UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA

EXAMEN PRÁCTICO - OPCION “B” COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER

EL TÍTULO DE QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO

POR
Humberto Noe García García

TITULO DEL PROYECTO.-

ENSAYO DE TRATABILIDAD NIVEL II, EN UNA MUESTRA DE SUELO CONTAMINADA

CON GASOLINA

ASESOR: DR. HUGO LUNA OLVERA

Lugar de trabajo: INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA..

Fecha de inicio: 11/10/08 Duración probable: 2 meses

San Nicolás de los Garza, N. L. Diciembre del 2008

INTRODUCCION.-

La Contaminación de suelos y aguas con compuestos derivados de la actividad petrolera: la extracción , el

refino, y el uso de hidrocarburos, es uno de las fuentes mas importantes de impacto ambiental; Uno de los
factores, por los que se considera a los hidrocarburos de esta manera, es que ha pasado a ser un problema
mundial a gran escala. De entre todas las demandas, la de los hidrocarburos es la mayoritaria en la
actualidad. Dado que los países consumidores de hidrocarburos se encuentran muy alejados de los
productores es necesario efectuar su transporte, normalmente por vía marítima, lo que trae como
consecuencia que se produzcan accidentes al igual que en las operaciones de carga y descarga o de
prospección. El consumo anual de petróleo, se estima en 22 mil millones de barriles al año (3,5 108 1)
(Energy Information Administration, International Energy, 1989; Department of energy, Washington, D.C.,
1991 ) Se estima que 1,6 millones de bariles (2,5 108 1) se derraman anualmente en el mar, que representan
aproximadamente el 0,1 % del consumo mundial por año (International Oil Spill Statitistic, 1999; OECD,
1991). Se considera que una cantidad similar se derrama en suelos y acuíferos en los continentes. En nuestro
país, el petróleo crudo y sus derivados son los contaminantes más comunes, los cuales están catalogados
como residuos peligrosos. A nivel nacional, los datos precisos de lugares afectados por contaminantes es muy
limitada; es muy probable que no se tenga una idea exacta, del gran impacto al medio por residuos peligrosos
y en especial por hidrocarburos; A medida que se van conociendo los efectos adversos en el medio y la salud,
crece la atención por desarrollar e implementar tecnologías innovadoras para la recuperación de sitios
contaminados. Existen diferentes tecnologías disponibles para tratar suelos contaminados, los cuales
incluyen excavación y confinamiento, extracción con vapor, estabilización y solidificación; Debido al costo
tan elevado de alguno de estos métodos, así como largos tiempos de tratamiento, los procesos biológicos han
destacado como una de las tecnologías mas atractivas de el saneamiento de sitios contaminados con
hidrocarburos, debido a sus bajos costos, y confiabilidad, por la eliminación parcial o total del contaminante
– con la reducción de su riesgo – asociado y a su aceptación social (Baker y Herson 1994; Loehr, 1992;
Miller, 1997). Actualmente los métodos biológicos, se emplean en un 15 o 20 % de los casos; Uno de los
mas usados es la Biorremediacion la cual evita las desventajas económicas y técnicas; así como los riesgos
que representan las tecnologías mecánicas, requiere menos energía, y es el único método que puede lograr
mineralización de los materiales residuales, liberando productos inocuos. Sin Embargo requiere de más
tiempo y muchas veces no alcanza el nivel de limpieza deseado. Los estudios de tratabilidad Nivel II , son
ensayos de laboratorio que consisten en simular un proceso de tratamiento, con una cantidad pequeña de
material contaminado y que proporcionan información sobre la eficiencia de un proceso de bio-degradación.
Objetivo General:
Determinar, si las tecnologías propuestas podrían alcanzar valores aceptables de limpieza, bajo las
condiciones imperantes en el lugar de tratamiento.

Objetivos específicos.-
Poner a punto el uso de un sistema sencillo, que permita evaluar su eficacia en un proceso de
biorremediacion en el que la muestra problema, presenta contaminación por gasolina.
Material.-
• Muestra de suelo.
• Matraz erlenmeyer de 500 ml y de 1lt
• Matraces tipo Bartha
• Tapones de hule.
• Pipetas
• Pizeta
• Bureta de 25 ml
• Vaso de precipitado
• Algodón
• Fibra de vidrio
• Jeringas
• Matraz aforado de 500ml y de 1lt
• Pistola de silicón
• Parafilm
• Manguera transportadora (fragmento de cable eléctrico hueco)
Reactivos.-
• HCL 0,2 N
• NAOH 0,097N
• BaCl2 al 1%
• Glucosa
• Gasolina premium (comercial)
Indicadores.-
• Fenolftaleina
Metodología.-
RESPIROMETROS

La evolución de CO2 es usada como un indicador de la actividad microbiana y descomposición relativa del
contaminante (Brown, 1983). A tal fin se utilizan equipos según lo descrito por Pramer y Bartha (1965).

Estos equipos están constituidos por un Erlenmeyer, el cual tiene adosado un tubo lateral. El erlenmeyer
contiene el suelo que esta siendo evaluado , y el tubo lateral NaOH 0,097 N donde es retenido el CO2
liberado por el metabolismo de los microorganismos presentes. Ambos recipientes deben permanecer
cerrados mediante tapones de goma. El tapón correspondiente al Erlenmeyer, esta atravesado con una jeringa
para inyección de agua , y un filtro de aire que permite el libre intercambio gaseoso reteniendo el CO2 del
aire que ingresa en el sistema. El tapón el tubo lateral, esta atravesado también, por una jeringa para
inyección de NaOH.

