Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

2.3. BACTERIILE Bacteriile sunt microorganisme monocelulare de tip procariot cu un cromozom unic, cu dimensiuni medii ntre 0,5 i 8 nm, care se nmulesc asexuat prin sciziune binar, izomorf. Rspndire. Bacteriile sunt microorganisme cu o larg rspndire n natur, ca rezultat al adaptrii lor n cursul procesului de evoluie. Rezervorul natural al bacteriilor este solul n care concentraia de celule poate ajunge la valori de 107-109 g-1 att n straturile superficiale (bacterii aerobe) ct i n straturile de profunzime (bacterii anaerobe). Din sol, bacteriile s-au adaptat s triasc n ape, unde concentraia de celule poate fi de la 10 x cm -3 n apa de izvor, pn la valori de 1012 x cm -3, de exemplu, n ape fecalo-menajere. Bacteriile se pot ntlni la adncimi mari n apa mrilor i oceanelor, n ape termale. Existena n aer a bacteriilor este temporar i prin intermediul curenilor de aer sunt rspndite la distane foarte mari. Din aer sunt antrenate din nou n sol, prin intermediul precipitaiilor atmosferice. Bacteriile fac parte din microbiota natural a plantelor i animalelor. Din sol, prin creterea plantelor, bacteriile ajung la suprafaa acestora i se menin n stare activ, pn cnd condiii favorabile le permit creterea i reproducerea. n organismul animal exist o microbiota bacterian intestinal cu rol important n transformarea bolului alimentar i n imunitatea organismului; la animalele erbivore, bacteriile anaerobe din rumen contribuie la degradarea fibrelor celulozice n procesul de nutriie. Din organismul animal, bacteriile se elimin n mediul ambiant prin intermediul materiilor de dejecie. Rolul bacteriilor n natur i n industrie. n condiii naturale, bacteriile au un rol imens n transformarea compuilor macromoleculari n compui simpli, prin mineralizarea materiei organice nevii, contribuind astfel la realizarea natural a circuitului unor elemente de importan vital: carbon, azot, sulf, fosfor, fier .a. Datorit activitii microorganismelor din sol se formeaz rezerva de substane nutritive - humusul, necesar pentru dezvoltarea plantelor. Pe drept cuvnt se consider c, fr activitatea bacteriilor, pmntul s-ar transforma treptat ntr-un uria cimitir". n industria alimentar, bacterii lactice selecionate sunt folosite n calitate de culturi starter la fabricarea produselor lactate acide i a brnzeturilor, n industria panificaiei, la conservarea legumelor, mslinelor, furajelor verzi .a. Bacteriile propionice se folosesc la fabricarea brnzeturilor tip vaier, deoarece prin fermentare produc acid propionic i CO2, responsabil pentru desenul caracteristic al acestor produse. Bacteriile acetice sunt folosite la obinerea industrial a oetului. Pe ci biotehnologice, folosind culturi bacteriene selecionate sau mutani ai acestora, se obin produse cu o mare valoare economic, de exemplu: enzime, proteine, aminoacizi, acid lactic, acid acetic, solveni (aceton, alcool izopropilic, alcool butilic), hormoni (insulina produs de un mutant de Escherichia coli), ngrminte biologice (genul Azotobacter), insecticide biologice (Bacillus thuringiensis), antibiotice (Streptomyces sp.), vitamine (Propionibacterium shermanii - vitamina B12) .a. n acelai timp, trebuie subliniate i unele aspecte negative ale activitii bacteriilor. Astfel, n industria alimentar, bacteriile pot produce alterarea produselor alimentare (acrirea berii, vinului, putrefacia crnii .a.). Un grup de bacterii care poate crete pe alimente produce toxine de natur proteic, nct prin ingerarea alimentelor contaminate se produc stri de toxiinfecii alimentare. Alte bacterii patogene sunt adaptate s infecteze organismele vii i dau mbolnviri grave (tuberculoza, febr tifoid, dizenterie, sifilis, bruceloz, antrax .a., bacterioze la plante). 1

