Virusologie general

CUPRINS

1.

2.

3.

4. 5.

6. 7.

Obiectul i istoricul microbiologiei. caracterizarea principalelor grupe de microorganisme: 1.1. Definiia i obiectul microbiologiei...11 1.2. Microorganisme, filogene i taxonomie....11 1.3. Ramurile microbiologiei i contingenele ei cu alte ramuri ale biologiei. ......13 1.4. Istoricul microbiologiei.14 1.5. Etapa intuitiv, de admitere ipotetic a existenei microorganismelor....14 1.6. Etapa descoperirii microorganismelor, a studiului lor morfologic i a primelor ncercri de difereniere i clasificare a acestora..16 1.7. Etapa constituirii microbiologiei ca tiin i a dezvoltrii ei pe baze moderne..18 1.8. Etapa contemporan de dezvoltare a microbiologiei.23 1.9. Dezvoltarea microbiologiei n Romania....26 Caracterizarea general a principalelor grupe de microorganisme 2.1. Prioni....29 2.2. Viroizi..31 2.3. Virusuri32 2.4. Bacterii.33 Virusologie general 3.1. Ipoteze privind originea virusurilor.....36 3.2. Teorii privind natura virusurilor..37 3.3. Formele de existen a virusurilor n natur40 3.4. Constantele virionului..41 3.4.1. Forma.41 3.4.2. Dimensiunile..42 3.5. Structura virionului..43 3.5.1. Capsida viral....43 3.5.2. Pericapsida ....49 3.5.3. Genomul viral.....51 3.6. Particularitile structurale ale unor virusuri zoopatogene complexe..54 3.7. Particularitile structurale ale bacteriofagilor.56 Tropismul virusurilor .59 Multiplicarea virusurilor.60 5.1. Multiplicarea virusurilor zoopatogene..61 5.1.1. Adsorbia sau fixarea virionilor pe celul..61 5.1.2. Ptrunderea virionilor n celul.....61 5.1.3. Decapsidarea..62 5.1.4. Multiplicarea propriu-zis.....63 5.1.5. Eliberarea virionilor din celul..71 Dinamica ciclului de multiplicare..72 Aspecte particulare ale multiplicrii virusurilor zoopatogene..74 7.1. Infecia endosimbiotic74

Virusologie general
7.2. 7.3. 7.4. 7.5. Infecia abortiv...75 Infecia simultan cu asociaii virale de tip cooperant....75 Infecia cu virusuri, interferente......77 Infecia cu acizi nucleici purificai (transfecia)..77

8. 9.

Multiplicarea bacteriofagilor..79 Integrarea virusurilor..83 9.1. Integrarea bacteriofagilor (lizogenia)...84 9.2. Integrarea virusurilor zoopatogene...87 10. Caracterizarea tipurilor de complex virus-celul..89 10.1. Modificri morfologice ale celulelor infectate cu virusuri...90 10.1.1. Efectul citopatic..90 10.1.2. Fuziunea celular....91 10.1.3. Hemaglutinarea i hemadsorbia91 10.1.4. Efectul incluziogen.92 10.1.5. Producerea de aberaii cromozomiale94 10.1.6. Efectul transformant (oncogen)......94 10.1.7. Mecanismele oncogenezei virale....94 10.1.8. Efectul oncolitic..98 10.1.9. Interferena viral...98 11.Comportarea virusurilor fa de factorii de mediu...103 11.1. Comportarea virusurilor fa de factorii fizici.....103 11.2. Comportarea virusurilor fa de factorii chimici.....105 11.3. Substanele chimioterapice i antibiotice.....105 11.4. Inhibitori ai ptrunderii virusului n celul......106 11.5. Inhibitori ai replicrii sau biosintezei..106 11.6. Inductori de interferoni....108 VIRUSOLOGIE SPECIAL 12. Clasificarea virusurilor..110 12.1. Principii de clasificare.110 12.2. Criteriile taxonomice aplicate la virusuri....111

. CLASA DEZOXIVIRA

Familia POXVIRIDAE..131 Subfamilia CHORDOPOXVIRINAE.....132 Genul Orthopoxvirus (subgrupa Vaccinia)..132 Virusul variolei umane (Smallpox).......132 Virusul variolei bovine (Cowpox)133 Virusul vaccinal (Poxvirus officinale)..133 Virusul ectromeliei (Mousepox)...134 Genul Avipoxvirus (subgr. Virusurilor variolei aviare)...134 Genul Capripoxvirus (subgr.virusurilor variolei ovine)...135 Virusul variolei ovine...135 Virusul variolei caprine....136 Virusul exantemului nodular....136 Genul Leporipoxvirus (subgr.mixomatozei)....136 Virusul Mixomatozei...136

Virusologie general
Genul Parapoxvirus......137 Virusul Orf.......137 Genul Suipoxvirus137 Familia HERPESVIRIDAE......137 Genul Herpesvirus...138 Herpesvirusuri patogene pentru mamifere: Virusul Herpes simplex varicella-zoster....138 Virusul bolii lui Aujeszky.139 Virusul rinotraheitei infecioase bovine- vulvo-vaginitei pustuloase infecioase (IBR-IPV)....141 Virusul febrei catarale maligne142 Virusul rinotraheitei equine avortul viral al iepelor...143 Virusul mamitei ulcerative a bovinelor (Herpesvirus mammilitis).144 Virusul Allerton (Herpesvirus bovin 2)...144 Herpesvirus canin 1..144 Virusul rinotraheitei feline (Herpesvirus felin 1).....144 Citomegalovirusurile145 Virusul rinitei cu incluzii..145 Virusul adenomatozei pulmonare a ovinelor146 Herpesvirusuri patogene pentru psri Virusul bolii lui Marek.147 Virusul laringotraheitei infecioase a ginilor..148 Herpesvirus columbar 1148 Virusul pestei raelor....149 Familia HEPADNAVIRIDAE. Genul Avihepadnavirus...149 Familia ADENOVIRIDAE Genul Mastadenovirus.151 Adenovirusuri bovine...151 Adenovirusuri suine.151 Adenovirusuri canine...151 Virusul hepatitei infecioase a cinilor i encefalitei vulpilor (Rubarth)...152 Virusul laringotraheitei infecioase..152 Familia IRIDOVIRIDAE..153 Familia ASFARVIRIDAE.153 Genul Asfivirus....153

Familia PAPOVAVIRIDAE..154
Familia PAPILLOMAVIRIDAE .154 Genul Papillomavirus (Papovavirus A)...154 Virusul papilomului lui Shope.154 Virusul papilomatozei bucale a iepurelui156 Virusul papilomatozei bovine..156 Virusul papilomatozei eqvine..156 Virusul papilomatozei canine..157 Familia POLYOMAVIRIDAE.157 Genul POLYOMAVIRUS..157 Virusul polyomei.157 Virusul SV40157

Virusologie general
Familia PARVOVIRIDAE...158 Subfamilia PARVOVIRINAE ..158 Genul Parvovirus.159 Virusul panleucopeniei pisicilor..159 Virusul parvovirozei canine.159 Parvovirusurile porcine....160 Genul Dependovirus....160 CLASA RIBOVIRA Familia CORONAVIRIDAE160 Genul Coronavirus...161 Virusul bronitei infecioase a puilor de gin.161 Virusul gastroenteritei infecioase virotice a porcului.....162 Virusul encefalomielitei de Ontario.163 Genul Torovirus...163 Familia PARAMYXOVIRIDAE...164 Genul Rubulavirus165 Virusul pseudopestei aviare (Newcastle).....165 Genul Paramyxovirus...169 Virusul parainfluenelor 1, 2,3,4......169 Genul Respirovirus......171 Virusul Sendai......171 Genul Morbilivirus......171 Virusul pojarului......171 Virusul pestei bovine...172 Virusul jigodiei (bolii lui Carr)......173 Subfamilia PNEUMOVIRINAE.....174 Genul Pneumovirus..174 Virusul sinciial respirator...174 Subfamilia RHABDOVIRINAE..175 Genul Veziculovirus....176 Virusul stomatitei veziculoase.....176 Genul Lyssavirus.....176 Virusul turbrii....177 Genul Ephemerovirus..181 Virusul febrei efemere bovine.181 Rhabdovirusuri patogene pentru peti Genul Novirhabdovirus..182 Agentul septicemiei hemoragice virotice Agentul viremiei de primvar a crapului Virusul necrozei infecioase a sistemului hematopoetic Familia BUNYAVIRIDAE....182 Genul Noirovirus.183 Virusul bolii de Nairobi Genul Phlebovirus....183 Virusul febrei vii Rift Genul Bunyavirus183 Virusul Akabane Familia ORTHOMYXOVIRIDAE...184 Genul Influenzavirus A186 Virusul influenei suinelor187 Virusul influenei ecvine..187

Virusologie general
Virusul influenei umane..188 Orthomyxovirusuri aviare....189 Virusul pestei aviare Virusul influenei raelor Genul Influenzavirus B....190 Genul Influenzavirus C....190 Familia ARENAVIRIDAE....190 Virusul coriomeningitei limfocitare.191

Virusul febrei Lassa..191

Genul Arterivirus.191 Virusul arterei ecvine...192 Virusul sindromului respirator i de reproducie la porcine (virusul Lelystad)..192 Familia TOGAVIRIDAE..192 Genul Alphavirus193 Genul Rubivirus...194 Familia FLAVIVIRIDAE.194 Genul Flavivirus..194 Virusul febrei galbene.195 Complexul virusurilor encefalitelor de cpue Virusul Louyping-ill...195 Genul Pestivirus..196 Virusul bolii mucoaselor diareei virotice a bovinelor 196 Virusul pestei porcine.....197 Virusul bolii de grani (Border disease)a mieilor..200 Virusul bolii de Wasselsbron..201 Virusul dehidrogenazei lactice (LDH-V; virusul Riley).201 Familia RETROVIRIDAE201 Subfamilia ONCOVIRINAE..202 Grupa Oncovirus tip C patogene pentru mamifere Genul Deltaretrovirus.....204 Virusul leucozei bovine...205 Virusul leucozei porcine..205 Virusul leucozei feline.205 Sarcomul venerian al cinelui..205 Genul Alpharetrovirus.206 Virusurile leucozelor aviare.206 Virusul sarcomului lui Rous208 Grupa Oncovirusurilor de tip B Genul Betaretrovirus208 Virusul tumorii mamare a oarecelui (Bittner)208 Subfamilia SPUMAVIRENAE...209 Genul Spumavirus...209 Subfamilia LENTIVIRINAE.....209 Genul Lentivirus..209 Virusul Visna Maedi209 Virusul anemiei infecioase a calului...209 Familia REOVIRIDAE...212 Genul Orthoreovirus....212 Genul Orbivirus...213 Virusul limbii albastre (Blue-tongue)..213 Virusul pestei ecvine214

Virusologie general
Virusul bolii crestei albastre (Blue-comb)...214 Genul Rotavirus...214 Virusul diareei neonatale a vieilor, purceilor, mnjilor, iepurilor, cinilor..214 Familia BIRNAVIRIDAE..215 Genul Avibirnavirus215 Virusul bursitei infecioase (Gumbaro)....215 Genul Aquabirnavirus...215 Virusul pancreatitei infecioase necrotice a pstrvilor...215 Familia PICORNAVIRIDAE215 Genul Enterovirus.216 Enterovirusuri umane:- virusul poliomelitei.216 - virusul coxsackie Enterovirusuri porcine:- virusul bolii de Teschen217 - virusul bolii veziculoase a porcului Enterovirusuri aviare: - virusul encefalomielitei infecioase a psrilor218 Enterovirusuri orfane: - virusurile ECHA...219 - virusurile ECBO - virusurile ECSO (ECPO) Genul Aphtovirus....219 Virusul febrei aftoase...220 Genul Rhinovirus.223 Rinovirusuri equine..223 Familia CALICIVIRIDAE223 Genul Calicivirus..223 Calicivirusuri feline..223 Genul Vesivirus....224 Virusul exantemului veziculos al porcului...224 Ageni subvirali Viroizii.224 Prionii...226 Bibliografie general.243 Bibliografie prioni.....249

Virusologie general

Prefa
Am rspuns cu plcere invitaiei autorului, de a prefaa fructul unei munci asidue, concretizat ntr-o valoroas i util lucrare de Microbiologie veterinar. Datorit progresului tehnic, o carte de specialitate este mereu ateptat, att datorit necesitii n procesul instructiv, ct i n activitatea zilnic, practic a medicului de laborator. De la primele rnduri, lucrarea atrage atenia prin noutatea modului de abordare i de sistematizare a tematicii, respectiv a problematicii tratate, bacteriologice i virusologice, a formei de prezentare, care te mbie s o consuli, renunndu-se la forma clasic cu care eram obinuii. Dup modul cum este alctuit, ca form i coninut, lucrarea se ncadreaz n normele pentru un tratat de specialitate, deoarece dezbate exhaustiv i actual toate problemele eseniale privitoare la bacteriile i virusurile implicate n patologia animal. Pe toat ntinderea ei, tratarea problemelor este extrem de constant, aa nct raportul dintre coninut i dimensiunea lucrrii nu e nici prolix, nici concentrat, ci mai degrab moderat. Totui, problemele de virusologie sunt tratate ntr-o viziune modern i personal, limitndu-se numai la cadrul necesar nelegerii aspectelor practice, aplicative n diagnostic. Prin sinteza i sistematizarea materialului, autorul reuete s pun n valoare experiena acumulat n peste 30 ani, n munca de laborator i n activitatea diagnostico-podagogic. Stilul clar, iconografia n bun parte original, mresc din plin accesibilitatea unei lucrri care, cu tot aspectul tehnic, te atrage i i d o satisfacie real de mplinire a unei misiuni de adnc utilitate. Sunt convins c acestea vor fi i sentimentele cititorilor, ceea ce m determin s o recomand cu ncredere. Felicitri sincere autorului, editurii VENUS Iai i tuturor celor care ntr-un fel sau altul au contribuit ca aceast valoroas i util lucrare de Microbiologie veterinar s vad lumina tiparului. 6 iulie 2001 Prof.dr. unv. Tudor PERIANU

Virusologie general

1. OBIECTUL I ISTORICUL MICROBIOLOGIEI. CARACTERIZAREA PRINCIPALELOR GRUPE DE MICROORGANISME

1.1. DEFINIIA I OBIECTUL MICROBIOLOGIEI

Microbiologia (gr. micros = mic + bios = via + logos = tiin, doctrin) este tiina care se ocup cu studiul vieuitoarelor invizibile cu ochiul liber, denumite n sens larg microbi. Termenul de microb a fost creat de SDILLOT n 1878 i se nelege toate microorganismele cu structur celular sau subcelular care, dei morfologic pot fi diferite, au un caracter comun de ncadrare, dimensiunea microscopic. n conformitate cu acest criteriu unic, microbiologia se ocup cu studiul virusurilor (Virusologia), bacteriilor (Bacteriologia), ciupercilor microscopice (Micologia) i protozoarelor (Protozoologia). Termenul de microb sau microorganism va fi folosit n sens generic pentru denumirea bacteriilor, virusurilor, viroizilor, prionilor i a ciupercilor microscopice, iar protozoarele, ncadrabile fr echivoc n microorganisme au rmas prin convenie i tradiie n sfera de preocupri a parazitologiei. Ca urmare a dezvoltrii cunotinelor despre microorganisme n cadrul microbiologiei au aprut o serie de discipline noi (umbrela microbiologiei devenind nencptoare) (fig. 1).

1.2. MICROORGANISME, FILOGENIE I TAXONOMIE

Microorganismele au poziii filogenetic i n sistematica biologic. 8

diferite

arborele

Virusologie general Astfel virusurile se gsesc la limita dintre materia organic i sistemele vii iar poziia bacteriilor i ciupercilor (micetelor) depinde de mprirea lumii vii n dou, trei, patru sau chiar cinci regnuri. Astfel, dac se admite mprirea lumii vii numai n dou regnuri vegetal i animal- mprire care nu mai satisface exigenele biologiei moderne, bacteriile ar trebui admise n lumea plantelor dei aa cum va rezulta din capitolul urmtor, celula bacterian prezint caractere care le deosebete de celula eucariot vegetal.

Fig. 1 Umbrela microbiologiei n care sunt incluse disciplinele constituente

Admind existena mai multor regnuri bacteriile alturi, de algele albastre-verzi pot fi considerate ca regn aparte desemnat de-a lungul timpului sub diferite denumiri: PRIMIGENUM (HOG 1860) PROTISTA (HAECKEL 1866) PROCARYOTA (MURAY 1968). Determinatorul lui Bergey (1974) adopt punctul de vedere nsuit de MURAY i ncadreaz bacteriile n regnul PROCARYOTA. Ciupercile (micetele) constituie un regn de sine stttor regnul FUNGI (WHITTAKER 1969). Referitor la perioada 9

Virusologie general aproximativ n care microorganismele au aprut pe pmnt dup COPELAND (1956) bacteriile ar fi aprut cu 3.000-1.000 de milioane de ani anterior, n precambrianul timpuriu i mijlociu iar micetele cu 1.500500 milioane de ani anterior, n precambrianul trziu i paleozaicul timpuriu, iar cu privire la virusuri sunt mai multe ipoteze care vor fi tratate la capitolul de virusologie.

1.3. RAMURILE MICROBIOLOGIEI I CONTINGENELE

EI CU ALTE RAMURI ALE BIOLOGIEI

Pe baza grupului de microorganisme care formeaz obiectul de studiu al unei ramuri, microbiologia se subdivide n: bacteriologie, virusologie i micologie (studiul micetelor). n funcie de caracterul fundamental sau aplicativ al studiului microorganismelor se pot deosebi: - microbiologia general ramur fundamental care studiaz caracterele generale, structurale i fiziologice ale microorganismelor, indiferent de nia lor ecologic sau domeniul pentru care prezint interes i - ramurile aplicative ale microbiologiei medical, medical-veterinar, industrial, marin, a alimentelor, a solului, a petrolului, a cosmosului, etc. al cror obiect l constituie studiul unui numr mai restrns sau mai larg de specii microbiene, care prin activitatea lor biosintetic sau prin relaiile lor ecologice cu alte organisme exercit un efect util sau nociv n raport cu una sau alta din diferitele sfere ale activitii umane. Cunoaterea nsuirilor biologice ale acestor microorganisme este menit s duc fie la elaborarea unor metode de combatere a germenilor respectivi n vederea evitrii sau ndeprtrii efectului lor duntor (n medicin, medicin veterinar, fitopatologie etc.), fie la folosirea lor pentru mrirea randamentului n diferite domenii productive (industria medicamentelor, industria alimentar, fertilizarea solului, producerea de petrol etc.). 10

Virusologie general Microbiologia are numeroase contingene cu alte ramuri ale tiinelor biologice. Astfel, Imunologia, nainte de a deveni o tiin de sine stttoare, a luat natere i s-a dezvoltat n cadrul Microbiologiei. Genetica molecular modern este n mare msur tributar cercetrilor de microbiologie. n cadrul medicinei sau medicinei veterinare majoritatea patologiilor studiaz un numr mai restrns sau mai larg de mbolnviri, n care factorul etiologic primar, secundar sau asociat este de multe ori de natur microbian. Toate domeniile patologiei, ct i controlul alimentelor sunt n acest fel ntr-o msur mai mare sau mai mic beneficiare att cunotinelor de microbiologie general, ct i microbiologiei medicale sau medical-veterinare, ca ramuri aplicative. Microbiologia medical-veterinar, care studiaz speciile microbiene ce prezint un pericol pentru starea de sntate a animalelor, are o serie de interferene cu microbiologia medicaluman. Ele se datoresc n primul rnd existenei unor microorganisme care n spectrul lor de patogenitate cuprind att omul ct i una sau mai multe specii animale. Unele microorganisme se pot transmite de la animale la om; mbolnvirile produse de acestea se numesc zoonoze sau antropozoonoze. Igiena alimentelor de origine animal este un alt domeniu n care din punct de vedere microbiologic cele dou domenii ale medicinei sunt cointeresate datorit implicaiilor pentru sntatea omului, ale aspectelor cantitative i calitative ale microbismului acestora.

1.4.

ISTORICUL MICROBIOLOGIEI

Evoluia cunotinelor despre microorganisme poate fi mprit n patru etape mai importante: etapa intuitiv, de admitere ipotetic a existenei microorganismelor; etapa descoperirii microorganismelor, a studiului lor morfologic i a primelor ncercri de difereniere i clasificare a acestora; etapa constituirii microbiologiei ca tiin i a dezvoltrii ei pe baze moderne; 11

Virusologie general etapa contemporan de dezvoltare a microbiologiei.

1.5. ETAPA INTUITIV, DE ADMITERE IPOTETIC A EXISTENEI MICROORGANISMELOR

Aceast etap se ntinde din antichitate i pn n a 2-a jumtate a secolului XIX. Ea este caracterizat prin elaborarea de ctre diferii nvai a unor ipoteze sau teorii care ncearc s explice contagiozitatea unor mbolnviri, dintre care merit a fi reinute urmtoarele: a)Teoria miasmatic a celebrului medic grec HIPPOCRAT din COS (460-380 .e.n.) reprezint prima teorie medical de profunzime. Conform acestei teorii, bolile molipsitoare sunt produse de miasme vehiculate prin aer. Este ns admis i posibilitatea transmiterii bolilor prin ape alterate aduse de la distan. Astfel de consideraiuni teoretice sunt urmate i de recomandri practice, cum ar fi executarea de fumigaii cu sulf sau esene aromate i fierberea apei, n cazul apariiei bolilor molipsitoare. HIPPOCRAT este primul care face observaii privind existena unor cauze comune la bolnavii care prezint aceleai manifestri de boal. Tot n antichitate au mai fost admise puncte de vedere privind cauza transmiterii unor boli, de ctre unii istorici i scriitori: - THUKIDIDE (465-388 .e.n.) atribuie apariia epidemiilor unor factori de contagiune contagium animatum. Renumitul istoric grec a fcut n acelai timp observaii privind imunitatea, menionnd n scrierile sale c dup trecerea prin boal nu se produc mbolnviri a doua oar. - MARCUS TERENTIUS VARO (116-27 .e.n.) coreleaz apariia unor mbolnviri cu particulariti zonale ale locului respectiv, ca de exemplu existena mlatinilor. Filozoful roman admite ca probabil prezena n regiunile palustre a unor animale minuscule aniamlia minuta- ce plutesc n aer i crora le revine responsabilitatea etiologic a mbolnvirilor. 12

Virusologie general Teoria miasmatic a fost ns cea mai bine consolidat, avnd valoarea unei teorii medicale. De aceea ea a persistat i n evul mediu, dup ce a fost emis teoria contagiunii, cu care a continuat s coexiste pn n timpurile moderne. b)Teoria contagiunii a medicului italian GIOROLAMO FRACASTORO (1478-1553), cunoscut i sub numele latinizat HYERONIMUS FRACASTORIUS, valorific n bun msur observaiile i experiena dobndite n decursul timpului privind bolile molipsitoare. n lucrarea sa De contagionibus, de morbis contagios et eorum curatione, FRACASTORO numete particulele responsabile de boli seminaria i le consider entiti vii, capabile de multiplicare. Natura contagioas este deci vie, definit deseori pe parcursul lucrrii i cu termenul contagium vivum. Lucrarea cuprinde i precizri asupra modurilor posibile de contagiune direct, indirect, la distan. Una din importantele idei noi, care apar n teoria lui FRACASTORO,este aceea a afinitii elective a germenilor, care admite c acetia pot avea afinitate numai pentru anumite specii animale sau pentru unele organe.

1.6. ETAPA DESCOPERIRII MICROORGANISMELOR, A STUDIULUI LOR MORFOLOGIC I A PRIMELOR NCERCRI DE DIFERENIERE I CLASIFICARE A ACESTORA

Aceast perioad ncepe odat cu ultimile decenii ale secolului al XVII-lea i se ntinde pn n a doua jumtate a secolului al XIX-lea. Ea este caracterizat prin cunoaterea nemijlocit a obiectului microbiologiei i este tributar progresului tehnic n plin avnt. a) Inventarea microscopului. Descoperirea microorganismelor nu ar fi fost posibil fr apariia instrumentelor de amplificare optic. Prima ncercare de construcie a unui microscop se datorete lui ROGER BACON n secolul XIII urmat abia peste aproximativ dou secole de fraii ZACCHARIAS i HANS JENSEN (1590) i de GALILEO GALILEI (1610), ROBERT HOOKE (1665) aduce perfecionri microscopului i-l folosete pentru cercetarea 13

Virusologie general structurii organismelor vegetale. n aceai perioad au aprut i ali constructori de microscoape, printre care se numr i LEUWENHOECK. Descoperirea microorganismelor ANTONY VAN LEUWENHOECK (1632-1723) construiete un microscop care se pare c mrea de 300 ori, cu care face cercetri n saliv i puroi, examineaz spermatoizii, solzi de fluturi etc. Fiind dotat cu un ptrunztor spirit de observaie i capacitatea de sesizare a noului, LEUWENHOECK observ, descrie i desemneaz (fig. 2) n lucrarea sa Arcana naturae ope microscopiorum detecta, microorganisme, astzi omologabile cu bacteriile i ciupercile inferioare, pentru care folosete denumirea animalcula. Lucrarea este prezentat la Societatea Regal de Biologie din Londra n 1675, este tiprit la DELFT n 1695 i reprezint certificatul de natere al microbiologiei.

b)

Fig. 2 Desenul lui LEUWENHOECK n care sunt redate bacteriile observate n saliv.

Secolul al XVIII-lea a marcat puine progrese n cunoaterea lumii microbiene descoperite de LEUWENHOECK. Cercetrile ntreprinse s-au concretizat n acumulri de date cu caracter predominant empiric privind morfologia microorganismelor. c) Primele ncercri de difereniere i clasificare a microorganismelor . LINNE (1707-1778) ine seama de 14

Virusologie general existena acestor vieuitoare i n lucrarea sa Systema natura aprut n 1735, le ncadreaz ntr-un singur gen, cruia i d numele de chaos, semnificativ pentru stadiul cunotinelor despre microbi din acel timp. FRIEDRICH MULLER ntre 1773-1786 este primul care subliniaz faptul c nu toate microorganismele sunt identice i propune mprirea lor n dou genuri; Vibrio i Monas. Ulterior se fac i alte propuneri de noi genuri i specii. Apar primele sisteme de clasificare ale microorganismelor. FERDINAND COHN n 1854 creaz termenul de bacterie i mpreun cu EHREHBERG desprind acest grup de microorganisme din regnul animal i argumenteaz ncadrarea lui n regnul vegetal, pe baza prezenei peretelui celular. Astfel, n cadrul vieuitoarelor microscopice, bacteriile devin un grup de sine stttor, difereniat, deocamdat pe baza criteriilor morfologice.

1.7. ETAPA CONSTITUIRII MICROBIOLOGIEI CA TIIN I A DEZVOLTRII EI PE BAZE MODERNE

Aceast etap cuprinde a doua jumtate a secolului al XIXlea. Ea este strns legat de apariia a dou personaliti: -LOUIS PASTEUR i ROBERT KOCH, care prin contribuiile lor i a colilor pe care le-au creat, au fundamentat microbiologia ca tiin i au declanat dezvoltarea ei impetuas. Tot n aceast perioad se situeaz i nceputurile imunologiei, ramur a tiinelor biologice, astzi de sine stttoare, dar care i are originea i s-a dezvoltat pn nu demult n strns conexiune cu microbiologia. a) Rolul lui LOUIS PASTEUR i a colii sale n revoluionarea microbiologiei. LOUIS PASTEUR (1822-1895) a fost un savant de larg orizont i de o excepional fecunditate, profunzime i probitate tiinific. Cu toate c a fost chimist ca formaie i c n primii si ani de activitate a elaborat cteva valoroase lucrri de chimie, PASTEUR i-a dedicat ntreaga sa activitate studiului microorganismelor. Mobilul schimbrii domeniului su de cercetare l-a constituit studiul unor procese chimice pe care, n 15

Virusologie general final, PASTEUR le-a dovedit ca fiind produse de microorganisme. Pornind de aici, el i-a lrgit treptat sfera de investigaii asupra microorganismelor. Astfel, s-a ajuns la depirea etapei morfologice de studiu a microorganismelor n care se acordase o atenie precumpnitoare formei acestora i inaugurarea etapei fiziologice, n care pe prim plan trece investigarea activitilor enzimatice microbiene, cu implicaiile acestora pentru diferite domenii ale activitii umane. Cele mai importante descoperiri ale lui PASTEUR n domeniul microbiologiei i a biologiei n general, au fost: Demonstrarea naturii microbiene a fermentaiilor. Solicitat fiind s lmureasc unele probleme ale procesului de vinificaie, PASTEUR dovedete c orice fermentaie este un act relativ unui fenomen vital. El infirm teoria lui LEIBIG, conform creia fermentaiile erau considerate rezultatul descompunerii microorganismelor. n 1865, PASTEUR descoper fermentaia butiric i bacteriile anaerobe. Fundamentarea naturii microbiene a infeciilor. PASTEUR stabilete relaia cauzal microb-infecie pe care o verific experimental. Pornind de la studiul unor boli ale larvelor fluturelui de mtase, PASTEUR i-a extins mai trziu studiile asupra unor infecii ale animalelor i omului. El demonstreaz c prezena germenilor n organele oilor moarte de antrax nu este consecina bolii, ci cauza acesteia. n concluziile sale, PASTEUR pornete de la analogia existent ntre fermenaie i infecie, ambele procese fiind efectul activitii biologice a bacteriilor. Infirmarea definitiv a teoriei generaiei spontane. Actualizat n secolul al XIX-lea de FELIX-ARCHIMEDE POUCHET, teoria generaiei spontane constituie n acea perioad o frn n dezvoltarea tiinelor biologice. Bazat pe descoperirile sale privind mecanismele fermentaiilor i a infeciei, PASTEUR demonstreaz fr echivoc c microorganismele nu apar spontan. Ele ajung n substraturile n care se multiplic din aer, de pe suprafaa obiectelor care vin n contact cu aerul etc. Un substrat nutritiv sterilizat ntrun recipient nchis la flacr, rmne practic steril la infinit. Aceste experine au stat i la baza introducerii sterilizrii n practica medical.

