm durante
tolueno. Se disuelve en agua fría dando soluciones
10 ó 20 minutos hasta que las partículas estén com-
coloidales.
pletamente dispersas y humectadas. Raspar las
CONSERVACIÓN paredes del recipiente con una espátula, si fuera
necesario, para asegurar que no hay sustancia sin
En envases bien cerrados. disolver y continuar la agitación en un baño de agua
equilibrado a una temperatura por debajo de 10 ºC
ENSAYOS durante 20 a 40 minutos. Ajustar el peso de la solu-
Identificación ción, si fuera necesario, a 200,0 g empleando agua
A - Distribuir uniformemente 1,0 g de Hidroxi- fría. Centrifugar para eliminar burbujas de aire y
propilmetilcelulosa sobre la superficie de 100 ml de remover con una espátula cualquier espuma presen-
agua en un vaso colocando un tapón suavemente si te.
fuera necesario para garantizar una capa uniforme Procedimiento - Determinar la viscosidad ci-
sobre la superficie. Dejar reposar durante 1 ó 2 nemática según se indica en Determinación de la
minutos: el material en polvo se debe agregar sobre viscosidad mediante el Viscosímetro de Tubo Capi-
la superficie. lar. Determinar la densidad (ver 180. Determina-
B - Distribuir uniformemente 1,0 g de Hidroxi- ción de la densidad relativa). Calcular la viscosi-
propilmetilcelulosa en 100 ml de agua hirviendo, dad por la fórmula siguiente:
mezclar empleando un agitador magnético con una
/
barra de 25 mm de largo: se debe formar una poción
gomosa y las partículas no se deben disolver. Dejar en la cual es la densidad y es la viscosidad ci-
enfriar la poción gomosa a 5 ºC y agitar empleando nemática: la viscosidad no debe ser menor a 80 ni
un agitador magnético: se debe formar una solución mayor a 120 % del valor declarado en el rótulo.
clara o ligeramente turbia con un espesor que de- Cuando en el rótulo se indica que la viscosidad
pende de su grado de viscosidad. es igual o mayor a 600 mPa.s.
C - A 0,2 ml de la solución obtenida en Identifi-
Solución muestra - Pesar exactamente una por-
cación B, agregar 9 ml de ácido sulfúrico diluido ción de Hidroxipropilmetilcelulosa, equivalente a
10,0 g de Hidroxipropilmetilcelulosa, calculada No más de 1,5 % determinado a 600 50 ºC.
sobre la sustancia seca. Transferir a un recipiente
de boca ancha, agregar agua caliente hasta obtener VALORACIÓN
un peso total de 500 g. Tapar, agitar a Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
400 50 rpm durante 10 ó 20 minutos hasta que las para cromatografía de gases con un detector de
partículas estén completamente dispersas y humec- conductividad térmica o de ionización a la llama de
tadas. Raspar las paredes del recipiente con una hidrógeno y una columna de 1,8 a 3 m 3 a 4 mm
espátula, si fuera necesario, para asegurar que no con una fase estacionaria constituida por tierra
hay sustancia sin disolver, y continuar la agitación silícea de 125 a 150 µm de diámetro recubierta con
en un baño de agua equilibrado a una temperatura polímero de metilsilicona entre 10 y 20 %. Mante-
por debajo de 10 ºC durante 20 a 40 minutos. Ajus- ner la columna a aproximadamente 100 ºC. Se debe
tar el peso de la solución, si fuera necesario, a emplear helio como gas transportador para el detec-
500,0 g empleando agua fría. Centrifugar para tor de conductividad térmica y helio o nitrógeno
eliminar burbujas de aire y remover con una espátu- para el detector de ionización a la llama de hidróge-
la cualquier espuma presente. no.
Procedimiento - Determinar la viscosidad de la Recipiente de reacción - Emplear un recipiente
solución empleando un viscosímetro rotatorio, Bro- de 5 ml hermético, de 50 mm de altura, 20 mm de
okfield tipo IV o equivalente. Proceder según se diámetro externo y 13 mm de diámetro interno en el
indica en la siguiente tabla, según los valores de cuello, equipado con un cierre tipo septo de goma
viscosidad declarados en el rótulo. de butilpolitetrafluoretileno, hermético, sellado por
Viscosidad precinto de aluminio o algún otro sistema que pro-
Nº de vea adecuada hermeticidad.
Declarada rpm Factor
Rotor Estufa - Emplear un módulo de calentamiento
(mPa.s)
600 – 1.399 3 60 20 con una plancha de aluminio de forma cuadrada con
1.400 – 3.499 3 12 100 aberturas de 20 mm de diámetro y 32 mm de pro-
3.500 – 9.499 4 60 100 fundidad como para que quepan los Recipientes de
9.500 – 99.499 4 6 1.000 reacción, capaz de mezclar el contenido del reci-
99.500 o más 4 3 2.000 piente empleando el agitador magnético provisto en
el módulo de calentamiento o empleando un agita-
Dejar rotar el cilindro durante 2 minutos antes dor recíproco a aproximadamente 100 veces por
de realizar la medición y dejar reposar 2 minutos minuto.
antes de la siguiente medición. Repetir la operación Solución del estándar interno - o-xileno y n-
dos veces más y calcular el promedio de tres medi- octano (100:3).
ciones: la viscosidad no debe ser menor a 45 ni Preparación estándar - Transferir entre 60 y
mayor a 140 % del valor declarado en el rótulo. 100 mg de ácido adípico, 2,0 ml de Solución del
[NOTA: la densidad es 1,00 g por ml, por lo tan- estándar interno y 2,0 ml de ácido iodhídrico al
to no es necesario la determinación de la densidad 57 %, a un Recipiente de reacción, tapar, sellar y
durante cada medición en el caso de tenerla como pesar exactamente. Agregar entre 15 y 22 µl de
dato confirmado.] ioduro de isopropilo a través del septo con una
Determinación del pH <250> jeringa, pesar exactamente, agregar 45 µl de ioduro
Sumergir el papel indicador sobre una porción de metilo a través del septo con una jeringa y volver
de solución empleada en el ensayo Determinación a pesar exactamente. Agitar el Recipiente de reac-
de la viscosidad a 20 2 ºC durante 5,0 0,5 minu- ción y emplear la fase superior como Preparación
tos: el pH debe estar comprendido entre 5,0 y 8,0. estándar.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Límite de metales pesados <590> dedor de 65 mg de Hidroxipropilmetilcelulosa,
Proceder según se indica en Método III, excepto transferir a un Recipiente de reacción, agregar entre
que los 2 ml de Solución estándar de plomo 60 y 100 mg de ácido adípico, 2,0 ml de Solución
(10 ppm) se deben agregar al matraz con la mezcla del estándar interno y 2,0 ml de ácido iodhídrico al
de 8 ml de ácido sulfúrico y 10 ml de ácido nítrico 57 %, tapar inmediatamente, sellar y pesar exacta-
al principio de la preparación. El límite es 0,002 %. mente. Mezclar el contenido del Recipiente de re-
Pérdida por secado <680> acción calentando en la Estufa a 130 2 ºC durante
Secar a 105 ºC durante 1 hora: no debe perder 60 minutos. [NOTA: si no se emplea agitación
más de 5,0 % de su peso. mecánica o magnética, agitar bien el Recipiente de
reacción a intervalos de 5 minutos durante los pri-
Determinación del residuo de ignición <270>
meros 30 minutos del calentamiento]. Dejar enfriar
y pesar nuevamente. Si la pérdida de peso es menor
a 0,50 % del contenido, emplear la fase superior
como Preparación muestra.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: ajustar la velocidad de flujo del gas
transportador de manera que el tiempo de retención
del estándar interno sea aproximadamente
10 minutos. El ensayo solo es válido si los picos de
ioduro de metilo, ioduro de isopropilo y del están-
dar interno se resuelven completamente y si el or-
den de elución de los picos es: ioduro de metilo,
ioduro de isopropilo y el estándar interno.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (entre 1 y 2 l) de
la Preparación estándar y la Preparación muestra,
registrar los cromatogramas y medir las respuestas
de los picos principales. Calcular el porcentaje de
grupos metoxilos en la porción de Hidroxipropilme-
tilcelulosa en ensayo, por la fórmula siguiente:
R Ma PEa
21,864
R Ea PM
R Mb PEb
44,17
R Eb PM
ROTULADO
Indicar en el rótulo la viscosidad nominal en
mPa.s y el tipo de sustitución.
una cámara cromatográfica para cromatografía
HIDROXIUREA descendente (ver 100. Cromatografía) que contenga
Fase estacionaria en el fondo de la cámara y Fase
O móvil en la cubeta superior. Desarrollar durante
OH 24 horas, retirar la tira de la cámara, secar al aire y
H2N N desarrollar nuevamente durante 24 horas. Retirar la
H
tira, secar al aire, pulverizar sobre esta con Revela-
CH4N2O2 PM: 76,1 127-07-1 dor y calentar a 90 °C durante 1 a 2 minutos: a
excepción de la mancha principal en el cromato-
Definición - Hidroxiurea es Hidroxicarbamida. grama obtenido a partir de la Solución muestra, no
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no deben observarse más de dos manchas y las intensi-
más de 103,0 por ciento de CH4N2O2, calculado dades de dichas manchas no deben ser mayores que
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- la de la mancha obtenida con la Solución están-
guientes especificaciones. dar (0,5 %). Los valores de Rf relativos a la
Caracteres generales - Polvo blanco o casi hidroxiurea, la mancha principal, deben ser 0,65 y
blanco. Es algo higroscópico, se descompone en 1,26 (urea).
presencia de humedad. Funde a más de 133 °C, Límite de metales pesados <590>
con descomposición. Fácilmente soluble en agua y No más de 0,003 %.
alcohol caliente.
Pérdida por secado <680>
Sustancia de referencia - Hidroxiurea SR-FA. Secar al vacio a 60 °C durante 3 horas: no debe
perder más de 1,0 % de su peso.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto,. Proteger de la Impurezas orgánicas volátiles <520>
humedad. Método I.
VALORACIÓN
ENSAYOS
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Identificación
para cromatografía de líquidos con un detector
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
ultravioleta ajustado a 214 nm y una columna de
Determinación del residuo de ignición <270> 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
No más de 0,50 %. por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 m de diámetro. El caudal
Urea y sustancias relacionadas debe ser aproximadamente 0,5 ml por minuto.
Fase estacionaria - Agitar volúmenes iguales Solución A - Disolver 1,7 g de sulfato ácido de
de alcohol isobutílico y agua en una ampolla de tetrabutilamonio y 1,74 g de fosfato dibásico de
decantación y dejar que las fases se separen. Em- potasio anhidro en 1 litro de agua y ajustar a pH 5,0
plear la fase inferior como fase estacionaria. con hidróxido de sodio 1 N o ácido fosfórico al
Fase móvil - Emplear la fase superior de la 85 %.
mezcla realizada en Fase estacionaria. Solución B - Metanol.
Solución reguladora de pH 6,5 - Mezclar Fase móvil - Solución A y Solución B (8,5:1,5).
700 ml de fosfato dibásico de sodio 0,2 M con Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
300 ml de ácido cítrico 0,1 M. (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución estándar - Preparar una solución de Solución de resolución - Disolver cantidades
urea en agua de aproximadamente 0,1 mg por ml. exactamente pesadas de Hidroxiurea SR-FA y clor-
Solución muestra - Disolver 10 mg de hidrato de hidroxilamina en Fase móvil y diluir
Hidroxiurea en 1,0 ml de agua. cuantitativamente y en etapas, si fuera necesario,
Revelador - Disolver 1,0 g de con Fase móvil para obtener una solución que con-
p-dimetilaminobenzaldehído en 50 ml de alcohol, tenga aproximadamente 0,4 mg de cada una por ml.
agregar 2 ml de ácido clorhídrico y diluir a 100 ml Preparación estándar - Disolver una cantidad
con alcohol. exactamente pesada de Hidroxiurea SR-FA en Fase
Procedimiento - Sumergir una tira de papel pa- móvil y diluir cuantitativamente y en etapas, si fuera
ra cromatografía (Whatman N°1 o equivalente) en necesario, con Fase móvil para obtener una solución
Solución reguladora de pH 6,5. Secar la tira de de aproximadamente 0,4 mg por ml.
papel y aplicar sobre esta 100 µl de Solución mues- Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
tra y 50 µl de Solución estándar. Colocar la tira en dedor de 200 mg de Hidroxiurea y transferir a un
matraz aforado de 500 ml. Disolver y completar a
volumen con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de
hidroxilamina e hidroxiurea no debe ser menor de
1,5; la eficiencia de la columna para el pico de
hidroxiurea no debe ser menor de 5.000 platos teó-
ricos; el factor de asimetría no debe ser mayor de
1,5. Cromatografiar la Preparación estándar y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 l) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de CH4N2O2 en la porción de Hidroxiurea
en ensayo.
Entre 5,5 y 6,5; determinado sobre una solución
HIOSCINA, de aproximadamente 50 mg por ml en agua libre de
BUTILBROMURO dióxido de carbono.
Determinación del residuo de ignición <270>
O
No más de 0,1 %; determinado sobre 500 mg.
-
CH3
Br H OH
Pérdida por secado <680>
N
+ O Secar entre 100 y 105 °C: no debe perder más
C H3 de 2,5 % de su peso, determinado sobre 500 mg.
H O
Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
C21H30BrNO4 PM: 440,4 149-64-4
para cromatografía de líquidos con un detector
Sinonimia - Butilbromuro de Escopolamina ultravioleta ajustado a 210 nm y una columna de
Definición - Butilbromuro de Hioscina es el 12,5 cm × 4,0 mm con fase estacionaria constituida
Bromuro de (1R,2R,4S,5S,7s,9r)-9-butil- por octilsilano químicamente unido a partículas
7-[[(2S)-3-hidroxi-2-fenilpropanoil]oxi]-9-metil- porosas de sílice de 4 µm de diámetro. Mantener la
3-oxa-9-azoniatriciclo[3.3.1.02,4]nonano. Debe columna a 25 ± 1 °C. El caudal debe ser aproxima-
contener no menos de 98,0 por ciento y no más de damente 2,0 ml por minuto.
101,0 por ciento de C21H30BrNO4, calculado sobre Solución de fosfato pH 3,3 - Disolver 7,0 g de
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes fosfato monobásico de potasio en 1 litro de agua y
especificaciones. ajustar a pH 3,3 con ácido fosfórico 0,05 M.
Fase móvil - Disolver 5,8 g de laurilsulfato de
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco sodio en una mezcla de 410 ml de acetonitrilo y
o casi blanco. Fácilmente soluble en agua y en 605 ml de Solución de fosfato pH 3,3. Filtrar y
cloruro de metileno; moderadamente soluble en desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
alcohol absoluto. Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Sustancias de referencia - Butilbromuro de Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
Hioscina SR-FA. N-Butilhioscina SR-FA. de 50 mg de Butilbromuro de Hioscina, transferir a
un matraz aforado de 10 ml, disolver con Fase
CONSERVACIÓN móvil y completar a volumen con Fase móvil.
En envases de cierre perfecto. Solución estándar A - Diluir 1,0 ml de Solución
muestra a 50,0 ml con Fase móvil. Diluir 5,0 ml de
ENSAYOS
esta solución a 50,0 ml con Fase móvil.
Identificación
Solución estándar B - Diluir 10,0 ml de Solu-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
ción estándar A a 10,0 ml con Fase móvil.
B - Una solución de Butilbromuro de Hioscina
Solución estándar C - Disolver 5,0 mg de
debe responder al ensayo para Bromuro <410>.
N-Butilhioscina SR-FA en Fase móvil, agregar
C - Preparar una solución de Butilbromuro de
1,0 ml de Solución muestra y diluir a 10,0 ml con
Hioscina de aproximadamente 50 mg por ml en
Fase móvil. Diluir 5,0 ml de esta solución a
agua libre de dióxido de carbono. A 5 ml de esta
50,0 ml con Fase móvil.
solución agregar 2 ml de solución de hidróxido de
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
sodio al 8,5 %: no se debe formar precipitado.
Cromatografiar la Solución estándar C y registrar
D - A 1 mg de Butilbromuro de Hioscina, agre-
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
gar 0,2 ml de ácido nítrico y evaporar hasta seque-
cedimiento: la resolución R entre los picos de butil-
dad en un baño de agua. Disolver el residuo con
hioscina y N-butilhioscina no debe ser menor de
2 ml de acetona y agregar 0,1 ml de una solución de
1,5; el factor de asimetría para el pico de butilhios-
hidróxido de potasio de aproximadamente 3,0 % en
cina no debe ser mayor de 2,5.
metanol: se debe desarrollar color violeta.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Determinación de la rotación óptica <170> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Rotación específica: entre –18° y –20°, sobre la 10 µl) de la Solución muestra y las Soluciones
sustancia seca. estándar A, B y C. Registrar los cromatogramas
Solución muestra: 50 mg por ml, en agua libre durante al menos 3,5 veces el tiempo de retención
de dióxido de carbono. de butilhioscina y medir las respuestas de los todos
Determinación del pH <250> los picos. El tiempo de retención del pico de butil-
hioscina debe ser aproximadamente 7,0 minutos.
Los tiempo de retención relativos al pico de butil-
hioscina deben ser aproximadamente 0,1 para ácido
DL-tropico, 0,36 para hioscina, 0,4 para metilhios-
cina, 0,7 para propilhioscina, 0,8 para
N-butilhioscina, 0,9 para pseudo isómero de butil-
hioscina y 3,0 para apo-N-butilhioscina. Para el
cálculo del contenido de ácido DL-trópico, emplear
un factor de corrección F igual a 0,3 y para el cálcu-
lo del contenido de apo-N-butilhioscina, emplear un
factor de corrección F igual a 0,6. En el cromato-
grama obtenido a partir de la Solución muestra, la
respuesta del pico correspondiente a hioscina no
debe ser mayor que la respuesta del pico principal
obtenido con la Solución estándar B (0,1 %); las
respuestas individuales de los picos correspondien-
tes a ácido DL-tropico, metilhioscina, propilhiosci-
na, N-butilhioscina, pseudo isómero de butilhiosci-
na y apo-N-butilhioscina, no deben ser mayores,
cada una de ellas, que la respuesta del pico principal
obtenido con la Solución estándar A (0,2 %); la
respuesta de cualquier otra impureza individual no
debe ser mayor que la respuesta del pico principal
obtenido con la Solución estándar B (0,1 %); y la
suma de las respuestas de todos los picos no debe
ser mayor que dos veces la respuesta del pico prin-
cipal obtenido con la Solución estándar A (0,2 %).
Ignorar la respuesta de cualquier pico con una res-
puesta menor a 0,5 veces la respuesta del pico prin-
cipal obtenido con Solución estándar B (0,05 %).
Ignorar el pico perteneciente al ion bromuro, el cual
eluye cerca del frente del solvente.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 400 mg de Bu-
tilbromuro de Hioscina y disolver en agua. Titular
con nitrato de plata 0,1 N (SV), determinando el
punto final potenciométricamente (ver 780. Volu-
metría). Cada ml de nitrato de plata 0,1 N equivale
a 44,04 mg de C21H30BrNO4.
hasta obtener 50 ml. Enfriar en un baño de hielo.
HOMATROPINA, A una segunda porción de 10,0 ml de la solución de
BROMHIDRATO DE Bromhidrato de Homatropina, agregar 5 ml de
ácido nítrico 1 N y luego agua hasta 50 ml. Enfriar
en baño de hielo. Agregar 1 gota de nitrofenantro-
lina (SR) a cada solución, manteniendo las solucio-
nes frías y titular con nitrato cérico amónico
0,05 N (SV) hasta la desaparición del color rosa.
Cada ml de la diferencia de volúmenes de nitrato
cérico amónico 0,05 N requerido equivale a
8,907 mg de C16H21NO3 . HBr.
VALORACIÒN
Pesar exactamente alrededor de 400 mg de
Bromhidrato de Homatropina, disolver en 50,0 ml
de agua y mezclar. Transferir 10,0 ml de esta solu-
ción a un vaso de precipitados, agregar 5 ml de
hidróxido de sodio 1 N y calentar casi a ebullición.
Agregar 10 ml de ácido nítrico 1 N y luego agua
E - Una solución de Metilbromuro de Homa-
HOMATROPINA, tropina 1 en 20 debe responder al ensayo para Bro-
METILBROMURO muro <410>.
Determinación del pH <250>
- Entre 4,5 y 6,5; determinado sobre una solución
Br OH
+
1 en 100.
H3C O
N
Pérdida por secado <680>
CH3 H O Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
más de 0,25 % de su peso.
C17H24BrNO3 PM: 370,3 80-49-9 Determinación del residuo de ignición <270>
Definición - Metilbromuro de Homatropina es No más de 0,2 %.
el Bromuro de 3-(hidroxifenilacetil)oxi- Homatropina, atropina y otros alcaloides so-
8,8-dimetil-8-azoniabiciclo[3.2.1]octano. Debe lanáceos
contener no menos de 98,5 por ciento y no más de Agregar unas gotas de hidróxido de amonio 6 N
100,5 por ciento de C17H24BrNO3, calculado sobre a 1,0 ml de solución de Metilbromuro de Homatro-
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes pina 1 en 50, agregar 5 ml de cloroformo y agitar.
especificaciones. Evaporar hasta sequedad la fase clorofórmica en un
Caracteres generales - Polvo blanco. Se oscu- baño de vapor. Calentar el residuo con 1,5 ml de
rece lentamente al exponerse a la luz.. Funde una solución preparada disolviendo 500 mg de
aproximadamente a 190 °C. Muy soluble en agua; cloruro mercúrico en 25 ml de una mezcla de alco-
fácilmente soluble en alcohol; prácticamente inso- hol y agua (5:3): no se debe producir coloración
luble en acetona y éter. amarilla o roja.
Sustancia de referencia - Metilbromuro de Impurezas orgánicas volátiles <520>
Homatropina SR-FA. Método I.
CONSERVACIÓN VALORACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto. Pesar exactamente alrededor de 700 mg de Me-
tilbromuro de Homatropina, disolver en una mezcla
ENSAYOS de 50 ml de ácido acético glacial y 10 ml de acetato
Identificación mercúrico (SR). Agregar 1 gota de cristal viole-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. ta (SR) y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV)
[NOTA: si se observan diferencias en los espectros, hasta punto final verde-azul. Realizar una determi-
disolver la muestra y la Sustancia de referencia en nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
metanol, recristalizar cada solución mediante el sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
agregado de dioxano y registrar nuevamente los perclórico 0,1 N equivale a 37,03 mg de
espectros.] C17H24BrNO3.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: alcohol.
Concentración: 1 mg por ml.
Las absortividades a 258 nm, calculadas sobre la
sustancia seca, no deben diferir en más de 3,0 %.
C - El agregado de iodomercuriato de pota-
sio (SR) a una solución de Metilbromuro de Homa-
tropina 1 en 50 debe producir un precipitado blanco
o levemente amarillo. Soluciones de hidróxidos
alcalinos o carbonatos no deben producir precipita-
do aun cuando la solución de Metilbromuro de
Homatropina sea concentrada [NOTA: esta carac-
terística es diferencial con muchos otros alcaloides.]
D - El agregado de reineckato de amonio (SR) a
una solución de Metilbromuro de Homatropi-
na 1 en 50 debe producir un precipitado rojo.
4-isobutilacetofenona (C12H16O) en la porción de
IBUPROFENO Ibuprofeno en ensayo, empleando las respuestas de
CH3 los picos de 4-isobutilacetofenona relativas al
estándar interno. No debe contener más de 0,1 %.
OH
CH3 Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
O
H3C para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 214 nm y una columna de
C13H18O2 PM: 206,3 15687-27-1 15 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
Definición - Ibuprofeno es Ácido (±) -metil-
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. Mantener la
4-(2-metilpropil)bencenoacético. Debe contener no
columna a 30,0 ± 0,2 °C. El caudal debe ser
menos de 97,0 por ciento y no más de 103,0 por
aproximadamente 2 ml por minuto.
ciento de C13H18O2, calculado sobre la sustancia
Fase móvil - Agua, previamente ajustada a
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi-
pH 2,5 con ácido fosfórico, y acetonitrilo (134:68).
caciones.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco ma en 100. Cromatografía).
o casi blanco. Muy soluble en acetona, alcohol, Solución muestra - Preparar una solución de
cloroformo y metanol; poco soluble en acetato de Ibuprofeno en acetonitrilo de aproximadamente
etilo; prácticamente insoluble en agua. 5 mg por ml.
Sustancia de referencia - Ibuprofeno SR-FA. Solución de resolución - Preparar una solución
de Ibuprofeno y valerofenona en acetonitrilo de
CONSERVACIÓN aproximadamente 5 mg de cada uno por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
En envases de cierre perfecto. Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
ENSAYOS cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
Identificación ben ser aproximadamente 0,8 para valerofenona y
A - Absorción infrarroja <460>. En suspen- 1,0 para ibuprofeno; la resolución R entre los picos
sión. [NOTA: no se debe secar la muestra ni la de valerofenona e ibuprofeno no debe ser menor
Sustancia de referencia.] de 2,0.
B - Absorción ultravioleta <470> Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
Concentración: 250 µg por ml. aproximadamente 5 µl de la Solución muestra,
Solvente: hidróxido de sodio 0,1 N. registrar los cromatogramas y medir las respuestas
Las absortividades a 264 y 273 nm, calcu- de los picos. Calcular el porcentaje de cada impu-
ladas sobre la sustancia anhidra, no deben diferir en reza en la porción de Ibuprofeno en ensayo, en
más de 3,0 %. relación a la suma de las respuestas de todos los
C - Examinar los cromatogramas obtenidos en picos. No debe contener más de 0,3 % de cualquier
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- impureza individual y la suma de todas las impure-
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- zas no debe ser mayor de 1,0 %.
paración muestra debe ser similar al obtenido con Impurezas orgánicas volátiles <520>
la Preparación estándar. Método III.
Determinación de agua <120> Solvente: dimetilsulfóxido.
Titulación volumétrica directa. No más de
1,0 %. VALORACIÓN
Determinación del residuo de ignición <270> Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
No más de 0,5 %. para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
Límite de Metales pesados <590>
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
Método II. No más de 0,002 %. por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Límite de 4-isobutilacetofenona porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
A partir de los cromatogramas de la Preparación caudal debe ser aproximadamente 2 ml por minuto.
muestra y la Solución estándar de Fase móvil - Disolver 4,0 g de ácido cloroacéti-
4-isobutilacetofenona obtenidos según se indica en co en 400 ml de agua, ajustar a pH 3,0 con hidróxi-
Valoración, calcular el porcentaje de do de amonio y agregar 600 ml de acetonitrilo.
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución del estándar interno - Preparar una so-
lución de valerofenona en Fase móvil de aproxima-
damente 0,35 mg por ml.
Solución estándar de 4-isobutilacetofenona -
Disolver cuantitativamente una cantidad exacta-
mente pesada de 4-isobutilacetofenona en acetoni-
trilo para obtener una solución de aproximadamente
0,6 mg por ml. Transferir 2,0 ml de esta solución a
un matraz aforado de 100 ml, completar a volumen
con Solución del estándar interno y mezclar para
obtener una solución de aproximadamen-
te 0,012 mg de 4-isobutilacetofenona por ml.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Ibuprofeno SR-FA en Solu-
ción del estándar interno para obtener una solución
de aproximadamente 12 mg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 1.200 mg de Ibuprofeno, transferir a un
matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con
Solución del estándar interno y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 1,4 para el estándar inter-
no y 1,0 para ibuprofeno; la resolución R entre los
picos de ibuprofeno y del estándar interno no debe
ser menor de 2,5; la desviación estándar relativa
para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
2,0 %. Cromatografiar la Solución estándar de
4-Isobutilacetofenona y registrar las respuestas de
los picos según se indica en Procedimiento: los
tiempos de retención relativos deben ser aproxima-
damente 1,0 para valerofenona y 1,2 para 4-isobu-
tilacetofenona; los factores de asimetría para los
picos individuales no deben ser mayores de 2,5; la
resolución R entre los picos de valerofenona y
4-isobutilacetofenona no debe ser menor de 2,5; la
desviación estándar relativa para inyecciones repe-
tidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
5 µl) de la Preparación estándar, la Preparación
muestra y la Solución estándar de
4-isobutilacetofenona, registrar los cromatogramas
y medir las respuestas de los picos principales.
Calcular la cantidad de C13H18O2 en la porción de
Ibuprofeno en ensayo.
Examinar la mezcla empleando un microscopio
IDARUBICINA, óptico con luz polarizada: las partículas deben pre-
CLORHIDRATO DE sentar birrefringencia y posiciones de extinción
cuando se gira la platina del microscopio, excepto
O OH O cuando se declara la forma amorfa, donde la mayor-
ía de las partículas no presentan dichas propiedades.
CH3
OH Pureza cromatográfica
Empleando el cromatograma de la Preparación
O OH O muestra obtenido en Valoración y omitiendo el pico
. HCl debido al solvente, calcular el porcentaje de cada
H3C O impureza en la porción de Clorhidrato de Idarubici-
na en ensayo, en relación a la suma de las respues-
NH2
OH tas de todos los picos. No debe contener más de
1,0 % de cualquier impureza individual y la suma
C26H27NO9 . HCl PM: 534,0 57852-57-0 de todas las impurezas no debe ser mayor de 3,0 %.
Definición - Clorhidrato de Idarubicina es VALORACIÓN
Clorhidrato de (7S-cis)-9-acetil-7-[(3-amino-2,3,6-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
trideoxi--L-lixo-hexopiranosil)oxi]-7,8,9,10-
para cromatografía de líquidos con un detector
tetrahidro-6,9,11-trihidroxi-5,12-naftacenodiona.
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
Debe contener no menos de 960 µg y no más de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
1.030 µg de C26H27NO9 . HCl por mg, calculado
por trimetilsilano químicamente unido a partículas
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las
siguientes especificaciones. porosas de sílice de 3 a 10 m de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 2,0 ml por minu-
Caracteres generales - Polvo rojo anaranjado a to.
rojo amarronado. Soluble en metanol; poco soluble Fase móvil - Agua, acetonitrilo, metanol y áci-
en agua; insoluble en acetona y éter etílico. do fosfórico (540:290:170:2). Disolver 1,0 g de
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Ida- laurilsulfato de sodio en 1 litro de esta mezcla y
rubicina SR-FA. ajustar a pH 3,6 0,1 con hidróxido de sodio 2 N.
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
CONSERVACIÓN (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
En envases de cierre perfecto. Diluyente - Proceder según se indica en Fase
móvil, excepto que debe omitirse el agregado de
Precaución - Manipular el Clorhidrato de Ida-
laurilsulfato de sodio.
rubicina con sumo cuidado, evitando la inhalación
Solución de resolución - Preparar una solución
de sus partículas y el contacto con la piel.
acuosa que contenga 1 mg de clorhidrato de idaru-
ENSAYOS bicina por ml. Transferir 2,0 ml de esta solución a
Identificación un tubo de ensayo y agregar 20 µl de ácido clorhí-
A - Absorción infrarroja <460>. En Fase sólida. drico. Calentar en un baño de aceite a 95 °C duran-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en te 8 minutos. Mezclar 1,0 ml de esta solución con
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- 9 ml de Diluyente. La solución así preparada con-
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- tiene una mezcla de 4-demetoxidaunorubicinona e
paración muestra se debe corresponder con el obte- idarubicina.
nido en la Preparación estándar. Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Clorhidrato de Idarubici-
Determinación del pH <250> na SR-FA en Diluyente para obtener una solución
Entre 5,0 y 6,5; determinado sobre una solución de aproximadamente 500 µg por ml.
de aproximadamente 5 mg por ml. Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Determinación de agua <120> dedor de 50 mg de Clorhidrato de Idarubicina y
Titulación volumétrica directa. No más de transferir a un matraz aforado de 100 ml. Disolver
5,0 %. y completar a volumen con Diluyente y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cristalinidad Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
Colocar partículas de Clorhidrato de Idarubicina las respuestas de los picos según se indica en Pro-
en aceite mineral, sobre un portaobjetos de vidrio. cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 0,5 para
4-demetoxidaunorubicinona y 1,0 para idarubicina;
la resolución R entre los picos de
4-demetoxidaunorubicinona e idarubicina no debe
ser menor de 9,5. Cromatografiar la Preparación
estándar y registrar las respuestas de los picos
según se indica en Procedimiento: el factor de ca-
pacidad k para el pico de idarubicina no debe ser
menor a 10 ni mayor a 20; la eficiencia de la co-
lumna para el pico de idarubicina no debe ser me-
nor de 3.000 platos teóricos; el factor de asimetría
no debe ser menor de 0,85 ni mayor de 1,2; la des-
viación estándar relativa para inyecciones repetidas
no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 l) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C26H27NO9 . HCl en la porción de Clor-
hidrato de Idarubicina en ensayo.
ROTULADO
Indicar en el rótulo cuando Clorhidrato de Ida-
rubicina es amorfo.
Diluyente - Amoníaco concentrado (SR) y me-
IDOXURIDINA tanol (1:5).
Solución muestra - Disolver 200 mg de Idoxu-
O ridina en Diluyente y diluir a 5 ml con el mismo
I solvente.
HN
Solución estándar A - Disolver 20 mg de
HO O N 5-iodouracilo, 20 mg de 2'-desoxiuridina y 20 mg
de 5-bromo-2'-desoxiuridina en Diluyente y diluir a
O
100 ml con el mismo solvente.
Solución estándar B - Disolver 200 mg de
Idoxiuridina SR-FA en 5 ml de Solución estándar
OH
A.
Solución estándar C - Diluir 1 ml de la Solu-
C9H11IN2O5 PM: 354,1 54-42-2 ción muestra a 10 ml con Diluyente y mezclar.
Definición - Idoxuridina es 2'-Desoxi- Diluir 1 ml de esta solución a 20 ml con Diluyente.
5-iodouridina. Debe contener no menos de 98,0 por Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
ciento y no más de 101,0 por ciento de C9H11IN2O5, placa 5 µl de la Solución muestra, 5 µl de la Solu-
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir ción estándar A, 5 µl de la Solución estándar B y
con las siguientes especificaciones. 5 µl de la Solución estándar C. Desarrollar los
cromatogramas dos veces consecutivas hasta que el
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco; frente del solvente haya recorrido aproximadamente
prácticamente inodoro. Poco soluble en agua y tres cuartas partes de la longitud de la placa. Secar
alcohol; prácticamente insoluble en cloroformo y la placa con una corriente de aire frío luego de cada
éter. desarrollo y examinar bajo luz ultravioleta a
Sustancia de referencia - Idoxuridina SR-FA. 254 nm: ninguna mancha correspondiente a
5-iodouracilo, 2'-desoxiuridina o 5-bromo-
CONSERVACIÓN 2'-desoxiuridina en el cromatograma obtenido a
En envases inactínicos de cierre perfecto. partir de la Solución muestra, debe ser más intensa
que las manchas correspondientes obtenidas con la
ENSAYOS Solución estándar A (0,5 %); a excepción de la
mancha principal o las correspondientes a
Identificación 5-iodouracilo, 2'-desoxiuridina y 5-bromo-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. 2'-desoxiuridina, ninguna mancha debe ser más
B - Absorción ultravioleta <470> intensa que la obtenida con la Solución estándar C
Solvente: solución reguladora de pH 12,0, (0,5 %). El ensayo sólo es válido si el cromatogra-
preparada disolviendo 7,46 g de cloruro de potasio ma obtenido con la Solución estándar B presenta
y 24 ml de hidróxido de sodio 1 N en 2 litros de cuatro manchas claramente diferenciadas.
agua.
Concentración: 35 µg por ml. VALORACIÓN
Las absortividades a 279 nm, calculadas
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de Pesar exactamente alrededor de 250 mg de
2,0 %. Idoxuridina y disolver en 20 ml de dimetilformami-
da previamente neutralizada con metóxido de sodio
Pérdida por secado <680> 0,1 N en tolueno (SV), empleando una solución de
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de 300 mg de azul de timol en 100 ml de metanol
Idoxuridina y secar al vacío a 60 °C durante como indicador. Titular con metóxido de sodio
2 horas: no debe perder más de 1,0 % de su peso. 0,1 N en tolueno (SV) hasta punto final azul, evi-
Sustancias relacionadas tando la absorción de dióxido de carbono de la
Fase estacionaria - Emplear una placa para atmósfera. Realizar una determinación con un
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Volumetría). Cada ml de metóxido de sodio 0,1 N
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm equivale a 35,41 mg de C9H11IN2O5.
de espesor.
Fase móvil - Alcohol isopropílico, cloroformo y
amoníaco concentrado (SR) (50:40:10).
Fase estacionaria - Emplear una placa para
IMIPRAMINA, cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
CLORHIDRATO DE grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Acetato de etilo, ácido acético gla-
cial, agua y ácido clorhídrico (55:35:5:5).
Solución muestra - Disolver 250 mg de Clor-
N hidrato de Imipramina en metanol y diluir a 10 ml
HCl con el mismo solvente. [NOTA: preparar en el
momento de su uso.]
H3C Solución estándar A - Diluir 1,0 ml de la Solu-
N ción muestra a 10 ml con metanol. Diluir 1,0 ml de
CH3 esta solución a 50 ml con el mismo solvente.
Solución estándar B - Disolver 5 mg de imino-
dibencilo en metanol y diluir a 100 ml con el mismo
C19H24N2 . HCl PM: 316,9 113-52-0 solvente. [NOTA: preparar en el momento de su
Definición - Clorhidrato de Imipramina es Mo- uso.]
noclorhidrato de 5-3-(dimetilaminopropil)- Revelador - Preparar una solución de dicromato
10,11-dihidro-5H-dibenz[b,f]azepina. Debe conte- de potasio de aproximadamente 5 g por litro en una
ner no menos de 98,5 por ciento y no más de 101,0 mezcla de agua y ácido sulfúrico (4:1).
por ciento de C19H24N2 . HCl, calculado sobre la Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de las
especificaciones. Soluciones estándar A y B.. Dejar secar las aplica-
ciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
frente del solvente haya recorrido aproximadamente
o ligeramente amarillo. Fácilmente soluble en agua
tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
y alcohol; insoluble en éter.
rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Imi- vente y dejar secar al aire durante 5 minutos. Pul-
pramina SR-FA. verizar sobre la placa con Revelador y examinar de
inmediato. El cromatograma obtenido a partir de la
CONSERVACIÓN Solución muestra debe presentar una mancha prin-
En envases inactínicos de cierre perfecto. cipal de color azul. La mancha correspondiente a
iminodibencilo en el cromatograma obtenido a
ENSAYOS partir de la Solución muestra no debe ser más inten-
sa que la obtenida con la Solución estándar B
Identificación (0,2 %); y a excepción de la mancha principal y la
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. mancha correspondiente a iminodibencilo en el
B - Absorción ultravioleta <470> cromatograma obtenido a partir de la Solución
Solvente: ácido clorhídrico 0,1 N. muestra, ninguna mancha debe ser más intensa que
Concentración: 20 µg por ml. la obtenida con la Solución estándar A (0,2 %).
Las absortividades a 250 nm, calculadas
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de Impurezas orgánicas volátiles <520>
3,0 %. Método I.
Determinación del punto de fusión <260> VALORACIÓN
Entre 170 y 174 °C.
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de
Pérdida por secado <680> Clorhidrato de Imipramina, disolver en 50 ml de
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder alcohol y agregar 5 ml ácido clorhídrico 0,01 N.
más de 0,5 % de su peso. Titular con hidróxido de sodio 0,1 N (SV), determi-
Determinación del residuo de ignición <270> nando el punto final potenciométricamente. Reali-
No más de 0,1 %. zar una determinación con un blanco y hacer las
correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Límite de metales pesados <590> Determinar el volumen de hidróxido de sodio 0,1 N
Método II. No más de 0,001 %. agregado entre los dos puntos de inflexión. Cada
Sustancias relacionadas ml de hidróxido de sodio 0,1 N equivale a 31,69 mg
de C19H24N2 . HCl.
de ioduro de potasio disuelto en 5 ml de agua.
IODO Diluir a aproximadamente 50 ml con agua, agregar
1 ml de ácido clorhídrico 3 N y titular con tiosulfato
I2 PM: 253,8 7553-56-2
de sodio 0,1 N (SV), agregando 3 ml de al-
Definición - Iodo debe contener no menos de midón (SR) cerca del punto final. Realizar una
99,8 por ciento y no más de 100,5 por ciento de I y determinación con un blanco y hacer las correccio-
debe cumplir con las siguientes especificaciones. nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 12,69 mg de I.
Caracteres generales - Placas o granulos de co-
lor gris-violáceo con brillo metálico. Fácilmente
soluble en cloroformo, disulfuro de carbono, éter y
tetracloruro de carbono; soluble en alcohol y en
soluciones de ioduros; moderadamente soluble en
glicerina; muy poco soluble en agua.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Las soluciones de Iodo 1 en 1.000 en cloro-
formo y en disulfuro de carbono deben ser de color
violeta.
B - A una solución de Iodo saturada, agregar
almidón-ioduro de potasio (SR): se debe producir
un color azul. Cuando la mezcla se calienta a ebu-
llición, el color debe desaparecer pero reaparece
cuando se enfría, a menos que se haya sometido a
ebullición prolongada.
Límite de residuo no volátil
Transferir 5,0 g de Iodo a una cápsula de porce-
lana previamente pesada, calentar en un baño de
vapor hasta que se haya eliminado el iodo y secar a
105 °C durante 1 hora: el residuo debe corresponder
a no más de 0,05 %.
Cloruros y bromuros
Triturar 250 mg de Iodo finamente pulverizado
con 10 ml de agua y filtrar la solución. Agregar
gota a gota ácido sulfuroso (libre de cloruro), pre-
viamente diluido con varios volúmenes de agua
hasta que el color del iodo desaparezca. Agregar
5 ml de hidróxido de amonio 6 N, seguidos de 5 ml
de nitrato de plata (SR) en pequeñas porciones.
Filtrar y acidificar el filtrado con ácido nítrico: el
líquido resultante no debe presentar más turbidez
que el de un control realizado con las mismas canti-
dades de los mismos reactivos a los cuales se les ha
agregado 0,10 ml de ácido clorhídrico 0,020 N,
omitiéndose el ácido sulfuroso (0,028 % como
cloruro).
VALORACIÓN
Transferir 500 mg de Iodo pulverizado a un er-
lenmeyer, previamente pesado, con tapón de vidrio.
Insertar el tapón, pesar exactamente, y agregar 1 g
recido. Agregar 25,0 ml de nitrato de plata
IODO POVIDONA 0,1 N (SV) y 10 ml de ácido nítrico y mezclar.
Titular el nitrato de plata en exceso con tiocianato
H de amonio 0,1 N (SV), empleando sulfato férrico
C CH2 amónico (SR) como indicador. Realizar una deter-
. x I2 minación con un blanco y hacer las correcciones
N
O necesarias (ver Titulaciones residuales en 780.
Volumetría). Cada ml de nitrato de plata 0,1 N
n equivale a 12,69 mg de I. Del porcentaje total de
iodo, calculado sobre la sustancia seca, restar el
porcentaje de iodo disponible (ver Valoración de
(C6H9NO)n . xI 25655-41-8 iodo disponible) para obtener el porcentaje de iodu-
Definición - Iodo Povidona es un homopolíme- ro. Debe contener no más de 6,6 %, calculado
ro de 1-Etenil-2-pirrolidinona, compuesto con iodo. sobre la sustancia seca.
Es un complejo de Iodo con Povidona. Debe con- Límite de metales pesados <590>
tener no menos de 9,0 por ciento y no más de 12,0 Método II. No más de 0,002 %.
por ciento de iodo disponible (I2), calculado sobre
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes Determinación de nitrógeno <200>
especificaciones. Debe contener no menos de 9,5 % y no más de
11,5 % de N, calculado sobre la sustancia seca.
Caracteres generales - Polvo amorfo de color
marrón amarillento a marrón rojizo, con un débil VALORACIÓN DE IODO DISPONIBLE
olor característico. Sus soluciones son ácidas frente Pesar exactamente alrededor de 5 g de Iodo Po-
al papel de tornasol. Soluble en agua y alcohol; vidona, transferir a un vaso de precipitados de
prácticamente insoluble en acetona, cloroformo, 400 ml y agregar 200 ml de agua. Cubrir el vaso de
éter, éter de petróleo y tetracloruro de carbono. precipitados y agitar mecánicamente a temperatura
CONSERVACIÓN ambiente durante no más de 1 hora para disolver tan
completamente como sea posible. Titular de inme-
En envases de cierre perfecto. diato con tiosulfato de sodio 0,1 N (SV), agregar
ENSAYOS 3 ml de almidón (SR) cerca del punto final. Reali-
zar una determinación con un blanco y hacer las
Identificación correcciones necesarias. Cada ml de tiosulfato de
A - Absorción infrarroja <460>. Proceder sodio 0,1 N equivale a 12,69 mg de I.
según se indica en Identificación por medio de
espectros de referencia.
B - Agregar 1 gota de una solución de Iodo Po-
vidona 1 en 10 a una mezcla de 1 ml de al-
midón (SR) y 9 ml de agua: se debe producir un
color azul profundo.
Determinación del pH <250>
Entre 1,5 y 5,0, determinado a partir de una so-
lución preparada disolviendo 1 g de Iodo Povidona
en 10 ml de agua libre de dióxido de carbono.
Pérdida por secado <680>
Secar 500 mg de Iodo Povidona entre 100 y
105 °C durante 3 horas: no debe perder más de
8,0 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
Inapreciable, determinado sobre 2 g.
Ioduro
Determinación de la cantidad total de iodo -
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Iodo
Povidona, transferir a un erlenmeyer de 250 ml y
disolver con 100 ml de agua. Agregar bisulfito de
sodio (SR) hasta que el color del iodo haya desapa-
Solución muestra - Disolver una cantidad de
IOHEXOL Iohexol en metanol para obtener una solución de
aproximadamente 10 mg por ml.
OH Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
H
O N OH placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de la
Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y
I I desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
OH del solvente haya recorrido aproximadamente tres
H cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
N OH
HO N placa de la cámara, marcar el frente del solvente,
I O dejar secar al aire y examinar bajo luz ultravioleta a
HO O CH3 254 nm: en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra se deben observar dos manchas
C19H26I3N3O9 PM: 821,1 66108-95-0 (isómeros endo y exo) cada una de ellas similar en
tamaño e intensidad a la mancha principal corres-
Definición - Iohexol es 5-[Acetil(2, pondiente y al mismo valor de Rf en la Solución
3-dihidroxipropil)amino]-N,N'-bis(2,3-dihidroxi- estándar. La mancha con el menor valor de Rf
propil)-2,4,6-triiodo-1,3-bencenodicarboxamida. corresponde al isómero endo.
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no D - Calentar 500 mg de Iohexol en un crisol: se
más de 102,0 por ciento de C19H26I3N3O9, calculado deben producir vapores de color violeta.
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las
siguientes especificaciones. Transparencia de la solución
Pesar exactamente alrededor de 16,18 g de Io-
Caracteres generales - Polvo blanco o casi hexol, transferir a un matraz aforado de 25 ml,
blanco, higroscópico e inodoro. Muy soluble en completar a volumen con agua y mezclar. Filtrar a
agua y metanol; prácticamente insoluble en cloro- través de un filtro de 0,22 m: la absorbancia de la
formo y éter. solución determinada en celdas de 1 cm, a 400, 420
Sustancias de referencia - Iohexol SR-FA. y 450 nm, con un espectrofotómetro y empleando
Impureza A de Iohexol SR-FA: 5-(acetilamino)- agua como blanco, no debe ser mayor de 0,180;
N,N'-bis(2,3-dihidroxipropil)-2,4,6-triiodo-1,3-ben- 0,030 y 0,015, respectivamente.
cenodicarboxamida. Impureza B de Io- Determinación de la rotación óptica <170>
hexol SR-FA: 5-amino-N,N'-bis(2,3-dihidroxipro- Rotación específica: Entre -0,5° y +0,5°.
pil)-2,4,6-triiodo-1,3-bencenodicarboxamida. Im- Solución muestra: 50 mg por ml, en agua.
pureza C de Iohexol SR-FA: N,N'-bis(2,3-dihidro-
xipropil)-5-nitro-1,3-bencenodicarboxamida. Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
CONSERVACIÓN 4,0 %.
En envases inactínicos bien cerrados. Límite de metales pesados <590>
ENSAYOS Método I. No más de 0,002 %.
Identificación Aminas aromáticas libres
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
B - Absorción ultravioleta <470> de 200 mg de Iohexol, transferir a un matraz afora-
Solvente: agua. do de 50 ml, agregar 15 ml de agua y mezclar para
Concentración: 1 en 100.000. disolver.
C - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
Fase estacionaria - Emplear una placa para tamente pesada de Impureza B de Iohexol SR-FA
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- en agua para obtener una solución de aproximada-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- mente 10 µg por ml. Transferir 10 ml de esta solu-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm ción a un matraz aforado de 50 ml y agregar 5 ml de
de espesor. agua.
Fase móvil - Alcohol n-butílico, agua y ácido Blanco - Transferir 15 ml de agua a un matraz
acético glacial (50:25:11). aforado de 50 ml.
Solución estándar - Disolver una cantidad de Procedimiento - Colocar los matraces que con-
Iohexol SR-FA en metanol para obtener una solu- tienen la Solución muestra, la Solución estándar y
ción de aproximadamente 10 mg por ml. el Blanco en un baño de hielo y enfriar durante
5 minutos. [NOTA: al realizar los pasos siguientes, La conductividad específica de la solución no
mantener los matraces en el baño de hielo el mayor debe ser mayor que la de una solución de cloruro de
tiempo posible hasta que se hayan agregado todos sodio 0,0002 % (0,01 % de compuestos iónicos).
los reactivos]. Proceder con cada matraz del si-
Límite de metanol, alcohol isopropílico y me-
guiente modo: agregar 3,0 ml de ácido clorhídrico
toxietanol
5 N y agitar por rotación. Agregar 2,0 ml de solu-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
ción de nitrito de sodio 1 en 50, mezclar y dejar
para cromatografía de gases con un detector de
reposar durante 4 minutos. Luego agregar 2,0 ml
ionización a la llama y una columna de sílice fundi-
de solución de ácido sulfámico 1 en 25, agitar y
da de 30 m 0,53 mm recubierta con una película
dejar reposar durante 1 minuto. [Precaución - Se
de 3 µm de espesor de 94 % dimetilpolisiloxano y
produce una presión considerable]. Retirar los
6 % cianopropilfenil polisiloxano. Equilibrar la
matraces del baño de hielo y agregar a cada uno
columna a 40 ºC durante 5 minutos, luego aumentar
2,0 ml de una solución 1 en 1.000, recientemen-
a razón de 10 °C por minuto hasta 100 °C y mante-
te preparada, de diclorhidrato N-(1-naftil) etilendia-
ner a esta temperatura durante 1 minuto. Mantener
mina en propilenglicol diluido (7 en 10) y mezclar.
el inyector y el detector a 140 y 250 °C, respecti-
Completar a volumen con agua, mezclar y dejar
vamente. Se debe emplear helio como gas transpor-
reposar durante 5 minutos. Determinar las absor-
tador; el caudal debe ser aproximadamente 14 ml
bancias de la Solución muestra y la Solución están-
por minuto.
dar, en celdas de 5 cm a la longitud de onda de
Solución del estándar interno - Preparar una so-
máxima absorción, aproximadamente 495 nm, con
lución de alcohol butílico secundario en agua de
un espectrofotómetro, contra el Blanco. La absor-
aproximadamente 0,05 mg por ml.
bancia de la Solución muestra no debe ser mayor
Solución estándar A - Pesar exactamente alre-
que la de la Solución estándar (0,05 %).
dedor de 0,6 g de metanol, transferir a un matraz
Iodo libre aforado de 1.000 ml, agregar 100 ml de agua y
Pesar exactamente alrededor de 2,1 g de Io- mezclar. Pesar exactamente alrededor de 0,6 g de
hexol, transferir a un tubo de centrífuga de 50 ml alcohol isopropílico, diluir con 100 ml de agua,
provisto de un tapón, agregar 20 ml de agua y agitar agregar a la solución anterior y mezclar. Pesar
vigorosamente para disolver. [NOTA: se puede exactamente alrededor de 0,6 g de metoxietanol,
calentar suavemente la solución para ayudar a di- diluir con 100 ml de agua, agregar a la solución
solver pero se debe enfriar a temperatura ambiente anterior, completar a volumen con agua y mezclar.
antes de proceder]. Agregar 5 ml de tolueno y 5 ml Solución estándar B - Transferir 10 ml de la So-
de ácido sulfúrico 2 N, agitar y centrifugar a alta lución estándar A a un matraz aforado de 50 ml,
velocidad durante 15 minutos: la fase orgánica no completar a volumen con agua y mezclar. Transfe-
debe presentar color rojo o rosado. rir 10 ml de esta solución a un matraz aforado de
Ioduro libre 100 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Pesar exactamente alrededor de 5,0 g de Io- Solución estándar C - Transferir 5 ml de la So-
hexol, transferir a un recipiente apropiado, agregar lución estándar A a un matraz aforado de 100 ml,
20 ml de agua y titular con nitrato de plata completar a volumen con agua y mezclar.