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

Caracterele morfologice ale bacteriilor. Bacteriile prezint forme celulare foarte diversificate i anume forme de baz, monocelulare, precum i forme derivate ale acestora, ce rezult n urma asocierii stabile a celulelor rezultate prin reproducere. Dintre formele de baz se disting urmtoarele: - sferic - denumit coccus, n care sfera este perfect (micrococi) sau ovalar (enterococi), lanceolat (pneumococi) sau reniform (gonococi); - bacilar - cilindric, denumit i bacterium; - spiralate-elicoidale, specifice bacteriilor patogene care pot fi: forma vibrio (la genul Vibrio comma - agentul holerei), forma spirillum, sub forma unor filamente rigide cu spire largi, forma spirocheta, sub forma unor filamente flexibile cu mai multe spire (la agentul sifilisului); - filamentoase, caracteristice bacteriilor miceliene cu habitatul n sol i n ape (actinomicete; chlamydobacterii .a.). Structura celulei bacteriene. Bacteriile au celula de tip procariot, mai simplificat dect celula eucariot. Principalele diferene constau n faptul c celula are un singur cromozom amplasat ntr-un nucleoid lipsit de membran nuclear i nu conine organite detaate de membran. Prile componente ale celulei bacteriene sunt: peretele celular i structurile extraparietale, membrana plasmatic, citosolul i structuri din citosol (nucleoid, ribozomi, vacuole de gaz, mezozomi). a) Membrana plasmatic. Situat n interiorul peretelui celular, membrana plasmatic are o structur lipoproteic, o grosime de 5-10 nm i este alctuit din straturi de fosfolipide n care sunt situate proteine integrate i proteine globulare. Membrana plasmic are un rol vital, deoarece reine citosolul la bacterii lipsite de perete celular. Este o barier osmotic ce d o permeabilitate selectiv celulei; la nivelul su sunt localizate enzime care asigur transportul activ al nutrienilor n celul i receptori chimici. b) Matricea citoplasmatic reprezint substana cuprins ntre membrana plasmatic i nucleoid. Conine, n stare solubil sau gel, substane organice i anorganice. Incluziunile organice pot fi reprezentate de glicogen (substan de rezerv n celul ce poate fi folosit ca surs de energie) i -hidroxibutirat. Incluziunile anorganice cuprind polifosfai (incluziuni de volutin), incluziuni de sulf sau de magnetit. Dintre structurile interne ale citosolului fac parte: - mezozomii sau corpii membranoi, care rezult prin invaginri ale membranei plasmatice i au un rol funcional important n creterea suprafeei i n diviziunea celular. Contribuie la sinteza peretelui celular, n procese secretorii ale metaboliilor i n procesul de respiraie; - vacuolele de gaz, care au un perete rigid, alctuit din proteine cu molecule mici, permeabil la gaz i impermeabil la ap; - ribozomii, care sunt alctuii din molecule de ARN i proteine, au dimensiuni mai mici dect la eucariote i pot fi localizai fie n zona membranar fie n matrice, alctuind reticulul ribozomal; - nucleoidul sau materialul nuclear, care reprezint o zon din matricea citoplasmatic n care este localizat cromozomul bacterian format din ADN dublu spiralat, nucleoproteide i cantiti mici de ARN. Molecula de ADN are un numr mare de nucleotide, care pot alctui aproximativ 1000 de gene ce pot transmite tot attea caractere genetice. n bacterii de dimensiuni mari se poate ntlni ADN extracromozomial, n plasmide cu rol n tehnici de inginerie genetic. c) Peretele celular. Are o mare diversitate structural ce influeneaz comportarea celulelor la diferite condiii de mediu i condiioneaz afinitatea tinctorial a bacteriilor, nc din 2

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

1884, Christian Gram a constatat c bacteriile reacioneaz diferit atunci cnd se aplic aceeai tehnic de colorare i pune baza metodei difereniale de colorare ce i poart numele, prin care bacteriile sunt mprite n dou mari grupe: bacterii Gram-pozitive i bacterii Gram-negative. Peretele celular asigur forma (rigiditatea) celulei i protecia fa de liza osmotic sau de prezena unor substane toxice, antibiotice .a. d) Structuri extraparietale. La unele bacterii n exteriorul peretelui celular se afl o structur complex de natur poliglucidic denumit glicocalix, care extinde suprafaa celulei i favorizeaz aderena bacteriilor n condiii naturale, la suprafaa diverselor materiale. Diferitele tipuri de glicocalix pot aparine urmtoarelor categorii: stratul S - format din iruri regulate de subuniti glicoproteice; capsula - format dintr-o matrice fibroas. Capsula poate fi rigid, flexibil sau integrat prin asociere cu suprafaa periferic. n timp ce capsula este uniform repartizat pe suprafaa celulei, stratul mucos se prezint sub forma unei mase neorganizate de materiale. La bacteriile acetice, de exemplu, stratul mucos leag prin fibrile extracelulare mai multe celule i poart denumirea de mas zoogleic. Capsula i stratul mucos sunt componente inerte rezultate din metabolismul celulei care i asigur protecie la desicaie, iar n cazul bacteriilor patogene le mrete rezistena la aciunea fagocitelor. La unele bacterii se mai pot ntlni urmtoarele formaiuni: - flageli (cili), care sunt organite de locomoie prezente sub forma unor filamente, cu lungimea de 12-25 m, la bacteriile mobile. Deplasarea celulei se produce prin rotirea flagelului n jurul axului ca o elice, propulsnd celula; - fimbri (pili), care sunt structuri pericelulare sub forma unor tuburi subiri din proteine aranjate helicoidal. Au rol n ataarea bacteriilor i n formarea de pelicule; - spini - structuri rigide (1-15 /celul), ntlnite la bacteriile Gram-negative. Caractere morfologice coloniale. Mediul de baz pentru cultivarea bacteriilor ntlnite pe produse alimentare i folosit n practic este bulionul de carne lichid (BCL) sau solidificat bulion de carne cu agar (BCA). Prin reproducere, dintr-o celul de bacterie, aflat pe mediu nutritiv solidificat, ia natere o clon sau o colonie alctuit din biomas de celule rezultate prin sciziune din celula unic. n cazul bacteriilor sunt ntlnite colonii aparinnd urmtoarelor tipuri: colonii de tip S (smooth" neted, lucios); colonii de tip R (rough" - rugos, aspru, zbrcit); colonii de tip M, cu consisten mucoid, gelatinoas, formate de ctre bacterii productoare de capsule. Pe BCA, coloniile devin vizibile dup 24-48 ore i pot avea culori diverse (alb, alb-crem, galben-auriu, oranj-rou, albastru, fluorescen), caractere macroscopice importante n identificare. Prin cultivare n medii nutritive lichide, bacteriile pot da tulburare i sediment, n cazul bacteriilor anaerobe i facultativ anaerobe, sau pot s formeze la suprafaa lichidelor voal caracteristic, fragil, cutat sau gelatinos, n cazul bacteriilor aerobe (acetice). Caractere fiziologice generale ale bacteriilor. Bacteriile se caracterizeaz prin complexitate metabolic, avnd o mare capacitate de adaptare. Sunt rspndite pe cele mai diverse medii, ca urmare a producerii de enzime inductive, care le permit utilizarea n nutriie a compuilor organici macromoleculari (celuloz i alte poliglucide, protide, lipide). n raport cu temperatura, bacteriile se dezvolt ntr-un domeniu larg, -10C i +90C; majoritatea bacteriilor-ageni de alterare a alimentelor, sunt bacterii mezofile i dau alterri la temperatura camerei (bacterii de putrefacie). Bacteriile n forma vegetativ sunt inactivate pe cale termic la temperaturi de pasteurizare, iar sub form de endospori, la temperaturi de sterilizare. n raport cu oxigenul, majoritatea bacteriilor sunt aerobe (bacterii acetice), altele 3