16

Virusologie general Prepararea unor vaccinuri. Vaccinul contra holerei aviare a fost primul vaccin antibacterian bazat pe atenuarera germenilor n condiii de laborator. Aceast descoperire a fost consecina unei ntmplri. PASTEUR a uitat o tulpin de germeni la termostat i a constatat apoi c ea nu mai reproduce infecia la gini, iar ginile inoculate au devenit rezistente la inocularea cu o tulpin virulent. Inspirat din aceast ntmplare, PASTEUR a atenuat i bacilul crbunelui. Pe baza unei experiene tiinifice organizate dup un protocol bine stabilit n 1881, n localitatea Pouilly le Fort, este spectaculos demonstrat eficacitatea vaccinului anticrbunos pasteurian pentru oaie. Geniul lui PASTEUR este mai pregnant ilustrat prin prepararea vaccinului antirabic. Fr a cunoate natura agentului etiologic al turbrii, PASTEUR reuete n 1885 s obin prin treceri succesive intracerebrale pe iepure, virus rabic fix, incapabil s reproduc turbarea pe cale subcutanat, dar cu proprieti imunizante. Practica imunizrii antirabice cu virusuri fixe s-a pstrat pn n zilele noastre. Izolarea i identificarea agenilor etiologici ai unor infecii ale omului i animalelor. Lui PASTEUR i revine meritul de a fi izolat i descris mai muli germeni printre care Clostridium septicum (vibrionul septic al lui PASTEUR), stafilococii i streptococii. PASTEUR a avut numeroi elevi, n jurul lui constituinduse o coal la care s-au format o serie de emineni microbiologi, din rndul crora se cuvine a fi menionai: - EMILE ROUX (1853-1933), alturi de YERSIN, s-a distins, printre altele, n studiul toxinelor microbiene. - EDMOND ISIDORE ETIENNE NOCARD (18501903) mpreun cu ROUX izoleaz i identific mai muli germeni cunoscui astzi sub numele de micoplasme. - CHARLES EDUARD CHAMBERLAND este autorul unor inovaii tehnice deosebit de utile activitii curente de laborator, ca de exemplu primul filtru bacteriologic i autoclavul. Dintre discipolii lui PASTEUR se numr i VICTOR BABE, fondatorul colii romneti de microbiologie. 17

Virusologie general Marile descoperiri ale lui PASTEUR n-au ntrziat s-i gseasc laturi aplicative i n alte domenii ale medicinei. Aa a fost cazul introducerii antisepsiei n chirurgie de ctre JOSEPH LISTER (1827-1917); primul antiseptic utilizat pentru pansamente i pulverizri n slile de operaii a fost fenolul. b) Rolul lui ROBERT KOCH i a colii sale n dezvoltarea microbiologiei. ROBERT KOCH (1843-1910), fr s fie dotat cu geniul lui PASTEUR dar animat de o neobosit sete de cunoatere i o enorm putere de munc, trebuie considerat al doilea fondator al microbiologiei tiinifice. Contribuiile sale cele mai importante n acest sens au fost urmtoarele: Stabilirea criteriilor la baza crora un microorganism poate fi considerat agentul cauzal al unei boli. Aceste criterii sunt exprimate sub forma a trei condiii cunoscute sub numele de postulatele sau triada lui ROBERT KOCH. n conceperea i formularea lor, KOCH s-a inspirat din lucrrile profesorului su JAKOB HENLE (1809-1885). Postulatele elaborate ntre anii 1878 i 1884 precizeaz c un microb poate fi considerat agentul cauzal al unei boli atunci cnd: - se gsete la toi indivizii care au prezentat aceleai semne de boal; - se izoleaz i se menine n culturi pure, care - inoculate, reproduc infecia experimental identic sau asemntoare cu infecia natural. Cu toate c nu oglindesc toate faetele procesului complex al infeciei microbiene, postulatele lui KOCH au contribuit substanial la fundamentarea tiinific a patologiei bolilor infecioase. Punerea la punct a tehnicii de izolare a bacteriilor n culturi pure. Obinerea culturilor pure a fost condiionat de introducerea n practica de laborator a mediilor de cultur solide pe care bacteriile se dezvolt sub form de colonii. Posibilitatea izolrii n culturi pure a marcat un important pas nainte n practica individualizrii germenilor din punct de vedere taxonomic. Semnalarea primului fenomen de alergie i prepararea primei substane revelatoare. KOCH observ o sensibilitate deosebit a cobailor inoculai cu bacilul tuberculozei, care n cazul unei reinoculri reacioneaz prin formarea unei inflamaii urmate de un ulcer la locul inocularii. Aceast 18

Virusologie general reacie este cunoscut sub numele de fenomenul lui KOCH. Totodat, cu intenia iniial de a prepara un vaccin, ROBERT KOCH obine tuberculina care, cu unele perfecionri tehnice inerente procesului metodelor de extracie i purificare chimic, este folosit i astzi ca preparat revelator pentru diagnosticul alergic al tuberculozei. Izolarea i identificarea agenilor etiologici a unor grave infecii ale omului i animalelor. KOCH a stabilit etiologia tuberculozei, obinnd n culturi pure bacteria care produce aceast grav mbolnvire. i astzi este uzual apelativul Bacilul lui Koch ca nume comun pentru bacilul tuberculozei. O alt bacterie izolat i descris de KOCH este agentul holerei umane. coala fondat de ROBERT KOCH a fost i ea ilustrat prin renumii bacteriologi, printre care se impune a fi amintii: FRIEDRICH LOFFLER (1852-1915), izoleaz i descrie agenii etiologici ai morvei i rujetului, imagineaz reeta unor medii de cultur i a unor tehnici de colorare i mpreun cu PAUL FROSCH (1860-1928) descoper virusul febrei aftoase. HANS CHRISTIAN GRAM (1853-1938) introduce n anul 1884 metoda de colorare care-i poart numele, rmas pn astzi tehnica de baz pentru examenele bacteriologice curente. n perioada marilor descoperiri ale lui PASTEUR i KOCH este elucidat cauza a numeroase infecii, fiind identificai i descrii agenii etiologici ale acestora de ctre o serie de bacteriologi de renume: ESCHERICH, 1882 Escherichia coli-, NICOLAIER i KITASATO, 1884 Clostridium tetani-, BRUCE, 1887 Brucella melitensis-, NOCARD i ROOX 1898 Mycoplasma mycoides, etc. c) Descoperirea virusurilor. Cu toate c anterior descoperiri lor se preparaser vaccinuri contra unor boli virotice de ctre JENNER i PASTEUR, primul virus a fost pus n eviden abia n anul 1892. DIMITRI IOSIFOVICI IVANOVSKI (1864-1919), un botanist rus, descoper virusul mozaicului tutunului, preciznd c aceast boal este produs de un microb extrem de mic, invizibil la microscop, care traverseaz porii filtrelor bacteriologice. n anul 1898, LOFFLER i FROSCH descoper primul microb filtrabil patogen pentru animale- virusul febrei aftoase, menionat anterior. 19

Virusologie general d) nceputurile imunologiei. Pe baza marilor descoperiri din domeniul microbiologiei i paralel cu aceast, ia natere i se dezvolt imunologia. EDWARD JENNER (1749-1823), un medic englez, preparase nc cu aproximativ un secol n urm (1798) vaccinul contra variolei umane din leziuni recoltate de pe ugerul vacilor; etimologic, cuvntul vaccin este corelat cu vac. Din lucrrile lui JENNER se inspir PASTEUR n prepararea vaccinurilor contra holerei aviare, a crbunelui i turbrii. Aceste importante descoperiri destinate rezolvrii unor probleme practice de mare stringen sunt urmate de cercetri privind mecanismele de aprare antimicrobian ale organismului animal. Cele mai importante probleme elucidate n ultimile decenii ale secolului al XIX-lea, care confer suportul teoretic metodelor imunologice deja intrate n practica prevenirii bolilor microbiene, sunt: - Stabilirea proprietilor antimicrobiene ale sngelui i tumorilor de ctre FODOR n 1887. - Descoperirea fenomenului de fagocitoz de ctre ILIA MECINIKOV (1845-1916). Pornind de la studiul fenomenelor de digestie la steaua de mare, MECINIKOV demonstreaz c n sngele omului unele globule albe sunt capabile s nglobeze particule strine, ntocmai ca celulele din cavitatea general a celenteratelor. - Prepararea primelor seruri imune de ctre BABE i LEPP n 1889 urmai de BEHRING i KITASATO n 1890. - Investigarea mecanismelor unor reacii antigenanticorp; precipitare KRAUS, 1887; imunocitoliza PFEIFFER i ISAEFF, 1894; fixarea complementului BORDET, 1899. HANS BUCHNER (1850-1902) i PAUL EHRLICH (18541915) sunt autorii primelor teorii privind modul de formare al cuplului antigen-anticorp. Teoria catenelor laterale a lui EHRLICH subliniaz substratul chimic care st la baza constituirii cuplului.

20

Virusologie general

1.8. ETAPA CONTEMPORAN DE DEZVOLTARE A MICROBIOLOGIEI

Etapa pe care microbiologia o parcurge la momentul de fa debuteaz cu nceputul secolului XX. Ea este dominat de o serie de importante descoperiri, dup cum i elaborarea i aprofundarea a numeroase probleme prin noi metode corespunztoare progresului tehnico-tiinific din chimie, optic, electronic, etc. care a lrgit mult limitele procesului cunoaterii n toate domeniile tiinelor biologice. Cele mai de seam cuceriri ale microbiologie contemporane pot fi considerate urmtoarele: introducerea substanelor chimioterapice i antibiotice n tratamentul bolilor microbiene, cunoaterea detaliilor structurale i a proceselor fiziologice de finee ale microorganismelor, nceputurile, urmate de progresul rapid al studiilor de genetic microbian, descoperirea ultrastructurii virusurilor i a mecanismelor infeciei virale, dezvoltarea imunologiei i afirmarea ei ca ramur independent a tiinelor biologice. a) mbogirea arsenalului terapeutic antimicrobian. Pn n primele decenii ale secolului XX numeroase boli microbiene erau practic incurabile fapt care a determinat meninerea unui procent ridicat de mortalitate n cazul unor epidemii ca antraxul, pesta, holera etc. Chimioterapeuticele au fost introduse n practica medical de ctre PAUL EHRLICH care sintetizeaz salvarsanul, folosit cu succes n tratamentul sifilisului n jurul anului 1910. Chimioterapia i-a lrgit considerabil sfera de aplicaii odat cu descoperirea sulfamidelor.Cu toate c ultima sulfamid a fost preparat de PAUL GELMO nc din 1908, folosirea lor pe scar larg n tratamentul infeciilor microbiene a nceput abia n anul 1932 cnd GERHARD DOMACK are iniiativa utilizrii ca substan chimioterapeutic a sulfamidei roii (prontozilul) preparat de MIETSCH i KLARER. Antibioticele au intrat n patrimoniul terapiei antimicrobiene n anul 1941 cnd ERNST CHAIN i HOWARD FLOREY trateaz primii pacieni cu penicilina obinut nc din 1929 de ctre ALEXANDER FLEMING din culturile ciupercilor 21

Virusologie general genului Penicillium. Numrul antibioticelor sporete repede mai ales dup identificarea actinomicetelor ca microorganisme secretoare de astfel de substane. WAKSMAN obine n 1944 streptomicina din Streptomyces griseus BURKHOLDER n 1947 cloromicetina, din Streptomyces venezuelae etc. Astzi medicina dispune de foarte multe antibiotice de o mare varietate din punct de vedere al originii i al spectrului de activitate. b) Adncirea studiului morfologiei i fiziologiei microorganismelor. Cunoaterea detaliilor de structur i a mecanismelor fiziologice de finee au fost determinate de progresele din domeniul fizicii i chimiei contemporane. Vizualizarea virusurilor i cunoaterea ultrastructurii microorganismelor a fost posibil datorit inventrii microscopului electronic. Primele microscoape electronice au fost construite n perioada 1930-1940 de ctre firma Siemens i aproximativ din aceai perioad dateaz i primele cercetri electronooptice n domeniul microbiologiei. Aprofundarea cunoaterii mecanismelor fiziologice ale microorganismelor este tributar dezvoltrii biochimiei i introducerii n biologie a modului de lucru cu izotopi radioactivi. Devine astfel posibil cunoaterea structurii chimice a microorganismelor, studiul activitii lor enzimatice, stabilirea cu ajutorul atomilor marcai a soartei diferitelor substane din mediu n raport cu procesele vitale. c) Descoperirea determinanilor genetici ai microorganismelor i dezvoltarea geneticii microbiene. Primele observaii care mai trziu au dus la elucidarea sediului informaiei genetice la microorganisme i n ntreaga lume vie au fost fcute de GRIFFITH n 1928, care a constatat c pneumococii aviruleni aparinnd tipului serologic II, se pot transforma n pneumococi viruleni aparinnd tipului serologic III, dac sunt inoculai la animale n amestec cu o suspensie de pneumococi de tip III omori prin cldur. n 1944, OSWALD AVERY stabilete c responsabilitatea transformrii pneumococilor de tip II n pneumococi de tip III s-a datorat AND-ului eliberat de pneumococii de tip III omori prin cldur, care a ptruns n celulele pneumococilor de tip II aducnd cu sine mesajul genetic care codific nsuirile caracteristice tipului III. Descoperirea lui AVERY st la baza ntregii genetici 22

Virusologie general moleculare moderne, ea dovedindu-i valabilitatea pentru toate vieuitoarele. d) Noi descoperiri n domeniul virusologiei. Sfritul secolului al XIX-lea a marcat demonstrarea existenei virusurilor ca entiti etiologice ale unor mbolnviri ale plantelor i animalelor, invizibile la microscopul fotonic i filtrabile. Acestor relativ sumare cunotine despre virusuri li se adaug nc din primele decenii ale secolului XX, date noi care vor aduce treptat virusologia n stadiul actual de dezvoltare. - Descoperirea bacteriofagilor, a virusurilor care paraziteaz bacteriile se datorete investigaiilor lui WILLIAM TWORT, care n 1915 izoleaz primul bacteriofag, activ fa de stafilococ. El intuiete ns numai vag natura principiului care lizeaz stafilococii, folosind pentru acesta termenul liz transmisibil. Este meritul lui FELIX dHERELLE de a fi stabilit natura viral a factorului litic i de a fi creat termenul bacteriofag (1917). Importana descoperirii bacteriofagilor i a fenomenului de bacteriofagie a constat mai ales n acea c a oferit un model i un instrument uor de mnuit pentru aprofundarea mecanismelor generale ale infeciei virale. - Cultivarea virusurilor i meninerea lor n condiii de laborator reprezint un alt pas nainte pentru studiul virusurilor. Marele virusolog romn, CONSTANTIN LEVADITI folosete primul, n 1910, culturile celulare pentru cultivarea virusurilor. WOODROUF i GOODPASTURE, n 1931 introduc n practica virusologic cultivarea pe ou embrionate, experimentat pentru prima oar n 1911 de MOURPHY. - Cunoaterea ultrastructurii virusurilor a fost posibil ntr-o prim etap datorit studiilor lui BERNAL i FANKUCHEN (1941), pe baza difraciei razelor X, iar mai trziu datorit extrem de numeroaselor cercetri de microscopie electronic deja menionate, care au dus la lmurirea celor mai fine detalii de structur ale particulei virale.

23

Virusologie general Elucidarea mecanismului infeciei virale reprezint cel mai de seam pas al evoluiei cunotinelor de virusologie, un adevrat salt calitativ marcat prin demonstrarea rolului esenial al acidului nucleic n infecia viral. HERSHEY i CHASE, n 1952 arat primii c la virusurile bacteriofagice numai acidul nucleic fagic ptrunde n celula bacterian, nu i capsida, iar GIERER i SCHRAMM, 1956, concomitent cu FRAENKEL CONRAT demonstreaz primii posibilitatea reproducerii experimentale a infeciei cu acidul nucleic viral purificat. e) Dezvoltarea imunologiei i afirmarea ei ca ramur independent a tiinelor biologice. Studiul reaciilor antigen-anticorp nceput la sfritul secolului trecut, capt o amploare deosebit ajungnd la cunoaterea intim a structurii anticorpilor i la investigarea procesului de anticorpogenez n esena lui. n paralel sunt lmurite aspecte noi ale imunologiei cum este cazul fenomenelor de alergie sau hipersensibilitate. n urma unor studii de profunzime sunt elucidate bazele celulare ale imunitii. Se descoper c numeroase stri normale i patologice nc neclarificate din punct de vedere etiopatogenetic, se realizeaz prin mecanisme imunologice. Implicaiile imunologiei se contureaz pregnant i pentru alte domenii ale medicinei dect patologia infecioas, dup cum i pentru alte ramuri ale tiinelor. De aceea, ea a devenit cu timpul o disciplin de grani ntre microbiologie i alte discipline biologice i se poate aprecia c n momentul de fa i-a dobndit un statut de ramur de sine stttoare n vastul ansamblu al tiinelor biologice. Concomitent cu detaarea imunologiei din cadrul microbiologiei au nceput s se contureze noi discipline de grani ntre imunologie i alte ramuri de tiin: imunochimia, imunogenetica, imunopatologia. Pornind de la aceast atitudine fa de imunologie, ea urmeaz s formeze obiectul unui curs aparte. -

24

Virusologie general 1.9. DEZVOLTAREA MICROBIOLOGIEI N ROMNIA

nceputurile cercetrii i practicii microbiologice n Romnia se situeaz spre sfritul secolului al XIX-lea. a) coala de microbiologie medical VICROT BABE (18541925) a fost fondatorul colii romneti de microbiologie. Marele savant romn s-a format lucrnd n perioada 18811884 n laboratorul lui PASTEUR i n 1885 n laboratorul lui KOCH. BABE a desfurat o prodigioas activitate tiinific elabornd peste 1.000 lucrri, 25 monografii i primul tratat de bacteriologie n colaborare cu VICTOR CORNIL n 1883. Descoperirea n 1887 a incluziilor produse de virusul turbrii n celulele piramidale din cornul lui Ammon, cunoscute sub numele incluziile lui Babe-Negri, a serurilor imune (mpreun cu LEPP n 1889), a paraziilor din hematiile unor specii de animale, paternitatea acestei descoperiri fiind recunoscut prin crearea genului Babesia n care au fost ncadrate microorganismele respective, reprezint contribuiile cele mai importante cu care VICTOR BABE a mbogit tezaurul tiinei romneti i universale. Alturi de acestea trebuie menionate i numeroasele sale cercetri asupra antagonismului bacterian i descrierea granulelor metacromatice din citoplasma bacilului difteriei (corpusculii Babe-Ernst). Paralel cu activitatea tiinific, VICTOR BABE a dezvoltat i o bogat activitate didactic, organizatoric i obteasc, conturndu-se ca o figur luminoas de savant patriot. Savanii care ulterior au dezvoltat n mod strlucit coala de microbiologie medical romneasc au fost: IOAN CANTACUZINO (1863-1934), CONSTANTIN IONESCU-MIHESTI (1883-1962), MIHAI CIUCA (1883-1969), DUMITRU COMBIESCU (1887-1961), iar n domeniul virusologiei CONSTANTIN LEVADITI (1874-1953) i TEFAN S. NICOLAU (1896-1967). b) coala de microbiologie veterinar PAUL RIEGLER (18671938) a fost fondatorul colii romneti de microbiologie veterinar. Elev al lui VICTOR BABE, el a introdus la noi n ar practica diagnosticului bacteriologic n medicina veterinar. n 1911 a fondat institutul de seruri i vaccinuri de uz veterinar (n acea perioad, al treilea de acest fel n 25

Virusologie general lume), care n 1922 primete numele lui PASTEUR. n cadrul institutului organizeaz producia preparatelor imunoprofilactice. A desfurat o susinut activitate tiinific, remarcndu-se prin lucrrile sale privind bacilul morvei. RIGLER a fost primul profesor de Microbiologie i Anatomie Patologic la coala de Medicin Veterinar din Bucureti. PAUL RIGLER a fost un savant erudit i a avut marele merit de a fi creat o coal n cadrul creia s-au format personaliti de seam, care s-au distins pe plan naional i internaional continundu-i opera. ALEXANDRU VECHIU (1890-1954) s-a remarcat printr-o activitate multilateral. El a condus, dup RIGLER, Institutul Pasteur i Catedra de Microbiologie. VECHIU a fost printre primii cercettori care au reuit adaptarea virusului pestei porcine pe iepure. ALEXANDRU CIUCA (1880-1972) a fost profesor de Boli Infecioase la Facultatea de Medicin Veterinar din Bucureti. Prin activitatea sa tiinific a adus contribuii importante n probleme ca : infecia experimental cu bacilul morvei la taurine, tipizarea virusului febrei aftoase prin RFC, tratamentul durinei cu neosalvarsan etc. CONSTANTIN CERNAT (1890-1972) s-a remarcat printrun studiu asupra piroplasmelor i o ndelungat activitate ca director al Institutului Pasteur. ILIE POPOVICI (1902-1982), personalitate fecund i multilateral, a adus printre altele contribuii deosebite n problema preparrii de noi vaccinuri contra febrei aftoase, turbrii, agalaxiei contagioase a oilor i caprelor i holerei aviare. VLADIMIR WYNOHRADNIK (1902-1972) a adus o contribuie substanial la dezvoltarea cercetrii virusologice n medicina veterinar i a organizat producia biopreparatelor antipestoase porcine n cadrul Institutului Pasteur. NICOLAE MUNTIU (1909-1977), dup o serie de lucrri inedite privind bacilul morvei, a iniiat i organizat cercetarea i producia de biopreparate n domeniul febrei aftoase. Se cuvine a fi menionat i activitatea altor personaliti reprezentative, care au desfurat o rodnic activitate pe tarmul microbiologiei veterinare: - NICOLAE STAMATIN, profesor de Microbiologie la Facultatea de Medicin Veterinar din Bucureti, 26

Virusologie general continund tradiia inaugurat de PAUL RIGLER contribuie la nflorirea colii romneti de Microbiologie Veterinar. Practica veterinar i datoreaz, printre altele, dou vaccinuri cu mare valoare profilactic: vaccinul anticrbunos preparat din tulpina acapsulogen 1190 R i vaccinul antirujetic preparat din tulpina VR2, vaccinuri adoptate astzi i n alte ri. Totodat, cercetrile fundamentale ntreprinse n domeniul biologiei sporogenezei, a antagonismului microbian, a bacteriofagilor speciilor din genul Bacillus, contribuiile aduse n domeniul clasificrii stafilococilor i pasteurelelor, completeaz palmaresul care l situeaz pe NICOLAE STAMATIN printre reprezentanii de frunte ai bacteriologiei veterinare romneti. - ALEXANDRU POP, microbiolog, erudit a adus contribuii originale n domeniul brucelozei i al unor probleme de imunologie teoretic. - CONSTANTIN SURDAN a elaborat numeroase lucrri privind pararickettsiile. - VALENTIN VOLINTIR, pionier al unor domenii de cercetare, a diagnosticat i izolat, primul n ara noastr, ageni etiologici ca Listeria monocytogenes, Moraxella bovis etc. - POPA OCTAVIAN, autor a unor lucrri privind salmonelozele animalelor i a unor cursuri de Microbiologie i Imunologie la F.M.V. Timioara. - ALEXANDRU GRECIANU, cercettor, microbiolog i cadru didactic de excelen la F.M.V. Iai, a adus contribuii originale la metodica identificrii grupului E. coli izolat de la gin. Institutul Pasteur, disciplinele de Microbiologie i Imunologie de la cele partu faculti de Medicin Veterinar, laboratoarele centrale, reeaua laboratoarelor judeene i a laboratoarelor din ntreprinderi de industrie alimentar, reprezint astzi cadrul care asigur dezvoltarea practicii i a cercetrii n demeniul microbiologiei veterinare la noi n ar.

27

Virusologie general

2. CARACTERIZAREA GENERAL A PRINCIPALELOR GRUPE DE MICROORGANISME

Grupele de microorganisme incluse n lumea microbian (prioni, viroizi, virusuri, bacterii i micei) au urmtoarele caractere generale:

2.1. PRIONII

Proteinele prionice reprezint cele mai simple i mai inferioare forme de ageni patogeni infecioi neconvenionali, fiind lipsite n totalitate de o informaie genetic. Moleculele proteice din care sunt formate aceste particule se gsesc att n creierul normal ct i n cel bolnav al omului i animalelor i au fost semnalate pentru prima dat de americanul STANLEY B. PRUSINER care n 10 oct. 1997 primete premiul NOBEL. ntr-o perioad de 7-8 ani PRUSINER a efectuat studii n care a analizat proteinele din creierul normal de hamster i cele din creierul ovinelor bolnave de scrapie. Iniial a demonstrat c la ovinele infectate exist n creer o protein specific pe care a denumit-o protein prionic scrapie (P.P.S.) iar ulterior a gsit i n creierul hamsterilor normali o protein asemntoare dar puin diferit pe care a denumit-o proteina prionic celular (P.P.C.). Principalele caracteristici ale celor dou proteine sunt: P.P.C. - este o protein normal prezent n membrana pericarionilor mai concentrat la locul sinapselor; - este sensibil la aciunea enzimelor proteolitice; - este degradat n timpul metabolismului celular; - este nepatogen, neinfectant, netransmisibil; - are funcie neurotransmitoare; - structura secundar este helical; P.P.S.: - este prezent numai la animalele infectate; - este rezistent la proteaze; - este termostabil la 350OC;

28

Virusologie general nu este degradat n cursul metabolismului celular, putndu-se acumula n lizozomii din neuroni; - este infecioas i transmisibil; - structura secundar este lamelar; - secvena aminoacizilor este identic cu cea din P.P.C., cu o singur diferen c leucina este nlocuit cu prolina, modificare determinat de o mutaie punctiform; Investigaiile i cercetrile efectuate de PRUSINER sunt susinute i de o serie de argumente de ordin experimental cum ar fi: - ndeprtarea sau denaturarea acestei proteine P.P.S. determin suprimarea infeciozitii; - introducerea prionilor P.P.S. n culturi celulare neuronale determin apariia leziunilor caracteristice; - punerea n contact in vitro a proteinei normale P.P.C. cu cea patogen de tip P.P.S. duce la transformarea celei normale n cea patogen; - gena mutant care determin sinteza proteinei anormale implicat n apariia leziunilor de encefalopatie spongiform este localizat la om pe braul scurt al cromozomului 20. PRUSINER a elaborat 2 ipoteze privind originea prionilor: originea endogen i originea exogen. 1. Originea endogen arat c gena care codific proteina de tip P.P.C., gena care codific sinteza, sufer o mutaie punctiform care duce la apariia proteinei de tip P.P.S. Inseria greit a prolinei n locul leucinei duce la destabilizarea structurii helicale a acestei proteine i care capt nsuiri fizice, chimice i biologice deosebite. 2. Originea exogen susine c prionii pot proveni i din exterior ca n sindromul CREUTZFELDT JOKOB de la om. n aceste cazuri proteina de tip P.P.S. acioneaz asupra proteinei normale de tip P.P.C. care sufer conversia de la helical la lamelar. Prin urmare nu are loc o sintez propriuzis a proteinelor dup mecanismele genetice cunoscute, ci o sintez amplificat prin conversie (celula sintetizeaz proteina normal care sub influena proteine prionice de tip P.P.S. i schimb structura de la normal la patologic, astfel nct fiecare molecul 29

Virusologie general de protein normal PPC este convertit, dup modelul dominoului, ntr-o molecul PPS. Bolile de origine prionic cunoscute pn n prezent sunt: scrapia sau tramblanta ovinelor, sindromul de vac nebun (vache folle), sindromul CREUTZFELDT JAKOB, KURU i boala lui ALZHEIMER la om.

2.2.

VIROIZI

Viroizii reprezint forme acelulare de via, mai simple dect virusurile i de dimensiuni incomparabil mai mici dect acestea. Primul viroid a fost descoperit de cercettorul american T. O. DIENNER la BELTSVILLE (S.U.A.) n urma unor cercetri efectuate n perioada 1967-1971 la cartof. Ei determin maladii la plante cum ar fi: boala stelrii (deformrii) tuberculilor de cartof, nanismul i ptarea clorotic a crizantemelor, cloroza castraveilor, boala cadang-cadang a palmierilor de cocos, etc. Caractere generale: 1. Sunt forme acelulare de via alctuite din molecule de ARN de talie mic neprotejate de alte nveliuri externe. 2. Molecula de ARN are o structur circular cu regiuni mono sau dublu catenare. 3. n general sunt localizai n nucleul celulelor unde se replic cu ajutorul unor enzime de tipul ARN replicazelor din celula gazd. 4. Originea lor nu este prea bine cunoscut, dar se presupune c ar reprezenta introni nedegradai eliminai n procesul de activare al genelor. 5. Capacitatea lor patogen se datoreaz interaciunii lor cu genomul celulei gazd i perturbrii mecanismelor de reglaj genetic al celulei gazd. 6. Viroizii reprezint o nou clas de ageni patogeni subvirali care se afl la limita inferioar a materiei vii i care posed un program genetic redus la minim. 30

Virusologie general

2.3.

VIRUSURILE

1. Sunt considerate forme acelulare de via fiind n afara organismelor vii, lipsite de capacitatea de cretere i multiplicare. Ele sunt replicate (multiplicate) de celula gazd pe care o paraziteaz. 2. Sunt lipsite de aparat enzimatic i metabolism propriu fiind obligator, parazite a celulelor animale, vegetale sau bacteriene. 3. Au o structur simpl, formate din genomul viral i un nveli protector care se numete capsid. 4. Genomul viral conine un singur acid nucleic ADN sau ARN i niciodat ambii acizi. 5. Virusurile care conin ARN pot depozita i transmite informaia genetic, caz unic n biologie, rolul de purttor al informaiei genetice fiind ADN, pentru restul vieuitoarelor. 6. n natur virusurile se gsesc sub trei forme biologice: - virus complet sau virion, dotat cu infeciozitate i capabil de a supravieui un timp limitat n afara celulei gazd; - virus vegetativ prezent numai n celula parazitat i neinfecios; - virus integrat (provirus) integrat n genomul celulei gazd unde rmne un timp nelimitat replicndu-se odat cu acesta. n esen virusurile sunt sisteme bioide care se comport ca fiine vii n interiorul celulei parazitate i ca o substan organic complex n afara acesteia.

2.4.

BACTERIILE

1. Sunt microorganisme unicelulare de tip procariot caracterizate prin absena structurilor intracelulare delimitate prin membrane, spre deosebire de tipul 31

Virusologie general eucariot la care nucleul i unele organite intracelulare, posed membrane proprii. Materialul genetic sau genomul bacterian este reprezentat de un cromozom, format dintr-o molecul mare de ADN i uniti ereditare extracromozomiale numite plasmide, constituite din molecule circulare de ADN mult mai mic (aproximativ 1%) din mrimea cromozomului. Bacteriile sunt lipsite de mitocondrii, aparat Golgi i reticul endoplasmatic. Bacteriile au un aparat enzimatic i o activitate metabolic proprie iar nutriia este de tip absorbtiv. Sub aspectul asigurrii energiei necesare proceselor nutritive, nutriia poate fi de tip chimiotrof, cnd energia rezult din reaciile chimice i de tip fototrof prin prezena unor pigmeni fotosintetizani care permit utilizarea energiei solare. Bacteriile se multiplic prin diviziune simpl binar (sciziparitate) i pot avea pe suprafaa celulei bacteriene cili sau flageli ca organite de micare i pili sau fimbrii pentru aderen. Unele specii bacteriene pot exista n natur sub dou forme biologice: - forma sporulat care este o form de rezisten i de conservare a speciei; - forma vegetativ care reprezint celula bacterian propriu-zis.

2.

3.

4.

5.

2.5.

MICEII (fungii, ciupercile)

1. Sunt organisme eucariote situate la grania dintre bacterii i organismele vegetale. 2. Ciupercile microscopice au aparat Golgi i reticul endoplasmatic. 3. Au echipament enzimatic complex, iar nutriia este de tip absorbtiv, chimiotrof. 4. Reproducerea la ciupercile microscopice este foarte difereniat, putndu-se realiza prin diviziune direct

32

Virusologie general prin creterea n lungime a unor structuri plasmoidale i prin spor (sexuat sau asexuat). Principalele caractere comparative sau difereniale ntre cele cinci grupe de microorganisme care constituie obiectul de studiu al microbiologiei sunt redate n tabelul 1.

