Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
LUCRĂRI PRACTICE
CUPRINS
Teste imunologice în laboratorul clinic
Reacţia antigen-anticorp
A. Reacţii imnochimice folosite în laboratorul clinic
1. Reacţia de precipitare
a) Reacţia de precipitare în mediul solid
- Difuzia în gel
- Imunodifuzia radială simplă
- Dubla difuzie în gel
- Difuzia combinată cu migrarea electroforetică
- Imunoelectroforeza
- Contraimunelectroforeza
- Electroimunodifuzia
- Imunofixarea
b) Reacţia de precipitare în mediul lichid
- Reacţia de precipitare în inel
- Imunonefelometria
2. Reacţia de aglutinare
a) Reacţia de aglutinare directă
b) Reacţia de aglutinare indirectă
c) Reacţia de inhibare a aglutinării
d) Reacţia de aglutinare mediată de anticorpi anti-imunoglobuline
3. Reacţia de neutralizare
4. Reacţii ce utilizează complement
a) Reacţia de fixare a complementului
b) Testul de imunohemoliză pasivă în prezenţa complementului
c) Determinarea imunohemolitică a complementului
5. Reacţii cu reactivi marcaţi
a) Reacţia de imunofluorescenţă
- Reacţia de imunofluorescenţă directă
- Reacţia de imunofluorescenţă indirectă
- Reacţia de imunofluorescenţă cu fixarea complementului
b) Analiza radioimunologică
c) Analiza imunoenzimatică
-Tehnica ELISA
6. Tehnica Western Blot
B. Metode şi tehnici de imunocitologie
1. Tehnica pentru celule lupice
2. Testul reducerii NBT
3. Chemiluminiscenţa
4. Testul inhibiţiei aderenţei leucocitelor
5. Imunofenotiparea cu ajutorul citometriei în flux
6. Testul de transformare blastică a limfocitelor
7. Reacţia de limfocitotoxicitate
C. Principalele reacţii antigen-anticorp şi aplicaţiile acestora
Teste imunologice în laboratorul clinic
Reacţia antigen-anticorp
Reacţia de precipitare
Difuzia în gel
Difuziile în gel se grupează în trei categorii: difuzia simplă, difuzia dublă, difuzia
combinată cu migrarea în câmp electric.
Se utilizează gel de agar sau agaroză în concentraţie de 0,8-1,6 g % (conţinutul
mare de apă permite moleculelor de Ag şi Ac să migreze liber în gel). Difuzia poate fi
accelerată de aplicarea unui câmp electric (contraimunoelecroforeză).
În cazul dublei difuzii, are loc difuzia ambilor reactanţi. În acazul difuziei simple
are loc difuzia unuia către celălalt reactant înglobat în faza solidă. Într-o zonă relativ
îngustă se creează datorită gradientului de concentraţie condiţii optime pentru
imunoprecipitare. În gelul transparent apar linii sau zone opace. Liniile se pot deplasa
până când se ajunge la echilibrul sistemului ag-Ac. Nivelul liniilor corespunde numărului
minim de sisteme Ag-Ac.
Imunoelectroforeza
Contraimunelectroforeza
Electroimunodifuzia
Imunofixarea
Imunonefelometria
În prezenţa unei cantităţi fixe de Ac sau Ag, complexele Ag-Ac precipitate într-o
suspensie, modifică intensitatea şi dispersia luminii proporţional cu concentraţia Ag sau
Ac.
Complexarea Ag cu Ac specific atinge o valoare maximă stabilă în aprox. 60 sec.
Deoarece formarea complexelor care dispersează lumina este dependentă de prezenţa în
proporţii optime a moleculelor de Ag şi Ac pentru o cantitate constantă de Ac (respectiv
Ag), gradul de complexitate creşte proporţional cu cantitatea de Ag (respectiv de Ac)
până la un maximum, după care Ag în exces determină scăderea progresivă a
complexităţii; din această cauză se recomandă ca determinările nefelometrice să fie
executate în exces moderat de Ac. Avantajele constau în rapiditatea obţinerii rezultatelor
(automatizarea determinărilor).
Evaluarea se exprimă în mg/l, automat în funcţie de curba existentă în memoria
nefelometrului
Dezavantajele nefelometriei constau în costul ridicat al aparaturii şi
imposibilitatea determinării directe a proteinelor în probele icterice, hemolizate sau
lactescente.
Metoda este limitată şi de deficienţe ce pot să apară în sistemele mecanice şi
electronice ale instalaţiei.
2. Reacţia de aglutinare
3. Reacţia de neutralizare
a) Reacţia de imunofluorescenţă
c) Analiza imunoenzimatică
Tehnica ELISA
3. Chemiluminiscenţa
5. Reacţia de limfocitotoxicitate
Material biologic
Se foloseşte sânge total (puncţie în deget)
Modul de lucru
I. Testul pe lamă
A.Testul rapid
-Se pune o picătură de anti-A, Anti-B, Anti-AB pe o lamă de sticlă
-Se adaugă o picătură mică de sânge total şi se omogenizează bine
-Se roteşte uşor lama timp de 2 min.
-Se observă apariţia aglutinării. Aglutinarea apare între 30-60 sec
Rezultatele negative pot fi semnalate după 2 min.
B.Testul cu incubare
-Se prepară o suspensie de celule 5-10% în soluţie salină izotonică sau se foloseşte sânge
total
-Se pune o picătură din fiecare reactiv Anti-A, Anti-B, anti-AB pe o lamă
-Se adaugă o picătură de suspensie ori o picătură mică de sânge şi se amestecă bine
-Se incubează 15-30 min. la temperatura de 200C
-Se amestecă uşor şi se observă apariţia aglutinării
Reactivul anti-D
Anticorpi monoclonali umani din clasa IgM, obţinuţi din culturi celulare
Se păstrează la 2-80C
Conservare cu NaN3-0,1%
Reactivul este pentru diagnosticul in vitro
Reactivi
Conţine anticorpi monoclonali de origine umană din clasa IgM, obţinut din culturi
celulare. Specificitatea şi reproductibilitatea sunt proprietăţi bine cunoscute la anticorpii
monoclonali.
Majoritatea reactivilor anti-D monoclonali aparţin clasei de IgM.
Modul de lucru
I. Testul pe lamă
A. Testul rapid
Testul trebuie efectuat pe o suprafaţă ce are temperatura cuprinsă între 20-370C
-Se pune o picătură de reactiv Anti-D pe lamă
-Se adaugă o picătură mică de sânge total. Se omogenizează bine.
-Se roteşte energic lama 2 min. Se observă dacă apare aglutinarea
-Se citeşte rezultatul după 2 min. (suprafaţa uscată poate fi interpretată ca o reacţie fals-
pozitivă.
B. Testul cu incubare
Se poate folosi sânge total sau suspensia de celule
-Se prepară o suspensie de 5-10% din celule ce trebuie testate în soluţie salină izotonică
sau se foloseşte sânge total
-Se pune câte o picătură de reactiv anti-D în cerculeţele lamei, ce se vor folosi
-Se adaugă o picătură de suspensie sau o picătură mică de sînge total şi se omogenizează
bine
-Se incubează 30 minla 20-370C
-Se agită uşor lama şi se observă aglutinarea
-Se pregăteşte o suspensie 3-5% din celule ce trebuie testate în soluţie salină izotonică
-Se pune o picătură de reactiv anti-D în tubul-probă
-Se adaugă în fiecare tub o picătură din suspensia de celule şi se omogenizează bine
-Se centrifughează 2 min. la 1000 rpm
-Se dislocă uşor butonul de celule şi se observă prezenţa aglutinării.
Dacă reacţia este negativă se incubează tubul 15 min. la 200C, se centrifughează 2 min la
1000 rpm, se dislocă uşor butonul de celule şi se observă aglutinarea.