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

care cresc n semiaerobioz (bacterii lactice), iar un grup restrns de bacterii sunt adaptate s creasc n strict anaerobioz (bacterii butirice). Bacteriile se pot dezvolta n domeniu de pH = 1-11, cu zone optime la valori acide pentru bacterii acidotolerante (bacterii acetice, lactice) sau la valori neutre pentru bacterii de putrefacie. Creterea i reproducerea bacteriilor. n condiii favorabile de via, n prezena mediului nutritiv, bacteriile reacioneaz rapid i are loc creterea, proces prin care se produce mrirea coordonat a tuturor componentelor celulei, rezultat prin adugarea de substan nou-format prin biosintez. n cazul n care prin cretere se produce o modificare n raportul optim stabilit genetic ntre suprafaa care asimileaz i volumul care acumuleaz, se declaneaz reproducerea prin sciziune, care va restabili raportul vital. n prima etap, o dat cu biosinteza componentelor celulare, are loc replicarea cromozomului bacterian, dublarea numrului de mezozomi care vor lega moleculele de ADN i printr-un proces de cariochinez acestea vor fi deplasate spre polii celulei. n zona median ncepe biosinteza unui perete despritor, nct celula parental se regsete n cele dou celule rezultate prin sciziune, celule identice ca form, dimensiune i structur genetic (fig. 6).

Fig. 6. Reproducerea prin sciziune. n urma reproducerii, celulele nou-formate se pot separa sau pot rmne asociate pe direcia axei de sciziune, cu obinerea urmtoarelor forme derivate, care dau uneori denumirea genului: - la forma coccus prin sciziune ntr-un singur plan se formeaz diplococi i prin sciziune repetat se formeaz lanuri de coci cu denumirea de streptococi; - dac sciziunea are loc succesiv n dou plane perpendiculare, ntre ele rezult prin asociere formaiuni cu cte patru coci denumite tetrade (genul Pediococcus). - n cazul n care sciziunea are loc pe trei direcii perpendiculare, se formeaz cuburi ce conin opt coci cu denumirea de sarcina (genul Sarcina): - la bacteriile din genul Staphylococcus n urma sciziunii n trei plane, neordonat, rezult o formaiune n form de strugure; -n cazul bacteriilor cilindrice, sciziunea are loc ntr-un singur plan, perpendicular pe axul longitudinal al celulei, i pot rezulta ca forme asociate, diplobacterii i streptobacterii (genul Lactobacillus). Capacitatea de sporogenez a bacteriilor. Un grup restrns de bacterii au dobndit n timp capacitatea genetic de a forma ntr-un anumit stadiu al ciclului lor de via, o formaiune intracelular denumit endospor, care asigur perpetuarea speciei datorit rezistenei mari la temperaturi ridicate i la lipsa de ap. Printre bacteriile contaminante ale produselor alimentare se pot ntlni dou mari grupe de bacterii: - asporogene, care se reproduc numai prin sciziune i sunt n form vegetativ - sporogene, care se pot ntlni fie n forma lor vegetativ, form n care se reproduc prin sciziune pn cnd n mediu apare un factor defavorizant, de obicei epuizarea unui nutrient necesar, cnd este indus cea de a doua form, respectiv forma sporulat. 4