33

Virusologie general

Tabelul 1

Principalele caractere difereniale ntre micoroorganisme

NR. CRT. 1. 2. 3.

CARACTERUL DIFERENIAL Numrul tipurilor de acizi nucleici Tipul de organizare Organizarea materialului genetic Echipamentul enzimatic i activitatea metabolic proprie Capacitatea de cretere Modul de reproducere

PRIONI Acelular -

VIROIZI 1 (ARN) Acelular ARN de talie mic Absente Absent Sunt sintetizai de celula gazd

VIRUSURI 1 (ADN sau ARN) niciodat ambii Acelular Genom viral

BACTERII 2 (ADN + ARN) Celular procariot Un singur cromozom i plasmide

CIUPERCI MICROSCOPICE 2 (ADN + ARN) Celular eucariot Mai muli cromozomi (2-4) Prezente Prezent Independent, prin forme variate asexuate sau sexuate Absent Absent Miceliu sau pseudomiceliu -spor (forma de reproducere) Microorganisme vii cu organizare eucariot

4.

Absente Absent Sintez amplificat prin conversie

Absente Absent Sunt sintetizate de celula gazd

Prezente Prezent Independent, mai des prin sciziparitate Absent Absent -Forma vegetativ -Forma sporulat

5. 6.

7. 8. 9.

Capacitate de difereniere Parazitism absolut Forme biologice de existen n natur

10.

Poziia pe scara filogenetic

Nu este cazul Constant obligat P.P.C.: protein prionic celular normal P.P.S.: protein prionic din scrapie patologic La grania dintre viu i neviu

Nu este cazul Constant obligat ARN mic intranuclear

Nu este cazul Constant obligat -virion infecios -virus vegetativ -virus integrat

Idem

Idem

Microorganisme vii cu organizare procariot

Virusologie general

VIRUSOLOGIE GENERAL

3.1. IPOTEZE PRIVIND ORIGINEA VIRUSURILOR

Momentul apariiei i modul de formare al virusurilor pe pmnt nu poate fi stabilit, datorit lipsei dovezilor paleontologice. Ipotezele emise cu privire la aceast problem sunt urmtoarele: a) Ipoteza formrii virusurilor dintr-un protovirus preistoric, aprut ca prim manifestare de evoluie i organizare a materiei de la neviu ctre viu, susinut de biologii sovietici Oparin, SvetMoldavski, Jdanov i alii; aceste forme primare precelulare de via nu s-au mai putut dezvolta i evolua, fapt care le-a obligat s se adapteze unui parazitism obligatoriu i absolut. Verosimilitatea acestei ipoteze este diminuat de faptul c protovirusul ancestral ar fi trebuit totui s se multiplice iniial pe seama substanelor organice din oceanul primitiv ntr-un timp lung, ceea ce pare prea departe i diferit de caracteristicile virusurilor actuale, care se multiplic exclusiv n celul i n timp scurt. b) Ipoteza provenienei virusurilor din microorganisme cu o organizare mai complex, capabile de o via independent, care au regresat i s-au simplificat n urma adaptrii lor la parazitism, susinut de Green, Laidlaw, Boivin i alii; ineria metabolic a virusurilor se datorete, conform acestei ipoteze, pierderii n filogenez a 35

Virusologie general echipamentului enzimatic i a capacitii de biosintez. Aceast ipotez are un grad mai mare de veridicitate prin faptul c regresii de la saprofitism ctre un parazitism obligat intracelular, nsoite de simplificri structurale i biologice, au fost constatate i la unele bacterii actuale. Cu toate acestea, treptele intermediare ale involuiei de la structura celular ctre cea de particul viral sunt greu de imaginat. c) Ipoteza originii endogene a virusurilor, susinut de Bedson i Waterson, admite formarea virusurilor din fragmente de material genetic, desprinse din cromozomul celular, care au devenit cu timpul autonome, autoreplicndu-se independent i devenind capabile de a ptrunde n celule noi. Treptat, genomurile devenind autonome au dobndit i capacitatea de a codifica n celul sinteza unor nveliuri proteice, care s le protejeze, asigurndu-le astfel posibilitatea unei existene tranzitorii extracelulare. Argumentele favorabile acestei ipoteze constau n: - posibilitatea reproducerii infeciei cu acizi nucleici purificai; - caracteristicile virusurilor integrate; - existena n celula bacterian a plasmidelor, ca uniti genetice autoreplicante, independente de cromozom; - posibilitatea trecerii unora dintre plasmide n forme epizomale mult asemntoare cu genomurile virale integrate. Aceste ipoteze i menin o valabilitate teoretic fiindc chiar dac s-ar ajunge la confirmarea experimental a vreuneia din ele, acestea n-ar fi nc o dovad de netgduit c cu miliarde de ani n urm fenomenele s-ar fi petrecut la fel. Nu se poate exclude nici posibilitatea ca pentru diferite grupe de virusuri s fie valabile i ipoteze diferite. Astfel, n-ar fi exclus ca virusurile mari i complexe s provin din involuia unor bacterii, iar virusurile cele mai mici i mai simple s aibe o origine endogen. 36

Virusologie general Nici una din ipotezele menionate nu ofer ns nici mcar o sumar ncercare de explicaie a originii virusurilor ARN. Proprietile i modul lor de dezvoltare nu au nici un corespondent n natur. De aceea, se impune admiterea unei origini aparte pentru aceste virusuri. Apariia lor a fost foarte probabil condiionat de o modalitate n care ARN (probabil ARNm) a putut deveni independent de ADN i autoreplicant, dobndind capacitatea de a codifica i chiar de a transcrie invers. 3.2. TEORII PRIVIND NATURA VIRUSURILOR

n ultimii ani, exist n literatur o controvers teoretic asupra poziiei virusurilor n raport cu conceptele de viu i neviu. Aceast disput este complicat de lipsa unei unanimiti asupra celor dou concepte. ncercri mai recente de stabilire a nsuirilor eseniale, caracteristice sistemelor vii, aparinnd unor biologi de mare renume, sunt: Luria consider ca indispensabile n definirea vieii urmtoarele proprieti: capacitatea de a produce un anumit tip de organizare, specific, independent, autoreplicant. Prin aceste nsuiri, structurile vii sunt caracterizate printr-o configuraie specific, care se pstreaz dup izolarea lor, capacitatea de reintegrare n circuitul lumii vii i proprietatea de a se transforma prin recombinri genetice. Lwoff acept urmtoarele nsuiri ca definitorii pentru organismele vii: structura celular ca unitate minim de integrare, cooperare i reproducere a unui asamblu de constituieni moleculari i continuitatea genetic. Jacob susine caracterul integrativ al sistemelor de organizare ca primordial pentru un sistem viu, iar celula bacterian un minimum vital sub al crui nivel de organizare nu poate fi vorba de via. Monod atribuie sistemelor vii patru proprieti eseniale: - morfogeneza autonom;

37

Virusologie general reproducerea invariant - capacitatea de a reproduce i transmite de la o generaie la alta informaia genetic corespunznd structurii proprii; - emergena capacitatea de a reproduce i multiplica structuri ordonate cu grad nalt de complexitate i de a creea evolutiv structuri de complexitate creascnd; - teleonomia proprietatea de a avea a structur i organizare definit capabil de a asigura supravieuirea individului i a speicei. Szent-Gyrgy recunoate ca nsuiri de baz ale sistemelor vii un grad nalt de organizare al moleculelor n sisteme ierarhizate la niveluri diferite, fiecare dintre ele fiind corelat i reacionnd cu toate celelalte i cu ansamblul lor, la rndul lor corelat i reacionnd cu fiecare dintre ele. Amplasarea virusurilor ntre sistemele vii sau n cadrul materiei organice vii, depinde de punctul de vedere acceptat pentru definiia viului. Admind prerea lui Luria, virusurile ntrunesc condiiile sistemelor vii; dac se iau n considerare celelalte teorii citate, care leag conceptul de viu de un numr mai mare de criterii, virusurile trebuie privite ca structuri organice complexe nevii. Iftimovici (1978) adaug criteriilor care pledeaz prntru includerea virusurilor n lumea vie, funcia lor antientropic (tendina de a se opune dezorganizrii diferitelor structuri din nautr i uniformizrii strilor energetice). Totodat, susine prerea c viaa ca fenomen a precedat apariia primului organism. Virusurile sunt privite ca biostructuri ancestrale, care realizeaz unitatea acizi nucleici-proteine ntr-o form precelular, reprezentnd un prim pas spre via. Discuia asupra naturii vii sau nevii a virusurilor are un caracter teoretic speculativ, care permite o polemic la infinit, fr a se putea statua care din cele dou puncte de vedere este mai valabil. Realitatea atest faptul c virusurile au att nsuiri caracteristice sistemelor vii continuitatea genetic, infeciozitatea, funcia antientropic- ct i a materiei nevii numrul fix de molecule, ineria metabolic, incapacitatea de reproducere prin mijloace proprii. De aceea, cea mai corect poziie n problema naturii virusurilor este acceptarea lor ca 38

Virusologie general entiti cu totul originale, constituind un unicat n natur, situate la grania ntre sistemele nevii i cele vii, ntre forma chimic i cea biologic, de micare a materiei, indiferent dac apariia lor pe pmnt a precedat organismele indiscutabil vii, sau dac a fost mai trzie. ncercrile de a decreta definitiv virusurile ca vii sau nevii nu pot avea dect un caracter forat. Lwoff precizeaz cel mai bine acest punct de vedere: Categoria de virus este definit printr-un ansamblu de caractere originale. Aceste caractere permit distingerea virusurilor de nonvirusuri. Ele sunt acelea care confer lumii virusurilor personalitate i realitate, iar cu alt prilej, acelai eminent virusolog afirma, sub forma unei butade: virusurile trebuie considerate ca virusuri, fiindc virusurile sunt virusuri.

3.3.

FORMELE DE EXISTEN A VIRUSURILOR N NATUR

Virusurile sunt entiti etiologice cu o structur acelular sau subcelular, constituite dintr-un numr fix de molecule, lipsite de capacitate de cretere, metabolic inerte, care pot exista n natur sub trei forme biologice, fiecare din ele reprezentnd n acelai timp cte o etap distinct din circuitul lor n natur. Aceste forme sunt: Virusul complet, numit i virusul matur sau particul viral, care posed toate componentele structurale caracteristice virusului respectiv. El este capabil de o existen pe timp limitat n afara celulei sensibile i are ca principal nsuire infeciozitatea posibilitatea de a ptrunde sau de a inocula acidul nucleic viral ntr-o celul gazd, receptiv, capabil de a-l sintetiza. Virusul vegetativ, care prezint forma de via intracelular a virusului. n aceast stare virusul este lipsit de o structur proprie, materialul viral fiind dispersat n celula gazd, inseparabil de coninutul celular. Conform informaiei genetice coninute n acidul nucleic viral, celula cu aparatul ei enzimatic sintetizeaz componentele virale. n interiorul 39

Virusologie general celulei virusul vegetativ se transform, n final, din nou n virusul complet prin asamblarea componentelor virale. Virionii rezultai din procesele intracelulare de biosintez sunt eliberai din celul. Dup eliberarea lor, virionii, ptrunznd ntr-o nou celul gazd, reiau circuitul care asigur conservarea virusurilor n natur. n faza de virus vegetativ, dependena virusului de celul este total, el fiind incapabil de a supravieui n afara acesteia. Virusul integrat sau provirusul, care este tot o form intracelular total dependent de celula gazd, ca i virusul vegetativ, cu deosebirea c sub aceast form celula nu sintetizeaz material viral. Acidul nucleic viral se fixeaz n genomul celulei sensibile, unde se comport ca un fragment de material genetic, propriu celulei. Aceast form de existen este mai cunoscut la virusurile bacteriofagice i la virusurile tumorale. Genomul viral, ancorat n cromozomul celulei gazd, confer acesteia noi nsuiri determinate de informaia genetic pe care o conine. Virusul se comport ca un component normal al celulei gazd. El poate rmne sub aceast form un timp nedefinit. Virusul integrat se poate transforma n virus vegetativ, de obicei sub aciunea unor factori stresani pentru celul, n care caz genomul viral se desprinde din cromozomul celulei i ncepe s codifice sintez de material viral, trecnd n forma de virus vegetativ. Descrierea virusurilor, n continuare, se refer la forma de virus complet sau virion, ntruct aceasta este singura n care virusul are o structur proprie, celelalte dou forme fiind indisolubil legate de celula gazd.

40

Virusologie general

3.4. CONSTANTELE VIRIONULUI

3.4.1.Forma Virionii pot avea forme variate. La examenul cu un microscop electronic cu o mic putere de rezoluie, se pot distinge 3 tipuri principale de forme: - alungit, - corpuscular, - spermatozoidic. La examenul electronooptic, la un aparat cu mare putere de rezoluie, care permite observarea tuturor detaliilor ultrastructurale, virionii se pot nfia ntr-o gam mai variat de forme, ca de exemplu: - bastona drept, - filament pliat, - icozaedru, - corpuscul sferic, - crmid cu colurile rotunjite, - ghiulea, - spermatozoid (ali termeni de comparaie pentru aceeai form: cirea cu coad, ac cu gmlie mare, mormoloc). Determinant pentru forma virionului la majoritatea virusurilor este tipul de simetrie al capsidei, iar la unele virusuri prezena nveliului pericapsidal. 3.4.2.Dimensiunile Dimensiunile virusurilor variaz ntre limite cuprinse ntre 8-10 nm(x) pn la 300-350 nm. Virusurile cele mai mici, ca de exemplu Picorna i Parvovirusurile se aproprie de dimensiunile unor macromolecule organice, n timp ce virusurile cele mai mari, ca de exemplu Poxvirusurile, au dimensiuni identice cu cele mai mici bacterii. Volumul virusurilor reprezentative ale celor dou extreme este de 0,00001 microni3 pentru virusul poliomielitei (un Picornavirus) i de 0,01 microni3 pentru Poxvirus. n urmtoarea figur (fig. 41

Virusologie general 3) sunt redate schematic forma i raporturile dimensionale ale principalelor grupe (familii) de virusuri n comparaie cu o celul bacterian de Escherichia coli.

Fig. 3 Reprezentarea schematic a formelor i dimensiunilor comparative ale principalelor grupe (familii) de virusuri n raport cu Escherichia coli: 1.Picornavirus; 2.Parvovirus; 3.Papovavirus; 4.Togavirus; 5.Leucovirus; 6.Adenovirus; 7.Reovirus; 8.Coronavirus; 9.Orthomixovirus; 10.Arenavirus; 11.Colifagul T; 12.Rhabdovirus; 13.Herpesvirus; 14.Iridovirus; 15.Paramyxovirus; 16.Poxvirus; 17.Escherichia coli.

3.5.

STRUCTURA VIRIONULUI

Virionul este constituit dintr-un nveli i un coninut. La toate virusurile nveliul este format din uniti proteice, numite capsomere, aezate dup un tip de simetrie bine definit, constituind n ansamblul lor pericapsida viral. La unele virusuri, exterior capsidei, se gsete un al doilea strat al nveliului, numit pericapsid (anvelop, peplos). Din punct de vedere al prezenei nveliului pericapsidal, virusurile se 42

Virusologie general mpart n dou categorii: nude i nvelite n peplos. (fig. 10) Coninutul virionului este un genom format dintr-un singur tip de acid nucleic, fie ADN, fie ARN. Nici un virus nu conine ambii acizi nucleici. Unitatea constituit din genom + capsid poart i numele de nucleocapsid. 3.5.1.Capsida viral Termenul de capsid deriv de la cuvntul grecesc kapsa = cutie. El desemneaz nveliul extern al virionului, prezentat n forma sa cea mai simpl de un strat unic de uniti identice, numitte capsomere (meros = parte), aezate n mod regulat dup un tip de simetrie bine definit. Puine virusuri au capsida constituit din dou sau mai multe straturi concentrice. Compoziia chimic a capsidei este exclusiv proteic. Proteinele constituente ale capsidei sunt antigenice, fiind responsabile pentru structura antigenic specific fiecrui virus. La majoritatea virusurilor, cu excepia virusurilor helicoidale prevzute cu nveli pericapsidal, capsida este determinant pentru forma virionului. Rolul capsidei este de a proteja genomul viral de aciunea factorilor de mediu. La adpostul capsidei, acidul nucleic viral este vehiculat de la o gazd receptiv la alta. Cu toate c n condiii experimentale au putut fi reproduse numeroase infecii virale numai cu acizii nucleici ai virusurilor respective, nu s-a semnalat nc un fenomen similar n condiii naturale, protecia capsidei fiind indispensabil conservrii i circuitului virusurilor n natur. Subunitile componente ale capsidei, capsomerele, sunt formate din una sau mai multe molecule proteice, constituite la rndul lor din lanuri polipeptidice. n funcie de numrul moleculelor din care sunt formate, capsomerele pot fi de dou feluri: - monomere, constituite dintr-o singur molecul proteic, avnd o mas molecular n jurul a 20.000 30.000 daltoni; ele sunt caracteristice pentru virusurile de form alungit, iar asamblarea lor n arhitectura capsidei este dup tipul de simetrie helicoidal; 43

Virusologie general oligomere, constituite din mai multe monomere, dispuse circular, formnd un inel sau buton; oligomerele sunt aranjate n cadrul capsidei dup tipul de simetrie icozaedral sau cubic. n funcie de numrul monomerelor componente, oligomerele sunt de dou feluri: - hexamere sau hexoni, formate din ase monomere; ele alctuiesc feele triunghiulare i laturile (muchiile) capsidelor icozaedrale; - pentamere sau pentoni, formate din cinci monomere; ele sunt aezate la colurile (vrfurile) capsidelor icozaedrale. n figura 4 este redat schematic structura tipurilor de capsomere. -

Fig. 4 Schema tipurilor structurale de capsomere:

1 i 2 = lanuri peptidice; 3 = monomer; 4 i 5 = oligomere; 4 = hexamer (hexon); 5 = pentamer (penton). Literele reprezint simbolic grupurile chimice de legtur ntre monomerele constituiente ale oligomerelor, care sunt de acelai tip (A-a i B-b).

Numrul capsomerelor este constant pentru un virus, mai ales la virusurile icozaedrale. Simetria capsomerelor poate fi de trei feluri:icozaedral sau cubic,helicoidal,binar sau dubl.

44

Virusologie general 3.5.1.1.Capsida helicoidal Capsida helicoidal (helical) are forma unui tub cilindric. Unitile ei structurale sunt molecule identice de form ovoid sau puin alungit (fig. 5).
Fig.5 Schema structurii capsidei helicoidale a virusului mozaicului tutunului

Aranjamentul lor este n form de spiral helicoidal regulat, asemntoare cu al unui resort n stare comprimat. Spirala capsomerelor delimiteaz pe faa intern a tubului un an n care este aezat, tot helicoidal, ntr-un perfect paralelism cu capsida, genomul (acidul nucleic) viral. Extremitile interne ale capsomerelor nu se ating, fiind desprite de fragmentul de acid nucleic care se interpune. Numrul capsomerelor variaz n funcie de lungimea virionului. Capsidele helicoidale pot fi de dou feluri: rigide i flexibile. Capsida rigid este de regul caracteristic virusurilor fitopatogene. Un exemplu de virus care poate fi considerat de referin, fiind studiat n cele mai mici detalii, este virusul mozaicului tutunului. El se prezint sub forma unui bastona rigid de 300 nm lungime, 17 nm lime, cu un diametru interior de 4 nm. Genomul lui este constituit dintr-un filament de ARN, lung de 2 microni, avnd masa molecular de 2 x 106 daltoni, aezat n anul delimitat de o spiral helicoidal format din 130 capsomere. Fiecare capsomer este o molecul proteic, compus din 158 de aminoacizi. Fiecare tur de spir nsumeaz de 16 45

Virusologie general 1/3 capsomere, iar adiacent unei capsomere se gsesc trei nucleotide din lanul de ARN. Capsida flexibil se ntlnete la unele virusuri zoopatogene. Forma ei este tot tubular, dar se poate plia sub forma unui ghem. n aceasta stare se dispun nucleocapsidele helicoidale la interiorul nveliului pericapsidal, care are o form aproximativ sferic. Exemple de virusuri pentru care este caracteristic o astfel de structur sunt Orthomyxovirusurile, din care fac parte virusurile influenelor i Paramyxovirusurile n care se ncadreaz virusul pesudopestei aviare. Ele au o form sferic, cu un diametru de 80-120 nm. La interiorul unei pericapside groase de 8-10 nm se gsete nucleocapsida helicoidal, de lungimi variabile, cu diametrul transversal de 9-10 nm. n figura 6 este redat schematic organizarea virionului unui virus gripal.

Fig. 6 organiz\rii gripal.

Schema unui virus

Nucleocapsida helicoidal\ se g\se[te pliat\ sub form\ de ghem la interiorul pericapsidei.

La Myxovirusuri nu exist o corelaie ntre forma global a virionului (sfeeric) i cea a nucleocapsidei (alungit, filamentoas). Determinat pentru tipul de simetrie al oricrui virus este ns nucleocapsida.

3.5.1.2.Capsida icozaedral Capsida icozaedral (izometric, cu simetrie cubic) rezult din asamblarea ntr-o form geometric regulat a unui 46

Virusologie general numr fix de hexa i pentamere, care alterneaz dup un plan de organizare foarte precis. Icozaedrul este un poliedru constituit din 20 de fee, fiecare avnd forma unui triunghi echilateral. Ca orice structur geometric regulat, el are trei tipuri de axe de simetrie (p), schematizate n figura 7. O rotaie 2 /p n jurul exei aduce structura respectiv ntr-o poziie identic cu cea iniial. Icozaedrul are: 12 vrfuri (unghiuri sau coluri) i 6 axe de simetrie de tip 5, care traverseaz fiecare 2 unghiuri opuse; 20 de fee i 10 axe de simetrie de tip 3, care trec prin punctele
Fig. 7 Tipurile de axe de simetrie ale icozaedrului: a. tipul 2; b.
tipul 3; c. tipul 5.

centrale a 2 fee triunghiulare opuse; 30 laturi i 15 axe de simetrie de tip 2, care unesc 2 laturi opuse exact la jumtatea acestora. Succesiunea capsomerelor n structura capsidei icozaedrale este urmtoarea: feele i laturile sunt formate din hexamere, iar colurile sau vrfurile din pentamere (fig. 8). Alternana suprafeelor hexagonale cu cele pentagonale ntr-o anumit succesiune n structura unei figuri geometrice care poate fi nscris ntr-o sfer este o condiie obligatorie pentru stabilirea acestei structuri. n domeniul arhitecturii, aceast regul s-a confirmat prin construcia domului geodezic de ctre Fuller i, mai recent, a pavilionului american de la expoziia universal de la Montreal n 1967 (dup Zarnea, 1974). Klug i Caspar (1962) explic primii structura capsidelor virale icozaedrale pe baza ndeplinirii aceluiai deziderat. n figura 9 este schematizat o secven de fee pentagonale i hexagonale n succesiunea lor caracteristic capsidelor icozaedrale.

47

Virusologie general

Fig. 8 Modul de asamblare al capsomerelor ntr-o capsid icozaedral (dup Davis i col., 1967). Modelul din schem este
constituit din 42 capsomere, din care 30 sunt hexamere i 12 pentamere. Numrul din centrul capsomerelor indic numrul monomerelor componente, iar literele (A, B, C, i D) simbolizeaz grupri chimice care leag unitile proteice ntre ele. Tipul legturilor ntre monomerele unui oligomer (A, D) este diferit de cel care leag oligomerele ntre ele (B, C).

Fig. 9 Alternana suprafeelor hexagonale i pentagonale, analoage celei a hexamerelor i pentamerelor din structura capsidelor icozaedrale. O hexamer este ncadrat de dou pentamere i patru hexamere aezate simteric (dup Lwoff)

Numrul total de capsomere (N) al unui virion icozaedral este dat de formula: 48

Virusologie general N = 10 (n - 1)2 + 2 n care n este egal cu numrul de capsomere al unei laturi. n tabelul nr. 1 este redat numrul capsomerelor obinute pe baza acestei formule la 4 grupe de virusuri. n cazul unor virusuri foarte mici, ca de exemplu virusul poliomielitei n care n = 2 (o fa triunghiular este format din laturi a cte 2 capsomere care ncadreaz o capsomer central), formula se modific, devenind: N = 30 (n 1)2 + 2 Capsida icozaedral este forma cea mai economic de organizare arhitectonic a unor uniti proteice identice prin care se asigur nveliul protector genomului viral. Tabelul nr. 2 Numrul capsomerelor la 4 grupe de virusuri. Grupa
Bacteriofag mic Reovirus Herpesvirus Adenovirus (dup Hannoun, 1976) n 2 4 N 12 92 162 252

Dou virusuri avnd masele moleculare ale virionilor egale, dar cu tipuri diferite de simetrie a capsidelor, unul helicoidal i altul icozaedral, difer sensibil i n ce privete numrul capsomerelor. Astfel, virusul mozaicului tutunului cu capsida helicoidal este format din 2180 molecule, n timp ce virusul mozaicului galben al napului, cu aceeai mas molecular, dar cu capsida icozaedral, este alctuit din numai 180 molecule (dup Zarnea G., 1974). 3.5.1.3.Capsida cu simetrie binar Capsida cu simetrie binar sau dubl este caracteristic bacteriofagilor cu cap i coad. Capsida capului este de tip icozaedral, n timp ce capsida cozii este organizat dup tipul de simetrie helicoidal. Ea va fi descris mai amnunit la virusurile bacteriofagice. 3.5.2. Pericapsida (anvelopa, peplosul) 49

Virusologie general

Pericapsida, pentru desemnarea creia se folosesc la fel de frecvent i termenii de anvelop sau peplos (manta n limba greac), este un nveli suplimentar, ntlnit numai la unele virusuri, aezat exterior capsidei. n funcie de prezena sau absena pericapsidei, corelat cu tipul de simetrie al pericapsidei, virionii sunt de 4 feluri (fig. 10): - virion helicoidal nud, - virion icozaedral nud, - virion helicoidal nvelit de pericapsid, - virion icozaedral nvelit de pericapsid.
Fig. 10 Prezentarea schematic a clasificrii virusurilor n funcie de prezena sau absena pericapsidei corelat cu simetria nucleocapsidei. :1.capsid; 2.pricapsid; 3.genom viral; 4.virion helicoidal nud; 5.virion icozaedral nud; 6. virion helicoidal nvelit de pericapsid i 7.virion icozaedral nvelit de pericapsid.

Virionii nvelii de pericapsid au totdeauna o form globuloas, aproximativ sferic, indiferent de tipul de simetrie al nucleocapsidei (virionii helicoidali sunt pliai n interiorul pericapsidei sub frorma unui ghem). Grosimea pericapsidei este n jur de 100-150 . Analog capsidei, ea este constituit din uniti structurale numite peplomere (peplos = manta). Peplomerele sunt ns puin conturate electronooptic, comparativ cu capsomerele i nu sunt aranjate dup un tip precis de simetrie. Comparativ cu capsida, pericapsida este o form mai puin regulat, este mai puin rigid, avnd un anumit grad de flexibilitate i elasticitate. Pe suprafaa pericapsidei se gsesc de obicei protuberane sub forma unor spiculi sau antene, de

50

Virusologie general aproximativ 100 lungime. Ele sunt aezate la distane de 7080 una de alta. Compoziia chimic a pericapsidei, predominant proteic, este caracterizat i prin prezena altor compui organici glucide, dar mai ales lipide, care mpreun cu proteinele formeaz complexe glico- sau lipidoproteice. Lipidele, compuii chimici ai pericapsidei, concur i ei la determinarea structurii antigenice a virusului. Originea componentelor pericapsidei poate fi proprie sau derivat din membrana celulei gazd n care a fost sintetizat virionul. Partea proprie este numit i homeopeplos, iar cea provenit din componenii celulei gazd heteropeplos.Acestea sunt considerate ca fcnd parte din cadrul proprietilor virusurilor caracterizate ca induse de celula gazd. Constituirea heteropeplosului are loc cu prilejul eliberrii virionilor nou formai din celul prin procesul de nmugurire (burjeonare).(Fig.21) Rol: pericapsida concur, mpreun cu capsida, la protejarea genomului viral la factorii de mediu i asigur fixarea virionului pe celula gazd. Prezena ei confer ns virusurilor anumite nsuiri, absente la virusurile nude. Acestea sunt: sensibilitatea la eter i cloroform, datorat componentelor lipidice din structura peplomerelor, capacitatea de absorbie pe diferite substraturi celulare i activitatea hemaglutinant de care sunt responsabili spiculii (antenele) de pe suprafaa capsidei, numii de aceea hemaglutinine. La Myxovirusuri, pericapsida conine enzime, numite neuraminidaze, care nlesnesc ptrunderea virusului n celula sensibil. 3.5.3. Genomul viral Genomul viral este reprezentat de acidul nucleic viral. Urmtoarele nsuiri ale acidului nucleic trebuie considerate eseniale pentru caracterizarea unui virus: tipul de acid nucleic, structura, masa molecular n strns relaie cu capacitatea de codificare, proporia de acid nucleic raportat la masa virionului, compoziia n baze azotate, configuraia i modul de dispunere n interiorul capsidei. Tipul de acid nucleic poate fi ARN sau ADN. 51

Virusologie general n funcie de natura acidului nucleic, virusurile se mpart n ribovirusuri cu ARN i dezoxiribovirusuri cu ADN. La virusurile fitopatogene acidul nucleic este totdeauna ARN, n timp ce la virusurile zoopatogene i bacteriofagice, poate fi unul sau cellalt. Structura acidului nucleic poate fi n funcie de numrul lanurilor din care este constituit molecula monocatenar sau dublucatenar. Ca regul general, dezoxiribovirusurile au ADN dublu catenar, cu excepia parvovirusurilor i a fagului X 174, al cror ADN este monocatenar. Ribovirusurile au ARN monocatenar, cu excepia reovirusurilor, al cror ARN este dublu catenar. Masa molecular a acidului nucleic este corelat cu mrimea i masa virionului. Masa molecular este n funcie de lungimea lanurilor i implicit de numrul nucleotidelor componente, care la rndul lor sunt determinante pentru informaia genetic, respectiv capacitatea de codificare a genomului. Cel mai mic genom este acela al virusului necrozei tutunului, format dintr-o molecul de ARN constituit din aproximativ 1.000 de nucleotide, capabil s codifice sinteza unui singur tip de protein. Simplitatea genomului acestui virus i determin defectivitatea, sinteza lui nefiind posibil n celula vegetal dect n prezena unui virus helper al crui genom conine circa 6.000 de nucleotide. Genomul celui mai mic virus ADN (virusul poliomei) are masa molecular de 3 x 106 i este format din aproximativ 5.000 perechi de nucleotide. Masa molecular a ARN constituent al genomului virusului febrei aftoase, cel mai mic virus zoopatogen, este de 2,4 x 106 daltoni. Masa molecular maxim a proteinelor a cror sintez este capabil s-o codifice acest genom este de 240.000 daltoni. Virusurile complexe, ca de exemplu colifagul T4 au i genomul mult mai complex. n cazul bacteriofagului amintit, genomul are n structura sa n jurul a 100 de gene ale cror responsabiliti sunt bine cunoscute n procesul complex de biosintez i morfogenez al acestui virus. Proporia acidului nucleic raportat la masa virionului este un raport adoptat de mai muli ani de Comitetul Internaional de Clasificare i Nomenclatur a Virusurilor ca criteriu taxonomic. 52

Virusologie general Masa molecular a genomului este, n general, mult mai mic, reprezentnd 5-30% din masa total a virionului. Astfel, n cazul virusului febrei aftoase, masa genomului este de 2,4 x 106 daltoni, n timp ce aceea a ntregului virion este de 7,2 x 106. n tabelul nr. 3 sunt prezentate cele dou constante la alte cteva virusuri. Compoziia genomului n baze azotate. n cazul majoritii virusurilor, acizii nucleici virali nu difer biochimic de restul acizilor nucleici prezeni n celula animal sau vegetal. Unii bacteriofagi au ns n compoziia genomului viral o baz azotat -5 hidroximetilcitozina -, inexistent n compoziia acizilor nucleici ai celulei bacteriene, vegetale sau animale. Configuraia (topologia) acizilor nucleici poate fi de trei feluri (fig. 11): - linear, ntlnit mai ales la acizii nucleici monocatenari i o parte din cei bicatenari; - ciclic simpl sau circular ciclic evideniat la ADN constituient al unor Papovavirusuri (virusurile poliomei i ale papilomatozelor); - ciclic superrsucit (supercoiled), evideniat tot la virusurile poliomei; aceast topologie rezult din mpletirea ntre ele a dou lanuri dublu catenare de ADN.

