INFORME Nº 2

BIOLOGIA MOLECULAR
Prof: MSc. Liliana Yaneth Suárez Contreras
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1 de Abril

c    cc ccc  c
  cc
c
c
A
Dayana Andrea Vásquez Barajas (1610457) E-mail: ingbiovas@hotmail.com
B
Pedro Luis Acero Arroyave (1610434) E-mail: Bioacero91@hotmail.com
C
Diana Milena Tarazona Serrano (1610315) E-mail:minithed@hotmail.com
c


c c!

c funcionan bajo un mismo principio de
pistones para operar.[2]
La micropipeta es un instrumento de
laboratorio empleado para medir
absorber pequeños volúmenes de
líquidos y permitir su manejo en las
distintas técnicas científicas. Los
volúmenes captables por estos
instrumentos varían según el modelo: los
más habituales, denominados p20, p50 y
p100, admiten un máximo de 20, 50 y
100 ȝl, respectivamente. En los
laboratorios de Biología Molecular, el
manejo del equipo básico es
fundamental. Además, se requiere del
conocimiento de las distintas unidades
de medición y su correcta conversión, ya
que dichos procedimientos se utilizan a Figura 1. Esquema general de las
diario en distintas labores relacionadas micropipetas marca BioRad a utilizar
con el trabajo. [1] durante elcurso. A1: botón pulsador, A2:
tornillo del botón pulsador, B: rueda
En las de volumen variable,se puede dentada degraduación del volumen, C:
seleccionar un volumen dentro de un cono de la pipeta, D: expulsor de punta y
rango de valores determinado. E: punta o³tip´ descartable. Tomado del
Lamicropipeta más comúnmente usada manual de manejo de
en los laboratorios de análisis fue micropipetasBiorad, BR/06/05
introducidapor la compañía Eppendorf y
este nombre se adoptó de forma
genérica para estosdispositivos, aunque
hoy en día existen una gran cantidad de
compañías ymodelos similares que
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c
 



 
c
Mediante su conocimiento se busca c
identificar las partes, describir las c
recomendaciones básicas y técnicas G  G  G

para el uso y manejo de G
 
micropipetasdigitales y la
determinación de la precisión de sus Simulamos una mezcla de reacción para
medidas. digestión con enzimas de restricción,
c utilizando micropipeta de 0.5 -10 µL.



"
c c

c 6 Marcar tres tubos de 1.5 ml. (figura
A)
Los rangos de pipetas a manejar son los
siguientes y sus respectivas puntas; y
diversas soluciones jabonosas con
diversos colores que simulen diferentes
sustancias, reactivos entre otras

Micropipetas de rango 05-10 µl

Micropipetas de rango 10-100 µl c
Micropipetas de rango 100-1000 µl
Puntas transparentes 6 Haga una matriz de distribución y
Puntas amarillas adicione a cada tubo lo establecido
Puntas azules teniendo en cuenta las puntas a
utilizar y el no contaminarlas, debe
G
G
GGG diferenciarlas y al mismo tiempo
c tener cuidado en el pase de una a
otra solución deben descartarse la
punta utilizada anteriormente.

r
c cc c
c cc cc

c *c
c c
c 
c c

c *c
c c
c c c
c
c *c
c *c
c 
c c
c

6 Cuadre el volumen deseado en la

micropipeta para la toma de la
solución y sin tocar las puntas
correspondientes adicione una de
c ellas en la micropipeta.(Figura B)
Reconocer las partes de las
micropipetas, su debido manejo y los
diferentes rangos volumétricos
caracterizados con un color determinado
y de igual forma las puntas que le
corresponde a cada una.
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Simulamos que es la extracción de ADN
plasmidico, utilizando micropipeta de 20-
~c 1000 µL.

6 Introduzca la micropipeta hasta el 6 Marcar tres tubos de 1.5 ml. (figura
primer tope y tome la solución E)
soltando dicho tope, (figura c)
correspondiente respetando el
orden de adición sin contaminar
las puntas o el mezclar
soluciones.

c
Haga una matriz de distribución y
adicione a cada tubo lo establecido

c teniendo en cuenta las puntas a utilizar y
el no contaminarlas, debe diferenciarlas y
6 Agregué o adicione al mismo tiempo tener cuidado en el
cuidadosamente la solución sin pase de una a otra solución deben
tocar los bordes presionado el descartarse la punta utilizada
embolo hasta el segundo tope. anteriormentec
(figura D) c
r
c c c cc c c
c c
c c c
c c c c c c

c
c
c
c
c

c c c c c c

c
c
c
c
c c c c c c

c
c
c
6 Por ultimo descarte la punta
utilizada en hipoclorito. c
6 Verifique si obtuvo un volumen de 6 Cuadre el volumen deseado en la
reacción final de 10µL. Tenga en micropipeta para la toma de la
cuenta lo siguiente: Permaneció solución y sin tocar las puntas
algún residuo en el tubo?, correspondientes y ponga una de
desocupo el tubo pero se formó ellas en la micropipeta.
burbuja de aire en la punta? Mida 6 Repita los pasos del punto
el volumen con el cual lleno anterior los cales se basan en el
completamente la punta?. mismo principio y los mismos
cuidados. Tenga en cuenta el
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orden de las adiciones a cada
tubo y el manejo de los topes.

c
c
c
c
c
c

"
c
c
G
G
GGG
c c
c
c

En este caso la pipeta es del siguiente

rango 10-100µl el cual está indicado en
la parte inferior de la micropipeta y su
color característico es el amarillo, de este
c
mismo color son las puntas
c

c
La micropipeta observada es la de menor
rango trabajadoen laboaratorioque es de
0.5-10µl, identificado en la parte superior
de la micropipeta la escala volumétrica y
su color característico es el gris, las
puntas son las transparentes.c
c

c
Las Pipetas que tiene el color
característico azul y de igual color son
las puntas son aquellas que manejan la
c siguiente escala volumétrica de 100-
1000µl como viene indicada en la parte
superior de la micropipeta

El reconocimiento de los topes, el

primero para tomar la muestra y para
depositarla se lleva a hasta el
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segundotope y además el punto de
seguridad de cada escala volumétrica la
cual impide manejar el volumen deseado
y estándar.