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

Bacteriile sporogene, incluse n clasificarea general n familia Bacillaceae, formeaz intraceluiar un singur endospor; de aceea, sporularea este considerat ca o form de rezisten a celulei i nu o form de nmulire. Etape de formare a endosporilor. n ciclul de viaa al unei bacterii sporogene, n condiiile apariiei unor factori defavorizani ai nmulirii, celula vegetativ sufer anumite transformri direcionate de cele peste 50 de gene care induc, sporularea. ntr-o prim etap are loc o concentrare a materialului citoplasmatic i nuclear, apoi n celul ncepe s se formeze un protoplast, iar membrana plasmica nconjoar celula sporal asigurnd condiii de protecie i cretere. n etapa urmtoare, n jurul celulei sporale, se formeaz cortexul, apoi nveliul sporal propriu-zis. Endosporul matur poate fi pus n libertate prin solubilizarea peretelui celulei sporogene. Endosporul eliberat, n condiii favorabile, germineaz transformndu-se din nou n celul vegetativ, capabil de reproducere (fig.7).

Fig. 7. Formarea endosporilor bacterieni: n funcie de dimensiunile endosporului i de localizarea sa n celula de tip bacterium, sporii bacterieni pot fi de 2 tipuri: - tip bacillus, n care diametrul endosporului este apropiat cu al celulei, cu o poziie central sau subterminal; - tip clostridium, n care diametrul endosporului este mai mare dect al celulei vegetative; celula n urma sporulrii se deformeaz i capt forma de suveic, atunci cnd poziia endosporului este central, sau de bec-lumnare, atunci cnd endosporul este format terminal. Structura i proprietile endosporilor bacterieni. Cu ajutorul microscopului electronic s-a stabilit c endosporul prezint un nveli sporal tristratificat, n compoziia cruia au fost evideniate proteine cu un procent ridicat n aminoacizi cu sulf, care pot forma uor legturi disulfidice, cu rol n mrirea rezistenei la denaturarea pe cale termic. Sub nveliul sporal se constat o zon transparent - cortex, de natur peptidoglucanic, ce asigur o rezisten mecanic i are rol important n reglarea presiunii osmotice. Partea central a endosporului denumit core" (miez) este format din: sporoplasm, nucleoplasm i un numr mare de ribozomi. n exteriorul endosporului se pot pune n eviden microtubuli ce menin endosporul ntr-o anumit poziie. Carcasa celulei vegetative n care s-a format endosporul poart denumirea de exosporium i acesta poate rmne ataat de endospor sau prin rupere sau liz s l elibereze n mediu (fig. 8).

Fig. 8. Structura endosporului 5

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

Prin studiul microscopic al bacteriilor sporogene, n frotiu, formele vegetative apar uniform colorate, n timp ce la formele sporulate endosporul este incolor, iar colorantul este prezent n exosporium. n endospor au loc importante modificri de compoziie i activitate metabolic comparativ cu celula vegetativ, nainte de sporulare. Din punct de vedere fizic, endosporul ocup 1/7-1/17 din volumul celulei vegetative, iar masic aproximativ 1/3 din cea a celulei productoare. n endospor, cantitatea de ap se reduce de la 80 la aproximativ 15%. Forma n care se gsete apa n endospor este cea de ap legat de diferite componente structurale, ap care nu favorizeaz reaciile biochimice. Datorit lipsei de ap liber, enzimele sporale sunt inactive, iar din punct de vedere metabolic endosporul se afl n stare de anabioz. n endospor este prezent n concentraie ridicat o substan specific - acidul dipicolinic (10 %/s.u.), care prin cele dou grupri carboxilice formeaz cu uurin chelai cu ionii de calciu i magneziu. Se consider c aceste modificri arhitecturale n structura sporoplasmei contribuie la proprietile deosebite ale bacteriilor sporogene. O proprietate remarcabil a endosporilor este termorezistena. n timp ce celula vegetativ este inactivat termic la temperaturi de 80C/1-5 min, ca urmare a denaturrii proteinelor/enzimelor din citosol, sub form de endospori inactivarea poate avea loc la temperaturi de 120C/10-20 min, n mediu umed, sau la 180C/45-60 min, n mediu uscat. Termorezistena este explicabil prin coninutul redus n ap, prezena proteinelor cu sulf i a acidului dipicolinic, compui care protejeaz enzimele sporale, n anumite limite, de o inactivarea ireversibil. O alt proprietate important este rezistena la uscciune, deoarece n stare de anabioz, dei n stare inactiv, enzimele i menin calitatea de biocatalizatori un timp ndelungat, prelungind starea latent de via a celulelor sporale (zeci/sute de ani). n condiii favorabile sau prin reactivare prin nclzire la 60C/10 min, are loc germinarea sporilor. Se produce o absorbie a apei, are loc activarea enzimelor, crete activitatea de respiraie i fermentaie i sunt eliminate substane specifice cum ar fi acidul dipicolinic i unele peptide. Se formeaz tuburi germinative n poziie polar i celula vegetativ rezultat are caracterele genotipice originare. Sporularea reprezint un caracter de specie, este o form de difereniere celular i trebuie privit ca o strategie de adaptare a procariotelor, deoarece sporii sunt forme de rezisten ce pstreaz caracterele genetice ale celulei sporogene. Clasificarea general a bacteriilor. Clasificarea de baz, folosit n prezent, aparine lui Bergey, iar bacteriile sunt grupate n 10 ordine i 47 familii (1952); aceast clasificare a fost modificat n 1984 dup criterii morfologice, prin care bacteriile sunt remprite n 33 de seciuni. n continuare, n mod selectiv, se vor trece n revist principalele ordine, familii i genuri cu importan practic. n clasificarea general a microorganismelor, bacteriile sunt incluse n regnul PROCARIOTAE cu dou diviziuni: - diviziunea SCOTOBACTERIA, n care sunt cuprinse bacterii chimiosintetizante, ce folosesc pentru cretere i multiplicare energia rezultat din reacii chimice; - diviziunea PHOTOBACTERIA, care cuprinde bacterii ce conin pigmeni similari clorofilei i care pot folosi energia luminoas n procese de biosintez celular. n diviziunea SCOTOBACTERIA bacteriile sunt clasificate n trei clase: A. clasa BACTERIA - ce include bacterii chimiosintetizante propriu-zise; B. clasa ACTINOMYCES - care cuprinde bacterii filamentoase; C. clasa MOLICUTES (Mycoplasma) - cu bacterii lipsite de perete celular, patogene. 6