Fig.11 Configuraia genomului virusului poliomielitei n funcie de viteza de ultra-centrifugare:

1 i 2 = ciclic suprarsucit; 3= ciclic simpl circular i 4 = linear.

53

Virusologie general Genomul virusului poliomei se poate de altfel prezenta n oricare din cele trei tipuri de configuraie, n funcie de viteza de turaie la ultracentrifugare. La 20 S ADN se depune prezentnd o configuraie ciclic superrsucit, la 16 S una ciclic simpl, iar la 14 S una linear. Acest mod de comportare al genomului virusului poliomei a determinat emiterea ipotezei, deocamdat nedemonstrat, a caracterului general al configuraiei ciclice a genomurilor virale, linearitatea fiind considerat rezultatul unui artefact. Genomurile constituite din mai multe fragmente legate ntre ele prin puni de hidrogen au fost evideniate mai ales la unele virusuri ARN, dar cu acelai grad de incertitudine privind realitatea acestui mod de existen. Dispunerea acidului nucleic n interiorul capsidei difer n funcie de simetria acesteia. La virusurile helicale exist un pararelism perfect ntre spirala helical a capsomerelor i dispunerea helical ntre irurile de nucleotide a lanului de acid nucleic. La virusurile icozaedrale, acidul nucleic este pliat sub forma unui ghem. La aceste virusuri nu exist un paralelism n raporturile dintre capsid i acidul nucleic viral. Proprietile anitigenice ale acizilor nucleici sunt slabe n comparaie cu proteinele; de aceea, genomul viral are un rol minor n determinismul structurii antigenice a virusurilor, comparativ cu capsida i peplosul. Genomul viral este componenta esenial a virusului, care poart informaia genetic necesar devierii metabolismului celulei gazd, n sensul sintezei constituienilor virali. Ribovirusurile reprezint un unicat n biologie, n ce privete posibilitatea pstrrii informaiei genetice de ctre ARN.

54

Virusologie general Tabelul nr. 3 Greutile moleculare ale unor virusuri i ale genomurilor lor.
(dup Zarnea G., 1970) Greutatea Virusul molecular Virion 6,2 x 106 Fag 174 Poliom 40 x 106 Adenovirus 177 x 106 Herpes ? Fag coli T2 300 x 106 Vaccinal 2.000 x 106 Fag ARN ? Virus nanism 11 x 106 tomate Virus mozaic 40 x106 tutun Poliovirus 6,8 x106 Influenzavirus 280 x 106 Virusul Rous i 107 virus ajuttor Greutatea molecular Genom 1,7 x 106 3,5 x 106 23 x 106 60 x 106 31 x 106 150 x 106 1,3 x 106 1,7 x 106 2,1, x 106 2,2 x 106 2 x 106 ?

Virusuri ADN

Virusuri ARN

3.6. PARTICULARITILE STRUCTURALE ALE UNOR VIRUSURI ZOOPATOGENE COMPLEXE

Unele virusuri zoopatogene se abat de la modelul clasic descris anterior prin structura mai complex a nveliului particulei virale. Poxvirusurile au urmtoarele componente structurale de la interior spre exterior (fig 12): genomul viral (inima sau smburele) sub forma unui disc biconcav, n form de haltere pe seciune, este constituit din ADN cu o mas molecular de 150 x 106/particul; o membran proteic neted cu grosimea de 50 ;

55

Virusologie general un strat compus din uniti proteice de form cilindric, de 50 lime i 100 nlime, analoage capsomerelor;

Fig. 12 Diagrama structurii unui Poxvirus: 1.inima (smburele);

2.membrana intern neted; 3.membrana extern format din capsomere cilindrice; 4.nveli extern constituit dintr-o mpletitur de structuri; 5.corp lateral.

doi corpi proteici numii i corpi laterali, cu diametrul de 600-800 , situai n depresiunile rezultate din forma biconcav a smburelui; o membran extern format dintr-o mpletitur de structuri tubulare, asemntoare cu nite capside helicoidale goale. Rhabdovirusurile, avnd ca reprezentant de referin virusul stomatittei veziculoase, au o form de ghiulea i urmtoarele componente structurale de la interior spre exterior (fig. 13): genomul viral, constituit din ARN monocatenar, dispus helicoidal, diametrul spiralelor este de 150-180 ; o capsid constituit din capsomere, dispuse n dublu strat helicoidal, cu diametrul spiralelor externe de 500 ; o membran proteic neted;

56

Virusologie general un peplos format din peplomere de 100, asimetrice, avnd o form comparabil cu un buton, par sau bec, regulat aezate, cu extremitatea mai ngust ataat de membrana neted.
Fig.13 Diagrama structurii unui Rhabdovirus:
1. 2. peplomere 2.i 3 nucleocapsid dublu helicoidal

3.7. PARTICULARITI STRUCTURALE ALE BACTERIOFAGILOR

Bacteriofagii (virusuri parazite pentru bacterii) au genomul constituit n majoritatea cazurilor din ADN i mai rar din ARN. Genomul viral este dispus n interiorul capsidei ca la virusurile icozaedrale. Capsida viral poate avea diferite forme i grade de complexitate structural. Majoritatea bacteriofagilor, la examenul electronooptic, cu o putere de rezoluie mai mic, au aspect de spermatozoid, cirea cu coad, mormoloc), distingndu-se ca pri componente ale virionului un cap i o coad. Studiile de finee din ultimii ani, au permis observarea mai multor tipuri morfologice. BRADLEY (1971) deosebete 6 tipuri morfologice principale (fig. 14): - fagi cu coada lung i contractil, - fagi cu coada lung necontractil, - fagi cu coada scurt, 57

Virusologie general fagi fr coad, cu capsomere mari la coluri, fagi fr coad, numai cu capsomere mici, la coluri, - fagi filamentoi, fr cap. Fagii cu coad lung i contractil reprezint tipul cel mai complex, al crui reprezentant cunoscut i descris n cele mai fine detalii este colifagul T2 (fig. 15). Prile lui structurale sunt urmtoarele: -

Fig. 14 Tipuri structurale de bacteriofagi (dup Bradley, 1971): 1.fagi cu coada contractil; 2.fagi cu coada lung necontractil; 3.fagi cu
coada scurt; 4.fag fr coad, cu capsomere mari la coluri; 5.fag fr coad, cu capsomere mici la coluri; 6.fag filamentos.

capul fagului, constituit dintr-un poliedru hexagonal, bipiramidal, cu o lungime de 950-1.050 i o mas molecular de 8,5 x106, este format din: - genomul viral reprezentat de o molecul de ADN dublu catenar, cu masa molecular de 120 x 106, format din 200 perechi de nucleotide, avnd o lungime de 49 4 microni; - capsida capului este un icozaedru alungit, format din dou piramide de cte 5 fee triunghiulare, ntre care se interpun dou benzi ecuatoriale, constituite fiecare din 10 fee triunghiulare;

58

Virusologie general

Fig. 15 Structura bacteriofagului T2: A.fag cu coad relaxat; B.fag cu coad contractat; 1. capsida capului coninnd genomul; 2. genomul (ADN dublu caternar) 3.capsida capului nidat de genom dup inocularea acestuia n celula bacterian sensibil (fag fantom); 4.gulerul; 5.coada relaxat; 6.coada contractat; 7.placa termi-nal; 8.croete; 9.proteine fibrilare.10.cilindru axial

- structura capsomerelor nu difer de cea a virusurilor icozaedrale zoopatogene; coada fagului, format la rndul ei din: - smburele cozii sau cilindrul axial cu o compoziie proteic i diametrul de 70 ; - teaca cozii format dintr-un cilindru cu o lungime de 800 , n stare necontractat; diametrul tecii este de 160 , iar masa molecular de 7,8 x106 - 12 x 106; structura tecii cozii este identic cu cea a capsidelor helicoidale; n timpul contraciei, coada se scurteaz cu 50% prin alunecarea una peste alta a spiralelor constituiente ale capsidei helicoidale a acesteia; - gulerul fagului, interpus ntre cap i coad, de forma unui disc hexagonal subire cu diametrul de 306 ; - placa terminal este un disc hexagonal similar gulerului la extremitatea cozii; - croetele sunt n numr de 6, aezate la unghiurile plcii terminale; 59

Virusologie general fibrilele cozii sunt formaiuni filamentoase proteice, cu lungimea de 1.300 , diametrul de 20 i masa molecular 400.000, formnd o reea n jurul tecii cozii. Placa terminal, mpreun cu croetele i fibrele cozii, formeaz aparatul de fixare al bacteriofagului, la nivelul cruia se gsete enzima numit lizozim fagic, capabil s permeabilizeze peretele celulei gazd. -

4. TROPISMUL VIRUSURILOR
Tropismul virusurilor const n afinitatea acestora fa de gazd, esut, celul. Genotropismul sau afinitatea pentru specia biologic pe care o paraziteaz permite mprirea virusurilor, n funcie de numrul speciilor receptive n monopatogene i patogene pentru 2,3 sau mai multe specii (virusuri cu spectru larg); dup apartenena de regn a speciilor receptive, se mpart n zoopatogene, fitopatogene i bacteriofagi i micofagi. Histotropismul sau afinitatea pentru anumite esuturi, permite mprirea virusurilor n urmtoarele categorii: virusuri epiteliotrope (dermotrope), cu afinitate pentru celulele epiteliale ale pielii i mucoaselor; ex.: virusurile din grupa Pox, virusul febrei aftoase etc. virusuri neurotrope, cu afinitate pentru celula nervoas; ex.: virusul rabic, virusul poliomielitei, alte virusuri encefalitice; virusuri organotrope (viscerotrope), cu afinitate pentru anumite organe interne; la rndul lor, acestea pot fi clasificate, dup organul afectat, n: - pneumotrope ex.: virusul jigodiei, virusurile influenelor; - enterotrope ex.: virusurile enterocitopatogene, virusul diareei virotice bolii mucoaselor etc.

60

Virusologie general virusuri mezenchimotrope (pantrope) cu afinitate pentru celula mezenchimal, indiferent de locul ei n organism; ex.: virusurile pestelor la diferite specii animale. Histotropismul nu se manifest totdeauna foarte strict, unul i acelai virus avnd posibilitatea ca n decursul infeciei s se localizeze n esuturi diferite. n astfel de situaii, se ia n considerare tropismul pentru esutul n care virusul se localizeaz n faza iniial i din partea cruia se produc simptomele i leziunile cele mai caracteristice ale bolii. Citotropismul reprezint afinitatea virusurilor pentru anumite tipuri de celule din cadrul aceluiai esut. Ex.: virusul rabic este neurotrop, dar se multiplic de preferin n celulele piramidale de tip Betz din coarnele lui Ammon; virusul poliomielitei, tot neurotrop, are afinitate pentru neuronii motori din coarnele anterioare ale mduvei. Tropismul virusurilor este determinat pe de o parte de complementaritile de ordin stereochimic, electronostatic i geometric dintre nveliul particulei virale i membrana celulei gazd, complementariti datorit crora are loc fixarea (adsorbia) virusului pe celul, iar pe de alt parte de capacitatea genomului viral de a substitui informaia genetic a genomului celular i de a determina astfel biosinteza de material viral n locul compuilor specifici celulei.

5. MULTIPLICAREA VIRUSURILOR
Pentru virusuri, termenul de multiplicare nu reflect de fapt realitatea fenomenelor care au loc n celula gazd, n interiorul creia virusurile nu se multiplic, ci sunt sintetizate de celul prin activitatea metablic a acesteia, deviat de la normal n urma substituirii informaiei genetice a celulei cu cea a virusului. innd seama de faptul c nu s-a gsit un termen cu o semnificaie semantic mai adecvat pentru reflectarea realitii fenomenelor care au loc n cursul producerii de ctre celul a materialului viral, se menine deocamdat n uz termenul de multiplicare. Multiplicarea virusurilor implic patru etape principale: 61

Virusologie general 1. adsorbia sau fixarea virionului pe celula gazd; 2. ptrunderea n celul a virionului (la virusurile zoopatogene) sau numai a genomului viral (la virusurile bacteriofagice); 3. multiplicarea intracelular propriu-zis a virusului, n cadrul creia se pot deosebi trei categorii de procese; - replicarea acidului nucleic viral; - biosinteza materialului viral; - asamblarea (morfogeneza) noilor virioni; 4. eliberarea virionilor nou formai din celul. n desfurarea acestor etape se constat unele diferene ntre virusurile zoopatogene i bacteriofagi, care se refer mai ales la primele dou i la ultima, multiplicarea intracelular propriu-zis realizndu-se n esen identic la toate categoriile de virusuri.

5.1.

MULTIPLICAREA VIRUSURILOR ZOOPATOGENE

5.1.1.

Adsorbia sau fixarea virionilor pe celul

Prima etap a multipicrii virusurilor se caractrizeaz printr-un grad relativ redus de specificitate. Responsabilitatea fixrii o poart complimentaritile de tip stereo, de natur chimic, electrostatic i geometric dintre capsida sau pericapsida virionului i membrana celulei gazd. Gruprile chimice de pe suprafaa membranei celulare, care intervin n determinismul afinitii dintre celul i virion, poart numele de receptori. n general, receptorii acioneaz complementar prin gruprile lor fosfat, fa de gruprile aminice ale capsidei virale. La unele virusuri, ca de exemplu virusurile gripale, au fost identificate cu precizie proteinele receptor de pe suprafaa celulelor. Acestea sunt de natur glicoproteic, complementare neuraminidazei enzima din pericapsida virusurilor gripale care din punct de vedere al activitii ei biologice este o glucidaz. 62

Virusologie general Datorit specificitii relativ reduse a atraciei dintre majoritatea virusurilor zoopatogene i celulele animale, fixarea virionilor este de cele mai multe ori precedat de un numr mai mic sau mai mare de ciocniri ntmpltoare dintre virus i celul. De aceea, dintr-o multitudine de particule virale care ptrund n organism, un numr mult mai redus ajung s se fixeze i apoi s strbat nveliul celulei gazd. Rata de fixare a fost stabilit n cazul unor virusuri zoopatogene, ca fiind de 3-5 x 109. 5.1.2.Ptrunderea virionilor n celul n cazul virusurilor zoopatogene, spre deosebire de bacteriofagi, virionul ptrunde n ntregime n celula sensibil printr-un proces activ, ntructva asemntor cu fenomenele de fagocitoz sau pinocitoz. Membrana celular se invagineaz i se adncete progresiv n dreptul virionului, pn cnd acesta este complet nglobat n celul. Fenomenul poart i numele de viropexie. Dup nglobare, marginile opuse ale membranei celulare invaginate fuzioneaz, restabilindu-se astfel integritatea suprafeei celulare. Virusul ptruns n celul este inclus ntr-o vacuol ai crei perei se dezintegreaz treptat. 5.1.3.Decapsidarea Decapsidarea este un proces specific numai virusurilor zoo- i fitopatogene, absent la bacteriofagii a cror capsid nu ptrunde n celul. Ea const n liza capsidei sub aciunea enzimelor de tip lizozomal, numite decapsidaze, produse de celula gazd. Pentru desemnarea fenomenului de decapsidare mai sunt utilizai i termenii deproteinare sau dezbrcare, acesta din urm mprumutat din literatura englez de specialitate (uncoating). Sinteza decapsidazelor este sub determinismul genetic al genomului viral. La poxvirusuri s-a emis ipoteza c ADN viral, chiar nainte de decapsidare, este capabil s codifice i s transcrie pe ARNm o secven responsabil de sinteza decapsidazei. Aceast ipotez i gsete confirmarea ntr-o experien cunoscut sub numele de fenomenul Berry-Dedrick: 63

Virusologie general n celulele infectate cu un poxvirus A nclzit la 560C nu are loc sinteza materialului viral; acelai lucru este valabil i pentru o populaie de celule infectate cu un virus B iradiat cu ultraviolete; n celulele infectate ns, simultan cu virusul nclzit A i virusul iradiat B, se constat sinteza de material viral. Explicaia fenomenului este urmtoarea: virusul A, a crui ARN polimeraz este inactivat, nu este decapsidat, n timp ce genomul virusului B decapsidat nu se poate replica datorit alterrilor produse de radiaiile ultraviolete; dac cele dou virusuri se amestec, ARN polimeraza eliberat din virusul B nealterat cu ultraviolete va determina sinteza ARNm precoce, din care un segment este responsabil de sinteza decapsidazei; aceasta va decapsida virusul B care se va replica declannd multiplicarea normal a virusului. Momentul decapsidrii difer la diferitele grupe de virusuri. n cazul virusurilor picorna, el ncepe din momentul contactului cu membrana celular. La altele, decapsidarea poate s nu aibe loc, fr ca aceasta s mpiedice replicarea acidului nucleic i transcrierea informaiei genetice. Cu privire la dinamica procesului decapsidrii s-a putut stabili, n cazul adenovirusurilor, c ruperea capsidei are loc la nivelul pentamerelor constituiente ale colurilor icozaedrului, care reprezint punctele cele mai fragile ale acestuia. O dat cu decapsidarea, virusul pierde infectivitatea n condiii naturale i trece din forma de virion n cea de virus vegetativ, dependena sa de celul devenind total. n fig. 16 sunt redate schematic primele trei etape ale multiplicrii virusurilor.

64

Virusologie general

Fig. 16 Schema primelor trei etape ale multiplicrii virusurilor:

1.fixarea virionului pe celula sensibil; 2.ptrunderea virionului n celul (viropexia); 3.decapsidarea

5.1.4.Multiplicarea propriu-zis Multiplicarea prorpiu-zis este un proces complex bazat pe substituirea informaiei genetice a genomului celular cu cea a genomului viral. Acesta prin mecanisme care nc nu sunt pe deplin clarificate, scoate din funcie ADN celular n momentul copierii informaiei de pe ADN pe ARNm. n celul va apare ARNm de o calitate nou transcris de pe genomul viral care va transmite la nivelul ribozomilor un mesaj genetic nou, care va obliga celula ca n locul enzimelor i a celorlalte proteine proprii s sintetizeze material viral (fig. 17). Parelel cu replicarea acidului nucleic viral, are loc inhibarea sintezei proteinelor celulare. n cazul mai multor virusuri ARN se constat ncetinirea sintezei proteinelor celulare n proporie de 70-90% nc din prima or de la ptrunderea virusului n celul. Un alt fenomen caracteristic celulelor infectate cu virus const n nlocuirea treptat a poliribozomilor celulari de tip 200 S cu poliribozomi virali de tip 350 S.

65

Virusologie general

Fig. 17 Schema substituirii informaiei genetice a genomului celular cu cea a genomului viral: 1.celula naintea ptrunderii
virusului; 2. n celul a ptruns un virus care n urma decapsidrii a eliberat genomul viral i 3.genomul viral a substituit genomul celular i a nceput s se replice transcriind informaia sa genetic pe ARN m.

Acetia din urm sunt incapabili s recepioneze informaia genetic de la ARNm celulari, recepionnd informaia genetic numai de la ARN virali. n transmiterea informaiei genetice nscrise n programul viral se pot deosebi mecanisme diferite determinate de acidul nucleic, constituent al genomului viral (ADN sau ARN), structura acestuia (mono sau dublu catenar), capacitatea i modul de codificare al diferiilor acizi ribonucleici i de unele particulariti ale complexului viruscelul. n funcie de aceti factori au putut fi identificate pn n prezent, la virusurile animalelor, mai multe scheme sau strategii de multiplicare. Indiferent de detaliile aschemei de multiplicare, aceasta implic totodeauna trei procese: - replicarea genomului viral, - biosinteza materialului viral, - asamblarea sau morfogeneza noilor virioni.(Exemplificri n fig.29,30,31) 5.1.4.1.Replicarea genomului viral Acest proces are loc n mod diferit, n funcie de structura mono sau bicatenar a acidului nucleic, dup cum urmeaz: ADN dublu catenar prezent la majoritatea virusurilor ADN se replic semiconservativ, cele dou catene despletinduse dup modelul clasic al fermoarului (literei Y). La Adenovirusuri s-a demonstrat c replicarea ncepe de regul la 66

Virusologie general extremitatea catenei care este mai bogat n perechi de baze Adenin-Tinin. ADN monocatenar caracteristic Parvovirusurilor i construiete sub aciunea unei enzime (replicaz) lanul complementar, devine astfel ADN dublu catenar replicativ, dup care se replic conform modelului menionat mai sus, caracteristic pentru ADN dublu catenar. Unele Parvovirusuri sunt defective, genomul fiind incapabil de replicare. Ele se multiplic numai cu ajutorul unui Adenovirus helper al crui genom este ADN dublu catenar, din replicarea cruia rezult i lanurile necesare Parvovirusurilor adeno-asociate. ARN monocaternar, care constituie genomul majoritii virusurilor ARN, determin prin enzime (replicaze) sinteza de noi lanuri de ARN prin dou feluri (tipuri) de mecanisme de replicare: Tipul semiconservativ, precedat de transformarea ARN monocatenar n bicatenar, prin sinteza unei catene complementare. Transformat n bicatenar, ARN devine replicativ i se replic dup modelul semiconservativ clasic prin despletirea celor dou catene n form de fermoar sau litera Y. Cele dou catene fiice sunt una + i alte (fig. 18).

Fig. 18 Tipul semiconservativ de replicare a ARN: prin aciunea unei replicaze, ARN viral monocatenar devine dublu
catenar i replicativ; din replicarea semiconservativ rezult o caten + i alta - .

Tipul asimetric, caracterizat prin replicarea de pe aceeai caten paralel, devenit matrice, a mai multor catene complementare; catenelor noi care se 67

Virusologie general formeaz treptat, pe msura deplasrii catenei parentale, rmn ataate ctva timp de aceasta. n acest fel se formeaz o molecul mare, numit intermediar de replicare, ramificat n form de brad, cu un numr de ramuri care variaz de la 1 la 7 i sunt catene +. Formarea intermediarilor de replicare este totdeauna precedat de replicarea de tip semiconservativ (fig. 19).

Fig. 19 Tipul asimetric de replicare: dup replicarea semiconservativ se formeaz, de pe o caten matrice, mai multe catene laterale rezultnd o molecul ramificat (intermediarul de replicare).

Indiferent de tipul de replicare, catenele + devin viitoare genmuri virale sau dirijeaz n continuare sinteza de material virla, n timp ce catenele - dup ce i-au ndeplinit rolul de suport (matrice) pentru procesul de replicare, se dezagreg. ARN bicatenar constiuie o excepie n cadrul virusurilor ARN, fiind prezent numai la Reovirusuri. n celulele infectate cu Reovirusuri au putut fi evideniate trei categorii de ARN monocatenari: mari de 24 S, mijlocii de 18 S i mici de 14 S. Fiecare ARN monocatenar este o copie fidel transcris de pe un ARN bicatenar. n multiplicarea reovirusurilor intervin dou feluri de enzime: una responsabil de transcrierea ARN monocatenar de pe ARN bicatenar, iar a doua responsabil de replicarea ARN bicatenar. Prima este o protein virus specific, fiind identificat n interiorul capsidei virionilor. Aceast enzim este activat n cursul decapsidrii. n nucleocapsida Reovirusurilor au fost identificate i lanuri de ARN 68

Virusologie general monocatenar, reprezentnd a 10-a parte din genom, dar rolul acestuia n-a putut fi stabilit. n cursul replicrii semiconservative a acidului nucleic viral se produce substituirea total sau parial a ADN din genomul celular, ncepnd transcrierea informaiei genetice nscrise n genomul viral de ARN mesager, care urmeaz s transmit informaia pentru sinteza constituienilor virali la nivelul ribozomilor celulei gazd. n acest fel se iniiaz cel de al doilea proces esenial al multiplicrii virusurilor biosinteza de material viral. (Exemplificri n fig. 32,33) 5.1.4.2.Biosinteza materialului viral n biosinteza materialului viral se disting dou faze. Studiul acestora la virusurile ARN a permis stabilirea urmtoarei dinamici de desfurare i a urmtoarelor caracteristici pentru fiecare faz: Faza exponenial de sintez ncepe la 30 minute de la ptrunderea virusului n celul i dureaz 2,5-3 ore; timpul de dublare a cantitii de ARN din celul este de aproximativ 15 minute; Faza linear de sintez se caracterizeaz printr-un ritm constant de acumulare de ARN viral; n celul se sintetizeaz n jur de 3.000 molecule de ARN pe minut, meninndu-se n stare activ 500-800 de matrice. O molecul de ARN se sintetizeaz n 50 secunde, ritmul de polimerizare al nucleotidelor fiind de 130 pe secund. n aceast faz ncepe i se desfoar cu o vitez crescnd morfogeneza noilor virioni prin ncapsidarea genomurilor. Bosinteza materialului viral decurge la diferitele grupe de virusuri dup urmtoarea schem: Virusurile ADN sunt sintetizate de celula gazd n dou faze: Faza precoce: ADN viral determin, n cursul replicrii, prin intermediul unei ARN polimeraze ADN dependente sinteza unui ARNm precoce. Originea ARN polimerazelor variaz de la o grup (familie) de virusuri la alta. La unele grupe de virusuri ARN polimeraza preexist n interiorul 69

Virusologie general virionului, fiind o protein virus specific. Majoritatea virusurilor ADN codific ns utiliznd ARN polimeraze celulare. n virionul Poxvirusurilor, pe lng ARN polimeraz, se gsete i o dezoxiribonucleaz i o nucleotidfosfohidrolaz. Acestea intervin n biosinteza materialului viral ca enzime tardive. ARNm precoce codific sinteza de genomuri virale progene i de proteine virale precoce, majoritatea de natur enzimatic. Genomurile progene au aceeai capacitate de codificare ca genomul viral parental. Proteinele precoce produc inhibarea replicrii ADN, ARN i a proteinelor specifice celulei gazd i catalizeaz sinteza unor precursori ai proteinelor virale structurale. Faza tardiv. n momentul cnd n urma replicrii ADN viral s-a ajuns la un anumit numr de genomuri virale patogene, este inhibat sinteza proteinelor precoce, declanndu-se prin intermediul unui ARNm tardiv sinteza proteinelor tardive, n marea lor majoritate proteine structurale, virus specifice, care urmeaz s fie asamblate n procesul de morfogenez a noilor virioni. Echipamentul enzimatic evideniat n celulele n care are loc biosinteza virusurilor ADN este reprezentat cu precdere de enzime corelate cu metabolismul ADN. Astfel, n celule care multiplic un Herpesvirus au fost identificate urmtoarele enzime: timidinkinaza, timidinmonofosfatkinaza, deoxiguanozinmono-fosfatkinaza deoxiadenozinmonofosfatkinaza, ADN polimeraza i deoxiribonucleaza. Timpul n care decurg cele dou etape ale biosintezei este n funcie de grupa (familia) de virusuri. La Adenovirusuri, faza precoce dureaz 6-8 ore, sinteza proteinelor tardive ncepnd din a 8-a or. Virusurile ARN determin biosinteza metabolismului viral de ctre celula gazd prin mecanisme variate, dar ncadrabile n trei scheme (strategii) mai importante: a) ARN viral ndeplinete direct rolul de ARNm precoce i poate transmite informaia genetic direct la nivelul ribozomilor printr-un proces de substituire 70

Virusologie general direct sau scurtcircuitare a ARNmcelular; acest mecanism este caracteristic pentru Picornavirusuri. b) ARN viral nu poate fi citit la nivelul ribozomilor celulei i nu poate deci transmite direct informaia nscris n genomul viral. De aceea, prin intermediul unei ARNm polimeraze ARN dependente, el va determina sinteza unui ARNm precoce de neoformaie care va declana sinteza proteinelor virale precoce, dup care procesul continu ca la celelalte grupe de virusuri. Unele virusuri ARN care se multiplic n acest mod pot conine n virion transcriptaze structurale. Dup aceast schem se sintetizeaz Mixo i Rhabdovirusurile. c) ARN viral, printr-un proces de transcriere invers cu ajutorul unor enzime numite invers sau reverstranscriptaze, determin formarea unui ADN proviral. Invers transcriptaza pare a nu fi o singur enzim, ci un complex format din 3 enzime: o ADN polimeraz ARN instruit, o ADN polimeraz hibrid instruit i o ADN polimeraz ADN instruit. Separarea celor trei enzime nu a reuit ns pn n prezent. Transcrierea invers este un fenomen unic n biologie. Prin acest proces enzimatic se formeaz un ADN proviral care preia conducerea sintezelor celulare dup modelul descris la virusurile ADN. Prin intermediul unui ARN polimeraze ADN dependente el determin sintez proteinelor virale precoce, restul proceselor fiind aproximativ identice cu ale celorlalte scheme de biosintez. ADN proviral se poate, n unele cazuri, integra n genomul celular sub forma de provirus. Multiplicarea dup acest mecanism a fost identificat la unele virusuri tumorale ARN. n fig. 20 sunt redate schematic cele 3 strategii descrise mai sus.

71

Virusologie general

Fig. 20 Strategii de transmitere a informaiei genetice responsabile de codificarea biosintezei virusurilor ARN: 1.de pe
ARN viral direct la ribozomi; 2.prin intermediul unui ARN m copiat de pe ARN viral i 3. prin intermediul unui ADN proviral copiat prin transcriere invers.