0,001 N (SV), empleando un electrodo de plata Solución estándar D - Transferir 10 ml de la
combinado con un electrodo de referencia apropia- Solución estándar A a un matraz aforado de 100 ml,
do, determinando el punto final potenciométrica- completar a volumen con agua y mezclar.
mente (ver 780. Volumetría). Cada ml de nitrato de Solución estándar E - Transferir 10 ml de Solu-
plata 0,001 N equivale a 126,9 µg de iodo: no debe ción estándar D y 10 ml de Solución del estándar
contener más de 0,001 %. interno a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con agua y mezclar. Transferir 6 ml de
Compuestos iónicos esta solución a un recipiente con tapa y sellar.
[NOTA: lavar todo el material de vidrio cinco Calentar el recipiente sellado a 95 °C durante
veces con agua destilada.] Medir la resistencia 15 minutos.
específica Resp a 20 °C, de una solución acuosa Solución muestra A - Pesar exactamente alrede-
1 en 50, empleando un conductímetro apropiado dor de 6,25 g de Iohexol, transferir a un matraz
(ver 70. Conductividad). Calcular la conductividad aforado de 25 ml. Agregar 5 ml de Solución del
específica , por la fórmula siguiente: estándar interno, completar a volumen con agua y
(1/Resp)106 mezclar.
Solución muestra B - Transferir 5 ml de la So-
lución muestra A y 1 ml de agua a un recipiente con
tapa y sellar. Calentar el recipiente sellado a 95 °C transportador con un caudal de aproximadamente
durante 15 minutos. 1 ml por minuto.
Solución muestra C - Transferir 5 ml de Solu- Solución estándar - Pesar exactamente alrede-
ción muestra A y 1 ml de Solución estándar B a un dor de 500 mg de 3-cloro-1,2-propanodiol y disol-
recipiente con tapa y sellar. Calentar el recipiente ver en 100 ml de acetato de metilo. Diluir 1 ml de
sellado a 95 °C durante 15 minutos. esta solución a 100 ml con acetato de metilo.
Solución muestra D - Transferir 5 ml de Solu- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
ción muestra A y 1 ml de Solución estándar C a un de 1,0 g de Iohexol y disolver en 2 ml de agua.
recipiente con tapa y sellar. Calentar el recipiente Extraer con cuatro porciones de 2 ml de acetato de
sellado a 95 °C durante 15 minutos. metilo y combinar los extractos. Secar los extractos
Solución muestra E - Transferir 5 ml de Solu- combinados con sulfato de sodio anhidro, filtrar y
ción muestra A y 1 ml de Solución estándar D a un concentrar hasta un volumen de 2 ml.
recipiente con tapa y sellar. Calentar el recipiente Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
sellado a 95 °C durante 15 minutos. Cromatografiar la Solución estándar y registrar las
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - respuestas de los picos según se indica en Procedi-
Cromatografiar la Solución estándar E y registrar miento: el tiempo de retención de 3-cloro-
las respuestas de los picos según indica en Proce- 1,2-propanodiol debe ser aproximadamente 8 minu-
dimiento: los tiempos de retención relativos deben tos.
ser aproximadamente 0,3 para metanol, 0,5 para Procedimiento - Inyectar por separado en el
alcohol isopropílico, 1,0 para alcohol butílico se- cromatógrafo con un inyector sin flujo dividido,
cundario y 1,3 para metoxietanol; la resolución R volumenes iguales (aproximadamente 2 µl) de la
entre los picos de metanol y alcohol isopropílico no Solución estándar y la Solución muestra, registrar
debe ser menor de 2,5; la desviación estándar rela- los cromatogramas y medir las respuestas de todos
tiva para inyecciones repetidas no debe ser mayor los picos. Calcular la cantidad en mg de 3-cloro-
de 5 %. 1,2-propanodiol en la porción de Iohexol en ensayo:
Procedimiento - Inyectar por separado en el no debe contener más de 100 ppm.
cromatógrafo mediante un inyector de espacio libre
Sustancias relacionadas
superior, volúmenes iguales (aproximadamente
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
2 ml) de las Soluciones muestra B, C, D, E y la
para cromatografía de líquidos con un detector
Solución estándar E. Registrar los cromatogramas
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
y medir las respuestas de los picos principales.
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
Calcular la relación entre la respuesta del pico de
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
metanol, alcohol isopropílico y metoxietanol, según
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
corresponda, y el estándar interno. Graficar los
caudal debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
cocientes en función de las cantidades agregadas
Programar el cromatógrafo con mezclas variables
por g de Iohexol. Extrapolar en el gráfico hasta
de Solución A y Solución B aumentando el porcen-
interceptar con el eje de concentración. La distan-
taje de Solución A en la Fase móvil de 1 a 13 % a
cia entre este punto y el origen de coordenadas
razón de 0,2 % por minuto.
representa la concentración en mg por g de metanol,
Solución A - Acetonitrilo.
alcohol isopropílico o metoxietanol en la porción de
Solución B - Agua.
Iohexol en ensayo. No debe contener más de
Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
0,005 % de metanol y alcohol isopropílico y no más
lución A y Solución B según se indica en Sistema
de 0,002 % de metoxietanol.
cromatográfico.
Límite de 3-cloro-1,2-propanodiol Solución de aptitud del sistema - Disolver una
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo cantidad exactamente pesada de Iohexol, Impure-
para cromatografía de gases con un detector de za A de Iohexol SR-FA y de Impureza C de Io-
ionización a la llama y una columna de sílice fundi- hexol SR-FA en agua para obtener una solución de
da de 25 m × 0,33 mm recubierta con una película aproximadamente 1,5; 0,0075 y 0,0069 mg por ml,
de 1 µm de polimetilfenilsiloxano. Mantener la respectivamente.
columna a 80 °C durante 2 minutos, luego aumentar Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
a razón de 15 °C por minuto hasta alcanzar 170 °C de 75 mg de Iohexol, transferir a un matraz aforado
y mantener a esta temperatura durante 2 minutos. de 50 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
Mantener el inyector y el detector a 230 y 250 °C, Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
respectivamente. Se debe emplear helio como gas Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: el tiempo de retención de la
sustancia O-alquilada debe ser entre 1,1 y 1,4, rela-
tivo a 1,0 para el isómero exo de Iohexol; la resolu-
ción R entre los picos de Impureza A de Io-
hexol SR-FA y la Impureza C de Iohexol SR-FA no
debe ser menor de 20,0; la respuesta del pico de
Impureza C de Iohexol SR-FA debe ser 0,5 ± 0,1 %
de la respuesta total de todos los picos del cromato-
grama.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
aproximadamente 10 µl de la Solución muestra,
registrar el cromatograma y medir las respuestas de
todos los picos. Calcular el porcentaje de sustan-
cias O-alquiladas en la porción de Iohexol en ensa-
yo, en relación a la suma de las respuestas de todos
los picos: no debe contener más de 0,1 % de cual-
quier impureza individual, no más de 0,6 % de
sustancias O-alquiladas y la suma de todas las im-
purezas no debe ser mayor de 0,3 %.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Io-
hexol, transferir a un erlenmeyer de 125 ml con
tapón de vidrio, agregar 25 ml de hidróxido de
sodio 1,25 N y 500 mg de polvo de cinc. Conectar
el erlenmeyer a un refrigerante y calentar a reflujo
la mezcla durante 1 hora. Enfriar el erlenmeyer a
temperatura ambiente, lavar el refrigerante con
20 ml de agua y filtrar. Lavar el erlenmeyer y el
filtro con porciones pequeñas de agua y agregar los
lavados al filtrado. Agregar 5 ml de ácido acético
glacial y titular con nitrato de plata 0,1 N (SV),
determinando el punto final potenciométricamente
(ver 780. Volumetría). Cada ml de nitrato de plata
0,1 N equivale a 27,37 mg de C19H26I3N3O9.
a un matraz aforado de 5 ml, disolver y completar a
IOPANOICO, ÁCIDO volumen con Diluyente.
Solución estándar B - Transferir 1 ml de la So-
I O lución muestra B a un matraz aforado de 50 ml y
completar a volumen con Diluyente.
OH Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 5 µl de la Solución muestra A y 5 µl de la
I I CH3 Solución estándar B. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
del solvente haya recorrido aproximadamente tres
C11H12I3NO2 PM: 570,9 96-83-3
cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
Definición - Ácido Iopanoico es el Ácido placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
(±)-3-Amino--etil-2,4,6-triiodohidrocinámico. dejar secar. Examinar bajo luz ultravioleta a
Debe contener una cantidad de iodo equivalente a 254 nm. A excepción de la mancha principal en el
no menos de 97,0 por ciento y no más de 101,0 por cromatograma obtenido a partir de la Solución
ciento de C11H12I3NO2, calculado sobre la sustancia muestra A, ninguna mancha debe ser más intensa
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- que la mancha principal obtenida con la Solución
ciones. estándar B (0,2 %).
Caracteres generales - Polvo casi blanco o Determinación del punto de fusión <260>
blanco amarillento. Fotosensible. Soluble en alco- Entre 152 y 158 °C, con descomposición.
hol, cloroformo, éter y en soluciones de hidróxidos
Pérdida por secado <680>
y carbonatos alcalinos; insoluble en agua.
Secar a 105 °C durante 1 hora: no debe perder
Sustancia de referencia - Ácido Iopanoi- más de 1,0 % de su peso.
co SR-FA. Determinación del residuo de ignición <270>
CONSERVACIÓN No más de 0,1 %.
En envases inactínicos de cierre perfecto. Iodo libre
Agitar durante 1 minuto 200 mg de Ácido Iopa-
ENSAYOS noico con 2 ml de agua y 2 ml de cloroformo: la
Identificación fase clorofórmica no debe presentar color violeta.
Pesar exactamente alrededor de 100 mg de Áci-
Haluros
do Iopanoico, transferir a un crisol, mezclar con
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Áci-
500 mg de carbonato de sodio y calentar hasta car-
do Iopanoico, transferir a una probeta de 50 ml con
bonizar. Enfriar, agregar 5 ml de agua caliente,
tapón de vidrio, agregar 10 ml de ácido nítrico 2 N
calentar en baño de vapor durante 5 minutos y fil-
y 15 ml de agua, agitar durante 5 minutos y filtrar a
trar: la solución debe responder a los ensayos para
través de papel de filtro: 10 ml del filtrado no debe
Ioduro <410>.
presentar mayor turbidez que la producida con
Sustancias relacionadas 0,05 ml de ácido clorhídrico 0,020 N (ver 560.
Fase estacionaria - Emplear una placa para Límite de cloruro y sulfato).
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Límite de metales pesados <590>
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
Método II. No más de 0,002 %.
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor. VALORACIÓN
Fase móvil - Dioxano, metanol, tolueno y
amoníaco concentrado (50:20:20:10). Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Áci-
Diluyente - Metanol y amoníaco (97:3). do Iopanoico, transferir a un erlenmeyer de 250 ml
Solución muestra A - Pesar exactamente alrede- con tapón de vidrio. Agregar 30 ml de hidróxido de
dor de 1,0 g de Ácido Iopanoico, transferir a un sodio 1,25 N y 500 mg de cinc en polvo y calentar
matraz aforado de 10 ml, disolver y completar a la mezcla a reflujo durante 30 minutos. Enfriar a
volumen con Diluyente. temperatura ambiente, lavar el refrigerante con
Solución muestra B - Transferir 1 ml de la So- 20 ml de agua y filtrar la mezcla. Lavar el erlen-
lución muestra A a un matraz aforado de 10 ml y meyer y el filtro con pequeñas porciones de agua,
completar a volumen con Diluyente. agregando los lavados al filtrado. Agregar al filtra-
Solución estándar A - Pesar exactamente alre- do 5 ml de ácido acético glacial y 1 ml de tetrabro-
dedor de 50 mg Ácido Iopanoico SR-FA, transferir mofenolftaleinato de etilo (SR) y titular con nitrato
de plata 0,05 N (SV) hasta que el color amarillo del
precipitado cambie a verde. Realizar una determi-
nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de nitrato de
plata 0,05 N equivale a 9,516 mg de C11H12I3NO2.
tas partes de la longitud de la placa. Retirar la placa
IPRATROPIO, BROMURO DE de la cámara, marcar el frente del solvente y secar
al aire. Pulverizar sobre la placa con Revelador: la
CH3
mancha principal en el cromatograma obtenido a
H3C +
N CH3 partir de la Solución muestra debe ser similar en
valor de Rf, color y tamaño a la obtenida con la
Solución estándar.
- H2O
Br
H
Determinación del pH <250>
H Entre 5,0 y 7,5, determinado sobre una solución
O OH
de aproximadamente 10 mg por ml.
O
Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre 0,10 º y +0,10 º.
C20H30BrNO3 . H2O PM: 430,4 22254-24-6 Solución muestra: 10 mg por ml, en agua.
Definición - Bromuro de Ipratropio es Bromuro Sustancias relacionadas
de (1R,3r,5S,8r)-3-[(RS)-3-hidroxi-2-fenilpropanoil Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
oxi-8-metil-8-(1-metiletil)-8-azoniabiciclo[3.2.1] para cromatografía de líquidos con un detector
octan. Debe contener no menos de 99,0 por ciento ultravioleta ajustado a 210 nm y una columna de
y no más de 100,5 por ciento de C20H30BrNO3, 12,5 cm × 4,0 mm con fase estacionaria constituida
calculado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir por octilsilano químicamente unido a partículas
con las siguientes especificaciones. porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 2 ml por minuto.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Fase móvil - Disolver 1,0 g de metanosulfonato
o casi blanco. Funde aproximadamente a 230 ºC, de sodio en una mezcla de 120 ml de acetonitrilo y
con descomposición. Soluble en agua; fácilmente 1 litro de ácido fosfórico 0,05 M. Hacer los ajustes
soluble en metanol; poco soluble en alcohol. necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
Sustancias de referencia - Bromuro de Ipra- tografía).
tropio SR-FA. Bromuro de 8s-Ipratropio SR-FA. Solución madre del estándar - Pesar exacta-
mente alrededor de 25 mg de Bromuro de
ENSAYOS 8s-Ipratropio SR-FA, transferir a un matraz aforado
Identificación de 200 ml, disolver en Fase móvil, completar a
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. volumen con el mismo solvente y mezclar.
B - Una solución debe responder al ensayo para Solución estándar - Transferir 1 ml de Solución
Bromuro <410>. madre del estándar a un matraz aforado de 100 ml,
C - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
Fase estacionaria - Emplear una placa para Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- de 25 mg de Bromuro de Ipratropio, transferir a un
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- matraz aforado de 100 ml, disolver en Fase móvil,
grafía, de 0,25 mm de espesor. completar a volumen con el mismo solvente y mez-
Fase móvil - Cloruro de metileno, alcohol, agua clar.
y ácido fórmico anhidro (45:45:7,5:2,5). Solución de resolución - Emplear una solución
Solución estándar - Disolver 10 mg de Bromu- preparada mezclando 1 volumen de Solución mues-
ro de Ipratropio SR-FA en 2 ml de metanol. tra y 2 volúmenes de Solución madre del estándar.
Solución muestra - Disolver 5 mg de Bromuro Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
de Ipratropio en 1 ml de metanol. Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
Revelador - Disolver 8 g de ioduro de potasio las respuestas de los picos según se indica en Pro-
en suficiente agua para obtener 20 ml y agregar esta cedimiento: la resolución R entre los picos de ipra-
solución a una mezcla de 0,85 g de subnitrato de tropio y 8s-ipratropio debe ser mayor de 1,5. Cro-
bismuto, 40 ml de agua y 10 ml de ácido acético matografiar la Solución muestra y registrar las res-
glacial. puestas de los picos según se indica en Procedi-
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la miento: el factor de asimetría del pico principal
placa 2 µl de la Solución muestra y 2 µl de la Solu- debe ser menor de 2,2. Cromatografiar la Solución
ción estándar. Dejar secar las aplicaciones y des- estándar y registrar las respuestas de los picos
arrollar los cromatogramas hasta que el frente del según se indica en Procedimiento: la relación señal-
solvente haya recorrido aproximadamente tres cuar- ruido del pico principal debe ser mayor de 5,0.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Solución muestra, la Solución de reso-
lución y la Solución estándar y registrar los croma-
togramas hasta dos veces el tiempo de retención del
pico principal del cromatograma obtenido con la
Solución muestra. La respuesta de cualquier pico
correspondiente al 8s-ipratropio en el cromatogra-
ma obtenido a partir de la Solución muestra no debe
ser mayor que la respuesta del pico obtenido con la
Solución estándar (0,5 %); la respuesta de cualquier
pico, excepto el pico principal y cualquier pico
correspondiente al 8s-ipratropio, en el cromatogra-
ma obtenido a partir de la Solución muestra no debe
ser mayor que la mitad de la respuesta del pico
obtenido con la Solución de estándar (0,25 %).
Apo-ipratropio
Disolver 140 mg de Bromuro de Ipratropio en
ácido clorhídrico 0,01 N y diluir a 100 ml con el
mismo solvente. Medir la absorbancia de esta solu-
ción a 246 y 263 nm con un espectrofotómetro.
Calcular el contenido porcentual de apo-ipratropio
por la fórmula siguiente:
10(A246/A263 - 0,863)
en la cual A246 y A263 son las absorbancias de la
solución a 246 y 263 nm, respectivamente. No
debe contener más de 0,5 %.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. Entre 3,9 y
4,4 %, determinada sobre 500 mg de muestra.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 350 mg de
Bromuro de Ipratropio, disolver en 50 ml de agua y
agregar 3 ml de ácido nítrico diluido. Titular con
nitrato de plata 0,1 N (SV), determinando el punto
final potenciométricamente. Realizar una determi-
nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de nitrato de
plata 0,1 N equivale a 41,24 mg de C20H30BrNO3.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
ISONIAZIDA Método I.
O VALORACIÓN
NH2 Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
N
para cromatografía de líquidos con un detector
H
N
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
C6H7N3O PM: 137,1 54-85-3 porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml por minu-
Definición - Isoniazida es Hidrazida del ácido to.
4-piridincarboxilico. Debe contener no menos de Fase móvil - Disolver 4,4 g de docusato sódico
98,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de en 600 ml de metanol, agregar 400 ml de agua,
C6H7N3O, calculado sobre la sustancia seca y debe ajustar a pH 2,5 con ácido sulfúrico 2 N y mezclar.
cumplir con las siguientes especificaciones. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
Caracteres generales - Cristales incoloros o ma en 100. Cromatografía).
blancos o polvo cristalino blanco. Inodoro. Se Preparación estándar - Disolver una cantidad
altera lentamente por exposición al aire y a la luz. exactamente pesada de Isoniazida SR-FA en Fase
Fácilmente soluble en agua; moderadamente solu- móvil y diluir cuantitativamente con Fase móvil
ble en alcohol; poco soluble en cloroformo; muy para obtener una solución de aproximadamente
poco soluble en éter. 0,32 mg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Sustancia de referencia - Isoniazida SR-FA. dedor de 16 mg de Isoniazida, transferir a un matraz
aforado de 50 ml, disolver con Fase móvil, comple-
CONSERVACIÓN tar a volumen con Fase móvil y mezclar.
En envases inactínicos de cierre perfecto. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
ENSAYOS las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Identificación cedimiento: la eficiencia de la columna determinada
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. a partir del pico de isoniazida no debe ser menor de
B - Absorción ultravioleta <470>. Transferir 1.800 platos teóricos; el factor de asimetría para el
50 mg de Isoniazida a un matraz aforado de 500 ml, pico de isoniazida no debe ser mayor de 2,0; la
completar a volumen con agua y mezclar. Transfe- desviación estándar relativa para inyecciones repe-
rir 10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de tidas no debe ser mayor de 2,0 %.
100 ml, agregar 2,0 ml de ácido clorhídrico 0,1 N, Procedimiento - Inyectar por separado en el
completar a volumen con agua y mezclar: el espec- cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
tro de absorción ultravioleta de la solución así obte- 10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
nida debe presentar máximos y mínimos sólo a las muestra, registrar los cromatogramas y medir las
mismas longitudes de onda que una solución similar respuestas de los picos principales. Calcular la
de Isoniazida SR-FA. cantidad de C6H7N3O en la porción de Isoniazida en
ensayo.
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 170 y 173 °C.
Determinación del pH <250>
Entre 6,0 y 7,5, determinado sobre una solución
1 en 10.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,2 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder
más de 1,0 % de su peso.
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,002 %.
Solución estándar B - Disolver 100 mg de ma-
ISOSORBIDA DILUIDO, nitol en agua y diluir a 10 ml con el mismo solven-
DINITRATO DE te.
Solución estándar C - Mezclar volúmenes igua-
les de las Soluciones estándar A y B.
NO2
Solución muestra - Agitar una cantidad de Dini-
trato de Isosorbida Diluido que corresponda a
O
H 100 mg de manitol o lactosa con 10 ml de agua y
H O filtrar si fuera necesario.
Revelador 1 - Disolver 1 g de ácido
p-aminobenzoico en una mezcla de 18 ml de ácido
O O NO2 acético glacial, 20 ml de agua y 1 ml ácido fosfóri-
H co. Inmediatamente antes de usar, preparar una
H
mezcla de esta solución y acetona (2:3).
C6H8N2O8 PM: 236,1 87-33-2 Revelador 2 - Periodato de sodio (SR) al 0,2 %.
Sinonimia - Dinitrato Diluido de Isosorbide. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 1 µl de la Solución estándar A, la Solución
Definición - Dinitrato de Isosorbida Diluido es estándar B, la Solución estándar C y la Solución
una mezcla de 2,5-Dinitrato de muestra. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
1,4:3,6-dianhidro-D-glucitol (C6H8N2O8) con Lac- los cromatogramas hasta que el frente del solvente
tosa Monohidrato o Manitol. Debe contener no haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
menos de 95,0 por ciento peso en peso y no más de de la longitud de la placa. Secar bajo una corriente
105,0 por ciento peso en peso de C6H8N2O8 y debe de aire caliente. Repetir inmediatamente el desarro-
cumplir con las siguientes especificaciones. llo empleando Fase móvil renovada. Secar la placa
Sustancias de referencia - Dinitrato de Isosor- bajo una corriente de aire caliente. Pulverizar sobre
bida SR-FA. 2-Nitrato de Isosorbida SR-FA. la placa con Revelador 1. Secar la placa bajo una
Mononitrato de Isosorbida SR-FA. corriente de aire frío hasta eliminar la acetona y
calentar a 100 °C durante 15 minutos. Dejar enfriar
CONSERVACIÓN
y pulverizar sobre la placa con Revelador 2. Secar
En envases inactínicos de cierre perfecto. la placa bajo una corriente de aire frío y calentar a
ENSAYOS 100 ºC durante 15 minutos. La mancha principal en
el cromatograma obtenido a partir de la Solución
Precaución - Manipular el dinitrato de isosor- muestra debe ser similar en color, tamaño y en
bida no diluido con extremo cuidado y en cantida- valor de Rf, a la mancha principal en el cromato-
des muy pequeñas ya que es un potente explosivo y grama obtenido con la Solución estándar A para la
puede estallar si se somete a golpes o calor excesi- lactosa o a la mancha principal del cromatograma
vo. obtenido con la Solución estándar B para el mani-
Identificación tol. La identificación solo es válida si el cromato-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. grama obtenido a partir de la Solución estándar C
Emplear el residuo obtenido en Determinación del presenta dos manchas claramente separadas.
punto de fusión. Determinación del punto de fusión <260>
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Agitar una cantidad de Dinitrato de Isosorbida
Fase estacionaria - Emplear una placa para Diluido correspondiente a 25 mg de dinitrato de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- isosorbida con 10 ml de acetona durante 5 minutos.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Filtrar, evaporar a sequedad a una temperatura me-
grafía que contenga aproximadamente 13 % de nor a 40 °C y secar el residuo sobre pentóxido de
sulfato de calcio hemihidrato, de 0,25 mm de espe- fósforo a una presión de 5 mm Hg durante 16 horas.
sor. El punto de fusión del residuo debe estar compren-
Fase móvil - Cloruro de etileno, ácido acético dido entre 69 y 72 °C.
glacial, metanol y agua (50:25:15:10). [NOTA:
medir estos volúmenes con precisión, ya que un Nitratos inorgánicos
ligero exceso de agua puede ocasionar turbidez.] Fase estacionaria - Emplear una placa para
Solución estándar A - Disolver 100 mg de lac- cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
tosa en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente. grafía), recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Tolueno, acetona y ácido acético isosorbida, 8 minutos para 2-nitrato de isosorbida y
glacial (60:30:15). 11 minutos para 5-nitrato de isosorbida. El ensayo
Solución de estándar - Disolver 10 mg de nitra- solo es válido si en el cromatograma obtenido a
to de potasio en 1 ml de agua y diluir a 100 ml con partir de la Preparación estándar E, la resolución R
alcohol. entre los picos correspondientes al dinitrato de
Solución muestra - Agitar una cantidad de Dini- isosorbida y al 2-nitrato de isosorbida es mayor
trato de Isosorbida Diluido que corresponda a a 6,0.
100 mg de dinitrato de isosorbida con 5 ml de alco- Procedimiento - Inyectar por separado en el
hol y filtrar. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Revelador - Disolver 750 mg de ioduro de pota- 10 l) de Preparación muestra A, Preparación
sio en 100 ml de agua, calentar a ebullición y agre- estándar C y Preparación estándar D. En el cro-
gar, mientras se agita, una solución de 500 mg de matograma obtenido a partir de la Preparación
almidón soluble en 35 ml de agua. Calentar a ebu- muestra A, la respuesta del pico correspondiente al
llición durante 2 minutos y dejar enfriar. 2-nitrato de isosorbida no debe ser mayor a la del
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la pico principal obtenido en el cromatograma de la
placa 10 µl de Solución de referencia y 10 µl de Preparación estándar C (0,5 %), y la respuesta del
Solución muestra. Dejar secar las aplicaciones y pico correspondiente al 5-nitrato de isosorbida no
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente debe ser mayor a la del pico principal del cromato-
del solvente haya recorrido aproximadamente tres grama obtenido a partir de la Preparación estándar
cuartas partes de la longitud de la placa. Secar la D (0,5 %).
placa bajo corriente de aire hasta evaporación com-
VALORACIÓN
pleta del ácido acético. Pulverizar sobre la placa
con Revelador recientemente preparado. Exponer Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
la placa a la luz ultravioleta de 254 nm durante para cromatografía de líquidos con un detector
15 minutos y examinar con luz diurna. Ninguna ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
mancha correspondiente al ion nitrato en el croma- 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
tograma obtenido a partir de la Solución muestra por aminopropilmetilsilano químicamente unida a
debe ser más intensa que la mancha obtenida con la partículas de sílice de 10 µm de diámetro. El cau-
Solución de referencia (0,5 %, calculado como dal debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
nitrato de potasio). Fase móvil - 2,2,4-Trimetilpentano y alcohol
(85:15). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
5-Nitrato de isosorbida y 2-Nitrato de isosor-
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
bida
tografía).
Preparación muestra A, Preparación estándar
Preparación estándar A - Transferir 25,0 mg de
C, Preparación estándar D; Preparación estándar
Dinitrato de Isosorbida SR-FA a un matraz aforado
E y Fase móvil - Proceder según se indica en Valo-
de 25 ml, suspender en 20 ml de Fase móvil, soni-
ración.
car durante 15 minutos, y completar a volumen con
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Fase móvil. Filtrar la suspensión a través de un
para cromatografía de líquidos con un detector
filtro de membrana.
ultravioleta ajustado entre 210 y 215 nm y una
Preparación estándar B - Transferir 1,0 ml de
columna de 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria
la Preparación estándar A a un matraz aforado de
constituida por aminopropilmetilsilano química-
10 ml y completar a volumen con Fase móvil.
mente unida a partículas de sílice de 10 µm de diá-
Preparación estándar C - Disolver 10,0 mg de
metro. El caudal debe ser aproximadamente 1 ml
2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en Fase móvil y
por minuto.
diluir a 10,0 ml con Fase móvil. Transferir 0,1 ml
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
de esta solución a un matraz aforado de 20 ml y
Cromatografiar la Preparación estándar C y regis-
completar a volumen con Fase móvil.
trar las respuestas de los picos según se indica en
Preparación estándar D - Disolver 10,0 mg de
Procedimiento: ajustar la sensibilidad del equipo de
Mononitrato de Isosorbida SR-FA en Fase móvil y
manera que el pico principal del cromatograma
diluir hasta 10,0 ml con Fase móvil. Transferir
obtenido a partir de la Preparación estándar C no
0,1 ml de esta solución a un matraz aforado de
sea menor al 20 % de la escala completa del regis-
20 ml y completar a volumen con Fase móvil.
trador. Cromatografiar la Preparación estándar E y
Preparación estándar E - Disolver 5 mg de
registrar las respuestas de los picos según se indica
2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en Fase móvil y
en Procedimiento: los tiempos de retención deben
diluir hasta 10 ml con Fase móvil. A 1 ml de esta
ser aproximadamente 5 minutos para dinitrato de
solución agregar 0,5 ml de Preparación estándar A
y diluir hasta 10 ml con Fase móvil.
Preparación muestra A - Transferir 25,0 mg de
Dinitrato de Isosorbida a un matraz aforado de
25 ml, suspender en 20 ml de Fase móvil, sonicar
durante 15 minutos, y completar a volumen con
Fase móvil. Filtrar la suspensión a través de un
filtro de membrana.
Preparación muestra B - Transferir 1,0 ml de la
Preparación muestra A a un matraz aforado de
10 ml y completar a volumen con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Inyectar 20 µl de la Preparación estándar B. Ajus-
tar la sensibilidad del sistema de modo que la res-
puesta del pico principal a partir de la Preparación
estándar B sea al menos el 50 % de la escala com-
pleta del registrador. Si las respuestas de los picos
correspondientes a dos inyecciones sucesivas difie-
ren en más de 1,0 %, inyectar otras cuatro veces y
calcular para las seis inyecciones la desviación
estándar relativa. El ensayo solo es válido si la
desviación estándar relativa para seis inyecciones
repetidas no es menor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
volúmenes iguales (aproximadamente 20 µl) de la
Preparación muestra B y la Preparación estándar
B. Registrar los cromatogramas y medir las res-
puestas de todos los picos. Calcular la cantidad de
C6H8N2O8 en la porción de Dinitrato de Isosorbida
en ensayo.
ROTULADO
Indicar en el rótulo el contenido de Dinitrato de
Isosorbida en porcentaje.
co. Inmediatamente antes de usar, preparar una
ISOSORBIDA DILUIDO, mezcla de esta solución y acetona (2:3).
MONONITRATO DE Revelador 2 - Preparar una solución de perioda-
to de sodio al 2 %.
OH
H Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
H O placa 1 µl de la Solución estándar A, la Solución
estándar B, la Solución estándar C y la Solución
muestra. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
O O NO2 los cromatogramas hasta que el frente del solvente
H haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
H
de la longitud de la placa. Secar bajo una corriente
C6H9NO6 PM: 191,1 16051-77-7 de aire caliente. Repetir inmediatamente el desarro-
Sinonimia - Mononitrato de Isosorbide Diluido. llo empleando Fase móvil renovada. Secar la placa
bajo una corriente de aire caliente. Pulverizar sobre
Definición - Mononitrato de Isosorbida Diluido la placa con Revelador 1. Secar la placa bajo una
es 5-Nitrato de 1,4:3,6-dianhidro-D-glucitol y es corriente de aire frío hasta eliminar la acetona y
una mezcla seca de mononitrato de isosorbida y de calentar a 100 °C durante 15 minutos. Dejar enfriar
Lactosa Monohidrato o Manitol. Debe contener no y pulverizar sobre la placa con Revelador 2. Secar
menos de 95,0 por ciento y no más de 105,0 por la placa bajo una corriente de aire frío y calentar a
ciento de la cantidad declarada de C6H9NO6 y debe 100 ºC durante 15 minutos. La mancha principal en
cumplir con las siguientes especificaciones. el cromatograma obtenido a partir de la Solución
Sustancias de referencia - Mononitrato de Iso- muestra debe ser similar, en posición, color y tama-
sorbida SR-FA. 2-Nitrato de Isosorbida SR-FA. ño a la mancha principal en el cromatograma obte-
Dinitrato de Isosorbida SR-FA. nido con la Solución estándar A para la lactosa o a
la mancha principal del cromatograma obtenido con
CONSERVACIÓN la Solución estándar B para el manitol. El ensayo
En envases inactínicos de cierre perfecto. solo es válido si el cromatograma obtenido a partir
de la Solución estándar C presenta dos manchas
ENSAYOS
claramente separadas.
Identificación
Determinación del punto de fusión <260>
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
Agitar una cantidad de Mononitrato de Isosorbi-
Emplear el residuo obtenido en Determinación del
da Diluido correspondiente a 25 mg de mononitrato
punto de fusión.
de isosorbida con 10 ml de acetona durante 5 minu-
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica.
tos. Filtrar, evaporar a sequedad a una temperatura
Fase estacionaria - Emplear una placa para
menor a 40 °C y secar el residuo sobre pentóxido de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
fósforo a una presión de 5 mm Hg durante 16 horas.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
El punto de fusión del residuo debe estar compren-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
dido entre 89 y 91 °C.
Fase móvil - Cloruro de etileno, ácido acético
anhidro, metanol y agua (50:25:15:10). [NOTA: Nitratos inorgánicos
medir estos volúmenes con exactitud, ya que un Fase estacionaria - Emplear una placa para
ligero exceso de agua puede ocasionar turbidez.] cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Solución estándar A - Disolver 100 mg de lac- grafía), recubierta con gel de sílice para cromato-
tosa en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente. grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
Solución estándar B - Disolver 100 mg de ma- de espesor.
nitol en agua y diluir a 10 ml con el mismo solven- Fase móvil - Tolueno, acetona y ácido acético
te. glacial (60:30:15).
Solución estándar C - Mezclar volúmenes igua- Solución estándar - Disolver 10 mg de nitrato
les de las Soluciones estándar A y B. de potasio en 1 ml de agua y diluir a 100 ml con
Solución muestra - Agitar una cantidad de Mo- alcohol.
nonitrato de Isosorbida Diluido que corresponda a Solución muestra - Agitar una cantidad de Mo-
100 mg de manitol o lactosa con 10 ml de agua y nonitrato de Isosorbida Diluido que corresponda a
filtrar si fuera necesario. 100 mg de mononitrato de isosorbida con 5 ml de
Revelador 1 - Disolver 1 g de ácido alcohol y filtrar.
p-aminobenzoico en una mezcla de 18 ml de ácido Revelador - Disolver 750 mg de ioduro de pota-
acético anhidro, 20 ml de agua y 1 ml ácido fosfóri- sio en 100 ml de agua, calentar a ebullición y agre-
gar, mientras se agita, una solución de 500 mg de matograma obtenido a partir de la Preparación
almidón soluble en 35 ml de agua. Calentar a ebu- muestra A, la respuesta del pico correspondiente al
llición durante 2 minutos y dejar enfriar. [NOTA: 2-nitrato de isosorbida no debe ser mayor a la del
preparar esta solución en el momento de su uso.] pico principal obtenido en el cromatograma de la
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la Preparación estándar B (0,5 %), y la respuesta del
placa 10 µl de Solución estándar y 10 µl de Solu- pico correspondiente al dinitrato de isosorbida no
ción muestra. Dejar secar las aplicaciones y des- debe ser mayor a la del pico principal del cromato-
arrollar los cromatogramas hasta que el frente del grama obtenido a partir de la Preparación estándar
solvente haya recorrido aproximadamente tres cuar- C (0,5 %).
tas partes de la longitud de la placa. Secar la placa
VALORACIÓN
bajo una corriente de aire hasta evaporación com-
pleta del ácido acético. Pulverizar sobre la placa Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
con Revelador. Exponer la placa a luz ultravioleta para cromatografía de líquidos con un detector
de 254 nm durante 15 minutos y examinar con luz ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
diurna. Ninguna mancha correspondiente al ión 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
nitrato en el cromatograma obtenido a partir de la por aminopropilmetilsilano químicamente unida a
Solución muestra debe ser más intensa que la man- partículas de sílice de 10 µm de diámetro. El cau-
cha obtenida con la Solución estándar (0,5 %, cal- dal debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
culado como nitrato de potasio). Fase móvil - 2,2,4-Trimetilpentano y alcohol
(85:15). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
Dinitrato de isosorbida y 2-Nitrato de isosor- necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
bida tografía).
Preparación muestra A, Preparación estándar Preparación estándar A - Transferir 25,0 mg de
B, Preparación estándar C, Preparación estándar Mononitrato de Isosorbida SR-FA a un matraz
D y Fase móvil - Proceder según se indica en Valo- aforado de 25 ml, suspender en 20 ml de Fase
ración. móvil, sonicar durante 15 minutos, y completar a
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo volumen con Fase móvil. Filtrar la suspensión a
para cromatografía de líquidos con un detector través de un filtro de membrana.
ultravioleta ajustado entre 210 y 215 nm y una Preparación estándar B - Disolver 10,0 mg de
columna de 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria 2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en Fase móvil y
constituida por aminopropilmetilsilano química- diluir hasta 10,0 ml con Fase móvil. Diluir 0,1 ml
mente unido a partículas de sílice de 10 µm de diá- de esta solución hasta 20,0 ml con Fase móvil.
metro. El caudal debe ser aproximadamente 1 ml Preparación estándar C - Transferir 10,0 mg de
por minuto. Dinitrato de Isosorbida SR-FA a un matraz aforado
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - de 20 ml, suspender en 15 ml de Fase móvil, soni-
Cromatografiar la Preparación estándar B y regis- car durante 15 minutos, y completar a volumen con
trar las respuestas de los picos según se indica en Fase móvil. Filtrar la suspensión a través de un
Procedimiento: ajustar la sensibilidad del equipo de filtro de membrana. Diluir 0,1 ml de esta solución a
manera que el pico principal del cromatograma
10 ml con Fase móvil.
obtenido a partir de la Preparación estándar B no Preparación estándar D - Disolver 5 mg de
sea menor al 20 % de la escala completa del regis- Mononitrato de Isosorbida SR-FA y 5 mg de
trador. Cromatografiar la Preparación estándar D 2-Nitrato de Isosorbida SR-FA en Fase móvil y
y registrar las respuestas de los picos según se indi- diluir hasta 10 ml con Fase móvil. Diluir 1 ml de
ca en Procedimiento: los tiempos de retención de- esta solución hasta 10 ml con Fase móvil.
ben ser: aproximadamente 5 minutos para dinitrato Preparación muestra A - Transferir 25,0 mg de
de isosorbida, 8 minutos para 2-nitrato de isosorbi- Mononitrato de Isosorbida a un matraz aforado de
da, 11 minutos para 5-nitrato de isosorbida. El
25 ml, suspender en 20 ml de Fase móvil, sonicar
ensayo solo es válido si en el cromatograma obteni- durante 15 minutos, y completar a volumen con
do a partir de la Preparación estándar D, la resolu- Fase móvil. Filtrar la suspensión a través de un
ción R entre los picos correspondientes al 2-nitrato filtro de membrana.
de isosorbida y al 5-nitrato de isosorbida es mayor Preparación muestra B - Transferir 1,0 ml de la
a 4,0. Preparación muestra A a un matraz aforado de
Procedimiento - Inyectar por separado en el 10 ml y completar a volumen con Fase móvil.
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
10 l) de Preparación muestra A, Preparación Inyectar 20 µl de la Preparación estándar A. Ajus-
estándar B y Preparación estándar C. En el cro- tar la sensibilidad del sistema de manera que la
respuesta del pico principal a partir de la Prepara-
ción estándar A sea al menos el 50 % de la escala
completa del registrador. Si las respuestas de los
picos correspondientes a dos inyecciones sucesivas
difieren en más de 1,0 %, inyectar otras cuatro
veces la Preparación estándar A y calcular la des-
viación estándar relativa para las seis inyecciones.
El ensayo sólo es válido si la desviación estándar
relativa es menor de 2 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 l) de la Preparación muestra B y la Prepara-
ción estándar A. Registrar los cromatogramas y
medir las respuestas de los picos. Calcular la canti-
dad de C6H9NO6 en la porción de Mononitrato de
Isosorbida en ensayo.
ROTULADO
Indicar en el rótulo el contenido de Mononitrato
de Isosorbida en porcentaje.
aproximadamente 1,5 ml por minuto. Equilibrar la
ITRACONAZOL columna durante 30 minutos con Solución B y luego
N
con la composición del eluyente inicial durante por
CH3
O
N lo menos 5 minutos (80 % de Solución A y 20 % de
N
H3C
O Solución B). Programar el cromatógrafo del si-
N
N
N N N O
O
guiente modo:
H
Cl Cl Tiempo Solución A Solución B Etapa
(minutos) (% p/v) (% p/v)
0-20 80 50 20 50 Gradiente
C35H38Cl2N8O4 PM: 706,0 84625-61-6 lineal
Definición - Itraconazol es 4-[4-[4-[4-[[2-(2,4- 20-25 50 50 Isocrático
Diclorofenil)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ilmetil)-1,3- 25-30 80 20 Retorno a la
dioxolan-4-il]metoxi]fenil]-1-piperazinil]fenil]-2,4- composición
dihidro-2-(1-metilpropil)-3H-1,2,4-triazol-3-ona. inicial de
Debe contener no menos de 98,5 por ciento y no elución
más de 101,5 por ciento de C35H38Cl2N8O4, calcula- 30=0 80 20 Reiniciar
do sobre la sustancia seca y debe cumplir con las gradiente
siguientes especificaciones. Solución A - Solución de sulfato ácido de tetra-
Caracteres generales - Polvo blanco o casi butilamonio al 2,72 %.
blanco. Facilmente soluble en cloruro de metileno; Solución B - Acetonitrilo. Filtrar y desgasificar.
moderadamente soluble en tetrahidrofurano; muy Fase móvil - Emplear mezclas variables de So-
poco soluble en alcohol; prácticamente insoluble en lución A y Solución B, según se indica en Sistema
agua. cromatográfico. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Sustancia de referencia - Itraconazol SR-FA. Diluyente - Metanol y tetrahidrofurano (1:1).
CONSERVACIÓN Solución muestra - Disolver 100,0 mg de Itra-
conazol en Diluyente y diluir a 10,0 ml con la mis-
En envases inactínicos bien cerrados. ma mezcla.
ENSAYOS Solución estándar A - Disolver 5,0 mg de Itra-
conazol SR-FA y 5,0 mg de Miconazol en Diluyen-
Identificación
te y diluir a 100,0 ml con la misma mezcla.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
Solución estándar B - Diluir 1,0 ml de Solución
B - Transferir 30 mg de Itraconazol a un crisol
muestra a 100,0 ml con Diluyente. Diluir 5,0 ml de
de porcelana. Agregar 0,3 g de carbonato de sodio
esta solución a 10 ml con Diluyente.
anhidro y calentar directamente sobre la llama du-
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
rante 10 minutos. Dejar enfriar, recolectar el resi-
Cromatografiar la Solución estándar A y registrar la
duo con 5 ml de ácido nitrico al 12,5 % p/v y filtrar.
respuesta de los picos según se indica en Procedi-
A 1 ml del filtrado agregar 1 ml de agua: esta solu-
miento: la resolución R entre los picos de miconazol
ción debe responder a los ensayos para Cloru-
e itraconazol no debe ser menor de 2,0.
ros <410>.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
Determinación del punto de fusión <260> cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Entre 166 y 170 °C. de 10 l) de la Solución estándar B, la Solución
Determinación de la rotación óptica <170> muestra y Diluyente, que será empleado como blan-
Entre –0,10° y +0,10°; determinada sobre una co. Registrar los cromatogramas y medir las res-
solución preparada disolviendo 2,0 g de Itraconazol puestas de todos los picos: a excepción del pico
en 20 ml de cloruro de metileno. principal en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra, la respuesta de ningún pico debe
Sustancias relacionadas ser mayor a la respuesta del pico principal obtenido
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo con la Solución estándar B (0,5 %); la suma de las
para cromatografía de líquidos con un detector respuestas de todos los picos, a excepción del pico
ultravioleta ajustado a 225 nm y una columna de principal, no debe ser mayor a 2,5 veces la respues-
10 cm 4,0 mm con fase estacionaria constituida ta del pico principal obtenido con la Solución
por octadecilsilano, desactivado para compuestos estándar B (1,25 %). Ignorar cualquier pico debido
básicos, químicamente unido a partículas porosas de al blanco y cualquier pico con una respuesta inferior
sílice de 3 m de diámetro. El caudal debe ser
a 0,1 veces la respuesta del pico principal obtenido
con la Solución estándar B.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Pérdida por secado <680>
Secar entre 100 y 105 °C durante 4 horas: no
debe perder más de 0,5 % de su peso.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Itra-
conazol, disolver en 70 ml de una mezcla de metil
etil cetona y ácido acético glacial (7:1) y titular con
ácido perclórico 0,1 N (SV), determinando el punto
final potenciométricamente titulando hasta el se-
gundo punto de inflexión (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
35,30 mg de C35H38Cl2N8O4.
IVERMECTINA CONSERVACIÓN
En envases herméticos.
OCH3
ENSAYOS
HO
OCH3
Identificación
H3C O O
H CH3 CH3 A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
H3C O O
H
O B - Examinar los cromatogramas obtenidos en
CH3
H O
H
Valoración. Los tiempos de retención de los dos
H R
H3C
picos principales en el cromatograma obtenido a
O O
OH
partir de la Preparación muestra se deben corres-
H
ponder con los de los dos picos principales en el
O
CH3
cromatograma obtenido con la Preparación están-
H
OH dar A.
Determinación de la rotación óptica <170>
Componente R FM PM Rotación específica: Entre –17° y –20º, sobre la
H2B1a CH2-CH3 C48H74O14 875 sustancia anhidra y libre de solvente.
Solución muestra: 25 mg por ml, en metanol.
H2B1b CH3 C47H72O1 861
Sustancias relacionadas
70288-86-7 Sistema cromatográfico, Fase móvil, Prepara-
ciones estándar A, B y C y Aptitud del sistema -
Definición - Ivermectina es una mezcla de Proceder según se indica en Valoración.
(2aE,4E,5’S,6S,6’R,7S,8E,11R,13R,15S,17aR, Solución muestra - Emplear la Preparación
20R,20aR,20bS)-7-[[2,6-dideoxi-4-O-(2,6-dideoxi- muestra según se indica en Valoración.
3-O-metil--L-arabino-hexopiranosil)-3-O-metil- Procedimiento - Inyectar por separado en el
-L-arabino-hexopiranosil]oxi]-20,20b-dihidroxi- cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
5’,6,8,19-tetrametil-6’-[(1S)-1-metilpropil]- 20 l) de la Solución muestra y las Preparaciones
3’,4’,5’,6,6’,7,10,11,14,15,17a,20, 20a,20b- estándar B y C, registrar los cromatogramas y me-
tetradecahidroespiro[11,15-metano-2H,13H,17H- dir las respuestas de todos los picos. En el croma-
furo[4,3,2-pq][2,6]benzodioxaci-clooctadeceno- tograma obtenido a partir de la Solución muestra la
13,2’-[2H]piran]-17-ona (componente H2B1a) y respuesta del pico de la impureza con un tiempo de
(2aE,4E,5’S,6S,6’R,7S,8E, retención relativo entre 1,3 y 1,5 con respecto al
11R,13R,15S,17aR,20R,20aR,20bS)-7-[[2,6- pico principal no debe ser mayor de 2,5 veces la
dideoxi-4-O-2,6-dideoxi-3-O-metil--L-ara-bino- respuesta del pico principal en el cromatograma
hexopiranosil)-3-O-metil--L-arabino- obtenido con la Preparación estándar B (2,5 %). A
hexopiranosil]oxi]-20,20b-dihidroxi-5’,6,8,19- excepción de los dos picos principales las respues-
tetrametil-6’-(1-metiletil)-3’,4’,5’,6,6’,7,10,11, tas de los picos de cualquier otra impureza en el
14,15,17a,20,20a,20b-tetradecahidroespiro [11,15- cromatograma obtenido a partir de la Solución
metano-2H,13H,17H-furo[4,3,2-pq][2,6] benzo- muestra, no debe ser mayor a la respuesta del pico
dioxaciclooctadeceno-13,2’-[2H]piran]-17-ona principal en el cromatograma obtenido con la Pre-
(componente H2B1B). Debe contener no menos de paración estándar B (1,0 %) y la suma de las res-
95,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de la puestas de todos los picos no debe ser mayor de
suma de ambos componentes (H2B1a+H2B1b), calcu- cinco veces la respuesta del pico principal en el
lado sobre la sustancia anhidra y libre de solvente y cromatograma obtenido a partir de la Preparación
la relación H2B1a/(H2B1a+H2B1b) de las áreas por estándar B (5,0%). Descartar cualquier pico con
cromatografía líquida debe ser al menos de 90,0 por una respuesta menor a la obtenida con la Prepara-
ciento. Ivermectina debe cumplir con las siguientes ción estándar C (0,05 %).
especificaciones. Alcohol y formamida
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
o blanco-amarillento. Levemente higroscópico. para cromatografía de gases con un detector de
Fácilmente soluble en cloruro de metileno; soluble ionización a la llama y una columna de vidrio de
en alcohol; prácticamente insoluble en agua. 30 m 0,53 mm recubierta con una película de
Sustancia de referencia - Ivermectina SR-FA. 1 m de una fase estacionaria constituida por polie-
tilenglicol (peso molecular de aproximadamente
20.000). Se debe emplear helio como gas transpor-
tador, con un caudal de aproximadamente 7,5 ml Titulación volumétrica directa. No más de
por minuto. Programar el cromatógrafo del siguien- 1,0 %, determinada sobre 0,5 g.
te modo: Determinación del residuo de ignición <270>
Tiempo Temperatura No más de 0,1 %.
(minutos) (ºC) VALORACIÓN
Columna 0-2 50 80
2-8 80 240 Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Cámara de para cromatografía de líquidos con un detector
220 ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
inyección
Detector 280 25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Solución del estándar interno - Diluir 5 ml de porosas de sílice de 5 m de diámetro. El caudal
alcohol n-propílico a 100 ml con agua. debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
Solución muestra - Pesar alrededor de 120 mg Fase móvil - Acetonitrilo, metanol y agua
de Ivermectina, transferir a un tubo de centrífuga y (51:34:15).
disolver en 2 ml de m-xileno, si es necesario calen- Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
tar en un baño de agua entre 40 y 50 ºC. Agregar dedor de 40 mg de Ivermectina, transferir a un
2 ml de agua, mezclar y centrifugar. Separar la matraz aforado de 50 ml, disolver y completar a
capa superior, transferirla a otro tubo y extraer con volumen con metanol.
2 ml de agua. Descartar la fase superior y combinar Preparación estándar A - Pesar exactamente al-
las fases acuosas. Agregar 1 ml de Solución del rededor de 40 mg de Ivermectina SR-FA, transferir
estándar interno, centrifugar y descartar el m-xileno a un matraz aforado de 50 ml, disolver y completar
residual. a volumen con metanol.