G  G  G

G
 c

c
Al observar los tubos en la escala
volumétrica que traen el 2 y 3 presentan
1000µl y el primero no por lo cual
empleamos la comprobación al extraer el
c volumen de cada tubo y finalmente al
c tubo numero 1 le falta volumen para
completar los 1000µl.

c #c$ #c
%c <1000µL
&c 1000 µL
'c 1000 µL

c
c
Mediante la comprobación de los c
volúmenes en cada tubo que fueron 
c c"
c
exactos, en los cuales cada uno había c
10µl. En los laboratorios de Biología Molecular,
el manejo del equipo básico es

c #c$ #c fundamental.Además, se requiere del
%c 10 µL conocimiento de las distintas unidades
&c 10 µL de medición y su correctaconversión, ya
'c 10 µL que dichos procedimientos se utilizan a
c diario en distintas laboresrelacionadas
con el trabajo o prácticas de laboratorio.
c
   !"#$%&  '
Debido a que la micropipeta tiene un
( rango de volumen ajustable, esnecesario
c seleccionar el volumen a medir. Para ello
se debe localizar elindicador de volumen,
compuesto de tres dígitos que se deben
leer dearriba hacia abajo. En la parte
más baja del indicador hay una escala
quepermite el ajuste del volumen al

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último dígito o decimal permitido según
elcaso. En las micropipetas de 2 hasta
200 ȝl, los dígitos negros
indicanmicrolitros y los dígitos rojos
representan décimas de microlitro. [2]
Las micropipetas son instrumentos de
gran ayuda, utilidad por su precisión en
la biología molecular, pero para obtener
con éxito los resultados de diferentes
protocolos o pruebas a desarrollar en
esta área se debe tener claro los rangos
volumétricos y el manejo de
conversiones, pero es indispensable
reconocer las partes de la micropipeta y
su forma de acción para tener un mejor
desempeño a la hora de emplearlas.
Para selección de la punta hay que tener
en cuenta quedebe ajustarse al cono de
la micropipeta. Al insertar la punta en
elcuerpo de la pipeta hay que aplicar una
fuerte presión con movimientogiratorio
para asegurar la hermeticidad. Nunca
usar la pipeta con líquidossin la punta
colocada. Es posible que la punta
plástica se encuentre en unacaja también
plástica que facilita su uso.[3]
Al igual que las pipetas sus rangos
volumétricos están identificados por un
color característicos de esta misma
forma la as puntas que utiliza cada una,
estas puntas son estériles al trabajar por
lo cual no se deben tocar, si no hacer
una leve presión para ponerlas en la
micropipeta.
A la hora de tomar el volumen deseado y
con la escala volumétrica cuadrada en él,
se introduce la punta en la solución pero
previamente oprimido el embolo hasta el
primer tope, al tomar la muestra este se
suelta lentamente y cuidadosamente
para evitar alguna burbuja que altere la
medición como pudo haber ocurrido en el
tubo 1 donde no habían 1000µl ó puede
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ser alguna falla e imperfección de la
micropipeta, y en volúmenes grandes
evitar hacer muy rápido la toma por qué
parte de la solución puede tocar el filtro
de la pipeta y dañarla, se lleva al tubo y
se expulsa la solución llevando el embolo
hasta el segundo tope.
En conclusión las micropipetas son
indispensables para la biología molecular
ya que está en su mayoría trabaja con
microvolumenes, pero para obtener los
resultados deseados es bueno tener un
conocimiento de estas, un desempeño
adecuado y cuidadoso en su manejo,
para evitar alteraciones en las practicas o
la perdida de materiales empleados en
estas como las soluciones y muchas
veces el tiempo empleado
c
c
c
"($c
c
[1]. YOHN JAIRO GUEVARA
BOHÓRQUEZ,RICARDO DANIEL
ORTIZ HOYOS. Manejo de micropipetas
automáticas y precisión de sus medidas.
[en línea] [Citado en 2011-03-31].
Disponible en internet:
<http://www.invivored.co.cc/wp-
content/uploads/2010/09/Uso-de-
micropipetas-Lab-II.pdf
[2]. PRÁCTICA 1. Principios básicos de
laboratorio, uso de pipetas y cálculos de
utilidad en Bioquímica. [en línea][Citado
en 2011-03-31].Disponible en internet:
<http://www.medvet.una.ac.cr/carrera/mv
a505_Practica1.pdf
c
[3]. JORGE AZOFEIFA. Mediciones y
micropipeteo. [Citado en 2011-03-
31].Disponible en internet: <
http://biologia.ucr.ac.cr/profesores/Labora
torio/Practica%201.pdf

    

  

 
   


    
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[4].CLAUDIO GARIBAY
ORIJEL.Materiales y operaciones
frecuentes en el Laboratorio. [Citado en
2011-03-31].Disponible en internet:
<http://personal.us.es/jmorillo/exquimica2
/materiales.pdf

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