Resumen: E-074

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E

Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2004

Alcohol a partir de sorgo dulce.

Sacarificación y fermentación

Fernández, Carina - Garro, Oscar A.

Cátedra Microbiología de Alimentos. Facultad de Agroindustrias, UNNE.

Cte. Fernández 755, Sáenz Peña, Chaco, Argentina.
garro@fai.unne.edu.ar

Antecedentes

La producción de alcohol a partir de sustratos azucarados o amiláceos se conoce desde tiempos inmemoriales,
principalmente en lo que respecta a la obtención de bebidas, pero el conocimiento del por qué ocurre es más reciente.
El etanol a partir de cultivos agrícolas “bioetanol” es de interés a causa de la naturaleza renovable de las materias
primas; sin embargo el costo de producción puede ser más alto que para los combustibles a partir del petróleo.
Los cultivos más usados son el de la caña de azúcar y la remolacha azucarera, sin embargo se lo puede
producir a partir de una gran variedad de sustratos azucarados o amiláceos, principalmente granos de cereales. En
nuestra región se produce en varias épocas del año el sorgo dulce del que se pueden utilizar los granos y/o el tallo para
su conversión a etanol. Una ventaja adicional del cultivo de sorgo es que se pueden utilizar tierras que no son aptas
para aquellos cultivos con requerimientos exigentes para su desarrollo. En el Chaco puede implantarse en tierras
marginales y contribuir a diversificar la producción agrícola.
Para que esta aplicación sea viable es necesario generar localmente los conocimientos de las distintas etapas
del proceso: producción del cultivo, fermentación y destilación. Este trabajo pretende estudiar la etapa de sacarificación
y fermentación en lo que respecta a la selección del microorganismo a utilizar y sistema de fermentación más
adecuado a este proceso.
El grano de sorgo es rico en almidón y es uno de los cultivos óptimos para aplicaciones industriales y, a pesar
de tener una composición química similar a la del maíz, ha sido subutilizado en la elaboración de productos industriales
y de valor agregado (Leeson y Summers, 1997).
La mayor barrera que afecta a su utilización industrial son sus propiedades de molido y una baja digestibilidad por los
microorganismos, principalmente debido a la presencia de polifenoles (taninos) (J.M. Bvochora, R. Zvauya, 2001). La
producción de biomateriales y productos químicos se enfrenta a un desafío económico, el éxito depende de los
pretratamientos (molido, cocción, sacarificación, etc), todos estos procesos que incrementan el costo de producción.
La producción de etanol usando mezclas de jugo de sorgo dulce y granos de sorgo fue investigada bajo
condiciones normales y de muy alta concentración de sólidos (VHG), usando cepas de Saccharomyces cerevisiae a
30°C obteniendo concentraciones de etanol de hasta 16,8%v/v (J.M. Bvochora y col., 2000).
La fermentación alcohólica se realiza generalmente con cepas de Sacharomyces cerevisiae aunque también es
posible alcanzar concentraciones importantes de etanol con la bacteria Zymomonas mobilis (Garro y col, 1995; Abate y
col. 1996).
El objetivo de este trabajo fue determinar las condiciones para obtener el mejor grado de hidrólisis del almidón
del grano, usando las propias enzimas que se generan durante la germinación.

Materiales y Métodos

Preparación de las muestras

- Se trabajó con muestras preparadas a partir de granos germinados y sin germinar.
- Para la germinación, los granos se pusieron en remojo durante 24 horas, luego se colocaron los mismos sobre un
lienzo húmedo, durante 48 horas más, manteniéndose la temperatura en aproximadamente 30° C. Posteriormente, se
sometieron los granos a un proceso de secado a fin de detener la germinación.
- Se realizó la molienda de los granos (tanto germinados como sin germinar).
- Con la harina así obtenida, se prepararon suspensiones con 10 o 20 g de harina (según el ensayo) por cada 100 ml.
- Gelatinización del almidón: la suspensión de harina se puse en baño de María a 100°C durante una hora.
-Hidrólisis química: se agregó ácido ClH en distintas proporciones y se dejo en las condiciones de tiempo temperatura
especificadas en el ensayo.
Determinaciones químicas.
- El pH se midió usando tiras indicadoras.
- La determinación de azúcares se realizó con el método de Fehling – Causse – Bonnans.
- La hidrólisis química se realizó, en una primera parte, agregando 2 ml de ácido clorhídrico a 10 ml de solución,
calentando el sistema a baño María durante 10 minutos; luego se completó el volumen a 100 ml (este paso se realizó
para la determinación de azúcares totales en el grano, para usar este valor como referencia).
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- Determinación de etanol. Se realizo una destilación por arrastre con vapor , en un dispositivo de micro Kjeldhal. Sobre
el destilado se midió el índice de refracción. De tabla se obtiene el porcentaje de alcohol en volumen.
Inóculo
Se utilizó levadura seca comercial en la proporción de 1 gramo de levadura seca por litro de medio de cultivo.

Medio de Fermentación
El medio de fermentación contiene por litro: 200 g de harina de sorgo, 3 g de peptona, 1 g de KH2PO4, 1 g de
(NH4)2SO4 y 1 g de levadura seca . El pH del medio se ajusto a un valor de 5, usando Na(OH).

Resultados y Discusión

Sacarificación enzimática.
Se trabajó con suspensiones de harina de granos germinados, que se sometieron a tres condiciones de temperatura
controlada, temperatura ambiente, 47° y 60°C, sacándose muestras a distintos tiempos para seguir el grado de hidrólisis
mediante determinaciones de azúcares. Los valores obtenidos se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1: Azúcares libres en muestras de granos germinados en 100 g de harina.