Solución estándar A - Diluir 3,0 g de Alcohol Preparación estándar B - Transferir 1,0 ml de
Absoluto a 100 ml con agua. la Preparación estándar A a un matraz aforado de
Solución estándar B - Diluir 1,0 g de formami- 100 ml y completar a volumen con metanol.
da a 100 ml con agua. Preparación estándar C - Transferir 5,0 ml de
Solución estándar C - Diluir 5 ml de la Solu- la Preparación estándar B a un matraz aforado de
ción estándar A y 5 ml de la Solución estándar B a 100 ml y completar a volumen con metanol.
50 ml con agua. Transferir 2 ml de esta solución a Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
un tubo de centrífuga, agregar 2 ml de m-xileno, Cromatografiar la Preparación estándar A y regis-
mezclar y centrifugar. Separar la capa superior, trar las respuestas de los picos según se indica en
transferir a otro tubo y extraer con 2 ml de agua. Procedimiento: la resolución R entre el primer pico
Descartar la capa superior y combinar las capas (componente H2B1b) y el segundo pico (componente
acuosas. Agregar 1 ml de la Solución del estándar H2B1a) no debe ser menor de 3,0; el factor de asi-
interno, centrifugar y descartar el m-xileno residual. metría para el pico principal debe ser menor de 2,5.
Solución estándar D - Diluir 10 ml de la Solu- Cromatografiar la Preparación estándar C y regis-
ción estándar A y 10 ml de la Solución estándar B a trar las respuestas de los picos según se indica en
50 ml con agua. Proceder según se indica para Procedimiento: la relación señal/ruido para el pico
Solución estándar C comenzando donde dice principal no debe ser menor a 10.
“Transferir 2 ml de...”. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Procedimiento - Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 20 l) de la Preparación muestra y la Preparación
1 l) de la Solución muestra y las Soluciones están- estándar A, registrar los cromatogramas y medir las
dar C y D, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la
respuestas de todos los picos: no debe contener más cantidad en porcentaje de Ivermectina
de 5,0 % de alcohol y no más de 3,0 % de formami- (H2B1a + H2B1b) y la relación
da. H2B1a/(H2B1a + H2B1b), en la porción de Ivermecti-
Límite de metales pesados <590> na en ensayo.
Método VI. Preparar la Solución muestra a par-
tir de 1,0 g de Ivermectina y la Solución estándar
empleando 2 ml de Solución estándar de plomo
(10 ppm). No más de 0,002 %:
Determinación de agua <120>
KETAMINA, partículas porosas de sílice de 5 m de diámetro y
una columna de 12,5 cm 4,0 mm con la misma fase
CLORHIDRATO DE estacionaria. El caudal debe ser aproximadamente
1,0 ml por minuto.
CH3 Fase móvil - Disolver 950 mg de
hexanosulfonato de sodio en 1 litro de una mezcla de
NH
agua y acetonitrilo (75:25), agregar 4 ml de ácido
HCl
acético y mezclar. Filtrar y desgasificar. Hacer los
O
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cl Cromatografía).
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 50,0 mg de Clorhidrato de Ketamina, transferir a
C13H16ClNO . HCl PM: 274,2 1867-66-9 un matraz aforado de 50 ml, disolver en Fase móvil,
Definición - Clorhidrato de Ketamina es completar a volumen con el mismo solvente y filtrar.
Clorhidrato de (±) 2-(2-clorofenil)-2-(metilami- Solución muestra diluida - Transferir 1,0 ml de
no)ciclohexanona. Debe contener no menos de Solución muestra a un matraz aforado de 10 ml y
99,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de completar a volumen con Fase móvil. Transferir
C13H16ClNO . HCl y debe cumplir con las 1 ml de esta solución a un matraz aforado de 20 ml y
siguientes especificaciones. completar a volumen con Fase móvil.
Solución de aptitud del sistema - Pesar
Caracteres generales - Polvo cristalino
exactamente alrededor de 25,0 mg de Impureza A de
blanco. Funde aproximadamente a 260 °C, con
Ketamina SR-FA, transferir a un matraz aforado de
descomposición. Fácilmente soluble en agua y
50 ml, disolver y completar a volumen con Fase
metanol; soluble en alcohol.
móvil, sonicar si fuera necesario. Transferir 1 ml de
Sustancia de referencia - Impureza A de esta solución a un matraz aforado de 100 ml, agregar
Ketamina SR-FA: 1-[(2-clorofenil)(metilimino) 0,5 ml de Solución muestra y completar a volumen
metil]ciclopentanol. con Fase móvil. [NOTA: preparar esta solución
CONSERVACIÓN inmediatamente antes de su uso].
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
En envases inactínicos bien cerrados. Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
ENSAYOS registrar las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la resolución R entre los picos de
Identificación impureza A de ketamina y ketamina no debe ser
A - Absorción infrarroja <460>. Proceder menor de 1,5.
según se indica en Identificación por medio de Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
espectros de referencia. volúmenes iguales (aproximadamente 20 µl) de la
B - Una solución de Clorhidrato de Ketamina Solución muestra y la Solución muestra diluida,
debe responder a los ensayos para Cloruro <410>. registrar los cromatogramas durante diez veces el
Transparencia de la solución tiempo de retención de ketamina y medir las
Disolver 5,0 g de Clorhidrato de Ketamina en respuestas de todos los picos. El tiempo de retención
25,0 ml de agua libre de dióxido de carbono: la debe estar comprendido entre 3 y 4,5 minutos para
solución debe ser transparente e incolora. ketamina. A excepción del pico principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
Determinación del pH <250>
muestra, la suma de todos los picos no debe ser
Entre 3,5 y 4,1, determinado sobre una
mayor que el pico principal en el cromatograma
solución 1 en 10.
obtenido con la Solución muestra diluida (0,5 %).
Determinación de la rotación óptica <170> Ignorar cualquier pico con una respuesta menor a 0,2
Rotación específica: Entre 0,2° y 0,2°. veces la respuesta del pico principal en el
Solución muestra: 20 mg por ml, en agua. cromatograma obtenido con la Solución muestra
diluida (0,1 %).
Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo Determinación del residuo de ignición<270>
para cromatografía de líquidos con un detector No más de 0,1 %.
ultravioleta ajustado a 215 nm, una precolumna de Límite de metales pesados <590>
4 mm 4,0 mm con fase estacionaria constituida Método I. No más de 0,002 %.
por octadecilsilano químicamente unido a
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de
Clorhidrato de Ketamina, transferir a un matraz
aforado de 50 ml, completar a volumen con
metanol y agregar 1 ml de ácido clorhídrico 0,1 M
y titular potenciométricamente con hidróxido de
sodio 0,1 M, leer el volumen agregado entre los
dos puntos de inflexión. Realizar una
determinación con un blanco y hacer las
correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de hidróxido de sodio 0,1 M equivale a
27,42 mg de C13H16ClNO . HCl.
Solución estándar B - Diluir una porción de la
KETOCONAZOL Solución estándar A cuantitativamente con cloro-
formo para obtener una solución de aproximada-
O mente 1,0 mg por ml.
N N O H
O
Cl Solución muestra - Disolver 30,0 mg de Keto-
H3C
conazol en 3,0 ml de cloroformo.
O Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Cl placa 10 µl de la Solución muestra y la Solución
N
estándar A y 2 µl de la Solución estándar B. Dejar
N secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogra-
mas, en una cámara no saturada, hasta que el frente
del solvente haya recorrido aproximadamente tres
C26H28Cl2N4O4 PM: 531,4 65277-42-1 cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
Definición - Ketoconazol es cis placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
1-Acetil-4-[4-[[2-(2,4-diclorofenil)-2-(1H-imidazol- dejar secar al aire. Examinar bajo luz ultravioleta a
1-ilmetil)-1,3-dioxolan-4-il]metoxi]fenil]piperazina. 254 nm: la mancha principal en el cromatograma
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no obtenido a partir de la Solución muestra debe ser
más de 102,0 por ciento de C26H28Cl2N4O4, calcula- similar en valor de Rf y tamaño a la mancha obte-
do sobre la sustancia seca y debe cumplir con las nida con la Solución estándar A y la suma de las
siguientes especificaciones. intensidades de las manchas secundarias obtenidas a
partir de la Solución muestra no debe ser mayor a la
Caracteres generales - Polvo blanco o casi intensidad de la mancha principal obtenida con la
blanco. Fácilmente soluble en cloruro de metileno; Solución estándar B (2,0 %).
soluble en metanol; moderadamente soluble en
alcohol; prácticamente insoluble en agua Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método II.
Sustancia de referencia - Ketoconazol SR-FA.
Determinación del punto de fusión <260>
CONSERVACIÓN Entre 148 y 152 °C.
En envases inactínicos bien cerrados. Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,002 %.
ENSAYOS
Pérdida por secado <680>
Identificación Secar al vacío a 80 °C durante 4 horas: no debe
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. perder más de 0,5 % de su peso.
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en
Pureza cromatográfica. La mancha principal en el Determinación del residuo de ignición <270>
cromatograma obtenido a partir de la Solución No más de 0,1 %, determinado sobre 2 g.
muestra debe ser similar en valor de Rf y tamaño a
la mancha principal obtenida con la Solución están- VALORACIÓN
dar. Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Ke-
Determinación de la rotación óptica <170> toconazol y disolver en 40 ml de ácido acético gla-
Rotación específica - Entre -1° y +1°, medidos cial. Titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), de-
a 20 °C. terminando el punto final potenciométricamente.
Solución muestra: 40 mg por ml, en metanol. Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Pureza cromatográfica Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
Fase estacionaria - Emplear una placa para 26,57 mg de C26H28Cl2N4O4.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - n-hexano, acetato de etilo, meta-
nol, agua e hidróxido de amonio (42:40:15:2:1).
Solución estándar A - Disolver una cantidad de
Ketoconazol SR-FA en cloroformo para obtener
una solución de aproximadamente 10,0 mg por ml.
Revelador - Emplear una solución alcohólica
KETOROLACO recientemente preparada de aproximadamente
TROMETAMINA 30 mg de ninhidrina por ml.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
O placa 40 µl de la Solución estándar y 40 µl de la
OH
Solución muestra. Dejar secar las aplicaciones y
OH
HO OH desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
N
NH2
del solvente haya recorrido aproximadamente tres
O
cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
C15H13NO3 . C4H11NO3 PM: 376,4 74103-07-4 dejar secar. Pulverizar sobre la placa con Revela-
dor y calentar la placa a 150 °C entre 2 y 5 minutos.
Definición - Ketorolaco Trometamina es Ácido
En la placa deben aparecer manchas amarillas con
(±)-5-benzoil-2,3-dihidro-1H-pirrolicina-1-carboxí-
bordes de color rosado hasta púrpura en las zonas
lico, compuesto con 2-amino-2-(hidroximetil)-
donde se aplicaron la Solución estándar y la Solu-
1,3-propanodiol (1:1). Debe contener no menos de
ción muestra.
98,5 por ciento y no más de 101,5 por ciento de
C15H13NO3 . C4H11NO3, calculado sobre la sustan- Determinación del pH <250>
cia seca y debe cumplir con las siguientes especifi- Entre 5,7 y 6,7; determinado sobre una solución
caciones. 1 en 100.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Pureza cromatográfica
o casi blanco. Funde aproximadamente a 162 °C, Sistema cromatográfico, Fase móvil, Diluyente,
con descomposición. Fácilmente soluble en agua y Preparación estándar, Preparación muestra, Solu-
metanol; poco soluble en alcohol, alcohol absoluto ción de resolución y Aptitud del sistema - Proceder
y tetrahidrofurano; prácticamente insoluble en ace- según se indica en Valoración.
tato de etilo, acetona, acetonitrilo, alcohol butílico, Procedimiento - Inyectar la Preparación mues-
diclorometano, dioxano, hexano y tolueno. tra según se indica en Procedimiento en Valoración
y registrar el cromatograma durante al menos tres
Sustancia de referencia - Ketorolaco Trome-
veces el tiempo de retención del ketorolaco. Medir
tamina SR-FA.
las respuestas de todos los picos. Calcular el por-
CONSERVACIÓN centaje de cada impureza individual en la porción
En envases inactínicos de cierre perfecto. de Ketorolaco Trometamina en ensayo, relacionan-
do la respuesta de los picos para cada impureza
ENSAYOS individual y la suma de las respuestas de todos los
Identificación picos de impurezas y el pico principal de ketorola-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase solida. co. Multiplicar la respuesta de cada pico de impu-
B - Absorción ultravioleta <470> reza individual por los siguientes factores de co-
Solvente: metanol. rrección: 0,52 para el análogo 1-ceto-ketorolaco;
Concentración: 10 µg por ml. 0,67 para el análogo 1-hidroxi-ketorolaco; 2,2 para
C - Identificación de trometamina. Aplicar la el pico de impureza con un tiempo de retención de
siguiente técnica cromatográfica. 0,54 relativo al ketorolaco y 0,91 para el pico de
Fase estacionaria - Emplear una placa para impureza con un tiempo de retención relativo de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- 0,66. No debe contener más de 0,1 % del análogo
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- 1-ceto-ketorolaco o del análogo 1-hidroxi-
grafía, de 0,25 mm de espesor. ketorolaco, no debe contener más de 0,5 % de cual-
Fase móvil - Diclorometano, acetona y ácido quier otra impureza y la suma de todas las impure-
acético glacial (95:5:2). zas no debe ser mayor de 1,0 %.
Diluyente - Diclorometano y metanol (2:1). Impurezas orgánicas volátiles <520>
Solución estándar - Disolver una cantidad exac- Método III.
tamente pesada de Ketorolaco Trometamina SR-FA
en Diluyente para obtener una solución de aproxi- Límite de metales pesados <590>
madamente 5 mg por ml. Método II. No más de 0,002 %.
Solución muestra - Disolver una cantidad exac- Pérdida por secado <680>
tamente pesada de Ketorolaco Trometamina en Secar al vacío a 60 °C durante 3 horas: no debe
Diluyente para obtener una solución de aproxima- perder más de 0,5 % de su peso.
damente 5 mg por ml.
Determinación del residuo de ignición <270> las respuestas de los picos según se indica en Pro-
No más de 0,1 %. cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 0,63 para el análogo
VALORACIÓN
1-hidroxi-ketorolaco, 0,89 para el análogo 1-ceto-
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo ketorolaco y 1,0 para ketorolaco; la resolución R
para cromatografía de líquidos con un detector entre los picos del análogo 1-ceto-ketorolaco y de
ultravioleta ajustado a 313 nm y una columna de ketorolaco no debe ser menor de 1,5. Cromatogra-
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida fiar la Preparación estándar y registrar las respues-
por octilsilano unido químicamente a partículas tas de los picos según se indica en Procedimiento:
totalmente porosas de sílice de 5 µm de diámetro. la eficiencia de la columna no debe ser menor de
Mantener la columna aproximadamente a 40 °C. El 5.500 platos teóricos; la desviación estándar relativa
caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml por minu- para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
to. 1,5 %.
Solución reguladora de fosfato - Disolver Procedimiento - Inyectar por separado en el
5,75 g de fosfato monobásico de amonio en 1 litro cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
de agua y ajustar a pH 3,0 con ácido fosfórico. 10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
Fase móvil - Solución reguladora de fosfato y muestra, registrar los cromatogramas y medir las
tetrahidrofurano (70:30). Filtrar y desgasificar. respuestas de los picos principales. Calcular la
Hacer los ajustes necesarios para obtener un tiempo cantidad en mg de C15H13NO3 . C4H11NO3 en la
de retención para ketorolaco de aproximadamente 8 porción de Ketorolaco Trometamina en ensayo.
a 12 minutos (ver Aptitud del sistema en 100. Cro-
matografía).
Diluyente - Agua y tetrahidrofurano (70:30).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Ketorolaco Trometami-
na SR-FA cuantitativamente en Diluyente para
obtener una solución de aproximadamente 0,4 mg
por ml. [NOTA: proteger esta solución de la luz].
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 20 mg de Ketorolaco Trometamina, trans-
ferir a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con Diluyente y mezclar. [NOTA: prote-
ger esta solución de la luz].
Solución de resolución - Mezclar 100 ml de
agua, 100 ml de diclorometano, 30 mg de Ketorola-
co Trometamina SR-FA y 1 ml de ácido clorhídri-
co 1 N en una ampolla de decantación de 250 ml.
Tapar, agitar y dejar separar las fases. Transferir la
fase inferior de diclorometano a un erlenmeyer de
borosilicato con tapón y descartar la fase superior.
Exponer la solución de diclorometano a la luz solar
directa durante 10 a 15 minutos. Transferir 1,0 ml
de la solución a un recipiente apropiado con tapón,
evaporar hasta sequedad con una corriente de aire o
en una corriente de nitrógeno, agregar 1,0 ml de
Diluyente y agitar por rotación hasta disolver.
[NOTA: esta solución puede estar almacenada bajo
refrigeración y emplearse mientras el cromatograma
obtenido según se indica en Procedimiento, sea
apropiado para identificar los picos debidos al aná-
logo 1-ceto-ketorolaco y al análogo 1-hidroxi-
ketorolaco, y para medir la resolución entre los
picos del análogo 1-ceto-ketorolaco y de ketorola-
co].
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
LÁCTICO, ÁCIDO Cloruro
A 10 ml de una solución de Ácido Láctico al 1 %,
50-21-5 acidificada con ácido nítrico, agregar unas gotas de
Definición - Ácido Láctico es una mezcla de Áci- nitrato de plata (SR): no se debe producir opalescencia
do Láctico (C3H6O3) y Lactato del Ácido Láctico inmediata.
(C6H10O5). Debe contener no menos de 88,0 por Límite de metales pesados <590>
ciento y no más de 92,0 por ciento de C3H6O3. Ácido Método II. No más de 10 ppm.
Láctico es obtenido mediante fermentación láctica de
Límite de ácido cítrico, oxálico, fosfórico o
azúcares o preparado sintéticamente. Ácido Láctico
tartárico
obtenido mediante fermentación de azúcares es levo-
A 10 ml de una solución de Ácido Láctico al
rrotarorio y el obtenido por medio de síntesis es racé-
0,1 %, agregar 40 ml de hidróxido de calcio (SR) y
mico. [NOTA: en solución, Ácido Láctico obtenido
calentar a ebullición durante 2 minutos: no se debe
por fermentación cambia a dextrorrotarorio por hidró-
producir turbidez.
lisis del Lactato del Ácido L-(-)-Láctico a Ácido
L-(+)-Láctico]. Ácido Láctico debe cumplir con las Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
siguientes especificaciones. Cuando en el rótulo se indique que Ácido Láctico
esté destinado a preparaciones parenterales debe con-
Caracteres generales - Líquido siruposo, incolo-
tener menos de 5,0 Unidades de endotoxina por g.
ro o amarillento. Al ser concentrado por ebullición se
forma Lactato del Ácido Láctico. Densidad de VALORACIÓN
aproximadamente 1,20. Miscible en agua, alcohol y A 2,5 ml de Ácido Láctico, exactamente pesados,
éter. Insoluble en cloroformo. agregar 50 ml de hidróxido de sodio 1 N y calentar a
CONSERVACIÓN ebullición durante 20 minutos. Agregar fenolftaleí-
na (SR) y titular el exceso de hidróxido de sodio con
En envases de cierre perfecto.
ácido sulfúrico 1 N. Realizar una determinación con
ENSAYOS un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Identificación Volumetría). Cada ml de hidróxido de sodio 1 N SV)
Debe responder a los ensayos para Lactato <410>. equivale a 90,08 mg de C3H6O3.
VALORACIÓN
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Norgestrel SR-FA en alco-
hol para obtener una solución de aproximadamente
10 µg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 mg de Levonorgestrel, disolver en
alcohol y diluir cuantitativamente y en etapas con
alcohol para obtener una solución de aproximada-
mente 10 µg por ml.
Procedimiento - Determinar concomitantemen-
te las absorbancias de ambas soluciones en celdas
de 1 cm a la longitud de onda de máxima absorción,
aproximadamente 241 nm, con un espectrofotóme-
tro, empleando alcohol como blanco. Calcular la
cantidad de C21H28O2 en la porción de Levornorges-
trel en ensayo.
una mezcla de alcohol e hidróxido de sodio 1 N
LEVOTIROXINA SÓDICA (2:1).
I O
Pérdida por secado <680>
Secar 500 mg de Levotiroxina Sódica sobre
HO I
ONa pentóxido de fósforo a 60 °C y a una presión que no
H NH2 . H2O exceda los 10 mm Hg durante 4 horas: no debe
I O perder más de 11,0 % de su peso.
I Límite de ioduro inorgánico
Solución de extracción - Preparar una solución
C15H10I4NNaO4 . H2O 25416-65-3 1 en 100 de ácido sulfúrico en agua.
Solución estándar - [NOTA: preparar esta so-
Anhidra PM: 798,9 55-03-8 lución en el día de su uso]. Disolver una cantidad
Definición - Levotiroxina Sódica es la Sal mo- exactamente pesada de ioduro de potasio en agua
nosódica de O-(4-hidroxi-3,5-diiodofenil)- para obtener una solución que contenga 0,131 mg,
3,5-diiodo-L-tirosina, hidrato. Es la sal sódica del equivalentes a 0,100 mg de ioduro, por ml. Trans-
isómero levo de la tirosina. Debe contener no me- ferir 0,6 ml de esta solución a un matraz aforado de
nos de 97,0 por ciento y no más de 103,0 por ciento 1 litro, completar a volumen con Solución de ex-
de C15H10I4NNaO4, calculado sobre la sustancia tracción y mezclar. Cada ml de Solución estándar
anhidra y debe cumplir con las siguientes especifi- contiene 0,06 µg de ioduro.
caciones. Solución muestra - Transferir 7,5 mg de Levoti-
roxina Sódica a un vaso de precipitados, agregar
Caracteres generales - Polvo casi blanco o 100 ml de Solución de extracción y sonicar durante
amarillo pálido; inodoro e higroscópico. Estable al 5 minutos.
aire seco, puede adquirir un leve color rosado por Sistema de electrodos - Emplear un electrodo
exposición a la luz. Soluble en soluciones de indicador específico para ioduro y un electrodo de
hidróxidos alcalinos y en soluciones calientes de referencia de plata-cloruro de plata, conectado a un
carbonatos alcalinos; poco soluble en alcohol; muy medidor de pH capaz de medir los potenciales con
poco soluble en agua; insoluble en acetona, cloro- una reproducibilidad mínima de ± 1 mV (ver 250.
formo y éter. Determinación del pH).
Sustancias de referencia - Levotiroxi- Procedimiento - Transferir la Solución estándar
na SR-FA. Liotironina SR-FA. a un vaso de precipitados que contenga una barra de
agitación magnética. Enjuagar y secar los electro-
CONSERVACIÓN dos, insertar en la solución, agitar durante 5 minutos
En envases inactínicos de cierre perfecto. o hasta que se estabilice la lectura y leer el poten-
cial, en mV. Repetir este proceso empleando la
ENSAYOS Solución muestra. Se cumplen los requisitos del
Identificación ensayo si la Solución muestra tiene un potencial
A - Someter a ignición aproximadamente más alto, en mV, que la Solución estándar: no más
50 mg de Levotiroxina Sódica en una cápsula de de 0,08 %.
platino sobre llama: se debe descomponer y emitir
Límite de liotironina sódica
vapores de iodo. Sistema cromatográfico, Fase móvil, Prepara-
B - Agregar a 0,5 mg de Levotiroxina Sódica, ción estándar, Preparación muestra y Aptitud del
7,5 ml de solución ácida de cloruro de sodio (prepa- sistema - Proceder según se indica en Valoración.
rada mezclando 300 ml de agua, 250 ml de alcohol, Procedimiento - Proceder según se indica en
100 ml de hidróxido de sodio 1 N y 100 ml de ácido Valoración. Calcular la cantidad de liotironina
clorhídrico) y 1 ml de solución de nitrito de sodio sódica (C15H11I3NNaO4) en la porción de Levoti-
1 en 100. Dejar reposar en la oscuridad durante roxina Sódica en ensayo, a partir de las respuestas
20 minutos y agregar 1,25 ml de hidróxido de amo- de los picos de liotironina, obtenidos con la Prepa-
nio: se debe producir un color rosado.
ración muestra y la Preparación estándar. No
Determinación de la rotación óptica <170> debe contener más de 2,0 % de liotironina.
Rotación específica: Entre -5° y -6°.
VALORACIÓN
Solución muestra: una cantidad equivalente a
30 mg de Levotiroxina Sódica anhidra por ml, en Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 225 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por gel de sílice de 10 µm de diámetro químicamen-
te unido a un revestimiento de intercambio catióni-
co fuertemente ácido. El caudal debe ser aproxi-
madamente 1,5 ml por minuto.
Fase móvil - Agua y acetonitrilo (60:40) que
contenga 0,5 ml de ácido fosfórico por cada
1.000 ml. Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
tografía).
Preparación estándar - Transferir cantidades
exactamente pesadas de Levotiroxina SR-FA y
Liotironina SR-FA a un envase apropiado, disolver
en Fase móvil y diluir cuantitativamente y en etapas
con Fase móvil para obtener una solución de
aproximadamente 10 µg de levotiroxina por ml y
0,2 µg de liotironina por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 µg de Levotiroxina Sódica y transferir
a un tubo de centrífuga. Agregar 2 perlas de vidrio
y 10 ml de Fase móvil y mezclar empleando un
mezclador por vórtice durante 3 minutos. Centrifu-
gar hasta obtener un líquido sobrenadante transpa-
rente, filtrando si fuera necesario.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de lioti-
ronina y levotiroxina no debe ser menor de 5,0; la
desviación estándar relativa para inyecciones repe-
tidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
100 µl) de la Preparación estándar y la Prepara-
ción muestra, registrar los cromatogramas y medir
las respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C15H10I4NNaO4 en la porción de Levo-
tiroxina Sódica en ensayo, a partir de las respuestas
de los picos de levotiroxina obtenidos con la Prepa-
ración muestra y la Preparación estándar.
presente en la porción remanente del filtrado a la
LIDOCAÍNA cual no se le agregó cloruro de bario (SR).
Limite de metales pesados <590>
CH3
H Método I. Disolver 1,0 g de Lidocaína en una
N mezcla de 2 ml de ácido clorhídrico 3 N y 10 ml de
H3C N
agua, evaporar en un baño de vapor hasta sequedad
O y disolver el residuo en 25 ml de agua (0,002 %).
H3C H3C
Límite de 2,6-Dimetilanilina
Disolver 250 mg de Lidocaína en metanol y
C14H22N2O PM: 234,3 137-58-6 diluir a 10 ml con el mismo solvente. A 2 ml de
esta solución agregar 1 ml de una solución
Definición - Lidocaína es 2-(Dietilamino)- recientemente preparada de p-dimetilaminoben-
N-(2,6-dimetilfenil)acetamida. Debe contener no zaldehído al 1 % en metanol y 2 ml de ácido acético
menos de 97,5 por ciento y no más de 102,5 por glacial y dejar en reposo durante 10 minutos. Una
ciento de C14H22N2O y debe cumplir con las eventual coloración amarillenta en la solución no
siguientes especificaciones. debe ser más intensa que la de una solución de
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco referencia preparada al mismo tiempo y de la
o levemente amarillo. Estable al aire. Muy soluble misma manera empleando 2 ml de una solución de
en alcohol y cloroformo; fácilmente soluble en éter; 2,6-dimetilanilina en metanol de aproximadamente
prácticamente insoluble en agua. Se disuelve en 2,5 µg por ml (100 ppm).
aceites.
VALORACIÓN
Sustancia de referencia - Lidocaína SR-FA.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
CONSERVACIÓN para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
En envases bien cerrados.
30 cm 3,9 mm con fase estacionaria constituida
ENSAYOS por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. Se
Identificación debe mantener la temperatura de la columna entre
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. 20 y 25 °C 0,1 °C. El caudal debe ser
Secar previamente al vacío sobre gel de sílice aproximadamente 1,5 ml por minuto.
durante 24 horas. Fase móvil - Mezclar 50 ml de ácido acético
B - Disolver 100 mg de Lidocaína en 1 ml de glacial y 930 ml de agua. Ajustar a pH 3,40 con
alcohol. Agregar a esta solución 10 gotas de hidróxido de sodio 1 N. Mezclar aproximadamente
cloruro cobaltoso (SR) y agitar durante 4 volúmenes de esta solución con 1 volumen de
aproximadamente 2 minutos: se debe desarrollar un acetonitrilo, de manera que el tiempo de retención
color verde brillante y formar un precipitado fino. de lidocaína sea entre 4 a 6 minutos. Filtrar y
Determinación del punto de fusión <260> desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Entre 66 y 69 °C. Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Pesar exactamente
Determinación del residuo de ignición <270> alrededor de 85 mg de Lidocaína SR-FA, transferir
No más de 0,1 %. a un matraz de 50 ml y disolver en 0,5 ml de ácido
Límite de cloruro y sulfato <560> clorhídrico 1 N, calentando si fuera necesario para
Cloruro - Disolver 1,0 g de Lidocaína en una favorecer la disolución. Completar a volumen con
mezcla de 3 ml de ácido nítrico 2 N y 12 ml de agua Fase móvil y mezclar para obtener una solución de
y agregar 1 ml de nitrato de plata (SR): la turbidez aproximadamente 1,7 mg de Lidocaína por ml.
no debe ser mayor que la producida por 50 µl de Solución de resolución - Preparar una solución
ácido clorhídrico 0,020 N (0,0035 %). de Metilparabeno en Fase móvil de
Sulfato - Disolver aproximadamente 200 mg de aproximadamente 220 µg por ml. Mezclar 2 ml de
Lidocaína en una mezcla de 2 ml de ácido nítrico esta solución y 20 ml de la Preparación estándar.
2 N y 20 ml de agua y filtrar si fuera necesario. A Preparación muestra - Pesar exactamente
la mitad del filtrado agregar 1 ml de cloruro de alrededor de 85 mg de Lidocaína, transferir a un
bario (SR): la turbidez no debe ser mayor que la matraz aforado de 50 ml y disolver en 0,5 ml de
ácido clorhídrico 1 N, calentando si fuera necesario
para favorecer la disolución. Completar a volumen
con Fase móvil y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la resolución R entre los picos de
lidocaína y metilparabeno no debe ser menor de 3,0.
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1,5 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación muestra y la Preparación
estándar, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C14H22N2O en la porción de Lidocaína
en ensayo.
Disolver aproximadamente 200 mg de Clor-
LIDOCAÍNA, hidrato de Lidocaína en 20 ml de agua, agregar 2 ml
CLORHIDRATO DE de ácido clorhídrico 3 N, mezclar y dividir en dos
porciones. A una porción de la solución agregar
1 ml de cloruro de bario (SR): no se debe producir
CH3
H más turbidez que la presente en la porción remanen-
N te de la solución a la que no se agregó el cloruro de
H3C N HCl H2O
bario (SR).
O
H3C H3C Límite de 2,6-dimetilanilina
Solución muestra - Disolver 250 mg de Clor-
hidrato de Lidocaína en metanol y diluir a 10 ml
C14H22N2O . HCl . H2O PM: 288,8 6108-05-0 con el mismo solvente.
Anhidro PM: 270,8 73-78-9 Solución estándar - Disolver 50 mg de
2,6-dimetilanilina en metanol y diluir a 100 ml con
Definición - Clorhidrato de Lidocaína es Mo- el mismo solvente. Diluir 1 ml de esta solución a
noclorhidrato de 2-(dietilamino)-N-(2,6-dimetilfe- 100 ml con metanol.
nil)acetamida, monohidrato. Debe contener no Procedimiento - Emplear tres tubos de Nessler,
menos de 97,5 por ciento y no más de 102,5 por transferir al primer tubo 2 ml de Solución muestra,
ciento de C14H22N2O . HCl, calculado sobre la sus- al segundo tubo 1 ml de Solución estándar y 1 ml
tancia anhidra y debe cumplir con las siguientes de metanol y al tercer tubo 2 ml de metanol (em-
especificaciones. pleado para preparar el blanco). A cada uno de los
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco. tubos agregar 1 ml de una solución recientemente
Muy soluble en agua y alcohol; soluble en cloro- preparada de p-dimetilaminobenzaldehído al 1 % en
formo; insoluble en éter. metanol y 2 ml de ácido acético glacial y dejar
reposar la solución a temperatura ambiente durante
Sustancia de referencia - Lidocaína SR-FA. 10 minutos. La intensidad de la coloración amarilla
en el tubo que contiene la Solución muestra debe
CONSERVACIÓN estar comprendida entre la del tubo que contiene el
En envases inactínicos bien cerrados. blanco y la del tubo que contiene la Solución están-
dar (100 ppm).
ENSAYOS
Identificación Límite de metales pesados <590>
A - Transferir aproximadamente 300 mg de Método I. No más de 0,002 %.
Clorhidrato de Lidocaína a una ampolla de decanta- Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
ción, disolver en 5 a 10 ml de agua, agregar 4 ml de Cuando en el rótulo se indique que el Clorhidra-
hidróxido de amonio 6 N y extraer con cuatro por- to de Lidocaína es estéril, no debe contener más de
ciones de 15 ml de cloroformo. Combinar los ex- 1,1 Unidades de Endotoxina por mg de Clorhidrato
tractos clorofórmicos, evaporar con una corriente de de Lidocaína.
aire caliente y secar el residuo al vacío sobre gel de
Ensayos de esterilidad <370>
sílice durante 24 horas: el precipitado cristalino
Cuando en el rótulo se indique que el Clorhidra-
obtenido debe responder a los ensayos de Identifi-
to de Lidocaína es estéril debe cumplir con los
cación en Lidocaína.
requisitos.
B - Una solución debe responder a los ensayos
para Cloruro <410>. VALORACIÓN
Determinación del punto de fusión <260> Sistema cromatográfico, Fase móvil y Prepara-
Entre 74 y 79 °C. No secar la muestra antes de ción estándar - Proceder según se indica en Valo-
la determinación. ración en Lidocaína.
Determinación de agua <120> Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Titulación volumétrica directa. Entre 5,0 y dedor de 100 mg de Clorhidrato de Lidocaína,
7,0 %. transferir a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con Fase móvil y mezclar.
Determinación del residuo de ignición <270> Solución de resolución - Preparar una solución
No más de 0,1 %. de Metilparabeno en Fase móvil de aproximada-
Límite de sulfato mente 220 µg por ml. Mezclar 2 ml de esta solu-
ción y 20 ml de Preparación estándar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar aproximadamente 20 µl de la Solu-
ción de resolución y registrar las respuestas de los
picos según se indica en Procedimiento: la resolu-
ción R entre los picos de lidocaína y metilparabeno
no debe ser menor de 3,0. Cromatografiar la Pre-
paración estándar y registrar las respuestas de los
picos según se indica en Procedimiento: la desvia-
ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
debe ser mayor de 1,5 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación muestra y la Preparación
estándar. Registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en mg de C14H22N2O . HCl en la porción
de Clorhidrato de Lidocaína en ensayo.
ROTULADO
Cuando el Clorhidrato de Lidocaína esté desti-
nado para la preparación de formas farmaceúticas
inyectables, en el rótulo se debe indicar que es
estéril.
Límite de ioduro inorgánico en Levotiroxina Sódi-
LIOTIRONINA SÓDICA ca.
Solución muestra - Transferir 7,5 mg de Lioti-
O ronina Sódica a un vaso de precipitados, agregar
HO I
100 ml de Solución de extracción y sonicar durante
ONa 5 minutos.
H NH2
Procedimiento - Proceder según se indica en
Límite de ioduro inorgánico en Levotiroxina Sódi-
I O
ca: el límite es 0,08 %.
I Límite de levotiroxina sódica
Sistema cromatográfico, Fase móvil, Prepara-
C15H11I3NNaO4 PM: 673,0 55-06-1 ción estándar, Preparación muestra y Aptitud del
sistema - Proceder según se indica en Valoración.
Definición - Liotironina Sódica es la Sal sódica Procedimiento - Proceder según se indica en
de O-(4-Hidroxi-3-iodofenil)-3,5-diiodo-L-tirosina. Valoración: no debe contener más de 5,0 % de
Debe contener no menos de 95,0 por ciento y no levotiroxina sódica.
más de 101,0 por ciento de C15H11I3NNaO4, calcu-
lado sobre la sustancia seca y debe cumplir con las Contenido de cloruro
siguientes especificaciones. Pesar exactamente alrededor de 100 mg de Lio-
tironina Sódica previamente secados y transferir a
Caracteres generales - Polvo cristalino de co- una cápsula de platino. Someter a ignición sobre
lor castaño claro. Inodoro. Poco soluble en alco- una llama de baja intensidad. Cuando se haya com-
hol; muy poco soluble en agua; prácticamente inso- pletado la ignición, enfriar la cápsula, agregar 2
luble en la mayoría de otros solventes orgánicos. gotas de agua y deshacer la masa carbonizada con
Sustancias de referencia - Liotironina SR-FA. una varilla. Agregar 10 ml de agua, 5 ml de
Levotiroxina SR-FA. hidróxido de amonio y mezclar. Transferir la mez-
cla a un erlenmeyer de 50 ml con tapa de vidrio y
CONSERVACIÓN
lavar con agua la cápsula de platino y la varilla,
En envases de cierre perfecto. agregando los lavados al erlenmeyer hasta que el
ENSAYOS volumen de la solución sea aproximadamente de
25 ml. Agregar 10 ml de solución de nitrato de
Identificación plata 1 en 20 y agitar. Filtrar a través de un papel
A - Absorción ultravioleta <470> de filtro recolectando los filtrados en un tubo de
Solvente: ácido clorhídrico diluido (1 en Nessler de 50 ml. Lavar el matraz y el papel de
50) en alcohol al 80 %. filtro con 10 ml de agua y agregar los lavados al
Concentración: 100 µg por ml. tubo. Acidificar el filtrado y los lavados combina-
Las absortividades a 297 nm, calculadas dos con ácido nítrico empleando tornasol como
sobre la sustancia seca como ácido, no deben diferir indicador y diluir con agua a 50 ml. Preparar un
en más de 5,0 %. control del siguiente modo: mezclar 5 ml de
B - Calentar aproximadamente 50 mg de Lioti- hidróxido de amonio, 20 ml de agua y 10 ml de
ronina Sódica con unas gotas de ácido sulfúrico en solución de nitrato de plata 1 en 20, filtrar la mezcla
un crisol de porcelana: se deben producir vapores a través de un papel de filtro a un tubo de Nessler
de iodo de color violeta. de 50 ml, luego lavar el papel de filtro con 10 ml de
C - El residuo de ignición de Liotironina Sódica agua en el tubo, acidificando su contenido frente al
debe responder a los ensayos para Sodio <410>. tornasol con ácido nítrico; diluir con agua a 50 ml y
Determinación de la rotación óptica <170> agregar solución de cloruro de sodio 1 en 1.000 en
Rotación específica: Entre +18° y +22°. porciones de 0,1 ml hasta que la turbidez del control
Solución muestra: 20 mg por ml, en una mezcla sea comparable a la de la solución en ensayo. No se
de alcohol y ácido clorhídrico 1,2 N (4:1). deben requerir más de 2,0 ml de cloruro de sodio
(1,2 %).
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder Contenido de sodio
más de 4,0 % de su peso. Pesar exactamente alrededor de 100 mg de Lio-
tironina Sódica previamente secados y transferir a
Límite de ioduro inorgánico una cápsula de platino. Agregar de 8 a 10 gotas de
Solución de extracción, Solución estándar y Sis- ácido sulfúrico y someter a ignición hasta peso
tema de electrodos - Proceder según se indica en
constante, evitando salpicaduras. Cada mg de resi-
duo equivale a 0,324 mg de Na. Corregir el resul-
tado por la cantidad de sodio equivalente al NaCl
encontrado en el ensayo para Contenido de cloruro:
no menos de 2,9 ni más de 4,0 %.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 225 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por grupos nitrilo químicamente unidos a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,5 ml por minu-
to.
Fase móvil - Agua y acetonitrilo (60:40) que
contenga 0,5 ml de ácido fosfórico por litro. Filtrar
y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver cantidades
exactamente pesadas de Liotironina SR-FA y Levo-
tiroxina SR-FA en Fase móvil y diluir cuantitativa-
mente y en etapas con Fase móvil para obtener una
solución de aproximadamente 10 µg de liotironina y
0,5 µg de levotiroxina por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 100 µg de Liotironina Sódica, transferir a
un tubo de centrífuga, agregar 2 perlas de vidrio,
10,0 ml de Fase móvil y agitar durante 3 minutos.
Centrifugar hasta obtener un líquido sobrenadante
transparente, filtrar si fuera necesario.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre los picos de levo-
tiroxina y liotironina no debe ser menor de 5,0; la
desviación estándar relativa para inyecciones repe-
tidas de liotironina no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
100 µl) de la Preparación estándar y la Prepara-
ción muestra, registrar los cromatogramas y medir
las respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C15H11I3NNaO4 en la porción de Lioti-
ronina Sódica en ensayo.
40 ml y agregar 1 ml de cloruro de bario (SR).
LITIO, CARBONATO DE Preparar una solución estándar de igual volumen
que contenga 1,0 ml de ácido sulfúrico 0,020 N,
Li2CO3 PM: 73,9 554-13-2 1 ml de ácido clorhídrico 3 N y 1 ml de cloruro de
Definición - Carbonato de Litio debe contener bario (SR). La turbidez observada en la solución
no menos de 99,0 por ciento de Li2CO3, calculado muestra, luego de 3 minutos, no debe ser mayor que
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- la producida en la solución estándar (0,1 %).
guientes especificaciones.
Hierro y aluminio
Caracteres generales - Polvo granular blanco, Disolver 500 mg de Carbonato de Litio en 10 ml
inodoro. Moderadamente soluble en agua; muy de agua mediante el agregado de ácido clorhídrico
poco soluble en alcohol. Se disuelve con eferves- gota a gota y agitar. Calentar a ebullición la solu-
cencia en ácidos minerales diluidos. ción y enfriar. A una porción de 5 ml de esta solu-
ción, agregar hidróxido de amonio 6 N hasta reac-
CONSERVACIÓN
ción alcalina: no se debe desarrollar turbidez o
En envases bien cerrados. precipitado.
ENSAYOS Calcio
Identificación Suspender 5,0 g de Carbonato de Litio en 50 ml
A - Debe producir efervescencia al agregar un de agua y agregar un ligero exceso de ácido clorhí-
ácido, liberando un gas incoloro que cuando se pasa drico 3 N. Calentar a ebullición la solución transpa-
a través de hidróxido de calcio (SR), causa inmedia- rente para eliminar el dióxido de carbono, agregar
tamente la formación de un precipitado blanco. 5 ml de oxalato de amonio (SR), alcalinizar con
B - Cuando se humedece con ácido clorhídrico, hidróxido de amonio 6 N y dejar reposar durante 4
debe proporcionar un color carmesí intenso a una horas. Filtrar a través de un crisol filtrante y lavar
llama no luminosa. con agua caliente hasta que el último lavado no
desarrolle turbidez con cloruro de calcio (SR).
Alcalinidad Colocar el crisol en un vaso de precipitados, cubrir
Una solución saturada debe ser alcalina frente al con agua, agregar 3 ml de ácido sulfúrico, calentar a
tornasol. 70 °C y titular con permanganato de potasio 0,10 N
Sustancias insolubles hasta color rosa pálido que persiste durante
Transferir 10 g de Carbonato de Litio a un vaso 30 segundos. No debe consumirse más de 3,76 ml
de precipitados de 250 ml, agregar 50 ml de agua y de permanganato de potasio 0,10 N (0,15 %).
agregar lentamente 50 ml de ácido clorhídrico 6 N. Sodio
Cubrir con un vidrio de reloj y calentar a ebullición Solución estándar - Transferir 1,271 g de cloru-
durante 1 hora. Filtrar la solución al vacío, a través ro de sodio, previamente secado a 130 °C hasta
de un crisol previamente pesado y seco equipado peso constante, a un matraz aforado de 1 litro.
con un disco filtrante de fibra de vidrio. Lavar el Disolver en agua, completar a volumen con el mis-
filtro con agua caliente hasta que el último lavado mo solvente y mezclar. Esta solución contiene
de negativa la reacción para cloruros con nitrato de 500 µg de Na por ml.
plata (SR). Secar el crisol en una estufa a 110 °C Solución madre de la muestra - Suspender
durante 1 hora: el peso del residuo no debe ser 20,0 g de Carbonato de Litio en 100 ml de agua,
mayor de 0,02 % del peso del Carbonato de Litio en agregar con cuidado 50 ml de ácido clorhídrico,
ensayo. transferir a un matraz aforado de 200 ml, completar
Límite de cloruro y sulfato <560> a volumen con agua y mezclar.
Cloruro - A 500 mg de Carbonato de Litio Solución muestra - Transferir 5,0 ml de Solu-
agregar 1,2 ml de ácido nítrico, diluir con agua a ción madre de la muestra a un matraz aforado de
50 ml y agregar 1 ml de nitrato de plata (SR). Pre- 100 ml, completar a volumen con agua y mezclar.
parar una solución estándar de igual volumen que Solución control - Transferir 5,0 ml de Solución
contenga 1,2 ml de ácido nítrico, 0,50 ml de ácido madre de la muestra y 1,0 ml de Solución estándar
clorhídrico 0,020 N y 1 ml de nitrato de plata (SR). a un matraz aforado de 100 ml, completar a volu-
La turbidez observada en la solución muestra no men con agua y mezclar.
debe ser mayor que la desarrollada en la solución Procedimiento - Ajustar un fotómetro de llama
estándar (0,07 %). para obtener máxima emisión aproximadamente a
Sulfato - Disolver 1,0 g de Carbonato de Litio 589 nm, empleando la Solución control. Medir las
en 10 ml de ácido clorhídrico 3 N, diluir con agua a intensidades de emisión de la Solución muestra a
580 y 589 nm. La diferencia entre las intensidades
observadas a 580 y 589 nm para la Solución mues-
tra no debe exceder la diferencia entre las intensi-
dades observadas a 589 nm para la Solución mues-
tra y la Solución control, respectivamente. El lími-
te de sodio es 0,1 %.
Límite de metales pesados <590>
Disolver 1 g de Carbonato de Litio en 10 ml de
ácido clorhídrico 3 N y diluir con agua a 25 ml: el
límite es 0,002 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 200 °C durante 4 horas: no debe perder
más de 1,0 % de su peso.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 1 g de Carbona-
to de Litio, disolver en 50,0 ml de ácido sulfúrico
1 N (SV), agregar naranja de metilo (SR) y titular el
exceso de ácido con hidróxido de sodio 1 N (SV).
Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver Titulaciones resi-
duales en 780. Volumetría). Cada ml de ácido
sulfúrico 1 N equivale a 36,95 mg de Li2CO3.
LOMUSTINA Límite de cloruros
Solución muestra - Disolver 0,24 g de Lomusti-
na en 4,0 ml de metanol y agregar 20 ml de agua.
NO Dejar en reposo durante 20 minutos y filtrar. A
H 10,0 ml del filtrado obtenido agregar 5,0 ml de
N N
Cl metanol y emplear esta última solución como Solu-
ción muestra.
O
Procedimiento - A los 15 ml de Solución mues-
tra agregar 1,0 ml de ácido nítrico al 12,5 %.
Transferir esta mezcla a un tubo de Nessler que
C9H16ClN3O2 PM: 233,7 13010-47-4 contenga 1,0 ml de nitrato de plata (SR) y proteger
Definición - Lomustina es N-(2-Cloroetil)-N’- de la luz. Proceder del mismo modo con un control
ciclohexil-N-nitrosourea. Debe contener no menos preparado a partir de 5,0 ml de metanol y 10,0 ml
de 98,5 por ciento y no más de 100,5 por ciento de de solución de cloruro (5 ppm) (SL) y examinar los
C9H16ClN3O2, calculado sobre la sustancia seca y tubos lateralmente sobre fondo negro. Luego de
debe cumplir con las siguientes especificaciones. 5 minutos, si la Solución muestra presenta opales-
cencia, esta no debe ser más intensa que la del con-
Caracteres generales - Polvo cristalino amari- trol (500 ppm).
llo. Fácilmente soluble en acetona y cloruro de
metileno; soluble en alcohol; prácticamente insolu- Sustancias relacionadas
ble en agua. ENSAYO I
Fase estacionaria - Emplear una placa para
Sustancia de referencia - Lomustina SR-FA.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
CONSERVACIÓN grafía), recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía, de 0,25 mm de espesor.
En envases inactínicos bien cerrados.
Fase móvil - Tolueno y ácido acético glacial
ENSAYOS (80:20).
[NOTA: realizar todos los ensayos al resguardo Solución muestra A - Disolver 250 mg de Lo-
de la luz y preparar todas las soluciones inmediata- mustina en metanol y diluir a 10 ml con el mismo
mente antes de su uso]. solvente.
Solución muestra B - Diluir 1,0 ml de Solución
Identificación muestra A a 25 ml con metanol.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Solución estándar A - Disolver 10 mg de Lo-
B - Absorción ultravioleta <470>. Disolver mustina SR-FA en metanol y diluir a 10 ml con el
50 mg de Lomustina en alcohol y diluir a 50 ml con mismo solvente.
el mismo solvente. Diluir 2,0 ml de esta solución a Solución estándar B - Diluir 1,0 ml de Solución
100 ml con alcohol. Examinar entre 220 y 350 nm: muestra B a 10 ml con metanol.
esta solución debe presentar un máximo de absor- Solución estándar C - Diluir 1,0 ml de Solución
ción a 230 nm: el coeficiente de extinción específi- muestra B a 20 ml con metanol.
ca E(1 %, 1 cm) a esta longitud de onda debe estar Solución estándar D - Disolver 10 mg de Lo-
comprendido entre 250 y 270. mustina SR-FA y 10 mg de diciclohexilurea en
C - Examinar los cromatogramas obtenidos en metanol y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
Sustancias relacionadas. La mancha principal en el Revelador - Almidón-ioduro de potasio (SR1).
cromatograma obtenido a partir de la Solución Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
muestra B se debe corresponder en valor de Rf , placa 5 µl de las Soluciones muestra A y B y 5 µl de
tamaño, color e intensidad con la obtenida con la las Soluciones estándar A, B, C y D. Dejar secar las
Solución estándar A. aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
Determinación del punto de fusión <260> que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
Entre 89 y 91 °C. damente tres cuartas partes de la longitud de la
placa. Secar la placa a 110 °C durante 1 hora. En
Pérdida por secado <680> el fondo de una cámara, colocar una cápsula de
Secar sobre pentóxido de fosforo a una presión evaporación conteniendo una mezcla de permanga-
que no exceda los 5 mm Hg, durante 24 horas: no nato de potasio al 1,5 %, agua y ácido clorhídrico al
debe perder más de 1,0 % de su peso. 25 % p/v (2:1:1). Cerrar la cámara y dejar en repo-
so durante 15 minutos. Colocar la placa seca en la
cámara y cerrar. Dejar la placa en contacto con
vapores de cloro durante 5 minutos, retirar la placa un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
de la cámara y colocarla en una corriente de aire 780. Volumetría). Cada ml de nitrato de plata 0,1 N
frío hasta eliminar el exceso de cloro. Comprobar equivale a 23,37 mg de C9H16ClN3O2.
que el área de recubrimiento por debajo de los pun-
tos de aplicación no presente color azul frente al
agregado de una gota de Revelador. Pulverizar
sobre la placa con Revelador: a excepción de la
mancha principal en el cromatograma obtenido a
partir de la Solución muestra A, ninguna mancha
debe ser más intensa que la obtenida con la Solu-
ción estándar B (0,4 %); y solo una de las manchas
secundarias obtenidas a partir de la Solución mues-
tra A, puede ser más intensa que la obtenida con la
Solución estándar C (0,2 %). El ensayo solo es
válido si el cromatograma obtenido a partir de la
Solución estándar D presenta dos manchas comple-
tamente separadas.
ENSAYO II
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 230 nm y una columna de
25 cm 4,0 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 a 10 m de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 2 ml por minuto.
Fase móvil - Metanol y agua (50:50). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver Apti-
tud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución muestra - Disolver 250 mg de Lomus-
tina en metanol y diluir a 10 ml con el mismo sol-
vente.