Anti-A Anti-B Anti-AB
Grupa A + - +
Grupa B - + +
Grupa O - - -
Grupa AB + + +
Principiul metodei
Reactivul folosit este o suspensie de particule latex de polistiren încărcate cu
streptolizina O stabilizată.
Reactivul a fost astfel preparat încât, în prezenţa unui titru ASLO normal de 200
ui/ml sau mai crescut, să dea o aglutinare vizibilă a particulelor latex, fără diluarea
serului.
Reactivi
1 flacon cu reactiv latex de 5 ml
1 flacon cu control pozitiv de 1 ml
1 flacon cu control negativ de 1 ml
1 plăcuţă pe care se efectuează reacţia
Material biologic
Serul de cercetat trebuie să fie clar şi proaspăt.
Plasma, serul lipemic ori contaminat poate determina erori în obţinerea
rezultatelor. Dacă testul nu poate fi efectuat imediat, atunci serul se păstrează la 2-80C,
maximum 72 ore. Pentru o perioadă mai îndelungată serul trebuie să fie păstrat congelat.
Modul de lucru
Interpretarea testului
Reacţia ASLO negativă: obţinerea unei suspensii lăptoase, fără aglutinare, ca cea
observată la controlul negativ
Reacţia ASLO pozitivă: obţinerea unei aglutinări observată în cercul probei
asemănătoare cu cea observată la controlul pozitiv.
Reacţia ASLO indică starea de imunitate antitoxică faţă de streptococ.
Valori normale: între 0-200 ui
Valori crescute:
I. > 200 ui
La pacienţii care au avut în ultimele trei luni o angină streptococică sau alte
infecţii streptococice
II. > 300 ui
În infecţii streptococice: glomerulonefrită acută streptococică, scarlatină, purpură
reumatoidă
III. 600-2500 ui
În reumatismul articular acut, reacţia ASLO ajută în stabilirea diagnosticului
retrospectiv al bolii, deoarece titrul anticorpilor antistreptolizină O se menţine crescut
timp de câteva luni după puseul reumatismal acut.
Titrul ASLO creşte odată cu evoluţia puseului reumatismal. Reacţia ASLO este
pozitivă în stenoză mitrală, amigdalită acută streptococică, endocardita streptococică
lentă.
Observaţii
Reactivii conţin azidă de sodiu ce se poate combina cu Cu şi Pb, putând asfel
deveni explozibili.
Controlul pozitiv şi negativ a fost preparat din ser uman care a fost testat folosind
metoda licenţiată FDA şi s-a demonstrat că nu reacţionează cu anticorpii pentru AgHBs
şi HCV.
Toate probele umane pot fi considerate potenţial infectate.
Reactivii şi controalele sunt stabile până la data expirării, dacă sunt păstrate la
temperatura de 2-80C. Reactivii nu se păstrează la congelator.
Testul este utilizat pentru identificarea proteinei C reactive (CRP) în ser pentru
diagnosticul unor afecţiuni inflamatorii sau pentru monitorizarea inflamaţiei.
Principiul metodei
Reactivul CRP este o suspensie de particule latex de polistiren, marcate cu o
fracţiune de gamaglobulină a serului anti-uman CRP specific. Când CRP este prezentă în
probă, se observă o aglutinare ce indică un conţinut de 6 mg/l.
Reactivi
1 flacon cu reactiv latex de 5 ml
1 flacon cu control pozitiv de 1 ml
1 flacon cu control negativ de 1 ml
1 plăcuţă pe care se efectuează reacţia
Material biologic
Se foloseşte ser clar şi proaspăt.
Plasma, serul lipemic, ori contaminat poate duce la erori în obţinerea rezultatelor.
Dacă testul nu poate fi făcut imediat, serul se păstrează la 2-80C, pentru 72 de ore.
Pentru o perioadă mai îndelungată, serul trebuie păstrat congelat.
Modul de lucru
-Se aduc reactivii şi probele la temperatura camerei înaintea folosirii cu 30 min.
-Se pun 2 picături (50 µ l) de control (+) în primul cerc şi 2 picături în al doilea cerc al
plăcuţei de testare
-Se pune o picătură (45 µ l) de ser nediluat din fiecare probă în cercurile ce urmează
-Se agită uşor suspensia de reactiv latex
-Se pune în fiecare cerc folosit o picătură (45 µ l)
Pentru omogenizare se foloseşte un beţişor pentru fiecare test efectuat
-Se roteşte plăcuţa 2 minute şi se citeşte rezultatul imediat în dreptul unei surse de lumină
Interpretarea rezultatelor
Reacţia negativă: apariţia unei suspensii lăptoase, fără aglutinare, ca cea observată
în controlul negativ
Reacţia pozitivă: orice aglutinare observată la proba asemănătoare celei observate
la controlul pozitiv
Proteina C reactivă nu este prezentă în serul pacienţilor aparent sănătoşi.
Determinarea CRP poate servi la monitorizarea activităţii inflamatorii, fie ca
rezultat al terapiei, fie al remisiunii spontane
Valori normale: <6 mg/l
Valori crescute:
I. În faza iniţială a inflamaţiei în
-infecţii bacteriene: pneumonii
-infarct miocardic, stări postoperatorii, afecţiuni maligne, mielom
multiplu, lupus eritematos sistemic (LES)
II. Alte afecţiuni
-febre reumatice, afecţiuni reumatice diverse, colagenoze, tuberculoza
activă
Observaţii
Reactivii conţin azidă de sodiu ce se poate combina cu Cu şi Pb, putând deveni
explozibili.
Controlul pozitiv şi negativ din ser uman, a fost testat prin metoda licenţiată FDA
şi s-a demonstrat că nu reacţionează cu anticorpii pentru AgHBs şi HIV.
Toate probele umane pot fi considerate potenţial infectate.
Reactivii şi controalele sunt stabile până la data expirării, dacă sunt păstrate la
temperatura de 2-80C, maximum 72 de ore. Reactivii nu se păstrează congelaţi.
Principiul metodei
Reactivul pentru factorul reumatoid (FR) este o suspensie de particule latex de
polistiren încărcate cu IgG uman. Sensibilitatea reactivului FR detectează o concentraţie
minimă de 8 ui/ml, în acord cu WHO Internaţional Standard, fără diluarea probei. În mod
practic, particulele de polistiren-latex învelite cu gamaglobulină denaturată sunt
aglutinate de seruri ce conţin FR.
Reactivi
1 flacon cu reactiv latex de 5 ml
1 flacon cu control pozitiv de 1 ml
1 flacon cu control negativ de 1 ml
1 plăcuţă pe care se efectuează testul
Material biologic
Se foloseşte ser clar şi proaspăt.
Plasma, serul lipemic sau contaminat poate duce la erori în obţinerea rezultatelor.
Dacă testul nu poate fi făcut imediat, serul se păstrează la 2-80C, pentru 72 de ore. Pentru
o timp mai îndelungat, serul trebuie păstrat congelat.
