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TURBIDIMETRÍA
Y
NEFELOMETRÍA
Química analítica II
Eliel Rafael Romero Gracia
INGENIERÍA BIOQUÍMICA
5st SEMESTRE
No control: 09120036
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Contenido
INTRODUCCIÓN............................................................................................................................................................. 3
DEFINICIONES ............................................................................................................................................................... 6
Turbidimetría ............................................................................................................................................................ 6
Nefelometría .............................................................................................................................................................. 6
TURBIDIMETRÍA ........................................................................................................................................................... 8
Turbidímetros ........................................................................................................................................................... 9
NEFELOMETRÍA ......................................................................................................................................................... 10
Nefelómetro ............................................................................................................................................................ 13
APLICACIÓN ................................................................................................................................................................. 15
Imunoprecipitación.............................................................................................................................................. 15
CONCLUSIÓN ............................................................................................................................................................... 17
REFERENCIAS ............................................................................................................................................................. 17
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INTRODUCCIÓN
Los métodos ópticos de análisis cubren un amplio campo de aplicaciones debido a su rapidez,
a la gran gama de instrumentación disponible y sus grandes posibilidades de automatización.
Los métodos no espectroscópicos son aquellos en los que no hay intercambio de energía, sino
cambios en la dirección o en las propiedades físicas de la radiación electromagnética
Cuando un haz de luz choca con una partícula en suspensión parte de la luz se dispersa, parte
de la luz se refleja y parte de la luz se absorbe. La dispersión de la luz depende de: la longitud
de onda de la luz, del tamaño de la partícula y del índice de refracción de la partícula en
relación con el medio que la rodea.
- Determinación de proteínas totales en suero, LCR u orina (haciendo que las proteínas
precipiten con TCA o ácido sulfosalicílico).
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La nefelometría: mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente
con ángulos que oscilan entre 15 y 90°). Utiliza como instrumento el nefelómetro en el que el
detector se ubica con un ángulo que oscila entre 15 y 90° ejemplo:
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las dos técnicas se usan para determinar la transparencia y controlar el tratamiento de aguas
potables, efluentes de plantas de tratamiento de aguas y otros tipos de aguas ambientales.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas
sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia La turbidez
es la propiedad óptica de una muestra que hace que la radiación sea dispersada y absorbida
más que transmitida en línea recta a través de la muestra. La turbidez es ocasionada por la
presencia de materia suspendida en un líquido. Hay dos métodos para medir la turbidez de
una muestra, la turbidimetría y la nefelometría. Son dos técnicas complementarias que se
utilizan para el análisis cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas.
En la turbidimetría se compara la intensidad del rayo de luz que emerge con la del que llega a
la disolución. En cambio, en la nefelometría la medida de la intensidad de luz se hace con un
ángulo de 90º con respecto a la radiación incidente. El instrumento usado en la nefelometría,
el nefelómetro se asemeja al fluorómetro. En cambio en turbidimetría se utiliza el
turbidíemetro que es un fotómetro de filtro.
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DEFINICIONES
Turbidimetría
Siendo la concentración de las partículas dispersantes expresada como masa por unidad de
volumen; es la longitud del camino óptico y es una constante que depende de varios
factores: tamaño, forma de las partículas dispersantes y la longitud de onda.
Nefelometría
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Elección entre turbidimetría y nefelometría
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TURBIDIMETRÍA
Cuando un haz de luz monocromática, de longitud de onda no absorbible choca contra las
partículas de una sustancia que está en suspensión, cambia la dirección de propagación del
haz de luz (en realidad sólo cambian de dirección algunos fotones del haz). Este efecto es
usado para determinar la presencia de un analito en suspensión ya que ese cambio de
dirección del haz y de su intensidad depende de muchos factores que una vez relacionados y
cuantificados permiten obtener los valores buscados.
Turbidimetría fundamento
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Existe una relación matemática determinada experimentalmente:
Donde:
Turbidímetros
Diagrama esquemático de un
trubidímetro Du Pont modelo
430.
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El haz incidente se convierte en luz polarizada en un plano mediante el polarizador primario.
Después de atravesar la muestra el haz se divide en dos, mediante un espejo semi-plateado, y
se detecta con dos fototubos separados. Cuando la disolución de la muestra no tiene partículas
en suspensión, la fotocélula 1 da una respuesta máxima y la fotocélula 2 da una respuesta
mínima nula. La relación entre la señal 2 y la señal 1 es una media de la concentración de las
partículas en suspensión. Al aumentar la concentración de las partículas en suspensión en la
muestra, aumenta la señal de la fotocélula 2 y disminuye la de la fotocélula 1 y por esto la
razón de las dos señales permite una medida sensible de la turbidez. Este sistema de doble
haz minimiza el problema debido a la absorción por las partículas de la disolución pero tiene
el inconveniente de que no puede usarse cuando la disolución contiene sustancias
ópticamente activas. Este instrumento puede usarse tanto para muestras individuales como
para control en continuo de corrientes de fluidos.