Solución estándar - Diluir 1,0 ml de Solución
muestra a 100 ml con metanol.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
de 20 l) de la Solución estándar y la Solución
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de todos los picos: a excepción del pico
principal en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra, la suma de las respuestas de
todos los picos no debe ser mayor a la respuesta del
pico principal obtenido con la Solución estándar
(1 %). Ignorar cualquier pico debido al solvente y
cualquier pico con una respuesta menor a 0,05 ve-
ces la respuesta del pico principal obtenido con la
Solución estándar.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Lo-
mustina, disolver en 3 ml de alcohol y agregar
20 ml de hidróxido de potasio al 20 % p/v. Calentar
a ebullición, en un condensador a reflujo, durante
2 horas. Agregar 75 ml de agua y 4 ml de ácido
nítrico, enfriar y titular con nitrato de pla-
ta 0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
ciométricamente. Realizar una determinación con
Método II. No más de 0,002 %.
LOPERAMIDA,
Pureza cromatográfica
CLORHIDRATO DE Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
HO de espesor.
N O
Fase móvil - Cloroformo, metanol y ácido
HCl
fórmico (85:10:5).
N(CH3) 2
Solución estándar - Preparar una solución de
Clorhidrato de Loperamida SR-FA en cloroformo
Cl de aproximadamente 10 mg por ml.
Solución muestra - Preparar una solución de
Clorhidrato de Loperamida en cloroformo de
C29H33ClN2O2 . HCl PM: 513,5 34552-83-5 aproximadamente 10 mg por ml.
Definición - Clorhidrato de Loperamida es Procedimiento - Aplicar sobre la placa 10 µl de
Clorhidrato de 4-(p-Clorofenil)-4-hidroxi- la Solución muestra y 10 µl de la Solución están-
N,N-dimetil-α,α-difenil-1-piperidinbutiramida. dar. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no cromatogramas hasta que el frente del solvente haya
más de 102,0 por ciento de C29H33ClN2O2 . HCl, recorrido aproximadamente tres cuartas partes de la
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
con las siguientes especificaciones. marcar el frente del solvente y dejar secar al aire.
Exponer a vapores de iodo y examinar la placa: la
Caracteres generales - Polvo blanco o débil- mancha principal en el cromatograma obtenido a
mente amarillento. Funde aproximadamente a partir de la Solución muestra debe ser similar en
225 °C, con descomposición. Fácilmente soluble valor de Rf, color e intensidad a la obtenida con la
en alcohol isopropílico, cloroformo y metanol; poco Solución estándar y no se deben observar manchas
soluble en agua y en ácidos diluidos. secundarias.
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Lope- Contenido de cloruro
ramida SR-FA. Pesar exactamente alrededor de 13 mg de Clor-
CONSERVACIÓN hidrato de Loperamida y proceder según se indica
en 60. Combustión en erlenmeyer con oxígeno,
En envases bien cerrados. empleando una mezcla de 10 ml de hidróxido de
ENSAYOS sodio 0,02 N y 2 gotas de peróxido de hidrógeno al
30 % como líquido de absorción. Cuando se com-
Identificación
pleta la combustión y se absorbieron los gases de la
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
combustión, enjuagar el tapón, el sujetador de la
B - Absorción ultavioleta <470>.
muestra y las paredes internas del matraz con 50 ml
Pesar exactamente alrededor de 40 mg de Clor-
de alcohol isopropílico. Agregar 4 ml de ácido
hidrato de Loperamida, transferir a un matraz afo-
nítrico 0,1 N y titular con nitrato mercúrico
rado de 100 ml, disolver en aproximadamente 50 ml
0,01 N (SV), empleando difenilcarbazona (SR)
de alcohol isopropílico, agregar 10 ml de ácido
como indicador. Cada ml de nitrato mercúrico
clorhídrico 0,1 N, completar a volumen con alcohol
0,01 N equivale a 0,3545 mg de cloro: debe conte-
isopropílico y mezclar: el espectro de absorción
ner entre 13,52 y 14,20 %.
ultravioleta de esta solución, determinado entre 250
y 300 nm, debe presentar máximos y mínimos a las VALORACIÓN
mismas longitudes de onda que el de una solución
Acido acético neutralizado - Disolver 10 mg de
similar de Clorhidrato de Loperamida SR-FA.
p-naftolbenceína en 100 ml de ácido acético glacial
Pérdida por secado <680> y agregar ácido perclórico 0,1 N (SV) hasta color
Secar al vacío a 80 °C durante 4 horas: no debe verde, sin considerar la cantidad de solución con-
perder más de 0,5 % de su peso. sumida.
Procedimiento - Pesar exactamente alrededor
Determinación del residuo de ignición <270>
de 375 mg de Clorhidrato de Loperamida y disolver
No más de 0,2 %.
en 25 ml de Acido acético neutralizado. Agregar
Límite de metales pesados <590> 10 ml de una solución de acetato mercúrico, prepa-
rada disolviendo 1 g de acetato mercúrico en 33 ml
de Acido acético neutralizado. Titular con ácido
perclórico 0,1 N (SV) hasta restablecer el color
verde original del Acido acético neutralizado.
Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
51,35 mg de C29H33ClN2O2 . HCl.
Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
LORAZEPAM tamente pesada de Lorazepam en cloroformo para
obtener una solución de aproximadamente 2 mg por
H O ml.
N
Solución de identificación - Disolver una canti-
OH dad exactamente pesada de Lorazepam SR-FA en
cloroformo para obtener una solución de aproxima-
Cl N
damente 2 mg por ml.
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
Cl tamente pesada de Impureza A de Loraze-
pam SR-FA en cloroformo para obtener una solu-
ción de aproximadamente 20 µg por ml.
Solución estándar A - Diluir cuantitativamente
C15H10Cl2N2O2 PM: 321,2 846-49-1 una cantidad de Solución estándar con cloroformo
para obtener una solución de aproximadamente
Definición - Lorazepam es (±) 7-Cloro- 10 µg por ml.
5-(2-clorofenil)-1,3-dihidro-3-hidroxi-2H-1,4-ben- Solución estándar B - Diluir cuantitativamente
zodiazepin-2-ona. Debe contener no menos de 98,0 una cantidad de Solución estándar con cloroformo
por ciento y no más de 102,0 por ciento de para obtener una solución de aproximadamente
C15H10Cl2N2O2, calculado sobre la sustancia seca y 4 µg por ml.
debe cumplir con las siguientes especificaciones. Procedimiento - Dentro de los 30 minutos si-
Caracteres generales - Polvo blanco o casi guientes a la preparación de las soluciones, aplicar
blanco. Prácticamente inodoro. Moderadamente por separado sobre la placa 50 µl de la Solución
soluble en alcohol; poco soluble en cloroformo; muestra, 50 µl de la Solución de identificación,
insoluble en agua. 50 µl de la Solución estándar, 50 µl de la Solución
estándar A y 50 µl de la Solución estándar B. De-
Sustancias de referencia - Lorazepam SR-FA.
jar secar las aplicaciones y desarrollar los cromato-
Impureza A de Lorazepam SR-FA: (7-cloro-
gramas hasta que el frente del solvente haya reco-
5-(o-clorofenil-1,3-dihidro-3-acetoxi-2H-1,4-benzo-
rrido aproximadamente tres cuartas partes de la
diazepin-2-ona). Impureza B de Loraze-
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
pam SR-FA: 2-amino-2',5-diclorobenzofenona.
marcar el frente del solvente y dejar secar al aire
CONSERVACIÓN durante aproximadamente 30 minutos. Examinar la
En envases inactínicos de cierre perfecto. placa bajo luz ultravioleta a 254 nm. Comparar las
intensidades de cualquier mancha secundaria obser-
ENSAYOS vada en el cromatograma de la Solución muestra
Identificación con las manchas principales obtenidas en los cro-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. matogramas de la Solución estándar y las Solucio-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en nes estándar A y B: la suma de las intensidades de
el Ensayo A en Sustancias relacionadas. El valor todas las manchas secundarias en el cromatograma
de Rf de la mancha principal en el cromatograma obtenido a partir de la Solución muestra no debe ser
obtenido a partir de la Solución muestra se debe mayor de 1,0 %.
corresponder con el obtenido con la Solución de ENSAYO B
identificación. Fase estacionaria y Fase móvil - Proceder
según se indica en Ensayo A.
Sustancias relacionadas Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
ENSAYO A de 50,0 mg de Lorazepam, transferir a un erlenme-
Fase estacionaria - Emplear una placa para yer de 10 ml, agregar 2,5 ml de acetona y agitar.
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- Dejar sedimentar cualquier partícula que no se haya
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- disuelto y emplear la solución sobrenadante.
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
de espesor, lavada previamente con una mezcla de tamente pesada de Impureza B de Loraze-
cloroformo, acetato de etilo y metanol (2:1:1) y pam SR-FA en acetona para obtener una solución
secada al aire. de aproximadamente 10 µg por ml.
Fase móvil - Cloroformo, dioxano y ácido acé- Revelador 1 - Solución de ácido sulfúrico 2 N.
tico glacial (91:5:4). Revelador 2 - Solución de nitrito de sodio
1 en 1.000.
Revelador 3 - Solución de sulfamato de amonio
1 en 200.
Revelador 4 - Solución de diclorhidrato de
N-(1-naftil)etilendiamina 1 en 1.000.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 50 µl de la Solución muestra y 10 µl de la
Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
del solvente haya recorrido aproximadamente tres
cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
dejar evaporar el solvente. Pulverizar sobre la placa
con Revelador 1, secar a 105 °C durante 15 minutos
y pulverizar sucesivamente con Revelador 2, 3 y 4,
secando la placa con una corriente de aire luego de
cada pulverización. Examinar la placa bajo luz
visible: la mancha obtenida a partir de la Solución
muestra no debe ser mayor en tamaño o intensidad
a la mancha principal obtenida con la Solución
estándar (0,01 % de Impureza B de Lorazepam).
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,002 %.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a 105 °C durante 3 horas: no debe
perder más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,3 %.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 400 mg de Lo-
razepam y disolver en 50 ml de N,N-dimetilfor-
mamida. Titular con hidróxido de tetrabutilamonio
0,1 N (SV) y, tomando precauciones para evitar la
absorción de dióxido de carbono atmosférico, de-
terminar el punto final potenciométricamente, em-
pleando un electrodo de vidrio y un electrodo de
calomel que contenga una solución saturada de
cloruro de potasio en metanol. Realizar una deter-
minación con un blanco y hacer las correcciones
necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
hidróxido de tetrabutilamonio 0,1 N equivale a
32,12 mg de C15H10Cl2N2O2.
LOVASTATINA Sustancias relacionadas
Sistema cromatográfico, Fase móvil, Solución
de aptitud del sistema y Aptitud del sistema - Pro-
H ceder según se indica en Valoración.
O
H3C HO
Solución estándar - Proceder según se indica
H O para Preparación estándar B en Valoración.
H3C O H H H Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
O H H de 20 mg de Lovastatina, transferir a un matraz
CH3 aforado de 50 ml, disolver, completar a volumen
H3C con acetonitrilo y mezclar.
H Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
C24H36O5 PM: 404,5 75330-75-5
10 l) de la Solución estándar y la Solución mues-
Definición - Lovastatina es (S)-2- tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
Metilbutanoato de (4R,6R)-6-[2-[(1S,2S,6R,8S,8aR) puestas de todos los picos. En el cromatograma
-1,2,6,7,8,8a-hexahidro-8-hidroxi-2,6-dimetl-1- obtenido a partir de la Solución muestra, la respues-
naftil]etil]tetrahidro-4-hidroxi-2H-piran-2-ona-8- ta de ningún pico individual debe ser mayor a 0,6
ilo. Debe contener no menos de 97,0 por ciento y veces la respuesta del pico correspondiente a lovas-
no más de 102,0 por ciento de C24H36O5, calculado tatina obtenido con la Solución estándar B (0,3 %);
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- la suma de las respuestas de todos los picos no debe
guientes especificaciones. ser mayor a 2 veces la respuesta del pico corres-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco pondiente a lovastatina obtenido con la Solución
a casi blanco. Fácilmente soluble en cloroformo; estándar B (1 %). Ignorar cualquier pico con una
soluble en acetona, acetonitrilo y metanol; modera- respuesta menor a 0,1 veces la respuesta del pico
damente soluble en alcohol; prácticamente insolu- correspondiente a lovastatina obtenido con la Solu-
ble en hexano; insoluble en agua. ción estándar B (0,05 %).
(1S,7S,8S,8aR)-8-[2-[(2R,4R)-4-
hidroxi-6-oxotetrahidro-2H-piran-
2-il]etil]-7-metil-1,2,3,7,8,8a-
0,8
hexahidronaftalen-1-il (2S)-2-
metilbutanoato (mevastatina)
Simvastatina
1,1
(1S,3R,7S,8S,8aR)-3,7-dimetil-8-
[2-[(2R)-6-oxo-3,6-dihidro-2H-
piran-2-il]etil]-1,2,3,7,8,8a-
hexahidronaftalen-1-il (2S)-2- 1,2
metilbutanoato (dehidrolovastati-
na)
Solución de cloruro de lantano - Transferir
MAGNESIO, 5,86 g de óxido de lantano a un matraz de 1 litro,
CARBONATO DE agregar 40 ml de agua y luego 25 ml de ácido
clorhídrico, gradualmente y con agitación. Agitar
Definición - Carbonato de Magnesio es carbo-
hasta que se disuelva, completar a volumen con
nato básico de magnesio hidratado o carbonato
agua y mezclar.
normal de magnesio hidratado (1:1). Debe contener
Solución blanco - Transferir 4 ml de Solución
el equivalente a no menos de 40,0 por ciento y no
de lantano y 10 ml de Ácido clorhídrico diluido a
más de 43,5 por ciento de Óxido de Magnesio
un matraz aforado de 200 ml, completar a volumen
(MgO) y debe cumplir con las siguientes especifi-
con agua y mezclar.
caciones.
Soluciones estándar - Transferir 279,7 mg de
Caracteres generales - Polvo blanco o masas carbonato de calcio, previamente secado a 300 °C
friables blancas. Liviano, voluminoso, inodoro y durante 3 horas y enfriados en un desecador durante
estable al aire. Soluble en ácidos diluidos, con 2 horas, a un matraz aforado de 100 ml, disolver en
efervescencia; prácticamente insoluble en agua, una porción de ácido clorhídrico, completar a vo-
dando a la misma una ligera reacción alcalina; inso- lumen con agua y mezclar. Transferir 5,0 ml de
luble en alcohol. esta solución a un matraz aforado de 1 litro que
CONSERVACIÓN contenga 20 ml de Solución de cloruro de lantano y
40 ml de Ácido clorhídrico diluido, completar a
En envases bien cerrados. volumen con agua y mezclar. Esta solución contie-
ENSAYOS ne 5,6 µg de Ca por ml.
Solución muestra - Transferir 250 mg de Car-
Identificación bonato de Magnesio a un vaso de precipitados,
Disolver una porción de Carbonato de Magnesio agregar 30 ml de Ácido clorhídrico diluido y agitar
en ácido clorhídrico 3 N. Debe producirse eferves- hasta que se disuelva, calentando si fuera necesario.
cencia y la solución resultante debe responder a los Transferir esta solución a un matraz aforado de
ensayos para Magnesio <410>. 200 ml que contenga 4 ml de Solución de cloruro
Sales solubles de lantano, completar a volumen con agua y mez-
Transferir 2,0 g de Carbonato de Magnesio a un clar.
matraz aforado de 100 ml, disolver y completar a Procedimiento - Determinar las absorbancias de
volumen con una mezcla de alcohol n-propílico y la Solución estándar y la Solución muestra en la
agua (1:1). Calentar a ebullición con agitación línea de emisión del calcio a 422,7 nm, con un
constante, enfriar a temperatura ambiente, comple- espectrofotómetro de absorción atómica (ver 440.
tar a volumen con agua y filtrar. Evaporar 50 ml Espectrofotometría de absorción y emisión atómi-
del filtrado hasta sequedad en un baño de vapor y ca) equipado con una lámpara de calcio de cátodo
secar a 105 °C durante 1 hora: el peso del residuo hueco y una llama de aire-acetileno, emplear la
no debe ser mayor a 10 mg (1,0 %). Solución blanco para llevar a cero la lectura del
instrumento. La absorbancia obtenida a partir de la
Sustancias insolubles en ácido
Solución muestra no debe ser mayor que la obtenida
Transferir 5,0 g de Carbonato de Magnesio con
con la Solución estándar (0,45 %).
75 ml de agua a un erlenmeyer, agregar ácido
clorhídrico en porciones pequeñas, agitando, hasta Límite de metales pesados <590>
completar la disolución y calentar a ebullición du- Método I. Disolver 0,67 g de Carbonato de
rante 5 minutos. Si queda un residuo insoluble, Magnesio en 10 ml de ácido clorhídrico 3 N en un
filtrar, lavar con agua hasta que el último lavado crisol apropiado y evaporar hasta sequedad en un
esté libre de cloruro y someter a ignición: el peso baño de vapor. Someter a ignición a 550 ± 25 °C
del residuo no debe ser mayor a 2,5 mg (0,05 %). durante 2 horas. Disolver el residuo en una mezcla
de 15 ml de agua y 5 ml de ácido clorhídrico y
Límite de arsénico <540>
evaporar hasta sequedad. Hacia el final de la eva-
Método I. Disolver 750 mg de Carbonato de
poración, agitar con frecuencia para desintegrar el
Magnesio en 25 ml de ácido clorhídrico 3 N y em-
residuo y obtener un polvo seco. Disolver el polvo
plear esta solución como Solución muestra. No
obtenido en 20 ml de agua y evaporar hasta seque-
más de 4 ppm.
dad de la misma manera. Disolver nuevamente el
Límite de calcio residuo en 20 ml de agua, filtrar si fuera necesario,
Ácido clorhídrico diluido - Diluir 25 ml de áci- y agregar al filtrado 2 ml de ácido acético 1 N y
do clorhídrico con agua a 250 ml.
agua para obtener 25 ml: no debe contener más de
0,003 %.
Límite de hierro <580>
No debe contener más de 0,02 %.
Solución muestra - Calentar a ebullición 50 mg
de Carbonato de Magnesio con 5 ml de ácido nítri-
co 2 N durante 1 minuto. Enfriar, diluir con agua a
45 ml, agregar 2 ml de ácido clorhídrico y mezclar.
Control higiénico de productos no obligato-
riamente estériles <90>
Debe cumplir con el ensayo para ausencia de
Escherichia coli.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 1,00 g de Car-
bonato de Magnesio, disolver en 30,0 ml de ácido
sulfúrico 1 N (SV), agregar naranja de metilo (SR)
y titular el exceso de ácido con hidróxido de sodio
1 N (SV). Del volumen de ácido sulfúrico 1 N
consumido, deducir el volumen de ácido sulfúrico
1 N correspondiente al contenido de calcio en la
porción de Carbonato de Magnesio en ensayo. La
diferencia es el volumen de ácido sulfúrico 1 N
equivalente al Óxido de Magnesio presente. Cada
ml de ácido sulfúrico 1 N (SV) equivale a 20,2 mg
de MgO y a 20,0 mg de Ca.
ver, agregar 4 ml de Solución de lantano, completar
MAGNESIO, CLORURO DE a volumen con agua y mezclar.
Procedimiento - Proceder según se indica en
MgCl2 . 6H2O PM: 203,3 7791-18-6
Límite de calcio en Carbonato de magnesio. Calcu-
Anhidro PM: 95,2 7786-30-31 lar el porcentaje de calcio en el Cloruro de Magne-
sio en ensayo por la fórmula siguiente:
Definición - Cloruro de Magnesio es Cloruro
de magnesio hexahidrato. Debe contener no menos 0,002C
de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de en la cual C es la concentración en µg por ml de
MgCl2 . 6H2O y debe cumplir con las siguientes calcio en la Solución muestra: no debe contener
especificaciones. más de 0,01 %.
Caracteres generales - Cristales o escamas in- Potasio
coloras e inodoras; delicuescente. Pierden agua Disolver 5 g de Cloruro de Magnesio en 5 ml de
cuando se calientan a 100 °C y pierden ácido agua y agregar 0,2 ml de bitartrato de sodio (SR):
clorhídrico cuando se calientan a 110 °C. Muy no se debe producir turbidez dentro de los
soluble en agua; fácilmente soluble en alcohol. 5 minutos.
CONSERVACIÓN Determinación de aluminio <140>
En envases de cierre perfecto. Cuando en el rótulo se indica que Cloruro de
Magnesio está destinado para ser empleado en
ENSAYOS
hemodiálisis, proceder según se indica empleando
Identificación 2,0 g de Cloruro de Magnesio para preparar la Solu-
Una solución de Cloruro de Magnesio 1 en 20 ción muestra. El límite es 0,001 %.
debe responder a los ensayos para Magnesio <410>
y Cloruro <410>. Límite de metales pesados <590>
Disolver 2 g de Cloruro de Magnesio en agua
Determinación del pH <250> para obtener 25 ml. El límite es 0,001 %.
Entre 4,5 y 7,0, determinado sobre una solución
1 en 20, en agua libre de dióxido de carbono. Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
Materia insoluble
Pesar exactamente alrededor de 20 g de Cloruro VALORACIÓN
de Magnesio, disolver en 200 ml de agua, calentar a Pesar exactamente alrededor de 450 mg de Clo-
ebullición y digerir en un vaso de precipitados tapa- ruro de Magnesio, disolver en 25 ml de agua, agre-
do en un baño de vapor durante 1 hora. Filtrar a gar 5 ml de solución reguladora de amoníaco-
través de un crisol filtrante, previamente pesado, cloruro de amonio (SR) y 0,1 ml de negro de erio-
lavar completamente y secar a 115 °C: el peso del cromo (SR) y titular con edetato disódico
residuo no debe ser mayor de 1 mg (0,005 %). 0,05 M (SV) hasta punto final color azul. Cada ml
de edetato disódico 0,05 M equivale a 10,17 mg de
Límite de cloruro y sulfato <560>
MgCl2 . 6H2O.
Sulfato - Una porción de 10 g de Cloruro de
Magnesio no debe contener más sulfato que el co- ROTULADO
rrespondiente a 0,50 ml de ácido sulfúrico 0,020 N Indicar en el rótulo cuando Cloruro de Magnesio
(0,005 %). esté destinado para ser empleado en hemodiálisis.
Bario
Disolver 1 g de Cloruro de Magnesio en 10 ml
de agua y agregar 1 ml de ácido sulfúrico 2 N: no se
debe producir turbidez dentro de las 2 horas.
Límite de calcio
Ácido clorhídrico diluido, Solución de lantano,
Soluciones estándar y Solución blanco - Proceder
según se indica en Límite de calcio en Carbonato
de magnesio.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 10,0 g de Cloruro de Magnesio, transferir a un
matraz aforado de 200 ml, agregar agua para disol-
más de 0,05 ml de ácido clorhídrico 0,1 N o hidróxido
MAGNESIO, ESTEARATO DE de sodio 0,1 N para virar el color del indicador.
557-04-0
Límite de plomo <600>
Definición - Estearato de Magnesio es la sal de Transferir 0,50 g de Estearato de Magnesio a un
magnesio del ácido octadecanoico, es una mezcla de crisol de sílice y someter a ignición a una temperatura
sales magnésicas de ácidos orgánicos sólidos y consiste comprendida entre 475 y 500 C durante 15 a
principalmente en proporciones variables de estearato 20 minutos. Enfriar, agregar 3 gotas de ácido nítrico,
de magnesio y palmitato de magnesio. Los ácidos evaporar sobre una llama pequeña hasta sequedad y
grasos se obtienen a partir de fuentes comestibles. someter a ignición entre 475 a 500 C durante
Estearato de Magnesio debe contener el equivalente a 30 minutos. Disolver el residuo obtenido en 1 ml de
no menos de 4,0 por ciento y no más de 5,0 por ciento una mezcla de volúmenes iguales de ácido nítrico y
de Mg, calculado sobre la sustancia seca y debe cum- agua, transferir la solución a una ampolla de decanta-
plir con las siguientes especificaciones. ción, lavar el crisol con varias porciones de agua, y
Caracteres generales - Polvo blanco muy fino, li- recolectar los líquidos de lavado en la ampolla de de-
viano, untuoso al tacto. Insoluble en agua, alcohol y cantación. Agregar 3 ml de Solución de citrato de
éter. amonio y 0,5 ml de Solución de clorhidrato de
hidroxilamina y alcalinizar con hidróxido de amonio
Sustancias de Referencia - Ácido Palmítico frente al rojo de fenol (SR). Agregar 10 ml de Solu-
SR-FA. Ácido Esteárico SR-FA. ción de cianuro de potasio. Extraer de inmediato la
CONSERVACIÓN solución con porciones sucesivas de 5 ml de Solución
de ditizona para extracciones. Juntar los extractos en
En envases de cierre perfecto.
otra ampolla de decantación y continuar las extraccio-
ENSAYOS nes hasta que en la porción agregada de la solución de
Identificación ditizona no se observe cambio de coloración. Agitar los
A - Mezclar 5 g de Estearato de Magnesio con extractos combinados con 20 ml de ácido nítrico 0,2 N
50 ml de éter libre de peróxidos, 20 ml de ácido nítrico durante 30 segundos y descartar la fase clorofórmica.
diluido y 20 ml de agua en un balón. Conectar el balón Agregar a la solución ácida, 4,0 ml de la Solución de
a un refrigerante y calentar a reflujo hasta disolver amoníaco-cianuro y 2 gotas de una Solución de clor-
completamente. Dejar enfriar y transferir el contenido hidrato de hidroxilamina. Agregar 10 ml de Solución
del balón a una ampolla de decantación. Agitar, dejar de ditizona estándar y agitar la mezcla durante
separar las fases y transferir la fase acuosa a otra ampo- 30 segundos. Filtrar la fase clorofórmica a través de un
lla de decantación. Extraer la fase etérea con dos por- papel de filtro lavado con ácido, y colocar en un tubo
ciones de 4 ml de agua y agregar estos extractos acuo- de Nessler. Comparar el color obtenido con el de una
sos al extracto acuoso principal. Lavar los extractos solución estándar preparada del siguiente modo: a
acuosos con 15 ml de éter libre de peróxidos, transferir 20 ml de ácido nítrico 0,2 N, agregar 5 g de plomo,
los extractos acuosos a un matraz aforado de 50 ml, 4 ml de Solución de amoníaco-cianuro y 2 gotas de
diluir con agua a volumen y mezclar. [NOTA: conser- Solución de clorhidrato de hidroxilamina; agitar con
var esta solución para Límite de cloruro y sulfato]. 10 ml de Solución de ditizona estándar durante
Esta solución debe responder a los ensayos para Mag- 30 segundos. Filtrar a través de un papel de filtro
nesio <410>. lavado con ácido en un tubo de Nessler. El color obte-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en nido a partir de la solución muestra no debe ser más
Contenido relativo de ácido esteárico y ácido palmíti- intenso que el del control (10 ppm).
co. Los tiempos de retención de los picos de ácido Límite de cloruro y sulfato <560>
esteárico y ácido palmítico en el cromatograma obteni- Cloruro - Una porción de 10,0 ml de la solución
do a partir de la Solución muestra se deben correspon- obtenida en el ensayo de Identificación A no debe
der con los de la Solución de aptitud del sistema. contener más cloruro que el correspondiente a 1,4 ml
Acidez o alcalinidad de ácido clorhídrico 0,020 N (1.000 ppm).
Transferir 1,0 g de Estearato de Magnesio a un va- Sulfato - Una porción de 3,0 ml de la solución ob-
so de precipitado de 100 ml, agregar 20 ml de agua tenida en el ensayo de Identificación A, no debe conte-
libre de dióxido de carbono, calentar a ebullición en un ner más sulfato que el correspondiente a 1,5 ml de
baño de vapor durante 1 minuto con agitación conti- ácido sulfúrico 0,020 N (5.000 ppm).
nua, enfriar y filtrar. Agregar 0,05 ml de azul de bro- Contenido relativo de ácido esteárico y ácido
motimol (SR) a 10 ml del filtrado: no debe consumir palmítico
Sistema cromatográfico - Emplear un cromatógra- picos de todos los ésteres de los ácidos grasos en el
fo de gases equipado con un detector de ionización a la cromatograma obtenido. Calcular la cantidad de ácido
llama, mantenido a aproximadamente 260 C, un siste- esteárico en la porción de ácidos grasos de Estearato
ma de inyección no dividido y una columna capilar de de Magnesio en relación a la suma de las respuestas de
sílice fundida con fase estacionaria constituida por un todos los picos de los ésteres de ácidos grasos. Calcu-
compuesto de polietilenglicol de alto peso molecular lar la cantidad de ácido palmítico en la porción de Es-
químicamente unida con un ligando diepóxido (de tearato de Magnesio en ensayo. La respuesta del pico
p.m.p. aproximadamente 15.000) de 5 m. Mantener de estearato no debe ser menor de 40 % y la suma de
la temperatura del inyector a 220 C. Mantener la las respuestas de los picos de estearato y de palmitato
columna a una temperatura de 70 C durante 2 minutos no debe ser menor de 90 % de la respuesta total de
después de la inyección y aumentarla a razón de 5 C todos los picos de ésteres de ácidos grasos en el cro-
por minuto hasta 240 C, y mantenerla durante matograma obtenido con la Solución muestra.
5 minutos. Emplear helio como gas transportador con Impurezas orgánicas volátiles <520>
una velocidad lineal de aproximadamente 50 cm por Método II.
segundo.
Pérdida por secado <680>
Solución de aptitud del sistema - Transferir
aproximadamente 50 mg de Ácido Esteárico SR-FA y Secar a 105 C hasta peso constante: no debe per-
50 mg de Ácido Palmítico SR-FA a un erlenmeyer der más de 6,0 % de su peso.
conectado a un refrigerante. Agregar 5 ml de una Control higiénico de productos no obligatoria-
solución preparada disolviendo 14 g de trifluoruro de mente estériles <90>
boro en metanol y diluyendo a 100 ml, mezclar y calen- El recuento de aerobios viables totales no debe ser
tar a reflujo hasta disolver durante aproximadamente mayor 103 por gramo, el recuento de hongos y levadu-
10 minutos. Agregar 4 ml de n-heptano para cromato- ras no debe ser mayor de 50 por gramo y debe cumplir
grafía a través del refrigerante, calentar a reflujo duran- con los requisitos del Ensayo para Salmonella spp. y
te 10 minutos y enfriar. Agregar 20 ml de solución Escherichia coli.
saturada de cloruro de sodio, agitar y dejar separar las
VALORACIÓN
fases. Filtrar la fase de n-heptano a través de una capa
de 0,1 g de sulfato de sodio anhidro previamente lava- Solución reguladora de cloruro de amonio de pH
do con n-heptano para cromatografía, transferir 1,0 ml 10 - Disolver 5,4 g de cloruro de amonio en agua,
del filtrado a un matraz aforado de 10 ml, completar a agregar 20 ml de hidróxido de amonio y diluir con agua
volumen con n-heptano para cromatografía y mezclar. a 100 ml.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de Procedimiento - Pesar exactamente alrededor de
100 mg de Estearato de Magnesio, transferir a un er- 500 mg de Estearato de Magnesio, transferir a un er-
lenmeyer conectado a un refrigerante y proceder según lenmeyer de 250 ml, agregar 50 ml de una mezcla de
se indica en Solución de aptitud del sistema, comen- alcohol butílico y alcohol absoluto (1:1), 5 ml de
zando donde dice “...Agregar 5,0 ml de una solución hidróxido de amonio, 3 ml de Solución reguladora de
preparada disolviendo...”. cloruro de amonio de pH 10; 30,0 ml de edetato di-
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - sódico 0,1 M (SV), 1 ó 2 gotas de negro de eriocromo
Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y (SR) y mezclar. Calentar entre 45 y 50 C hasta que la
registrar las respuestas de los picos según se indica en solución sea transparente. Enfriar y titular el exceso de
Procedimiento: los tiempos de retención relativos de- edetato disódico con sulfato de cinc 0,1 M (SV) hasta
ben ser aproximadamente 0,86 para palmitato de metilo que el color azul de la solución se torne violeta. Reali-
y 1,0 para estearato de metilo. La resolución R entre zar una determinación con un blanco y hacer las co-
los picos de palmitato de metilo y estearato de metilo rrecciones necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml
no debe ser menor de 5,0. La desviación estándar de edetato disódico 0,1 M equivale a 2,43 mg de Mg.
relativa para inyecciones repetidas de las respuestas de
los picos de palmitato y de los picos de estearato no
debe ser mayor de 6,0 %. La desviación estándar rela-
tiva para inyecciones repetidas del cociente de las res-
puestas de los picos de palmitato y de los picos de
estearato no debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
aproximadamente 1 l de la Solución muestra regis-
trar el cromatograma y medir las respuestas de los
Procedimiento - Proceder según se indica en el
MAGNESIO, HIDRÓXIDO DE ensayo Límite de Calcio en Carbonato de magne-
sio: el límite es 1,5 %.
Mg(OH)2 PM: 58,3 1309-42-8
Límite de metales pesados <590>
Definición - Hidróxido de Magnesio secado a
Método I. Pesar exactamente alrededor de 1,0 g
105 °C durante 2 horas, debe contener no menos de
de Hidróxido de Magnesio, disolver en 15 ml de
95,0 por ciento y no más de 100,5 por ciento de
ácido clorhídrico 3 N y evaporar la solución hasta
Mg(OH)2 y debe cumplir con las siguientes especi-
sequedad en un baño de vapor. Hacia el final de la
ficaciones.
evaporación, agitar el residuo con frecuencia, desin-
Caracteres generales - Polvo blanco. Soluble tegrándolo hasta obtener un polvo seco, disolver el
en ácidos diluidos; prácticamente insoluble en agua residuo en 20 ml de agua y filtrar. Al filtrado que
y alcohol. debe ser neutro frente al papel de tornasol, agregar
2 ml de ácido acético 1 N y diluir a 25 ml con agua.
CONSERVACIÓN El límite es 20 µg por g.
En envases de cierre perfecto. Límite de plomo <600>
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
ENSAYOS dedor de 1 g de Hidróxido de Magnesio y disolver
Identificación en 20 ml de ácido clorhídrico 3 N.
Una solución de Hidróxido de Magnesio 1 en 20 Solución estándar de plomo - Emplear 10 ml de
en ácido clorhídrico 3 N debe responder a los ensa- Solución estándar de plomo (10 ppm).
yos para Magnesio <410>. El límite es 0,001 %.
Sales solubles Pérdida por calcinación <670>
Pesar exactamente alrededor de 2,0 g de Someter a ignición a 800 °C, aumentando el ca-
Hidróxido de Magnesio, calentar a ebullición con lor gradualmente, hasta llegar a peso constante:
100 ml de agua durante 5 minutos en un vaso de debe perder entre 30,0 y 33,0 % de su peso.
precipitados cubierto, filtrar en caliente, enfriar y Pérdida por secado <680>
diluir el filtrado a 100 ml con agua. Titular 50 ml Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
del filtrado diluido con ácido sulfúrico 0,10 N, más de 2,0 % de su peso.
emplear rojo de metilo (SR) como indicador: no
deben consumirse más de 2,0 ml de ácido sulfúrico Control higiénico de productos no obligato-
0,10 N. Evaporar hasta sequedad 25 ml del filtrado riamente estériles <90>
diluido y secar a 105 °C durante 3 horas: no debe Cumple con los requisitos del ensayo para au-
contener más de 10 mg de residuo. sencia de Escherichia coli.
Carbonato VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 100 mg de
Hidróxido de Magnesio, agregar 5 ml y calentar a Pesar exactamente alrededor de 75 mg de
ebullición, enfriar y agregar 5 ml de ácido acético Hidróxido de Magnesio previamente secado y trans-
6 N: se debe observar una ligera efervescencia. ferir a un erlenmeyer. Agregar 2,0 ml de ácido
clorhídrico 3 N y agitar por rotación hasta disolu-
Límite de calcio ción. Agregar 100 ml de agua, ajustar a pH 7 con
Ácido clorhídrico diluido, Solución de lantano, hidróxido de sodio 1 N (emplear papel indicador de
Soluciones estándar y Solución blanco - Proceder pH, ver Papeles y papeles indicadores en Reactivos
según se indica en el ensayo Límite de calcio en y soluciones), agregar 5 ml de solución reguladora
Carbonato de magnesio. de amoníaco - cloruro de amonio (SR) y 0,15 ml de
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor negro de eriocromo (SR) y titular con edetato di-
de 250 mg de Hidróxido de Magnesio previamente sódico 0,05 M (SV) hasta punto final color azul.
secados, transferir a un vaso de precipitados, agre- Realizar una determinación con un blanco y hacer
gar 30 ml de Ácido clorhídrico diluido y agitar las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
hasta disolver, calentar si fuera necesario. Transfe- Cada ml de edetato disódico 0,05 M equivale a
rir la solución obtenida a un matraz aforado de 2,916 mg de Mg(OH)2.
200 ml que contenga 4 ml de Solución de lantano,
completar a volumen con agua y mezclar.
[NOTA: preparar esta solución en el día de su em-
MAGNESIO, SULFATO DE peo.]
Reactivo colorimétrico - Transferir 380 mg de
MgSO4 . xH2O sal disódica del ácido 3-(2-piridil)-5,6-di(2-furil)-
1,2,4-triazina-5',5''-disulfónico a un matraz aforado
Monohidrato PM: 138,4
de 100 ml, disolver en Solución de acetato de amo-
Heptahidrato PM: 246,5 10034-99-8 nio, agitando mecánicamente si fuera necesario,
Anhidro PM: 120,4 7487-88-9 completar a volumen con Solución de acetato de
amonio y mezclar. Emplear esta solución en el día
Definición - Sulfato de Magnesio, transforma- de su preparación.
do en anhidro mediante ignición, debe contener no Solución madre del estándar - Transferir 5,0 ml
menos de 99,0 por ciento y no más de 100,5 por de Solución estándar de hierro (ver 580. Límite de
ciento de MgSO4 y debe cumplir con las siguientes hierro) a un matraz aforado de 50 ml, completar a
especificaciones. volumen con ácido clorhídrico en agua 1 en 1.000 y
Caracteres generales - Cristales incoloros pe- mezclar. Esta solución contiene 1,0 µg de hierro
queños, generalmente en forma de aguja. Es eflo- por ml.
rescente al aire tibio y seco. Muy soluble en agua a Soluciones estándar - A tres matraces aforados
ebullición; fácilmente soluble en agua y glicerina; de 50 ml, transferir 2,0; 5,0 y 10,0 ml de la Solución
moderadamente soluble en alcohol. madre del estándar y diluir a 35 ml con ácido
clorhídrico en agua 1 en 1.000. Estas soluciones
CONSERVACIÓN contienen 2,0; 5,0 y 10,0 µg de hierro, respectiva-
En envases bien cerrados. mente.
Solución muestra – Pesar exactamente alrede-
ENSAYOS dor de 10,0 g de Sulfato de Magnesio, transferir a
Identificación un matraz aforado de 50 ml, diluir a 35 ml con
Una solución de Sulfato de Magnesio 1 en 20 Ácido clorhídrico diluido y sonicar, si fuera necesa-
debe responder a los ensayos para Magnesio <410> rio, hasta disolver completamente.
y para Sulfato <410>. Blanco - Transferir 35 ml de Ácido clorhídrico
diluido a un matraz aforado de 50 ml.
Determinación del pH <250> Procedimiento - A cada uno de los matraces
Entre 5,0 y 9,2, determinado sobre una solución que contiene las Soluciones estándar, la Solución
1 en 20. muestra y el Blanco, agregar 5 ml de Solución de
Límite de cloruro y sulfato <560> ácido ascórbico y 5 ml de Reactivo colorimétrico.
Cloruro - Una porción de 1,0 g de Sulfato de Completar a volumen cada solución con Acido
Magnesio no debe contener más cloruro que el clorhídrico en agua 1 en 1.000, mezclar y dejar
correspondiente a 0,20 ml de ácido clorhídrico reposar durante 10 minutos. Determinar las absor-
0,020 N (0,014 %). bancias de las Soluciones estándar y la Solución
muestra, a la longitud de onda de máxima absor-
Límite de Hierro ción, aproximadamente 594 nm, con un espectro-
Para el sulfato de magnesio destinado a la pre- fotómetro, contra el Blanco. Graficar la absorban-
paración de formas farmacéuticas no parenterales. cia de las Soluciones estándar en función de su
Disolver 0,50 g de Sulfato de Magnesio en contenido de hierro en µg por matraz y calcular la
40 ml de agua y proceder según se indica en ecuación de la recta que mejor ajuste. A partir de la
580. Límite de Hierro. El límite es 20 µg por g. ecuación obtenida, determinar el contenido de hie-
Para el sulfato de magnesio destinado a la pre- rro C en µg por matraz de la Solución muestra.
paración de formas farmacéuticas parenterales. Calcular el contenido en ppm de hierro en la por-
[NOTA :enjuagar el material de vidrio emplea- ción de Sulfato de Magnesio en ensayo multipli-
do en este ensayo con ácido clorhídrico en agua cando el contenido de hierro C por 0,1. El límite es
1 en 1.000.] 0,5 µg por g.
Solución de acetato de amonio – Transferir
250 g de acetato de amonio a un matraz aforado de Límite de metales pesados <590>
500 ml, disolver, completar a volumen con agua y Disolver 2 g de Sulfato de Magnesio en 25 ml
mezclar. de agua: el límite es 0,001 %.
Solución de ácido ascórbico – Transferir 1,34 g Límite de selenio <610>
de ácido ascórbico a un matraz aforado de 100 ml,
disolver, completar a volumen con agua y mezclar.
Disolver 200 mg de Sulfato de Magnesio en
50 ml de ácido nítrico 0,25 N para obtener la Solu-
ción muestra. El límite es 0,003 %.
Pérdida por calcinación <670>
Pesar exactamente alrededor de 1 g de Sulfato
de Magnesio en un crisol, calentar a 105 °C durante
2 horas, luego someter a ignición a 450 ± 25 °C
hasta peso constante: el monohidrato debe perder
entre 13,0 y 16,0 %; la forma anhidra entre 22,0 y
28,0 % y la heptahidratada entre 40,0 % y 52,0 %.
Perdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: la forma an-
hidra no debe perder más de 2 % de su peso.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg del Sul-
fato de Magnesio obtenidos según se indica en
Pérdida por calcinación, disolver en 100 ml de
agua y la mínima cantidad de ácido clorhídrico 3 N
requerida para obtener una solución límpida. Ajus-
tar el pH de la solución a 7 con hidróxido de sodio
1 N, empleando papel indicador de pH (ver Papeles
y Papeles indicadores en Reactivos y Soluciones),
agregar 5 ml de solución reguladora de amonía-
co-cloruro de amonio (SR) y 0,15 ml de negro de
eriocromo (SR). Titular con edetato disódico
0,05 M (SV) hasta punto final color azul, realizar
una determinación con un blanco y hacer las co-
rrecciones necesarias (ver 780. Volumetría). Cada
ml de edetato disódico 0,05 M equivale a 6,018 mg
de MgSO4.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si se trata de la forma an-
hidra, monohidrato o heptahidrato. Indicar en el
rótulo si es Sulfato de Magnesio destinado a la
preparación de formas farmacéuticas parenterales o
no parenterales.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
MANITOL placa 2 l de la Solución muestra y 2 l de la Solu-
ción estándar A y B. Dejar secar las aplicaciones y
HO H H OH desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
HO del solvente haya recorrido aproximadamente tres
OH cuartas partes de la longitud de la placa. Dejar
H OH HO H secar la placa al aire, pulverizar sobre la placa con
Revelador 1 y dejar secar en una corriente de aire
frío hasta eliminar la acetona. Calentar la placa a
C6H14O6 PM: 182,2 69-65-8 100 ºC durante 15 minutos, dejar enfriar y pulveri-
Definición - Manitol es D-Manitol. Debe con- zar sobre la placa con Revelador 2. Secar la placa
tener no menos de 98,0 por ciento de C6H14O6 cal- en una corriente de aire frío y calentar a 100 ºC
culado sobre la sustancia seca y debe cumplir con durante 15 minutos: en el cromatograma obtenido a
las siguientes especificaciones. partir de la Solución muestra, la mancha principal
debe ser similar en color, tamaño y valor de Rf a la
Caracteres generales - Gránulos o polvo cris-
obtenida con la Solución estándar A. El ensayo
talino blanco o casi blanco. Fácilmente soluble en
sólo es válido si el cromatograma obtenido a partir
agua; muy poco soluble en alcohol.
de la Solución estándar B presenta dos manchas
Presenta polimorfismo.
completamente separadas.
Sustancia de referencia - Manitol SR-FA. C - A 5 gotas de una solución saturada de
CONSERVACIÓN 200 mg de Manitol por ml, agregar 1 ml de cloruro
férrico (SR) y 5 gotas de una solución de hidróxido
En envases bien cerrados. de sodio al 20 %: debe formarse un precipitado
ENSAYOS amarillo. Agitar la solución vigorosamente: debe
formarse una solución clara. No debe formarse
Identificación precipitado por la posterior adición de solución de
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. hidróxido de sodio al 20 %.
[NOTA: si los espectros obtenidos presentan dife-
rencias, disolver por separado la sustancia en ensa- Aspecto de la solución
yo y la Sustancia de referencia en agua, evaporar Disolver 2,0 g de Manitol en 10 ml de agua ca-
hasta sequedad y registrar nuevamente los espectros liente: la solución debe ser clara e incolora.
sobre los residuos]. Determinación del punto de fusión <260>
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Entre 165 y 170 °C.
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- Determinación de la rotación óptica <170>
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Rotación específica: Entre 137º y 145º, calcu-
grafía, de 0,25 mm de espesor. lada sobre la sustancia anhidra.
Fase móvil - Propanol, acetato de etilo y agua Solución muestra: Transferir 1,0 g de Manitol
(70:20:10). previamente secado a un matraz aforado de 100 ml
Solución estándar A - Disolver 25 mg de Mani- y disolver con 80 ml de una solución de molibdato
tol SR-FA en agua y diluir a 10 ml con el mismo de amonio 1 en 20. Completar a volumen con una
solvente. solución de ácido sulfúrico 1 en 35 y agitar.
Solución estándar B - Disolver 25 mg de Mani- Conductividad <70>
tol SR-FA y 25 mg de Sorbitol en agua y diluir a Disolver 20,0 g de Manitol en agua libre de di-
10 ml con el mismo solvente. óxido de carbono y diluir a 100 ml con el mismo
Solución muestra - Disolver 25 mg de Manitol solvente. Determinar la conductividad de la solu-
en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente. ción agitando suavemente con un agitador magnéti-
Revelador 1 - Disolver 1 g de ácido co: no debe ser mayor de 20 S.cm-1.
p-aminobenzoico en una mezcla de 18 ml de ácido
acético glacial, 20 ml de agua y 1 ml de ácido fosfó- Azúcares reductores
rico. Inmediatamente antes de su empleo, mezclar A 5,0 ml de citrato cúprico alcalino (SR), agre-
2 volúmenes de esta solución con 3 volúmenes de gar 1 ml de solución de 200 mg de Manitol por ml y
acetona. calentar a ebullición en un baño de agua durante
Revelador 2 - Preparar una solución de 2 mg de 5 minutos: no debe formarse más que un ligero
periodato de sodio por ml. precipitado.
Niquel
Disolver 0,5 g de Manitol en 5 ml de agua,
agregar 3 gotas de solución de dimetilglioxina al
1 % en alcohol y 3 gotas de amoníaco (SR). Dejar
reposar durante 5 minutos: no debe formarse colo-
ración roja.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder
más de 0,3 % de su peso.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
Cuando en el rótulo se indica que Manitol esté
destinado a la preparación de formas farmacéuticas
parenterales debe contener menos de 2,5 Unidades
de Endotoxinas por gramo.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Ma-
nitol, previamente secado y transferir a un matraz
aforado de 100 ml. Disolver y completar a volumen
con agua. Transferir 10 ml de esta solución a un
recipiente apropiado y agregar 50 ml de una solu-
ción preparada disolviendo 2,8 g de periodato de
potasio en 200 ml de agua. Agregar gota a gota
20 ml de ácido sulfúrico concentrado para disolver
y completar a 1 litro con agua. Calentar durante
15 minutos en un baño de agua, enfriar y agregar
2,5 g de ioduro de potasio. Tapar y agitar. Dejar en
reposo protegiendo de la luz durante 5 minutos.
Titular el iodo liberado con tiosulfato de sodio
0,1 N (SV) agregando 1 ml de almidón (SR) como
indicador. Realizar una determinación con un blan-
co y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
volumetría). Cada ml de tiosulfato de sodio 0,1 N
equivale a 1,8217 mg de C6H14O6.
ROTULADO
Indicar en el rótulo cuando Manitol esté desti-
nado a la preparación de formas farmacéuticas
parenterales.
Fase móvil - Cloroformo, metanol y ácido fórmi-
MEBENDAZOL co al 96 % (90:5:5).
Diluyente - Cloroformo y ácido fórmico al 96 %
O (9:1).
H
N
Solución estándar - Pesar exactamente alrededor
H de 50 mg de Mebendazol SR-FA, transferir a un ma-
N
traz aforado de 10 ml y disolver en 1,0 ml de ácido
N OCH3
fórmico al 96 %. Completar a volumen con clorofor-
O
mo y mezclar para obtener una solución con una con-
centración de aproximadamente 5 mg por ml.
C16H13N3O3 PM: 295,3 31431-39-7 Solución estándar diluida - Transferir 1,0 ml de la
Definición - Mebendazol es el Éster metílico del Solución estándar a un matraz aforado de 200 ml,
ácido (5-benzoil-1H-benzimidazol-2-il)-carbámico. completar a volumen con Diluyente y mezclar.
Debe contener no menos de 98,0 por ciento y no más Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 101,0 por ciento de C16H13N3O3, calculado sobre la de 50 mg de Mebendazol, transferir a un matraz afo-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes espe- rado de 10 ml y disolver en 1,0 ml de ácido fórmico al
cificaciones. 96 %. Completar a volumen con cloroformo y mez-
clar.
Caracteres generales - Polvo blanco o débilmen- Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
te amarillo. Funde aproximadamente a 290 C. placa 10 µl de la Solución muestra, 10 µl de la Solu-
Fácilmente soluble en ácido fórmico; prácticamente ción estándar y 10 µl de la Solución estándar diluida.
insoluble en agua, en soluciones diluidas de ácidos Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los croma-
minerales, alcohol, éter, cloruro de metileno y cloro- togramas hasta que el frente del solvente haya recorri-
formo. do aproximadamente tres cuartas partes de la longitud
Presenta polimorfismo. de la placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el
Sustancia de referencia - Mebendazol SR-FA. frente del solvente y dejar que el solvente se evapore.
Examinar la placa bajo luz ultravioleta a 254 nm: el
CONSERVACIÓN valor de Rf de la mancha principal en el cromatograma
En envases inactínicos bien cerrados. obtenido a partir de la Solución muestra debe ser
similar al obtenido con la Solución estándar y, a ex-
ENSAYOS cepción de la mancha principal en el cromatograma
Identificación obtenido a partir de la Solución muestra, ninguna
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. mancha debe ser mayor en tamaño e intensidad a la
[NOTA: si los espectros obtenidos presentan diferen- obtenida con la Solución estándar diluida (0,5 %).
cias, disolver por separado la muestra y la Sustancia Límite de metales pesados <590>
de referencia en alcohol absoluto, evaporar hasta Método II. No más de 0,002 %.
sequedad y repetir el ensayo sobre los residuos].
B - Disolver 30,0 mg de Mebendazol en 2 ml de Determinación del residuo de ignición <270>
ácido fórmico anhidro y diluir a 100 ml con alcohol No más de 0,1 %.
isopropílico. Transferir 2,5 ml de esta solución a un Pérdida por secado <680>
matraz aforado de 100 ml y completar a volumen con Secar a 105 C durante 4 horas: no debe perder
alcohol isopropílico. Examinar entre 230 y 320 nm más de 0,5 % de su peso.