Modul de lucru
-Se aduc reactivii şi probele la temperatura camerei înaintea folosirii cu 30 min
-Se pun 2 picături (50 µ l) de control (+) în primul cerc şi 2 picături în al doilea cerc al
plăcuţei de testare
-Se pune o picătură (45 µ l) de ser nediluat din fiecare probă în cercurile ce urmează
-Se agită uşor suspensia de reactiv latex
-Se pune în fiecare cerc folosit o picătură (45 µ l)
Pentru omogenizarea conţinutului se foloseşte un beţişor pentru fiecare test efectuat
-Se roteşte plăcuţa 2 minute şi se citeşte rezultatul imediat în dreptul unei surse de lumină
Interpretarea rezultatelor
Reacţia negativă: apariţia unei suspensii lăptoase, fără aglutinare, ca cea observată
în controlul negativ
Reacţia pozitivă: orice aglutinare observată la proba întocmai celei observate la
controlul pozitiv
Factorii reumatoizi sunt imunoglobuline cu activitate de anticorpi. FR sunt
prezenţi la pacienţii care prezintă poliartrită reumatoidă (PR). În continuare se recomandă
folosirea testului Waaler-Rose-test specific pentru determinarea FR împotriva IgG de
animal
Factorul reumatoid este prezent şi la persoanele aparent sănătoase. Peste vârsta de
60 de ani, frecvenţa FR este de 5-6%
Valori normale: între 0-6 ui/ml
Valori patologice:
Reacţia pozitivă: poliartrită reumatoidă; boli de colagen (la 10-50%), ex: lupus
eritematos sistemic, sclerodermie; unele disglobulinemii (ex: Kala-Azar, maladia
Waldenström)
Reacţia negativă: gută, reumatism articular acut, artroze
Observaţii
Reactivii conţin azidă de sodiu ce se poate combina cu Cu şi Pb, putând deveni
explozibili.
Controlul pozitiv şi negativ din serul uman, a fost testat prin metoda licenţiată
FDA şi s-a demonstrat că nu reacţionează cu anticorpii pentru AgHBs şi HIV.
Toate probele umane pot fi considerate potenţial infectate.
Reactivii şi controalele sunt stabile până la data expirării, dacă sunt păstrate la
temperatura de 2-80C. Reactivii nu se congelează.
Serurile contaminate sau citirea mai târziu de 3 min., pot da reacţii fals-pozitive.
Nu se poate pune un diagnostic doar pe baza unui singur test, este necesară corelarea cu
datele clinice.
Principiul metodei
Reactivul Waaler-Rose este o suspensie stabilizată de hematii de oaie sensibilizate
la rândul lor cu anti IgG de şoarece. Sensibilitatea reactivului este pentru a detecta o
cantitate minimă de FR de 6 ui/ml în acord cu WHO Internaţional Standard), fără
diluarea probei.
Material biologic
Se foloseşte serul clar şi proaspăt.
Plasma, serul lipemic, ori contaminat poate duce la erori în obţinerea rezultatelor.
Dacă testul nu poate fi făcut imediat, serul se păstrează la 2-80C, pentru 72 de ore. Pentru
un timp mai îndelungat, serul trebuie păstrat congelat.
Modul de lucru
I. Testul calitativ
Acest test se realizează prin efectuarea unor diluţii succesive ale serului în soluţie
salină izotonică.
Diluţii 12 14 18 116
100 µ l
100 µ l
100 µ l
Volumul probei 50 µ l 50 µ l 50 µ l 50 µ l
Interpretarea rezultatelor
Valori normale: între 0-6 ui/ml
Valori patologice: poliartrita reumatoidă (95% dintre cazuri), în unele colagenoze
(lupusul eritematos sistemic, dermatomiozită), în unele forme de neoplasm şi unele
hemopatii maligne, intr-un numar mare de afecţiuni reumatismale ale copilăriei
(spondilartrita anchilozantă), boli infecţioase (sifilis, TBC, hepatita virală), boli
respiratorii (astm bronşic, fibroza pulmonară, bronşite).
Observaţii
Reactivii conţin azidă de sodiu ce se poate combina cu Cu şi Pb, putând deveni
explozibili.
Controlul pozitiv şi negativ din ser uman, a fost testat prin metoda licenţiată FDA
şi s-a demonstrat că nu reacţionează cu anticorpii pentru AgHBs şi HIV.
Toate probele umane pot fi considerate potenţial infectate.
Reactivul se va agita bine înainte de folosire, astfel încât suspensia să fie bine
omogenizată.
Sensibilitatea testului depinde de volumul picăturii (50 µ l). Reactivii şi
controalele sunt stabile până la data expirării, dacă sunt păstrate la temperatura de 2-8 0C.
Reactivul nu se păstrează congelat.
Serurile contaminate sau citirea mai târziu de 3 min., pot da reacţii fals-pozitive.
Nu se poate pune un diagnostic doar pe baza unui singur test, este necesară corelarea cu
datele clinice.
Principiul metodei
Testul pentru identificarea AgHBs este un test rapid se efectuează din ser, este util
în diagnosticul infecţiei cu virusul hepatitic B.
Rezultatul testului poate fi citit vizual, fără niciun instrument.
Testul se bazează pe principiul determinării semicantitative a AgHBs din ser, cu
ajutorul metodei imunoenzimatice de tip “sandwich”. Anticorpii monoclonali şi
policlonali sunt folosiţi pentru identificarea AgHBs cu o înaltă sensibilitate. Testul
durează aprox. 15 min.
Reactivi
25 de plăcuţe imunocromatografice
Reactivul 1=enzima conjugată
Reactivul 2=soluţia de spălare
Reactivul 3=soluţia revelatoare
Material biologic
Pacientul nu necesită o pregătire prealabilă.
-Se recoltează sânge fără anticoagulant
-Se lasă sângele să se coaguleze
-Se separă serul
Dacă probele nu pot fi testate în ziua recoltării, serul se păstrează în frigider sau congelat.
Nu se recomandă congelare şi decongelare repetată.
-După decongelare, serul se omogenizează bine.
Modul de lucru
-Se aduc toţi reactivii, plăcuţa şi toate materialele necesare la temperatura camerei înainte
de efectuarea testului cu 30 min. Nu se amesteca capacele eprubetelor ce conţin probe
-Se adaudă 300-400 µ l de ser în situsul de testare. Se lasă serul să se absoarbă complet
-Se adaugă 2 picături Reactiv 1 (Enzima conjugată).
-Se lasă soluţia să se absoarbă complet. Se aşteaptă 10 min.
-Se adaugă 8 picături Reactiv 2 (Soluţia de spălare) în situsul de testare.
-Se lasă ca soluţia să se absoarbă complet.
-Se îndepărtează filtrul
-Se adaugă 3 picături Reactiv 3 (Revelator de culoare) în situsul de testare.
-Se lasă ca soluţia să se absoarbă complet.
-Se adaugă încă 5 picături Reactiv 3
-Se citeşte rezultatul după 3 min.
Interpretarea rezultatelor
Negativ: sunt vizibile doar cele 3 spoturi mici
Intens pozitiv: toate cele trei spoturi mici şi spotul mare sunt vizibile, iar spotul
mare este intens colorat
Slab pozitiv: apar cele 3 spoturi mici şi spotul central, dar spotul mare nu foarte
intens colorat
Neconcludent: când spotul central este vizibil, dar cele mici nu sau când nu apare
nici un spot. Se repetă testul
Observaţii
Kitul trebuie păstrat la temperatura de 2-80C. După deschiderea pachetului, kitul
poate fi păstrat la temperatura camerei o săptămână, dar nu la temperaturi mai mari de
300C. Flaconul cu reactiv reprezintă enzima conjugată şi trebuie păstrată la 2-80C.
Principiul metodei
Reactivul este o suspensie de particule latex de polistiren ]nc[rcate cu
gamaglobulină anti-HBs înalt purificată. Când AgHBs este prezent în probă se observă o
aglutinare evidentă.
Reactivi
1 flacon cu reactiv latex de 5 ml
1 flacon cu control pozitiv de 1 ml
1 flacon cu control negativ de 1 ml
1 plăcuţă pe care se efectuează reacţia
Material biologic
Se foloseşte ser clar şi proaspăt. Probele pot fi păstrate la 2-80C pentru 48 de ore,
înainte de efectuarea testului. Pentru o perioadă mai lungă serul trebuie păstrat congelat
Modul de lucru
-Se aduc reactivii şi probele la temperatura camerei cu 30 min. înaintea folosirii
-Se agită uşor reactivul pentru dispersia particulelor şi pentru omogenizare
-Pentru fiecare probă se pregăteşte o eprubetă etichetată şi se adaugă în 2 ml soluţie
salină izotonică, 50 µ l de probă (diluţie 1/40)
-Se pipetează 1 picătură de control negativ şi pozitiv nediluat în câte un cerculeţ al
plăcuţei.
