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Número de recambio=
(µmoles de sustrato/min)/µmoles de enzima x sitios activos= min-1.
8. Al hacer una purificación de una enzima el extracto crudo tiene una actividad total de
45 U y una actividad específica de 29 mU/mg. En el último paso de purificación se
obtuvo una actividad total de 19,8 U y una actividad específica de 780 mU/mg.
Calcular:
a) Cantidad de proteínas en mg en ambas fracciones.
b) Porcentaje de recuperación.
c) Factor de purificación.
Sol.: a) 1551,7 mg y 25,38 mg; b) 44,0%; c) 26,9 veces
9. Al hacer una purificación de una enzima el extracto crudo tiene una actividad total de
53,70 U y una actividad específica de 20 mU/mg. En el último paso de purificación se
obtuvo una actividad total de 24,16 U y una actividad específica de 604 mU/mg.
Calcular:
a) Cantidad de proteínas en mg en ambas fracciones.
b) Porcentaje de recuperación.
c) Factor de purificación.
Sol.: a) 2685 mg y 40 mg; b) 44,9%; c) 30,2 veces
12. Para purificar un determinado enzima, a partir de un extracto crudo que lo contiene,
se ensayan sucesivamente precipitaciones fraccionadas, cromatografía de intercambio
iónico y cromatografía de exclusión, con los resultados que registra la siguiente tabla:
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Volumen de disolución (proteína) Actividad enzimática
(ml) (mg/ml) (U/ml)
_________________________________________________________________
I 2000 10 50
II 500 5 160
III 100 4 400
IV 50 2 700
V 10 9,1 3200
__________________________________________________________________
a) Calcular el porcentaje de recuperación del enzima después de cada una de las
manipulaciones a las que se le ha sometido
b) Indicar si procede seguir purificando el enzima o cabe esperar haber alcanzado su
homogeneidad electroforética.
Sol.: a) AT(I)= 80%, AT(II)= 40%, AT(III)= 35%, AT(IV)= 32%; b) no procede
seguir purificando.
15. La siguiente tabla muestra los valores obtenidos al purificar la aldolasa de músculo
esquelético de rata:
Fracción V (ml) Prot (mg/ml) AT (U)
I Extracto crudo 1290 62,3 29,7
II Sobrenadante de 27000 g 1200 34,2 27,0
III Eluato de DEAE-celulosa 1150 29,7 31,0
IV Eluato de gel de fosfato cálcico 210 3,0 37,2
V Precipitado de SO4(NH4)2 (0-50%) 30 36,3 24,3
VI Eluato de alúmina Cr 14,5 1,3 8,1
VII Filtración en agarosa 20,5 0,15 2,0
A partir de estos datos calcular:
a) Porcentaje de recuperación final.
b) Número de veces que se ha logrado purificar el enzima.
Sol: a) 6,7% b) 1760 veces
21. En una reacción enzimática en la que un sustrato (S) se isomeriza para dar un
producto (P), usando 2,5 mg de enzima (Pm 125000) se encontró una velocidad inicial
máxima de 275 µmoles/min. Calcular el número de recambio de dicha enzima en esas
condiciones.
Sol.: 13750 min-1.
23. Una enzima tiene un peso molecular de 60000 y 6 sitios activos por molécula. La
velocidad inicial de la reacción que cataliza es 12 µmoles de sustrato cada 2 minutos en
presencia de 18 µg de enzima. Calcúlese la actividad molecular por centro catalítico de
la enzima.
Sol.: 3333 min-1.
24. Calcular el número de recambio de una enzima (Pm 100000) sabiendo que una
preparación pura del enzima tiene una actividad específica de 500 U/mg de proteínas.
Calcular a partir de la siguiente tabla de purificación la recuperación y el factor de
purificación.
Fracción V(ml) A.T. (U) Prot. (mg/ml)
I 1000 500 10
II 500 300 3
-1
Sol.: a) 50000 min ; b) 60%; c) 4 veces.