(ver 470. Espectrofometría ultravioleta y visible),
empleando una solución de ácido fórmico anhidro al VALORACIÓN
0,05 % v/v en alcohol isopropílico como blanco: esta Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Me-
solución debe presentar dos máximos a 247 y312 nm bendazol, disolver en 3 ml de ácido fórmico anhidro y
cuyos coeficientes de extinción específica agregar 40 ml de ácido acético glacial. Titular con
E(1 %, 1 cm) deben estar comprendidos entre 940 y ácido perclórico 0,1 N (SV), determinando el punto
1.040 y entre 485 y 535, respectivamente. final potenciométricamente. Realizar una determina-
Pureza cromatográfica ción con un blanco y hacer las correcciones necesarias
Fase estacionaria - Emplear una placa para cro- (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
matografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) 0,1 N equivale a 29,53 mg de C16H13N3O3.
recubierta con gel de sílice para cromatografía con
indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de espesor.
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
MEDROXIPROGESTERONA, tamente pesada de Acetato de Medroxiprogestero-
ACETATO DE na SR-FA en Fase móvil y diluir cuantitativamente
y en etapas, si fuera necesario, con Fase móvil para
O CH3 obtener una solución de aproximadamente 50 µg
CH3
por ml.
O CH3
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
O
de 62,5 mg de Acetato de Medroxiprogesterona,
CH3 H
transferir a un matraz aforado de 25 ml, disolver en
H H Fase móvil, completar a volumen con el mismo
solvente y mezclar.
O Solución de aptitud del sistema - Disolver can-
H CH3 tidades apropiadas de Acetato de Megestrol y Ace-
tato de Medroxiprogesterona SR-FA en Fase móvil
C24H34O4 PM: 386,5 71-58-9 para obtener una solución de aproximadamente
40 µg por ml de cada uno.
Definición - Acetato de Medroxiprogesterona Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
es 17-Acetoxi-6-metilpregn-4-eno-3,20-diona. Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no registrar las respuestas de los picos según de indica
más de 103,0 por ciento de C24H34O4, calculado en Procedimiento: la resolución R entre los picos de
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- acetato de megestrol y acetato de medroxiprogeste-
guientes especificaciones. rona no debe ser mayor de 1,5. Cromatografiar la
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Solución estándar y registrar las respuestas de los
o casi blanco. Estable al aire. Fácilmente soluble picos según se indica en Procedimiento: la desvia-
en cloroformo; soluble en acetona y dioxano; mode- ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
radamente soluble en etanol y metanol; poco solu- debe ser mayor de 3 %.
ble en éter; insoluble en agua. Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Sustancia de referencia - Acetato de Medroxi- 20 µl) de la Solución muestra y la Solución están-
progesterona SR-FA. dar, registrar los cromatogramas y medir las res-
CONSERVACIÓN puestas de todos los picos. Calcular el porcentaje
de cada impureza en la porción de Acetato de Me-
En envases inactínicos de cierre perfecto. droxiprogesterona en ensayo, en relación a la res-
ENSAYOS puesta del pico principal obtenido en la Solución
estándar. No debe contener más de 1,0 % de cual-
Identificación
quier impureza individual y no más de 1,5 % de
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
impurezas totales.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: alcohol. Pérdida por secado <680>
Concentración: 10 µg por ml. Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder
Las absortividades a 241 nm, calculadas más de 1,0 % de su peso.
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
2,0 %. VALORACIÓN
VALORACIÓN
[NOTA: para evitar el sobrecalentamiento en el
medio de reacción, homogeneizar completamente y
detener la valoración inmediatamente después de
haber alcanzado el punto final].
Pesar exactamente alrededor de 60 mg de Clor-
hidrato de Metformina y disolver en 4 ml de ácido
fórmico anhidro. Agregar 50 ml de anhídrido acéti-
co y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), deter-
minando el punto final potenciométricamente.
Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
8,28 mg de C4H11N5 . HCl.
METILCELULOSA <PDG> Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 1,5 %, determinado a 600 50 ºC.
9004-67-5
Pérdida por secado <680>
Definición - Metilcelulosa es el Éter metílico de Secar a 105 ºC durante 1 hora: no debe perder
la celulosa. Debe contener no menos de 26,0 por más de 5,0 % de su peso.
ciento y no más de 33,0 por ciento de grupos me-
toxilos (-OCH3), calculado sobre la sustancia seca y VALORACIÓN
debe cumplir con las siguientes especificaciones. Sistema cromatográfico, Recipiente de reacción,
Estufa y Solución de estándar interno - Proceder
Caracteres generales - Polvo o gránulos blan-
según se indica en Valoración en Hidroxipropilme-
cos, blanco-amarillentos o blanco-grisáceos.
tilcelulosa.
Higroscópico luego de secado. Prácticamente inso-
Preparación estándar - Transferir entre 60 y
luble en acetona, agua caliente, alcohol, éter y tolue-
100 mg de ácido adípico, 2,0 ml de Solución del
no. Se disuelve en agua fría dando soluciones coloi-
estándar interno y 2,0 ml de ácido iodhídrico al
dales.
57 % a un Recipiente de reacción, tapar, sellar y
CONSERVACIÓN pesar exactamente. Agregar 45 µl de ioduro de
En envases bien cerrados. metilo a través del septo con una jeringa y volver a
pesar exactamente. Agitar el Recipiente de reacción
ENSAYOS y emplear la fase superior como Preparación están-
Identificación dar.
A - Debe cumplir con el ensayo de Identifica- Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
ción A en Hidroxipropilmetilcelulosa. dedor de 65 mg de Metilcelulosa, transferir a un
B - Debe cumplir con el ensayo de Identifica- Recipiente de reacción, agregar entre 60 y 100 mg
ción B en Hidroxipropilmetilcelulosa. de ácido adípico, 2,0 ml de Solución del estándar
C - A 0,2 ml de la solución obtenida en Identifi- interno y 2,0 ml de ácido iodhídrico al 57 %, tapar
cación B, agregar 9 ml de ácido sulfúrico diluido inmediatamente, sellar y pesar exactamente. Mez-
(9 en 10), agitar y calentar a baño de agua durante clar el contenido del Recipiente de reacción calen-
exactamente 3 minutos. Inmediatamente enfriar en tando en la Estufa a 130 2 ºC durante 60 minutos.
un baño de hielo, agregar cuidadosamente 0,6 ml de [NOTA: si no se emplea agitación mecánica o
una solución preparada disolviendo 2 g de ninhidrina magnética, agitar bien el Recipiente de reacción a
en 1 litro de una mezcla de butanol y ácido acético intervalos de 5 minutos durante los primeros 30
diluido (95:5). Agitar y dejar reposar a 25 ºC: se minutos del calentamiento]. Dejar enfriar y pesar
debe desarrollar inmediatamente un color rojo que nuevamente. Si la pérdida de peso es menor a
no cambia a púrpura durante los siguientes 0,50 % del contenido, emplear la fase superior como
100 minutos. Preparación muestra.
D - Debe cumplir con el ensayo de Identifica- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
ción D en Hidroxipropilmetilcelulosa. Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
E - Debe cumplir con el ensayo de Identifica- las respuestas de los picos según se indica en Proce-
ción E en Hidroxipropilmetilcelulosa. dimiento: ajustar la velocidad de flujo del gas trans-
portador de manera que el tiempo de retención del
Determinación de la viscosidad <190> estándar interno sea aproximadamente 10 minutos.
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa- El ensayo solo es válido si los picos de ioduro de
ya según se indica en 190. Determinación de la metilo y del estándar interno se resuelven completa-
viscosidad en Hidroxipropilmetilcelulosa, excepto mente y si el tiempo de retención para ioduro de
que el baño de agua debe equilibrarse a una tempe- metilo es menor al tiempo de retención para el
ratura por debajo de 5 ºC. estándar interno.
Determinación del pH <250> Procedimiento - Inyectar por separado en el
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa- cromatógrafo volúmenes iguales (entre 1 y 2 µl) de
ya según se indica en 250. Determinación del pH, en la Preparación estándar y la Preparación muestra,
Hidroxipropilmetilcelulosa. registrar los cromatogramas y medir las respuestas
de los picos principales. Calcular el porcentaje de
Límite de metales pesados <590>
grupos metoxilos en la porción de Metilcelulosa en
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
ensayo por la fórmula siguiente:
ya según se indica en 590. Límite de metales pesa-
dos en Hidroxipropilmetilcelulosa.
RM PE
21,864
RE PM
N VALORACIÓN
S
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Me-
timazol, disolver en 75 ml de agua. Agregar desde
NH una bureta 15 ml de hidróxido de sodio 0,1 N (SV),
mezclar y agregar, con agitación, aproximadamente
30 ml de nitrato de plata 0,1 N. Agregar 1 ml de
C4H6N2S PM: 114,2 60-56-0
azul de bromotimol (SR) y continuar la titulación
Sinonimia - Tiamazol. con hidróxido de sodio 0,1 N (SV) hasta que se
Definición - Metimazol es 1,3-Dihidro-1- produzca un color permanente verde azulado. Rea-
metil-2H-imidazol-2-tiona. Debe contener no me- lizar una determinación con un blanco y hacer las
nos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
de C4H6N2S, calculado sobre la sustancia seca y Cada ml de hidróxido de sodio 0,1 N equivale a
debe cumplir con las siguientes especificaciones. 11,42 mg de C4H6N2S.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Una solución de Metimazol 1 en 200 debe
producir un precipitado blanco con cloruro mercúri-
co (SR), pero no debe producir un precipitado con
trinitrofenol (SR). La solución se debe colorear
intensamente de azul con fosfotungstato de molib-
deno (SR).
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 143 y 146 °C.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de selenio <610>
No más de 0,003 %, empleando una muestra de
200 mg.
Impurezas comunes <510>
Solución muestra y Solución estándar: emplear
acetato de etilo como solvente.
Fase móvil: tolueno, alcohol isopropílico e
hidróxido de amonio (70:29:1), en una cámara no
saturada.
Fase móvil - Butanol, ácido acético glacial y
METIONINA DL agua (60:20:20).
Solución estándar A - Transferir 20 mg de Me-
O tionina DL SR-FA a un matraz aforado de 50 ml,
S disolver y completar a volumen con agua.
H3C OH Solución estándar B - Diluir 1,0 ml de Solución
H NH2 estándar A con agua a 10 ml.
Solución muestra A - Transferir 200 mg de Me-
tionina DL a un matraz aforado de 10 ml, disolver y
C5H11NO2S PM: 149,2 59-51-8 completar a volumen con agua.
Definición - Metionina DL es ( ) Ácido- Solución muestra B - Diluir 1,0 ml de Solución
2-amino-4-(metiltio)butírico. Debe contener no muestra A con agua a 50 ml.
menos de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por Revelador - Preparar una solución de aproxi-
ciento de C5H11NO2S, calculado sobre la sustancia madamente 2 mg de ninhidrina por ml en una mez-
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- cla de butanol y ácido acético 2 N (95:5).
ciones. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 5 l de las Soluciones muestra A y B y 5 l de
Caracteres generales - Polvo cristalino casi
las Soluciones estándar A y B. Dejar secar las apli-
blanco o pequeñas escamas. Funde aproximada-
caciones y desarrollar los cromatogramas hasta que
mente a 270 °C. Se disuelve en ácidos diluidos y en
el frente del solvente haya recorrido aproximada-
soluciones diluidas de hidróxidos alcalinos. Mode-
mente tres cuartas partes de la longitud de la placa.
radamente soluble en agua; muy poco soluble en
Dejar secar y pulverizar sobre la placa con Revela-
alcohol; prácticamente insoluble en éter.
dor. Calentar la placa entre 100 y 105 °C durante
Sustancia de referencia - Metioni- 15 minutos: a excepción de la mancha principal en
na DL SR-FA. el cromatograma obtenido a partir de la Solución
CONSERVACIÓN muestra A, ninguna mancha debe ser mayor en
tamaño o intensidad a la mancha principal obtenida
En envases inactínicos bien cerrados. con la Solución estándar B (0,2 %).
ENSAYOS Límite de cloruro
Identificación Solución muestra - Disolver 250 mg de Metio-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. nina DL en 35 ml de agua. Agregar 5 ml de ácido
[NOTA: secar la sustancia a 105 °C.] nítrico al 12,5 % y 10 ml de nitrato de plata (SR).
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en Dejar en reposo, protegido de la luz, durante
Sustancias relacionadas. La mancha principal en el 5 minutos y filtrar.
cromatograma obtenido a partir de la Solución Solución de comparación - Preparar al mismo
muestra B se debe corresponder en valor de Rf, tiempo y del mismo modo según se indica en Solu-
tamaño e intensidad a la mancha principal obtenida ción muestra pero empleando 10 ml de solución de
con la Solución estándar A. cloruro (5 ppm) (SL) y 25 ml de agua.
Procedimiento - Examinar la Solución muestra
Determinación de la rotación óptica <170> y la Solución de comparación en sendos tubos de
Rotación específica: Entre 0,05° y 0,05°. Nessler frente a un fondo negro: la opalescencia de
Solución muestra: Disolver 2,50 g de Metioni- la Solución muestra no debe ser más intensa que la
na DL en ácido clorhídrico 1 N y diluir a 50,0 ml obtenida con la Solución de comparación
con el mismo solvente. (200 ppm).
Determinación del pH <250> Límite de sulfato
Entre 5,4 y 6,1, determinado sobre una solución Solución muestra - Disolver 1,0 g de Metionina
de 1,0 g de Metionina DL en 50 ml de agua libre de DL en 20 ml de agua destilada. Calentar a 60°C,
dióxido de carbono. enfriar a 10°C y filtrar.
Sustancias relacionadas Procedimiento - A 1,5 ml de solución de sulfato
Fase estacionaria - Emplear una placa para (10 ppm) (SL1), agregar 1,0 ml de solución de
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- cloruro de bario al 25 %. Agitar y dejar reposar
grafía) recubierta con gel de sílice para cromatogra- durante 1 minuto. Agregar 15 ml de Solución
fia, que contenga aproximadamente 13 % de sulfato muestra y 0,5 ml de ácido acético. Proceder del
de calcio hemihidratado, de 0,25 mm de espesor. mismo modo con 15 ml de solución de sulfato
(10 ppm) (SL) para obtener un control. Luego de
15 minutos, si la Solución muestra presenta opales-
cencia, esta no debe ser más intensa que la obtenida
a partir del control (200 ppm).
Límite de metales pesados <590>
Método VII. Preparar la Solución estándar a
partir de 2 ml de Solución estándar de plomo
(10 ppm). No más de 0,002 %.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Pérdida por secado <680>
Secar 1,0 g de Metionina DL entre 100 y
105 °C: no debe perder más de 0,5 % de su peso.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 140 mg de Me-
tionina DL, disolver en 3 ml de ácido fórmico an-
hidro y agregar 30 ml de ácido acético glacial.
Inmediatamente después de obtenida la disolución
completa, valorar con ácido perclórico 0,1 N en
metanol (SV) y determinar el punto final poten-
ciométricamente. Realizar una determinación con
un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
0,1 N equivale a 14,92 mg de C5H11NO2S.
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
METOCLOPRAMIDA, de espesor.
CLORHIDRATO DE Fase móvil - Cloroformo, metanol, tolueno e
hidróxido de amonio (140:60:20:1).
Solución estándar - Disolver una porción de
Clorhidrato de Metoclopramida SR-FA en metanol
y mezclar para obtener una solución de aproxima-
damente 1 mg por ml. Diluir cuantitativamente con
metanol para obtener tres Soluciones estándar, con
las siguientes concentraciones:
%
Solución Concentración
C14H22ClN3O2 . HCl . H2O PM: 354,3 54143-57-6 Dilución con respecto a
estándar (µg por ml)
la muestra
Definición - Clorhidrato de Metoclopramida es
A 1 en 4 250 0,5
Monoclorhidrato de 4-amino-5-cloro-N-[2-(dietil-
B 3 en 20 150 0,3
amino)etil]-o-anisamida, monohidrato. Debe con-
C 1 en 20 50 0,1
tener no menos de 98,0 por ciento y no más de
101,0 por ciento de C14H22ClN3O2 . HCl, calculado Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las tamente pesada de Clorhidrato de Metoclopramida
siguientes especificaciones. en metanol para obtener una solución de aproxima-
damente 50 mg por ml.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
Solución de identificación - Diluir una porción
o casi blanco. Muy soluble en agua; fácilmente
de la Solución muestra cuantitativamente con meta-
soluble en alcohol; poco soluble en cloroformo;
nol para obtener una solución de aproximadamente
prácticamente insoluble en éter.
500 µg por ml.
Presenta polimorfismo.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Me- placa 10 µl de la Solución muestra, 10 µl de la
toclopramida SR-FA. Solución de identificación y 10 µl de las Soluciones
CONSERVARCIÓN estándar A, B y C. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
En envases inactínicos de cierre perfecto. del solvente haya recorrido aproximadamente tres
ENSAYOS cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
Identificación placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. dejar evaporar. Examinar la placa bajo luz ultravio-
B - Disolver 50 mg de Clorhidrato de Metoclo- leta a 254 nm y comparar las intensidades de cual-
pramida en 5 ml de agua y agregar 5 ml de una quier mancha secundaria en el cromatograma obte-
solución 1 en 100 de p-dimetilaminobenzaldehído nido a partir de la Solución muestra con las man-
en ácido clorhídrico 1 N: se debe producir un color chas principales obtenidas con las Soluciones
entre anaranjado y amarillo. estándar C. [NOTA: no se deben considerar las
C - Examinar los cromatogramas obtenidos en manchas observadas en el origen de los cromato-
Pureza cromatográfica. El valor de Rf de la man- grama]. Ninguna mancha secundaria en el croma-
cha principal en el cromatograma obtenido a partir tograma obtenido a partir de la Solución muestra
de la Solución de identificación se debe correspon- debe ser mayor en tamaño o intensidad que la obte-
der con el obtenido con la Solución estándar A. nida con la Solución estándar A (0,5 %) y la suma
de las intensidades de todas las manchas secunda-
Determinación de agua <120> rias obtenidas a partir de la Solución muestra no
Titulación volumétrica directa. Entre 4,5 y debe ser mayor de 1,0 %.
6,0 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Determinación del residuo de ignición <270> Método I.
No más de 0,1 %. VALORACIÓN
Pureza cromatográfica Pesar exactamente alrededor de 300 mg de
Fase estacionaria - Emplear una placa para Clorhidrato de Metoclopramida, transferir a un
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- erlenmeyer de 125 ml con tapón, agregar 10 ml de
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- acetato mercúrico (SR), 2 ml de anhídrido acético y
dejar reposar durante 3 horas. Agregar 80 ml de
ácido acético glacial y titular con ácido perclórico
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
ciométricamente. Realizar una determinación con
un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
0,1 N equivale a 33,63 mg de C14H22ClN3O2 . HCl.
Solución muestra: 10 mg por ml, en carbonato
METOTREXATO de sodio 0,05 M, empleando un tubo polarimétrico
de 2 dm.
H2N N N
CH3 Determinación de agua <120>
N N
O
Titulación volumétrica directa. No más de
N
H OH 12,0 %.
NH2 N
OH
Determinación del residuo de ignición <270>
H
O No más de 0,1 %.
O
Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico, Solución reguladora de
C20H22N8O5 PM: 454,4 59-05-2 pH 6,0, Fase móvil, Solución de aptitud del sistema
y Aptitud del sistema - Proceder según se indica en
Definición - Metotrexato es Ácido N-[4-[[(2,4-
Valoración.
diamino-6-pteridinil)metil]metilamino]benzoil]-L-
Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
glutámico. Es una mezcla de ácido 4-amino-10-
tamente pesada de Metotrexato SR-FA en Fase
metilfólico y compuestos estrechamente relaciona-
móvil para obtener una solución de aproximada-
dos. Debe contener no menos de 98,0 por ciento y
mente 5 µg por ml.
no más de 102,0 por ciento de C20H22N8O5, calcula-
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
do sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las
de 100 mg de Metotrexato, transferir a un matraz
siguientes especificaciones.
aforado de 100 ml, disolver en Fase móvil, con la
Caracteres generales - Polvo cristalino marrón ayuda de sonicación o agitación si fuera necesario,
anaranjado o amarillo. Fácilmente soluble en solu- completar a volumen con el mismo solvente y mez-
ciones diluidas de hidróxidos alcalinos y carbona- clar.
tos; poco soluble en ácido clorhídrico 6 N; prácti- Procedimiento - Inyectar por separado en el
camente insoluble en agua, alcohol, cloroformo y cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
éter. 10 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
Sustancia de referencia - Metotrexato SR-FA. tra y dejar que la Solución muestra eluya por lo
menos tres veces el tiempo de retención de meto-
Precaución - Evitar la inhalación y la exposi- trexato. Registrar los cromatogramas y medir las
ción a la piel de partículas de Metotrexato. respuestas de los picos. A excepción del pico prin-
CONSERVACIÓN cipal, la suma de todos los picos en el cromatogra-
ma obtenido a partir de la Solución muestra no debe
En envases inactínicos de cierre perfecto. ser mayor que cuatro veces la respuesta del pico
ENSAYOS principal en la Solución estándar (2,0 %); ningún
pico en el cromatograma obtenido con la Solución
Identificación
muestra debe ser mayor que el pico principal en la
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
Solución estándar (0,5 %).
[NOTA: no secar las muestras.]
B - Absorción ultravioleta <470>. Pesar exac- Impurezas orgánicas volátiles <520>
tamente alrededor de 10 mg de Metotrexato, trans- Método III.
ferir a un matraz aforado de 100 ml, disolver con Solvente: dimetilsulfóxido.
hidróxido de sodio 0,1 N, completar a volumen y VALORACIÓN
mezclar. Diluir 10 ml de esta solución a 100 ml con
hidróxido de sodio 0,1 N. El espectro de absorción Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
ultravioleta, determinado entre 230 y 380 nm, debe para cromatografía de líquidos con un detector
presentar máximos a 258, 302 y 371 nm y la rela- ultravioleta ajustado a 302 nm y una columna de
ción de absorbancia para el máximo a 302 nm con 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
respecto al máximo a 371 nm debe estar compren- por octadecilsilano químicamente unido a partículas
dida entre 2,8 y 3,3. porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minu-
Determinación de la rotación óptica <170> to.
Rotación específica: Entre +19° y +24°; calcu- Solución reguladora de pH 6,0 - Preparar una
lado sobre la sustancia anhidra. mezcla de fosfato dibásico de sodio 0,2 M y ácido
cítrico 0,1 M (63:37). Ajustar, si fuera necesario, a
pH 6,0 con ácido cítrico 0,1 M o fosfato dibásico de
sodio 0,2 M.
Fase móvil - Solución reguladora de pH 6,0 y
acetonitrilo (90:10). Filtrar y desgasificar. Hacer
los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Metotrexato SR-FA en Fase
móvil para obtener una solución de aproximada-
mente 100 µg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 25 mg de Metotrexato, transferir a un
matraz aforado de 250 ml, disolver en Fase móvil,
completar a volumen con el mismo solvente y mez-
clar.
Solución de aptitud del sistema - Disolver can-
tidades apropiadas de Metotrexato SR-FA y Ácido
Fólico en Fase móvil para obtener una solución de
aproximadamente 0,1 mg por ml de cada una.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: los tiempos de retención relati-
vos deben ser aproximadamente 0,35 para ácido
fólico y 1,0 para metotrexato; la resolución R entre
los picos de ácido fólico y metotrexato no debe ser
menor de 8,0; la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,5 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación muestra y la Preparación
estándar, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C20H22N8O5 en la porción de Meto-
trexato en ensayo.
Solución estándar - Preparar una solución de
METRONIDAZOL Metronidazol SR-FA en acetona con una concentra-
ción de aproximadamente 3,0 mg por ml.
OH Solución estándar diluida - Diluir la Solución
estándar cuantitativamente y en etapas con acetona
N
O2N CH3 para obtener una solución con una concentración de
aproximadamente 30 µg por ml.
N Solución muestra - Disolver 100 mg de Metro-
nidazol en 10,0 ml de acetona.
Revelador 1- Tricloruro de titanio al 20 %.
C6H9N3O3 PM: 171,2 443-48-1
Revelador 2 - Solución de sal de fast blue B al
Definición - Metronidazol es 2-Metil- 1 %.
5-nitroimidazol-1-etanol. Debe contener no menos Revelador 3 - Emplear una mezcla de alcohol,
de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de agua e hidróxido de amonio (50:30:20).
C6H9N3O3, calculado sobre la sustancia seca y debe Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
cumplir con las siguientes especificaciones. placa 20 µl de la Solución muestra, 20 µl de la
Solución estándar y 20 µl de la Solución estándar
Caracteres generales - Cristales blancos a
diluida. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
amarillo pálido, o polvo cristalino. Estable al aire,
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
se oscurece por exposición a la luz. Moderadamen-
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
te soluble en agua y alcohol; poco soluble en éter y
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cloroformo.
cámara, marcar el frente del solvente y dejar que el
Sustancia de referencia - Metronida- solvente se evapore. Pulverizar sobre la placa con
zol SR-FA. Revelador 1, calentar a 110 °C hasta que el color
CONSERVACIÓN gris azulado empiece a desaparecer y enfriar la
placa. Pulverizar sobre la placa con Revelador 2.
En envases inactínicos bien cerrados. [Precaución - Emplear la solución de sal de fast
ENSAYOS blue B bajo campana, evitando la inhalación de los
vapores y el contacto con la piel]. Dejar reposar
Identificación durante 3 minutos y pulverizar sobre la placa con
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Revelador 3: el valor de Rf de la mancha principal
B - Absorción ultravioleta <470> en el cromatograma obtenido a partir de la Solución
Solvente: ácido sulfúrico en metanol muestra se debe corresponder con el obtenido con
(1 en 350). la Solución estándar y a excepción de la mancha
Concentración: 20 µg por ml. principal, ninguna mancha en el cromatograma
Determinación del punto de fusión <260> obtenido a partir de la Solución muestra debe ser
Entre 159 y 163 °C. mayor en tamaño o intensidad que la mancha prin-
cipal obtenida con la Solución estándar diluida
Determinación del residuo de ignición <270> (0,03 %).
No más de 0,1 %.
Pérdida por secado <680>
Límite de metales pesados <590> Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
Método II. No más de 0,005 %. más de 0,5 % de su peso.
Sustancias no básicas VALORACIÓN
Una porción de 1,0 g de Metronidazol se debe
disolver completamente en 10 ml de ácido clorhí- Pesar exactamente alrededor de 100 mg de Me-
drico diluido (1 en 2). tronidazol y disolver en 20 ml de anhídrido acético,
calentando levemente para favorecer la disolución.
Pureza cromatográfica Enfriar, agregar 1 gota de verde de malaquita (SR)
Fase estacionaria - Emplear una placa para y titular con ácido perclórico 0,1 N (SV) desde una
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- bureta de 10 ml hasta punto final verde amarillento.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Realizar una determinación con un blanco y hacer
grafía, de 0,25 mm de espesor. las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Fase móvil - Cloroformo, alcohol absoluto, di- Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
etilamina y agua (80:10:10:1). 17,12 mg de C6H9N3O3.
METRONIDAZOL, Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
BENZOATO DE cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
NO2 de espesor. Calentar la placa a 110 ºC durante
O 1 hora y dejar enfriar antes de usar.
N Fase móvil - Acetato de etilo.
O Solución muestra A - Pesar exactamente alrede-
N CH3 dor de 200 mg de Benzoato de Metronidazol, disol-
ver en acetona y diluir a 10 ml con el mismo sol-
vente.
C13H13N3O4 PM: 275,3
Solución muestra B - Diluir 1 ml de la Solución
Definición - Benzoato de Metronidazol es Ben- muestra A a 10 ml con acetona.
zoato de 2-(2-metil-5-nitro-1H-imidazol-1-il)etilo. Solución estándar A - Pesar exactamente alre-
Debe contener no menos de 98,5 por ciento y no dedor de 20 mg de Benzoato de Metronida-
más de 101,0 por ciento de C13H13N3O4, calculado zol SR-FA, disolver en acetona y diluir a 10 ml con
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- el mismo solvente.
guientes especificaciones. Solución estándar B - Diluir 5 ml de la Solu-
Caracteres generales - Polvo o copos cristali- ción muestra B a 100 ml con acetona.
nos, blancos o ligeramente amarillentos. Fácilmen- Solución estándar C - Diluir 2 ml de la Solu-
te soluble en cloruro de metileno; soluble en aceto- ción muestra B a 100 ml con acetona.
na; poco soluble en alcohol; muy poco soluble en Solución estándar D - Pesar exactamente alre-
éter; prácticamente insoluble en agua. dedor de 10 mg de Metronidazol SR-FA, disolver
Presenta polimorfismo. en acetona y diluir a 100 ml con el mismo solvente.
Solución estándar E - Disolver 10 mg de
Sustancias de referencia - Metronida- 2-metil-5-nitroimidazol en acetona y diluir a 100 ml
zol SR-FA. Benzoato de Metronidazol SR-FA. con el mismo solvente.
CONSERVACIÓN Solución estándar F - Pesar exactamente alre-
dedor de 10 mg de Metronidazol SR-FA y 10 mg de
En envases inactínicos bien cerrados. 2-metil-5-nitroimidazol, disolver en acetona y diluir
ENSAYOS a 50 ml con el mismo solvente.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Identificación
placa 10 µl de las Soluciones muestras A y B, 10 µl
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
de las Soluciones estándar A, B, C, D, E y F. Dejar
B - Absorción ultravioleta <470>.
secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogra-
Solvente: ácido clorhídrico 2,8 N.
mas hasta que el frente del solvente haya recorrido
Concentración: 0,01 mg por ml.
aproximadamente tres cuartas partes de la longitud
Examinar entre 220 y 350. La solución
de la placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el
debe presentar dos máximos de absorción a 232 y
frente del solvente, dejar secar al aire y examinar
275 nm. La absorbancia específica en el máximo
bajo luz ultravioleta a 254 nm. En el cromatograma
de absorción, 232 nm, debe estar comprendido entre
obtenido a partir de la Solución muestra A: ninguna
525 y 575.
mancha correspondiente a metronidazol o a 2-metil-
Acidez 5-nitroimidazol debe ser más intensa que la mancha
Disolver 2,0 g de Benzoato de Metronidazol en correspondiente en los cromatogramas obtenidos
una mezcla de dimetilformamida y agua (20:20) con las Soluciones estándar D y E (0,5 %); A ex-
previamente neutralizada con ácido clorhídri- cepción de la mancha principal y a cualquier man-
co 0,02 M, empleando 0,2 ml de solución de rojo de cha correspondiente a metronidazol y a 2-metil-
metilo (SR). No deben consumirse más de 0,25 ml 5-nitroimidazol, ninguna debe ser más intensa que
de hidróxido de sodio 0,02 M. la mancha en el cromatograma obtenido con la
Determinación del punto de fusión <260> Solución estándar B (0,5 %) y solo una de ellas
Entre 99 y 102 °C. puede ser más intensa que la mancha en el croma-
tograma obtenido con la Solución estándar C
Determinación del residuo de ignición <270> (0,2 %). El ensayo sólo es válido si el cromatogra-
No más de 0,1 %. ma obtenido con la Solución estándar F presenta
dos manchas principales claramente separadas.
Límite de metales pesados <590>
Método VI. Preparar la Solución estándar em-
pleando 2 ml de Solución estándar de Pb (10 ppm):
no debe contener más de 0,002 %.
Pérdida por secado <680>
Secar a 80 °C durante 3 horas: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Ben-
zoato de Metronidazol, disolver en 50 ml de ácido
acético anhidro. Titular con ácido perclórico
0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
ciométricamente. Realizar una determinación con
un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
0,1 N equivale a 27,53 mg de C13H13N3O4.
Solución estándar - Disolver una cantidad
MICONAZOL apropiada de Miconazol SR-FA en cloroformo para
obtener una solución con una concentración de
N aproximadamente 10,0 mg por ml.
Solución estándar diluida - Diluir la Solución
N estándar cuantitativamente con cloroformo para
obtener una solución con una concentración de
aproximadamente 100 µg por ml.
O
Solución muestra - Disolver 30 mg de Micona-
zol en 3,0 ml de cloroformo.
Cl Cl Cl Cl Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 5 µl de la Solución estándar, 5 µl de la Solu-
C18H14Cl4N2O PM: 416,1 22916-47-8 ción estándar diluida y 5 µl de la Solución muestra.
Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los croma-
Definición - Miconazol es (±)-1-[2-(2,4- togramas hasta que el frente del solvente haya reco-
Diclorofenil)-2-[(2,4-diclorofenil)metoxi]etil]-1H- rrido aproximadamente tres cuartas partes de la
imidazol. Debe contener no menos de 98,0 por longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
ciento y no más de 102,0 por ciento de marcar el frente del solvente y dejar evaporar el
C18H14Cl4N2O, calculado sobre la sustancia seca y solvente. Exponer la placa a vapores de iodo en
debe cumplir con las siguientes especificaciones. una cámara cerrada durante aproximadamente
Caracteres generales - Polvo blanco o casi 30 minutos y localizar las manchas: el valor de Rf
blanco. Funde entre 78 y 82 ºC. Fácilmente solu- de la mancha principal en el cromatograma obteni-
ble en alcohol, metanol, alcohol isopropílico, aceto- do a partir de la Solución muestra se debe corres-
na, propilenglicol, cloroformo y dimetilformamida; ponder con el obtenido con la Solución estándar y
soluble en éter; insoluble en agua. ninguna otra mancha obtenida a partir de la Solu-
Presenta polimorfismo. ción muestra debe ser mayor en tamaño o intensi-
dad que la mancha principal obtenida con la Solu-
Sustancia de referencia - Miconazol SR-FA.
ción estándar diluida (1,0 %).
CONSERVACIÓN
Pérdida por secado <680>
En envases inactínicos bien cerrados. Secar al vacío a 60 °C durante 4 horas: no debe
ENSAYOS perder más de 0,5 % de su peso.
Identificación VALORACIÓN
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Mi-
B - Transferir 40 mg de Miconazol a un matraz conazol, disolver en 40 ml de ácido acético glacial,
aforado de 100 ml, disolver en 50 ml de alcohol agregar 4 gotas de p-naftolbenceína (SR) y titular
isopropílico, agregar 10 ml de ácido clorhídrico con ácido perclórico 0,1 N (SV) hasta punto final
0,1 N, completar a volumen con alcohol isopropíli- verde. Realizar una titulación con un blanco y
co y mezclar: el espectro de absorción ultravioleta hacer las correcciones necesarias (ver 780. Volu-
de esta solución (ver 470. Espectrofotometría ultra- metría). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equiva-
violeta y visible) debe presentar máximos y míni- le a 41,61 mg de C18H14Cl4N2O.
mos a las mismas longitudes de onda que el de una
solución similar de Miconazol SR-FA.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,2 %.
Pureza cromatográfica
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - n-hexano, cloroformo, metanol e
hidróxido de amonio (60:30:10:1) [NOTA: preparar
en el momento de su uso.]
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
MICONAZOL, NITRATO DE ma en 100. Cromatografía).
Solución muestra - Transferir 100 mg de Nitra-
N to de Miconazol a un matraz aforado de 10 ml,
N completar a volumen con Fase móvil y mezclar.
Solución muestra diluida - Diluir un volumen
HNO3
exactamente medido de la Solución muestra cuanti-
O
tativamente y en etapas, si fuera necesario, con
Fase móvil para obtener una solución de aproxima-
Cl Cl Cl Cl
damente 25 µg de Nitrato de Miconazol por ml.
Solución de resolución - Disolver cantidades
C18H14Cl4N2O . HNO3 PM: 479,1 22832-87-7 exactamente pesadas de Nitrato de Micona-
zol SR-FA y Nitrato de Econazol en Fase móvil
Definición - Nitrato de Miconazol es Mononi-
para obtener una solución de aproximadamente
trato de 1-[2-(2,4-diclorofenil)-2-[(2,4-diclorofe-
25 µg por ml de cada uno.
nil)metoxi]etil]-1H-imidazol. Debe contener no
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
ciento de C18H14Cl4N2O . HNO3, calculado sobre la
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
especificaciones.
ben ser aproximadamente 0,5 para econazol y 1,0
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco para miconazol; la resolución R entre los picos de
o casi blanco, de olor débil. Funde entre 178 y econazol y miconazol no debe ser menor de 10; la
183 °C, con descomposición. Fácilmente soluble desviación estándar relativa para inyecciones repe-
en dimetilsulfóxido; soluble en dimetilformamida; tidas no debe ser mayor de 2,0 %.
moderadamente soluble en metanol; poco soluble Procedimiento - Inyectar por separado en el
en alcohol, cloroformo y propilenglicol; muy poco cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
soluble en agua y alcohol isopropílico; insoluble en 10 µl) de la Solución muestra y la Solución muestra
éter. diluida, registrar los cromatogramas durante 1,2
Sustancia de referencia - Nitrato de Micona- veces el tiempo de retención del pico principal y
zol SR-FA. medir las respuestas de todos los picos. A excep-
ción del pico principal en el cromatograma obtenido
CONSERVACIÓN a partir de la Solución muestra, la respuesta de
ningún pico debe ser mayor a la respuesta del pico
En envases inactínicos bien cerrados. principal en el cromatograma obtenido con la Solu-
ENSAYOS ción muestra diluida (0,25 %) y la suma de las
respuestas de todos los picos, a excepción del pico
Identificación principal, no debe ser mayor a dos veces la respues-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. ta del pico principal en el cromatograma obtenido
B - Absorción ultravioleta <470> con la Solución muestra diluida (0,5 %). Descartar
Solvente: ácido clorhídrico 0,1 N en alco- el pico del ión nitrato y cualquier pico con una
hol isopropílico 1 en 10. respuesta menor de 0,2 veces la respuesta del pico
Concentración: 400 µg por ml. principal.
Determinación del residuo de ignición <270> Pérdida por secado <680>
No más de 0,2 %. Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
Sustancias relacionadas más de 0,5 % de su peso.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo VALORACIÓN
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 235 nm y una columna de Pesar exactamente alrededor de 350 mg de Ni-
10 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida trato de Miconazol, disolver en 75 ml de ácido
por octadecilsilano químicamente unido a partículas acético glacial, calentar si fuera necesario y titular
porosas de sílice de 3 µm de diámetro. El caudal con ácido perclórico 0,1 N (SV) determinando el
debe ser aproximadamente 2,0 ml por minuto. punto final potenciométricamente. Realizar una
Fase móvil - Acetato de amonio 0,2 M, metanol determinación con un blanco y hacer las correccio-
y acetonitrilo (38:32:30). Filtrar y desgasificar. nes necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de
ácido perclórico 0,1 N equivale a 47,91 mg de
C18H14Cl4N2O . HNO3.
MIDAZOLAM Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
N cromatografía en capa delgada (ver 100.
H3C Cromatografía), recubierta con gel de sílice para
N cromatografía con indicador de fluorescencia, de
0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Acetato de etilo, metanol, agua y
N ácido acético glacial (80:20:15:2).
Cl Solución muestra A - Disolver 200 mg de
F Midazolam en alcohol y diluir a 5 ml con el mismo
solvente.
Solución muestra B - Diluir 1 ml de Solución
muestra A a 50 ml con alcohol.
Solución estándar A - Diluir 1 ml de Solución
C18H13ClFN3 PM: 325,8 59467-71-8 muestra A a 10 ml con alcohol. Diluir 2 ml de esta
Definición - Midazolam es 8-Cloro-6-(2- solución a 100 ml con alcohol.
fluorofenil)-1-metil-4H-imidazo[1,5-a][1,4] Solución estándar B - Disolver 8 mg de
benzodiazepina. Debe contener no menos de 98,5 Midazolam SR-FA en alcohol y diluir a 10 ml con
por ciento y no más de 101,5 por ciento de el mismo solvente.
C18H13ClFN3, calculado sobre la sustancia seca y Solución estándar C - Disolver 8 mg de
debe cumplir con las siguientes especificaciones. Midazolam SR-FA y 8 mg de
Clordiazepóxido SR-FA en alcohol y diluir a 10 ml
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
con el mismo solvente.
o amarillento. Fácilmente soluble en acetona y
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
alcohol; soluble en metanol; prácticamente
placa 5 µl de las Soluciones muestra A y B y 5 µl de
insoluble en agua.
las Soluciones estándar A, B y C. Dejar secar las
Sustancias de referencia - Midazolam SR-FA. aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
Clordiazepóxido SR-FA. que el frente del solvente haya recorrido
CONSERVACIÓN aproximadamente tres cuartas partes de la longitud
de la placa. Retirar la placa de la cámara, dejar
En envases inactínicos bien cerrados. secar al aire y examinar bajo luz ultravioleta a
ENSAYOS 254 nm: a excepción de la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
Identificación muestra A, ninguna mancha debe ser más intensa
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. que la obtenida con la Solución estándar A (0,2 %).
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en El ensayo solo es válido si el cromatograma
Sustancias relacionadas, bajo luz ultravioleta a obtenido a partir de la Solución estándar C presenta
254 nm. La mancha principal en el cromatograma dos manchas completamente separadas.
obtenido a partir de la Solución muestra B se debe
corresponder en valor de Rf y tamaño a la obtenida Pérdida por secado <680>
con la Solución estándar B. Secar entre 100 y 105 °C durante 2 horas: no
C - Mezclar 90 mg de Midazolam con 0,3 g de debe perder más de 0,5 % de su peso.
carbonato de sodio anhidro y someter a ignición en VALORACIÓN
un crisol hasta obtener un residuo casi blanco
(normalmente en menos de 5 minutos). Dejar Pesar exactamente alrededor de 120 mg de
enfriar, disolver el residuo obtenido en 5,0 ml de Midazolam, disolver en 30 ml de ácido acético
ácido nítrico al 12,5 % p/v y filtrar. A 1,0 ml del glacial y agregar 20 ml de anhídrido acético.
filtrado obtenido agregar 1,0 ml de agua: esta Titular con ácido perclórico 0,1 N (SV),
solución debe cumplir con el ensayo para determinando el punto final potenciométricamente,
Cloruros <410>. titulando hasta el segundo punto de inflexión (ver
780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
Determinación del punto de fusión <260> 0,1 N equivale a 16,29 mg de C18H13ClFN3.
Entre 161 y 164 °C.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %; en un crisol de platino.
Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
MITOMICINA Cuando en el rótulo se indique que Mitomicina
es estéril, no debe contener más de 10,0 Unidades
O
de Endotoxina por mg de Mitomicina.
O
O
H2 N
H NH
2 Ensayos de esterilidad <370>
Cuando en el rótulo se indique que Mitomicina
OCH3
es estéril, debe cumplir con los requisitos según se
H
H3 C N indica en Método de filtración por membrana.
NH
O
H VALORACIÓN
C15H18N4O5 PM: 334,3 50-07-7 Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
Sinonimia - Mitomicina C. ultravioleta ajustado a 365 nm y una columna de
Definición - Mitomicina es [1aS- 30 cm 4,0 mm con fase estacionaria constituida
(1a,8,8a,8b)]-6-Amino-8-[[(aminocarbonil) por grupos fenilo químicamente unidos a partículas
oxi]metil]-1,1a,2,8,8a,8b-hexa-hidro-8a-metoxi-5- porosas de sílice de 5 a 10 m de diámetro. El
metilazirino[2’,3’:3,4]pirrolo[1,2-a]indol-4,7-diona. caudal debe ser aproximadamente 2,0 ml por minu-
Debe contener una potencia no menor de 970 µg de to.
C15H18N4O5 por mg y debe cumplir con las siguien- Fase móvil - Transferir aproximadamente
tes especificaciones. 1,54 g de acetato de amonio a un matraz aforado de
Caracteres generales - Polvo cristalino azul- 1 litro, disolver en 250 ml de metanol, agregar
violaceo. Soluble en acetona, ciclohexanona y 5,0 ml de ácido acético 0,83 N y completar a volu-
metanol; poco soluble en agua. men con agua. Mezclar, filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
Sustancia de referencia - Mitomicina SR-FA. ma en 100. Cromatografía).
Solución de resolución - Disolver cantidades
CONSERVACIÓN apropiadas de Mitomicina SR-FA y 3-etoxi-
En envases inactínicos de cierre perfecto, a 4-hidroxibenzaldehído en N,N-dimetilacetamida,
25 °C. [NOTA: la temperatura de almacenamiento para obtener una solución de aproximadamente 0,5
no debe ser menor de 15 °C ni mayor de 30 °C]. y 7,5 mg por ml, respectivamente.
Preparación estándar - Disolver una porción
ENSAYOS exactamente pesada de Mitomicina SR-FA en
Identificación N,N-dimetilacetamida para obtener una solución de
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. aproximadamente 0,5 mg por ml.
B - Absorción ultravioleta <470> Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Solvente: metanol dedor de 25 mg de Mitomicina y transferir a un
Concentración: 5 µg por ml matraz aforado de 50 ml. Disolver y completar a
La absortividad a 357 nm no debe ser me- volumen con N,N-dimetilacetamida y mezclar.
nor de 95,0 % ni mayor de 105,0 % de la Sustancia Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
de referencia, con respecto a la sustancia anhidra. Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Determinación del pH <250>
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
Entre 6,0 y 7,5; determinado sobre una suspen-
ben ser aproximadamente 1,0 para mitomicina y 1,4
sión acuosa de aproximadamente 5 mg por ml.
para 3-etoxi-4-hidroxibenzaldehído; la resolución R
Determinación de agua <120> entre los picos de mitomicina y 3-etoxi-
Titulación volumétrica directa. No más de 4-hidroxibenzaldehído no debe ser menor de 1,8.
2,5%. Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Cristalinidad cedimiento: el factor de asimetría para el pico de
Colocar partículas de Mitomicina en aceite mi- mitomicina no debe ser mayor de 1,3; la desviación
neral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
mezcla empleando un microscopio óptico con luz ser mayor de 2,0 %.
polarizada: las partículas deben presentar birrenfri-
Procedimiento - Inyectar por separado en el
gencia y posiciones de extinción cuando se gira la cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
platina del microscopio.
10 l) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C15H18N4O5 en la porción de Mitomici-
na en ensayo.
MOMETASONA, Pureza cromatográfica
Fase estacionaria - Emplear una placa para
FUROATO DE cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
O grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
O de espesor.
Cl
H CH3 O Fase móvil - Cloroformo y acetato de etilo
O
HO (3:1).
H Soluciones estándar - Preparar una solución de
CH3 H Furoato de Mometasona SR-FA en diclorometano
CH3
de aproximadamente 10 mg por ml. Diluir esta
Cl H solución con diclorometano para obtener cinco
Soluciones estándar con las siguientes concentra-
O ciones:
Solución Concentración % con respecto
C27H30Cl2O6 PM: 521,4 83919-23-7 estándar (mg por ml) a la muestra
Definición – Furoato de Mometasona es A 0,5 5,0
(11,16)-9,21-Dicloro-17-[(2-furanilcarbonil)oxi] B 0,2 2,0
-11-hidroxi-16-metilpregna-1,4-dieno-3,20-diona. C 0,1 1,0
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no D 0,02 0,2
más de 102,0 por ciento de C27H30Cl2O6, calculado E 0,01 0,1
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- Solución muestra - Preparar una solución de
guientes especificaciones. Furoato de Mometasona en diclorometano de
Caracteres generales - Polvo blanco o casi aproximadamente 10 mg por ml.
blanco. Funde aproximadamente a 220 °C, con Procedimiento - Aplicar sobre la placa 40 µl de
descomposición. Soluble en acetona y cloruro de la Solución muestra y 40 µl de las Soluciones
metileno; poco soluble en alcohol; prácticamente estándar A, B, C, D, y E. Dejar secar las aplicacio-
insoluble en agua. nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
frente del solvente haya recorrido aproximadamente
Sustancia de referencia - Furoato de Mometa-
tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
sona SR-FA.
rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
CONSERVACIÓN vente y secar al aire. Examinar la placa bajo luz
En envases bien cerrados. ultravioleta a 254 nm: ninguna mancha secundaria
del cromatograma obtenido a partir de la Solución
ENSAYOS muestra debe ser mayor en tamaño o intensidad que
Identificación la mancha principal obtenida con la Solución están-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. dar C (1 %); y la suma de las intensidades de todas
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en las manchas secundarias en el cromatograma obte-
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- nido a partir de la Solución muestra no debe ser
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- mayor que la mancha principal obtenida con la
paración muestra se debe corresponder con el obte- Solución estándar B (2,0 %).
nido con la Preparación estándar, ambos relativos VALORACIÓN
al estándar interno.
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Determinación de la rotación óptica <170> para cromatografía de líquidos con un detector
Rotación específica: Entre +56° y +62°. ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
Solución muestra: 5 mg por ml, en dioxano. 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
Pérdida por secado <680> por octilsilano químicamente unido a partículas
Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder totalmente porosas de sílice de 3 a 10 µm de diáme-
más de 0,5 % de su peso. tro. El caudal debe ser aproximadamente 1,7 ml
por minuto.
Determinación del residuo de ignición <270> Fase móvil - Metanol y agua (65:35). Filtrar y
No más de 0,1 %. desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Límite de metales pesados <590> Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Método II. No más de 0,003 %.
Diluyente - Metanol, agua y ácido acético
(65:35:0,2).
Solución del estándar interno - Pesar exacta-
mente alrededor de 40 mg de Dipropionato de Be-
clometasona, transferir a un matraz aforado de
100 ml, disolver con Diluyente, completar a volu-
men con el mismo solvente y mezclar.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Furoato de Mometaso-
na SR-FA en metanol y diluir cuantitativamente con
Diluyente para obtener una solución de aproxima-
damente 0,1 mg por ml. Transferir volúmenes
iguales de esta solución y de Solución del estándar
interno, y diluir cuantitativamente con Diluyente
para obtener una solución de aproximadamente
0,02 mg por ml de Furoato de Mometasona y
0,08 mg por ml de dipropionato de beclometasona.
Preparación muestra - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Furoato de Mometasona en
metanol y diluir cuantitativamente con Diluyente
para obtener una solución de aproximadamente
0,1 mg por ml. Transferir 10,0 ml de esta solución
y 10,0 ml de Solución del estándar interno a un
matraz aforado de 50 ml, completar a volumen con
Diluyente y mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 1,6 para dipropionato de
beclometasona y 1,0 para furoato de mometasona;
la resolución R entre los picos de furoato de mome-
tasona y dipropionato de beclometasona no debe ser
menor de 4,0; el factor de asimetría para el pico de
furoato de mometasona no debe ser mayor de 1,8; la
desviación estándar relativa para inyecciones repe-
tidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C27H30Cl2O6 en la porción de Furoato
de Mometasona en ensayo.
Determinación de la rotación óptica <170>
MORFINA, Rotación específica: Entre - 110° y - 115°.
CLORHIDRATO DE Solución muestra: 20 mg por ml, en agua.
Meconato
H Disolver 500 mg de Clorhidrato de Morfina en
N CH3
agua y diluir hasta 25 ml. A 10 ml de esta solución
agregar 1 ml de ácido clorhídrico y 0,1 ml de cloruro
H
férrico (SR). Determinar la absorbancia de esta solu-
.HCl. 3H 2O ción a 480 nm: no debe ser mayor de 0,2 %. Emplear
una solución blanco preparada simultáneamente y del
HO O OH mismo modo empleando 10 ml de agua.
Determinación del residuo de ignición <270>
C17H20ClNO3 . 3H2O PM: 375,8 52-26-6 No más de 0,1 % determinados sobre el residuo
del ensayo de Pérdida por secado.
Definición - Clorhidrato de Morfina es el Clor-
Sustancias relacionadas
hidrato de (5,6)-7,8-didehidro-4,5-epoxi- Fase estacionaria - Emplear una placa para cro-
17-metilmorfinan-3,6-diol trihidrato. Debe contener
matografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía)
no menos de 98,0 por ciento y no más de 101,0 por recubierta con gel de sílice para cromatografía, de
ciento de C17H20ClNO3, calculado sobre la sustancia 0,25 mm de espesor.
seca y debe cumplir con las siguientes especificacio- Fase móvil - Tolueno, acetona, etanol, agua y
nes.
amoníaco concentrado (35:32,5:24,5:10,5:2,5).