-Se pipetează 50 µ l de probă diluată într-un cerculeţ al plăcuţei şi 50 µ l de probă
nediluată într-un alt cerculeţ
-Se adaugă o picătură de suspensie latex AgHBs în fiecare cerculeţ utilizat. Se amestecă
ambele picături de pe plăcuţă cu un beţişor
-Se roteşte plăcuţa manual sau cu un rotator (60-80 rpm) timp de 5 min.
-Se citeşte imediat lângă o sursă de lumină aglutinarea
-Sensibilitatea testului descreşte proporţional cu temperatura camerei
Observaţii
Reactivii conţin azidă de sodiu care în contact cu plumbul şi cuprul ţevilor poate
forma azidă metalică explozivă. După îndepărtarea reactivilor se spală sistemul de
scurgere cu un volum mare de apă.
Reactivii se aruncă sub jet de apă pentru a preveni formarea de azidă metalică
explozivă .
Controlul pozitiv prezintă caracteristicile antigenice nu şi pe cele infecţioase.
Totuşi, nici o metodă de testare nu poate oferi siguranţa absolută.
Toate probele umane pot fi considerate potenţial infectate.
Principiul metodei
Acesta este un test rapid pentru identificarea anticorpilor anti-HBs în ser, fiind util
în diagnosticul infecţiei cu virusul hepatitic B. Rezultatele pot fi citite vizual.
Testul se bazează pe principiul determinării semicantitative a anticorpilor anti-
HBs în ser cu ajutorul metodei imunoenzimatice de tip “sandwich”. Anticorpi sintetici şi
recombinaţi sunt folosiţi pentru identificarea specifică a anticorpilor anti-HBs, metoda
prezintă o sensibilitate crescută.
Anticorpii anti-HBs mai mici de 10 mui/l pot fi detectaţi în 10-15 min.
Spotul mare sau linia celor 3 spoturi mici ne ajută la citirea rezultatelor pozitive şi
negative. Cele 3 spoturi mici servesc pentru controlul intern. Spotul mic central este un
control slab pozitiv, celelalte 2 spoturi laterale sunt pentru controlul intens pozitiv. Aceste
spoturi apar cînd reacţia imunoenzimatică este completă
Reactivi
25 de pliculeţe imunocromatografice
R1 Enzima conjugată
R2 Soluţia de spălare
R3 Soluţia de developare
Kitul se păstrează la temperatura de 2-80C. După deschiderea pachetului, acesta
poate fi păstrat la temperatura camerei o săptămână, dar nu la temperaturi mai mari de
300C.
Flaconul cu enzima conjugată trebuie păstrat la 2-80C.
Material biologic
Pacientul nu necesită în prealabil o pregătire. Se recoltează sânge într-o eprubetă
fără anticoagulant. Se lasă sângele să se coaguleze şi se separă serul. Dacă probele nu pot
fi lucrate în ziua recoltării, serul se păstrează în frigider sau congelator. Se evită
congelarea şi decongelarea repetată. După decongelare serul trebuie să se omogenizeze.
Modul de lucru
-Se aduc toţi reactivii, plăcuţa, probele şi toate materialele necesare la temperatura
camerei înainte de efectuarea testului. Pentru fiecare test se foloseşte o singură casetă.
-Cu pipeta se adaugă 3 picături de soluţie de spălare (R2) în dispozitivul de testare. Se
lasă să se absoarbă complet soluţia înaintea continuării testării.
-Se adaugă 300-400 µ l de ser în situsul de testare.
-Se adaugă 2 picături de Reactiv 1 (Enzima conjugată). Se lasă reactivul să se absoarbă
complet (se aşteaptă 10 min).
-Se adaugă 8 picături de Reactiv 3 (Soluţia de developare) în situsul de testare. Din nou
se lasă să se absoarbă complet
-Se adaugă alte 5 picături de Reactiv 3. Se lasă 2 min
-Se citeşte rezultatul
Interpretarea rezultatelor
Negativ: sunt vizibile doar cele 3 spoturi mici
Intens pozitiv: Sunt vizibile toate cele 3 spoturi mici şi spotul mare. Spotul mare
este intens colorat
Slab pozitiv: Apar cele 3 spoturi mici şi spotul mare central, dar spotul mare nu
este foarte intens colorat
Neconcludent: Când spotul central este vizibil, dar cele mici nu sunt vizibile sau
când nu apare nici un spot. În această situaţie se recomandă repetarea testului.
Testul pentru identificarea anticorpilor anti-HCV
Principiul metodei
Este un test rapid pentru identificarea anticorpilor anti-HCV din ser, care ajută la
diagnosticul infecţiei cu virusul hepatitic C.
Se bazează pe principiul reacţiei imunoenzimatice, determinându-se anticorpii
anti-HCV în ser. Antigenele sintetice şi recombinate HCV sunt folosite pentru
identificarea specifică a anticorpilor anti-HCV cu înaltă specificitate. Testul durează 3
min. Anticorpii anti-HCV nu reacţionează cu IgM, iar IgG este marker pentru HCV.
Formarea unui spot mare (Ref. A) şi o linie cu 3 spoturi mici indică un rezultat
pozitiv sau negativ. Cele 3 spoturi mici servesc ca un control intern. Spotul central mic
indică un control slab pozitiv şi cele 2 spoturi laterale indică un control intens pozitiv.
Acestea apar după ce reacţia imunoenzimatică este completă.
Reactivi
25 de teste (fiecare plăcuţă imunocromatografică este pentru un test)
2 flacoane cu soluţie conjugată de aur coloidal
Material biologic
Recoltarea probelor nu necesită pacientului o pregătire specială.
Recoltarea sângelui se face într-o eprubetă fără anticoagulant. Se foloseşte numai ser.
Modul de lucru
-Se aduc toţi reactivii, plăcuţa, probele şi orice alte materiale necesare la temperatura
camerei înainte de efectuarea testului
-Se adaugă 10 picături de soluţie conjugat în spaţiul de reacţie de pe plăcuţă
-Se adaugă 30 µ l ser peste soluţia conjugat şi se agită
-Folosind o pipetă se transferă toată soluţia din spaţiul de reacţie respectiv peste pre-
filtrul care acoperă spaţiul în care se găseşte hârtia imunocromatografică
-Se lasă ca probele să fie absorbite complet de pre-filtru
-Se aşteaptă să apară spoturile de control înainte de a continua următoarea etapă.
-Se adaugă 10 picături de soluţie conjugat peste prefiltru
-Se lasă să se absoarbă toată soluţia
-Se îndepărtează prefiltrul plăcuţei
-Se citeşte rezultatul
Interpretarea rezultatelor
Negativ: dacă numai cele 3 spoturi mici de pe linia de control sunt vizibile.
Uneori datorită concentraţiei crescute a probei poate să apară şi un spot superior liniei de
control, mai puţin intens colorat
Pozitiv: spotul superior şi linia de control sunt vizibile
Slab pozitiv: spotul superior apare mai puţin intens, dar este însoţit de linia de
control
Neconcludent: când apare doar spotul central şi linia de control nu apare sau când
atât spotul central cât şi linia de control nu apare. În acest caz se recomandă repetarea
testului.
Principiul testului
Este un test vizual, rapid, pentru identificarea calitativă a IgG specifice anti-
Helicobacter pylori în serul uman.
Acest kit este utilizat pentru diagnosticul infecţiei cu Helicobacter pylori la
pacienţi cu simptome gastro-intestinale.
Testul este conceput pentru detectarea anticorpilor specifici anti-Helicobacter
pylori din serul uman. Folosirea corectă a testului permite detectarea infecţiei cu
Helicobacter pylori la pacienţi simptomatici. Această informaţie poate fi folosită în
urmărirea de către medic a evoluţiei bolii.
