Acridine orange

Acridin orange este un colorant flourescent. Acest compus se leaga de materialul genetic si
permite diferentierea ADN-ului de ARN.

Un colorant flourescent cum este acridin orange absoarbe energia luminii primite. Energia
luminoasa trece in moleculele colorantului. Aceasta energie nu poate fi pastrata de colorant
pentru totdeauna asa ca este eliberata. Energia eliberata are o alta lungime de unda decat enegia
luminii primite, fiind astfel detectata intr-o alta culoare.

Acridin orange absoarbe radiatia primita datorita structurii sale inelare. Excesul de energie trece
in jurul inelului.

Structura inelului confera o natura hidrofobica compusului. Atunci cand se aplica unei probe in
solutie acridin orange tinde sa se raspandeasca in jurul membranei ce inconjoara
microoraganismele. Odata ajuns in interiorul celulei acridin orange va forma complexe cu ADN
si ARN. Chimia acestor complexe afecteaza lungimea de unda a radiatiilor emise. In cazul
complexului acridin orange-ADN, radiatia emisa este verde. In cazul complexului format cu
ARN lumina emisa este portocalie. Culorile diferite permit diferentierea ADN-ului de ARN.

Cand se leaga la ADN are un spectru similar cu flourescina, cu o excitatie maxima la 502nm si
un maxim de emisie la 525nm (verde), cand se leaga la ARN excitatia maxima se schimba la
460nm (albastru) si maximul de emisie se schimba la 650nm (rosu).

Acridin orange patrunde deasemeni si in compartimentele acidice cum sunt lizozomii devinind
protonate si sechestrate. In aeste conditii de pH scazut, colorantul va emite lumina portocalie
cand este excitat cu lumina albastra.

Legarea acridin orange la acizii nucleici are loc atat in bacteriile vii cat si moarte precum si in
alte microorganisme. Prin urmare colorantul nu este folosit pentru a distinge microbii vii de cei
morti. Si nici nu face discriminare intre o specie de microb fata de o alta specie.

Cu toate astea acridin orange s-a dovedit a fi foarte util in numararea numarului total de
microorganisme dintr-o proba. Cunoasterea numarului total de bacterii versus numarul de
bacterii vii poate fi foarte util, de exemplu in evaluarea efectului unui agent antibacterian asupa
supravetuirii bacteriilor.

Acridin orange poate fi folosit in conjunctie cu Bromura de etidiu pentru a se face diferenta intre
celule viabile , apoptotice si celulele necrotice. In plus acridin orange poate si folosit pe probe de
sange pentru flourecenta ADN ului bacterian ajutand in diagnosticul clinic al infectiilor
bacteriene odata ce serul si ramasitele a fost filtrate.
Acridin orange este utilizat intr-un tip specializat de tehnica de microscopie numit microscopie
flourescenta. In plus flourescenta ADN-ului si ARN-ului permite celulelor dintr-o proba permite
diferentierea acestora folosind tehnica flow citometriei. Acest tip de informatie permite o analiza
detaliata a ciclului de replicare a ADN-ului in microorganisme.

http://www.enotes.com/microbiology-encyclopedia/acridine-orange

http://en.wikipedia.org/wiki/Acridine_orange