Caracteres generales - Polvo cristalino, blanco Diluyente - Alcohol y agua (50:50).
o casi blanco, o agujas sedosas incoloras o en forma Solución muestra - Disolver 100 mg de Clor-
de masas cúbicas. Eflorescente en atmósfera seca. hidrato de Morfina en Diluyente y diluir hasta 10 ml
Soluble en agua y en glicerol; poco soluble en alco- con el mismo solvente.
hol. Solución estándar - Disolver 50 mg de Fosfato
de Codeína en 5 ml de la Solución muestra. Diluir
CONSERVACIÓN
0,1 ml de esta solución hasta 10 ml con Diluyente.
En envases inactínicos de cierre perfecto. Revelador 1 - Solución de iodobismutato de po-
tasio (SR).
ENSAYOS
Revelador 2 - Solución de peróxido de hidróge-
no (SR) 1 en 10.
Identificación
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
A - Colocar 1 mg de Clorhidrato de Morfina pul-
verizado en un crisol de porcelana o cápsula pequeña placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de la Solu-
ción estándar. Dejar secar las aplicaciones y desarro-
y agregar 0,5 ml de ácido sulfúrico que contenga por
cada ml, 1 gota de formaldehído (SR): se debe pro- llar los cromatogramas hasta que el frente del solven-
te haya recorrido aproximadamente tres cuartas par-
ducir inmediatamente un color púrpura intenso, el
cual rápidamente debe cambiar a violeta. tes de la longitud de la placa. Secar la placa con una
corriente de aire. Pulverizar con Revelador 1 y secar
B - Disolver en un tubo de ensayo 5 mg de Clor-
hidrato de Morfina en 5 ml de agua. Agregar 3 gotas durante 15 minutos en una corriente de aire. Pulveri-
zar con Revelador 2. La mancha correspondiente a la
de una solución recientemente preparada de aproxi-
madamente 10 g/l de ferricianuro de potasio (SR) y codeína en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra no debe ser más intensa que la
1 gota de cloruro férrico (SR): se debe producir in-
mediatamente una coloración azul. mancha correspondiente en el cromatograma obteni-
do con la Solución estándar (1 %). A excepción de
C - Una solución de Clorhidrato de Morfina
1 en 50 debe responder a los ensayos para Cloru- la mancha principal y la correspondiente a la codeína,
ro <410>. en el cromatograma obtenido con la Solución están-
dar, ninguna mancha debe ser más intensa a la man-
Acidez cha correspondiente a la Morfina (1 %). El ensayo
Disolver 500 mg de Clorhidrato de Morfina en solo es válido si el cromatograma obtenido con la
agua y diluir a 25 ml, agregar 1 gota de rojo de meti- Solución estándar presenta dos manchas completa-
lo (SR) y titular con hidróxido de sodio 0,020 N: no mente separadas.
debe consumir más de 0,20 ml para producir una
Pérdida por secado <680>
coloración amarilla.
Secar 500 mg de Clorhidrato de Morfina en estufa
a 130 ºC: no debe perder más de 15 %.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 350 mg de Clor-
hidrato de Morfina, disolver en ácido acético anhidro,
calentar si fuera necesario. Dejar enfriar y agregar
6 ml de una solución de acetato mercúrico (SR1).
Titular con ácido perclórico 0,1 N empleando 0,1 ml
de solución de cristal violeta como indicador. Reali-
zar una determinación con un blanco y hacer las
correcciones necesarias (ver 780. Volumetría). Cada
ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a 32,18 mg de
C17H20ClNO3.
oscuro (codeína y etilmorfina dan las mismas
MORFINA, SULFATO DE reacciones de coloración, pero hidromorfona y
H
papaverina no producen este cambio de coloración).
N CH3 D - Una solución de Sulfato de Morfina 1 en 50
H
debe responder a los ensayos para Sulfato <410>.
H2SO4 5 H2O
Acidez
Disolver 500 mg de Sulfato de Morfina en 15 ml
O
HO OH
2
de agua, agregar 1 gota de rojo de metilo (SR) y
titular con hidróxido de sodio 0,020 N: no debe
consumir más de 0,50 ml para producir una
(C17H19NO3)2 . H2SO4 . 5H2O PM: 758,9 6211-15-0 coloración amarilla.
Anhidro PM: 668,7 64-31-3 Determinación de la rotación óptica <170>
Definición - Sulfato de Morfina es Sulfato de Rotación específica: Entre -107° y -109,5°.
(5 ,6 )-7,8-didehidro-4,5-epoxi-17-metilmorfinan-3, Solución muestra: el equivalente a 20 mg por ml,
6-diol (2:1) (sal) pentahidrato. Debe contener no en agua.
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por Determinación de agua <120>
ciento de (C17H19NO3)2 . H2SO4, calculado sobre la Titulación volumétrica directa. Entre 10,4 y
sustancia anhidra y debe cumplir con las siguientes 13,4 %.
especificaciones.
Cloruro
Caracteres generales - Cristales blancos, A 10 ml de una solución de Sulfato de Morfina
sedosos, con aspecto de plumas o en forma de masas 1 en 100 agregar 1 ml de ácido nítrico 2 N y 1 ml de
cúbicas, o polvo blanco cristalino. Inodoro. Cuando nitrato de plata (SR): no se debe producir de
se expone al aire pierde gradualmente agua de inmediato ningún precipitado o turbidez.
hidratación. Se oscurece por exposición prolongada
a la luz. Fácilmente soluble en agua caliente; soluble Sales de amonio
en agua; poco soluble en alcohol pero más soluble en Calentar en un baño de vapor 200 mg de Sulfato
alcohol caliente; insoluble en cloroformo y en éter. de Morfina con 5 ml de hidróxido de sodio 1 N
durante 1 minuto: no se debe percibir olor a
Sustancia de referencia - Sulfato de amoníaco.
Morfina SR-FA.
Límite de alcaloides extraños
CONSERVACIÓN Disolver 1,0 g de Sulfato de Morfina en 10 ml de
En envases inactínicos de cierre perfecto. hidróxido de sodio 1 N en una ampolla de
decantación y agitar la solución con tres porciones
ENSAYOS sucesivas de 15, 10 y 10 ml de cloroformo, pasar las
Identificación soluciones clorofórmicas a través de un filtro
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. pequeño previamente humedecido con cloroformo.
[NOTA: Secar a 145 °C durante 1 hora]. Agitar las soluciones combinadas de cloroformo con
B - Colocar 1 mg de Sulfato de Morfina en un 5 ml de agua, separar la capa clorofórmica y evaporar
crisol de porcelana o cápsula pequeña y agregar hasta sequedad cuidadosamente en un baño de vapor.
0,5 ml de ácido sulfúrico que contenga, por cada ml, Agregar al residuo 10 ml de ácido sulfúrico 0,020 N
1 gota de formaldehído (SR): se debe producir y calentar suavemente hasta disolver. Enfriar,
inmediatamente una coloración púrpura intensa, la agregar 2 gotas de rojo de metilo (SR) y titular el
cual rápidamente debe cambiar a azul-violeta exceso de ácido con hidróxido de sodio 0,020 N: no
profundo, a diferencia de codeína en que produce debe consumir menos de 7,5 ml (1,5 %).
inmediatamente una coloración violeta-azul intensa y Impurezas orgánicas volátiles <520>
de hidromorfona en que produce al principio una Método I.
coloración amarillo pardusca, que cambia a rosada y
luego a rojo púrpura. Determinación del residuo de ignición <270>
C - Disolver en un tubo de ensayo 5 mg de No más de 0,1 %, determinado sobre 500 mg.
Sulfato de Morfina en 5 ml de ácido sulfúrico. VALORACIÓN
Agregar 1 gota de cloruro férrico (SR), mezclar y
calentar en agua hirviendo durante 2 minutos: se debe Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
producir una coloración azul y cuando se agrega para cromatografía de líquidos con un detector
1 gota de ácido nítrico debe cambiar a rojo-pardusco ultravioleta ajustado a 284 nm y una columna de
30 cm 3,9 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El caudal
debe ser de aproximadamente 1,5 ml por minuto.
Fase móvil - Disolver 0,73 g de
1-heptanosulfonato de sodio en 720 ml de agua,
agregar 280 ml de metanol y 10 ml de ácido acético
glacial, mezclar. Filtrar y desgasificar. Hacer los
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad,
exactamente pesada, de Sulfato de Morfina SR-FA en
Fase móvil y diluir cuantitativamente y en etapas si
fuera necesario, con Fase móvil para obtener una
solución de aproximadamente 0,24 mg por ml.
[NOTA: preparar esta solución el día de su uso.]
Preparación muestra - Pesar exactamente
alrededor de 24 mg de Sulfato de Morfina, transferir
a un matraz aforado de 100 ml, disolver en Fase
móvil, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Solución de aptitud del sistema - Disolver
cantidades adecuadas de Sulfato de Morfina SR-FA y
fenol en Fase móvil hasta obtener una solución de
aproximadamente 0,24 y 0,15 mg por ml,
respectivamente.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y la
Solución de aptitud del sistema. Registrar las
respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: los tiempos de retención relativos
deben ser aproximadamente 0,7 para fenol y 1,0 para
sulfato de morfina; el factor de asimetría para el pico
de sulfato de morfina no debe ser mayor de 2,0; la
resolución R entre los picos de fenol y sulfato de
morfina no debe ser menor de 2,0; la desviación
estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
25 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de (C17H19NO3)2 . H2SO4 en la porción de
Sulfato de Morfina en ensayo.
MUPIROCINA VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
H
O O ultravioleta ajustado a 229 nm y una columna de
H3C H
H
H H
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
CH3 O OH
H3C por octadecilsilano químicamente unido a partículas
H O
HO H OH O porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
OH H
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Solución reguladora de pH 6,3 - Preparar una
C26H44O9 PM:500,6 12650-69-0 solución de fosfato monobásico de sodio 0,05 M y
ajustar a pH 6,3 ± 0,2 con hidróxido de sodio 10 N.
Definición - Mupirocina es Ácido [2S-2(E), Fase móvil - Solución reguladora de pH 6,3 y
3, 4,5 [2R*,3R*(1R*,2R*)]]-9-[3-metil-1-oxo- acetonitrilo (75:25). Filtrar y desgasificar. Hacer
4-[tetrahidro-3,4-dihidroxi-5-[[3-(2-hidroxi-1-metil los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
propil)oxiranil]metil]-2H-piran-2-il]-2-butenil] oxi] 100. Cromatografía).
nonanoico. Debe contener no menos de 920 µg y Preparación estándar - Pesar exactamente alre-
no más de 1.020 µg de C26H44O9 por mg, calculado dedor de 11 mg de Mupirocina de Litio SR-FA,
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las transferir a un matraz aforado de 100 ml, agregar
siguientes especificaciones. 25 ml de acetonitrilo y agitar para disolver. Com-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco pletar a volumen con Solución reguladora de
o casi blanco. Fácilmente soluble en acetona, alco- pH 6,3 y mezclar.
hol absoluto, cloroformo y metanol; poco soluble en Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
éter; muy poco soluble en agua. dedor de 11 mg de Mupirocina, transferir a un ma-
traz aforado de 100 ml, agregar 25 ml de acetonitri-
Sustancia de referencia - Mupirocina de Li- lo y agitar para disolver. Completar a volumen con
tio SR-FA. Solución reguladora de pH 6,3 y mezclar.
CONSERVACIÓN Solución de resolución - A 10 ml de la Prepa-
ración estándar agregar ácido clorhídrico 6 N para
En envases de cierre perfecto.
ajustar a pH 2,0. Dejar reposar aproximadamente
ENSAYOS durante 2 horas y ajustar a pH 6,3 ± 0,2 con
Identificación hidróxido de sodio 5 N.
A - Absorción infrarroja <460>. Proceder Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
según se indica en Identificación por medio de Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
espectros de referencia. las respuestas de los picos según se indica en Pro-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- ben ser 0,9 para el producto de hidrólisis ácida de
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- mupirocina y 1,0 para mupirocina; la resolución R
paración muestra se debe corresponder con el obte- no debe ser menor de 2,0. Cromatografiar la Pre-
nido con la Preparación estándar. paración estándar y registrar las respuestas de los
picos según se indica en Procedimiento: el factor de
Cristalinidad asimetría no debe ser mayor de 2,0; la eficiencia de
Colocar partículas de Mupirocina en aceite mi- la columna no debe ser menor de 1.500 platos teóri-
neral, sobre un portaobjetos de vidrio. Examinar la cos; la desviación estándar relativa para inyecciones
mezcla empleando un microscopio óptico con luz repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
polarizada: las partículas deben presentar birrefrin- Procedimiento - Inyectar por separado en el
gencia y posiciones de extinción cuando se gira la cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
platina del microscopio. 20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
Determinación del pH <250> muestra, registrar los cromatogramas y medir las
Entre 3,5 y 4,5, en solución acuosa saturada. respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C26H44O9 en la porción de Mupirocina
Determinación de agua <120> en ensayo.
Titulación volumétrica directa. No más de
1,0 %.
Solución muestra y Solución estándar: emplear
NAFAZOLINA, metanol como solvente.
CLORHIDRATO DE Fase móvil: Metanol, ácido acético glacial y
agua (8:1:1).
Revelador: 2.
VALORACIÓN
H Pesar exactamente alrededor de 300 mg de
N HCl
Clorhidrato de Nafazolina, disolver en 50 ml de
ácido acético glacial, agregar 10 ml de acetato
N mercúrico (SR) y 1 gota de cristal violeta (SR).
Titular con ácido perclórico 0,1 N (SV) hasta punto
final verde azulado. Realizar una determinación
C14H14N2 . HCl PM: 246,7 550-99-2 con un blanco y hacer las correcciones necesarias
(ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido perclórico
Definición.- El Clorhidrato de Nafazolina es
0,1 N equivale a 24,67 mg de C14H14N2 . HCl.
Clorhidrato de 2-(1-naftilmetil)imidazolina. Debe
contener no menos de 98,0 por ciento y no más de
100,5 por ciento de C14H14N2 . HCl, calculado sobre
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
especificaciones.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco.
Funde aproximadamente a 255 °C, con descompo-
sición. Fácilmente soluble en agua y alcohol; muy
poco soluble en cloroformo; prácticamente insolu-
ble en éter.
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Nafa-
zolina SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: metanol.
Concentración: 20 µg por ml.
Las absortividades a 280 nm, calculadas
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
3,0 %.
C - Una solución de Clorhidrato de Nafazolina
1 en 100 debe responder a los ensayos para Cloru-
ro <410>.
Determinación del pH <250>
Entre 5,0 y 6,6, determinado sobre una solución
1 en 100 en agua libre de dióxido de carbono: la
solución debe ser transparente e incolora.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,2 %.
Impurezas comunes <510>
NALIDÍXICO, ÁCIDO Pureza cromatográfica
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
CH3
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
H3C N N
de espesor.
Fase móvil - Alcohol, cloroformo e hidróxido
OH de amonio 5 M (70:20:10).
Solución estándar - Preparar una solución de
O O
Ácido Nalidíxico SR-FA en cloroformo de aproxi-
madamente 1,0 mg por ml. Diluir cuantitativamen-
C12H12N2O3 PM: 232,2 389-08-2 te con cloroformo para obtener Soluciones estándar
con las siguientes concentraciones:
Definición - Ácido Nalidíxico es el Áci-
do 1-etil-1,4-dihidro-7-metil-4-oxo-1,8-naftiridina-
%
3-carboxílico. Debe contener no menos de 99,0 por Solución Concentración
Dilución con respecto
ciento y no más de 101,0 por ciento de C12H12N2O3, estándar (mg por ml)
a la muestra
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir
con las siguientes especificaciones. A 1 en 10 0,10 0,5
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco B 1 en 25 0,04 0,2
o amarillo muy pálido. Soluble en cloroformo,
cloruro de metileno y soluciones de hidróxidos o C 1 en 50 0,02 0,1
carbonatos alcalinos; poco soluble en acetona, alco-
hol, metanol y tolueno; muy poco soluble en agua y
Solución muestra - Disolver una cantidad exac-
éter.
tamente pesada de Ácido Nalidíxico en cloroformo
Sustancia de referencia - Ácido Nalidíxi- para obtener una solución de aproximadamente
co SR-FA. 20 mg por ml.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
CONSERVACIÓN placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de cada
En envases inactínicos de cierre perfecto. Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
ENSAYOS del solvente haya recorrido aproximadamente tres
Identificación cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cámara, marcar el frente del solvente y
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. secar bajo una corriente de aire caliente. Examinar
B - Absorción ultravioleta <470> la placa bajo luz ultravioleta a 254 nm. Comparar
Disolver 12,5 mg de Ácido Nalidíxico en la intensidad de cualquier mancha secundaria obte-
hidróxido de sodio 0,1 N y diluir a 50,0 ml con el nida en el cromatograma a partir de la Solución
mismo solvente. Transferir 2,0 ml de esta solución muestra con las intensidades de las manchas princi-
a un matraz aforado de 100 ml y completar a volu- pales en los cromatogramas obtenidos con las Solu-
men con hidróxido de sodio 0,1 N. Examinar entre ciones estándar: ninguna mancha secundaria debe
230 y 350 nm. La solución debe presentar dos ser más intensa que la mancha principal obtenida a
máximos de absorción a 258 y 334 nm. La rela- partir de la Solución estándar A (0,5 %).
ción de absorbancias a 258 y 334 nm debe estar
comprendida entre 2,2 y 2,4. VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Áci-
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 225 y 231 °C. do Nalidíxico, disolver en 30 ml de dimetilforma-
mida, previamente neutralizada frente a la timolfta-
Pérdida por secado <680> leína (SR). Titular con metóxido de li-
Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder tio 0,1 N (SV), empleando un agitador magnético y
más de 0,5 % de su peso. evitando la absorción de dióxido de carbono at-
Determinación del residuo de ignición <270> mosférico. Realizar una determinación con un
No más de 0,1 %. blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada
ml de metóxido de litio 0,1 N equivale a 23,22 mg
Límite de metales pesados <590> de C12H12N2O3.
Método II. No más de 0,002 %.
NALOXONA, Clorhidrato de noroximorfona [clorhidrato de
(-) 4,5--epoxi-3,14-dihidroximorfinan-6-ona] y
CLORHIDRATO DE otras impurezas
Fase estacionaria - Emplear una placa para cro-
H matografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía)
N recubierta con gel de sílice para cromatografía,
CH2 de 0,25 mm de espesor, previamente activada por
HO calentamiento durante 15 minutos a 105 C.
Solución de butanol amoniacal - Agitar 100 ml de
. HCl alcohol butílico con 60 ml de solución de hidróxido de
O amonio 1 en 100, descartando la fase inferior.
HO O
Fase móvil - Emplear una solución 1 en 20 de me-
tanol en Solución de butanol amoniacal.
C19H21NO4 . HCl PM: 363,8 357-08-4 Solución estándar A - Preparar una solución de
Dihidrato PM: 399,9 51481-60-8 Naloxona SR-FA en cloroformo de aproximadamente
7,6 mg por ml.
Definición - Clorhidrato de Naloxona es Clor- Solución estándar B - Preparar una solución de
hidrato de 17-alil-4,5--epoxi-3,14-dihidroximorfinan- Clorhidrato de Noroximorfona SR-FA en metanol
6-ona. Debe contener no menos de 98,0 por ciento y diluido 3 en 5 de aproximadamente 0,084 mg por ml.
no más de 100,5 por ciento de C19H21NO4 . HCl, cal- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
culado sobre la sustancia seca y debe cumplir con las de 40 mg de Clorhidrato de Naloxona, transferir a un
siguientes especificaciones. matraz aforado de 5 ml, disolver completamente en
Caracteres generales - Polvo blanco o casi blan- 2,0 ml de agua, completar a volumen con metanol y
co. Sus soluciones acuosas son ácidas. Soluble en mezclar.
agua, ácidos diluidos y álcalis fuertes; poco soluble en Revelador - [NOTA: preparar en el momento de
etanol; prácticamente insoluble en cloroformo y éter. su uso]. Disolver 100 mg de ferricianuro de potasio
en 20 ml de una solución de cloruro férrico 1 en 10.
Sustancias de referencia - Naloxona SR-FA. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Clorhidrato de Noroximorfona SR-FA. placa 5 µl de la Solución muestra y 5 µl de las Solu-
CONSERVACIÓN ciones estándar A y B. Dejar secar las aplicaciones y
desarrollar los cromatogramas, protegidos de la luz,
En envases inactínicos de cierre perfecto. hasta que el frente del solvente haya recorrido aproxi-
ENSAYOS madamente tres cuartas partes de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el frente
Identificación
del solvente y secarla perfectamente. Pulverizar sobre
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. Di-
la placa con Revelador: el valor de Rf de la mancha
solver 150 mg de Clorhidrato de Naloxona en 25 ml
principal en el cromatograma obtenido a partir de la
de agua en una ampolla de decantación, agregar len-
Solución muestra debe ser similar al obtenido con la
tamente algunas gotas de hidróxido de amonio 6 N
Solución estándar A; y a excepción de la mancha
hasta que se forme un precipitado blanco. Extraer con
principal y la mancha en el origen (cloruro de amonio),
tres porciones de 5 ml de cloroformo y filtrar los ex-
ninguna mancha en el cromatograma obtenido a partir
tractos a través de un filtro seco, recolectando el fil-
de la Solución muestra debe ser más intensa que la
trado en un matraz. Evaporar el filtrado hasta seque-
mancha principal obtenida con la Solución estándar B
dad en un baño de vapor y secar a 105 C durante (1,0 %).
1 hora.
Contenido de cloruro
Determinación de la rotación óptica <170>
Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Clor-
Rotación específica: Entre -170° y -181. hidrato de Naloxona y disolver en 50 ml de metanol en
Solución muestra: 25 mg por ml, en agua. un erlenmeyer de 125 ml. Agregar 5 ml de ácido
Pérdida por secado <680> acético glacial y 2 gotas de eosina (SR) y titular con
Secar a 105 C hasta peso constante: la forma an- nitrato de plata 0,1 N (SV) hasta punto final de color
hidra no debe perder más de 0,5 % de su peso; la rosado. Realizar una determinación con un blanco y
forma hidratada no debe perder más de 11,0 % de su hacer las correcciones necesarias (ver 780. Volumetr-
peso. ía). Cada ml de nitrato de plata 0,1 N equivale a
3,545 mg de cloruro. No debe contener menos de
9,54 % ni más de 9,94 %, calculado sobre la sustancia
seca.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Clor-
hidrato de Naloxona, previamente secados, y disolver
en una mezcla de 40 ml de ácido acético glacial y
10 ml de anhídrido acético. Agregar 10 ml de acetato
mercúrico (SR) y 1 gota de violeta de metilo (SR) y
titular con ácido perclórico 0,1 N (SV). Realizar una
determinación con un blanco y hacer las correcciones
necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
perclóclórico 0,1 N equivale a 36,38 mg de
C19H21NO4 . HCl.
B - Disolver aproximadamente 10 mg de Sulfa-
NEOMICINA, SULFATO DE to de Neomicina en 1 ml de agua, agregar 5 ml de
1405-10-3 ácido sulfúrico 15 N y calentar a 100 °C durante
Definición - Sulfato de Neomicina es el sulfato 100 minutos. Dejar enfriar, agregar 10 ml de xileno
de una clase de neomicina o una mezcla de dos o y agitar durante 10 minutos. Dejar separar y decan-
más de sus sales. La neomicina es una sustancia tar la fase de xileno. A la fase de xileno agregar
antibacteriana producidas por el crecimiento de 10 ml de p-bromoanilina (SR) y agitar: se debe
Streptomyces fradiae Waksman (Streptomycetace- producir un color rojo rosado intenso al dejar en
ae). Debe tener una potencia equivalente a no me- reposo.
nos de 600 µg de neomicina por mg, calculada C - Una solución de Sulfato de Neomicina
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- 1 en 20 debe responder a los ensayos para Sulfa-
guientes especificaciones. to <410>.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto y en un
sitio fresco.
ENSAYOS
Identificación
Absorción ultravioleta <470>. Transferir 50 mg
de Nistatina a un matraz aforado de 100 ml con
tapón de vidrio. Agregar 25 ml de metanol y 5 ml
de ácido acético glacial, completar a volumen con
metanol y mezclar. Transferir 2 ml de esta solución
a un matraz aforado de 100 ml, completar a volu-
men con metanol y mezclar para obtener una solu-
ción de aproximadamente 10 µg por ml.
Relación: la relación (A230/A279) debe estar com-
prendida entre 0,9 y 1,25.
Determinación del pH <250>
Entre 6,0 y 8,0, determinado sobre una suspen-
sión acuosa al 3 %.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 3,5 %.
Pérdida por secado <680>
Pesar exactamente alrededor de 100 mg de Nis-
tatina, secar en un pesafiltro provisto de tapa con
perforación capilar, al vacío a una presión que no
exceda los 5 mm Hg a 60 °C durante 3 horas: no
debe perder más de 5,0 % de su peso.
Ensayo de toxicidad anormal <360>
Cuando la Nistatina esté destinada a la prepara-
ción de formas farmacéuticas de administración por
vía oral debe cumplir con este ensayo. Inyectar a
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
NITRAZEPAM de espesor.
Fase móvil - Nitrometano y acetato de etilo
H O (85:15).
N
Solución muestra - Disolver 200 mg de Nitra-
zepam en acetona y diluir a 10 ml con el mismo
N solvente. [NOTA: preparar esta solución en el
O2N
momento de su uso].
Solución estándar A - Disolver 10 mg de ami-
nonitrobenzofenona en acetona y diluir a 100 ml
con el mismo solvente. Diluir 10 ml de esta solu-
ción a 50 ml con acetona.
C15H11N3O3 PM: 281,3 146-22-5 Solución estándar B - Disolver 10 mg de Impu-
Definición - Nitrazepam es 1,3-Dihidro-7-nitro- reza A de Nitrazepam SR-FA en acetona y diluir a
5-fenil-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona. Debe conte- 100 ml con el mismo solvente. Diluir 10 ml de esta
ner no menos de 99,0 por ciento y no más de 101,0 solución a 50 ml con acetona.
por ciento de C15H11N3O3, calculado sobre la sus- Solución estándar C - Diluir 1 ml de Solución
tancia seca y debe cumplir con las siguientes espe- muestra a 20 ml con acetona. Diluir 1 ml de esta
cificaciones. solución a 50 ml con acetona.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Caracteres generales - Polvo cristalino amari-
placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de las
llo. Soluble en acetona; poco soluble en alcohol y
Soluciones estándar A, B y C. Dejar secar las apli-
éter; prácticamente insoluble en agua.
caciones y desarrollar los cromatogramas hasta que
Sustancias de referencia - Nitrazepam SR-FA. el frente del solvente haya recorrido aproximada-
Impureza A de Nitrazepam SR-FA: 3-Amino-6- mente tres cuartas partes de la longitud de la placa.
nitro-4-fenilquinolin-2(1H)-ona. Retirar la placa de la cámara, dejar secar al aire y
CONSERVACIÓN examinar bajo luz ultravioleta a 254 nm: la mancha
correspondiente a aminonitrobenzofenona en el
En envases inactínicos bien cerrados. cromatograma obtenido a partir de la Solución
ENSAYOS muestra no debe ser más intensa que la obtenida
con la Solución estándar A (0,1 %); la mancha
Identificación correspondiente a impureza A de nitrazepam en el
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. cromatograma obtenido a partir de la Solución
B - [NOTA: emplear recipientes de vidrio in- muestra no debe ser más intensa que la obtenida
actínico y medir las absorbancias de inmediato]. con la Solución estándar B (0,1 %); a excepción de
Disolver 25 mg de Nitrazepam en una solución al la mancha principal y las manchas correspondientes
0,5 % de ácido sulfúrico en metanol y diluir a a aminonitrobenzofenona y a impureza A de nitra-
250 ml con el mismo solvente. Diluir 5 ml de esta zepam en el cromatograma obtenido a partir de la
solución a 100 ml con el mismo solvente y exami- Solución muestra, ninguna mancha debe ser más
nar bajo luz ultravioleta entre 230 y 350 nm (ver intensa que la obtenida con la Solución estándar C
470. Espectrofotometría ultravioleta y visible): esta (0,1 %).
solución debe presentar un máximo de absorción a
280 nm y el coeficiente de extinción específica Límite de metales pesados <590>
E(1 %, 1 cm) a esta longitud de onda debe estar Método VII. Preparar la Solución muestra a par-
comprendido entre 890 y 950. tir de 1,0 g de Nitrazepam y la Solución estándar
empleando 2 ml de Solución estándar de plo-
Determinación del punto de fusión <260> mo (10 ppm). No más de 0,002 %.
Entre 226 y 230 °C.
Pérdida por secado <680>
Determinación del residuo de ignición <270> Secar entre 100 y 105 °C durante 4 horas: no
No más de 0,1 %. debe perder más de 0,5 % de su peso.
Sustancias relacionadas VALORACIÓN
[NOTA: realizar el siguiente ensayo protegido
de la luz]. Pesar exactamente alrededor de 250 mg de Ni-
Fase estacionaria - Emplear una placa para trazepam, disolver en 25 ml de anhídrido acético y
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determinan-
grafía), recubierta con gel de sílice para cromato- do el punto final potenciométricamente. Realizar
una determinación con un blanco y hacer las co-
rrecciones necesarias (ver 780. Volumetría). Cada
ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a 28,13 mg
de C15H11N3O3.
Fase móvil - Cloroformo y metanol (9:1).
NITROFURANTOÍNA Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
tamente pesada de diacetato de nitrofurfural en una
O mezcla de dimetilformamida y acetona (1 en 10)
O2N O
N para obtener una solución con una concentración de
N
aproximadamente 100 µg por ml.
NH
Solución muestra - Transferir 100 mg de Nitro-
furantoína a un matraz aforado de 10 ml, disolver
O en 1 ml de dimetilformamida, agregar acetona a
volumen y mezclar.
C8H6N4O5 PM: 238,2 67-20-9 Revelador - Emplear una solución preparada di-
Monohidrato PM: 256,2 17140-81-7 solviendo 0,75 g de clorhidrato de fenilhidracina en
50 ml de agua. Decolorar con carbón activado,
Definición - Nitrofurantoína es 1-[[(5-Nitro- agregar 25 ml de ácido clorhídrico y mezclar con
2-furanil)metilen]amino]-2,4-imidazolidinodiona. agua para obtener un volumen de 200 ml.
Es anhidra o contiene una molécula de agua de Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
hidratación. Debe contener no menos de 98,0 por placa 10 µl de la Solución muestra y 10 µl de la
ciento y no más de 102,0 por ciento de C8H6N4O5, Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y
calculado sobre la sustancia anhidra y debe cumplir desarrollar los cromatogramas hasta que el frente
con las siguientes especificaciones. del solvente haya recorrido aproximadamente tres
Caracteres generales - Cristales amarillo cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la
limón o polvo fino. Inodoro. Soluble en dimetil- placa de la cámara, marcar el frente del solvente,
formamida; muy poco soluble en agua y alcohol. dejar secar al aire durante 5 minutos y calentar la
Presenta polimorfismo. placa a 105 °C durante 5 minutos. Retirar la placa
de la estufa y, mientras esté todavía caliente, pulve-
Sustancia de referencia - Nitrofurantoí- rizar sobre la placa con Revelador: ninguna mancha
na SR-FA. con un Rf de aproximadamente 0,7 en el cromato-
CONSERVACIÓN grama obtenido a partir de la Solución muestra debe
ser mayor en tamaño o intensidad que la obtenida
En envases inactínicos de cierre perfecto. con la Solución estándar al mismo valor de Rf
ENSAYOS (1,0 % de diacetato de nitrofurfural).
[NOTA: la Nitrofurantoína y sus soluciones se Límite de nitrofurazona
decoloran en presencia de álcalis y por exposición a Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
la luz; se descompone en contacto con metales, a para cromatografía de líquidos con un detector
excepción de acero inoxidable y aluminio.] ultravioleta ajustado a 375 nm y una columna de
Identificación 30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. por octadecilsilano químicamente unido a partículas
[NOTA: secar previamente la muestra a 140 °C porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
durante 30 minutos.] caudal debe ser aproximadamente 1,6 ml por minu-
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en to.
Valoración. El tiempo de retención del pico princi- Solución reguladora de fosfato de pH 7,0 - Pro-
pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre- ceder según se indica en Valoración.
paración muestra se debe corresponder con obteni- Fase móvil - Solución reguladora de fosfato de
do con la Preparación estándar. pH 7,0 y tetrahidrofurano (9:1). Filtrar y desgasifi-
car. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
Pérdida por secado <680> sistema en 100. Cromatografía).
Secar a 140 °C durante 30 minutos: la forma Solución estándar - Preparar una solución de
anhidra no debe perder más de 1,0 % de su peso y nitrofurazona en dimetilformamida para obtener
la forma hidratada entre 6,5 y 7,5 %. una concentración de aproximadamente 5,0 µg por
Límite de diacetato de nitrofurfural ml. Transferir 2 ml de esta solución a un matraz
Fase estacionaria - Emplear una placa para con tapón de vidrio, agregar 20,0 ml de agua y
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- mezclar.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Solución muestra - Transferir 100 mg de Nitro-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm furantoína a un matraz de 25 ml con tapón de vidrio
de espesor. y disolver en 2,0 ml de dimetilformamida. Agregar
20,0 ml de agua, mezclar y dejar reposar durante 40,0 ml de dimetilformamida y disolver. Agregar
15 minutos para permitir que se forme un precipita- 50,0 ml de Solución del estándar interno y mezclar.
do. Filtrar una porción de la solución a través de un Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
filtro de membrana de nylon de 0,45 µm de porosi- dedor de 50 mg de Nitrofurantoína, transferir a un
dad y emplear el filtrado transparente. matraz con tapón de vidrio, agregar 40,0 ml de
Solución de resolución - Preparar una solución dimetilformamida y disolver. Agregar 50,0 ml de
en dimetilformamida con concentraciones de Solución del estándar interno y mezclar.
aproximadamente 5,0 µg de nitrofurazona y nitrofu- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
rantoína por ml. Diluir 1 ml de esta solución con Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
10 ml de Fase móvil. las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - cedimiento: el tiempo de retención del pico de nitro-
Cromatografiar la Solución estándar y registrar las furantoína debe ser aproximadamente 8 minutos; la
respuestas de los picos según se indica en Procedi- resolución R entre los picos de acetanilida y nitrofu-
miento: el tiempo de retención del pico de nitrofu- rantoína no debe ser menor de 3,0; la desviación
razona debe ser aproximadamente 10,5 minutos; la estándar relativa del cociente de las respuestas de
desviación estándar relativa para inyecciones repe- los picos para inyecciones repetidas no debe ser
tidas no debe ser mayor de 2,0 %. Cromatografiar mayor de 2,0 %.
la Solución de resolución y registrar las respuestas Procedimiento - Inyectar por separado en el
de los picos según se indica en Procedimiento: la cromatógrafo volúmenes iguales (entre 5 y 10 µl)
resolución R entre los picos de nitrofurazona y de la Preparación estándar y la Preparación mues-
nitrofurantoína no debe ser menor de 4,0. tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
Procedimiento - Inyectar por separado en el puestas de los picos principales. Calcular la canti-
cromatógrafo volúmenes iguales (entre 60 y 100 µl) dad de C8H6N4O5 en la porción de Nitrofurantoína
de la Solución estándar y la Solución muestra, en ensayo.
registrar los cromatogramas y medir las respuestas
ROTULADO
de todos los picos. Si aparece un pico en el croma-
tograma obtenido a partir de la Solución muestra Indicar en el rótulo si es anhidra o monohidrato.
con un tiempo de retención correspondiente al pico
principal de la Solución estándar este no debe ser
mayor que la respuesta del pico principal obtenido
con la Solución estándar (0,01 %).
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro.
Solución reguladora de fosfato de pH 7,0 - Di-
solver 6,8 g de fosfato monobásico de potasio en
aproximadamente 500 ml de agua. Agregar sufi-
ciente hidróxido de sodio 1,0 N para ajustar a pH
7,0 (aproximadamente 30 ml), diluir con agua a
1 litro y mezclar.
Fase móvil - Solución reguladora de fosfato de
pH 7,0 y acetonitrilo (88:12). Filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
ma en 100. Cromatografía).
Solución del estándar interno - Preparar una so-
lución de acetanilida de aproximadamente 1 mg por
ml.
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 50 mg de Nitrofurantoína SR-FA, trans-
ferir a un matraz con tapón de vidrio, agregar
Secar a 105 °C durante 1 hora: no debe perder
NITROFURAZONA más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
O
O No más de 0,1 %.
N
O2N N NH2 Impurezas comunes <510>
H Solución muestra y Solución estándar: emplear
dimetilformamida como solvente.
C6H6N4O4 PM: 198,1 59-87-0 Volumen de aplicación: 10 µl.
Fase móvil: cloroformo, metanol e hidróxido de
Sinonimia - Nitrofural. amonio (20:8:1), en una cámara no saturada.
Revelador: 1.
Definición - Nitrofurazona es 2-[(5-Nitro-2- fu-
ranil)metilen]-hidrazincarboxamida. Debe contener Límite de 5-nitro-2-furfuraldazina
no menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por Fase estacionaria - Emplear una placa para
ciento de C6H6N4O4, calculado sobre la sustancia cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
ciones. grafía, de 0,5 mm de espesor.
Fase móvil - Acetato de etilo y ciclohexa-
Caracteres generales - Polvo cristalino amari- no (4:1).
llo. Se oscurece lentamente por exposición a la luz. Solución estándar - Transferir 50,0 mg de
Funde aproximadamente a 236 ºC, con descomposi- 5-Nitro-2-furfuraldazina SR-FA a un matraz afora-
ción. Soluble en dimetilformamida; muy poco do de 100 ml, disolver en dimetilformamida, com-
soluble en alcohol y agua; poco soluble en propi- pletar a volumen con el mismo solvente y mezclar.
lenglicol y mezclas de polietilenglicol; práctica- Transferir 5,0 ml de esta solución a un matraz afo-
mente insoluble en cloroformo y éter. rado de 25 ml, agregar 10 ml de dimetilformamida,
Sustancias de referencia - Nitrofurazo- completar a volumen con acetona y mezclar.
na SR-FA. Impureza A de Nitrofurazona: 5-Nitro- Solución muestra - Transferir 2,0 g de Nitrofu-
2-furfuraldazina SR-FA razona a un matraz aforado de 100 ml. Disolver en
60 ml de dimetilformamida, completar a volumen
CONSERVACIÓN con acetona y mezclar.
En envases inactínicos de cierre perfecto, evi- Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
tando la exposición a la luz directa y al calor exce- placa 5 µl de la Solución estándar y 5 µl de la Solu-
sivo. ción muestra. Dejar secar las aplicaciones y des-
arrollar los cromatogramas hasta que el frente del
ENSAYOS solvente haya recorrido aproximadamente tres cuar-
[NOTA: evitar exponer las soluciones de nitro- tas partes de la longitud de la placa. Retirar la placa
furazona a la luz directa, al calor excesivo y a las de la cámara y marcar el frente del solvente. Exa-
sustancias alcalinas.] minar la mancha producida por la Solución están-
dar y la mancha producida por la Solución muestra,
Identificación con el mismo valor de Rf, con un densitómetro
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. apropiado, equipado con un filtro cuya máxima
B - Absorción ultravioleta <470>. transmitancia se encuentre a 254 nm. La integra-
Concentración: 8 µg por ml, preparada ción de la intensidad de energía absorbida, barrien-
según se indica en Valoración. do el área de la mancha de la Solución muestra no
Relación de absorbancias A306/A375: no de- debe ser mayor que la correspondiente integración
be ser mayor a 0,25. proveniente de la mancha de la Solución estándar
C - Disolver 400 mg de hidróxido de potasio en (0,5 %).
10 ml de alcohol. Inmediatamente antes de su uso,
diluir esta solución a 100 ml con dimetilformamida. VALORACIÓN
A 10 ml de la solución preparada agregar unos Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
pocos cristales de Nitrofurazona: se debe producir dedor de 100 mg de Nitrofurazona, previamente
una solución color púrpura. secados, transferir a un matraz aforado de 250 ml,
Determinacion del pH <250> disolver en 50 ml de dimetilformamida, completar a
Suspender 1 g de Nitrofurazona en 100 ml de volumen con agua y mezclar. Transferir 5,0 ml de
agua, agitar durante 15 minutos, dejar que la sus- esta solución a un matraz aforado de 250 ml, com-
pensión sedimente y filtrar: el pH del filtrado debe pletar a volumen con agua y mezclar.
estar comprendido entre 5,0 y 7,5. Preparación estándar - Preparar una solución
de Nitrofurazona SR-FA de aproximadamente 8 µg
Pérdida por secado <680>
por ml en el mismo medio empleado en la Prepara-
ción muestra.
Procedimiento - Determinar concomitantemen-
te las absorbancias de la Preparación muestra y la
Preparación estándar, en celdas de 1 cm a la longi-
tud de onda de máxima absorción, a 375 nm, em-
pleando agua como blanco (ver 470. Espectrofoto-
metría ultravioleta y visible). Calcular la cantidad
de C6H6N4O4 en la porción de Nitrofurazona en
ensayo.
de la Solución muestra de identificación se debe
NITROGLICERINA corresponder con el de la Solución estándar.
DILUIDA B - Examinar los cromatogramas obtenidos en
Valoración. El tiempo de retención del pico princi-
ONO2 pal en el cromatograma obtenido a partir de la Pre-
paración muestra se debe corresponder con el de la
O2NO Preparación estándar.
ONO2
Pureza cromatográfica
Fase estacionaria - Emplear una placa para
C3H5N3O9 PM: 227,1 55-63-0 cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
Sinonimia - Trinitrato de Glicerilo. grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
Definición - Nitroglicerina Diluida es una mez- de espesor.
cla de nitroglicerina (trinitrato de Fase móvil - Tolueno y acetato de etilo (4:1).
1,2,3-propanotriol) con lactosa, dextrosa, alcohol, Revelador - Preparar una solución de difenila-
propilenglicol, u otros excipientes que permitan un mina en metanol (1 en 100).
tratamiento seguro. La mezcla generalmente contie- Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
ne no más de 10,0 por ciento de Nitroglicerina tamente pesada de Nitroglicerina Diluida SR-FA en
(C3H5N3O9). Debe contener no menos de 90,0 por metanol y diluir cuantitativamente con el mismo
ciento y no más de 110,0 por ciento de la cantidad solvente para obtener una solución de aproximada-
declarada de C3H5N3O9 y debe cumplir con las mente 400 µg de nitroglicerina por ml.
siguientes especificaciones. Solución muestra de identificación - Preparar
una solución límpida de Nitroglicerina Diluida en
Caracteres generales - Cuando se diluye con metanol, equivalente a 400 µg de nitroglicerina por
lactosa, es un polvo blanco inodoro. Si se diluye ml.
con propilenglicol o alcohol es un líquido límpido e Solución muestra - Transferir una porción exac-
incoloro o de color amarillo pálido. [NOTA: la tamente pesada de Nitroglicerina Diluida, equiva-
nitroglicerina no diluida es un líquido denso, explo- lente a 100 mg de nitroglicerina, a un matraz afora-
sivo e inflamable, de un color entre blanco y amari- do de 5 ml, disolver en metanol, completar a volu-
llo pálido]. La Nitroglicerina no diluida es soluble men con el mismo solvente y mezclar. Centrifugar,
en acetato de etilo, acetona, ácido acético glacial, si fuera necesario, para obtener una solución límpi-
alcohol, benceno cloroformo, cloruro de metileno, da.
disulfuro de carbono, éter etílico, fenol, metanol, Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
nitrobenceno y tolueno; poco soluble en agua. placa 20 µl de la Solución muestra, 5, 10, 15 y
Sustancia de referencia - Nitroglicerina Dilui- 20 µl de las Solución estándar y 20 µl de la Solu-
da SR-FA. ción muestra de identificación. Dejar secar las
aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
CONSERVACIÓN que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
damente tres cuartas partes de la longitud de la
En envases inactínicos de cierre perfecto. Con-
placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el fren-
servar a 25°C. Proteger de la exposición al calor
te del solvente y dejar secar al aire. Pulverizar
excesivo.
sobre la placa con Revelador. Irradiarr la placa bajo
Precaución - Considerar la concentración y luz ultravioleta, a 254 y 366 nm durante 15 minutos
cantidad de nitroglicerina (C3H5N3O9) presente en y examinar: ninguna mancha secundaria en el cro-
la Nitroglicerina Diluida, tomando las precaucio- matograma obtenido a partir de la Solución muestra
nes necesarias en el tratamiento de este material. debe ser más intensa que la mancha principal obte-
La Nitroglicerina es un explosivo muy potente y nida con la aplicación de 20 µl de Solución están-
puede detonar por percusión o calor excesivo. No dar. Comparar las intensidades de cualquier man-
debe ser aislada. cha secundaria observada en el cromatograma obte-
nido a partir de la Solución muestra con las man-
ENSAYOS chas principales obtenidas en los cromatogramas de
Identificación la Solución estándar (correspondientes a 0,5, 1,0,
A - Examinar los cromatogramas obtenidos en 1,5 y 2,0 %, respectivamente): la suma de las inten-
Pureza cromatográfica. El valor de Rf de la man- sidades de las manchas secundarias obtenidas a
cha principal en el cromatograma obtenido a partir partir de la Solución muestra no debe ser mayor de
3 %. [NOTA: los valores de Rf para el mononitrato,
dinitrato y trinitrato de glicerina son aproximada-
mente 0,21, 0,37, y 0,61, respectivamente.]
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 220 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro, y si
fuera necesario, emplear una precolumna con la
misma fase estacionaria. El caudal debe ser
aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Metanol y agua (1:1). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Nitroglicerina Dilui-
da SR-FA en Fase móvil y diluir cuantitativamente
con el mismo solvente para obtener una solución de
aproximadamente 0,075 mg de nitroglicerina por
ml.
Preparación muestra - Pesar una porción de
Nitroglicerina Diluida, equivalente a 7,5 mg de
nitroglicerina, transferir a un matraz aforado de
100 ml y disolver en 75 ml de Fase móvil. Sonicar
durante 2 minutos o hasta dispersar por completo el
sólido y agitar durante 30 minutos. Completar a
volumen con Fase móvil, mezclar y filtrar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la eficiencia de la columna no debe ser
menor que 3.000 platos teóricos; el factor de asi-
metría para el pico de Nitroglicerina Diluida no
debe ser mayor de 2,5; la desviación estándar rela-
tiva para inyecciones repetidas no debe ser mayor
de 3,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C3H5N3O9 en la porción de Nitroglice-
rina Diluida en ensayo.
Pasar el Óxido Nitroso a través de un tubo
NITROSO, ÓXIDO detector de Dióxido de Carbono, al caudal
N2O PM 44,0 10024-97-2 especificado por el fabricante (ver Tubos
Definición - Óxido Nitroso debe contener no detectores en 625. Métodos de análisis para
menos de 98,0 por ciento, en volumen, de N2O en Gases Medicinales). No se debe observar cambio
la fase gaseosa, a temperatura de 20 °C y debe de color (descarta la presencia de dióxido de
cumplir con las siguientes especificaciones. carbono).
S CH3
de esta solución hasta 47 ml con agua: el límite es
N
HO OH
0,0075 %.
N Sustancias relacionadas
MÉTODO I
Fase estacionaria - Impregnar un papel de fil-
C11H14N2S C23H16O6 PM: 594,7 22204-24-6 tro de 18 × 56 cm (Whatman Nº 1 o equivalente)
con una solución recientemente preparada mezclan-
Sinonimia - Emboato de Pirantel.
do 7 volúmenes de acetona y 3 volúmenes de solu-
Definición - Pamoato de Pirantel es ción reguladora de cloruro de sodio-glicina-ácido
(E)-1,4,5,6-tetrahidro-1-metil-2-[2-(2-tienil)etenil] clorhídrico, preparada mezclando 3 volúmenes de
pirimidina, compuesto con 4,4'-metilenobis- una solución de glicina y cloruro de sodio 0,3 M
[3-hidroxi-2-naftalencarboxílico] (1:1). Debe con- para ambos compuestos con 7 volúmenes de ácido
tener no menos de 98,0 por ciento y no más de clorhídrico 0,3 M. Prensar uniformemente el papel
102,0 por ciento de C34H30N2O6S, calculado sobre impregnado entre dos hojas de papel absorbente
la sustancia seca y debe cumplir con las siguientes blanco no fluorescente, para eliminar el exceso de
especificaciones. solvente.
Fase móvil - Acetato de etilo, butanol y agua
Caracteres generales - Sólido amarillo o pardo
(10:1:1).
claro. Soluble en dimetilsulfóxido; poco soluble en
Diluyente - Cloroformo, metanol e hidróxido de
dimetilformamida; prácticamente insoluble en agua
amonio (10:10:1).
y metanol.
Soluciones estándar – Preparar dos soluciones
Sustancias de referencia - Ácido Pamoi- de aproximadamente 0,2 y 20 mg por ml de Pamoa-
co SR-FA. Pamoato de Pirantel SR-FA. to de Pirantel SR-FA en Diluyente.
Soluciones muestra - Preparar dos soluciones
CONSERVACIÓN
de aproximadamente 0,2 y 20 mg por ml de Pamoa-
En envases inactínicos bien cerrados. to de Pirantel en Diluyente.
ENSAYOS Procedimiento - Aplicar por separado sobre el
papel 20 l de cada una de las Soluciones estándar
Identificación y 20 l de las Soluciones muestra. Colocar el papel
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. de inmediato en una cámara cromatográfica y des-
B - Absorción ultravioleta <470> arrollar por cromatografía descendente (ver 100.
Concentración: 16 µg por ml. Cromatografía) durante 16 a 20 horas. Retirar de la
Solvente: metanol. cámara, dejar secar al aire durante 10 minutos,
C - Examinar los cromatogramas según se indi- transferir a una estufa con circulación de aire y
ca en Valoración. Los tiempos de retención de los secar a 60 °C durante 30 minutos. Examinar los
picos principales de pirantel base y ácido pamoico cromatogramas bajo luz ultravioleta a 254 nm: los
obtenidos a partir de la Preparación muestra se valores de Rf de las manchas principales obtenidos a
deben corresponder con los obtenidos con la Prepa- partir de las Soluciones muestra se deben corres-
ración estándar. ponder con los obtenidos con las Soluciones están-
Pérdida por secado <680> dar, y a excepción de la mancha principal en el
Secar al vacío a 60 °C durante 3 horas: no debe cromatograma obtenido a partir de la Solución
perder más de 2,0 % de su peso. muestra de mayor concentración, ninguna mancha
debe ser mayor en tamaño o intensidad a la mancha
Determinación del residuo de ignición <270> principal en el cromatograma obtenido con la Solu-
No más de 0,5 %, a partir de 1,33 g. ción muestra de menor concentración.
Límite de metales pesados <590> MÉTODO II
Método II. No más de 0,005 %. Fase estacionaria - Emplear una placa para
Límite de hierro <580> cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Agregar 3 ml de ácido clorhídrico y 2 ml de áci- grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
do nítrico al residuo obtenido en el ensayo de De- grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
terminación del residuo de ignición y evaporar en de espesor.
un baño de vapor hasta sequedad. Disolver el resi-
Fase móvil - Acetato de etilo, agua y ácido acé- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
tico glacial (3:1:1). Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
Solución estándar - Pesar exactamente alrede- las respuestas de los picos según se indica en Pro-
dor de 50 mg de Pamoato de Pirantel SR-FA, trans- cedimiento: los tiempos de retención relativos para
ferir a un matraz aforado de 5 ml, completar a vo- el ácido pamoico y para el pirantel deben ser de
lumen con dimetilformamida y mezclar. aproximadamente 0,6 y 1,0 respectivamente; la
Solución madre de la muestra - Pesar exacta- resolución R entre pirantel y ácido pamoico no debe
mente alrededor de 100 mg de Pamoato de Pirantel, ser menor de 10; el número de platos teóricos para
transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver, el pico de pirantel no debe ser menor de 8.000; el
completar a volumen con dimetilformamida y mez- factor de asimetría para el pico de pirantel no debe
clar. ser mayor de 1,3; la desviación estándar relativa
Solución muestra - Transferir 1 ml de la Solu- para inyecciones repetidas no debe ser mayor de
ción madre de la muestra a un matraz aforado de 1,0 %.