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

n tabel se prezint cele mai importante genuri de bacterii din clasele Bacteria i Actinomyces. Tabelul 2.3. Clasificarea bacteriilor din clasa Bacteria i clasa Actynomices A. Clasa BACTERIA ORDINE FAMILII Pseudomonadales Pseudomonadaceae Nitrobacteriaceae Thiobacteriaceae Spirillaceae Eubacteriales Achromobacteriaceae Azotobactehaceae Bacillaceae Enterobactehaceae Lactobacillaceae Micrococcaceae Propionibacteriaceae B. Clasa ACTINOMYCES ORDINE Actinomycetales Ricketsiales FAMILII Mycobactehaceae Actinomycetaceae Streptomycetaceae GENURI IMPORTANTE Mycobacterium Actinomyce Streptomyces Ricketsia, Coxiella GENURI IMPORTANTE Pseudomonas, Acetobacter Xantomonas, Zymomonas Nitrobacter, Nitrosomonas Thiobacillus Cellvibrio, Cellulomonas Achromobacter.Alcaligenes, Flavobacterium Azotobacter Bacillus, Clostridium Escherichia, Enterobacter, Erwinia, Proteus, Salmonella, Serratia. Shigella Streptococcus.Lactococcus Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostoc Micrococcus, Sarcina, Staphylococcus Propionibacterium

A. Clasa BACTERIA cuprinde mai multe ordine, familii, respectiv genuri. Ordinul Pseudomonadales cuprinde bacterii Gram-negative, cu habitat n sol i ape, aerobe, nesporulate, n care sunt incluse familiile prezentate n continuare: Familia Pseudomonadaceae cuprinde bacterii Gram-negative, nesporulate. Familia Nitrobacteriaceae include bacterii care produc oxidarea compuilor cu azot rezultai din putrefacie, cu transformarea azotului amoniacal n azotii i azotai, form asimilabil de ctre plante. Familia Thiobacteriaceae cuprinde bacterii-ageni ai coroziunii biologice care produc oxidarea compuilor cu sulf. Familia Spirillaceae cuprinde bacterii care produc degradarea celulozei n condiii aerobe. Ordinul Eubacteriales cuprinde bacteriile propriu-zise, foarte rspndite, de form coccus, bacterium i forme derivate rezultate prin sciziune. Din acest ordin fac parte familiile prezentate n cele ce urmeaz: Familia Achromobacteriaceae cuprinde bacterii nesporulate Gram-negative, care produc putrefacie. 7