Respirometro tipo Bartha

En los equipos, se coloca una cantidad de muestra equivalente a 100g secos del sistema a evaluar,
manteniendo las condiciones de temperatura (22±2 ºC) y humedad (40 %) constantes.
En los ensayos se prepararon para cada condición a evaluar 5 sistemas:

Sistema Testigo: Tierra sin contaminar.

Sistema + : Tierra + Glucosa
Sistema problema: Suelo contaminado con Gasolina comercial en diferentes concentraciones.-
Sistema contaminado: Tierra + Una concentración de 10,000 ppm
Sistema contaminado: Tierra + Una concentración de 20,000 ppm
Sistema contaminado: Tierra + Una concentración de 30,000 ppm
Sistema contaminado: Tierra + Una concentración de 40,000 ppm

El NaOH recuperado debe ser sustituido cada 24 H, realizando el mismo procedimiento durante 7 dias; El
CO2 producido, es determinado por titulación con HCL 0,2 N , previo agregado BaCl2 al 1 % . Como
indicador de punto final se utiliza fenolftaleina.
Resultados y Discusión.-
Se trabajo, con cuatro niveles de concentración del hidrocarburo problema (10,000 ppm , 20,000 ppm ,
30,000 ppm , y 40,000 ppm.) manteniendo las condiciones de Temperatura (22±2 ºC ) y humedad (40%)
constantes ; y se pudo observar un estimulo en la flora bacteriana presente en el suelo.-
Calculos.-
Mg CO2 producto = [(ml NaOH) – (N NaOH) – (ml HCL) – (N HCl)] 0.022 x 1000
Tomando la relacion: mg de CO2 producido x Tiempo (Dias)

Efecto de Gasolina en la Actividad Metabolica del suelo

240

220

200

180

160
m g de CO2 pr oduci do

Glucosa
140 10,000 ppm
20,000 ppm
120 30,000 ppm
40,000 ppm
100

80

60

40

20

0
1 2 3 4 5 6 7 8
Ti em po di as

La concentración de 40,000 ppm Muestra los mejores resultados: se mantiene por encima de los demás
sistemas durante el periodo de 7 días que dura el experimento , por lo que se presume , es la concentración
que logra la mayor respuesta metabólica microbiana; Esta respuesta pudo estar relacionada con la
biodisponibilidad de algún componente de la mezcla; Datos recientes, indican que la gasolina contiene
varias sustancias, como : benceno, el tolueno, el etilbenceno y los isómeros del xileno, teniendo, el primero
de ellos, un alto poder carcinogénico, al igual que el éter metil tert-butílico,; por lo que a ciencia exacta ,en
este ensayo, no podremos saber cual es el sustrato principal que fue usado en la reacción metabólica.

Conclusión.-
El contenido de materia orgánica del suelo utilizado en procesos de biorremediación a pequeña escala
(Ensayos de tratabilidad Nivel II) o a escala mayor tiene influencia sobre:

• Los niveles de limpieza que pueden alcanzarse.

• La calidad y cantidad de hidrocarburos remanentes.
• El nivel de eliminación de hidrocarburos por procesos bióticos.
• La confiabilidad en el uso de estas metodologías.
REFERENCIAS.-
• Luis G. W., Myriam E. S., Patricia T. G., Rodolfo Q. R., Isela Q. Z.,
Procesos Biotecnológicos – UANL, Pág.: 53,54, y 214, 215.
• Baker, K.H. Y Herson, D. (1994). Bioremediation. McGrawHill.
• Energy Information Administration, International energy Anual, (1989).
Departament of Energy, Washington, D.C., (1991).
• International Oil Spill Statitistic (1990). en http://www.cutter.com/
• Efluentes líquidos en: http://www.estrucplan.com.ar/
• Brown KW. and Associates. (1983). Hazardous waste land treatment.
• Costanza O., Vecchioli G., Giorgieri S., Painceira MT.. (1998). Métodos
analíticos para el análisis de mezclas complejas de hidrocarburos. UFZ-
Bericht Nº 18 : 203-207.
• Vecchioli G., Costanza O., Giorgieri S. and Remmler M.. (1997). Extent of
cleaning achievable by bioremediation of soil contaminated with
petrochemical sludges. J. Chem. Tech. and Biotech. 70 : 331-
336.
• http://es.wikipedia.org/wiki/GasolinaGasolina#Componentes
• http://www.gasolineras.us/inflamable/seccion/gasolina/componentes_de_la_gasolina/
• http://noticias.uanl.mx/descripcion.php?id_not=3906
Puntos importantes.-
1.- Que otros métodos de limpieza de suelo (esterilización o eliminación de residuos se pueden
utilizar además del expuesto en el escrito.?
- Esterilizacion por Radiacion UV, Rayos GAMA

2.- El uso de este tipo de tecnología (Ensayo de Tratabilidad Nivel 2), podría facilitar la
remediación de suelos a largo plazo, obteniendo como beneficio principal, el desarrollo de
métodos efectivos y baratos, para el uso a escala mayor.