100 ml, completar a volumen con dimetilformamida Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
y mezclar. tamente pesada de Ácido Pamoico SR-FA en Fase
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la móvil para obtener una solución de aproximada-
placa 5 l de la Solución madre de la muestra, 5 l mente 0,52 mg por ml. Transferir 1,0 ml de esta
de la Solución muestra y 5 l de la Solución están- solución a un matraz aforado de 10 ml, completar a
dar. Desarrollar los cromatogramas hasta que el volumen con Fase móvil y mezclar.
frente del solvente haya recorrido aproximadamente Solución muestra - Emplear la Preparación
tres cuartas partes de longitud de la placa. Retirar muestra según se indica en Valoración.
la placa de la cámara y dejar secar al aire durante 10 Procedimiento - Inyectar por separado en el
minutos. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
254 nm. Los cromatogramas obtenidos para la 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
Solución madre de la muestra y la Solución muestra tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
deben presentar manchas separadas correspondien- puestas de los picos según se indica en Valoración.
tes al pirantel y al pamoato que se corresponden a Calcular la cantidad de C23H16O6 en la porción de
las obtenidas con la Solución estándar: el valor de Pamoato de Pirantel en ensayo, a partir de las res-
Rf del pirantel debe ser aproximadamente 0,3 y para puestas de los picos de ácido pamoico obtenidas
el pamoato debe ser aproximadamente 0,8. A ex- con la Solución muestra y la Solución estándar. No
cepción de las dos manchas principales en el croma- debe contener menos de 63,4 % y no más de 67,3 %
tograma obtenido a partir de la Solución madre de de ácido pamoico calculado sobre la sustancia seca.
la muestra, ninguna otra mancha debe ser mayor en VALORACIÓN
tamaño o intensidad a la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución Pesar exactamente alrededor de 450 mg de Pa-
muestra. moato de Pirantel, transferir a un erlenmeyer, agre-
gar 10 ml de anhídrido acético y 50 ml de ácido
Contenido de ácido pamoico acético glacial. Calentar a 50 °C y agitar durante
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo 10 minutos. Dejar enfriar a temperatura ambiente y
para cromatografía de líquidos con un detector titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determi-
ultravioleta ajustado a 288 nm y una columna de nando el punto final potenciométricamente. Reali-
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida zar una determinación con un blanco y hacer las
por partículas porosas de sílice de 5 a 10 µm de correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
diámetro. El caudal debe ser aproximadamente Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
1,0 ml por minuto. 59,47 mg de C11H14N2S C23H16O6.
Fase móvil - Acetonitrilo, ácido acético, agua y
dietilamina (92,8:3:3:1,2). Filtrar y desgasificar.
Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del siste-
ma en 100. Cromatografía). [NOTA: al aumentar
la cantidad de acetonitrilo en la Fase móvil aumen-
tan los tiempos de retención. Al aumentar la canti-
dad de ácido acético, agua y dietilamina reduce los
tiempos de retención. Si es necesario realizar algún
ajuste en la Fase móvil, mantener la proporción
entre ácido acético, agua y dietilamina (1:1:0,4)].
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
PIRAZINAMIDA grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
O Fase móvil - Butanol, agua y ácido acético gla-
cial (60:20:20).
N
Diluyente - Cloruro de metileno y metanol
NH2
(9:1).
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 100 mg de Pirazinamida, transferir a un matraz
N aforado de 10 ml, disolver y completar a volumen
con Diluyente.
C5H5N3O PM: 123,1 98-96-4 Solución estándar A - Transferir 1 ml de Solu-
ción muestra a un matraz aforado de 50 ml y com-
Definición - Pirazinamida es Pirazinacarboxa- pletar a volumen con Diluyente. Transferir 1 ml de
mida. Debe contener no menos de 99,0 por ciento y esta solución a un matraz aforado de 10 ml y com-
no más de 100,5 por ciento de C5H5N3O, calculado pletar a volumen con Diluyente.
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las Solución estándar B - Pesar exactamente alre-
siguientes especificaciones. dedor de 10 mg de Niacina, transferir a un matraz
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco aforado de 10 ml, disolver con Diluyente, agregar
o casi blanco. Moderadamente soluble en agua; 1 ml de Solución muestra y completar a volumen
poco soluble en alcohol, cloroformo y éter. con Diluyente.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Sustancia de referencia - Pirazinami- placa 20 µl de las Soluciones estándar A y B y 20 µl
da SR-FA. de la Solución muestra. Desarrollar los cromato-
CONSERVACIÓN gramas hasta que el frente del solvente haya reco-
rrido aproximadamente tres cuartas partes de la
En envases bien cerrados.
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
ENSAYOS marcar el frente del solvente, dejar secar al aire y
Identificación examinar bajo luz ultravioleta a 254 nm: a excep-
A - Absorción infrarroja <460>. En suspensión. ción de la mancha principal, ninguna mancha en el
B - Absorción ultravioleta <470> cromatograma obtenido a partir de la Solución
Solvente: agua. muestra debe ser más intensa que la mancha princi-
Concentración: 10 µg por ml. pal obtenida con la Solución estándar A (0,2 %). El
Las absortividades a 268 nm, calculadas ensayo sólo es válido si el cromatograma obtenido a
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de partir de la Solución estándar B presenta dos man-
chas completamente separadas.
3,0 %.
C - Calentar a ebullición 20 mg de Pirazinami- VALORACIÓN
da con 5 ml de hidróxido de 5 N: se debe percibir
Pesar exactamente alrededor de 100 mg de Pira-
olor a amoníaco.
zinamida, disolver en 50 ml de anhídrido acético.
Determinación del punto de fusión <260> Titular con ácido perclórico 0,1 N (SV), determi-
Entre 188 y 191 °C. nando el punto final potenciométricamente. Reali-
Determinación de agua <120> zar una determinación con un blanco y hacer las
Titulación volumétrica directa. No más de correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
0,5 %. Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equivale a
12,31 mg de C5H5N3O.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,001 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
Sustancias relacionadas
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
Pérdida por secado <680>
PIRIDOSTIGMINA, Secar al vacío sobre pentóxido de fósforo a
BROMURO DE 100 °C durante 4 horas: no debe perder más de
2,0 % de su peso.
HO
Pesar exactamente alrededor de 150 mg de Clor-
hidrato de Piridoxina, transferir a un erlenmeyer, di-
N HCl
solver en 5 ml de ácido fórmico anhídrido, agregar
50 ml de anhídrido acético y titular con ácido perclóri-
HO co 0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
ciométricamente. Realizar una determinación de un
blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
C8H11NO3 . HCl PM: 205,6 58-56-0 Volumetría). Cada ml de ácido perclórico 0,1 N equi-
Sinonimia - Clorhidrato de la Vitamina B6. vale a 20,56 mg de C8H11NO3 . HCl.
Definición - Clorhidrato de Piridoxina es Clor-
hidrato de 5-hidroxi-6-metil-3,4-piridindimetanol.
Debe contener no menos de 99,0 por ciento y no más
de 101,0 por ciento de C8H11NO3 . HCl, calculado
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las siguien-
tes especificaciones.
Caracteres generales - Polvo cristalino o crista-
les blancos o casi blancos. Estable al aire. Afectado
lentamente por la luz solar. Sus soluciones poseen un
pH de aproximadamente 3. Fácilmente soluble en
agua; poco soluble en alcohol; insoluble en éter.
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Piri-
doxina SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción Infrarroja <460>. En suspensión.
B - Debe responder a los ensayos para Cloru-
ro <410>.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío sobre gel de sílice durante 4 horas:
no debe perder más de 0,5 % de su peso.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
Límite de metales pesados <590>
Método II. No más de 0,003 %.
Contenido de cloruro
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Clor-
hidrato de Piridoxina, transferir a un erlenmeyer con
tapón de vidrio y disolver en 50 ml de metanol. Agre-
gar 5 ml de ácido acético glacial, 2 a 3 gotas de eosi-
na (SR) y titular con nitrato de plata 0,1 N (SV). Cada
ml de nitrato de plata 0,1 N equivale a 3,545 mg de
Cl. Debe contener no menos de 16,9 % y no más de
PIRIMETAMINA Sustancias relacionadas
[NOTA: preparar las soluciones que contengan
la muestra y la Sustancia de referencia en el mo-
CH3 mento de su uso].
N Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
H2N Cl grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
N grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
NH2
Fase móvil - Tolueno, ácido acético glacial,
propanol y cloroformo (76:12:8:4).
C12H13ClN4 PM: 248,7 58-14-0 Diluyente - Cloroformo y metanol (9:1).
Definición - Pirimetamina es 5-(4-Clorofenil)- Solución muestra A - Disolver 250 mg de Piri-
6-etil-2,4-pirimidinodiamina. Debe contener no metamina en Diluyente y diluir a 25 ml con Dilu-
menos de 99,0 por ciento y no más de 101,0 por yente.
ciento de C12H13ClN4, calculado sobre la sustancia Solución muestra B - Diluir 1 ml de Solución
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- muestra A a 10 ml con Diluyente.
ciones. Solución estándar A - Disolver 100 mg de Pi-
rimetamina SR-FA en Diluyente y diluir a 100 ml
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco. con Diluyente.
Poco soluble en acetona, alcohol y cloroformo; Solución estándar B - Diluir 2,5 ml de Solución
prácticamente insoluble en agua muestra A a 100 ml con Diluyente. Diluir 1 ml de
Sustancia de referencia - Pirimetami- esta solución a 10 ml con Diluyente.
na SR-FA. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 20 µl de las Soluciones muestra A y B y 20 µl
CONSERVACIÓN de las Soluciones estándar A y B. Dejar secar las
En envases inactínicos de cierre perfecto. aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente del solvente haya recorrido aproxima-
ENSAYOS
damente tres cuartas partes de la longitud de la
Identificación placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el fren-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. te del solvente y dejar secar al aire. Examinar la
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en placa bajo luz ultravioleta a 254 nm: a excepción de
Sustancias relacionadas, bajo luz ultravioleta a la mancha principal en el cromatograma obtenido a
254 nm. La mancha principal obtenida a partir de partir de la Solución muestra A, ninguna mancha
la Solución muestra B se debe corresponder en debe ser mayor en tamaño o intensidad que la man-
valor de Rf, tamaño e intensidad a la mancha princi- cha principal obtenida con la Solución estándar B
pal obtenida con la Solución estándar A. (0,25 %).
Impurezas comunes <510> Límite de sulfato
Solución estándar y Solución muestra: emplear Solución muestra - Agitar 1,0 g de Pirimetami-
una mezcla de metanol y cloroformo (1:1) como na con 50 ml de agua durante 2 minutos y filtrar.
solvente. Solución de comparación - A
Fase móvil: alcohol n-propílico, ácido acético Procedimiento - A 1,5 ml de solución de sulfato
glacial y agua (8:1:1). (10 ppm) (SL1) agregar 1 ml de cloruro de bario al
Revelador: 2. 25 %, agitar y dejar en reposo durante 1 minuto.
Determinación del punto de fusión <260> Agregar 15 ml de Solución muestra y 0,5 ml ácido
Entre 238 y 242 °C. acético. Proceder del mismo modo con un control
preparado a partir de 15 ml de una mezcla de
Pérdida por secado <680> 12,5 ml de agua y 2,5 ml de solución de sulfato
Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder (10 ppm) (SL). Luego de 5 minutos, si la Solución
más de 0,5 % de su peso. muestra presenta opalescencia, esta no debe ser más
Determinación del residuo de ignición <270> intensa que la del control (80 ppm).
No más de 0,1 %. Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método III.
Solvente: dimetilsulfóxido.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Pi-
rimetamina, disolver en 25 ml de ácido acético
glacial, calentando suavemente para disolver. En-
friar la solución a temperatura ambiente, agregar
4 gotas de rojo de quinaldina (SR) y titular con
ácido perclórico 0,1 N (SV). Realizar una determi-
nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
perclórico 0,1 N equivale a 24,87 mg de
C12H13ClN4.
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
PIROXICAM porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minu-
O O to.
Solución reguladora - Disolver 7,72 g de ácido
S CH3
N
cítrico anhidro en 400 ml de agua y disolver por
separado 5,35 g de fosfato dibásico de sodio en
H
N 100 ml de agua. Agregar la solución de fosfato a la
solución de ácido cítrico, diluir con agua a 1 litro y
O
mezclar.
OH N Fase móvil - Solución reguladora y metanol
(55:45). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
C15H13N3O4S PM: 331,4 36322-90-4 tografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
Definición - Piroxicam es 4-Hidroxi-2-metil- exactamente pesada de Piroxicam SR-FA en ácido
N-2-piridinil-2H-1,2-benzotiazina-3-carboxamida- clorhídrico metanólico 0,01 N para obtener una
1,1-dióxido. Debe contener no menos de 97,0 por solución de aproximadamente 0,25 mg por ml.
ciento y no más de 103,0 por ciento de Transferir 10,0 ml de esta solución a un matraz
C15H13N3O4S y debe cumplir con las siguientes aforado de 50 ml, agregar 25 ml de ácido clorhídri-
especificaciones. co metanólico 0,01 N y 10,0 ml de agua, diluir con
Caracteres generales - Polvo blanco o ligera- ácido clorhídrico metanólico 0,01 N a volumen y
mente amarillo. Inodoro. Poco soluble en alcohol mezclar.
y en soluciones alcalinas acuosas; muy poco soluble Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
en agua, en ácidos diluidos y en la mayoría de los dedor de 50 mg de Piroxicam, transferir a un matraz
solventes orgánicos. aforado de 100 ml, diluir con ácido clorhídrico
metanólico 0,01 N a volumen y mezclar. Transferir
Sustancia de referencia - Piroxicam SR-FA.
10,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
CONSERVACIÓN 100 ml, agregar 50 ml de ácido clorhídrico metanó-
En envases inactínicos de cierre perfecto. lico 0,01 N y 20,0 ml de agua. Diluir con ácido
clorhídrico metanólico 0,01 N a volumen y mezclar.
ENSAYOS Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Identificación Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. las respuestas de los picos según se indica en Pro-
B - Absorción ultravioleta <470> cedimiento: la eficiencia de la columna no debe ser
Solvente: ácido clorhídrico en metanol 1 en menor de 500 platos teóricos, el factor de asimetría
1.200. no debe ser mayor de 1,5; la desviación estándar
Concentración: 10 µg por ml. relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 2,0 %.
Determinación de agua <120> Procedimiento - Inyectar por separado en el
Titulación volumétrica directa. No más de cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
0,5 %. 25 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
Determinación del residuo de ignición <270> muestra, registrar los cromatogramas y medir las
No más de 0,3 %. respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en mg de C15H13N3O4S en la porción de
Límite de metales pesados <590> Piroxicam en ensayo.
Método II. No más de 0,005 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método III.
Solvente: dimetilsulfóxido.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un cromató-
grafo de líquidos equipado con un detector ultravio-
leta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 3,9 mm con fase estacionaria constituida
PLATA, NITRATO DE
AgNO3 PM: 169,9 7761-88-8
Definición - Nitrato de Plata es la Sal de plata
del ácido nítrico. El Nitrato de Plata pulverizado y
secado en la oscuridad sobre gel de sílice durante
4 horas, debe contener no menos de 99,8 por ciento
y no más de 100,5 por ciento de AgNO3 y debe
cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales - Cristales incoloros o
blancos que por exposición a la luz y en presencia
de materia orgánica, se torna gris o negro grisáceo.
El pH de sus soluciones acuosas es aproximada-
mente 5,5. Muy soluble en agua y aun más en agua
a ebullición; fácilmente soluble en alcohol a ebulli-
ción; moderadamente soluble en alcohol; poco
soluble en éter.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Una solución de Nitrato de Plata 1 en 50
debe responder a los ensayos para Plata <410>.
B - En un tubo de ensayo, mezclar una solución
de Nitrato de Plata 1 en 10 con 1 gota de difenila-
mina (SR) y luego verter cuidadosamente sobre
ácido sulfúrico: debe aparecer color azul profundo
en la superficie de contacto.
Aspecto de la solución
Una solución de 2 g de Nitrato de Plata en 20 ml
de agua debe ser límpida e incolora.
Cobre
A 5 ml de una solución de Nitrato de Plata
1 en 10 agregar hidróxido de amonio 6 N, gota a
gota, hasta disolver el precipitado formado: no se
debe producir color azul.
VALORACIÓN
Pulverizar aproximadamente 1 g de Nitrato de
Plata y secar en la oscuridad sobre gel de sílice
durante 4 horas. Pesar exactamente alrededor de
700 mg de la sal seca, disolver en 50 ml de agua,
agregar 2 ml de ácido nítrico y 2 ml de sulfato férri-
co amónico (SR) y titular con tiocianato de amonio
0,1 N (SV). Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias (ver 780.
Volumetría). Cada ml de tiocianato de amonio
0,1 N equivale a 16,99 mg de AgNO3.
Solución estándar C - Disolver 20 mg de fenila-
POLIMIXINA B, lanina en agua y diluir a 10 ml con el mismo sol-
SULFATO DE vente.
O
L-DAB
Solución estándar D - Disolver 20 mg de serina
L-DAB L-Thr L-DAB L-DAB L-DAB D-Phe X
en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
R L-Thr L-DAB L-DAB Solución muestra - Disolver 5 mg de Sulfato de
*
R' , x H2SO4 Polimixina B en 1 ml de una mezcla de volúmenes
H iguales de ácido clorhídrico y agua, calentar a
135 °C en un tubo sellado durante 5 horas y evapo-
DAB = Ácido 2,4-diaminobutírico rar hasta sequedad en un baño de agua. Disolver el
residuo en 0,5 ml de agua.
Polimixina R R’ X FM PM Revelador - Disolver 1,0 g de ninhidrina en
B1 CH3 CH3 L-Leu C56H98N16O13 1.204 50 ml de alcohol y agregar 10 ml de ácido acético
glacial.
B2 H CH3 L-Leu C55H96N16O13 1.190
Procedimiento - [NOTA: realizar las siguientes
B3 CH3 H L-Leu C55H96N16O13 1.190 operaciones protegidas de la luz]. Aplicar por sepa-
B1-I CH3 CH3 L-Ile C56H98N16O13 1.204 rado sobre la placa, en bandas de 10 mm, 5 l de las
Soluciones estándar A, B, C y D y 5 µl de la Solu-
Definición - Sulfato de Polimixina B es una ción muestra. Dejar que la placa se impregne con
mezcla de sulfatos de polipéptidos producidos por los vapores de la Fase móvil, pero sin estar en con-
el crecimiento de cepas de Bacillus polymyxa cuyo tacto con esta, durante al menos 12 horas. Desarro-
principal componente es Polimixina B1. Debe tener llar los cromatogramas hasta que el frente del sol-
una potencia equivalente a no menos de 6.500 Uni- vente haya recorrido aproximadamente tres cuartas
dades de Polimixina B por mg, calculada con res- partes de la longitud de la placa. Retirar la placa de
pecto a la sustancia seca. Polimixina B debe cum- la cámara, marcar el frente del solvente y secar
plir con las siguientes especificaciones. entre 100 y 105 °C. Pulverizar sobre la placa con
Caracteres generales - Polvo blanco o casi Revelador y calentar entre 100 y 105 ºC durante
blanco, higroscópico. Soluble en agua; poco solu- 5 minutos: el cromatograma obtenido a partir de la
ble en alcohol. Solución muestra debe presentar bandas cuyos
valores de Rf se deben corresponder con los obteni-
Sustancia de referencia - Sulfato de Polimixi- das con las Soluciones estándar A, B y C, pero no
na B SR-FA. debe presentar una banda que se corresponda con la
CONSERVACIÓN obtenida con la Solución estándar D. En el croma-
tograma obtenido a partir de la Solución muestra se
En envases inactínicos de cierre perfecto. debe observar una banda con un valor de Rf muy
ENSAYOS bajo, correspondiente al ácido 2,4-diaminobutírico.
C - Debe cumplir con los ensayos para Sulfa-
Identificación
tos <410>.
A - Examinar los cromatogramas obtenidos en
Sustancias relacionadas. Los tiempos de retención Determinación del pH <250>
de los picos correspondientes a Polimixina B1, B2, Entre 5,0 y 7,0; determinado sobre una solución
B3 y B1-I en el cromatograma obtenido a partir de la preparada disolviendo 200 mg de Sulfato de Poli-
Solución muestra se deben corresponder, respecti- mixina B en 10 ml de agua libre de dióxido de car-
vamente, con los obtenidos en la Solución estándar. bono.
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Determinación de la rotación óptica <170>
Fase estacionaria - Emplear una placa para Rotación específica: Entre - 78° y - 90°, con
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato- respecto a la sustancia seca.
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato- Solución muestra: disolver 500 mg de Sulfato
grafía, de 0,25 mm de espesor. de Polimixina B en 25 ml de agua.
Fase móvil - Fenol y agua (75:25).
Solución estándar A - Disolver 20 mg de leuci- Sustancias relacionadas
na en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente. Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Solución estándar B - Disolver 20 mg de treo- para cromatografía de líquidos con un detector
nina en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente. ultravioleta ajustado a 215 nm y una columna de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano desactivado para bases y total-
mente recubierto químicamente unido a partículas Sulfatos
porosas de sílice de 5 m de diámetro. Mantener la Disolver 250 mg de Sulfato de Polimixina B en
columna aproximadamente a 30 °C. El caudal debe 100 ml de agua y ajustar la solución a pH 11 con
ser aproximadamente 1,0 ml por minuto. amoníaco concentrado. Agregar 10 ml de cloruro
Solución de sulfato de sodio - Transferir 4,46 g de bario 0,1 M (SV) y aproximadamente 0,5 mg de
de sulfato de sodio anhidro, exactamente pesados, a púrpura de ftaleína. Titular con edetato disódi-
un matraz aforado de 1 litro y disolver en 900 ml de co 0,1 M (SV), agregando 50 ml de alcohol cuando
agua. Ajustar a pH 2,3 con ácido fosfórico diluido la solución comience a cambiar de color y continuar
y completar a volumen con agua. la titulación hasta la desaparición del color azul-
Fase móvil - Solución de sulfato de sodio y ace- violeta. Cada ml de cloruro de bario 0,1 M equivale
tonitrilo (80:20). Filtrar y desgasificar. Hacer los a 9,606 mg de sulfato. No debe contener menos de
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. 15,5 y no más de 17,5 % de sulfato, calculado con
Cromatografía). respecto a la sustancia seca.
Diluyente - Agua y acetonitrilo (80:20). Pérdida por secado <680>
Solución estándar - Pesar exactamente alrede- Secar a 60 °C durante 3 horas a una presión que
dor de 50 mg de Sulfato de Polimixina B SR-FA y no exceda los 5 mm Hg: no debe perder más de
transferir a un matraz aforado de 100 ml, disolver y 6,0 % de su peso.
completar a volumen con Diluyente.
Solución estándar diluida - Transferir 1 ml de Ensayos de esterilidad <370>
la Solución estándar a un matraz aforado de 100 ml Cuando el Sulfato de Polimixina B esté destina-
y completar a volumen con Diluyente. do a la preparación de formas farmacéuticas de
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor administración parenteral, debe cumplir con los
de 50 mg de Sulfato de Polimixina B, transferir a un requisitos.
matraz aforado de 100 ml, disolver y completar a Ensayo de piretógenos <340>
volumen con Diluyente. Cuando el Sulfato de Polimixina B esté destina-
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - do a la preparación de formas farmacéuticas de
Cromatografiar la Solución estándar y registrar las administración parenteral, debe cumplir con los
respuestas de los picos según se indica en Procedi- requisitos cuando se inyecta 1 ml de una solución
miento: el tiempo de retención para el pico corres- de Sulfato de Polimixina B de aproximadamente
pondiente a Polimixina B1 debe ser aproximada- 1,5 mg por ml en Agua para inyectables por kg del
mente 35 minutos; los tiempos de retención relati- peso corporal del conejo.
vos a Polimixina B1 deben se aproximadamente 0,5
para Polimixina B2, 0,6 para Polimixina B3 y 0,8 VALORACIÓN
para Polimixina B1-I; la resolución R entre los picos Proceder con Sulfato de Polimixina B según se
de Polimixina B2 y Polimixina B3 no debe ser me- indica para Sulfato de Polimixina B en 770. Valora-
nor de 3,0. ción microbiológica de antibióticos.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatografo volúmenes iguales (aproximadamente
ROTULADO
20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
tra. Cromatografiar la Solución muestra durante al Cuando Sulfato de Polimixina B esté destinado
menos 1,4 veces el tiempo de retención del pico de a la preparación de formas farmacéuticas de admi-
Polimixina B1. Registrar los cromatogramas y nistración parenteral, indicar en el rótulo que es
medir las respuestas de todos los picos: ninguna estéril y apirógena.
impureza individual debe ser mayor de 3,0 % de la
respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
ción estándar y la suma de todas las impurezas no
debe ser mayor de 17,0 % de la respuesta del pico
principal obtenido con la Solución estándar. Igno-
rar cualquier pico con una respuesta menor a 0,7
veces la respuesta del pico principal obtenido con la
Solución estándar.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,75 %.
POTASIO, CARBONATO DE
K2CO3 PM: 138,2
584-08-7
Definición - Carbonato de Potasio debe contener
no menos de 99,5 por ciento y no más de 100,5 por
ciento de K2CO3, calculado sobre la sustancia seca y
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales - Polvo granular blanco.
Higroscópico. Fácilmente soluble en agua.
CONSERVACIÓN
En envases bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Una solución de Carbonato de Potasio 1 en 10
debe ser fuertemente alcalina frente a la fenolftaleí-
na (SR).
B - Debe responder a los ensayos para Potasio
<410>.
C - Debe responder a los ensayos para Carbonato
<410>.
Pérdida por secado <680>
Secar a 180 C durante 4 horas: no debe perder
más de 0,5 % de su peso.
Sustancias insolubles
Disolver 1 g de Carbonato de Potasio en 20 ml de
agua: la solución obtenida debe ser transparente e
incolora.
Límite de metales pesados <590>
Disolver 4,0 g de Carbonato de Potasio en 10 ml
de agua, agregar 15 ml de ácido clorhídrico 3 N y
calentar a ebullición. Agregar 1 gota de fenolftaleí-
na (SR) y neutralizar con hidróxido de sodio 1 N hasta
que la solución sea débilmente rosada. Enfriar y diluir
a 25 ml con agua. El límite es 0,0005 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método I.
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 2,5 g de Carbona-
to de Potasio, secar a 180 °C durante 4 horas y trans-
ferir a un erlenmeyer con la ayuda de 50 ml de agua,
agregar 4 gotas de rojo de metilo (SR) y titular con
ácido clorhídrico 1 N (SV) lentamente y con agitación
constante hasta que la solución sea ligeramente rosa-
da. Calentar a ebullición, dejar enfriar y continuar la
titulación. Calentar a ebullición nuevamente y volver a
titular, si fuera necesario, hasta que la coloración rosa
pálido no cambie con la ebullición. Cada ml de ácido
clorhídrico 1 N equivale a 69,11 mg de K2CO3.
Solución muestra - Transferir 1,0 g de Cloruro
POTASIO, CLORURO DE de Potasio a un matraz aforado de 10 ml, diluir en
agua libre de dióxido de carbono y completar a
KCl PM: 74,6 7447-40-7
volumen con el mismo solvente. Transferir 1,0 ml
Definición - Cloruro de Potasio debe contener de esta solución a un matraz aforado de 50 ml y
no menos de 99,0 por ciento y no más de 100,5 por completar a volumen con agua. Transferir 5 ml de
ciento de KCl, calculado sobre la sustancia seca y esta solución a un matraz aforado de 10 ml agregar
debe cumplir con las siguientes especificaciones. 2,0 ml de rojo de fenol (SR1) y 1,0 ml de Solución
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco de cloramina T y mezclar inmediatamente. Luego
o cristales incoloros. Estable al aire. Sus solucio- de 2 minutos agregar 0,15 ml de tiosulfato de so-
nes son neutras al tornasol. Muy soluble en agua a dio 0,1 N, completar a volumen con agua y mezclar.
ebullición; fácilmente soluble en agua; insoluble en Procedimiento - Determinar la absorbancia de
alcohol. la Solución estándar y la Solución muestra con un
espectrofotómetro a 590 nm empleando agua como
CONSERVACIÓN blanco: la absorbancia de la Solución muestra no
En envases bien cerrados. debe ser mayor que la de la Solución estándar.
ENSAYOS Ioduro
Humedecer 5,0 g de Cloruro de Potasio median-
Identificación te el agregado, gota a gota, de 0,15 ml de una solu-
A - Una solución de Cloruro de Potasio debe ción recientemente preparada de nitrito de sodio
responder al ensayo para Cloruro <410>. al 10 %, 2 ml de ácido sulfúrico 1 N, 25 ml de al-
B - Transferir 10,0 g de Cloruro de Potasio a un midón libre de ioduro y 25 ml de agua. Dejar repo-
matraz aforado de 100 ml, disolver en agua libre de sar durante 5 minutos y examinar a la luz natural:
dióxido de carbono y completar a volumen con el no debe observarse coloración azul.
mismo solvente: esta solución debe responder al
ensayo para Potasio <410>. Determinación de aluminio <140>
Cuando en el rótulo se indique que Cloruro de
Acidez o alcalinidad Potasio esté destinado a la preparación de solucio-
Disolver 5,0 g de Cloruro de Potasio en 50 ml nes para diálisis peritoneal, hemodiálisis o hemofil-
de agua libre de dióxido de carbono, agregar 0,1 ml tración, proceder directamente empleando 2,0 g de
de azul de bromotimol (SR1): no se debe consumir Cloruro de Potasio para preparar la Solución mues-
más de 0,5 ml de ácido clorhídrico 0,01 N o tra: el límite es de 1 g por g.
hidróxido de sodio 0,01 N para virar el color de la
solución. Límite de magnesio y metales alcalinos térre-
os
Bario Solución reguladora - Transferir 5,4 g de cloru-
Transferir 10,0 g de Cloruro de Potasio a un ma- ro de amonio a un matraz aforado de 100 ml, disol-
traz aforado de 100 ml, disolver en agua libre de ver con 20 ml de agua, agregar 35 ml de hidróxido
dióxido de carbono y completar a volumen con el de amonio 10 M y completar a volumen con agua.
mismo solvente. A 5 ml de esta solución agregar El pH de la solución debe ser 10,0.
1 ml de ácido sulfúrico 2 N y 5 ml de agua (Solu- Procedimiento - A 200 ml de agua agregar
ción muestra) y a otra porción igual agregar 6 ml de 0,1 g de clorhidrato de hidroxilamina, 10 ml de
agua (Solución blanco). Luego de 15 minutos, las Solución reguladora, 1 ml de sulfato de cinc 0,1 M
soluciones deben ser igualmente claras. y aproximadamente 0,2 g de negro de eriocromo T,
Límite de bromuro calentar aproximadamente a 40 °C y titular con
Solución de cloramina T - Preparar una solu- edetato disódico 0,01 M (SV) hasta que el color
ción de aproximadamente 0,1 mg de cloramina T violeta vire al azul oscuro. Agregar 10,0 g de Clo-
por ml. ruro de Potasio, previamente disuelto en 100 ml de
Solución estándar - Preparar una solución de agua y si el color de la solución vira a violeta, titu-
3 mg de bromuro de potasio por litro. Transferir lar con edetato disódico 0,01 M (SV) hasta punto
5 ml de esta solución a un matraz aforado de 10 ml, final color azul oscuro: no se deben consumir más
agregar 2,0 ml de rojo de fenol (SR1) y 1,0 ml de de 5,0 ml de edetato disódico (0,02 %, calculado
Solución de cloramina T y mezclar. Luego de como calcio).
2 minutos agregar 0,15 ml de tiosulfato de so- Límite de hierro
dio 0,1 M, completar a volumen y mezclar. Solución muestra - Transferir 10,0 g de Cloruro
de Potasio a un matraz aforado de 100 ml, disolver
en agua libre de dióxido de carbono y completar a y emisión atómica). Realizar una curva de calibra-
volumen con el mismo solvente. Transferir 5 ml de ción con las respuestas obtenidas a partir de la So-
esta solución a un matraz aforado de 10 ml y com- lución estándar, trazar la recta que mejor se ajuste y
pletar a volumen con agua. determinar la concentración de sodio de la Solución
Procedimiento - A 10 ml de Solución muestra muestra: no debe contener más de 0,1 %.
agregar 2 ml de una solución de 0,2 g de ácido
Límite de metales pesados <590>
cítrico por ml y 0,1 ml de ácido tioglicólico. Mez- Método IV. Emplear 12 ml de una solución de
clar, alcalinizar con amoníaco y diluir a 20 ml con Cloruro de Potasio de aproximadamente 100 mg
agua. Proceder del mismo modo con 10 ml de por ml en agua libre de dióxido de carbono como
Solución estándar de hierro (ver 580. Límite de Solución muestra y preparar la Solución estándar
hierro) 1 en 10 para obtener una solución control. empleando Solución estándar de plomo (1 ppm). El
Luego de 5 minutos, si la Solución muestra presenta límite es 10 ppm.
color rosa, este no debe ser más intenso que el del
control (20 g por g). Pérdida por secado <680>
Secar entre 100 y 105 °C durante 3 horas: no
Límite de sulfato debe perder más de 1,0 % de su peso.
Solución muestra - Transferir 10,0 g de Cloruro Ensayo de endotoxinas bacterianas <330>
de Potasio a un matraz aforado de 100 ml, disolver Cuando en el rótulo se indique que Cloruro de
en agua libre de dióxido de carbono y completar a Potasio esté destinado a la preparación de formas
volumen con el mismo solvente. Diluir 5 ml de esta farmacéuticas inyectables, debe contener no más de
solución a 15 ml con agua. 8,8 Unidades de Endotoxinas por miliequivalente.
Procedimiento - A 4,5 ml de Solución de sulfa-
to (10 ppm) (SL1) agregar 3 ml de solución de VALORACIÓN
cloruro de bario al 25 %, agitar y dejar reposar Transferir 1,300 g de Cloruro de Potasio a un
durante 1 minuto. A 2,5 ml de esta solución agre- matraz aforado de 100 ml, disolver en agua y com-
gar 15 ml de Solución muestra y 0,5 ml de ácido pletar a volumen con el mismo solvente. A 10 ml
acético 5 N y mezclar. Proceder de igual modo con de esta solución agregar 50 ml de agua, 5 ml de
15 ml de Solución de sulfato (10 ppm) (SL) en ácido nítrico al 12,5 %, 25 ml de nitrato de pla-
lugar de Solución muestra para obtener una solu- ta 0,1 N (SV), 2 ml de ftalato de dibutilo y agitar.
ción control. Luego de 5 minutos, si la solución Titular con tiocianato de amonio 0,1 N (SV) emple-
muestra presenta opalescencia, esta no debe ser más ando 2 ml de sulfato férrico amónico al 10 % como
intensa que la del control (300 ppm). indicador y agitando vigorosamente cerca del punto
Límite de sodio final. Realizar una determinación con un blanco y
NOTA: cuando en el rótulo se indique que Clo- hacer las correcciones necesarias(ver 780. Volu-
ruro de Potasio esté destinado a la preparación de metría). Cada ml de nitrato de plata 0,1 N equivale
soluciones para diálisis de uso peritoneal, hemodiá- a 7,46 mg de KCl.
lisis o hemofiltración, debe cumplir con este requi- ROTULADO
sito.
Solución estándar - Disolver 0,5484 g de cloru- Indicar en el rótulo cuando Cloruro de Potasio
ro de sodio en agua, previamente secado entre 100 y esté destinado a la preparación de formas farmacéu-
105 °C, durante 3 horas, diluir con el mismo sol- ticas inyectables, soluciones para diálisis, hemodiá-
vente para obtener 1 litro y mezclar. Esta solución lisis o hemofiltración.
contiene aproximadamente 200 g de sodio por ml.
Diluir cuantitativamente para obtener no menos de
tres soluciones de concentraciones que se encuen-
tren en el orden de la concentración de la muestra.
Solución muestra - Transferir 1,0 g de Cloruro
de Potasio a un matraz aforado de 100 ml, disolver
en agua, completar a volumen con el mismo solven-
te y mezclar.
Procedimiento - Medir la intensidad de emisión
de la Solución estándar y la Solución muestra al
menos tres veces, en un espectrofotómetro de ab-
sorción atómica con corriente de aire de acetileno a
589 nm (ver 440. Espectrofotometría de absorción
Disolver 0,33 g de Fosfato Dibásico de Potasio
POTASIO, en 10 ml de agua, agregar 6 ml de solución de clor-
FOSFATO DIBÁSICO DE hidrato de hidroxilamina 1 en 10 y 4 ml de solución
de ortofenantrolina, preparada mediante la disolu-
K2HPO4 PM: 174,2 7758-11-4 ción de 1 g de ortofenantrolina en 1 litro de agua
que contenga 1 ml de ácido clorhídrico 3 N, y diluir
Definición - Fosfato Dibásico de Potasio debe
con agua a 25 ml: todo color rojo producido dentro
contener no menos de 98,0 por ciento y no más de
de 1 hora no debe ser más oscuro que el de un con-
100,5 por ciento de K2HPO4, calculado sobre la
trol preparado con 1 ml de Solución estándar de
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
hierro (ver 580. Límite de hierro): no más de
especificaciones.
0,003 %.
Caracteres generales - Polvo granular incoloro
Sodio
o blanco, algo higroscópico. Fácilmente soluble en
Una solución de Fosfato Dibásico de Potasio
agua; muy poco soluble en alcohol.
1 en 10 ensayada en un alambre de platino no debe
CONSERVACIÓN impartir un color amarillo intenso a una llama no
En envases bien cerrados. luminosa (ver Sodio en 410. Ensayos generales de
identificación).
ENSAYOS
Límite de metales pesados <590>
Identificación Solución muestra - Disolver una porción equi-
Una solución de Fosfato Dibásico de Potasio valente a 4,2 g de K2HPO4 en cantidad suficiente de
1 en 20 debe responder a los ensayos para Pota- agua para obtener 50 ml. Transferir 12 ml de esta
sio <410> y Fosfato <410>. solución a un tubo de Nessler de 50 ml.
Determinación del pH <250> Solución estándar - Transferir 1,0 ml de la So-
Entre 8,5 y 9,6, determinado sobre una solución lución estándar de plomo (10 ppm) y 11 ml de agua
1 en 20. a un tubo de Nessler.
Solución control - Transferir 11 ml de la Solu-
Pérdida por secado <680> ción muestra a un tubo de Nessler que contenga
Secar a 105 °C hasta peso constante: no debe 1,0 ml de Solución estándar de plomo (10 ppm).
perder más de 1,0 % de su peso. Procedimiento - Proceder según se indica para
Sustancias insolubles Método I, omitiendo la dilución a 50 ml: el límite es
Disolver 10 g de Fosfato Dibásico de Potasio en 0,001 %.
100 ml de agua caliente, filtrar a través de un crisol Límite de fluoruro
filtrante previamente pesado, lavar el residuo inso- Proceder según se indica en Límite de fluoruro
luble con agua caliente y secar a 105 °C durante en Fosfato Dibásico de Calcio. No más de
2 horas: el peso del residuo obtenido no debe ser 0,001 %.
mayor de 20 mg (0,2 %).
Límite de sal tribásica
Carbonato Disolver 3 g de Fosfato Dibásico de Potasio en
A 1 g de Fosfato Dibásico de Potasio, agregar 30 ml de agua, enfriar a 20 °C y agregar 3 gotas de
3 ml de agua y 2 ml de ácido clorhídrico 3 N: se azul de timol (SR): se debe producir color azul, el
deben producir solo unas pocas burbujas. cual se debe tornar amarillo (con un tinte verdoso)
Límite de cloruro y sulfato <560> al agregar no más de 0,4 ml de ácido clorhídri-
Cloruro - Una porción de 1,0 g de Fosfato Di- co 1 N.
básico de Potasio no debe presentar más cloruro que VALORACIÓN
el correspondiente a 0,40 ml de ácido clorhídri-
co 0,020 N (0,03 %). Transferir 40,0 ml de ácido clorhídrico 1 N a un
Sulfato - Una porción de 0,20 g de Fosfato Di- vaso de precipitados de 250 ml, agregar 50 ml de
básico de Potasio no debe presentar más sulfato que agua y titular potenciométricamente con hidróxido
el correspondiente a 0,20 ml de ácido sulfúri- de sodio 1 N (SV). Registrar el volumen del
co 0,020 N (0,1 %). hidróxido de sodio consumido como blanco. Pesar
exactamente alrededor de 6,5 g de Fosfato Dibásico
Límite de Arsénico <540> de Potasio, transferir a un vaso de precipitados de
Método I. No más de 3 ppm. 250 ml, agregar 50 ml de agua y 50,0 ml de ácido
Límite de hierro <580> clorhídrico 1 N (SV) y agitar hasta disolución. Titu-
lar el exceso de ácido potenciométricamente con
hidróxido de sodio 1 N (SV) hasta el punto de in-
flexión aproximadamente a pH 4 y registrar la lec-
tura de la bureta. Sustraer a esta lectura la lectura
del blanco y designar el volumen de hidróxido de
sodio 1 N resultante de esta resta como A. Conti-
nuar la titulación con hidróxido de sodio 1 N hasta
el punto de inflexión aproximadamente a pH 8,8,
registrar la lectura de la bureta y calcular el volu-
men (B) de hidróxido de sodio 1 N requerido en la
titulación entre los dos puntos de inflexión (pH 4 a
pH 8,8). Cuando A es igual o menor que B, cada ml
de ácido clorhídrico 1 N equivale a 174,2 mg de
K2HPO4. Cuando A es mayor que B, cada ml del
volumen 2B - A de hidróxido de sodio 1 N equivale
a 174,2 mg de K2HPO4.
POTASIO, HIDRÓXIDO DE
KOH PM: 56,1 1310-58-3
Definición - Hidróxido de Potasio debe contener
no menos de 85,0 por ciento de álcali total, calculado
como KOH, y no más de 3,5 por ciento de K2CO3 y
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales - Masas fusionadas blancas
o casi blancas, presentadas en forma de varillas, lente-
jas, cilindros o fragmentos irregulares. Duro y que-
bradizo. Presenta fractura cristalina. Delicuescente.
Absorbe rápidamente dióxido de carbono y humedad
en exposición al aire. Muy soluble en alcohol a ebulli-
ción, fácilmente soluble en agua, alcohol y glicerina.
CONSERVACIÓN
En envases de cierre perfecto.
ENSAYOS
Precaución - Manipular con sumo cuidado, ya
que es altamente cáustico.
Identificación
Una solución de Hidróxido de Potasio (1 en 25)
debe responder a los ensayos para Potasio <410>.
Sustancias insolubles
Disolver 1 g de Hidróxido de Potasio en 20 ml de
agua: la solución debe ser transparente e incolora.
Límite de metales pesados <590>
Disolver 0,67 g de Hidróxido de Potasio en una
mezcla de 5 ml de agua y 7 ml de ácido clorhídri-
co 3 N. Calentar a ebullición, enfriar y diluir con agua
a 25 ml. El límite es 30 ppm (0,003 %).
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 1,5 g de Hidróxido
de Potasio, disolver en 40 ml de agua libre de dióxido
de carbono y enfriar a temperatura ambiente. Agregar
fenolftaleína (SR) y titular con ácido sulfúrico
1 N (SV). Registrar el volumen de ácido consumido
hasta la desaparición del color rosado del indicador,
agregar naranja de metilo (SR) y continuar la titula-
ción hasta color rosado persistente. Realizar una
determinación con un blanco y hacer las correcciones
necesarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
sulfúrico 1 N equivale a 56,11 mg de álcali total, cal-
culado como KOH y cada ml de ácido consumido en
la titulación con naranja de metilo equivale a 138,2 mg
de K2CO3.
POTASIO, IODURO DE Tiosulfato
Disolver 10 g de Ioduro de Potasio en cantidad
suficiente de agua libre de dióxido de carbono para
KI PM: 166,0 7681-11-0
obtener 100 ml. Agregar 0,1 ml de almidón (SR) y
Definición - Ioduro de Potasio debe contener no 0,1 ml de una solución de iodo 0,005 M: se debe
menos de 99,0 por ciento y no más de 101,5 por desarrollar color azul.
ciento de KI, calculado sobre la sustancia seca y debe
Límite de metales pesados <590>
cumplir con las siguientes especificaciones.
Disolver 2,0 g de Ioduro de Potasio en 25 ml de
Caracteres generales - Cristales hexahédricos, agua: el límite es 0,001 %.
transparentes e incoloros o algo opacos y blancos o
Impurezas orgánicas volátiles <520>
polvo granular blanco. Higroscópico. Sus soluciones
Método I.
son neutras o alcalinas frente al tornasol. Muy
soluble en agua; fácilmente soluble en glicerina; VALORACIÓN
soluble en alcohol.
Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Ioduro
CONSERVACIÓN de Potasio y disolver en aproximadamente 10 ml de
agua. Agregar 35 ml de ácido clorhídrico y titular
En envases inactínicos bien cerrados.
con iodato de potasio 0,05 M (SV) hasta que la
ENSAYOS solución de color marrón oscuro que se produce se
torne marrón claro. Agregar 2 ó 3 gotas de
Identificación
Una solución de Ioduro de Potasio debe responder amaranto (SR) y continuar lentamente con la
a los ensayos para Potasio <410> y Ioduro <410>. titulación hasta que el color rojo vire a amarillo.
Realizar una determinación con un blanco y hacer las
Alcalinidad correcciones necesarias (ver 780. Volumetría). Cada
Disolver 1,0 g de Ioduro de Potasio en 10 ml de ml de iodato de potasio 0,05 M equivale a 16,60 mg
agua, agregar 0,1 ml de ácido sulfúrico 0,1 N y 1 gota de ioduro de potasio.
de fenolftaleína (SR): no se debe producir color
rosado.
Pérdida por secado <680>
Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder
más de 1,0 % de su peso.
Iodato
Disolver 10 g de Ioduro de Potasio en cantidad
suficiente de agua libre de dióxido de carbono para
obtener 100 ml. Transferir 10 ml de esta solución a
un tubo de Nessler y agregar 0,25 ml de una solución
de almidón preparada del mismo modo que el
almidón (SR) pero omitiendo el agregado de ioduro
mercúrico rojo [NOTA: preparar la solución de
almidón en el momento de su uso] y 0,2 ml de ácido
sulfúrico diluido. Dejar reposar al resguardo de la
luz durante 2 minutos: no se debe desarrollar color
azul.
Nitrato, nitrito y amoníaco
A una solución de 1 g de Ioduro de Potasio
diluida en 5 ml de agua contenida en un tubo de
ensayo con una capacidad aproximada de 40 ml,
agregar 5 ml de hidróxido de sodio 1 N y
aproximadamente 200 mg de alambre de aluminio.
Insertar una torunda de algodón purificado en la parte
superior del tubo de ensayo y colocar una pieza de
papel de tornasol rojo humedecido sobre la boca del
tubo. Calentar el tubo de ensayo en un baño de vapor
durante 15 minutos: el papel de tornasol no debe
adquirir color azul.
KMnO4 en la porción de Permanganato de Potasio
POTASIO, en ensayo por la fórmula siguiente:
PERMANGANATO DE 0,4718PE - 0,9482V
KMnO4 PM: 158,03 7722-64-7 en la cual 0,4718 es el equivalente en mg de
Definición - Permanganato de Potasio debe KMnO4 por cada mg de oxalato de sodio, PE es el
contener no menos de 99,0 por ciento y no más de peso en mg de oxalato de sodio empleado, 0,9482
100,5 por ciento de KMnO4, calculado sobre la es la cantidad en mg de KMnO4 en cada ml de Per-
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes manganato de Potasio 0,03 N y V es el volumen en
especificaciones. ml de permanganato de Potasio 0,03 N consumido.
Caracteres generales - Cristales púrpura oscu-
ro, casi opacos por transmisión de la luz y que por
reflección de la luz da un brillo azul metálico.
Estable al aire. Fácilmente soluble en agua a ebu-
llición; soluble en agua.
Precaución - Manipular el Permanganato de
Potasio con sumo cuidado, ya que se pueden pro-
ducir explosiones peligrosas si entra en contacto
con sustancias orgánicas o fácilmente oxidables, ya
sea en solución o en estado sólido.
CONSERVACIÓN
En envases bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
Una solución concentrada de Permanganato de
Potasio debe ser color violeta rojizo intenso y color
rosado cuando es una solución diluida; además debe
responder a los ensayos para Permanganato <410>.
Pérdida por secado <680>
Secar sobre gel de sílice durante 18 horas: no
debe perder más de 0,5 % de su peso.
Sustancias insolubles
Disolver 2,0 g de Permanganato de Potasio en
150 ml de agua, previamente calentada en un baño
de vapor y filtrar de inmediato a través de un crisol
filtrante, previamente pesado, de porosidad media.
Lavar el filtro con tres porciones de 50 ml de agua
caliente. Secar el crisol y el residuo a 105 °C du-
rante 3 horas: no se debe obtener más de 4 mg de
residuo (0,2 %).
VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 1.000 mg de
Permanganato de Potasio y transferir a un erlenme-
yer de 500 ml. Por cada mg de Permanganato de
Potasio en ensayo, agregar 2,13 mg de oxalato de
sodio exactamente pesado y previamente secado a
110 °C hasta peso constante. Agregar 150 ml de
agua y 20 ml de ácido sulfúrico 7 N, calentar
aproximadamente a 80 °C y titular el ácido oxálico
en exceso con Permanganato de Pota-
sio 0,03 N (SV). Calcular la cantidad en mg de
Solución de ácido 4-amino-3-hidroxi-1-
PRAZICUANTEL naftalenosulfónico - [NOTA: emplear esta solución
en el día de su preparación]. Triturar en un mortero
5 g de sulfito de sodio, 94,3 g de metabisulfito de
O
sodio y 700 mg de ácido 4-amino-3-hidroxi-1-
naftalenosulfónico. Disolver 1,5 g de esta mezcla
N
en 10 ml de agua, calentando suavemente si fuera
N necesario.
Solución estándar - Disolver 143,3 mg de fos-
O fato monobásico de potasio seco en agua para obte-
ner 1 litro. Transferir 5,0 ml de esta solución a un
matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con
C19H24N2O2 PM: 312, 4 55268-74-1
agua y mezclar. Esta solución contiene el equiva-
Definición - Prazicuantel es lente a 5 µg de fosfato en cada ml.
2-(Ciclohexilcarbonil)-1,2,3,6,7,11b-hexahidro-4H- Solución muestra - A 500 mg de Prazicuantel
pirazino[2,1-a]iso-quinolin-4-ona. Debe contener agregar 30 ml de agua y calentar a ebullición. De-
no menos de 98,5 por ciento y no más de 101,0 por jar enfriar y filtrar, recolectando el filtrado en un
ciento de C19H24N2O2, calculado sobre la sustancia matraz aforado de 50 ml. Lavar el filtro con agua,
seca y debe cumplir con las siguientes especifica- recolectando los lavados en el mismo matraz, com-
ciones. pletar a volumen con agua y mezclar.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Procedimiento - Tratar 10 ml de Solución
o casi blanco. Fácilmente soluble en alcohol y muestra y 10 ml de Solución estándar del siguiente
cloroformo; muy poco soluble en agua. modo. Agregar 5 ml de Solución de sulfato cúpri-
Presenta polimorfismo. co, 2 ml de solución de molibdato de amonio
(3 en 100), 1 ml de Solución de ácido 4-amino-3-
Sustancias de referencia - Prazicuan- hidroxi-1-naftalenosulfónico y 1 ml de solución de
tel SR-FA. Impureza A de Prazicuantel SR-FA: ácido perclórico (3 en 100), mezclar y dejar reposar
2-benzoil-1,2,3,6,7,11b-hexahidro- durante 15 minutos: la Solución muestra no debe
4H-pirazino[2,1-a]isoquinolin-4-ona. Impureza B presentar coloración azul más oscura que la Solu-
de Prazicuantel SR-FA: 2-(ciclohexilcarbonil)- ción estándar (0,05 %).