Testul este destinat detectării infecţiei prin interpretarea vizuală a culorii apărute
în dispozitivul de testare, care este o fază solidă de tip “sandwich” colorată prin
conjugare într-o reacţie imună neenzimatică. Membrana a fost acoperită cu antigen de
Helicobacter pylori în zona benzii testului şi cu anticorpi de capră anti-şoarece în
regiunea benzii de control. În timpul testului, serul diluat al pacientului este lăsat să
reacţioneze cu conjugatul colorat (antigenul de Helicobacter pylori – coloidul de aur
conjugat), care a fost precolorat în conţinutul din interiorul casetei. Amestecul va circula
in membrana cromatografică prin capilaritate. Când anticorpii specifici, adică IgG sunt
prezente în probă, va apărea o bandă colorată cu complexele antigen-anticorp. Pe de altă
parte, o bandă colorată va apare intotdeauna în zona de control. Această bandă de control
este un indicator al utilizării corecte a testului. O culoare distinctă apărută în regiunea
benzii-test indică un rezultat pozitiv, iar absenţa benzii colorate în regiunea testului
reprezintă un rezultat negativ
Reactivi
Dispozitivul testului: Fiecare casetă conţine o bandeletă de testare cu antigen
Helicobacter pylori, acoperită cu agentul colorant.
Soluţia de diluţie: fosfat tamponat salin, cu Tween 20 şi conservant
Material biologic
Sângele recoltat prin flebotomie este colectat intr-o eprubetă fără anticoagulant.
Se lasă sângele să se coaguleze. Se separă serul prin centrifugare. Serul se păstrează la 2-
80C până la 2 săptămâni. Serul poate fi păstrat la –200C până la 1 an.
Modul de lucru
-Inainte de testare, plăcuţa-test şi proba de ser a pacientului se aduc la temperatura
camerei (20-300C).
-Se scoate plăcuţa-test din punga de protecţie
-Se etichetează testul cu numele sau numărul de identificare al pacientului
-Se pipetează 20 µ l din proba de ser în 180 µ l soluţie de diluţie
-Se adaugă în dispozitivul de testare 3-4 picături de soluţie peste 20 µ l ser
-Se citeşte rezultatul în 5 min
Interpretarea rezultatelor
Negativ: când apare o singură bandă roşie în zona benzii de control. Nu apare nici
o bandă roşie în zona benzii de testare
Pozitiv: în afara benzii de control, apare o bandă roşie în regiunea liniei de testare
Neconcludent. Cînd nu apare nici o bandă în nici una din regiuni, procedura de
testare a fost probabil nerespectată sau reactivii au fost probabil alteraţi
Majoritatea subiecţilor care prezintă infecţia cu Helicobacter pylori au nivelurile
de IgG crescute. Se estimează că Helicobacter pylori este prezent la 50% din populaţia
globului. Incidenţa anticorpilor anti-Helicobacter pylori este în funcţie de vârstă, rasă,
zona geografică, starea clinică. O parte relativ mare de pacienţi care au valori pozitive ale
nivelurilor de anticorpi sunt asimptomatici, deşi sunt infectaţi cu Helicobacter pylori.
Nivelurile de anticorpi nu se corelează cu severitatea simptomelor clinice
Observaţii
Kiturile trebuie să fie păstrate la frigider (2-80C) sau la temperatura camerei (15-
300C) în punga de garanţie cu 1g deshidratant pentru păstrarea valabilităţii.
Kitul este folosit numai pentru diagnosticul in vitro. A nu se folosi după data
expirării. A nu se deschide punga casetei cu teste până nu sunteţi gata să efectuaţi testul.
Serurile icterice, lipemice, hemolizate sau contaminate pot furniza rezultate
eronate.
Principiul metodei
Testul este imunologic, calitativ, rapid, bazat pe principiul imunocromatografiei.
Principiul testului constă în plasarea probei într-un tub de reacţie ce conţine
soluţia A. După 2 min se adaugă în tub soluţia de extracţie B. După ce s-a realizat
extracţia, se adaugă 3 picături (aprox. 200 µ l) din proba obţinută în locaşul pentru probă
al casetei-test. În caseta-test, în regiunea benzii de testare, membrana se acoperă în
prealabil cu anticorpi monoclonali anti-antigen specific lipopolizaharidic (LPS), iar în
regiunea benzii de control, cu anticorpi de capră anti-şoarece. În timpul testării, proba va
reacţiona cu particulele de aur coloidal care au fost acoperite cu anticorpi monoclonali
anti-Chlamydia, complexul rezultat difuzând lateral în membrană prin capilaritate. Dacă
proba conţine antigenul de Chlamydia, pe membrană în regiunea bandă a testului, se va
forma o bandă colorată ce conţine complexul anticorp Chlamydia-anticorp particulă de
aur coloidal. Dacă antigenul de Chlamydia nu este prezent, nu se va forma nici o linie în
regiunea bandă a testului. Întotdeauna, indiferent de prezenţa Chlamydiei, va apărea în
regiunea de control o bandă colorată, servind drept control.
Reactivi
Fiecare kit conţine tot ce este necesar pentru efectuarea a 20 probe
20 casete-test/kit
1 fiolă soluţie de extracţie A: sticluţă picurătoare de plastic (12 ml) cu hidroxid de sodiu
0,2 M
1 fiolă soluţie de extracţie B: sticluţă picurătoare de plastic (12 ml) cu acid clorhidric 0,2
M
20 aplicatoare sterile
1 fiolă control pozitiv (1 ml): Chlamzdia inactivată termic, în tampon, azidă de sodiu
0,1%
1 fiolă control negativ (1 ml): Streptococ grupa B inactivat, în tampon, azidă de sodiu
0,1%
20 de tuburi de extracţie
1 ambalaj
Material biologic
Calitatea probelor recoltate are o mare importanţă. Detectarea antigenului de
Chlamydia cere ca tehnica de recoltare prin care se obţine material celular să fie altfel
decât pentru lichidele biologice (viguroasă şi suficientă).
Recoltarea probei de la nivelul zonei endocervicale
-Se foloseşte aplicatorul din kit. Înainte de recoltarea probelor se înlătură excesul de
mucus din zona endocervicală cu un tampon de vată
-Se introduce aplicatorul steril în canalul endocervical, trecând de joncţiunea
scuamocilindrică, până când cea mai mare porţiune a aplicatorului nu mai este vizibilă.
Aceasta permite recoltarea de celule cilindrice sau cuboidale, care sunt principalele sedii
ale Chlamydiilor în organism.
-Se roteşte ferm aplicatorul 10-15 sec., apoi aplicatorul poate fi scos cu atenţie, fără a
contamina proba cu celule exocervicale sau vaginale.
Ca o alternativă, probele endocervicale pot fi recoltate cu ansa citologică. Nu se folosesc
ansele citologice la pacientele însărcinate. După curetarea exocervixului cu aplicatorul, se
introduce ansa citologică în canalul endocervical, depăşind joncţiunea scuamocilindrică.
-Se lasă pe loc 2-3 sec., se roteşte ansa citologică de două ori, apoi se retrage ansa fără să
se atingă pereţii vaginului.
-Se introduce aplicatorul sau ansa în tubul de extracţie numai dacă testul se efectuează
imediat.
Modul de lucru
Toţi reactivii şi probele trebuie aduse la temperatura camerei înainte de începerea
analizei
Probele urinare trebuie centrifugate pentru a colecta toate particulele ce pot
conţine celule cu Chlamydia
-Se centrifughează urina (minimum 15 ml) timp de 10 min.