5.1.4.3.Asamblarea (morfogeneza) virionului La sfritul fazei de biosintez, dup ce n celul s-au acumulat cantiti mari de acid nucleic i proteine virale, are loc asamblarea noilor virioni. La virusurile mici, aezarea componentelor n jurul genomurilor virale, fenomen numit i ncapsidare, se petrece spontan printr-un proces de autoasamblare. La cele mai multe virusuri, asamblarea implic ns intervenia unor enzime. La virusurile complexe intervin i gene morfogenetice, care codific arhitectura proteinelor structurale ale virionului. ncapsidarea se realizeaz prin asocierea unor proteine precursoare n uniti formate mai nti din 3 subuniti, constituind o protein 5 S, iar apoi din 5 subuniti rezultnd o pentamer 14 S. Din asamblarea a 12 pentamere rezult o procapsid 80 S, constituit din 60 subuniti aranjate dup tipul de simetrie icozaedral. Asamblarea capsidelor are loc independent de prezena genomurilor virale, fenomenul demonstrat prin experiena lui Jacobson i Baltimore (1967) care, n urma inhibrii replicrii ARN a virusului poliomielitei n prezena guanidinei, au constatat acumularea n celul de capside goale. ncorporarea acidului nucleic are loc prin sciziunea ntrun anumit punct a unei proteine gigante precapsidale. Proteina gigant are masa molecular 40 x 103 iar proteinele care rezult 72

Virusologie general din scindarea ei, n momentul adiionrii ARN au masele moleculare de 28 x 103 i respectiv 12 x 103. Timpul de ncapsidare a unui genom ARN este de dou minute. ntre sinteza proteinelor capsidale i apariia lor n structura virionilor nou formai exist ns un interval de 20 minutte. Aceasta pledeaz pentru admiterea formrii unui depozit (Pool) intracelular de proteine capsidale, care crete cu timpul n volum, depozit din care emisia de proteine capsidale pare a avea loc la ntmplare, pe parcursul de morfogenez a virionilor. Experineele care pledeaz pentru acest mod de desfurare al asamblrii noilor particule virale sunt urmtoarele: Mixajul fenotipic al proteinelor capsidale: Ledinko i Hirst (1961) au constatat, dup o infecie mixt cu 2 serotipuri distincte de virus al poliomielitei, apariia de virioni care au fost neutralizai de seruri specifice pentru ambele serotipuri, dovedind astfel originea dubl a proteinelor capsidale a virionilor nou formai. Camuflajul fenotipic sau mascarea genotipului: Fraenkel-Conrat i Singer (1957) au reprodus artificial virioni, constituii din capsida unei tulpini i genomul alteia n cazul virusului mozaicului tutunului. Experiee similare s-au efectuat i cu virusul poliomielitei. Morfogeneza, ca regul general, are loc pentru virusurile ARN intracitoplasmatic, iar pentru virusurile ADN intranuclear. Materialul viral, dup sinteza lui n citoplasm, migreaz n cazul virusurilor ADN n nucleul celulei gazd, asmablndu-se aici. Excepii de la aceast caracteristic general o reprezint poxvirusurile care, fiind virusuri ADN, se asambleaz n citoplasm i myxovirusurile care, fiind virusuri ARN, se ncapsideaz n nucleu. Diferene ntre grupele (familiile) de virusuri exist i n ce privete locul i structurile intracelulare din citoplasm i nucleu unde are loc asamblarea lor. Astfel, poxvirusurile i picornavirusurile se pot asambla n diverse zone ale citoplasmei, rhabdovirusurile de obicei pe membranele marginale ale vacuolelor intracitoplasmatice, iar myxovirusurile dup ncapsidarea lor n nucleu i desvresc faza de maturare la periferia celulei, limitrof membranei.

73

Virusologie general 5.1.5.Eliberarea virionilor din celul Virionii nou formai pot fi eliberai din celul prin mai multe procese, dup cum urmeaz: nmugurirea sau burjonarea este modul cel mai frecvent de eliberare a virusurilor din celul. El a fost observat i studiat mai nti la virusurile a cror maturare are loc curent n apropierea membranei celulare; mai trziu, s-a constatat c este n realitate mult mai extins. Modelul general se caracterizeaz prin includerea ntr-o prim faz a virionilor nou asamblai n vezicule (cisterne), care se ataeaz de faa intern a membranei celulare, la suprafaa creia proemin i o bombeaz asemntoar unor muguri. Apoi, acetia se detaeaz de celul prin mici aperturi care apar n membran. (fig. 21). Intensitatea fenomenului i aspectul mugurilor poate mbrca o gam destul de variat de forme. Uneori, eliberarea virionilor are loc exploziv sub form de vacuole care se degaj la suprafaa celulei simultan i asincron (dup Lwoff i Dulbecco, 1955, citai de Hannoun, 1976).

Fig.21. Eliberarea virionilor din celula gazd\ prin `nmugurire

Alteori, la suprafaa celulelor se formeaz nite viloziti, iar virionii ies n mediul extracelular prin extremitile acestora. n urma procesului de nmugurire virusul pstreaz n componena nveliului sau mai ales al pericapsidei anumii compui specifici celulei care l-a sintetizat, provenind din 74

Virusologie general membrana intern a cisternei (veziculei) n care fusese inclus n cursul nmuguririi, fapt care determin prezena, la aceti virioni, a dou categorii de proteine: proteine virus specifice, elaborate de celul conform informaiei genetice a acidului nucleic viral; proteine cu specificitate de gazd, care fac parte din compuii obinuii ai celulei i care sunt antrenai n structura nveliului particulei virale (a pericapsidei), n cursul eliberrii virusului din celul. Liza celulei gazd sub aciunea unor enzime produse n celul n ultima faz a morfogenezei; acest mecanism, caracteristic bacteriofagilor, se ntlnete rar la virusurile animale. Eliberarea virionilor consecutiv morii celulei i dezintegrrii acesteia; aceste virusuri apar cel mai trziu, iar punerea lor n libertate se caracterizeaz printr-o frecven moderat. Trecerea virionilor direct la celula adiacent celei n care a avut loc multiplicarea, prin porii membranei celulare.

6. DINAMICA CICLULUI DE MULTIPLICARE

Ciclul multiplicrii unui virus sub diversele lui aspecte calitative i cantitative, precum i factorii care-l pot influena, a putut fi studiat la principalele grupe (familii) de virusuri in vitro n diferite sisteme celulare. Fazele evoluiei unui virus ntr-un sistem celular sunt: faza extracelular, care precede ptrunderea virionilor n celule, corespunznd fixrii adsorbiei, n care numrul virionilor este iniial egal, iar apoi din ce n ce mai mic fa de cel nsmnat; faza intracelular, care dureaz din momentul ptrunderii unuia sau mai multor virioni n celul, pn la eliberarea virionilor nou sintetizai; aceast faz poate fi divizat n dou subfaze:

75

Virusologie general faza de eclips, cnd virusul nu este evideniabil, corespunznd dispariiei infectivitii virale; virusul se gsete intracelular n diferite momente ale replicrii acidului nucleic i ale biosintezei materialului viral; - faza de maturare, n care consecutiv morfogenezei se acumuleaz intracelular cantiti importante de noi virioni; n aceast faz virusul este evidneiabil intracelular, dar nu i extracelular. faza extracelular final, caracterizat prin prezena unui numr mare de noi virioni eliberai din celulele n care a avut loc multiplicarea. Durata ntregului ciclu i a fiecrei faze n parte, exemplificat pentru unele virusuri ARN n tabelul nr. 3, este n funcie de virus, cantitatea de virioni nsmnat, tipul de celul, temperatur etc. Fazele ciclului de multiplicare sunt corelate cu modificrile de proporie ntre diferii compui chimici proprii celulei gazd i compuii chimici specifici virali. n fig. 22 este prezentat un grafic al ciclului de multiplicare al adenovirusurilor 2 i 5, cu implicaiile acestuia sub aspectul variaiilor calitative i cantitative ale unor compui chimici celulari i virali. Tabelul nr. 4 Ciclul de multiplicare a cinci virusuri ARN (dup Hannoun, 1976).
Celula gazd Numr NumEliberaPFU rul rea produse virionivirionide o lor lor din celul produi Eclips Maturar celul pe e celul 5 foarte 2,5 6 2 x 10 2 x105 lent 500 Durata n ore a fazei intracelulare

Virusul

Virusul poliomielite i

HeLa

76

Virusologie general
Arbovirus Fibroblaste Sindbis de pasre Reovirus L Paramyxovirus (Newcastle ) Embrion de gin

4 3 3

16 15 10

rapid, 30 min. incomplet 30% rapid

100 1000 50 104

Fibroblaste Leucoviru de pasre

12

foarte rapid (30 min. i continu)

0,2/or

200/or

Fig. 22. Schema ciclului de multiplicare a adenovirusurilor 2 i 5 (cultur n suspensie) (dup Warocquier, din Hannoun, 1976)

77

Virusologie general

7. ASPECTE PARTICULARE ALE MULTIPLICRII VIRUSURILOR ZOOPATOGENE

7.1. INFECIA ENDOSIMBIOTIC

Infecia endosimbiotic se caracterizeaz prin stabilirea unui echilibru ntre multiplicarea virusului i desfurarea aproape normal a proceselor vitale n celula gazd. O astfel de comportare s-a constatat la numeroase leucovirusuri, virusul sarcomului lui Rous i virusul S V 5. n celul se elaboreaz concomitent att compui proprii celulei gazd, ct i material viral, att genomul viral ct i cel celular codificnd sinteza de proteine fr a se exclude reciproc. Acest tip de infecie trebuie difereniat de echilibrul fals (carrier statte), cnd populia celular n care se multiplic virusul i pstreaz numai aparent integritatea. n realitate, n cadrul populaiei respective marea majoritate a celulelor sunt indemne de virus, acesta multiplicndu-se numai ntr-un numr foarte redus de celule, a cror moarte, nsoit sau nu de liz, trece neobservat.

7.2.

INFECIA ABORTIV

Infecia abortiv se caracterizeaz prin nefinalizarea ciclului de multiplicare viral. Genomul viral se replic, are loc biosinteza noilor genomuri i a proteinelor virale, fr a se ajunge ns la asamblarea noilor virioni. Evoluii de acest gen au fost observate la virusul gripal n celule HeLa i la virusul pseudopestei aviare n celule L. Infecii de tip abortiv au mai fost descrise la adeno, herpes i papovavirusuri. La aceste virusuri infecia abortiv poate fi corelat cu efectul lor oncogen.

78

Virusologie general 7.3. INFECIA SIMULTAN CU ASOCIAII VIRALE DE TIP COOPERANT Infeciile produse de dou virusuri sunt de obicei rezultatul cooperrii unui virus normal, capabil s induc n celula gazd un ciclu complet de multiplicare i un virus defectiv, fa de care virusul normal ndeplinete rolul de helper (ajuttor). Defectivitatea viral const n incapacitatea unor virusuri de a se multiplica prin mijloace proprii, informaia genetic din acidul lor nucleic fiind insuficient pentru a codifica un ciclu complet, finalizat prin formarea de noi virioni infectani. Literatura folosete uneori pentru desemnarea virusurilor defective termenii de viroizi sau virusuri satelit. Virusurile helper, multiplicndu-se n celul concomitent cu virusurile defective, sunt capabile s suplineasc lacunele de informaie genetic ale acestora prin codificarea sintezei acelor proteine a cror biosintez virusurile defective n-o pot induce singure. Astfel, virionii rezultai cu concursul unui virus helper sunt n realitate nite hibrizi, ei coninnd proteine specifice proprii, ct i proteine specifice helperului. Acest proces de hibridare implic fenomenele de mixaj i camuflaj fenotipic al virusului defectiv. Fenomeul prin care n cursul hibridrii intervirale apar n capsida unui virus proteinele specifice virusului helper coinfectant poart numele de transcapsidare. Virusurile defective pot fi, n funcie de persistena, modul i condiiile de manifestare a acestei nsuiri, de mai multe feluri: virusuri constant defective, indiferent de sistemul celular i condiiile de mediu n care se desfoar ciclul de multiplicare al celor dou virusuri asociate virusuri condiionat defective, la care manifestarea caracterului defectiv este dependent de sistemul celular sau de alt factor de mediu; un exemplu n acest sens l constituie particulele virale autointerferente studiate mai des la myxovirusuri; mecanismul producerii acestora, numit i fenomenul lui Von Magnus. 79

Virusologie general Defectivitatea poate afecta mai multe nsuiri ale virusurilor: Defectivitatea n capacitatea de replicare, care afecteaz obligatoriu i biosinteza; un asemenea fenomen a fost bine studiat la virusurile oncogene aviare i mai ales la virusul sarcomului lui Rous (VSR). Una din mutantele acestuia, VSR beta, nu se multiplic dect n cazul coinfeciei cu virusul limfomatozei RAV (Rous associated virus). Acesta codific sinteza uneia sau mai multor proteine, care vor intra n compoziia VSR beta. Un virus astfel mbrcat cu proteina specific altui virus reprezint un pseudotip (dup Hannoun, 1976). Alte mutante ale virusului sarcomului lui Rous sunt defective din punct de vedere al mai multor nsuiri. Astfel, mutanta VSR alfa este dublu defectiv, fiind incapabil s-i codifice sinteza proteinei de nveli i n acelai timp lipsit de invers trasncriptaz. Un tip interesant de asociaie viral este cea observat ntre virusul SV 40 i un adenovirus. Dup mai multe treceri ale unei tulpini de adenovirus 7 pe celule renale de maimu, un genom defectiv SV 40 contamineaz i se asociaz particulei virale de adenovirus 7. Acest genom defectiv a fost denumit component PARA (particule aiding replication of adenovirus). Defectivitatea n capacitatea de a induce un anumit efect asupra celulei gazd. Astfel, n cazul virusului sarcomului lui Rous, care are n mod obinuit un efect transformant oncogen asupra celulei gazd, sau putut obine mutante induse prin factori mutageni (ultraviolete, hidroxilamin), lipsite de efect oncogen. Genomurile se pot integra i rmne uneori mai mult vreme n celule fr a se multiplica. Ele pot fi ns recuperate din celule prin suprainfecia cu un virus helper. Un asemenea fenomen s-a constatat n celulele de hamster, transformate tumoral de virusul sarcomului murin. Acesta nu se multiplic n celulele respective. Recuperarea lui este posibil cu ajutorul unui helper leucemogen, rezultnd un hibrid care are genomul virusului sarcomului murin i nveliul virusului leucomogen. 80

Virusologie general Virusurile defective nu trebuie confundate cu alte componente virale produse n celul n cursul ciclului de multiplicare al unor virusuri. Astfel, n celulele infectate cu virusul plyomei se pot gsi capside i chiar fragmente de ADN celular nvelite n protein viral, numite i pseudovirioni. Asociaia viral de tip helper-virus defectiv, cu toat diversitatea aspectelor ei, trebuie considerat ca o relaie cooperant de potenare reciproc interviral.

7.4.INFECIA CU VIRUSURI INTERFERENTE Infecia cu un virus poate fi n unele cazuri defavorabil infeciei simultane sau suprainfeciei cu un al doilea virus. Acest tip de relaie ntre dou virusuri se numete interferen. ntruct mecanismul interferenei este ntr-o mai mare msur dependent de reaciile celulare determinate de prezena virusului dect de activitatea autoreplicant i codificant a acestuia, descrierea detaliat a fenomeului de interferen viral se va face n cadrul capitolelor care trateaz efectele virusurilor asupra celulei gazd.

7.5.

INFECIA CU ACIZI NUCLEICI PURIFICAI (TRANSFECIA)

Infecia cu acizi nucleici virali purificai, numit i transfecie, este posibil numai n condiii experimentale. Primul experiment de transfecie a fost realizat cu ARN al virusului mozaicului tutunului de Gierer i Schramm (1956) concomitent cu Fraenkel Conrat, dup ce n prealabil Hershey i Chase demonstreaz c la bacteriofagi acidul nucleic ptrunde singur n celul, capsida rmnnd n afara celulei gazd. Semnificaia teoretic a acestor descoperiri pentru dezvoltarea ulterioar a virusologiei a fost decisiv, demonstrndu-se astfel rolul esenial al acidului nucleic n infecia viral. Transfecia are urmtoarele caracteristici, comparativ cu infecia produs de particulele virale intacte: 81

Virusologie general

eficien mult mai sczut; spectrul de patogenitate mult mai larg. Explicaia lrgirii spectrului de patogenitate n cazul infeciei experimentale cu acizi nucleici purificai rezid n suprimarea complementaritilor stereochimice obligatorii i determinante pentru citotropismul virusurilor, relevndu-se capacitatea acizilor nucleici de a substitui informaia genetic a unui sortiment mult mai larg de celule, dect cel pe care virusurile se pot fixa i apoi ptrunde n condiii naturale. Transfecia nu este posibil n cazul tuturor virusurilor, ntruct la unele virusuri acizii nucleici i pstreaz infeciozitatea dup purificare, n timp ce la altele i-o pierd. n tabelul nr. 4 sunt prezentate principalele grupe de virusuri al cror genom este constituit din acizi nucleici infecioi dup purificare. n unele cazuri s-au putut reproduce cu acizi nucleici purificai i unele modificri celulare caracteristice anumitor virusuri, ca de exemplu transformarea tumoral la virusul polyomei. Imposibilitatea reproducerii transfeciei la mai multe grupe de virusuri (pox, herpes, adeno etc.) poate fi atribuit mai multor cauze, cum ar fi: dificultile tehnice n purificarea acizilor nucleici; prezena n genomul viral a unei proteine (transcriptaze) legate de ADN care intervine sau ajut transcrierea informaiei genetice; existena unui anumit situs intracelular care determin o topografie precis, corelat cu capacitatea de substituire a genomului celular cu cel viral. Lrgirea spectrului de infeciozitate al acizilor nucleici consecutiv purificrii, deschide noi perspective biologiei i medicinei viitorului datorit creerii posibilitilor de vindecare a unor leziuni metabolice i genetice prin materialul genetic necesar remedierii cu ajutorul ADN al unui fag transductor. 82

Virusologie general Tabelul nr. 5 Virusuri cu acizi nucleici infecioi. (dup Fenner i col., 1974) sau Condiiile de realizare a transfeciei

Familia genul

Virusuri ADN:
Parvovirus Papovaviridea

Rezultate

Adenovirus

pozitive n celule preinfectate cu un adenovirus helper Rezultate pozitive certe; scindarea n forma monocatenar nu reduce infeciozitatea Rezultate pozitive s-au obinut cu unele adenovirusuri simiene i umane

Virusuri ARN:
Picornaviridae

Reproducerea sigur; att forma

monocatenar ct i cea dublu catenar replicativ sunt infecioase Togaviridae Reproducerea sigur; infeciozitatea ARN este un caracter distructiv Virusul pentru familie dehidrogenaze Reproducerea sigur i lactice

8. MULTIPLICAREA BACTERIOFAGILOR
Bacteriofagii se multiplic n condiii naturale numai n celula bacterian. n condiii experimentale au putut fi infectate cu bacteriofagi i celule animale, fr a avea ns ca efect multiplicarea acestora. Ciclul de multiplicare, care se finalizeaz cu eliberarea unei cantiti mari de noi virioni, este denumit curent i ciclul litic sau productiv. Aceste apelative subliniaz particularitile specifice multiplicrii bacteriofagilor: litic deoarece 83

Virusologie general eliberarea virionilor se face totdeauna prin liza celulelor gazd i productiv deoarece pe de o parte ciclul se finalizeaz cu o producie mare de noi particule virale, iar pe de alt parte pentru a face o demarcare net fa de ciclul reductiv sau lizogenizant, n care virusul se integreaz n genomul celulei gazd i nu are loc formarea de noi virioni. Alternanele ntre multiplicare i integrare sau altfel spus, trecerile de la ciclul litic productiv la cel lizogenizant reductiv i invers, sunt mult mai frecvente la bacteriofagi, comparativ cu virusurile zoopatogene. Etapele multilicrii bacteriofagilor i dinamica ciclului de multiplicare (fig. 23) sunt n general aceleai ca la virusurile zoopatogene, cu unele deosebiri caracteristice fiecrei etape:
Fig. 23 Fazele multiplicrii bacteriofagului:
1.fixarea pe celula bacterian; 2.inocularea genomului fagic; 3.replicarea genomului i sinteza de ARN mesageri; 4.sinteza componentelor viitorilor virioni: precapete, cozi, plci terminale, proteine fibrilare; 5.morfogeneza:ncapsidarea genomurilor i ataarea cozilor cu aparatele de fixare; 6.liza (dup A. Steven [i M. Wurtz, 1977)

Adsorbia sau fixarea virionilor pe celul are un grad mult mai ridicat de specificitate, comparativ cu virusurile zoopatogene. Responsabilitatea fixrii o poart complementaritile stereochimice dintre receptorii din peretele celular al bacteriei i compuii chimici din aparatulde fixare situat n vrful cozii bacteriofagului. Un rol important n mecanismul fixrii l au proteinele fibrilare i croetele plcii terminale. Bacteriofagii cu cap i coad se fixeaz totdeauna cu vrful cozii pe celula bacterian. Bacteriofagii fr coad se fixeaz totdeauna fie printr-o 84

Virusologie general capsomer mare fie, n cazul absenei acesteia, printr-un unghi (col) al capsidei icozaedrale a capului. Lizozimul fagic contribuie de asemenea ntr-o msur nsemnat la chimiotactismul dintre bacterie i fag. Pe o celul bacterian se pot adsorbii un numr imens de fagi, ceea ce confer bacteriei aspectul unei perinie pline cu ace cu gmlie mare. Timpul de adsorbie este foarte scurt -cteva secunde de la nsmnarea fagului. Complementaritile fag-bacterie responsabile pentru adsorbia fagului au i principalul rol n determinismul spectrului de activitate al fiecrui fag, al specificitii de specie sau lizotip al acestuia. Un grup aparte de bacteriofagi l constituie fagii sexuai numnii aa fiindc nu se adsorb dect pe pilii sexuali. Receptorii complementari compuilor chimici din capsida fagului responsabili de adsorbie se gsesc numai pe aceti pili i nu i pe alte structuri de pe suprafaa bacteriei. Fagii sexuali sunt mici i lipsii de coad. Ei pot fi utilizai pentru identificarea populaiilor bacteriene F+ (fig. 24).

Fig. 24 Adsorbia fagilor sexuali.

Infectarea celulei sensibile are loc printr-un mecanism diferit de al virusurilor zoopatogene. n timp ce virusurile zoopatogene ptrund n ntregime n celul, la bacteriofagi capsida rmne nafara celulei, n care este introdus numai genomul. La fagii cu cap i coad introducerea genomului este asemntoare cu o injecie n care seringa este reprezentat de capul fagului, iar acul de coad. Acidul nucleic se deplaseaz din interiorul capsidei capului prin lumenul delimitat de canalul cozii. La fagii a cror coad este contractil, contracia cozii pare a avea principalul rol n mecanismul injectrii n celula 85

Virusologie general bacterian a genomului viral. n ipoteza c smburele (cilindrul axial) constituient al lumenului cozii ar avea o stare de agregare solid sau de gel, acesta se fluidific n timpul injectrii genomului. Peretele celular al bacteriei poate fi traversat de genomul viral, datorit permeabilitii sale prealabile prin aciunea lizozimului fagic. Sub aspectul activitii enzimatice, lizozimul fagic este o glucidaz, asemntoare cu lizozimul din diferitele umori ale organismului animal. Efectul oricrui lizozim, indiferent de originea sa, se exercit asupra mucopeptidei (mureinei) din peretele celular. Dup injectarea genomului, capsida fagului poate rmne un timp nedefinit ataat de peretele celular, fr s aibe o influen asupra complexului fag-bacterie. La examenul electronooptic, capsidele goale ale capetelor bacteriofagilor din care au fost expulzate genomurile, devin transparente fa de electroni, ceea ce a inspirat desemnarea lor sub numele de fagi fantom. Multiplicarea intracelular se desfoar asemntor cu a virusurilor zoopatogene. Majoritatea bacteriofagilor au genomul constituit din ADN bicatenar, care se replic semiconservativ. n timpul replicrii se sintetizeaz sub aciunea unei ARN polimeraze ADN dependente un ARNm precoce viral, care transmite la nivelul ribozomilor celulei bacteriene informaia genetic pentru sinteza proteinelor precoce. Celelalte faze biosinteza i morfogeneza au de asemenea similitudini cu fazele omoloage descrise la virusurile zoopatogene ADN. Bacteriofagii cu cap i coad, avnd o structur complex, se caracterizeaz i printr-o organizare mai complex a genomului, n cadrul cruia se disting grupe de gene care intervin n codificarea sintezei diferitelor componente ale virionului i mai ales n morfogeneza acestuia. Etapele morfogenezei, codificate fiecare de gene diferite i catalizate de unele procese enzimatice, se succed astfel: a) asamblarea precapetelor, respectiv a capsidelor icozaedrale ale acestora; b) introducerea genomurilor virale n interiorul precapetelor; proteine cu rol regulator determin lungimea exact a lanurilor de ADN ce ptrund n capsid; punctul de acces al genomului este acel col 86

Virusologie general (unghi) al icozaedrului, unde mai trziu se va ataa coada; asamblarea capsidelor icozaedrale ale cozilor; asamblarea aparatelor de fixare din plcile terminale prevzute cu croete i fibrile proteice; ataarea aparatelor de fixare de extremitile cozilor; ataarea cozilor de capate;

c) d) e) f)

Cu toat complexitatea morfogenezei (unele din etapele menionate se desfoar aparoape concomitent), ntregul proces nu dureaz mai mult de cteva minute. n fig. 25 sunt reprezentate schematic etapele asamblrii colifagului (unul din cei mai compleci fagi), cu precizarea genelor care codific fiecare etap.

Fig. 25 Morfogeneza fagului (dup A. Steven i M. Wurtz, 1977). Etapele relativ bine demonstrate sunt marcate cu sgei groase, iar cele ipotetice cu sgei subiri.

Eliberarea virionilor din celula bacterian se produce prin liza acesteia. Sub aciunea informaiei genetice virale apar n celul enzime, numite endolizine sau virolizine, care lizeaz nveliul celulei bacteriene, virionii maturi ieind n mediul extracelular.

87

Virusologie general

9. INTEGRAREA VIRUSURILOR
Ptrunderea unui virus n celul nu este totdeauna urmat de multiplicarea acestuia prin mecanismele descrise anterior. n unele situaii, genomul viral se ataeaz de genomul celulei, unde rmne i se comport n continuare ca component propriu al acestuia. Acest fenomen se numete integrare, iar genomul viral integrat mai este denumit i provirus. Fenomenul a fost observat prima dat de Bordet i Ciuc (1921) la un colifag. Mecanismele integrrii au fost mai nti studiate la bacteriofagi, mai trziu i la virusurile zoopatogene.

9.1.

INTEGRAREA BACTERIOFAGILOR (LIZOGENIA)

La bacteriofagi integrarea este un fenomen frecvent, iar evoluia intracelular a fagului n acest mod este denumit curent ciclu reductiv sau lizogenizant reductiv fiindc virusul nu se multiplic i uneori nici nu i manifest evident prezena; lizogenizant fiindc populaiile bacteriene care conin virus integrat sunt capabile s genereze liza la alte populaii neinfectate cu fag. Procesul de integrare a fagului ntro populaie bacterian se mai numete lizogenizare, iar culturile sau tulpinile care conin fag integrat mai sunt denumite i lizogene. Culturile lizogene, n condiii obinuite, nu sunt niciodat lizate de fag. Capacitatea lor de a genera liz la populaiile sensibile nu se datorete capacitii litice a fagului integrat, ci faptului c ntr-o proporie foarte redus, n celulele unei populaii lizogene (10-2 10-7) fagul se multiplic desfurnd un ciclu litic. Aceast proporie foarte redus de virioni nu este evideniabil n cultura lizogen, dar devine imediat evident ntr-o cultur bacterian sensibil, pe care o infecteaz producnd liza ei masiv. Modelele de integrare ale genomului fagic (fig. 24) n cromozomul celulei bacteriene sunt: 88

Virusologie general agarea (modelul lui Jacob i Wollman) acidul nucleic viral este agat sub forma unui crlig de lanul de ADN al cromozomului bacterian, ntr-o anumit zon a acestuia; inseria (modelul lui Campbell) genomul viral se ncorporeaz n continuarea cromozomului bacterian, dup ce acesta se rupe ntr-un anumit punct iar extremitile rmase libere se cupleaz cu extremitile genomului viral. Cele dou modele sunt ns discutate, neexistnd o certitudine absolut cu privire la mecanismul integrrii. Ca orice fenomen de recombinare genetic, integrarea este ns condiionat de unele similitudini de structur la nivelul nucleotidelor dintre genomul viral i cromozomul celular, n zona de cuplare a celor dou materiale genetice. Condiiile lizogenizrii sunt reprezentate de anumite nsuiri ale bacteriofagului, ale tulpinii bacteriene, dup cum i de anumii factori de mediu. Astfel, fagii care se integreaz au n general un grad redus de virulen, fiind numii fagi temperai. Tulpinile bacteriene, pentru a se lizogeniza, trebuie s fie iniial lizosensibile. Factorul de mediu care influeneaz cel mai frecvent integrarea este temperatura: temperatura de 200C, este de regul favorabil integrarii, n timp ce temperaturile mai ridicate (400C) sunt favorabile ciclului litic. Proprietile tulpinilor bacteriene lizogene sunt: Imunitatea fa de suprainfecia cu fagul omolog. Mecanismul imunitii antifag a tulpinilor lizogene rezid n incapacitatea unui nou genom viral omolog de a mai substitui informaia gentic a bacteriei i de a declana astfel sinteza de material viral. n cazul unei suprainfecii, bacteriofagul se fixeaz pe celula bacterian, i introduce genomul n celul, dar ajuns aici nu este capabil s codifice. Se pare c fagul integrat ar induce sinteza unei substane specifice, asemntoare cu represorii, iar aceasta blocheaz reaciile prin care genomul fagic nou venit ar putea iniia ciclul productiv. Conversia Este fenomenul prin care populaia bacterian care conine fagul integrat dobndete 89

Virusologie general noi caractere. Acestea se pot referi la structura antigenic, toxinogeneza, sinteza de noi enzime etc. Un exemplu clasic de conversie l reprezint toxinogeneza la specia Corynebacterium diphteriae; numai tulpinile lizogene sunt toxigene, n timp ce tulpinile care nu conin fag integrat sunt netoxigene. Proprietile noi, rezultate prin conversie, sunt determinate de informaia gentic adus n celul prin integrarea genomului fagic, care se comport n ntreaga perioad ct cultura rmne lizogen, ca material propriu. Reversibilitatea ciclului reductiv se refer la posibilitatea relurii ciclului productiv, a desprinderii genomului fagic din cromozomul bacterian i a reactivrii lui (fig. 26). Trecerea profagului n starea de fag vegetativ are loc, aa cum s-a amintit anterior, i n mod spontan cu o frecven foarte mic. n general, ns, acest fenomen se obine sub aciunea unor ageni inductori. Acetia pot fi de natur fizic - radiaiile ultraviolete i X sau chimic - peroxizi, iperita azotat etc. n urma induciei prin asemenea factori, fiecare bacterie lizogen indus elibereaz n jur de 100 virioni. Relaia fag integrat bacterie este o relaie de tip simbiotic caracterizat printr-un perfect echilibru ntre cei doi parteneri.

90

Virusologie general

Fig. 26 Relaia reversibil dintre ciclul productiv i cel reductiv al bacteriofagilor.