2,3,6,7-tetrahi-dro-4H-pirazino[2,1-a]isoquinolin-4-
ona. Impureza C de Prazicuantel SR-FA: Límite de metales pesados <590>
2-(N-formilhexahi-drohipuroil)-1,2,3,4- Método II. No más de 0,002 %.
tetrahidroisoquinolin-1-ona. Sustancias relacionadas
CONSERVACIÓN Sistema cromatográfico, Fase móvil y Aptitud
del sistema - Proceder según se indica en Valora-
En envases inactínicos bien cerrados. ción.
ENSAYOS Solución estándar - Disolver cantidades exac-
tamente pesadas de Impureza A, Impureza B e
Identificación Impureza C de Prazicuantel SR-FA en Fase móvil
Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. para obtener una solución con concentraciones de
Determinación del punto de fusión <260> 0,04 mg de cada una por ml.
Entre 136 y 142 °C. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 200 mg de Prazicuantel, transferir a un matraz
Determinación del residuo de ignición <270>
aforado de 10 ml, disolver en Fase móvil, completar
No más de 0,1 %.
a volumen con Fase móvil y mezclar.
Pérdida por secado <680> Procedimiento - Inyectar por separado en el
Secar al vacío a una presión que no exceda los cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
5 mm Hg, a 50 °C sobre pentóxido de fósforo du- 10 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-
rante 2 horas: no debe perder más de 0,5 % de su tra, registrar los cromatogramas y medir las res-
peso. puestas de todos los picos. Los tiempos de reten-
ción relativos deben ser aproximadamente 0,8 para
Límite de fosfato
impureza A, 1,0 para prazicuantel, 1,8 para impure-
Solución de sulfato cúprico - Disolver 250 mg
za B y 2,1 para impureza C. Calcular los porcenta-
de sulfato cúprico y 4,5 g de acetato de amonio en
jes de Impureza A, Impureza B e Impureza C de
ácido acético 2 N para obtener 100 ml de solución.
Prazicuantel en la porción de Prazicuantel en ensa-
yo, a partir de las respuestas de los picos de la sus-
tancia relacionada correspondiente obtenidas con la
Solución muestra y la Solución estándar. No debe
contener más de 0,2 % de cada impureza individual.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 210 nm y una columna de
25 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 10 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1,5 ml por minuto.
Fase móvil - Acetonitrilo y agua (60:40). Fil-
trar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Prazicuantel SR-FA en Fase
móvil y diluir cuantitativamente y en etapas, si fuera
necesario, con Fase móvil para obtener una solución
de aproximadamente 0,18 mg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 36 mg de Prazicuantel, transferir a un
matraz aforado de 20 ml, disolver y completar a
volumen con Fase móvil y mezclar. Transferir
5,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
50 ml, completar a volumen con Fase móvil y mez-
clar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: el factor de asimetría para el pico de
prazicuantel no debe ser mayor de 1,5; la desvia-
ción estándar relativa para inyecciones repetidas no
debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C19H24N2O2 en la porción de Prazicuan-
tel en ensayo.
Impurezas comunes <510>
PREDNISOLONA Solución muestra y Solución estándar: emplear
una mezcla de alcohol y agua (1:1) como solvente.
O Fase móvil: tolueno y alcohol isopropílico
OH
OH CH3 OH (70:30), en una cámara no equilibrada.
H Revelador: 1.
CH3 H Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a 105 °C durante 3 horas: la for-
H H ma anhidra no debe perder más de 1,0 % y la forma
hidratada no más de 7,0 % de su peso.
O
Determinación del residuo de ignición <270>
Inapreciable, determinado sobre 100 mg.
C21H28O5 PM: 360,5 50-24-8
VALORACIÓN
Sesquihidrato PM: 387,5 52438-85-4
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
Definición - Prednisolona es (11)- para cromatografía de líquidos con un detector
11,17,21-Trihidroxipregna-1,4-dieno-3,20-diona. ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no 30 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
más de 102,0 por ciento de C21H28O5, calculado partículas porosas de sílice de 5 a 10 µm de diáme-
sobre la sustancia seca y debe cumplir con las si- tro. El caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml
guientes especificaciones. por minuto.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Fase móvil - Cloruro de n-butilo, cloruro de
o casi blanco. Funde aproximadamente a 235 °C, n-butilo saturado con agua, tetrahidrofurano, meta-
con descomposición. Soluble en metanol y dioxa- nol y ácido acético glacial (95:95:14:7:6). Filtrar y
no; moderadamente soluble en acetona y alcohol; desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
poco soluble en cloroformo; muy poco soluble en Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
agua. Solución del estándar interno - Preparar una so-
Presenta polimorfismo. lución de Betametasona en tetrahidrofurano con una
concentración de 5 mg por ml. Diluir esta solución
Sustancia de referencia - Prednisolo- con cloroformo saturado con agua y mezclar para
na SR-FA. obtener una solución de aproximadamente 0,5 mg
CONSERVACIÓN por ml.
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
En envases inactínicos de cierre perfecto. rededor de 10 mg de Prednisolona SR-FA, disolver
ENSAYOS en 20,0 ml de Solución del estándar interno. Diluir
con cloroformo saturado con agua a 100,0 ml y
Identificación
mezclar.
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
[NOTA: si aparecen diferencias en los espectros,
dedor de 10 mg de Prednisolona, disolver en
disolver porciones de la muestra y de la Sustancia
20,0 ml de Solución del estándar interno, diluir con
de referencia en acetato de etilo, evaporar las solu-
cloroformo saturado con agua a 100,0 ml y mezclar.
ciones hasta sequedad y repetir el ensayo con los
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
residuos.]
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
B - Absorción ultravioleta <470>
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Solvente: metanol.
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
Concentración: 10 µg por ml.
ben ser aproximadamente 0,7 para betametasona y
Las absortividades a 242 nm, calculadas
1,0 para prednisolona; la resolución R entre los
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
picos de prednisolona y betametasona no debe ser
2,5 %.
menor de 3,5; la desviación estándar relativa para
Determinación de la rotación óptica <170> inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Rotación específica: Entre +97° y +103°. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano. cromatógrafo, volúmenes iguales (aproximadamen-
te 10 µl) de la Preparación estándar y la Prepara-
Límite de selenio <610>
ción muestra, registrar los cromatogramas y medir
No más de 0,003 %, determinado sobre 200 mg.
las respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C21H28O5 en la porción de Prednisolona
en ensayo, relacionando las respuestas de los picos
de prednisolona y del estándar interno obtenidas en
la Preparación muestra y la Preparación estándar.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si la Prednisolona es anhidra
o hidratada.
PREDNISOLONA, Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
ACETATO DE para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
O 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por partículas porosas de sílice de 5 µm de diáme-
O
O CH3 tro. El caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml
OH CH3
H por minuto.
OH
Fase móvil - Mezclar 350 ml de acetonitrilo y
CH3 H 600 ml de agua en un matraz aforado de 1 litro.
Completar a volumen con agua y mezclar. Hacer
H H los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en
100. Cromatografía).
O
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
de 25 mg de Acetato de Prednisolona, disolver en
C23H30O6 PM: 402,5 52-21-1 10 ml de metanol y mezclar.
Definición - Acetato de Prednisolona es Solución estándar - Diluir 1 ml de la Solución
(11)-11,17-dihidroxi-pregna-21-(acetiloxi)- muestra a 100 ml con Fase móvil.
1,4-dieno-3,20-diona. Debe contener no menos de Solución de resolución - Disolver 2 mg de Ace-
97,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de tato de Prednisolona SR-FA y 2 mg de Acetato de
C23H30O6, calculado sobre la sustancia seca y debe Hidrocortisona en Fase móvil y diluir a 100 ml con
cumplir con las siguientes especificaciones. el mismo solvente.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
o casi blanco. Funde aproximadamente a 235 °C, las respuestas de los picos según se indica en Pro-
con descomposición. Poco soluble en acetona, cedimiento: la resolución R entre los picos de aceta-
alcohol y cloroformo; prácticamente insoluble en to de prednisolona y acetato de hidrocortisona no
agua. debe ser menor de 2,5.
Sustancia de referencia - Acetato de Predniso- Procedimiento - Inyectar por separado en el
lona SR-FA. cromatógrafo volumenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Solución muestra y la Solución están-
CONSERVACIÓN dar, registrar los cromatogramas durante 2,5 veces
En envases bien cerrados. el tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra y medir las respuestas de todos los
ENSAYOS
picos. A excepción del pico principal en el croma-
Identificación tograma obtenido a partir de la Solución muestra,
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. ningún pico debe tener una respuesta mayor que la
B - Absorción ultravioleta <470> respuesta del pico principal obtenido con la Solu-
Solvente: metanol. ción estándar (1 %); no más de un pico debe ser
Concentración: 10 µg por ml. mayor que la mitad del pico principal obtenido con
Las absortividades a 242 nm, calculadas la Solución estándar (0,5 %); y a excepción del pico
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de principal, la suma de todos los picos no debe ser
2,5 %. mayor que dos veces la respuesta del pico principal
C - A aproximadamente 50 mg de Acetato de obtenido con la Solución estándar. Descartar el
Prednisolona, contenidos en un tubo de ensayo, pico correspondiente al solvente y cualquier pico
agregar 2 ml de alcohol y 2 ml de ácido sulfúrico con una respuesta menor a 0,05 % del pico principal
diluido 1 en 3,5. Calentar suavemente a ebullición de la Solución estándar.
durante aproximadamente 1 minuto: se debe perci-
bir olor a acetato de etilo. VALORACIÓN
Sistema cromatográfico y Fase móvil - Proce-
Determinación de la rotación óptica <170>
der según se indica en Valoración en Prednisolona.
Rotación específica: Entre + 112°y + 119°.
Solución muestra: 10 mg por ml, en dioxano. Solución del estándar interno - Preparar una so-
lución de Betametasona en tetrahidrofurano de
Pérdida por secado <680> aproximadamente 10 mg por ml. Diluir esta solu-
Secar a 105 °C durante 3 horas: no debe perder ción con cloroformo saturado con agua y mezclar
más de 1,0 % de su peso.
para obtener una solución de aproximadamente
1 mg de betametasona por ml.
Preparación estándar - Pesar exactamente al-
rededor de 10 mg de Acetato de Prednisolo-
na SR-FA, transferir a un matraz aforado de 100 ml
y agregar 20,0 ml de Solución del estándar interno.
Disolver, sonicando si fuera necesario, completar a
volumen con cloroformo saturado con agua y mez-
clar. Diluir 5 ml de esta solución a 20,0 ml con
cloroformo saturado con agua para obtener una
solución de aproximadamente 25 µg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 10 mg de Acetato de Prednisolona, trans-
ferir a un matraz aforado de 100 ml y agregar
20,0 ml de Solución del estándar interno. Disolver,
sonicando si fuera necesario, completar a volumen
con cloroformo saturado con agua y mezclar. Di-
luir 5 ml de esta solución a 20,0 ml con cloroformo
saturado con agua.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
ben ser aproximadamente 1,6 para betametasona y
1,0 para acetato de prednisolona; la resolución R
entre los picos de acetato de prednisolona y betame-
tasona no debe ser menor de 3,0; la desviación
estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad en C23H30O6 en la porción de Acetato de
Prednisolona en ensayo, relacionando las respuestas
de los picos de acetato de Prednisolona y del están-
dar interno obtenidas en la Preparación muestra y
la Preparación estándar.
Titulación volumétrica directa. No más de
PREDNISOLONA, 6,5 %.
FOSFATO SÓDICO DE Fosfato
Solución estándar de fosfato - Disolver
O ONa 143,3 mg de fosfato monobásico de potasio seco,
OH
OH CH3 O P O KH2PO4, en agua para obtener 1 litro. Esta solu-
H
ONa ción contiene aproximadamente 0,10 mg de fosfato
CH3 H (PO4) por ml.
Reactivo para fosfato A - Disolver 5 g de mo-
H H libdato de amonio en ácido sulfúrico 1 N para obte-
ner 100 ml.
O
Reactivo para fosfato B - Disolver 350 mg de
sulfato de p-metilaminofenol en 50 ml de agua,
C21H27Na2O8P PM: 484,4 125-02-0 agregar 20 g de bisulfito de sodio, mezclar y diluir
Definición - Fosfato Sódico de Prednisolona es con agua a 100 ml.
21-Fosfato disódico de 11,17,21-trihidroxipregna- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
1,4-dieno-3,20-diona. Debe contener no menos de de 50 mg de Fosfato Sódico de Prednisolona, trans-
96,0 por ciento y no más de 103,0 por ciento de ferir a un matraz aforado de 25 ml, agregar 10 ml de
C21H27Na2O8P, calculado sobre la sustancia anhidra agua y 5 ml de ácido sulfúrico 2 N, mezclar hasta
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. disolución calentando si fuera necesario. Agregar
1 ml de Reactivo para fosfato A y 1 ml de Reactivo
Caracteres generales - Gránulos friables o para fosfato B, completar a volumen con agua,
polvo blanco o amarillento. Levemente higroscópi- mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente
co. Fácilmente soluble en agua; soluble en meta- durante 30 minutos.
nol; poco soluble en alcohol y cloroformo; muy Solución estándar - Transferir 5,0 ml de Solu-
poco soluble en acetona y dioxano. ción estándar de fosfato a un matraz aforado de
Presenta polimorfismo. 25 ml. Proceder según se indica en Solución mues-
Sustancias de referencia - Prednisolo- tra comenzando donde dice "agregar 10 ml de agua
na SR-FA. Fosfato Sódico de Prednisolona SR-FA. y 5 ml...".
Procedimiento - Determinar concomitantemen-
CONSERVACIÓN
te las absorbancias de la Solución muestra y la
En envases inactínicos de cierre perfecto. Solución estándar en celdas de 1 cm, a 730 nm, con
ENSAYOS un espectrofotómetro, empleando agua como blan-
co. La absorbancia de la Solución muestra no debe
Identificación ser mayor que la de la Solución estándar. No debe
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. contener más de 1,0 % de fosfato (PO4).
[NOTA: si los espectros obtenidos presentan dife-
rencias, disolver la muestra y la Sustancia de refe- Límite de Selenio <610>
rencia en un mínimo volumen de alcohol, evaporar No más de 0,003 %; determinado sobre 200 mg.
a sequedad en un baño de agua y registrar nueva- Prednisolona libre
mente los espectros empleando los residuos obteni- Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
dos.] de 50,0 mg de Fosfato Sódico de Prednisolona,
B - El residuo de ignición de aproximadamente transferir a un matraz aforado de 25 ml, completar a
20 mg debe responder a los ensayos para So- volumen con agua y mezclar. Transferir 5 ml de
dio <410> y para Fosfato <410>. esta solución a un tubo de 50 ml con tapón de vi-
Determinación de la rotación óptica <170> drio, agregar 25,0 ml de cloruro de metileno, tapar,
Rotación específica: Entre + 95° y + 102°. mezclar agitando suavemente y dejar reposar hasta
Solución muestra: 10 mg por ml, en una mezcla que la fase de cloruro de metileno sea transparente
de solución reguladora de fosfato de pH 7,0 y agua (aproximadamente 20 minutos).
libre de dióxido de carbono (9:1). Solución estándar - Disolver una a cantidad
exactamente pesada de Prednisolona SR-FA en
Determinación del pH <250> cloruro de metileno y diluir cuantitativamente con
Entre 7,5 y 10,5; determinado sobre una solu- cloruro de metileno para obtener una solución de
ción al 1 %. aproximadamente 16 µg de Prednisolona SR-FA
Determinación de agua <120> por ml.
Procedimiento - Determinar concomitantemen- tar cualquier pico debido al solvente o con una
te las absorbancias de la Solución muestra y la respuesta menor de 0,025 veces la respuesta del
Solución estándar en celdas de 1 cm, a 241 nm, con pico principal obtenido con la Solución estándar.
un espectrofotómetro, empleando cloruro de meti-
VALORACIÓN
leno como blanco. Calcular la cantidad en mg de
prednisolona libre en la porción de Fosfato Sódico Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
de Prednisolona en ensayo: no debe contener más dedor de 100 mg de Fosfato Sódico de Prednisolo-
de 0,5 mg (1,0 %). na, transferir a un matraz aforado de 100 ml, disol-
ver y completar a volumen con agua. Transferir
Sustancias relacionadas
5 ml de esta solución a un matraz aforado de 250 ml
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
y completar a volumen con agua.
para cromatografía de líquidos con un detector
Preparación estándar - Proceder del mismo
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
modo que con la Preparación muestra, pero emple-
15 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
ando Fosfato Sódico de Prednisolona SR-FA.
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
Procedimiento - Determinar la absorbancia de
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal
la Preparación muestra y la Preparación estándar,
debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
en celdas de 1 cm, a la longitud de onda de máxima
Fase móvil - Transferir 1,360 g de fosfato mo-
absorción, aproximadamente 247 nm, con un espec-
nobásico de potasio y 0,600 g de hexilamina a un
trofotómetro y calcular el contenido C21H27Na2O8P
erlenmeyer de 250 ml, mezclar, dejar en reposo
en la porción de Fosfato Sódico de Prednisolona en
durante 10 minutos y luego disolver en 185 ml de
ensayo.
agua. Agregar 65 ml de acetonitrilo y mezclar.
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución muestra - Disolver 62,5 mg de Fosfato
Sódico de Prednisolona en Fase móvil y diluir a
25 ml con Fase móvil.
Solución estándar - Diluir 1 ml de Solución
muestra a 50 ml con Fase móvil.
Solución de Resolución - Disolver 25 mg de
Fosfato Sódico de Prednisolona SR-FA y 25 mg de
Prednisolona SR-FA en Fase móvil y diluir a 25 ml
con Fase móvil. Diluir 1 ml de esta solución a
25 ml con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de Resolución y regis-
trar las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: la resolución R entre los picos de
fosfato sódico de prednisolona y prednisolona no
debe ser menor de 4,5.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Solución estánda y la Solución muestra,
registrar los cromatogramas durante tres veces el
tiempo de retención del pico principal y medir las
respuestas de todos los picos. A excepción del pico
principal en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra, la respuesta de ningún pico debe
ser mayor que la del pico principal obtenido con la
Solución estándar (2,0 %) y no más de uno de estos
picos debe presentar una respuesta mayor a la mitad
del pico principal obtenido con la Solución estándar
(1,0 %); la suma de las respuestas de todos los pi-
cos, a excepción del pico principal, no debe ser
mayor que 1,5 veces la respuesta del pico principal
obtenido con la Solución estándar (3,0 %). Descar-
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
PREDNISOLONA, grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
HEMISUCCINATO DE de espesor, previamente activada por calentamiento
a 105 °C durante 1 hora.
O Fase móvil - Alcohol butílico, ácido acético y
O OH
agua (5:4:1).
OH CH3
O Preparación estándar - Disolver una cantidad
H
OH O exactamente pesada de Hemisuccinato de Predniso-
CH3 H lona SR-FA en una mezcla de alcohol y cloroformo
(50:50) para obtener una solución de aproximada-
H H
mente 8 mg por ml.
O Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
dedor de 80 mg de Hemisuccinato de Prednisolona
C25H32O8 PM: 460,5 2920-86-7 previamente secados, transferir a un matraz aforado
de 10 ml, disolver y completar a volumen con una
Definición - Hemisuccinato de Prednisolona es
mezcla de alcohol y cloroformo (50:50).
(11)-21-(3-Carboxi-1-oxopropoxi)-
Procedimiento - Proceder según se indica para
11,17-dihidroxi-pregna-1,4-dieno-3,20-diona. Debe
Procedimiento en Valoración de un esteroide aisla-
contener no menos de 98,0 por ciento y no más de
do previamente en <750>. Valoración de esteroi-
102,0 por ciento de C25H32O8, calculado sobre la
des, finalizando donde dice: “Centrifugar durante 5
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
minutos,” excepto que se deben aplicar 50 µl en
especificaciones.
lugar de 200 µl de las soluciones sobre la placa.
Caracteres generales - Polvo fino, casi blanco Determinar en sucesión inmediata las absorbancias
con terrones friables. Funde aproximadamente a de las soluciones en celdas de 1 cm a la longitud de
205 °C, con descomposición. Fácilmente soluble onda de máxima absorción, aproximadamente
en alcohol; soluble en acetona; muy poco soluble en 243 nm, con un espectrofotómetro, contra el blanco.
agua. Calcular la cantidad de C25H32O8 en la porción de
Hemisuccinato de Prednisolona en ensayo.
Sustancia de referencia - Hemisuccinato de
Prednisolona SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases de inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida.
B - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: metanol.
Concentración: 20 µg por ml.
Las absortividades a 243 nm, calculadas
sobre la sustancia seca, no deben diferir en más de
3,0 %.
Determinación de la rotación óptica <170>
Rotación específica: Entre + 99° y + 104°.
Solución muestra: 6,7 mg por ml, en dioxano.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío a 65 °C durante 3 horas: no debe
perder más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
Inapreciable; determinado sobre 100 mg.
VALORACIÓN
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
PREDNISONA Pureza cromatográfica
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
O ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
OH
CH3 OH 25 cm × 4,0 mm con fase estacionaria constituida
O
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
CH3 H porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1 ml por minuto.
H H Fase móvil - Cloroformo y metanol (98:2). Fil-
trar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
O (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
C21H26O5 PM: 358,4 53-03-2 de 25 mg de Prednisona y transferir a un matraz
aforado de 20 ml. Disolver en Fase móvil¸ comple-
Monohidrato PM: 376,5 tar a volumen con el mismo solvente y mezclar.
Definición - Prednisona es Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
17,21-Dihidroxipregna-1,4-dieno-3,11,20-triona. Cromatografiar la Solución muestra y registrar las
Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no respuestas de los picos según se indica en Procedi-
más de 102,0 por ciento de C21H26O5, calculado miento: la desviación estándar relativa para inyec-
sobre la sustancia anhidra y debe cumplir con las ciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
siguientes especificaciones. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
aproximadamente 5 µl de la Solución muestra,
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
registrar el cromatograma y medir las respuestas de
o casi blanco, inodoro. Funde aproximadamente a
todos los picos. Calcular el porcentaje de cada
230 °C, con descomposición. Poco soluble en al-
impureza individual en la porción de Prednisona en
cohol, cloroformo, dioxano y metanol; muy poco
ensayo, en relación a las respuestas de todos los
soluble en agua.
picos. No debe contener más de 1,5 % de cualquier
Presenta polimorfismo.
impureza individual y no más de 2,0 % de impure-
Sustancia de referencia - Prednisona SR-FA. zas totales.
CONSERVACIÓN Determinación del residuo de ignición <270>
En envases bien cerrados. Inapreciable; determinado sobre 100 mg.
ENSAYOS VALORACIÓN
Identificación Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
A - Absorción Infrarroja <460>. En fase sólida. para cromatografía de líquidos con un detector
[NOTA: si aparecen diferencias, disolver porciones ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
de la muestra y la Sustancia de referencia en meta- 25 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
nol, evaporar las soluciones hasta sequedad y repe- octadecilsilano químicamente unido a partículas
tir el ensayo.] porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
B - Disolver aproximadamente 6 mg de Predni- caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minu-
sona en 2 ml de ácido sulfúrico y dejar reposar to.
durante 5 minutos: se debe producir un color ana- Fase móvil - Agua, tetrahidrofurano libre de
ranjado. Verter esta solución en 10 ml de agua: el peróxido y metanol (688:250:62). Filtrar y desgasi-
color debe cambiar primero a amarillo y luego ficar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del
gradualmente a verde azulado. sistema en 100. Cromatografía).
Diluyente - Metanol diluido 1 en 2.
Determinación de la rotación óptica <170> Solución del estándar interno - Preparar una so-
Rotación específica: Entre +167° y +175°. lución de acetanilida en Diluyente de aproximada-
Solución muestra: 5 mg por ml, en dioxano. mente 110 µg por ml.
Determinación de agua <120> Preparación estándar - [NOTA: preparar esta
Titulación volumétrica directa. No más de solución en el momento de su uso]. Preparar una
1,0 % para la forma anhidra y no más de 5,0 % para solución de Prednisona SR-FA en Diluyente de
el monohidrato. aproximadamente 0,2 mg por ml. Transferir 5,0 ml
de esta solución y 5,0 ml de Solución del estándar
interno a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con Diluyente y mezclar para obtener una
solución de aproximadamente 20 µg de Prednisona
por ml.
Preparación muestra - [NOTA: preparar esta
solución en el momento de su uso]. Pesar exacta-
mente alrededor de 50 mg de Prednisona, transferir
a un matraz aforado de 250 ml y disolver en Dilu-
yente para obtener una solución de aproximadamen-
te 0,2 mg por ml. Transferir 5,0 ml de esta solución
y 5,0 ml de Solución del estándar interno a un ma-
traz aforado de 50 ml, completar a volumen con
Diluyente y mezclar para obtener una solución de
aproximadamente 20 µg de Prednisona por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
cedimiento: la resolución R entre prednisona y ace-
tanilida no debe ser menor de 3; la desviación
estándar relativa para inyecciones repetidas no debe
ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C21H26O5 en la porción de Prednisona
en ensayo, relacionando las respuestas de los picos
de prednisona y del estándar interno obtenidas con
la Preparación muestra y la Preparación estándar.
ROTULADO
Indicar en el rótulo si la Prednisolona es anhidra
o monohidrato.
concentrado y agitar con 10 ml de Fase móvil.
PRIMAQUINA, Emplear la fase inferior transparente.
FOSFATO DE Solución estándar A - Pesar exactamente alre-
dedor de 50 mg de Fosfato de Primaquina SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 5 ml, disolver con
H
H3CO N agua, completar a volumen con el mismo solvente y
NH2
mezclar. A 1 ml de esta solución agregar 0,2 ml de
CH3 amoníaco concentrado y agitar con 10 ml de Fase
2H3PO4
N
móvil. Emplear la fase inferior transparente.
Solución estándar B - Transferir 3,0 ml de So-
lución muestra a un matraz aforado de 100 ml y
completar a volumen con Fase móvil.
C15H21N3O . 2H3PO4 PM: 455,3 63-45-6 Solución estándar C - Transferir 1,0 ml de So-
Definición - Fosfato de Primaquina es Fosfato lución muestra a un matraz aforado de 10 ml y
de (±)-N4-(6-metoxi-8-quinolinil)-1,4-pentanodia- completar a volumen con Fase móvil. Transferir
mina. Debe contener no menos de 98,5 por ciento y 1,0 ml de esta solución a un matraz aforado de
no más de 101,5 por ciento de C15H21N3O . 2H3PO4, 50 ml y completar a volumen con Fase móvil.
calculado sobre la sustancia seca y debe cumplir Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
con las siguientes especificaciones. Cromatografiar la Solución estándar A y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
Caracteres generales - Polvo cristalino rojo cedimiento: el ensayo sólo es válido si el cromato-
anaranjado, inodoro. Sus soluciones son ácidas grama obtenido presenta, inmediatamente antes del
frente al tornasol. Funde aproximadamente a pico principal, un pico cuya respuesta sea aproxi-
200 ºC. Soluble en agua; insoluble en cloroformo y madamente 6 % de la respuesta del pico principal;
éter. la resolución R entre estos dos picos no debe ser
Sustancia de referencia - Fosfato de Prima- menor de 2,0. Cromatografiar la Solución estándar
quina SR-FA. C y registrar las respuestas de los picos según se
indica en Procedimiento: la relación señal-ruido
CONSERVACIÓN para el pico principal no debe ser menor de 5.
En envases inactínicos bien cerrados. Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
ENSAYOS 20 µl) de la Solución muestra y las Soluciones
Identificación estándar B y C, continuar la cromatografía durante
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. al menos dos veces el tiempo de retención del pico
B - El residuo obtenido por ignición debe res- principal, registrar los cromatogramas y medir las
ponder al ensayo para Pirofosfato según se indica respuestas de todos los picos. A excepción del pico
en Fosfato <410>. principal en el cromatograma obtenido a partir de la
Solución muestra, la suma de las respuestas de
Sustancias relacionadas todos los picos, no debe ser mayor que la respuesta
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo del pico principal en el cromatograma obtenido con
para cromatografía de líquidos con un detector la Solución estándar B (3,0 %). Ignorar el pico
ultravioleta ajustado a 261 nm y una columna de obtenido debido al solvente y cualquier pico cuya
20 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida respuesta sea inferior a la del pico principal en el
por gel de sílice para cromatografía de 10 µm de cromatograma obtenido con la Solución estándar C.
diámetro. El caudal debe ser aproximadamente
3,0 ml por minuto. Pérdida por secado <680>
Fase móvil - Hexano, cloruro de metileno, me- Secar a 105 °C durante 2 horas: no debe perder
tanol y amoníaco concentrado (45:45:10:0,1). Fil- más de 1,0 % de su peso.
trar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios Impurezas orgánicas volátiles <520>
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía). Método I.
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor VALORACIÓN
de 50 mg de Fosfato de Primaquina, transferir a un
matraz aforado de 5 ml, disolver con agua, comple- Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Fos-
tar a volumen con el mismo solvente y mezclar. A fato de Primaquina, disolver en 40 ml de ácido
1 ml de esta solución agregar 0,2 ml de amoníaco acético anhidro, calentando suavemente. Dejar
enfriar y titular con ácido perclórico 0,1 M (SV),
determinando el punto final potenciométricamente.
Realizar una determinación con un blanco y hacer
las correcciones necesarias (ver 780. Volumetría).
Cada ml de ácido perclórico 0,1 M equivale a
22,77 mg de C15H21N3O . 2H3PO4.
placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el frente
PROCAINAMIDA, del solvente y dejar secar al aire. Examinar la placa
CLORHIDRATO DE bajo luz ultravioleta a 254 nm. Pulverizar la placa con
Revelador y examinar a 366 nm: el valor de Rf de la
CH3
mancha principal en el cromatograma obtenido a partir
O de la Solución muestra debe ser similar al obtenido
N CH3 con la Solución estándar.
N HCl
H Determinación del punto de fusión <260>
H2N Entre 165 y 169 C.
Pérdida por secado <680>
C13H21N3O . HCl PM: 271,8 614-39-1 Secar a 105 C durante 4 horas: no debe perder
más de 0,3 % de su peso.
Definición - Clorhidrato de Procainamida es Mo-
noclorhidrato de 4-amino-N-[2-(dietilamino)etil]- Determinación del residuo de ignición <270>
benzamida. Debe contener no menos de 98,0 por No más de 0,1 %.
ciento y no más de 102,0 por ciento de Límite de metales pesados <590>
C13H21N3O . HCl, calculado sobre la sustancia seca y Método II. No más de 0,002 %.
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Límite de ácido p-aminobenzoico libre
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco o Sistema cromatográfico, Fase móvil y Solución de
ligeramente amarillo. Sus soluciones 1 en 10 poseen resolución - Proceder según se indica en Valoración.
un pH entre 5 y 6,5. Muy soluble en agua; soluble en Solución estándar - Pesar exactamente una canti-
alcohol; poco soluble en cloroformo; muy poco solu- dad de Ácido Aminobenzoico SR-FA y disolver en
ble en benceno y en éter. Fase móvil para obtener una solución de aproximada-
Sustancias de referencia - Clorhidrato de Pro- mente 0,25 µg por ml.
cainamida SR-FA. Ácido Aminobenzoico SR-FA. Solución muestra - Transferir 25 ml de la Prepa-
ración estándar empleada en Valoración a un matraz
CONSERVACIÓN aforado de 50 ml. Completar a volumen con Fase
En envases de cierre perfecto. móvil y mezclar para obtener una solución de aproxi-
madamente 0,25 mg por ml.
ENSAYOS
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Identificación Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. las respuestas de los picos según se indica en Proce-
B - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. dimiento: el factor de asimetría para el pico de ácido
Fase estacionaria - Emplear una placa para cro- p-aminobenzoico no debe ser mayor de 2,0. Croma-
matografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) tografiar la Solución estándar y registrar las respues-
recubierta con gel de sílice para cromatografía con tas de los picos según se indica en Procedimiento: la
indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de espesor. desviación estándar relativa para inyecciones repetidas
Fase móvil - Cloroformo, metanol e hidróxido de no debe ser mayor de 3,0 %.
amonio (70:30:0,7). Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
Solución estándar - Preparar una solución de matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Clorhidrato de Procainamida SR-FA en metanol de 20 µl) de la Solución estándar y la Solución muestra,
aproximadamente 0,2 mg por ml. registrar los cromatogramas y medir las respuestas de
Solución muestra - Preparar una solución de los picos principales. Calcular el porcentaje de ácido
Clorhidrato de Procainamida en metanol de aproxima- p-aminobenzoico en la porción de Clorhidrato de
damente 0,2 mg por ml. Procainamida en ensayo, relacionando las respuestas
Revelador - Solución de fluorescamina en acetona de los picos del ácido p-aminobenzoico obtenidas con
1 en 2.000. la Solución muestra y la Solución estándar.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
Impurezas comunes <510>
placa 20 µl de la Solución muestra y 20 µl de la Solu-
Solución estándar y Solución muestra: emplear
ción estándar. Secar las aplicaciones bajo una co-
metanol como solvente.
rriente de nitrógeno y desarrollar los cromatogramas
Fase estacionaria: gel de sílice para cromatograf-
hasta que el frente del solvente haya recorrido aproxi-
ía.
madamente tres cuartas partes de la longitud de la
Fase móvil: cloroformo, metanol e hidróxido de
amonio (70:30:0,7). matógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
Revelador: 1, luego pulverizar sobre la placa con 20 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
una solución 1 en 2.000 de fluorescamina en acetona y muestra, registrar los cromatogramas y medir las
examinar bajo luz ultravioleta a 366 nm. respuestas de los picos principales. Calcular la canti-
dad de C13H21N3O . HCl en la porción de Clorhidrato
Impurezas orgánicas volátiles <520>
de Procainamida en ensayo.
Método I.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para
cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta
ajustado a 280 nm y una columna de 30 cm 3,9 mm
con fase estacionaria constituida por octadecilsilano
químicamente unido a partículas porosas de sílice de
10 µm de diámetro. El caudal debe ser aproximada-
mente 1,0 ml por minuto.
Fase móvil - Agua, metanol y trietilamina
(140:60:1), ajustar a pH 7,5 0,1 con ácido fosfórico.
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Solución madre del estándar - Disolver una canti-
dad de Clorhidrato de Procainamida SR-FA en Fase
móvil para obtener una solución de aproximadamente
0,5 mg por ml.
Preparación estándar - Diluir cuantitativamente
un volumen exactamente medido de la Solución madre
del estándar con Fase móvil para obtener una solu-
ción de aproximadamente 0,05 mg por ml.
Solución de resolución - Disolver una cantidad de
ácido p-aminobenzoico en Fase móvil para obtener
una solución de aproximadamente 0,1 mg por ml.
Transferir 10 ml de esta solución y 10 ml de la Solu-
ción madre del estándar a un matraz aforado de
100 ml, completar a volumen con Fase móvil y mez-
clar.
Preparación muestra - Pesar exactamente alrede-
dor de 50 mg de Clorhidrato de Procainamida y trans-
ferir a un matraz aforado de 100 ml. Disolver, com-
pletar a volumen con Fase móvil y mezclar. Transferir
10,0 ml de esta solución a un segundo matraz aforado
de 100 ml, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de resolución y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Proce-
dimiento: la resolución R entre los picos de ácido
p-aminobenzoico y de procainamida no debe ser me-
nor de 5,0; los tiempos de retención relativos deben
ser aproximadamente 0,5 para ácido p-aminobenzoico
y 1,0 para clorhidrato de procainamida. Cromatogra-
fiar la Preparación estándar y registrar las respuestas
de los picos según se indica en Procedimiento: la
desviación estándar relativa para inyecciones repetidas
no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el cro-
Fase móvil - Agua y alcohol isopropílico
PROGESTERONA (72:28). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-
O tografía ).
H
CH3 Diluyente - Alcohol diluido 85 en 100.
CH3 Solución del estándar interno - Pesar exacta-
mente alrededor de 66 mg de metiltestosterona,
CH3 H transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver en
Diluyente, completar a volumen con el mismo sol-
H H vente y mezclar.
Preparación estándar - Disolver una cantidad
O exactamente pesada de Progesterona SR-FA en
Diluyente para obtener una solución de aproxima-
C21H30O2 PM: 314,5 57-83-0 damente 2,5 mg por ml. Transferir 4,0 ml de esta
solución a un matraz aforado de 10 ml, agregar
Definición - Progesterona es Pre-
1,0 ml de Solución del estándar interno, completar
gn-4-eno-3,20-diona. Debe contener no menos de
a volumen con Diluyente y mezclar para obtener
97,0 por ciento y no más de 103,0 por ciento de
una solución de aproximadamente 1 mg de Proges-
C21H30O2, calculado sobre la sustancia seca y debe
terona SR-FA por ml.
cumplir con las siguientes especificaciones.
Preparación muestra - Pesar exactamente alre-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco dedor de 25 mg de Progesterona, transferir a un
o casi blanco. Es estable al aire. Soluble en alco- matraz aforado de 25 ml, agregar 1,0 ml de Solu-
hol, acetona y dioxano; moderadamente soluble en ción del estándar interno, completar a volumen con
aceites vegetales; prácticamente insoluble en agua. Diluyente y mezclar.
Sustancia de referencia - Progestero- Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
na SR-FA. Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
las respuestas de los picos según se indica en Pro-
CONSERVACIÓN cedimiento: los tiempos de retención relativos de-
En envases inactínicos de cierre perfecto. ben ser aproximadamente 2,0 para progesterona y
1,0 para metiltestosterona; la resolución R entre los
ENSAYOS picos de progesterona y de metiltestosterona no
Identificación debe ser menor de 3,5; la desviación estándar rela-
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. tiva para inyecciones repetidas no debe ser mayor
B - Absorción Ultravioleta <470> de 1,5 %.
Solvente: metanol. Procedimiento - Inyectar por separado en el
Concentración: 10 µg por ml. cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
5 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
Determinación de la rotación óptica <170> muestra, registrar los cromatogramas y medir las
Rotación específica: Entre +175° y +183°. respuestas de los picos principales. Calcular la
Solución muestra: 20 mg por ml, en dioxano. cantidad de C21H30O2 en la porción de Progesterona
Determinación del punto de fusión <260> en ensayo.
Entre 126 y 131 °C.
Pérdida por secado <680>
Secar al vacío sobre gel de sílice durante
4 horas: no debe perder más de 0,5 % de su peso.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
30 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por
octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 10 µm de diámetro. El caudal
debe ser aproximadamente 1,5 ml por minuto.
5 minutos a 5 ºC. Agregar 2 ml de una solución de
PROGUANIL, sulfamato de amonio al 5 %, mezclar y dejar en
CLORHIDRATO DE reposo durante 10 minutos. Agregar 2 ml de una
solución de clorhidrato de N-(1-naftil)etilendiamina
H H H al 0,1 %, diluir a 50 ml con agua, mezclar y dejar en
N N N CH3 reposo durante 30 minutos: se debe producir un
. HCl color magenta que no debe ser más intenso que
NH NH CH3 producido por un control preparado a partir de
Cl
20 ml de una solución de 4-cloroanilina de aproxi-
madamente 1,25 g por ml, tratada del mismo mo-
C11H16ClN5 . HCl PM: 290,2 637-32-1 do (250 ppm).
Sinonimia - Clorhidrato de Clorguanida. Determinación del residuo de ignición <270>
Definición - Clorhidrato de Proguanil es Clor- No más de 0,1 %.
hidrato de 1 (p clorofenil) 5 isopropilbiguanida. Sustancias relacionadas
Debe contener no menos de 99,0 por ciento y no Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
más de 101,0 por ciento de C11H16ClN5 . HCl, cal- para cromatografía de líquidos con un detector
culado sobre la sustancia seca y debe cumplir con ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de
las siguientes especificaciones. 10 cm 5 mm con fase estacionaria constituida por
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco. octadecilsilano químicamente unido a partículas
Moderadamente soluble en alcohol; poco soluble en porosas de sílice de 5 m de diámetro. El caudal
agua pero más soluble en agua caliente; insoluble debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto.
en cloroformo y éter. Fase móvil - 1-Hexanosulfonato de so-
dio 0,01 M en una mezcla de metanol, agua y ácido
CONSERVACIÓN
acético glacial (120:80:1). Hacer los ajustes nece-
En envases inactínicos bien cerrados. sarios (ver Aptitud del Sistema en 100. Cromato-
ENSAYOS grafía).
Solución muestra A - Preparar una solución de
Identificación Clorhidrato de Proguanil al 0,00010 %.
A - Absorción infrarroja <460>. Proceder Solución muestra B - Preparar una solución de
según se indica en Identificación por medio de Clorhidrato de Proguanil al 0,010%.
espectros de referencia. Procedimiento - Inyectar por separado en el
B - Debe responder a los ensayos para Cloru- cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
ro <410>. 10 l) de la Solución muestra A y la Solución mues-
Determinación del punto de fusión <260> tra B, registrar los cromatogramas y medir las res-
A 15 ml de una solución saturada de Clorhidrato puestas de todos los picos. La suma de las respues-
de Proguanil, agregar 2 ml de hidróxido de so- tas de los picos secundarios en el cromatograma
dio 5 N y extraer con 20 ml de éter. Lavar el ex- obtenido a partir de la Solución muestra B no debe
tracto etéreo con agua y evaporar hasta sequedad a ser mayor a la respuesta del pico principal en el
105 ºC. El punto de fusión del residuo debe ser cromatograma obtenido a partir de la Solución
aproximadamente 131 ºC. muestra A (1,0 %).
Acidez o alcalinidad Pérdida por secado <680>
Mantener 35 ml de agua entre 60 y 65 ºC, agre- Secar a 105 ºC hasta peso constante: no debe
gar 0,2 ml de rojo de metilo-azul de metileno (SR), perder más de 0,5 % de su peso.
neutralizar con hidróxido de sodio 0,01 N o ácido VALORACIÓN
clorhídrico 0,01 N, agregar 0,4 g de Clorhidrato de
Proguanil y agitar hasta disolución: la solución Pesar exactamente alrededor de 300 mg de
resultante no debe ser ácida y debe requerir para la Clorhidrato de Proguanil y disolver en un volumen
neutralización no más de 0,2 ml de ácido clorhídri- exactamente medido de anhídrido acético, previa-
co 0,01 N. mente neutralizado con anhídrido acético. Agregar
15 ml de acetato de mercurio (SR) y titular con
4-Cloroanilina ácido perclórico 0,1 N (SV), determinando el punto
Disolver 0,1 g de Clorhidrato de Proguanil en final potenciométricamente. Realizar una determi-
1 ml de ácido clorhídrico 2 N, diluir con agua a nación con un blanco y hacer las correcciones nece-
20 ml y enfriar a 5 ºC. Agregar 1 ml de nitrito de sarias (ver 780. Volumetría). Cada ml de ácido
sodio 0,05 N, mezclar y dejar en reposo durante
perclórico 0,1 N equivale a 14,51 mg de
C11H16ClN5 . HCl.
Pérdida por secado <680>
PROMETAZINA, Secar a 105 °C durante 4 horas: no debe perder
CLORHIDRATO DE más de 0,5 % de su peso.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,1 %.
CH3
N
Sustancias relacionadas
N CH3 Fase estacionaria - Emplear una placa para
HCl cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-
S CH3
grafía) recubierta con gel de sílice para cromato-
grafía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - Acetato de etilo, acetona, alcohol e
hidróxido de amonio (90:45:2:1).
C17H20N2S . HCl PM: 320,9 58-33-3 Solución estándar - Disolver una cantidad exac-
tamente pesada de Clorhidrato de Prometazi-
Definición - Clorhidrato de Prometazina es na SR-FA en cloruro de metileno para obtener una
Monoclorhidrato de (±) N,N, -trimetil-10H-feno- solución de aproximadamente 10,0 mg por ml.
tiazin-10-etanamina. Debe contener no menos de Soluciones estándar diluidas - Preparar una se-
99,0 por ciento y no más de 101,0 por ciento de rie de diluciones cuantitativas de la Solución están-
C17H20N2S . HCl, calculado sobre la sustancia seca dar en cloruro de metileno de aproximadamente
y debe cumplir con las siguientes especificaciones. 0,2; 0,1; 0,05 y 0,025 mg por ml, las cuales corres-
ponden a 2,0; 1,0; 0,5 y 0,25 % de impurezas, res-
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
pectivamente.
a amarillo claro. Se oxida lentamente por exposi-
Solución muestra - Pesar exactamente alrededor
ción prolongada al aire, adquiriendo una coloración
de 100 mg de Clorhidrato de Prometazina y disolver
azul. Fácilmente soluble en agua, alcohol absoluto
en 10,0 ml de cloruro de metileno.
caliente y cloroformo; prácticamente insoluble en
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
éter, acetona y acetato de etilo.
placa 10 µl de la Solución muestra, 10 µl de la
Sustancia de referencia - Clorhidrato de Pro- Solución estándar y 10 µl de cada una de las Solu-
metazina SR-FA. ciones estándar diluidas. Dejar secar las aplicacio-
nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el
CONSERVACIÓN frente del solvente haya recorrido aproximadamente
En envases inactínicos de cierre perfecto. tres cuartas partes de la longitud de la placa. Reti-
rar la placa de la cámara, marcar el frente del sol-
ENSAYOS vente y dejar evaporar. Examinar la placa bajo luz
[NOTA: en todos los procedimientos siguientes, ultravioleta a 254 nm: el valor de Rf de la mancha
proteger las muestras, la Sustancia de referencia y principal en el cromatograma obtenido a partir de la
sus soluciones de la luz. Realizar los procedimien- Solución muestra debe ser similar al obtenido con la
tos rápidamente, empleando material de vidrio Solución estándar. Estimar la concentración de
inactínico.] cualquier mancha secundaria en el cromatograma
de la Solución muestra por comparación con las
Identificación Soluciones estándar diluidas: ninguna impureza
A - Absorción infrarroja <460>. En fase sólida. individual debe ser mayor de 1,0 % y la suma de
B - Debe responder a los ensayos para Cloru- todas las impurezas no debe ser mayor de 2,0 %.
ro <410>.
VALORACIÓN
Claridad de la solución
Preparar por separado sendas soluciones 1 en 10 Pesar exactamente alrededor de 250 mg de
de Clorhidrato de Prometazina en agua y en cloro- Clorhidrato de Prometazina y disolver en una mez-
formo: las soluciones deben ser prácticamente cla de 5 ml de ácido clorhídrico 0,01 N (SV) y
transparentes y presentar una coloración no más 50 ml de etanol. Titular con hidróxido de sodio
intensa que amarillo pálido. 0,1 N (SV), determinando el punto final poten-
ciométricamente (ver 780. Volumetría). Leer el
Determinación del pH <250> volumen agregado entre los dos puntos de inflexión.
Entre 4,0 y 5,0, determinado sobre una solución
1 en 20.
Cada ml de hidróxido de sodio 0,1 N equivale a
32,09 mg de C17H20N2S . HCl.
PROPILENGLICOL Sustancias oxidables
A 10 ml de Propilenglicol agregar 5 ml de agua,
2 ml de una solución de 166 mg de ioduro de pota-
OH sio por ml y 2 ml de ácido sulfúrico diluido. Prote-
OH ger de la luz y dejar reposar durante 15 minutos.
H3C Titular con tiosulfato de sodio 0,05 M (SV) emple-
ando 1 ml de almidón (SR) como indicador. No se
deben consumir más de 0,2 ml de tiosulfato de
C3H8O2 PM: 76,1 57-55-6
sodio 0,05 M (SV).
Definición - Propilenglicol es 1,2-Propanodiol
Sustancias reductoras
y debe cumplir con las siguientes especificaciones.
A 1 ml de Propilenglicol agregar 1 ml de amon-
Caracteres generales - Líquido viscoso, inco- íaco diluido y calentar en un baño de agua a 60 ºC
loro, transparente. Higroscópico. Miscible con durante 5 minutos. La solución no debe desarrollar
agua y alcohol. color amarillo. Agregar inmediatamente 0,15 ml de
Sustancia de referencia - Propilengli- nitrato de plata 0,1 M y dejar reposar durante
col SR-FA. 5 minutos. La solución no debe cambiar su apa-
riencia.
CONSERVACIÓN
Límite de metales pesados <590>
En envases de cierre perfecto. Método IV. Emplear 12 ml de una mezcla de
ENSAYOS 4 ml de Propilenglicol y 16 ml de agua como Solu-
ción muestra y preparar la Solución estándar em-
A - Absorción infrarroja <460>. En película fi- pleando 2 ml de Solución estándar de plomo
na. (1 ppm). El límite es 5 ppm.
B - A 0,5 ml de Propilenglicol agregar 5 ml de
piridina y mezclar. Agregar 2 g de cloruro de ni-
trobenzoílo finamente pulverizado, calentar a ebu-
llición durante 1 minuto y agregar agitando a 15 ml
de agua fría. Filtrar, lavar el precipitado con 20 ml
de solución saturada de bicarbonato de sodio, luego
con agua y secar. Disolver el residuo en alcohol al
80 % v/v en ebullición y filtrar en caliente. Enfriar
y secar entre 100 y 105 ºC. Se deben formar crista-
les que funden entre 123 y 128 ºC (ver Método II en
260. Determinación del punto de fusión).
Acidez
A 10 ml de Propilenglicol, agregar 40 ml de
agua y 0,1 ml de azul de bromotimol (SR1). La
solución debe presentar color amarillo-verdoso y no
se deben consumir más de 0,05 ml de hidróxido de
sodio 0,1 M para hacer virar el color del indicador a
azul.
Determinación de la densidad relativa <160>
Entre 1,035 y 1,040.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. No más de
0,2 %.
Determinación del índice de refracción <230>
Entre 1,431 y 1,433 a 20 ºC.
Determinación del residuo de ignición <270>
Someter a ignición 50 g de Propilenglicol. De-
jar enfriar, humedecer el residuo con ácido sulfúrico
y someter a ignición. Repetir esta operación. El
residuo no debe pesar más de 5 mg (0,01 %).
PROPILPARABENO VALORACIÓN
Pesar exactamente alrededor de 2 g de Propilpa-
O
rabeno, transferir a un recipiente adecuado, agregar
20,0 ml de hidróxido de sodio 1 N (SV) y calentar a
CH3 reflujo durante 1 hora. Enfriar a temperatura am-
O
biente y enjuagar el refrigerante con agua. Titular a
temperatura ambiente el exceso de hidróxido de
HO
sodio con ácido sulfúrico 1 N (SV), continuando la
titulación hasta el segundo punto de inflexión y
C10H12O3 PM: 180,2 94-13-3 determinar el punto final potenciométricamente.
Realizar una determinación con un blanco y hacer
Sinonimia - Nipasol. las correcciones necesarias (ver Titulación residual
Definición - Propilparabeno es el Éster propíli- en 780. Volumetría). Cada ml de hidróxido de
co del ácido 4-hidroxibenzoico. Debe contener no sodio 1 N equivale a 180,2 mg de C10H12O3.
menos de 98,0 por ciento y no más de 102,0 por
ciento de C10H12O3 y debe cumplir con las siguien-
tes especificaciones.
Caracteres generales - Polvo cristalino blanco
o cristales pequeños incoloros. Fácilmente soluble
en alcohol y metanol; poco soluble en agua caliente;
muy poco soluble en agua.
Sustancia de referencia - Propilparabe-
no SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción infrarroja <460>. En suspen-
sión.
B - Examinar los cromatogramas obtenidos en
Pureza Cromatográfica. La mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra B debe ser similar en tamaño y valor de Rf
a la mancha principal obtenida con la Solución
estándar B.
Acidez
Debe cumplir con los requisitos cuando se ensa-
ya según se indica en Acidez en Metilparabeno.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,05 %.
Pérdida por secado <680>
Secar sobre gel de sílice durante 5 horas: no de-
be perder más de 0,5 % de su peso
Determinación del punto de fusión <260>
Entre 95 y 98 ºC.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método II.
Pureza cromatográfica
Proceder según se indica en Pureza cromatográ-
fica en Metilparabeno.
Fase móvil - Cloroformo, 2-propanol y ácido
PROPILTIOURACILO acético glacial (50:6:0,1).
Solución muestra A - Disolver 100 mg de Pro-
H piltiouracilo en metanol y diluir a 10 ml con el
H3C N S
mismo solvente.
NH Solución muestra B - Diluir 1 ml de la Solución
muestra A a 10 ml con metanol.
O Solución estándar A - Disolver 10 mg de Pro-
p