-Se înlătură cu atenţie supernatantul
-Se adaugă 5 picături de soluţie de extracţie A în tub şi se amestecă sedimentul cu o
pipetă de unică folosinţă, până la omogenizarea suspensiei
-Se lasă 2 minute la temperatura camerei
-Se transferă suspensia într-un tub de extracţie folosind o pipetă de unică folosinţă
-Se adaugă 5 picături de soluţie de extracţie B
-Se scoate testul din folia protectoare şi se pune pe o suprafaţă plană, uscată şi curată
-Se etichetează testul
-Se adaugă 3 picături (200 µ l) din proba obţinută în caseta de testare
-Se aşteaptă să apară benzile colorate.
Rezultatul testului trebuie să fie citit în 10 min după adăugarea extractului de
suspensie. În funcţie de numărul de microorganisme de Chlamydia prezente pe aplicator
unele rezultate pozitive pot deveni vizibile după numai 1 min. Totuşi pentru a confirma
rezultatele negative este necesar un timp de reacţie de 10 min. Rezultatele nu se
interpretează după 15 min.
Interpretarea rezultatelor
Negativ: în regiunea test nu apare nici o bandă colorată clar şi distinct în roz.
Aceasta arată că nu a fost detectat antigenul de Chlamydia
Pozitiv: în afară de banda roz din regiunea control a testului apare o altă bandă roz
clar prezentă în regiunea test. Aceasta indică că proba conţine antigen de Chlamydia
Neconcludent: dacă nu apare nici o bandă în regiunea control, analiza trebuie
repetată. Aceasta indică o posibilă eroare în efectuarea testului. În acest caz se poate
recolta o probă nouă sau dacă nu a trecut mai mult de o oră de la recoltarea probei, se
poate efectua încă o determinare pe aceeaşi probă.
Observaţii
Se prelucrează toate probele chiar dacă conţin agenţi infecţioşi.
După terminarea testării, se aruncă aplicatoarele numai după autoclavarea
acestora la 1200C, cel puţin 20 min. Ca o alternativă, aplicatoarele pot fi tratate cu soluţie
de hipoclorit de sodiu 0,5-1,0% o oră înainte de a fi aruncate. Persoanele care efectuează
testul, trebuie să poarte îmbrăcăminte de protecţie cum ar fi halat şi mănuşi de unică
folosinţă în timpul recoltării şi testării probelor.
Nu se mănâncă, nu se bea, nu se fumează în aria unde sunt prelucrate probele şi
reactivii kitului.
Soluţia de extracţie A conţine hidroxid de sodiu. Soluţia de extracţie B conţine
acid clorhidric. Dacă una dintre cele două soluţii vine în contact cu pielea sau cu ochii, se
recomandă spălarea cu multă apă. Se evită orice contact al mâinilor cu nasul sau ochii în
timpul recoltării şi testării probelor.
Controlul pozitiv şi negativ din kitul de testare conţine azidă de sodiu (NaN3)
0,1%, care în contact cu plumbul şi cuprul ţevilor poate forma azidă metalică explozivă.
După îndepărtarea reactivilor se spală sistemul de scurgere cu un volum mare de apă.
Se recomandă folosirea aplicatoarelor ori anselor citologice pentru obţinerea
probelor endocervicale.
Nu se amestecă reactivii sau componentele din loturi sau kituri diferite. Nu se
schimbă dopurile sticlelor între ele. Nu se foloseşte kitul după expirarea datei indicată pe
cutie. La fel ca în cazul tuturor testelor, diagnosticul definitiv nu trebuie să se bazeze doar
pe rezultatul unui singur test şi acesta trebuie coroborat cu datele clinice.
Kitul se va păstra la temperatura camerei (15-200C).
Principiul metodei
Principala deosebire dintre Staphylococcus aureus şi alte tipuri de stafilococi este
existenţa unui factor de aglutinare. Staphylococcus aureus determină aglutinarea
hematiilor învelite cu fibrinogen.
Reactivi
Reactiv T 2x2 ml
hematii de oaie învelite cu fibrinogen
Reactiv C 2x2 ml
hematii de oaie
Picător 4 buc
Material biologic
Se folosesc colonii bacteriene considerate de Staphylococcus aureus
Modul de lucru
-Se agită bine reactivii
-Se deschid flacoanele şi se pun picătoarele
-Se pune o picătură de Reactiv T (test) şi o picătură de Reactiv C (control) la fiecare
capăt al lamei de sticlă
-Folosind o ansă, se amestecă coloniile bacteriene cu fiecare picătură
-Se înclină uşor lamela
Interpretarea rezultatelor
Reacţie pozitivă: suspensia din probă aglutinează în primele 15 sec, în timp ce
suspensia de control rămâne fin dispersată: Rezultatul este Staphylococcus aureus prezent
Reacţie negativă: atât suspensia din probă cât şi cea de control rămân fin
dispersate, chiar după 1 min. Rezultatul este Staphylococcus aureus absent.
Reacţia echivocă: atât suspensia din probă cât şi cea de control au semne de
aglutinare. În acest caz trebuie făcute testele clasice pentru identificare
Observaţii
Reactivii nedesfăcuţi sunt stabili la 2-80C până la data de expirare tipărită pe
cutie.
Principiul metodei
Hemoglobina umană din probele de fecale reacţionează cu un amestec de
anticorpi monoclonali/policlonali. În caz de reacţie pozitivă apar două linii roz în zonele
T şi C. Dacă nu există hemoglobină apare o singură linie vizibilă în zona de control C
Sensibilitatea testului: 0,03 mg Hb/g de materii fecale, 0,2 mg Hb/ml de soluţie.
Reactivi
Stripsuri pentru test 5 buc.
Tuburi colectoare (tampon) 5 buc.
Materialul biologic
Recoltarea probelor
-Se colectează materii fecale într-un recipient curat şi uscat
-Se deşurubează capacul tubului colector şi se scoate beţişorul aplicator
-Se recoltează 3 probe de materii fecale folosind beţişorul aplicator
-Se înlătură excesul de probă de pe beţişorul aplicator, ştergându-l cu un material
absorbant
-Se introduce beţişorul aplicator înapoi în tubul colector.
Proba astfel pregătită poate fi păstrată la 20-300C o săptămână
Modul de lucru
-Se scoate strip-ul de test din ambalaj
-Se amestecă bine proba în tubul colector
-Se taie vârful tubului colector şi se aruncă primele 2-3 picături de probă
-Se poziţionează vertical tubul colector şi se dispersează 4 picături pe suprafaţa marcată S
-Se aşteaptă 5 min. şi se citeşte rezultatul
Interpretarea rezultatelor
Pozitiv: apar linii colorate în zonele T (test) şi C (control)
Negativ: o linie colorată este vizibilă numai în zona C (control)
Neconcludent: nu există linie colorată nici în zona T nici în zona S. Testul trebuie
repetat
Observaţii
-Pentru obţinerea rezultatului real nu sunt necesare restricţii dietetice
-Probele nu trebuie colectate în timpul ciclului menstrual sau dacă pacientul suferă de
hemoroizi sau hematurie (rezultatul apare fals-pozitiv)
-Tratamentul cu medicamente care pot cauza iritaţii gastro-intestinale trebuie întrerupt cu
cel puţin 2 zile înainte de recoltarea probei
-Testul este specific pentru hemoglobina umană. Până la 500 µ g/ml nu s-au observat
interferenţe cu hemoglobina de pasăre, vacă, porc, capră, cal, iepure.
Principiul metodei
Reactivul RPR Carbon este o suspensie stabilizată cu cristale de colesterol
marcate cu cardiolipin lecitină şi particule de mangal (pentru îmbunătăţirea interpretării
rezultatelor). Reactivul are rolul de antigen faţă de anticorpii prezenţi în organismul
persoanelor infectate cu Treponema pallidum.