Agenii inductori menionai care au de obicei i un efect mutagen acioneaz n cazul de fa prin suprimarea sintezei substanei tip represor responsabil pentru inhibarea funcionalitii genetice a genomului viral. Trecerea de la ciclu reductiv la cel productiv implic uneori i alte fenomene cum sunt: - virionii nou formai pot ndeplini rolul de fagi transductori n cazul cnd n urma desprinderii genomului fagic din cromozomul bacterian acesta antreneaz cu sine i unele gene din cromozomul bacterian, limitrofe de zona unde fusese integrat. - sinteza unor virioni defectivi n locul celor normali. Defectivitatea la bacteriofagi se poate manifesta n incapacitatea de sintez a unor componente ale virionului sau de inducere a unui ciclu productiv finalizat prin eliberarea de virioni neinfectani. Din aceast categorie fac parte diferii factori litici capabili s induc liza populaiilor bacteriene sensibile neurmat de eliberarea n etapa final de noi fagi. Aceti factori litici se aseamn n mare msur cu bacteriocinele.

91

Virusologie general 9.2. INTEGRAREA VIRUSURILOR ZOOPATOGENE

La virusurile zoopatogene integrarea genomurilor virale este de regul urmat de transformarea tumoral a celulelor. Procesul integrrii are unele particulariti n funcie de tipul de acid nucleic constituient al genomului viral. Integrarea virusurilor ADN studiat mai ales la grupele Papovaviridae, Adenoviridae Herpesviridae se realizeaz printrun proces de hibridare a genomului viral cu genomul celular ntr-un anumit segment al unui cromozom n care exist similitudini n compoziia de baze azotate a celor doi acizi nucleici. Integrarea virusurilor ARN este mai complicat n sensul c genomul viral nu se integreaz el nsui. Materialul genetic integrat este n acest caz ADN previral sintetizat n celul dup informaia transcris invers de pe ARN viral. n ambele cazuri integrarea ADN viral sau previral produce efectul transformant oncogen ca rezultat al informaiei genetice cuprinse n segmentul de ADN integrat. Transformarea oncogen poate fi nsoit sau nu de producie de virus. EFectul exclusiv oncogen cu absena virogeniei presupune o evoluie a genomului viral asemntoare cu profagul. Efectul oncogen i virogen este rezultatul codificrii de ctre ADN-ul viral integrat a dou informaii genetice diferite: pe de o parte, cea responsabil de transformarea malign a celulei, iar pe de alt parte cea responsabil de sinteza de noi virioni. Proporia informaiei genetice responsabil de virogenie este ns mult mai redus comparativ cu cea dintr-un genom viral, n care se desfoar un ciclu productiv normal de multiplicare a unui virus. n cazul unor adenovirusuri s-a demonstrat c genomul viral se exprim numai n proporie de numai 5-10%. O dovad a acestei stri de lucruri este i masa molecular mare de ARN din celulele transformate (peste 30 S n nucleu i 28-30 S n citoplasm), ceea ce presupune sinteza de ARN policistronic de tip viral-celular ( dup Hannoun, 1976). Studiul virusurilor murine, din grupa leucemie- sarcom, a permis elaborarea unor modele teoretice privind efectul 92

Virusologie general oncogen al virusurilor i evnetualitatea unor arii mult mai largi de rspndire a tumorilor cu etiologie viral: Modelul lui Huebner virogen i oncogen. Bazat pe o vast anchet serologic i biochimic, Huebner susine uibcvitatea genomurilor virusului oncogen murin, de tip C ntrun numr mare de celule normale, somatice i germinale, la psri i oareci i poate chiar la toate vertebratele. Aceste genomuri integrate sunt transmise vertical de la prini la descendeni. Manifestarea lor fenotipic prin t ransformarea malign a celulelor n care se gsesc, este inhibat de sisteme represoare activabile sub aciunea a numeroi factori de mediu (raza X, substane chimice cancerigene, etc.). Modelele lui Temin- provirus i protovirus. - Provirusul reprezint un model analog profagului, celula infectat cu un virus de tip C devenind purttoare a informaiei virale. Acest model nu explic suficient modul n care celula primete un nou virus n cazul infeciei orizontale i nici relaiile care se stabilesc ntre genele virale vechi i noi. Protovirusul reprezint un virus potenial, a crei apariie este posibil n oricare celul normal, prin transcrierea invers de pe ARN celular. Protovirusurile sunt deci nite fragmente de ADN de neoformaie a cror sintez este ntmpltoare i care sunt capabile s se integreze n genomurile celulelor n care s-au format sau n celule vecine. Temin atribuie acestui mecanism un rol deosebit de important n fenomenele de amplificare genomic i de difereniere. El admite totodat c n acest mod poate fi generat orice informaie genetic necesar virogeniei i oncogeniei virusului de tip C.

Exceptnd integrarea genomurilor virale n celulele care obinuit sunt gazde ale multiplicrii virusului respectiv, n condiii experimentale fenomenul s-a dovedit a fi posibil i n celule nereceptive, situate uneori pe o treapt filogenetic foarte ndeprtat de a speciei receptive. Astfel, genomuri fagice au putut fi integrate n celule animale; i n acest caz, 93

Virusologie general efectul informaiei genetice virale este de cele mai multe ori tot de transformare tumoral. ADN proviral al unor virusuri oncogene aviare poate persista n celul, transmindu-se vertical fr a se integra n genomul celular. Persistena lui se datoreaz unei replicri coordonate cu cea a genomului celular. Acest mod de compertare a fost numit integrare funcional.

10.

CARACTERIZAREA TIPURILOR DE COMPLEX VIRUS CELUL

Din toate posibilitile de interaciune virus celul prezentate anterior rezult urmtoarele tipuri de stri sau complexe virus celul. Starea independent (complex virus-celul independent), care corespunde situaiei n care virusul se multiplic rezultnd n final noi virioni (ciclul productiv). Termenul de independent nu reflect ntocmai realitatea ntruct nsi existena virusurilor este indisolubil legat de dependena acestora de celula vie. El corespunde realitii numai n sensul c pentru un timp limitat virusul poate fi conservat i vehiculat nafara celulei, pn n momentul cnd reuete s infecteze o nou celul sensibil. Starea independent poate fi la rndul ei de dou feluri, n funcie de procesele pe care le sufer celula gazd: - starea independent cu efect citocid, caracterizat prin moartea celulei, consecutiv producerii virusului; n acest caz biosinteza de material viral duce la blocarea total a sintezei proteinelor celulare; - starea independent echilibrat, corespunznd infeciei endosimbiotice n care procesele de biosintez a materialului viral nu deranjeaz sintezele compuilor celulari proprii iar producia i eliberarea noilor 94

Virusologie general virioni este compatibil cu continuarea vieii celulei gazde. Stare dependent (complexul dependent) care corespunde formei de virus integrat (ciclul reductiv). n funcie de starea virusului din celul, celulele se mpart n dou categorii: - celule permisive, n care se desfoar ciclul productiv finalizat prin eliberarea de noi virioni; - celule nepermisive n care nu are loc producia de noi virioni (ciclul reductiv).

10.1. MODIFICRILE MORFOLOGICE ALE CELULELOR INFECTATE CU VIRUSURI

Multiplicarea virusurilor ntr-o celul provoac o gam larg de modificri morfologice i fiziologice ale acesteia. 10.1.1.Efectul citopatic Termenul de efect citopatic este utilizat n virusologie cu dou semnificaii semantice: n sens larg, efectul citopatic este orice modificare morfologic a unei celule, datorit prezenei unui virus; ntr-un sens mai ngust, care vizeaz n mod concret practica cultivrii virusurilor n culturi celulare, prin efect citopatic se nelege dezorganizarea i modificarea morfologic pe care o sufer celulele dintr-o cultur, consecutiv multiplicrii virusului. Efectul citopatic este cel mai uor de observat n cazul cultivrii virusurilor prin tehnica Dulbecco a monostratului (monolayer). n cazul relaiei virus-celul cu efect citopatic, se constat de obicei pierderea continuitii monostratului, tendina celulelor de a devia de la forma lor normal spre forme sferice, tergerea treptat a desenului celular, celulele 95

Virusologie general transformndu-se treptat n mase amorfe. n unele cazuri, efectul citopatic este caracteristic pentru un virus ntr-o cultur cu un anumit tip de celule i poate constitui un criteriu pentru identificarea virusului respectiv. Potenarea efectului citopatic const n apariia mai rapid i mai accentuat a efectului citopatic n cazul unor asociaii virale. De exemplu, virusul pseudopestei aviare produce efect citopatic n 5-6 zile, virusul pestei porcine nu produce efect citopatic. Dac o cultur celular cu virusul pestei porcine se suprainfecteaz cu virusul pseudopestei aviare, efectul citopatic apare mult mai rapid. EFECTUL LITIC Este o form particular a efectului citopatic caracterizat prin liza celulelor. Zonele de liz produse de virusurile zoopatogene n monostraturile de celule animale, ct i cele produse de bacteriofagi n culturi bacteriene pe medii solide poart numele de plaje. Ele nu au form circular regulat, iar diametrul lor este n funcie de virus i de tipul de celule. n condiiile cultivrii unei cantiti mari de virus cu efect litic, plajele sunt foarte dese, se ntreptrund, rezultnd o liz confluent. La virusurile animale productoare de plaje n monostraturi i la bacteriofagi se pot face aprecieri cantitative asupra numrului de virioni dintr-un material ce conine virus pe baza determinrii unitilor formatoare de plaje, notate prescutrat PFU (plaque forming units). ntructva, analog cu numrtoarea coloniilor bacteriene, determinarea cantitativ a virionilor pe baza numrului de PFU se bazeaz pe premiza c o plaje este generat de prezena iniial a unui singur virion. 10.1.2.Fuziunea celular Unele paramyxovirusuri produc n culturile celulare n care se cultiv sinciii rezultate din fuzionarea celulelor care conin virusul. Fuziunea poate avea loc ntre celule de acelai fel i n unele cazuri i ntre celule din esuturi cu origini diferite (heterocarioni). Astfel, n urma cultivrii virusului parainfluenei, s-a putut determina apariia unor sinciii 96

Virusologie general hibride rezultate din fuzionarea de celule umane cu celule de oarece. Fuziunea celular poate fi provocat i cu virusuri iradiate (ex. virusul Sendai). Mecanismul fuziunii pare a se realiza sub aciunea concomitent a neuraminidazei aceluiai virion fixat la nivelul zonei de contact ntre dou celule alturate, crendu-se astfel o punte celular ntre ele. Fuziunea celular sub aciunea virusurilor este util experimentelor de biologie celular, oferind posibilitatea unor studii de hibridare intracelular n cele mai diverse combinaii. 10.1.3.Hemaglutinarea i hemadsorbia Unele virusuri, mai ales cele nvelite de pericapsid, au capacitatea de a aglutina globulele roii ale diferitelor specii animale. Acest fenomen a fost observat prima oar de HIRST (1940) i i poart numele. Aciunea hemaglutinant este condiionat de prezena pe suprafaa virionului a unor protuberane cu aspect de spiculi sau antene numite hemaglutinine. Hemaglutinarea este consecina adsorbiei virionilor pe suprafaa hematiilor sau a eritorcitelor la nivelul creia produc modificri de natur electrostatic. Proprietile hemaglutinante constituie un criteriu de evideniere a virusurilor. Hemaglutinarea nu este un fenomen specific, neexistnd deosebiri nici de aspect al reaciei i nici de mecanism ntre diferitele virusuri hemaglutinante. Reacia poate fi utilizat n schimb pentru determinarea cantitativ a concentraiei de virioni dintr-un material prin executarea ei n diluii seriate n tuburi sau plci cu godeuri. Concentraia de virus se deduce dup diluia maxim la care are loc hemaglutinarea. Hemaglutinarea poate fi utilizat ca reacie indicatoare n cadrul unei reacii serologice cu grad nalt de specificitate i anume inhibarea hemaglutinrii. Aceasta se bazeaz pe pierderea capacitii hemaglutinante a virusului dup neutralizarea acestuia cu anticorpi specifici. Anticorpii fixai pe virioni mpiedic adsorbia acestora pe suprafaa globulelor roii. 97

Virusologie general Hemadsorbia este o variant a hemaglutinrii aplicat n cazul cultivrii virusurilor n monostraturi celulare. Ea se bazeaz pe aglutinarea i adsorbia hematiilor sau eritrocitelor pe suprafaa celulelor din monostrat, n care s-a multiplicat virusul. 10.1.4.Efectul incluziogen n celulele n care se multiplic virusul, apar frecvent structuri corpusculare de dimensiuni variabile, ntre 1-30 microni diametru, cu afiniti tinctoriale, n majoritatea cazurilor, oxifile, numite incluzii virale. Ca leziune microscopic, incluziile au fost descrise cu mult timp nainte de descoperirea virusurilor. Ele poart numele diferiilor autori care le-au observat i descris pentru prima oar. De exemplu, incluziile Babe-Negri, n turbare; Bollinger, n variola aviar; Guarnieri, n infeciile cu virusul vaccinal, etc. Mult mai trziu s-a stabilit relaia constant ntre prezena acestor leziuni celulare microscopice i infecia viral. Sediul incluziilor este n general n citoplasm, n cazul virusurilor ARN i n nucleu, n cazul virusurilor ADN. Poxvirusurile constituie o excepie, n sensul localizrii n citoplasm a incluziilor Bollinger. Incluziile la diferi te virusuri pot avea o natur i un mecanism de formare diferit: la adenovirusuri, incluziile sunt constituite din material viral n diferite faze ale procesului de biosintez sau morfogenez; la reovirusuri, sunt modificri la nivelul unor organite celulare provocate de multiplicare a virusului; la herpesvirusuri, ele reprezint locul unde a fost sintetizat materialul viral, nlocuit ulterior cu o substan oxifil. Incluziile virale pot fi puse n eviden n amprente sau seciuni histologice prin diferite metode, dintre care cele mai importante sunt: 98

Virusologie general colorarea prin metode speciale (Sellers pentru amprente, Mann, Lentz pentru seciuni etc.); imunoflorescena cu seruri specifice fa de virusul respectiv, marcate cu substane fluorocrome; autoradiografia cu izotopi radioactivi.
Fig. 27 Diferite tipuri de incluzii virale. A-incluzii intracitoplasmatice Guarnieri produse de virusul vaccinal; B-incluzii intranucleare produse de virusul Herpes simplex; C-incluzii intracitoplasmatice perinucleare caracteristice reovirusurilor; D-incluzii intranucleare caracteristice adenovirusurilor; E-incluzii BabeNegri produse de virusul turbrii; Fincluzii intranucleare i intracitoplasmatice produse de virusul pojarului; L i F-efectul incluziogen este nsoit de formarea de sinciii consecutiv fuziunii celulare (dup FENNER, 1974)

Punerea n eviden a incluziilor reprezint o metod frecvent utilizat n practica diagnosticului ntr-un numr mare de viroze. Specificitatea lor pentru un anumit virus este determinat de prezena lor n esutul pentru care virusul manifest histotropism i de poziia lor n celul -n citoplasm sau nucleu. La noi n ar, la nivelul laboratoarelor veterinare judeene, evidenierea incluziilor Babe-Negri n neuronii piramidali din cornul lui Ammon, constituie o metod curent pentru diagnosticul turbrii.

10.1.5 Producerea de aberaii cromozomiale Diferite virusuri din grupele paramyxo, adeno, papova etc., sunt capabile s produc, n celulele n care se multiplic, aberaii cromozomiale. Acestea pot fi: fragmentri de 99

Virusologie general cromozomi ajungnd uneori la pulverizrii, translocri (mutarea unor segmente de ADN de pe un cromozom pe altul) i fuzionri de cromozomi. Consecinele cele mai grave ale acestor efecte ale virusurilor se manifest la femelele gestante, cu urmri pentru viitorii produi. Asemenea situaii fac ca ntreruperea sarcinii s fie permis la femei care n cursul graviditii au suferit de unele viroze. 10.1.6.Efectul transformant (oncogen) Din aproximativ 600 virusuri identificate pn n prezent la animale, la aproximativ (150) s-a demonstrat un potenial oncogen. Transformarea tumoral este caracteristic pentru unele virusuri la specia natural receptiv n condiiile infeciei naturale. Prezena tumorilor este, n astfel de cazuri, i principala manifestare anatomoclinic din virozele respective. Aa este cazul leucozelor aviare, a leucozei taurinelor, al sarcomului lui Rous la psri, a poliomei oarecelui etc. O alt categorie de virusuri nu produce transformarea tumoral la speciile natural receptive, ci numai n condiiile experimentale pe animale de laborator; aa este cazul virusului SV 40 (Simian vacuolizant 40) care, n condiii naturale se gsete n stare latent n rinichiul de maimu, unde nu produce nici o infecie aparent, dar inoculat la hamster are proprieti oncogene. 10.1.7.Mecanismele oncogenezei virale Pot fi diferite. n majoritatea cazurilor, transformarea malign este consecina integrrii virusului. Genomul viral integrat constituie un supliment de material genetic capabil s determine o transformare profund a particularitilor normale ale celulei, ducnd n final la proliferarea ei anarhic. n mecanismul oncogenezei virale virusurile acioneaz diferit, n funcie de tipul de acid nucleic din care este constituit genomul: Virusuri ADN (grupele adeno, papova, herpes) induc transformarea prin integrarea genomului viral n genomul 100

Virusologie general celular. Experimental, hibridnd ADN din celule tumorale cu ARN marcat, sintetizat in vitro pe o matrice de ADN viral, cu ajutorul polimerazei de E. coli, s-a observat apariia n genomul celulei a unui numr mare de genomuri virale integrate, care a variat ntre 14 i 97, n funcie de tipul de adenovirus. Alte metode experimentale au contrazis aceste rezultate, demonstrnd integrarea unui singur genom. Prin experimentele de izolare i funcionare a cromozomilor celulelor transformate tumoral s-a constat c nu exist deosebiri ntre diferitele clase de cromozomi privind coninutul lor n ADN viral. La adenovirusuri s-a putut stabili o corelaie ntre capacitatea de transformare oncogen i coninutul n baze azotate al genomului, n sensul c proporia de G + C din genomul viral se apropie de cea din celula gazd. Virusurile ARN pentru care virusul sarcomului lui Rous a servit ca principal model, induc transformarea tumoral cu o frecven n general mai mare dect virusurile ADN. Mecanismul efectului lor transformant este corelat cu integrarea ADN previral de neoformaie rezultat din transcrierea invers. Informaia transformant a genomului virusului sarcomului lui Rous (VSR) este localizat ntr-o subunitate a genomului, reprezentnd aproximativ un sfert din molecula de ARN viral. Datele privind responsabilitatea genetic a diferitelor subuniti ale genomului n determinismul efectului oncogen, sunt reduse. Unele fraciuni au fost identificate ca responsabile pentru modificrile din membrana celular, altele pentru forma celulei. Prin studiul mutantelor transmisibile s-a stabilit c exprimarea fenotipic a efectului transformant depinde de cel puin dou proteine. La VSR au fost descrise att virusuri normale, ct i mutante defective. Efectul transformant pare a fi mai puternic la mutantele defective. Relaia ntre oncogenie i virogenie poate fi de dou feluri: virogenia este nsoit de virogenie; oncogenia nu este nsoit de virogenie, genomul viral manifestndu-i evident prezena.

101

Virusologie general Virogenia este n unele cazuri inductibil, prin activarea (inducia) genomului viral, fie prin metodele clasice deja descrise pentru reactivarea virusurilor integrate, fie prin suprainfecii cu alte virusuri, care de regul ndeplinesc rolul de helper. Mecanismul prin care virusurile supraadugate deprim genomurile integrate, nu este ns prea bine cunoscut. innd seama de cele dou tipuri de relaii ntre virogenie i oncogenie menionate, demonstrarea etiologiei virale a unor tumori maligne, consecutiv fenomenului de integrare, se poate realiza prin: recuperarea virusului transformant; decelarea diferitelor secvene de ARNm hibrid, care conin att secvene copiate dup genomul viral, ct i dup genomul celular. n cazul integrrii complete, prezena genomului nu poate fi totdeauna demonstrat. Imposibilitatea evidenierii, n toate cazurile, a prezenei genomului integrat, a determinat pe unii oncologi s emit ipoteza etiologie virale a tumorilor maligne.

10.1.7.1.Modificrile celulelor transformate Reproducerea in vitro a efectului oncogen a permis un studiu aprofundat al nsuirilor celulelor transformate care, comparativ cu celulele normale neinfectate cu virusuri oncogene, au urmtoarele caracteristici: modificri de form, evideniate mai ales la celulele de form alungit (fibroblaste); celulele tumorale au n general o tendin spre formele sferice; pierderea nevoii de fixare (ancorare) pe suporturi solide; liniile celulare tumorale se multiplic foarte bine n geluri semisolide de agar sau agaroz; dispariia inhibiiei de contact n dezvoltarea monostraturilor, celulele devenind capabile de a se multiplica supraetajat, rezultnd tumori miniaturale,chiar n culturi celulare; modificri de structur ale membranei se refer mai ales la o cretere cantitativ a glicoproteinelor n compoziia crora intr fucoza; accelerarea ritmului de multiplicare; 102

Virusologie general modificrile de cariotip, de obicei mai accentuate la virusurile ARN, sunt urmtoarele: heteroploidie mergnd pn la hipotetraploidie, apariia cromozomilor inelari etc.; modificrile metabolismului celular care constau n: o producie crescut de acid hialuronic, pierderea capacitii de sintez a unor compui chimici specifici (ex.: producia de pigment din irisul psrilor infectate cu virusul sarcomului lui Rous), incapacitatea sintezei de molecule mari glicolipidice (sintezele se opresc la nivelul precursorilor sialosilglicolipidici);

Fig. 28 Schema amplasrii genelor virale n genomul unei celule transformate. (dup Hannoun, 1976)

103

Virusologie general apariia de antigeni specifici, cum este cazul antigenului T, prezent la toate celulele transformate; VS 40 determin apariia a trei antigeni noi: T, TSTA i S; aglutinarea sub aciunea lectinelor de tipul concanavalinei A; aceasta reacioneaz cu Nacetilglucozamina prezent pe suprafaa membranelor celulare, mascat la celulele normale i descoperit la cele transformate.

10.1.7.2.Reversia (detransformarea) Efectului transformant este posibil n anumite condiii. Astfel, n cazul virusului sarcomului lui Rous, efectul transformant dispare la temperaturi superioare celei de 360C. n celulele transformate de VS 40 s-a constatat apariia de clone cu un mod de dezvoltare n culturi identic cu al celulelor normale. Mecanismul ipotetic al unui astfel de fenomen ar consta n participarea a dou categorii de gene virale n producerea transformrii tumorale: unele determin fixarea, altele meninerea efectului transformant; absena genelor de meninere determin astfel detransformarea (dup HANNOUN, 1976). 10.1.8.Efectul oncolitic Unele virusuri, consecutiv multiplicrii lor n celulele tumorale, sunt capabile s opreasc evoluia sau chiar s provoace regresul i liza tumorii. Efectul oncolitic s-ar explica prin necesitatea, pentru biosinteza viral a unor compui celulari, indispensabili n acelai timp i pentru dezvoltarea celulelor tumorale. Degradarea celulelor tumorale le face accesibile fagocitozei, ceea ce creaz premizele ramolismentului tumorii. Utilizarea virusurilor oncolitice n terapia anticanceroas nu s-a putut realiza datorit faptului c aceste virusuri, pe lng efectul lor antitumoral, au i o aciune nociv pentru sistemul nervos.

104

Virusologie general 10.1.9.Interferena viral Organismele sau celulele infectate cu un virus manifest uneori rezisten fa de o infecie simultan sau succesiv cu un alt virus. Acest fenomen poart numele de interferen. Cele dou virusuri interferente sunt: virusul inductor, care realizeaz primul infecia i provoac interferena; virusul revelator, care se suprapune primului i permite aprecierea efectului interferent al acestuia. Din punct de vedere al naturii celor dou virusuri, interferena poate fi omoloag, heteroloag i autointerferen. n funcie de efectul virusului inductor asupra virusului revelator, interferena poate fi stimulatoare i inhibitoare. Cel de al doile tip este mai frecvent i mai bine studiat. Primele observaii de interferen viral dateaz din 1935 i se datoresc lui Magrassi i apoi Hoskins, care au constatat c o variant neencefalitogen de virus Herpes simplex induce interferena fa de varietatea encefalitogen a aceluiai virus. Observaii asemntoare au fost fcute ulterior de Findlay i Mac Callum (1937). ntre dou mutante, una neurotrop i alta viscerotrop de virus al febrei galbene; Andrews (1942) ntre dou variante, una virulent i alta nevirulent de virus al influenei. Interferena poate fi indus de un virus viu, ct i de un virus inactivat. Timpul de inducie al interferenei este foarte scurt, de 1-2 minute n cazul interferenei omologe i mai lung, de 4-5 ore, n cazul interferenei heterologe. Durata aciunii interferente depinde i ea de natura celor dou virusuri, fiind mai scurt (26-60 ore) n cazul interferenei omologe i mult mai lung n cazul celei heterologe. Gradul de rezisten al virusurilor revelatoare poate fi diferit fa de efectul inhibitor al aceluiai virus inductor. 10.1.9.1.Mecanismele interferenei Interferena ntre dou virusuri recunoate mai multe feluri de mecanisme: 105

Virusologie general Excluderea mutual n faza de adsorbie: virusul inductor mpiedic accesul n celul al virusului revelator. Acest mecanism a fost demonstrat n unele cazuri de interferen omoloag ntre myxovirusuri, la care neuraminidaza din pericapsida virusului inductor distruge receptorii necesari fixrii virusului revelator de pe membrana celulei gazd. Rezistena celulelor fa de virusul revelator dispare ns dup 26-60 ore, timp n care receptorii se regenereaz. Fenomenul lui Von Magnus descris n 1951, explic autointerferena n cazul virusului influenei. Von Magnus a constatat c n oule embrionate inoculate cu cantiti mari de virus al influenei se sintetizeaz, alturi de virionii complei, i particule defective autointerferena cu virusul complet. Explicaia fenomenului pare s rezide n suprasolicitarea dispozitivelor de biosintez ale celulei care nu mai reuete s traduc integral informaia genetic a virusului. Blocarea replicrii intracelulare, n cazul virusurilor interferente, heterologe, a fost constatat de Lvine (1958) ntre virusul de Newcastle i virusul WEE i de Chany (1959) ntre virusul parainfluenei III i virusul poliomielitei. n aceste cazuri, ca i n cazul fenomenului lui Von Magnus, ptrunderea n celul a virusului revelator nu este mpiedicat, dar virusul inductor inhib replicarea i biosinteza intracelular a acestuia. Interferena prin interferoni este mecanismul cel mai bine studiat i mai rspndit, avnd la baz sinteza de ctre celula infectat sub aciunea virusului inductor a unor substane numite interferoni. 10.1.9.2.Interferonii Existena unor substane cu efect antiviral, prezente n celulele infectate, a fost admis ipotetic naintea identificrii interferonului, nc din 1944, de Garde, n celulele nervoase ale oarecilor infectai cu virusul encefalomielitei; de Lennette i Koprowski (1946) n culturile celulare infectate cu virusul febrei galbene; de Magamo i Kojimo (1954) n celulele infectate cu virusul vaccinal. 106

Virusologie general Isaacs i Lindemann (1957) identific, fizico-chimic i biologic, substana mediatoare a interferenei i o numesc interferon. Compoziia chimic: interferonii sunt glicoproteine macromoleculare, constituite din uniti proteice cuplate cu lanuri polizaharidice, cu grupri terminale de acizi sialici. Masa molecular depinde de celula productoare de interferon, variind ntre 25.000-160.000 daltoni. Uneori, chiar acelai tip de celule, ca de exemplu globulele albe umane, pot sintetiza interferoni cu mase moleculare foarte diferite. Carter explic variaiile de mas molecular pornind de la premiza unei uniti monomere de 12.000 daltoni, din polimeraza creia rezult diferii interferoni. Coppey presupune c variaiile de mas molecular se datoresc asocierii ntmpltoare de molecule active cu molecule inactive. Interferonii grei sunt antigenic distinci de cei uori. Sensibilitatea interferonilor fa de factorii de mediu este asemntoare cu cea a celorlalte proteine. Ei sunt distrui prin nclzire la 600C timp de aproximativ o or i rezist la variaii de pH ntre limite foarte largi, de la 2 la 10. Extracia din celul i purificarea interferonilor este foarte dificil. Inducia sintezei de interferon este condiionat de ptrunderea virusului n celul, indiferent dac acesta este viu sau inactivat, fapt care atest inexistena unei corelaii ntre funcia infecioas i cea inductoare a virusului. Responsabilitatea inductoare direct pentru sinteza interferonilor revine acizilor virali i mai ales acizilor ribonucleici, ARN bicatenar al reovirusurilor i formele replicative de ARN, nou formate dup replicarea genomurilor virale din ARN monocatenar, au o aciune inductoare deosebit de eficace. Acizii ribonucleici monocatenari sunt n general slab inductori. Ulterior s-a demonstrat posibilitatea induciei de interferon i cu acizi ribonucleici de origine neviral cum sunt cei extrai din celule heterologe. Field i col. (1967) au reuit s induc interferoni cu acizii nucleici de sintez, cum sunt complexul bicatenar de homocopolimere de acid riboinozinic i acid ribocitidilic. 107

Virusologie general Inducia de interferoni sau de inhibitori cu aciune analoag poate fi i rezultatul aciunii unui sortiment variat de substane chimice (fitohemaglutinina, statolonul, helenina, ciclohexamida, polimerii anionici sintetici, kanamicina, endotoxinele bacteriene), microorganisme (rickettsiile, micoplasmele, alte bacterii) i parazii (toxoplasmele). Mecanismul de aciune al interferonilor se realizeaz prin fixarea acestora pe receptorii prezeni la suprafaa celulelor. Interferonii se adsorb pe receptori indiferent de temperatur, dar acioneaz numai la 370C. Interferonii nu acioneaz asupre virusurilor direct, ci printr-un mecanism cooperant ntre receptori i un sistem activator, care declaneaz sinteza unei proteine antivirale. Acest mecanism de activare nu implic ptrunderea interferonilor n interiorul celulei, fiind suficient numai contactul lor cu receptorii. n celulele tratate cu interferon, proteina antiviral apare n aproximativ 4 ore. Aciunea acestei proteine se exercit asupra sintezei proteinelor virale precoce, mai ales asupra celor enzimatice, respectiv ARN polimeraze, n cazul virusurilor ARN i a ADN polimerazelor, n cazul virusurilor ADN. Interferonii sunt lipsii de specificitate fa de un anumit virus, avnd n general specificitate de celul i de specie animal, dar i aceasta este relativ. Astfel, s-a constatat c n unele cazuri interferonii produi de celulele unei specii, pot fi activi n celulele altei specii: de exemplu, interferonii elaborai de globulele albe umane pot avea efect i asupra celulelor de maimu; cei produi de fibroblaste embrionare umane acioneaz cu un efect chiar mai mare n celulele heterologe de rinichi de iepure etc. n ultimul timp s-a constatat c efectele inhibitorii ale interferonilor asupra sintezei de proteine nu se rezum numai la cele virale, extinzndu-se i asupra proteinelor celulare, fapt care determin la rndul lui diminuarea capacitii de multiplicare a celulelor, n special a celor canceroase. Fournier i col. (1968) au pus n eviden un factor tisular antagonist fa de interferon, extras din esutul corioamniotic uman. Unele substane ca actinomicina D, poteneaz aciunea antiviral a interferonilor, mrind-o de 10-100 ori. n acelai timp, ea este capabil s anihileze complet efectul 108

Virusologie general antiinterferon al factorului tisular menionat. Potenarea aciunii interferonului pare a fi corelat cu blocarea sintezei unei proteine, care la rndul ei controleaz sinteza proteinei antivirale. Aciunea interferonului in vitro este diferit ca durat i intensitate, de cea in vivo. n timp ce n organism efectul antiviral este trector, n culturi celulare este durabil, transmindu-se la 5-6 generaii consecutive. Determinismul i reglarea genetic a produciei i aciunii interferonilor. Sinteza de interferoni este determinat genetic de secvene ale genomului celular. Pe baza experienelor executate de Cassingena i col. (1970), citai de Hannoun (1976), aceste secvene sunt concentrate ntr-un mic cromozom subtelocentric. Acesta codific sinteza interferonului, neavnd ns nici o responsabilitate n determinismul rezistenei antivirale, ceea ce constituie un argument n plus pentru independena sintezei interferonului fa de infecia viral. Informaia genetic responsabil de sinteza proteinei antivirale este situat pe un cromozom diferit de cel care codific sinteza interferonului. Reglarea sintezei interferonului pare a fi realizat prin 4 mecanisme (dup Hannoun, 1976): aciunea unor represori (blocker, depresor), care intervin ca mecanisme de control precoce i tardiv; retroinhibiia proteinei antivirale asupra genei responsabile de sinteza interferonului; aciunea direct a preteinei antivirale asupra acidului nucleic inductor; aciunea cooperant a celor trei mecanisme mai sus citate. Posibiliti de utilizare a interferonilor n profilaxia i terapia infeciilor virale. Speranele puse iniial n aplicabilitatea interferonilor, ca mijloc profilactic i terapeutic antiviral, au fost doar parial satisfcute, principalele cauze fiind: dificultile n extracie i purificare, specificitatea de specie i celul, eliminarea rapid prin excreii, fragilitatea la aciunea factorilor de mediu n special la enzime.