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

Familia Azotobacteriaceae cuprinde bacterii care folosesc azotul atmosferic n nutriie; au rol n circuitul natural al azotului i sunt folosite pentru obinerea de ngrminte biologice - (Azotobacter chroococcum) Familia Bacillaceae cuprinde bacterii sub form de bastonae, Gram-pozitive, productoare de endospori. Familia Enterobaceriaceae cuprinde bacterii Gram-negative, nesporulate, aerobe/facultativ anaerobe, patogene/facultativ, cu habitatul n tractul digestiv. Familia Lactobacillaceae cuprinde bacterii (lactice) Gram-pozitive, nesporu-late, facultativ anaerobe, sub form de bacili sau forme derivate de la coccus. Caracterul fiziologic comun este capacitatea de a fermenta lactoza cu formare de acid lactic. Familia Micrococcaceae cuprinde bacterii Gram-pozitive, cu forma coccus sau forme derivate prin sciziune . Familia Propionibacteriaceae cuprinde bacterii nesporulate Gram-pozitive, care produc fermentaia propionic. B. Clasa ACTINOMYCES cuprinde dou ordine mai importante. Ordinul Actinomycetales cuprinde bacterii filamentoase, Gram-pozitive, saprofite sau facultativ patogene, folosite industrial pentru obinerea de substane biologic active. Familia Mycobactehaceae cuprinde bacterii patogene (M. tuberculosis). Familia Actinomicetaceae cuprinde bacterii patogene pentru animale/plante Au rol n formarea humusului i n nchiderea la culoare a solului. Familia Streptomicetaceae cuprinde bacterii filamentoase productoare de antibiotice, enzime.

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

Principalele genuri cu importan pentru industria alimentar sunt urmtoarele: - Acetobacter - bacterii acetice care produc oxidarea alcoolului etilic i se folosesc la fabricarea acidului acetic de fermentaie; - Acinetobacter -bacterii sub form de bastonae, Gram-negative, strict aerobe, rspndite n sol, ape, alimente proaspt refrigerate (denumiri sinonime: Moraxella, Psyhrobacter)', - Achromobacter - care produc amine biogene toxice prin degradarea protidelor. Sunt bacterii aerobe i produc alterarea produselor refrigerate; - Aeromonas - bastonae Gram-negative cu habitatul n microbiota intestinal a petilor. Produc gaze prin fermentarea glucidelor; - Alcaligenes - care produc reacie alcalin n lapte litmus, sunt nepigmentate. Pot fi ntlnite n lapte, pe carne de pui, de pete, i pe materii fecale; - Alteromonas - bastonae mobile, Gram-negative, strict aerobe, cu habitat n ape marine, care necesit sare pentru cretere; - Bacillus (28 specii) - bacterii de putrefacie aerobe sporogene. Unele specii selecionate se folosesc pentru obinerea de enzime: amilaze i proteaze; - Brochothrix - bacterii Gram-pozitive sub form de bastonae scurte, cocoide. B. thermosphacta i B. campestris se ntlnesc pe carne proaspt, pstrat n condiii de refrigerare; - Campylobacter - bastonae curbate sau spiralate, microerofile/anaerobe; n clasificrile anterioare erau incluse n genul Vibrio. - Carnobacterium - bacterii sub form de bastonae, Gram-pozitive, catalazo-negative, anterior asociate cu lactobaciiii. Sunt heterotrofe, cresc bine la 0C i nu cresc la 45C. Specii: C. divergens, C. piscicola, C. gallinarium', - Collulomonas - bacterii folosite la prelucrarea deeurilor de hrtie pentru obinerea de protein bacterian folosit n scop furajer; - Clostridium (93 specii) - bacterii butirice, bacterii de putrefacie anaerobe sporogene, productoare de toxine (Cl.botulinum), bacterii productoare desolveni. - Coxiella - bacterii patogene, care produc febra Q-hemoragic. C. Brunei se poate transmite prin lapte; - Enterobacter- bacterii de putrefacie din microbiota intestinal; - Escherichia - bacterii d putrefacie, facultativ patogene (agen ai gastroenteritelor; se pot nmuli n produse alimentare); pot produce toxine. E.coli este folosit ca indicator sanitar pentru verificarea condiiilor de igien la fabricarea produselor alimentare; - Erwinia - bacterii ce produc putrezirea umed a legumelor; - Flavobacterium - care se prezint sub form de bastonae, produc un pigment galben-rou; produc alterarea produselor refrigerate; - Lactobacillus - bacterii lactice acidotolerante, folosite n industria laptelui i pentru conservarea prin murare a produselor vegetale; - Leuconostoc - bacterii lactice hetarofermentative, ageni de alterare a sucurilor, siropurilor de zahr .a. Pot produce dextran (Leuconostoc mesen- teroides)', - Micrococcus - bacterii aerobe, anaerobe, de putrefacie; - Mycobacterium - bacterii patogene. Specii reprezentative: M. tuberculosis (agentul tuberculozei) i M. leprae; - Nitrobacter i Nitrosomonas - care produc oxidarea compuilor cu azot rezultai din putrefacie; - Pediococcus - bacterii lactice sub form de tetrade. Pot produce diacetil i acrirea berii; 9