Temp.
Ambiente 47° C 60° C
Tiempo

1 hora < 2 g glucosa 3 g glucosa 2,45 g glucosa

10 horas < 2 g glucosa 3,3 g glucosa 3,9 g glucosa
24 horas < 2 g glucosa 3,8 g glucosa 5,1 g glucosa

48 horas < 2 g glucosa 2,9 g glucosa* 5,7 g glucosa

*: la disminución en el valor de azúcar obtenido puede deberse a la posible acción de microorganismos

Posteriormente se trabajó con temperaturas superiores, para comprobar la posible obtención de mayores porcentajes de
azúcar. Para ello, las soluciones se prepararon de idéntica manera que en el caso anterior, observándose que,
efectivamente, los porcentajes de glucosa aumentaron. Los resultados se muestran en la Tabla 2.
En este caso, para control, también se realizó la determinación de azúcares totales, mediante hidrólisis química de las
muestras al final del ensayo.

Tabla 2: Azúcares libres y totales en muestras de granos germinados en 100 g de harina.

Temp.
60° C 80° C 100° C
Tiempo

1 hora < 2 g glucosa 3,2 g glucosa 7,1 g glucosa

2 horas - 3,86 g glucosa 10,6 g glucosa
3 horas - 7,7 g glucosa 8,8 g glucosa

24 horas 7,2 g glucosa - -

72 horas 8,8 g glucosa - -
96 horas 11,7 g glucosa - -
Control (az. Totales) 50 g glucosa 48 g glucosa 52 g glucosa

Con las enzimas propias del grano generadas durante la germinación, sólo se consigue hidrolizar aproximadamente el
20% del total de almidón del grano, por lo que no se realizan ensayos de fermentación con estas muestras, ya que el
porcentaje de alcohol que se obtendría seria muy bajo.

Sacarificación química por hidrólisis ácida.

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Se analizan, entonces, los porcentajes de glucosa obtenidos con la hidrólisis ácida, manteniendo las muestras a
temperatura ambiente y a 60 °C, con diferentes concentraciones de ácido, para determinar si es factible realizar ensayos
de fermentación con sustratos preparados a partir de granos sin germinar. Los porcentajes de glucosa a partir de
hidrólisis ácida se muestran en la Tabla 3:

Tabla 3: Glucosa en muestras de granos sin germinar, con hidrólisis ácida, en 100g de harina.
Temp. Ambiente 60 °

Tiempo 1% Äcido 3% Ac. 5 % Ac. 1% Äcido 3% Ac. 5 % Ac.

<2g <2g <2g <2g 2,16 g 2,44 g

2 horas glucosa glucosa glucosa glucosa glucosa glucosa
<2g <2g <2g 4,53 g 9,6 g 15, 01 g
6 horas
glucosa glucosa glucosa glucosa glucosa glucosa
12 horas <2g <2g <2g 5,6 g 17,79 g 51 g
glucosa glucosa glucosa glucosa glucosa glucosa
<2g <2g 3,05 g
24 horas - - -
glucosa glucosa glucosa

Para la sacarificación de los granos, se adoptó la combinación tiempo – temperatura – concentración que permitió
obtener 51 g glucosa (en 100 g de harina de sorgo). Con estas condiciones se preparó el medio de cultivo para realizar
un ensayo de fermentación, los resultados se muestran en la Tabla 4:

Tabla 4: Fermentación de harina de sorgo, sacarificada por hidrólisis ácida, con levaduras.
Tiempo (horas) Glucosa (gramos / litro) Alcohol (gramos / litro)
-
0 130
24 50 No se determinó
72 16,5
41,6

El rendimiento de fermentación obtenido fue de 71,5% del teórico.

Conclusiones

Comparando el porcentaje de glucosa obtenido con la referencia (52%), puede decirse que las mejores condiciones para
la hidrólisis del almidón de los granos de sorgo son 60°C, 12 horas y con un 5 % de ácido ClH. La solución puede ser
fermentada sin inconvenientes por levaduras.

Referencias

Abate C., D. Callieri, E. Rodriguez and O. Garro. 1996. Ethanol production by a mixed culture of flocculent strains of
Zymomonas mobilis and Saccharomyces sp. Appl. Microbiol. Biotechnol. 45:580-583
Análisis moderno de Alimentos ( Hart y Fisher – Editorial Acribia)
Bvochora J.M., J.S. Read, R. Zvauya, 2000. Application of very high gravity technology to the cofermentation of sweet
stem sorghum juice and sorghum grain. Industrial Crops and Products 11 (2000) 11–17.
Bvochora J.M., R. Zvauya, 2001. Biochemical changes occurring during the application of high gravity fermentation
technology to the brewing of Zimbabwean traditional opaque beer. Process Biochemistry 37:365–370
Garro O., E. Rodríguez, R. Palacios Unda and D.A. Callieri. 1995. Mathematical Modelling of the Alcoholic
Fermentation of Glucose by Zymomonas mobilis mobilis. J. Chem. Tech. Biotechnol. 63:367-373
http://es.wikipedia.org/wiki/Almidón
http://www.fao.org/docrep/T0818S/T0818Soc.htm
http://www.fao.org/livestock/agap/frg/afris/espanol/document/tfeed8/index.htm
http://www.geocities.com/catbromatologia/seminarios.htm
Leeson, S., Summers, J.D., 1997. Commercial Poultry Nutrition, second ed.. University Books Guelph, Ontario,
Canada.
Manual de Laboratorio de Ciencia de los Alimentos (Dana B. Ott – Editorial Acribia)
Principios de Ciencia y Tecnología de Cereales (Carl Hoseney – Editorial Acribia)