Reactivi
1 flacon cu reactiv latex de 3 ml
1 flacon cu control pozitiv de 1 ml
1 flacon cu control negativ de 1 ml
1 set de plăcuţe pe care se efectuează testul
1 flacon pipeta pentru reactivul latex
Material biologic
Se foloseşte ser clar, obţinut prin centrifugarea sângelui recoltat fără
anticoagulant. Probele pot fi păstrate la 2-80C maximum 48 de ore înainte de efectuarea
testului. Pentru o perioadă mai lungă, serul trebuie păstrat congelat.
Serurile hemolizate, lipemice sau contaminate pot da erori la interpretarea
rezultatelor.
Modul de lucru
-Se aduc reactivii şi probele la temperatura camerei, înainte de folosire
-Se agită uşor reactivul pentru dispersarea particulelor
-Se pune câte o picătură din controlul pozitiv şi negativ în câte un cerculeţ al plăcuţei
-Se pune câte o picătură (50 µ l) de ser nediluat din fiecare probă în câte unul din
cercurile plăcuţei
-Se adaugă o picătură de reactiv RPR Carbon, ori se pipetează 20 µ l de reactiv în fiecare
cerculeţ folosit
-Se amestecă ambele picături, fără să se disperseze pe toată suprafaţa cercului
-Se roteşte plăcuţa manual ori cu un rotor mecanic de 80-100 rpm, 8 min.
-Se citeşte prezenţa aglutinării vizibile cu ochiul liber. O aglutinare nespecifică poate
apare dacă testul este citit mai târziu de 8 min.
Testul semicantitativ
-Se poate efectua o diluţie succesivă cu soluţie salină izotonică
-Titrul serului este diluţia cea mai mare care produce reacţia pozitivă
Interpretarea rezultatului
Rezultat pozitiv: prezenţa unor nori cenuşii pe albul plăcuţei
Rezultat negativ: lipsa unei reacţii de floculare uniforme şi a unei culori cenuşii
Sifilisul este o boală cu transmitere sexuală, cauzată de Treponema pallidum.
Observaţii
Reactivii conţin azidă de sodiu ce se poate combina cu Pb şi Cu putând deveni
explozibili.
Controlul pozitiv şi negativ din ser uman a fost testat folosind metoda licenţiată
FDA şi s-a demonstrat că nu reacţionează cu anticorpii faţă AgHBs şi HIV. Oricum, toate
probele umane pot fi considerate potenţial infectate.
Se pune reactivul de RPR Carbon în sticluţa specială înainte de folosire. Acesta
trebuie foarte bine omogenizat, reactivul se agită bine înainte de folosire. Nu se folosesc
decât picăturile care sunt puse perpendicular pe suprafaţa plăcuţei. Dacă nu se foloseşte
sticluţa picurătoare, atunci se foloseşte pipeta automată pentru 20 µ l. Sensibilitatea
acestui test depinde de volumul picăturii. Reactivul şi controalele se păstrează la 2-80C.
Principiul metodei
Testul hCG (Gonadotrofina corionică umană) este un test calitativ, o reacţie
imună în două straturi pentru determinarea hCG în urină. Membrana a fost acoprită cu
anticorpi de capră anti-hCG în regiunea benzii de test şi anticorpi de capră anti-şoarece în
regiunea benzii de control. În timpul testului urina pacientei este lăsată să reacţioneze cu
anticorpii monoclonali anti-hCG coloraţi cu coloidul de aur aplicat pe bandeleta de test.
Mixtura va migra în membrană prin capilaritate. Absenţa benzii colorate în regiunea
benzii testului indică rezultatul negativ. Pentru controlul procedurii în regiunea de control
va aparea întotdeauna o bandă colorată în prezenţa hCG în proba de urină.
Reactivi
Bandeletele de testare: bandeletă acoperită cu anticorpi anti-hCG de capră şi
anticorpi monoclonali anti-hCG de şoarece în coloid de aur uscat.
Material biologic
Recoltarea probei
Orice probă de urină este bună pentru testare, dar prima urină de dimineaţă este
cea mai indicată, deoarece conţine cele mai mari concentraţii de hCG. Probele de urină
pot fi recoltate într-un recipient curat, de plastic sau de sticlă.
Dacă probele nu pot fi prelucrate imediat, acestea pot fi păstrate la frigider (2-
0
8 C) până la 72 de ore.Nu este necesar să adăugăm prezervant probei de urină. Proba de
urină trebuie lăsată la temperatura camerei înainte de efectuarea reacţiei.
Probele de urină tulbure trebuie centrifugate sau filtrate înainte de folosire.
Probele cu precipitate vizibile trebuie lăsate să se decanteze şi pentru testare se va folosi
numai supernatantul clar.
Modul de lucru
-Se scoate bandeleta de testare din ambalaj
-Se introduce bandeleta în urină, cu vârful săgeţii orientat spre urină. Nu se depăşeşte
linia max (maximum)
-Se poate lăsa bandeleta în urină sau se poate să o scoatem după min 3 sec şi să o lăsăm
pe o suprafaţă curată, uscată, neabsorbantă (ex: marginea recipientului cu urină)
-Se aşteaptă să apară banda colorată. Dependent de concentraţia de hCG din proba de
urină, rezultate pozitive pot fi obsevate în 10-30 sec. Pentru confirmarea rezultatului
negativ sunt necesare 5 min. pentru reacţie.
Nu se interpretează rezultatele după 30 min.
Interpretarea rezultatelor
Negativ: doar o singură bandă colorată apărută în zona de control. Nu apare nici o
bandă colorată în regiunea de testare
Pozitiv: benzi distincte colorate apar în regiunea de control şi în regiunea de
testare. Intensitatea culorii în regiunea de testare poate fi variabilă.
Incorect: nici o bandă vizibilă sau nici o bandă vizibilă în regiunea de testare. Se
repetă testul
Observaţii
Kitul de testare poate fi păstrat la temperatura camerei (20-300C) într-un container
uscat până la data expirării. Bandeletele testului trebuie păstrate departe de umezeală,
căldură şi razele soarelui. Capacul containerului de păstrare trebuie să conţină desicant
pentru păstrarea bandeletelor uscate. Imediat după utilizare se repune cu grijă capacul.
În anumite situaţii, altele decât sarcina, incluzând boala trofoblastică şi
neoplasmele netrofoblastice, se pot produce niveluri ridicate de hCG. Aceste diagnostice
trebuie luate în considerare dacă tabloul clinic le sugerează. Dacă probele de urină sunt
prea diluate, pot să nu conţină niveluri semnificative de hCG. Dacă se menţine
suspiciunea de sarcină trebuie repetat testul la 48-72 ore. Ca pentru toate testele
diagnostice, un diagnostic clinic definitiv nu se poate baza pe un singur test şi trebuie pus
numai de către medic după evaluarea datelor clinice şi de laborator.
Principiul metodei
Testul FSH pentru diagnosticul menopauzei este un test calitativ. o analiză
imunologică de tip sandwich prin care se determină concentraţia hormonului foliculo-
stimulant (FSH). Pe linia de test a membranei au fost fixaţi anticorpi anti-FSH, pe linia de
control s-au fixat anticorpi de capră anti.FSH de măgar. În timpul testului, FSH din urina
de la pacientă reacţionează cu conjugatul colorat în auriu (coloid de anticorp monoclonal
anti-FSH) care se află sub formă preuscată pe banda de test. Amestecul migrează spre
partea superioară a membranei cromatografice prin capilaritate. Dacă proba testată
conţine FSH (în concentraţie semnificativă) va apărea în regiunea de test a membranei o
linie colorată şi care reprezintă complexul conjugat anticorp FSH-FSH. În acelaţi timp va
apărea o linie de culoare slabă în regiunea de control a membranei. Această linie de
control reprezintă o referinţă a intensităţii culorii, echivalentă cu aprox. 25 mui/ml FSH.