109

Virusologie general Utilizrile cu o oarecare perspectiv sunt orientate n dou direcii: Stimularea produciei de interferon endogen prin inocularea de virusuri inactivate ori temperate, a acizilor nucleici de sintez (acid ribocitidilic) sau a altor substane inductoare (statolon). Vaccinarea cu virusuri vii i atenuate, mai ales n cazul unor virusuri ARN, ca de exemplu virusul pestei porcine, produce, pe lng imunizarea activ i inducia de interferon, efectul profilactic al vaccinului aplicndu-se prin cooperarea ambelor mecanisme antivirale. Administrarea de interferon pe cale intravenoas, extras pe ct posibil din celule provenind de la specia omoloag, metod care a dat rezultate bune mai ales n cazul unor virusuri oncogene.

11. COMPORTAREA VIRUSURILOR FA DE FACTORII DE MEDIU

Sensibilitatea virusurilor fa de factorii de mediu, se aseamn n general cu cea a bacteriilor, cu unele deosebiri determinate de particularitile morfochimice ale acestui grup de ageni.

11.1. COMPORTAREA VIRUSURILOR FA DE FACTORII FIZICI

Temperatura Inactivarea virusurilor are loc n majoritatea cazurilor la 560C n 30 minute, iar la 1000C n cteva secunde. Mecanismul inactivrii const n denaturarea proteinei virale. Temperaturile joase au un efect conservant. Pentru pstrarea virusurilor n colecii se utilizeaz refrigerarea ntre 400C i 1960C. Virusurile din unele grupe (poxvirusurile, enterovirusurile) se conserv mai bine la temperatura camerei. 110

Virusologie general Temperatura optim pentru multiplicarea virusurilor coincide, n marea majoritate a cazurilor, cu temperatura optim pentru celula gazd. n unele cazuri se constat ns un grad de independen relativ ntre limitele de temperatur favorabile multiplicrii i desfurrii celorlalte procese virale ale celulei i limitele de temperatur favorabile multiplicrii i producerii unor efecte specifice asupra celulei gazd ale virusului. Astfel, la bacteriofagii psihrofili, limitele inferioare de temperatur pentru multiplicarea celulelor gazd nu sunt totdeauna defavorabile multiplicrii virusului, n timp ce limitele superioare pot fi favorabile multiplicrii celulelor, fr a mai permite multiplicarea virusului. O comportare asemntoare se constat la unele mutante termosensibile ale unor virusuri zoopatogene capabile de a se multiplica pn la o limit de temperatur situat sub cea favorabil pentru celula gazd. Astfel, mutantele termosensibile ale virusului sarcomului lui Rous se multiplic i induc transformarea tumoral la 360, pierznd ambele proprieti la 40,50C. Aceast temperatur este nepermisiv i restrictiv fa de mutantele respective.n cazul altor mutante ale aceluiai virus, temperatura poate s nu afecteze multiplicare, inhibnd ns efectul transformant. Reacia febril a organismului n cursul infeciei, trebuie considerat ca un mijloc eficace de aprare antiviral, nivelurile de temperatur realizate prin hipertermie fiind de cele mai multe ori defavorabile multiplicrii virusului, fr a fi nocive celulei gazd. Variaiile de pH Limitele de pH n care majoritatea virusurilor i menin viabilitatea se situeaz ntre 5-9. Unele virusuri sunt ns capabile s reziste la valori sczute ale pH-ului n zona acid. Astfel, rhinovirusurile sunt distruse abia la pH 5,3 iar enterovirusurile i pstreaz infeciozitatea i la pH 2,2, (dup Buxton i Fraser, 1977). Rezistena la pH 3 constituie, pentru unele virusuri, un criteriu taxonomic. Energia radiant Radiaiile cele mai active fa de virusuri sunt ultravioletele. n doze mari, ele au un efect virulicid att asupra acizilor nucleici, ct i asupra proteinelor virale. Lumina ultraviolet cea mai activ este cea cu lungimea de und cea 111

Virusologie general mai mic, ntre 2600 i 2350 . De aceea, pentru sterilizarea camerelor de lucru se prefer lmpile de ultraviolete cu vapori de mercur, care emit radiaii de 2537 . Efectul ultravioletelor asupra virusurilor incluse n materiale celulare, este diminuat, particulele virale fiind protejate de substana organic care le acoper. Iradierea cu ultraviolete n doze mici a populaiilor celulare care conin virusuri sub form integrat, determin reversia virusului integrat i trecerea lui la forma de virus vegetativ cu reluarea ciclului productiv. Acest efect este utilizat curent n practica de laborator pentru recuperarea bacteriofagilor din culturile lizogene.

11.2. COMPORTAREA VIRUSURILOR FA DE FACTORII CHIMICI 11.2.1.Substanele antiseptice, dezinfectante, conservante Hidroxidul de sodiu este unul din cei mai activi dezinfectani cu efect antiviral, mai ales n stare firbinte. Agenii oxidani cu aciune antiseptic (permanganatul de potasiu, peroxidul de hidrogen) i dezinfectant (varul cloros, cloramina), pot fi utilizai n acelai scop cu bune rezultate. Amestecul de 10% oxid de etilen i bioxid de carbon reprezint un dezinfectant gazos foarte eficace. Formaldehida este activ, dar aciunea ei antiviral este mai lent. Ea se utilizeaz ns curent la prepararea vaccinurilor inactivate, concentraiile reduse nealternd proprietile antigenice i imunogene ale virusurilor. Efectul antiviral al formaldehidei este mai puternic asupra ARN monocatenar i ceva mai redus fa de acizii dublu catenari. Fenolul i crezolii au o slab aciune antiviral. Solvenii lipidelor Sensibilitatea la eter i cloroform reprezint un important criteriu taxonomic pentru virusuri. Aciunea antiviral a eterului i cloroformului, dup cum i cea a fosfolipazei i a deoxicolatului de sodiu, se exercit asupra 112

Virusologie general complexului glicoproteic din pericapsid. Virusurile nude sunt de obicei insensibile la aciunea solvenilor lipidelor. Glicerina Spre deosebire de bacterii, la care glicerina acioneaz constant antibacterian fa de celulele vegetative i conservant fa de spor, virusurile au o comportare difereniat. Pentru marea majoritate a virusurilor i mai ales a poxvirusurilor, glicerina este un bun conservant, o soluie salin de glicerin 50% asigurnd supravieuirea virionilor pe timp de mai multe luni i chiar ani. Un numr redus de virusuri, ca de exemplu virusul pestei bovine, sunt sensibile la glicerin.

11.3. SUBSTANE CHIMIOTERAPEUTICE I ANTIBIOTICE Substanele de uz curent pentru terapia antibacterian (sulfamidele, penicilina, streptomicina, tetraciclinele etc.) sunt inactive fa de virusuri. Ele se utilizeaz de obicei pentru aseptizarea materialelor virale i intr n compoziia mediilor pentru culturile celulare n scopul evitrii contaminrii bacteriene. Cu toate c nici o substan chimioterapeutic sau antibiotic n-a intrat pn n prezent n practica larg a terapiei antivirale, s-au studiat n ultimii ani numeroase substane care acioneaz prin diferite mecanisme asupra ciclului de multiplicare al virusurilor, dintre care unele cu perspective de introducere n terapie. Acestea se pot clasifica, pe baza mecanismului lor de aciune, n trei categorii mai importante: inhibitori ai ptrunderii virusurilor n celul, inhibitori ai replicrii sau biosintezei i inductori de interferoni.

11.4

INHIBITORI AI PTRUNDERII VIRUSULUI N CELUL

Izochinolinele acioneaz prin efectul lor antineuraminidazic. Ele sunt active mai ales supra myxovirusurilor, la care viropexia este facilitat de neuraminidaza din compoziia pericapsidei. Se pare c efectul antineuraminidazic, evident in vitro, nu se coreleaz cu 113

Virusologie general aciunea antiviral in vivo, unde izochinolinele intervin prin blocarea decapsidrii. Amantadina este o amin triciclic, care acioneaz prin blocare sau interferare a procesului de ptrundere a virusului n celul, la nivelul membranei celulare. Kato i Eggers, citai de Fenner, 1974, susin c amantadina blocheaz decapsidarea. Ea este activ mai ales fa de orthomyxovirusuri, majoritatea paramyxovirusurilor fiind rezistente. Experienele pe animale de laborator i pe voluntari umani au dovedit un oarecare efect in vivo fa de virusul gripal, prin reducerea sensibil a procentului de morbiditate. Ciclooctilamina hidrocloric are un efect similar amantadinei i este activ fa de un numr mare de virusuri ARN.

11.5. INHIBITORI AI REPLICRII SAU BIOSINTEZEI Substanele din aceast categorie pot aciona la rndul lor prin mai multe feluri de mecanisme, printre care cele mai importante sunt: aciunea antagonic fa de bazele azotate i inhibarea transcrierii informaiei genetice sau a traducerii ei n sinteza proteinelor. A. Substane cu aciune antagonic fa de bazele azotate Derivaii halogenai ai deoxiuridinei din care fac parte iododeoxiuridina (IUDR), fluorina, bromina etc. Aceste substane intervin n momentul replicrii ADN, fie mpiedicnd transcrierea timinei pe lanul complementar, fie substituinduse acesteia n catena nou transcris. Un alt mod de aciune poate fi inhibarea aciunii ARN polimerazei ADN dependente, ceea ce mpiedic sinteza ARNm viral. Efectul antiviral al acestor substane s-a confirmat n prezent experimental n cazul unor herpesvirusuri. B. Substanele inhibitoare ale transcrierii sau traducerii informaiei genetice Chimioterapice 114

Virusologie general Tiosemicarbazonele, utilizate i ca tuberculostatice, par s acioneze n timpul traducerii informaiei n faza de biosintez a proteinelor tardive, mpiedicnd constituirea poliribozomilor. n culturi celulare, efectul antiviral s-a manifestat numai fa de orthomyxovirusuri. Guanidina acioneaz numai in vitro prin inhibarea codificrii ARN monocatenar la picornavirusuri. Hidroxibenzilbenzimidazolul are un mod de aciune identic cu al guanidinei. Ambele substane sunt total lipsite de toxicitate pentru celula animal, dar perspectivele introducerii lor n terapia antiviral sunt limitate de uurina cu care virusurile dau nuane rezistente. Arabinofuranozilnucleozizii activi mai ales fa de herpesvirusuri, dar i fa de alte virusuri cu efect transformant oncogen, au un mecanism insuficient lmurit. Perspectiva introducerii lor n practic este relativ redus, datorit faptului c au i un efect citotoxic. Antibiotice Rifampicina este o hidrolizin a rifampicinei B extras din Streptomyces mediterranei, care blocheaz aciunea ARN polimerazei ADN dependente. n prezent, se experimenteaz posibilitatea utilizrii acestui antibiotic n tratamentul leucemiei i al altor boli tumorale cu etiologie virotic. Aranotina extras din ciuperca Arachniotus aureus, acioneaz asupra picornavirusurilor, inhibnd sinteza ARN polimerazei ARN dependente. ARN polimerazele ADN dependente sunt insensibile la aranotin. LL S88 este un metabolit extras din tulpini de Aspergillus terreus i are o aciune asemntoare cu aranotina, inhibnd multiplicarea n culturi celulare a unor picorna i myxovirusuri.

11.6. INDUCTORI DE INTERFERONI Substanele inductoare de interferoni pot substitui virusurile care ndeplinesc acelai rol. Inducia sintezei de 115

Virusologie general interferon, cu ajutorul unor substane chimice, chiar la organismele sau celulele infectate, s-a dovedit mult mai rentabil dect extracia i purificarea interferonilor din celule. Substanele cele mai eficace ca inductori de interferoni sunt polinucleotidele sintetice (analogi ai acizilor nucleici), diferite substane chimice de sintez i unele antibiotice. a) Polinucleotide sintetice Acidul poliriboinozinic i acidul poliribocitidilic (poli I poli C). Cele mai sensibile fa de interferoni indui de analogii sintetici ai acizilor nucleici sunt virusurile ARN. La om s-au obinut rezultatele bune prin administrarea pe cale intranazal n cazul unor rhinovirusuri. n condiii experimentale, pe cale intramuscular, s-a obinut protecia iepurilor fa de virusul rabic. n cazul unor virusuri cu efect transformant, administrarea de poli I poli C a adus la inhibarea procesului oncogen. Pe lng aciunea lor antiviral, aceste substane s-au dovedit a avea i un efect supresiv fa de dezvoltarea unor tumori cu etiologie neviral, dup cum i unele proprieti antibacteriene. b) Compuii chimici de sintez Tilorona este un inductor de interferon cu mas molecular redus, administrabil oral. La oareci, n condiii experimentale, confer protecie fa de mai multe virusuri, dar are un grad de toxicitate fa de sistemul hematopoetic i cel reticuloendotelial. in vitro este inactiv. c) Antibiotice Statolonul este un extract din Penicillium stoloniferum. Ciuperca s-a dovedit ns a fi infectat cu un mycofag al crui genom este constituit din ARN dublu catenar, iar acestuia i se atribuie principala responsabilitate n inducia interferonului. Spectrul de activitate al statolonului este foarte larg, cuprinznd virusuri ARN, ct i ADN. Helenina este extras din Penicillium funiculosum i are un efect asemntor cu statolonul. Imposibilitatea reproducerii transfeciei la mai multe grupe de virusuri (pox, herpes, adeno etc.) poate fi atribuit mai multor cauze, cum ar fi: dificultile tehnice n purificarea acizilor nucleici; 116

Virusologie general prezena n genomul viral a unei proteine (transcriptaze) legate de ADN care intervine sau ajut transcrierea informaiei genetice; existena unui anumit situs intracelular care determin o topografie precis, corelat cu capacitatea de substituire a genomului celular cu cel viral. Lrgirea spectrului de infeciozitate al acizilor nucleici consecutiv purificrii, deschide noi perspective biologiei i medicinei viitorului datorit crerii posibilitilor de vindecare a unor leziuni metabolice i genetice prin materialul genetic necesar remedierii cu ajutorul ADN al unui fag transductor.

117

Virusologie general

VIRUSOLOGIE

SPECIAL

12. CLASIFICAREA VIRUSURILOR

12.1. PRINCIPII DE CLASIFICARE Problema clasificrii virusurilor este nc nerezolvat; ea formeaz obiectul de studiu al unui comitet internaional, care n 1976 a fcut o prezentare a stadiului la care s-a ajuns cu privire la stabilirea criteriilor taxonomice i alegerea unei nomenclaturi adecvate. Principalele concluzii formulate sunt: codul de clasificare i nomeclatur folosite la bacterii nu poate fi aplicat la virusuri; adoptarea unei nomenclaturi internaionale latine este absolut necesar; nume de persoane nu vor fi admise n nomenclatura taxonilor; numere, litere sau combinaii de numere cu litere se vor accepta n componena taxonilor; specia tip este studiat complet din punct de vedere genetic i grupeaz virusurile cu caractere identice; genul cuprinde specia tip specii cu un anumit numr de caractere comune, iar n compoziia apelativului fiecrui gen intr sufixul virus (ex.: genul Aphtovirus); familia grupeaz genuri cu caractere comune, iar denumirea ei se termin totdeauna cu sufixul viridae (ex.: familia Picornaviridae). Unele familii grupeaz subfamilii cu caractere comune, iar denumirea lor se termin totdeauna cu sufixul virinae (ex. familia Paramyxoviridae, subfamilia Pneumovirinae i Rhabdovirinae).

118

Virusologie general

12.2.CRITERIILE TAXONOMICE APLICATE LA VIRUSURI Familiile (grupele), subfamiliile, genurile i speciile tip au la baz urmtoarele criterii taxonomice: felul acidului nucleic constituient al genomului viral: ADN sau ARN; structura acidului nucleic: monocatenar sau dublu catenar; masa molecular a acidului nucleic i proporia exprimat procentual a masei acidului nucleic raportat la masa total a virionului; proporia G + C% raportat la masa genomului; forma i sturctura nveliului particulei virale: - prezena sau absena nveliului pericapsidal; - tipul de simetrie al capsidei: helical, icozaedral, binal, complex; - numrul capsomerelor; gazda receptiv i modul de transmitere al virusului. La aceste criterii de baz, n definirea taxonilor la virusuri, se mai pot aduga i altele, utile mai ales n practica curent a diagnosticului virusologic i anume: proprieti antigenice; proprietile hemaglutinante sau hemadsorbante; caracterul leziunilor din infecia natural: cele produse la animalele de laborator infectate experimental i la embrioni de gin; aspectele citologice n culturi celulare; sensibilitatea fa de unii factori fzici i chimici: temperatura de 600C, pH 5, eter, cloroform. Pe baza criteriilor de mai sus, virusurile au fost ncadrate n phylum Vira mprit n dou subphyla pe baza naturii chimice a genomului viral: - Dezoxivira, - Ribovira.

119

Virusologie general n funcie de simetria capsidei - helicoidal sau cubic, virusurile se grupeaz n clase: - dezoxihelica i dezoxicubica, - ribohelica i ribocubica. n continuare clasificarea actual se limiteaz la definirea familiilor, subfamiliilor i genurilor virale, speciilor tip i speciilor cu caractere comune la acestea. S-a stabilit un consens privind acceptarea unei nomenclaturi latine cu terminaiile: - viridae pentru familii; - virinae pentru subfamilii; - virus pentru gen; Exemplu: - familia Coronaviridae genul Coronavirus sau - familia Parvoviridae genul Prvovirus. Conform criteriilor de clasificare taxonomic enumerate anterior i n funcie de gazd, virusurile au fost clasificate n 5 grupe:
virusuri parazite pentru nevertebrate; virusuri parazite pentru bacterii; virusuri parazite pentru alge, fungi i protozoare; virusuri parazite pentru vertebrate; virusuri parazite pentru plante. n tabelul nr.5 sunt prezentate, virusurile parazite pentru animale i entitile morbide pe care le determin. Acest grup (tabelul 5) cuprinde 19 familii, fiecare la rndul ei incluznd genuri de virusuri care produc mbolnviri la animale: - Poxviridae; - Herpesviridae; - Hepadnaviridae; - Adenoviridae; - Papovaviridae; - Coronaviridae; - Parvoviridae; - Paramyxoviridae; - Bunyaviridae; - Toroviridae; - Orthomyxoviridae; - Togaviridae; - Flavaviridae; - Retroviridae; - Rhabdoviridae - Reoviridae; - Birnaviridae; - Picornaviridae; - Caliciviridae.

120

Virusologie general
Circoviridae

121

Virusologie general

122

Virusologie general

123

Virusologie general

124

Virusologie general

125

Virusologie general
Tabelul 6

Clasificarea virusurilor patogene pentru animale i entitile morbide determinate (Murphy i colab., 1993)
.Reactualizat cu Raportul al VII-lea, Raport al Comitetului Internaional de Taxonomie viral din 1999 (7) Nr Familia Subcrt familia 0 1 2 1 PICORNAV IRIDE Genul 3 Enterovirus Specia 4 Virusul poliomielitei Enterovirusu ri porcine 111 Enterovirusu ri bovine 1-2 Entitatea produs 5 Specia tip a genului -Boala TeshaenTalfan -Boala veziculoas -Enterita cu enterovirus -Vagino-cervicita cataral -Orhiveziculita seminal la taur -Encefalomielita infecioas aviar -Hepatita viral a bobocilor de ra -Nefrita aviar -Hepatita viral a curcilor Specia tip a genului Encefalomiocardita porcilor Specia tip a genului

Enterovirusu ri aviare

Cardio -virus

Rhinovirus

Virusul encefalomiocarditei Cardiovirus porcin Rinovirusul uman A

Aphtovirus

Rhinovirusuri -Rinita viral a bovine 1-2 vieilor Rhinovirusuri -Rinita viral ecvine 1-3 ecvin Virusul febrei Specia tip a genului aftoase Aphtovirusur Febra aftoas i O, A, C, SAT 13, Asia-1

126

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul

Specia Virusul hepatitei A

Entitatea produs Specia tip a genului

Hepato virus Parecho virus

Parechoviru- Specia tip a genului sul uman

Nr crt 0 2

Familia 1 CALICIVIRIDAE

Subfamilia 2

Genul 3 Calicivirus Lagovirus

Specia 4 Calicivirus felin Virusul bolii hemoragice a iepurilor

Entitatea produs 5 -Caliciviroza felin Specia tip a genului Boala hemoragic viral a iepurelui Specia tip a genului Exantemul veziculos porcin Specia tip genului Encefalomielita ecvin american -Encefalo-mielita ecvin de Venezuela Specia tip a genului (Rubeola la om) a

Vesivirus

Virusul exantemului veziculos al porcului

3 TOGAVIRIDEA Alphavirus

Virusul Sindbis
V.encefalomielitei 1-3 V.encefalomielitei de Venezuela Virusul Rubella

Rubivirus

127

Virusologie general

Nr crt 4.

Familia

Subfamilia

Genul

FLAVIVIRIDAE

Entitatea produs Virusul febrei Specia tip galbene genului V.encefalitei -Encefalita B japoneze B.japonez V.encefalomielitei oilor V.meningoencefalitei curcilor

Specia

Flavivirus

-Encefalo-mielita infecioas ovin -Meningoencefalita curcilor

Pestivi -rus

V.1 al diareei Specia tip a virale bovine genului -Diareea viral bovin - boala mucoaselor V. pestei porcine V. Border -Pesta porcin clasic -Boala Border

V.Wesselsbron -Boala Wesselsbron Hepaci -virus Virusul hepatitei C V. febrei vii Rift Specia tip a genului Specia tip a genului -Boala vii Rift Noirovirus Virusul Dugbe V.bolii Nairobi Virusul Bunyamwer a V. Akabane Specia tip a genului Boala de Nairobi Specia tip a genului Boala Akabane la bovine

5.

BUNYAVIRIDAE

Phlebo -virus

Bunya -virus

128

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul

Specia

Entitatea produs Specia tip a genului Febra hemoragic cu tulburri renale i respiratorii la roztoare

Virusul Hantaan Hantavirus

Nr crt 0 6.

Familia 1 REOVIRIDAE

Subfamilia 2

Genul

Specia

3 4 Orthore Viru ovirus sul pneumo(Reoviru enteritei s bovine

Entitatea produs 5 Specia tip a genului Pneumo-enterita cu reovirus la bovine

Orbivi -rus

Reovirusuri aviare 1-9 V. bluetongue 1-24

-Artrita viral aviar Specia tip a genului -Boala limbii albastre -Pesta ecvin african -Boala Chuzan la viei (Japonia) -Boala hemoragic epizootic a cprioarei slbatice

V. pestei ecvine V. Chuzan

V. bolii hemoragice

129

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul Rotavi -rus

Entitatea produs Rotavirus Specia tip a A,(V.enteritei genului vieilor) -Enterita cu rotavirus la viei -Enterita cu Rotavirusuril rotavirus la purcei e B,C,D,E. -Enterita cu rotavirus la alte specii animale -Infecii cu rotavirus la psri

Specia

Aquareovirus Coltivi rus

Aquareovirusul A

Specia tip a genului

Virusul febrei de Colorado

Specia tip a genului

Nr crt 0

Familia 1

Subfamilia 2

Genul 3

Specia 4

Entitatea produs 5

130

Virusologie general

Nr crt 7.

Familia

Subfamilia

Genul Corona virus

Specia V. bronitei infecioase aviare

CORONA VIRIDAE

Entitatea produs Specia tip a genului -Bronita infecioas aviar

V.gastroenter i-tei Gastroenterita transmisibile transmisibil porcin V. diareei epizootice -Diareea epizootic V. encefaloporcin mielitei hemaglutinant -Corono-viroza e porcine respiratorie porcin -Encefalomielita Coronavirus cu virus bovin hemaglutinant -Enterita coronaviral bovin -Enterita coronaviral ecvin -Enterita coronaviral a curcilor -Enterita coronaviral canin -Peritonita infecioas felin Specia tip a genului -Enterita cu virus Breda la viei

Coronavirus ecvin

Coronavirusu l curcanilor

Coronavirus canin Coronavirus felin

Torovirus

Torovirusul ecvin V. Breda

131

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul Delta virus

Specia Virusul hepatitei delta

Entitatea produs Specia tip a genului

Nr crt 0 8

Familia 1 PARAMY XOVIRIDAE

SubGenul familia 2 3 Paramyx Paramy ovirinae xoviru s

Specia 4 V. parainfluene i 1, 2, 3,4

Morbilivirus

Rubul avirus

Respiroviru s Viru- Virusul suri Hendra nenca Virusul Nipah draten gen

Virusul Measles (v.pojarului) -V. pestei bovine -V. pestei rumegtoarelo r mici -V. distemper canin Virus ul Mumps(v. oreionului)) Paramyxovirus aviar 1-9 Virusul Sendai murin

Entitatea produs 5 -Parainfluena bovin -Parainfluena ovin -Parainfluena canin -Parainfluena ecvin Specia tip a genului -Pojarul copiilor -Pesta bovin -Pesta rumegtoarelor mici -Boala lui Carr Specia tip a genului -Oreionul la om -Pseudopesta aviar Specia tip a genului(Pneumonie) Boala cailor cu virusul Hendra Sindromul respi-rator i nervos a porcului cu v. Nipah

132

Virusologie general

Nr crt

Familia

SubGenul familia Pneumo Pneum virinae ovirus

Specia V. sinciial respirator uman V. sinciial respirator bovin

Entitatea produs Specia tip a genului

Metapneum ovirus 9 RHABDO VIRIDE Veziculovirus

Lyssavirus Epheme roviru s

-Bronhopneumonia bovinelor cu virus sinciial V. rinotrahe- Specia tip a itei curcilor genului -Rinotraheitei curcilor V. stomatitei Specia tip a veziculoase genului -Stomatita veziculoas V. rabiei Specia tip a genului -Turbarea V. febrei efemere bovine Specia tip a genului -Febra efemer bovin

V. necrozei infecioase a Noviesuturilor rhabd ovirus hematopoietic e 1 0 ORTHOM YXOVIRIDAE Influena virus A.

Influena virus B Influena virus C Thogot ovirus

Specia tip a genului. - v.necrozei infecioase a esutului hematopoietic la salmonide V. influenei Specia tip a A. genului -Influena ecvin -Influena suin -Influenele aviare V.influenei B Specia tip a genului V.influenei C Specia tip a genului Specia tip a genului

V.Thogoto

133

Virusologie general

Nr crt 1 1

Familia BIRNAVI RIDAE

Subfamilia

Genul Avibirnavirus

Specia V. bursitei infecioase

1 2

RETROVIRIDAE

Aquabi rnaviru s Alpharetrov i-rus Betare trovir us Gamma retrovirus

V.pancreatit ei necrotice V. leucozelor aviare

Entitatea produs Specia tip a genului -Bursita infecioas aviar Specia tip a genului Specia tip a genului -Leucozele aviare Specia tip a genului

V. tumorii mamare a oarecelui V.leucemiei murine

Speicia tip a genului

Nr crt 0

Familia 1

Subfamilia 2

Genul 3 Deltare troviru s

Specia 4 V. leucozei bovine

Entitatea produs 5 Specia tip a genului Leucoza enzootic bovin Specia tip a genului Specia tip a genului

Epsilonretroviru s Spuma virus

V.sarcomului cutanat Spumavirusu l cimpazeilor

134

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul Lentiv irus

Specia Virusul imunodeficie nei umane V. anemiei infecioase V. MaediVisna V.arteriteiencefalitei

Entitatea produs Specia tip a genului -Anemia infecioas ecvin -Pneumonia progresiv ovin -Complexul arteritencefalit caprin -Imunodeficiena bovin -Imunodeficiena felin Specia tip a genului -Parvoviroza canin -Parvoviroza porcin -Panleucopenia felin -Parvoviroza canin -Enterita viral a nurcilor -Boala de Aleutin -Boala lui Derzsy

V. imunodeficienei

1 3

PARVO VIRIDAE

Parvovirina e

Parvovirus

-Virusul parvovirozei canine Minute virus canine -Virusul parvovirozei porcine -V. panleucopeniei feline -V. parvovirozei canine -V. enteritei nurcilor -V. bolii de Aleutine -V. bolii lui Derzsy

Nr crt 0

Familia 1

Subfamilia 2

Genul 3

Specia 4

Entitatea produs 5

135

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul Erythro virus Dependovirus Circov irus

Specia Virusul B 19 Virusul 2 adenoasociat Virusul anemiei puilor

1 4

CIRCOVIR IDAE

Entitatea produs Specia tip a genului Specia tip a genului Specia tip a genului Circoviroza aviar -Circoviroza porcin -Boala penajului i ciocului la psittacine Specia tip a genului Papilomatoza bovin Specia tip a genului Specia tip a genului -Pneumoarterita cu adenovirus la bovine -Infecii cu adeno-virusuri la cabali-ne, ovine, porcine -Hepatita infecioas canin -Traheobronita infecioas canin

Circovirus porcin Circovirus aviar 1 5 PAPOVAV IRIDAE Papylomavi rus Virusul papilomatoz ei iepurelui V.papylomato zei Polyom V.Simian 40 avirus Masta Adenovirusul denovi uman C rus Adenovirusur i mamifere

1 6

ADENOVIRIDAE

V. hepatitei V. traheobronitei

136

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul Aviade novirus

Entitatea produs Adenovirusul Specia tip a A aviar genului Adenovirusur -Sindromul EDS76 i aviare 1-11 -Hepatita cu incluzii -Splenomegalia puilor-Enterita hemoragic a curcilor

Specia

Nr crt 0

Familia 1

Subfamilia 2

Genul 3

Specia 4

Entitatea produs 5

137

Virusologie general

Nr crt 1 7

Familia HERPESV IRIDAE

Subfamilia Alphaherpes virina e

Genul

Specia

Entitatea produs Specia tip a genului -Boala lui Aujeszky -Rinotraheita infecioas bovin -Mamilita herpetic bovin -Rinopneumonia ecvin -Exantemul coital ecvin -Adenoza pulmonar -Herpesviroza caprin -Herpesviroza canin -Rinotraheita infecioas felin -Laringotraheita infecioas aviar -Coriza herpetic la porumbei Specia tip a genului

Varice- Herpesvirus llovirus ul uman 3 Suid herpes 1

Bovid herpesvirus 1 Bovid herpesvirus 2 Herpesvirus ecvin 1 Herpesvirus ecvin 3 Bovid herpesvirus 5 Bovid herpesviru 6 Canin herpesvirus1 Feline herpesvirus1 Gallid herpesvirus1 Anatid herpesvirus 1 Pigeon herpesvirus 1 Simple xvirus Herpesvirus ul uman 1

138

Virusologie general

Nr crt 0

Familia 1

Subfamilia 2 Betaher pesvirinae

Genul 3 Roseoloviru s

Specia 4 Herpesvirus ul uman 6 Suid herpes virus 2 Equine herpesvirus 2

Entitatea produs 5 Specia tip a genului -Rinita cu incluzii a purceilor -Infecii cu citomegalovirusuri la ecvine Specia tip a genului Specia tip a genului -Specia tip a genului -Boala lui Marek Febra cataral malign bovin

Cytomegal ovirus Muro megal ovirus Gamma Rhadiherpes- novirus virinae

Herpesvirus ul uman 5 Herpesvirus ul murin 1 Gallid herpesvirus 2

Alcelaphine herpes-virus 3 Lymph ocrypto virus Avihepadna -virus Herpesvirus ul uman 4 V. hepatitei B a raelor.