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

- Proteus - bacterii de putrefacie mobile, aerobe, care produc alterarea crnii, a oulor pstrate la temperatura camerei; - Propionibacterium - bacterii folosite la fabricarea brnzeturilor i pentru obinerea vitaminei B12; - Pseudomonas - bastonae tipice, rspndite pe produse vegetale, carne (vit, pui), care produc alterarea produselor refrigerate; - Ricketsia - cu sp. R. prowazeckii- agent al tifosului exantematic; - Salmonella - care cuprinde bacterii patogene pentru om; se pot nmuli n produse alimentare i produc endotoxine; - Sarcina - bacterii aerobe de putrefacie; - Serratia - bacterii aerobe, care produc pigmeni de culoare roie i predomin n produse vegetale, carne refrigerat (S.liquefaciens); - Staphylococcus - bacterii facultativ patogene; produc enterotoxine i sunt ageni ai intoxicaiilor alimentare; - Streptococcus - care cuprinde bacterii sub form de streptococi (Strepto- coccus salivarius subspecia thermophillus). O parte din speciile genului au fost trecute n genul Lactococcus i folosite drept culturi starter n industrializarea laptelui; - Streptomyces - care cuprinde numeroase specii folosite pentru obinere de antibiotice: tetracicline, streptomicin, cloramfenicol .a., sau pentru enzime (glucozizomeraz, proteaze, amilaze, xilanaze .a.); - Shigella - care cuprinde bacterii enteropatogene (ageni ai dizenteriei); - Thiobacillus - care pot fi ageni ai coroziunii biologice; - Xanthomonas - care dau alterri ale legumelor; produc un polimer xantan; - Zymomonas - bacterii care pot produce fermentarea glucidelor cu forma rea de alcool; sunt folosite la obinerea alcoolului carburant din materii celulozice.

10

Microbiologie general Note de curs, CEPA II 2.4. VIRUSURI

Conf. univ. dr. Marian JELEA

Virusurile sau inframicrobii sunt ageni infecioi fr organizare celular, ce paraziteaz obligatoriu celule vii, i reprezint entiti corpusculare care includ acizii nucleici purttori ai informaiei genetice. Principalele caractere care le difereniaz de microorganisme sunt urmtoarele: absena organizrii structurale i funcionale a celulelor; din aceast cauz, virusurile nu cresc n dimensiuni, nu se divid, nu au metabolism propriu; majoritatea virusurilor nu conin n acelai timp ambele molecule de acizi nucleici; de aceea au fost clasificate n adenovirusuri (ADN) i ribovirusuri (ARN); virusurile sunt adaptate pentru a se reproduce n celula vie (eucariot/ procariot), ca rezultat al transmiterii informaiei genetice proprii, celulei parazitate. Rspndire i rol. Se consider c virusurile au aprut o dat cu primele forme de via. Dintre bolile virale ale omului i animalelor fac parte: turbarea, poliomielita, gripa, hepatita, forme de cancer, SIDA .a., iar la plante, diferite viroze produc ofilirea frunzelor, atrofii/hipertrofii, cloroza .a. (numai la plantele cerealiere se cunosc 25 boli virale). Virusurile denumite i fagi pot produce parazitarea microorganismelor (bacteriofagi, micofagi). Bolile virale se transmit uor prin contact infecios, prin leziuni sau prin inoculri (injectare, nepturi ale insectelor transportoare de virusuri). Prin alimente contaminate, prin materii prime de origine animal provenite de la animale bolnave de viroze, se pot transmite virusuri ce dau hepatita, poliomielita, herpesul .a. Caractere morfologice. O particul viral este alctuit din genom -respectiv o molecul de acid nucleic mono- sau bicatenar, cu diferite forme de compactizare. n genomul virusurilor animale i la bacteriofagi este prezent ADN-ul, n timp ce la virusurile vegetale este prezent ARN-ul. Acidul nucleic este nconjurat cu uniti proteice denumite protomere, cu o repartizare ordonat (capsomere), cu rol n protecia genomului i n recepia de ctre celulele ce urmeaz a fi parazitate. Acidul nucleic i moleculele proteice asociate alctuiesc nucleocapsida, cu diferite forme geometrice (cubic, icosaedric .a.). Masa molecular a virusurilor este de 100-120 kDa, iar 50% din aceasta este dat de acidul nucleic. La unele virusuri mari poate fi prezent o pseudomembran denumit peplos, la suprafaa creia sunt integrate molecule de proteine/enzime, care favorizeaz ptrunderea particulei virale n celula agresat. Virusurile sunt sensibile la diferiii factori ai mediului; astfel, pot fi inactivate pe cale termic la temperaturi de 60,..80C/30 min, n schimb rezist la temperaturi negative i pot fi conservate prin congelare. Pe cale chimic, inactivarea virusurilor poate fi fcut cu alcooli, detergeni, formol .a. Virusurile sunt, n schimb, rezistente la antibiotice. Ciclul vital al virusurilor. n replicarea viral se pot distinge mai multe etape: adsorbia, cnd are loc contactul infecios, particula viral gsete locusul receptor pe suprafaa celulei i are loc ataarea specific; nglobarea (ptrunderea), care este posibil prin transport sau endocitoz; decapsidarea, care const n separarea moleculelor capsomere i n eliberarea acidului nucleic; replicarea, etap ce are loc dup decapsidare, cnd acidul nucleic viral impune celulei parazitate biosinteza proteinelor timpurii" i sunt create, prin biosintez, componentele necesare ce alctuiesc matria pentru biosinteza a noi molecule de acid nucleic viral. Urmeaz biosinteza proteinelor tardive", care intr n structura capsidei; 11