Dacă intensitatea liniei de test este egală sau mai puternică decât cea a liniei de control,
atunci rezultatul este pozitiv
Reactivi
20 de casete de test cu membrana marcată cu anticorp de captură anti-FSH şi anticorp
monoclonal anti-FSH colorat
Material biologic
Proba de urină trebuie să fie recoltată într-un vas curat şi uscat. Poate fi folosită
urina din orice moment al zilei, totuşi se recomandă urina de dimineaţă, deoarece conţine
concentraţia maximă diurnă de FSH. Probele de urină pot fi păstrate la frigider (2-80C)
cel mult 72 ore înaintea efectuării testului. Dacă probele au fost ţinute la frigider înainte
de a efectua testul, acestea vor fi aduse la temperatura camerei.
Acele probe de urină unde se observă o precipitare, se filtrează sau se
centrifughează sau se lasă să se sedimenteze până se vor obţine eşantioane clare care vor
fi testate.
Modul de lucru
-Înainte de efectuarea testului, casetele de test, probele pacientelor, controalele şi probele
de referinţă trebuie să fie aduse la temperatura camerei (20-300C).
-Se scoate caseta de test din punga de protecţie (adusă în prealabil la temperatura
camerei, pentru a evita formarea condensului pe membrana test în momentul deschiderii)
-Se va înscrie pe fiecare casetă de test numărul de identificare al pacientului sau al
controalelor
-Se îndepărtează capacul de plastic roz pentru a avea liber vârful absorbant.
-Se apasă cu degetul mare pe caseta de test, astfel încât vârful absorbant să fie direcţionat
în jos.
-Se introduce vârful absorbant în urină timp de 10 sec.
-Se reacoperă caseta cu capacul roz şi se lasă pe o suprafaţă plană cu fereastra de test în
sus şi se aşteaptă până se obţine rezultatul
-Se citeşte rezultatul după minimum 3 min. (max. 10 min)
Interpretarea rezultatelor
Negativ: intensitatea culorii liniei de test este mai mică decât cea a liniei de
control
Pozitiv: intensitatea culorii liniei de test este egală sau mai mare decât a liniei de
control
Dacă nici linia de test, nici linia de control nu apar pe membrana casetei, atunci se
elimină testul respectiv. Acest lucru s-a datorat fie unei proceduri neadecvate în timpul
etapelor de testare, fir deteriorării reactivilor casetei. Se recomandă a se repeta testul 5-7
zile mai târziu (preferabil de recoltat urina la aceeaşi oră) pentru a determina dacă nivelul
de FSH este încă ridicat
Observaţii
Kitul se păstrează la frigider (2-80C) sau la temperatura camerei (până la 300C) în
punga de plastic cu desicant.
Testul LH de ovulaţie
Principiul
Testul este rapid şi uşor de folosit. Testul este calitativ, putând preciza când are
loc o secreţie de hormon luteinizant şi când este probabilă ovulaţia. Pentru început trebuie
determinată durata ciclului menstrual. Aceasta reprezintă numărul de zile cuprins între
prima zi a ciclului şi ziua premergătoare apariţiei ciclului. Dacă ciclul este mai scurt de
21 zile ori mai lung de 38 zile, trebuie consultat medicul.. Dacă nu se cunoaşte durata
ciclului, se începe testarea din a 11-a zi a ciclului, făcând o medie a celor 28 de zile. Se
efectuează un test la fiecare a 5-a zi a perioadei sau după ce secreţia de LH a fost
detectată
Material biologic
Nu se foloseşte prima urină de dimineaţă, deoarece LH este sintetizat în cursul
nopţii şi va apare în urină mai târziu, în timpul zilei. Perioada cea mai bună pentru
colectarea urinei este între orele 10.00-18.00. Se colectează urina la aceeeaşi oră în
fiecare zi.
Modul de lucru
-Se lasă casetele test, proba de urină şi soluţia de control să atingă temperatura camerei
(18-300C)
-Se extrage urina cu ajutorul unui picurător pentru urină
-Se adaugă 5 picături de urină în acest loc
-Se lasă lichidul să migreze
-Se aşteaptă să se coloreze şi să apară benzile
Depinzând de concentraţia de LH, rezultatele pozitive pot fi observate după aprox 40 sec.
Confirmarea rezultatelor negative este după ce a avut loc reacţia completă (10 min)
Interpretarea rezultatelor
Nu se secretă LH: apare o singură culoare în regiunea de control sau banda este
strălucitoare
Secreţie de LH: dacă apar 2 benzi colorate vizibile şi banda test este egală ca
intensitate cu banda de control, atubnci cu siguranţă ovulaţia va avea loc în următoarele
24-48 ore.
Test neconcludent: nu este nici o bandă vizibilă. Se recomandă repetarea testului.
Durata 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38
ciclului (zile)
Testul trebuie 6 6 7 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
efectuat în ziua
Determinarea crioproteinelor
Principiul
Incubarea serului la 40C timp de 24 ore, după care se urmăreşte prezenţa unui
precipitat în ser (crioproteine). Serul cu crioprecipitat se centrifughează, apoi sedimentul
este spălat la rce de mai multe ori, solubilizat la 37 0C, după care este testat în dubla
difuzie cu antiseruri monospecifice anti-imunoglobuline.
Prezenţa crioproteinelor reprezintă un semn de disproteinemie ce se manifestă în
anumite situaţii patologice (ex. afecţiuni autoimune).
BIBLIOGRAFIE
Cristea V., Crişan M., Costin N., Olinescu A. Imunologie clinică. Editura Casa
Cărţii de Ştiinţă, Cluj-Napoca, 2002
Dejica D. (sub red.) Tratat de imunologie clinică. Vol. I Ed. Dacia, Cluj-Napoca,
1997
Dejica D. (sub red.) Tratat de imunologie clinică. Vol. II Ed. Dacia, Cluj-
Napoca, 1998
Drugărin D., Negru Ş., Koreck A., Mederle C. Imunologie moleculară. Ed.
Mirton, Timişoara, 1998
Gluhovschi G. Actualităţi în imunologia clinică. Ed. Helicon, Timişoara, 1994
Moraru I. Imunologie. Ed. Medicală, Bucureşti, 1984
Olinescu A. Imunologie. Ed. Didactică şi Pedagogică, Bucureşti, 1995
Păunescu V., Tatu C.A., Stănescu D.I., Medrea D.P. Imunologie concepte
fundamentale şi aplicative. Ed. Helicon, Timişoara, 1996
Pereţianu D., Saragea M. Imunologia în teoria şi practica medicinei. Vol I Ed.
ALL, Bucureşti, 1996
Pereţianu D., Saragea M. Imunologia în teoria şi practica medicinei. Vol. II Ed.
ALL, Bucureşti, 1998
Răpunteanu G. Imunologie – Imunopatologie. Ed. Genesis, Cluj-Napoca, 1996
Voiculescu C.(sub red.) Noţiuni de imunologie şi imunopatologie. Ed.
Academiei Române, Bucureşti, 1999
Drugărin D., Negru Ş., Koreck A., Mederle C. Imunologie moleculară. Ed.
Mirton, Timişoara, 1998
Moraru I. Imunologie. Ed. Medicală, Bucureşti, 1984
Olinescu A. Imunologie. Ed. Didactică şi Pedagogică, Bucureşti, 1995
Păunescu V., Tatu C.A., Stănescu D.I., Medrea D.P. Imunologie concepte
fundamentale şi aplicative. Ed. Helicon, Timişoara, 1996
Pereţianu D., Saragea M. Imunologia în teoria şi practica medicinei. Vol I Ed.
ALL, Bucureşti, 1996
Pereţianu D., Saragea M. Imunologia în teoria şi practica medicinei. Vol. II Ed.
ALL, Bucureşti, 1998
Voiculescu C.(sub red.) Noţiuni de imunologie şi imunopatologie. Ed.
Academiei Române, Bucureşti, 1999