Filogenia moleculara a familiei de

pesti de apa dulce Cobitidae

Încadrarea sistematică
I. Subfamilia Cobitinae
Regnul Animalia Acanthopsis
Acanthopsoides II. Subfamilia Botiinae
Phylum: Chordata Acanthophthalmus Botia
Clasa: Actinopterygii Acantopsis Chromobotia
Bibarba Leptobotia
Ordin: Cypriniformes Cobitis Parabotia
Enobarbichthys Sinibotia
Familia: Cobitidae Iksookimia Syncrossus
Koreocobitis Yasuhikotakia
GENURI Kottelatlimia
Lepidocephalichthys
Lepidocephalus
29 GENURI???, 160 Misgurnus
SPECII Neoeucirrhichthys
Niwaella
În România: Cobitis Pangio
danubialis, Cobitis tanaitica, Paralepidocephalus
Cobitis megaspila(zvârlugi), Paramisgurnus
Sabanejewia bulgarica Protocobitis
(dunăriţă), Misgurnus fosslis Sabanejewia
(ţipar, chişcar) Serpenticobitis
Somileptes
• Tabelul 1. Genuri incluse în familia de peşti de apă
dulce Cobitidae

Nalbant (1963) -12 genuri, dar recent acelaşi autor (Nalbant, 1994) consideră 16 genuri valide.
Nelson (1984) - 18 genuri sunt incluse în familia Cobitidae (incluzând şi Botiidae).Nelson (2006)
- Cobitidele (fără Botiidae) -19 genuri Eschmeyer (2007) - 18 genuri. În total, 22 de genuri au
fost recent considerate valide.
 Caractere morfologice
• Peşti de apă dulce, cu corpul alungit, puternic comprimat
lateral, cu solzi mărunţi, cicloizi. Linia laterală adesea puţin
vizibilă. Gura inferioară mică, cu buze cărnoase şi 6-10
"mustăţi". La unele specii, buza inferioară adânc lobată, cu lobi
alungiţi, luând aspect de "mustăţi", numite "mentale" (o
pereche sau două). Ochii mici în anumite cazuri rudimentari.
Orificiile branhiale înguste. Dinţi faringieni totdeauna pe un
singur rând. Vezica înotătoare redusă, închisă într-o capsulă
osoasă. Peşti bentonici, dulcicoli, reofili sau stagnofili.
Cobitidele pot fi recunoscute ca un grup distinct pe baza
prezenţei unui spin suborbital bifurcat.
• Masculii sunt mai mari decât femelele, iar la baza înotatoarelor
pectorale au un apendice solzos – canestrin.
• dimorfismul sexual secundar: modificarea înnotătoarelor
pectorale şi umflarea corpului;
corpului
 Filogenia Cobitidaelor – caractere morfologice
• Prima ipoteză filogenetică Ramaswami (1953) pe baza caracterelor osteologice - două
grupuri: I) genul Pangio (sinonim cu Acanthophthalmus), Lepidocephalichthys şi
Acantopsis şi II) Cobitis, Misgurnus şi Canthophrys (sinonim cu Somileptes).
• Nalbant (1963) - Misgurnus - cea mai primitivă linie a Cobitidaelor, o a doua linie -
Cobitis, Sabanejewia, Niwaella şi posibil Canthophrys şi o a treia linie - (Acantopsis,
Acantopsoides), (Paralepidocephalus, (Lepidocephalus, Lepidocephalichthys),
(Eucirrichthys, (Cobitophis, Pangio).
• Nalbant (1994) Cobitis, Iksookimia, Niwaella, Paralepidocephalus şi Sabanejewia - linie
monofiletică înrudită cu genul Misgurnus şi o cladă : Acanthopsoides şi Acantopsis.
 Filogenia Cobitidaelor-
caractere moleculare
• -analiza filogenetică a secvenţei unor gene
mitocondriale şi nucleare în cadrul familiei
Cobitidae.
• Scopul acestui studiu : să identifice relaţiile
monofiletice, să stabilească principalele linii ale
Cobitidaelor şi să le compare cu actualul concept
privitor la genurile Cobitidelor.
 Materiale şi metode
 143 de indivizi din 52 de specii ce reprezintă 16 din cele 19 genuri
curente valide ale familiei Cobitidae
 Tehnici de laborator:
I. ADN extras din ţesut muscular sau înotătoare cu kit Dneasy Tissue Kit
(Qiagen) sau un protocol standard cu chloroform şi fenol (Sambrook et al.,
1989).
PCR

Primeri Glu-L.Ca14337–14359: 5’-GAA GAA CCA

CCG TTG TTA TTC AA-3’;
GENA Cyt b
MITOCONDRIALĂ Thr-H.Ca15568–15548: 5’-ACC TCC RAT CTY
CGG ATT ACA-3’
Primeri RAG-1F: 5’-AGC TGT AGT CAGTAY
GENA CAC AAR ATG-3’,
RAG-1
NUCLEARĂ
RAG-9R: 5’-GTG TAG AGC CAG TGR TGY
TT-3’
RAG-RV1: 5’-TCC TGR AAG ATY TTG TAG
AA-3’.
 Cyt b – 1141 pb Analiza datelor
RAG-1 – 910 PB • Testul omogenităţii de partiţie
-programul PAUP*- testul ILD (the
incongruencelength difference)
• Construirea arborilor filogenetici
- BI (Bayesian inference) cu programul
SECVENŢIERE MrBayes 3.1 şi ML (Maximum likelihood) cu
programul GARLI v. 0.9
- altgoritmul NJ în programul PAUP;
SeqMan II -software
LaseGene • Testul “ceasului molecular”- pe secvenţa cyt
(DNASTAR); b corelată cu evenimentele paleogeografice;
Clustal W -testul LTR (Likelihood ratio test);
-compararea cu scorurile likelihood ale arborilor
obţinuţi prin ML cu sau fără parametrul
molecular clock în PAUP;
ALINIEREA SECVENŢELOR
 Rezultate
• În urma analizei probelor, grupul reprezentat de genurile Cobitis, Iksookimia, Niwaella,
Kichulchoia, Koreocobitis, Misgurnus, Paramisgurnus şi Sabanejewia constituie clada
nordică. Genurile Acanthopsoides, Acantopsis, Canthophrys, Kottelatlimia,
Lepidocephalichthys,Lepidocephalus, Neoeurirrhichthys şi Pangio constituie linia sudică
(Figurile 2 şi 4).
CLADA NORDICĂ
• Cea mai evidentă contradicţie se referă la genul
Misgurnus: în timp ce analizele bazate pe RAG-1
certifică că toţi indivizii analizaţi aparţin acestei
linii, analizele pentru cyt b arată că o parte a
speciilor genului Misgurnus fac parte din Cobitis.
• Analizele secvenţei genei RAG-1 arată că
reprezentanţii europeni ai genului Cobitis
formează o linie monofiletică, în timp ce arborii
formaţi cu secvenţa cyt b sunt polifiletici
Divergenţa în timp a Cobitidaelor