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

morfogeneza, etapa de asamblare prin care moleculele de acid nucleic viral sunt nconjurate de unitile protomere; eliberarea particulei virale, care se poate face prin: exocitoz, transport prin locusuri ale celulei, sau liza peretelui celulei parazitate. Particulele virale mature (denumite virioni) pot s continue infecia celulelor adiacente din esutul viu i are loc fie distrugere acestuia, fie o cretere anarhic, anormal, ce conduce la formarea tumorilor. Procesul de infecie se oprete cnd esutul este distrus sau cnd intervine un factor de inhibare a ciclului litic viral. Un succes al biotehnologiei este obinerea prin inginerie genetic a interferonului, substan care inhib adsorbia i transmiterea unor virusuri. Unele virusuri pot avea concomitent un ciclu lizogenic, avnd capacitatea s se integreze n cromozomul celulei atacate, care se va reproduce normal, pn cnd un factor favorizant va elibera acidul nucleic viral ce va induce etapele ciclului litic. FAGII Fagii sunt virusuri care paraziteaz celule microbiene i, n funcie de natura celulelor parazitate, se cunosc bacteriofagi i micofagi. Bacteriofagii. Sunt virusuri adaptate s paraziteze celula procariot i au fost pui n eviden de ctre F. Twort (1915) i d'Hrlle (1917). Rspndire i rol. Bacteriofagii pot face parte din microbiota intestinal i se elimin prin materii de dejecie. n condiii naturale, bacteriofagii au un rol ecologic important, ca ageni de depoluare a apelor fecalo-menajere. n industria alimentar, bacteriofagii pot contamina i distruge culturi de bacterii lactice. Din acest motiv sunt folosite culturi starter lizorezistente. n ingineria genetic, bacteriofagii sunt folosii pentru transfer de gene i obinerea de tulpini bacteriene modificate genetic. Structura. Bacteriofagii sunt formai dintr-o capsid cu contur hexagonal, care nchide genomul. n interiorul capului hexagonal se afl o molecul de ADN dublu catenar, mpachetat n molecule de proteine i poliamine. n continuarea capului se afl un disc i un cilindru axial (coada bacteriofagului), gol n interior, alctuit din 24 inele-capsomere. Acestea alctuiesc teaca contractil a cozii, care, prin contracie, i reduce lungimea la jumtate. Cilindrul axial se termin cu o plac bazal prevzut cu un orificiu central i cu 6 croete uniti de fixare a bacteriofagului pe celula bacterian receptiv (fig. 8). Infecia cu bacteriofag are loc n urmtoarele etape: - adsorbia, care se produce prin ciocniri ntmpltoare ale bacteriofagilor cu celulele bacteriene, pn cnd acetia ajung pe un situs receptor al peretelui bacterian (de exemplu, acizii teichoici la bacteriile Gram-pozitive, lipopoliglucidele la bacteriile Gram-negative); - fixarea, care se realizeaz cu ajutorul croetelor din placa bazal. Au loc modificri catalizate enzimatic ce conduc la solubilizarea peretelui celular n zona de contact; - injectarea, cnd se produce o contractare a capsomerelor aflate pe tija cilindrului axial. Prin contracie, tija ptrunde n celul pe o distan de aproximativ 12 nm i molecula de ADN, n stare relaxat, este propulsat n interiorul celulei. Carcasa liber de acid nucleic rmne n exteriorul bacteriei; - replicarea acidului nucleic, care are loc similar cu a celorlalte virusuri, cu deosebirea c formarea capului i a cozii au loc separat i apoi are loc, intracelular, morfogeneza; - liza celulei bacteriene i eliberarea fagilor, care poate avea loc ntr-un interval de 2560 min i se produce sub aciunea unei enzime induse de prezena fagului, denumit muramidaz, iar sub aciunea presiunii interne i a lizei are loc ruperea/solubilizarea peretelui celular. Sunt sensibile la fagi, bacterii ale genurilor: Enterobacter, Pseudomonas, Bacillus, Vibrio, Lactobacillus, .a. n celulele lizogene se pot ntlni forme de profagi care, n condiii favorabile, devin viruleni . 12

Microbiologie general Note de curs, CEPA II

Conf. univ. dr. Marian JELEA

Micofagii (micovirusurile). Micovirusurile sunt mai puin studiate comparativ cu bacteriofagii. Au n structur ARN i pot parazita mucegaiuri ale genurilor: Penicillium, Aspergillus, Mucor, Fusarium, sau drojdiii: Saccharomyces cerevisiae .a.

Fig. 8. Structura bacteriofagului.

13