NEFELOMETRÍA
Se basa en la detección de los complejos Ag-Ab, por la refracción que dichos complejos
producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el antígeno y el anticuerpo
correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos láser y se establece una relación entre la
cantidad de luz que llega y la cantidad de complejos formados.
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El procedimiento generalmente es empírico y sólo se consideran 3 factores:
3. Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si
están coloreadas, se debe escoger una porción del espectro electromagnético en la que
la absorción del medio se reduzca al mínimo.
En las muestras se agregan agentes tensoactivos (como gelatina), para prevenir la coagulación
del coloide. Sólo se obtienen datos confiables si se controlan escrupulosamente las variables
que afectan el tamaño de partículas.
Procedimiento analítico
Se basa en la dispersión de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz
atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se
dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersión no
supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la propagación,
porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo. La intensidad depende
de: el número de partículas sus pendidas, su tamaño, su forma, los índices refractivos de la
partícula y del medio dispersante, y la longitud de onda de la radiación dispersada. Cuando la
concentración de una suspensión de partícula es baja es preferible medirla por este método.
En este caso la suspensión se coloca en una cubeta colocada como se muestra en la figura
siguiente.
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Este consiste en un tubo largo y estrecho en el cual se introduce una mezcla de gas formada
por 7 partes de helio y 1 parte de neón al que se le aplica un voltaje para producir una
descarga eléctrica.
Relación matemática
La relación matemática entre la intensidad de dispersión, S y la concentración de partículas
suspendidas es raramente utilizada es suficiente con saber que existe una relación lineal entre
ellas a bajas concentraciones. Sin embargo la relación matemática que cumplen es
Donde:
C: es la concentración en%
: es la radiación dispersada
: es una constante
|
P
Fuente C Cu Cr
Ángulo
S
Tf
C: filtro
Cu: cubeta (v. superior)
El valor del ángulo oscila entre 30 y 70, su valor depende de la aplicación específica
seleccionada.
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Nefelómetro
A los nefelómetros usados en las pruebas de calidad del agua, comúnmente se les
llaman turbidímetros. Sin embargo, pueden haber diferencias entre los modelos de
turbidímetros, dependiendo del arreglo geométrico de la fuente luminosa con respecto a la
fotocelda. Un turbímetro nefelométrico siempre monitorea la luz reflejada por las partículas y
no la atenuación debida a la turbidez.
Nefelómetro C-102
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TURBIDIMETRÍA VS NEFELOMETRÍA
Para nefelometría, la intensidad de la radicación dispersada a 90° será mayor cuanto menos
sea el tamaño de las partículas. Para partículas mayores, la intensidad de la dispersión a 90°
disminuye. Cuando se usa una fuente de radicación de UV/VIS, el tamaño de partícula optimo
para nefelometría es de 0.1 a 1 µm. para turbidimetría, fenómeno menos dependiente de la λ,
en cambio el tamaño de las partículas es menos importante; en este caso la señal es la
disminución relativa de la radiación trasmitida. De hecho, las medidas turbidimetricas son
aun posibles cuando el tamaño de las partículas dispersantes producen un aumento de la
reflexión y refracción (aunque la relación lineal entre la señal y la concentración de las
partículas dispersantes no puede mantenerse mucho más).
Preparación de la muestra
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APLICACIÓN
Imunoprecipitación
- Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partículas que produzcan una
dispersión de luz no deseada ej. lipoproteínas, quilomicrones También puede
interferir la suciedad. ·
- La intensidad de la luz dispersada. Las proteínas suelen tener un pico de absorción en
el ultravioleta y los cromógenos del suero entre 400-425nm; por todo ello se suele
trabajar a frecuencias que oscilen entre 320-380nm y 500-600nm.
Inmunodifusión radial
En este caso se añade un antisuero específico a la agarosa que, a su vez, se vierte sobre placas.
Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estándares de proteínas y problemas
(antígenos). El antígeno difunde en el gel durante varias horas y va reaccionando con el Ac. En
la zona de equivalencia se produce un anillo de precipitación
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Inmunodifusión doble o técnica de Ouchterlony
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CONCLUSIÓN
Los métodos ópticos de análisis cubren un amplio campo de aplicaciones dentro de las
Técnicas basadas en la dispersión de radiación tenemos la turbidimetría y la nefelometría. Las
cueles nos regularmente utilizadas en control de calidad, pero gracias al avances de diversas
maquinarias, nos es posible poder aplicar estos métodos de análisis dentro de otras ramas
científicas, ya sean salud o investigación.
Estas dos técnicas están basadas generalmente en la formación de un precipitado, del cual se
parte para el análisis.
Ambas técnicas permiten la descripción y análisis óptico una muestra. Y el uso de estas
técnicas de investigación depende de las necesidades del investigador. Las diferencias entre
las dos técnicas son especificas y permiten le análisis desde dos campo de la óptica muy
importante dentro de los laboratorios. La turbidimetría y la nefelometría se acoplan para un
mejor enfoque del análisis.
REFERENCIAS
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