Specia tip a genului Specia tip a genului -Hepatita B aviar Specia tip a genului

1 8

HEPADNAVIRIDAE

Orthohepad naviru s

Virusul hepatitei B

139

Virusologie general

Nr crt 1 9

Familia POXVIRI DAE

Subfamilia Chord opoxvi rinae

Genul Ortho poxvir us

Specia Virusul vaccinal Cowpoxvirus Buffalopoxvirus

Entitatea produs Specia tip a genului -Variola bovin -Variola bivolilor

Nr crt 0

Familia 1

Subfamilia 2

Genul 3 Parap oxviru s

Specia 4 V. Orf

Entitatea produs 5 -Ectima contagioas -Stomatita papuloas bovin

V. stomatitei papuloasa

V. pseudocowpo x V. bolii Auzduk Capripoxvirus V. sheeppox

-Boala nodular (pseudovariola) -Ectima contagioas a cmilei Specia tip a genului -Variola caprelor -Variola oilor -Dermatita viral nodular -Ectima contagioas a cmilei Specia tip a genului -Variola suin

V. goatppox V. lumpy skin disease V.bolii lui Auzduk Suipox virus V. swinepox

140

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul Lepori poxvir us

Specia V. mixoma

Avipo xvirus

V. fibromului Shope V. fowlpox

Mollus cipoxv irus Yatap oxviru s

V.contagios al molutelor V.tumorii maimuelor

Entitatea produs Specia tip a genului -Mixomatoza iepurilor -Fibromatoza iepurilor Specia tip a genului -Variola aviar -Variola porumbeilor Specia tip a genului Specia tip a genului

Nr crt 0 2 0

Familia 1 IRIDOVIR IDAE

Subfamilia 2

Genul 3 Ranav irus Lymph ocysti virus Asfivirus Bornavirus

Specia 4 V.3 al broatelor V.1 al limfocitozei V.pestei porcine africane V. bolii Borna

Entitatea produs 5 Specia tip a genului Specia tip a genului Specia tip a genului Specia tip a genului -Boala de Borna Specia tip a genului

2 1

ASFARVI RIDAE

2 BORNA2 VIRIDAE

2 FILOVIRID 3 AE

Magbu rg-like viruses

Magburg virus

141

Virusologie general

Nr crt

Familia

Subfamilia

Genul Ebola -like viruse s Arena virus

Specia Zaire Ebola virus

Entitatea produs Specia tip a genului

2 ARENAVIR 4 IDAE

Arterivirus

V. coriomeningitei limfocitare V.arteritei ecvine

Specia tip a genului Specia tip a genului -Arterita ecvin

2 5 2 6

ASTROVIR IDAE NODAVIRIDAE

Astrov irus Betan odavirus

V.sindromului respirator i -Sindromul de respirator i de infertilitate infertilitate porcin Astrovirusul Specia tip a uman 1 genului V. necrozei Specia tip a esutului genului nervos

Viroizii Satelii AGENI SUBVIRALI Ageni ai Encegalopatiei spongiforme dc AND Satelit sc ARN Satelit Specia tip: agentul scrapiei

Rubricile haurate reprezint modificrile taxonomice realizate conform celui de-al VII-lea Raport al Comitetului Internaional de Taxonomie Viral. Rubricile cu sgeat reprezint modificrile taxonomice realizate conformul ultimului Raport al Comitetului Internaional de Taxonomie Viral.

Prezentarea n continuare a familiilor, subfamiliilor i a genurilor virale patogene pentru animale, se va face dup natura genomului viral, n sensul c, nti vor fi prezentate dezoxiribovirusurile i apoi ribovirusurile.

142

Virusologie general

CLASA DEZOXIVIRA
Familia POXVIRIDAE
Numele taxonului deriv din cuvntul poc (pocc) care, n engleza veche, nseamn pustul, ulcer, leziune caracteristic infeciilor cu aceste virusuri. Poxvirusurile au genomul constituit din ADN dublu catenar, cu masa molecular de 130-240 x 106, reprezentnd 57,5% din masa virionului; proporia G + C este de 33-40% la genurile parazite pentru vertebrate i 26% la cele patogene pentru insecte. Dimensiunile virionilor sunt de 300-450/170-260 nm. Poxvirusurile sunt cele mai mari virusuri. Genurile i speciile conin n jur de 10 antigeni majori, prezena unora la mai multe specii permind reacii ncruciate ntre majoritatea poxvirusurilor parazite pentru vertebrate. Cu toate c genomul lor este ADN, poxvirusurile se asambleaz n citoplasm, unde produc incluzii. Eliberarea virionilor din celulele gazd are lor fie prin intermediul unor microvili, fie consecutiv morii i descompunerii celulei. Activitatea hemaglutinant i sensibilitatea fa de solvenii lipidelor este n funcie de gen (subgrup).n cadrul familiei Poxviridae se disting 2 subfamilii: Chordopoxvirinae, cuprinznd virusurile vertebratelor i Entomopoxvirinae, cele ale insectelor. Subfamilia Chordopoxvirinae include 6 genuri sau subgrupe: - Ortopoxvirus (subgrupa Vaccinia), - Aripoxvirus (subgrupa variolelor aviare), - Capripoxvirus (subgrupa variolei ovine), - Leporipoxvirus (subgrupa mixomatozei), 143

Virusologie general Parapoxvirus (subgrupa Orf), Suipoxvirus (subgrupa porcine).

variolei

Subfamilia CHORDOPOXVIRINAE

Genul ORTHOPOXVIRUS (subgrupa Vaccinia) Virusurile din acest gen sunt rezistente la eter i produc, n celulele infectate, o hemaglutinin antigenic, sub forma unei particule bogat n lipide, cu diametrul de 50-65 nm, separat de virion. Celelalte caractere se identific cu cele ale familiei. Orthopoxvirusurile produc variola la una sau mai multe specii de vertebrate; ele sunt nrudite antigenic, iar ntre ele sunt posibile recombinri genetice. Principalele specii sunt: Virusul variole umane (Smallpox). Variola uman avea n trecut o rspndire foarte larg datorit difuziunii epidemice. Astzi aria ei geografic s-a restrns foarte mult datorit eficacitii vaccinului. n leziunile naturale i experimentale, virusul formeaz incluzii intracitoplasmatice numite corpusculii lui Guarnieri. Virusul variolei bovine (Cowpox) Nedifereniat pn la mijlocul secolului XIX de virusul vaccinal, produce i astzi, n condiii naturale, variola la vaci, a crei arie geografic s-a limitat foarte mult n ultimii ani. Morfologic, biochimic i antigenic este foarte apropiat de virusul vaccinal, de care se deosebete prin urmtoarele caractere: - pustulele produse n membrana corioalantoidian sunt mai mici, - incluziile intracitoplasmatice sunt mai mari i mai intens acidofile, - necroza epitelial este mai rapid i tendina de invazie a esutului mezodermic, inclusiv a endoteliilor capilare, este mai accentuat. 144

Virusologie general Virusul vaccinal (Poxvirus officinale) Este un virus de laborator utilizat n vaccinarea antivariolic la om. Asupra originii lui exist unele ndoieli, dac provine din virusul variolei bovine sau dac este un recombinant genetic ntre acesta i virusul variolei umane. Antigenic, el este mai apropiat de virusul variolei umane dect de cel al variolei bovine. Virusul vaccinal i are originea n primul vaccin preparat de Jenner n 1796. n prezent el nu mai are nici un corespondent identic n stare slbatic. Tulpinile de virus vaccinal sunt ncadrabile n dou variante: - una dermotrop, care produce o pustul la iepure n cazul inoculrii intradermice, pe cale intracerebral este nepatogen, - una neuroptop, care inoculat intracerebral la iepure produce o encefalit. n celulele infectate se gsesc incluzii intracitoplasmatice iar n limfa veziculelor poate fi observat chiar virusul n frotiuri colorate prin metoda Giemsa, sub form de corpusculi elementari Paschen. Hemaglutininele prezente la suprafaa virionului sunt termostabile, de natur lipoproteic, produc aglutinarea eritrocitelor de curcan i n proporie de aproximativ 50% a celor de gin. Cultivarea se realizeaz n bune condiii pe ou embrionate, n care apar leziuni caracteristice n membrana corioalantoidian; virusul se dezvolt la fel de bine ntr-un variat sortiment de culturi i linii celulare. Antigenic, este strns nrudit cu virusurile variolei umane, variolei bovine i ectromeliei. Infecii cu virusul vaccinal sunt semnalate n urmtoarele mprejurri: la lucrtorii din laboratoarele n care este manipulat virusul, la copii consecutiv vaccinrii antivariolice i la vaci prin contaminare de la mulgtorii recent vaccinai. Virusul ectromeliei (Mousepox) Produce n cresctoriile de oareci o infecie caracterizat prin formarea de tumefacii edematoase, urmate de necroze la nivel cutanat (mai ales la extremiti) i n organele interne. Morfologic, 145

Virusologie general cultural i antigenic, virusul electromeliei este foarte apropiat de virusul vaccinal cu care de altfel oarecii pot fi imunizai prin scarificre. Alte specii din genul Orthopoxvirus sunt virusurile care produc infeciile variolice la bivol, cmil, maimu i iepure.

Genul AVIPOXVIRUS (subgr. virusurilor variolelor aviare) Genul cuprinde mai multe specii nrudite, este nehemaglutinant i eterrezistent. Incluzii citoplasmatice bogate n lipide (incluziile Bollinger) sunt prezente n celulele epiteliale infectate. n leziuni se gsesc corpusculi elementari evideniabili prin metoda Giemsa, de 330/280 nm, corpusculi Borrel. Virusurile variolelor aviare se cultiv n ou embrionate, multiplicndu-se mai ales n epiteliul membranei corioalantoidiene. Frecvent, produc i leziuni macroscopice ale membranei, constnd n apariia unor zone de opacitate sau chiar a unor mici noduli proliferativi. La examenul electronomicroscopic se evideniaz leziuni celulare caracteristice, cum ar fi: prezena virusurilor n fagozomi existena unor zone de replicare si morfogenez virala si existenta incluziilor Bollinger. (M.Carp-Crare , 1994) Virusuri variolice aviare au fost descrise pn n prezent cu specificitate pentru urmtoarele gazde: gin, porumbel, curc, canar, vrabie, prepeli, graur; primele patru sunt mai rspndite i mai bine studiate. Avipoxvirusurile sunt nrudite antigenic ntre ele i distincte de celelalte virusuri variolice. Virusurile variolice au valoare imunogen i se preteaz pentru prepararea unor vaccinuri eficiente att sub form vie i atenuat, ct i sub form inactivat. Ca tulpini vaccinale se pot folosi att virusuri homoloage, ct i virusuri heterologe. Astfel, pentru vaccinarea ginelor se poate utiliza un vaccin galinar, dar i unul columbar. Vaccinarea porumbeilor se face cu virusul de curc. n ultimii ani a existat tendina de introducere n practica imunizrii antivariolice aviare a vaccinrii colective 146

Virusologie general prin aerosoli solizi, materialul viral fiind amestecat cu pulberi inerte, ca de exemplu bentonita. O astfel de metod a fost experimentat la noi n ar de Carol-Dumitriu Emilia i col. (1978).

Genul CAPRIPOXVIRUS (subgr. virusului variolei ovine) Din aceast subgrup fac parte virusul variolei ovine i cel al variolei caprine.

Virionii sunt mai alungii comparativ cu celelalte virusuri variolice, nu conin hemaglutinine i sunt entersensibili. Transmisia se realizeaz frecvent prin artropode, care ndeplinesc ns rolul de vectori mecanici. Virusul variolei ovine numit n literatura francez i clavelee, produce infecii foarte grave, cu evoluie epizootic. n limfa variolic sunt prezeni corpusculi elementari de 200/115 nm. Virusul se poate cultiva n culturi celulare renale de oaie i capr, producnd n 4-6 zile un efect citopatic care se limiteaz de obicei la 50% din monostrat. Pe fibroblaste testiculare de oaie se obine un titru mai ridicat, iar efectul citopatic este mai rapid i mai intens. Virusul variolei ovine este bine individualizat antigenic, datele privind posibilele nrudiri antigenice cu virusul variolei caprelor i virusul Orf fiind controversate; ele par a fi valabile n funcie de zona geografic, apropierea focarelor i ali factori. Virusul este imunogen i se preteaz la prepararea de vaccinuri. Imunizarea prin practica empiric a variolizrilor este semnalat ca una din cele mai vechi, dac nu chiar prima metod de imunizare activ printr-o infecie dirijat, fiind aplicat de ciobani nc din antichitate. Astzi se folosesc vaccinuri vii, atenuate sau inactivate. Vaccinurile vii confer stri de imunitate mai solide. n unele ri (U.R.S.S., China) s-au obinut rezultate bune cu tulpini avianizate. Substane adjuvante adecvate, mai ales n cazul vaccinurilor inactivate, sunt hidroxidul de aluminiu i betapropiolactona. La noi n ar s-a folosit un vaccin inactivat 147

Virusologie general i adsorbit pe hidroxid de aluminiu (Stamatin, 1954); de mai muli ani, ara noasrt este indemn de variol ovin. Virusul variolei caprine produce la aceast specie o form de variol benign, cu un grad de inciden mai redus. Virusul exantemului nodular sau dermatitei nodulare (Lumpy skin) a bovinelor este asemntor cu virusul vaccinal, dar distinct antigenic de acesta i produce erupii nodulare cutanate cu tendin spre necroz.

Genul LEPORIPOXVIRUS (subgr. mixomatozei) Genul cuprinde mai multe specii patogene pentru iepure i veveri, dintre care mai importante sunt virusul mixomatozei i cel al fibromului lui Shope. Virusul mixomatozei, asemntor cu virusul vaccinal, are dimensiunile de 280/230 nm, se cultiv n culturi de celule de obolan, hmaster, iepure, pasre, om. n celulele renale produce un efect citopatic caracterizat prin leziuni vacuolizante ale nucleilor i incluzii mari intracitoplasmatice. Cultivat n ou embrionate, produce leziuni distincte n membrana corioalantoidian cu diametrul de 0,5-1 mm. Infecia natural (mixomatoza), specific iepurilor este original din Uruguay i Brazilia, unde a fost semnalat prima oar la specia Sylvilagus brasiliensis. Virusul a difuzat ulterior n Europa i alte continente. Anatomoclinic, infecia se caracterizeaz prin tumori cutanate moi, cu prezena unui exudat mucos, localizate predominant n regiunea capului. Virusul este transmisibil prin contact i prin insecte, mai ales tnari, n organismul crora virusul poate fi purtat pn la 7 luni.

148

Virusologie general Genul PARAPOXVIRUS Virionii au o structur foarte asemntoare cu cea a virusului vaccinal, dar sunt mai mici, avnd 290/160 nm. Virusurile din acest grup sunt: virusul Orf, virusul pseudovariolei bovine i virusul stomatitei papulare bovine. Virusul Orf este agentul unei dermatite infecioase a oilor, localizat la nivelul buzelor, cunoscut sub denumirile de: ectima contagioas, dermatita pustuloas contagioas, Scabby mouth. Virusul are o form oval i se cultiv cu uurin n ou embrionate i n culturi celulare embrionare, cutanate i renale ovine, celule testiculare ovine i bovine etc., producnd un efect citopatic evident. n condiii experimentale este inconstant patogen pentru iepure. Ectima contagioas are un caracter enzootic, benign, fiind uor diagnosticabil i tratabil. Imunizarea activ cu un vaccin viu, preparat din cruste uscate i suspendate 1% n soluie fiziologic glicerinat 50%. Genul SUIPOXVIRUS Virusul variolei porcine produce infecii mai ales la tineret. Virionul, asemntor cu cel al virusului vaccinal, este ns mai mare, avnd dimensiunile de 320/280 nm. Cu toate c inumodifuzia relev existena unei fraciuni antigenice comune cu virusul vaccinal, nici unul din cele dou virusuri nu imunizeaz fa de cellalt. Cultivarea nu este posibil pe embrioni de gin, realizndu-se cu destul dificultate numai pe celule embrionare renale, testiculare, pulmonare etc. ale speciei naturale respective. Poxvirusuruile neclasificate sunt cele care produc Molluscum contagiosum o infecie la om caracterizat prin formarea de tumorete moi la nivelul pielii, virusul Yaba, agentul unor tumori subcutanate la maimu, virusul variolei equine i Tanapoxvirusul, patogen pentru maimu i om.

149

Virusologie general

Familia HERPESVIRIDAE

Particulele virale sunt constituite dintr-o nucleocapsid cu diametru de 120-150 nm, nvelit de un peplos lipoproteic. Capsida icozaedral, format din 162 capsomere. Genomul este format din ADN dublu catenar, iar proporia G + C este 33-74%. Masa molecular a genomului este de 92-102 x 106. Multiplicarea herpesvirusurilor ncepe n nucleu i se completeaz cu compuii glico-lipoproteici n timpul trecerii virusului prin stratul intern al membranei nucleare spre reticulul endoplasmatic. Incluziile intranucleare sunt prezente la majoritatea cazurilor. Majoritatea herpesvirusurilor sunt lipsite de proprieti hemaglutinante.

Genul HERPESVIRUS Din aceast familie face parte un singur gen Herpesvirus-, care cuprinde mai multe specii patogene pentru om i animale. Numele familiei i genul provine de la numele leziunii (herpes) produs de specia reprezentativ a acestor taxoni. HERPESVIRUSURI PATOGENE PENTRU MAMIFERE

Virusul Herpes simplex varicella zoster Virusul este patogen pentru om la care produce trei afeciuni: herpesul, o infecie benign localizat cel mai frecvent la buze; varicella, o boal eruptiv cutanat ntlnit mai ales la copii; 150

Virusologie general zona-Zoster, o erupie cutanat dureroas localizat pe traiectul unui nerv intercostal. Morfologic, virionul are caracterele specifice familiei i genului. Se cultiv cu uurin pe membrana corioalantoidian a embrionului de gin, n grosimea creia produce leziuni mici proliferative, n diferite culturi i linii celulare (HeLa, BHK-21). Virusul bolii lui Aujeszky Istoric Existena virusului a fost demonstrat n 1902 de ctre Aujeszky, care a transmis boala prin inoculare de material patologic de la bovine i carnasiere la iepure. La noi n ar, primele cercetri s-au efectuat n perioada 1914-1920 de ctre Riegler cu diferii colaboratori. Datorit extinderii virusului, mai ales la specia porcin, cercetrile au avut n ultimile decenii o amploare deosebit, contribuii mai importante aducndu-i, printre alii, Vechiu A, Jivoin P., Berbinschi C., Popovici I., Bran L., Cure C., etc. Structura virionului Forma particulei virale este sferic, cu diametrul de 110-150. S-au evideniat ns i particule mai mari, ajungnd la 230 nm. Nucleocapsida singur are aproximativ 100 nm. ADN dublu catenar are masa molecular de 68-70 x 106 daltoni. Capsida este icozaedral i compus din 162 capsomere, din care 150 hexoni i 12 pentoni. Capsomerele au o form alungit, 12 nm lungime i 9 nm lime i delimiteaz un lumen central de 4 nm. Nucleocapsida poate fi nvelit de o pericapsid, n care caz diametrul ntregului virion ajunge la 180 nm. Proeminenele de la nivelul vrfurilor au 8-10 nm lungime. Cultivabilitate Comparativ cu alte virusuri, este mai uor cultivabil att n ou embrionate ct i pe diferite culturi celulare. Pe embrion necesit o prealabil adaptare, dup care se multiplic bine mai ales n celulele membranei corioalantoidiene. Mai uor se izoleaz virusul n culturi de celule renale, testiculare de porc, producnd constant efect citopatic. Prin treceri pe culturi celulare i pe embrioni, virusul se atenueaz. Efectul citopatic poate fi de dou tipuri: 1. unul caracteristic prin apariia de granule n citoplasm urmat de transformarea celulelor 151

Virusologie general n forme sferice, refringente, grupate n pachete; 2. altul n care predomin formele de fuziune celular cu formarea de sinciii (polikarioni). n monostraturi acoperite cu agar dup adsorbia virusului se pot forma, dup aproximativ 4-6 zile de incubaie, plaje. Efectul incluziogen Similar altor herpesviride, virusul bolii lui Aujeszky formeaz incluzii intranucleare. O singur incluzie mare ocup aproape tot nucleul, cromatina fiind mpins la periferie unde formeaz un inel marginal. Incluziile cu acest aspect reprezint tipul Cowdry A i sunt deosebite de tipul Cowdry B, tot intranucleare, dar mai mici i n numr variabil. Incluziile constituite de herpesvirusuri nu conin material viral; ele sunt n realitate artefacte, adic locul gol rmas dup migrarea virusului n afara nucleului. Sensibilitatea fa de factorii ecologici Virusul este sensibil la eter, cloroform, pH 3 i cldur. Se conserv bine ntre limite de pH 6-9. Comparativ cu alte virusuri, este mai rezistent la factorii de mediu. Temperatura optim pentru conservare este de 700C. Pe suprafaa obiectelor din grajduri rezist 18-37 zile, n carnea congelat 60 de zile, n diferite furaje 5-46 zile, iar n platformele de gunoi 5-15 zile. Substanele dezinfectante cele mai active sunt soda caustic, laptele de var i varul cloros. Substanele conservante pentru virus sunt glicerina i soluiile concentrate de NaCl. Tripsina i alte enzime inactiveaz virusul fr s distrug capsida. Infecia natural Spectrul de patogenitate al virusului este foarte larg, receptive fiind suinele, bovinele, carnasierele, cabalinele, etc. Omul este practic nereceptiv, cu toate c n literatur exist unele semnalri privind boala lui Aujeszky la om. Aceste date sunt ns discutabile i neconcludente. Psrile au un grad de receptivitate foarte redus. Rezervorul natural de virus l constituie roztoarele slbatice, mai ales obolanul, care este factorul principal prin care epizootiile se menin timp ndelungat n efectivele de animale, n special la porcine. Infecia are caracterul unei boli generale, asociat cel mai frecvent cu tulburrile manifestate sub form de prurit, la toate speciile, cu excepia porcului, la care pareza sau paralizia trenului posterior este semnul caracteristic. Porcul este, de 152

Virusologie general altfel, singura specie la care se ntlnete mai frecvent difuziunea enzootic a bolii, cu importante implicaii economice. n orae apar uneori enzootii la pisici, datorit consumului de carne i mai ales pulmon de porc bolnav sau purttor de virus. Datorit asemnrii tabloului anatomo-clinic, mai ales la carnasiere, cu cel din turbare, mult vreme i uneori chiar n prezent se folosete pentru desemnarea bolii, numele de pseudoturbare. ntre agenii etiologici i patogeneza celor dou infecii nu exist ns asemnri eseniale, exceptnd prezena virusului bolii lui Aujeszky n esutul nervos. Spre deosebire de virusul turbrii, el este ns prezent n numeroase alte esuturi i organe. Infecia experimental Iepurele este animalul de laborator cel mai sensibil. n urma inoculrii intramusculare sau subcutanate, iepurele face un tablou anatomo-clinic caracterizat printr-un prurit demenial la locul de inoculare, ajungndu-se la automutilare. Alte specii de laborator sensibile sunt oarecele, cobaiul i hamsterul Proprieti antigenice i imunogene Virusul este omogen din punct de vedere antigenic, nefiind descrise tipuri antigenic distincte. Valoarea imunogen a tulpinilor permite obinerea de vaccinuri capabile s confere stri de imunitate satisfctoare. Vaccinurile contra bolii lui Aujeszky sunt de dou feluri: vaccinuri vii i atenuate, care pot fi preparate din culturi celulare sau din embrioni; la noi n ar se folosete o tulpin atenuat prin pasaje pe embrioni (avianizat), introdus n producie de Bran i col. (1963); acest vaccin a fost adoptat i de alte ri, unde tulpina vaccinal este cunoscut sub simbolul Buk (Bucureti); vaccinuri inactivate, care se prepar din tulpini virulente n culturi celulare, inactivate apoi cu saponin i adsorbite pe hidroxid de aluminiu, dup o reet preconizat de Berbinschi i col. (1964).

153

Virusologie general Vaccinul viu avianizat se utilizeaz curent pentru imunizarea suinelor, iar vaccinul inactivat la alte specii n caz de nevoie (bovine, ovine, cini, vulpi, etc.). Virusul rinotraheitei infecioase bovine vulvo-vaginitei pustuloase infecioase (IBR-IPV =infectious bovine rhinotracheitis infectious pustular vulvovaginitis) Virionul este asemntor morfologic cu cel al virusului bolii lui Aujeszky, avnd diametrul de 130-180 nm. Genomul este ns constituit dintr-o cantitate mai mare de ADN, masa molecular fiind de 84 x 106 daltoni. Sensibil la eter, aceton, alcool, pH-ul 4, 5-5 i iradiere cu ultraviolete, virusul se conserv optim n condiii de pH 6-9, la temperatura de 600C. Cultivarea este posibil ntr-o gam destul de larg de sisteme celulare, printre care cele de rinichi de viel, cal, porc, oaie, alte diverse celule de origine bovin (testiculare, pulmonare, cutanate), celule splenice de iepure linia HeLa; n unele din aceste sisteme se multiplic de la izolare, n altele dup o prealabil adaptare. Efectul devine evident dup 1-2 zile. Embrionii de gin nu multiplic virusul. Omogen antigenic, distinct de celelalte herpesviride, virusul rinotraheitei bovine este nrudit antigenic cu cel al rinotraheitei equine. Rezultate bune dau, n scop de diagnostic, testul de seroneutralizare i hemaglutinare indirect cu hematii de oaie tanate. n condiii naturale este patogen numai pentru bovine, la care produce dou entiti morbide: rinotraheita infecioas, o afeciune respiratorie acut n care predomin simptomele de rinit, sinuzit, dispnee i febr; vulvovaginita pustuloas infecioas, denumit i exantem veziculos genital sau exantem coital, caracterizat prin inflamaia mucopurulent i necrotic a cilor genitale femele, fiind posibile i avorturi, mai ales la primipare. 154

Virusologie general n celulele epiteliale ale mucoaselor inflamate se gsesc incluzii intranucleare de tip Cowdry A. Imunizarea activ fa de IBR-IPV este posibil cu vaccinuri vii i atenuate sau cu vaccinuri inactivate. Atenuarea se realizeaz prin treceri n serie pe culturi celulare de porc. Virusul IBR-IPV poate fi combinat cu alte virusuri n cadrul unor vaccinuri polivalente (de obicei virusurile VD-MD i parainfluen-3). Virusul febrei catarale maligne Agentul etiologic al febrei catarale maligne, numit i herpesvirus bovin, este foarte fragil, sensibil la eter, cloroform, procese de putrefacie. Izolarea este posibil pe diferite celule de origine bovin, mai ales renale, suprarenale i tiroidiene, n care produce efecte de fuziune celular i incluzii de tip Cowdry A. Cultivarea pe embrioni de gin nu a reuit pn n prezent. Tulpinile par s fie antigenic identice. n condiii naturale sunt receptive bovine i bubaline. Ovinele i unele specii slbatice de rumegtoare nu fac forme clinice de boal, dar pot fi purttoare de virus. Febra cataral malign, numit i coriza gangrenoas a bovinelor, este o boal acut sau subacut, caracterizat prin febr, inflamaie cataral i mucopurulent a mucoaselor (bucal, nazal, conjunctival), leziuni congestive, hemoragice i necrotice n diferite esuturi i organe, mai ales n tubul digestiv, ganglionii limfatici, sistemul nervos central, etc. n condiii experimentale este sensibil iepurele. Cobaiul este rezistent. Virusul nu este imunogen. Infecia se poate ns trata cu hormoni corticosteroizi. Pop M. (1972) a obinut bune rezultate cu ACTH. Virusul rinopneumoniei equine avortului viral al iepelor Cunoscut i sub numele de herpersvirus equin 1, acest agent nu se deosebete morfologic de celelalte herpetoviride. n imaginile electronooptice virionii au o form aproximativ sferic, iar genomul are un aspect de stea sau cruce. masa molecular a ADN este de 92 x 106 daltoni. Pericapsida conine 155

Virusologie general o hemaglutinin, labil la 560C, activ fa de hematiile de cal i cobai. Virusul se cultiv mai greu pe ou embrionate, necesitnd o prealabil adaptare. Pentru izolare se preteaz cel mai bine culturi de celule, mai ales embrionare. O multiplicare satisfctoare se obine pe celule renale de hamster, esuturi embrionare de cal, bou, porc, pisic, celule amniotice umane, linia Hela, etc. Efectul citopatic se caracterizeaz prin apariia formelor sferice sau fuzionarea celulelor n sinciii, n care se observ incluzii intranucleare. Antigenic este nrudit cu virusul rinotraheitei infecioase bovine. Herpesvirusurile de origine equin au fost mprite n 3 specii sau tipuri antigenic distincte: tipul 1 patogen, izolat cel mai frecvent din cazuri de rinopneumonie-avort viral; tipul 2, numit i citomegalovirus equin, prezent mai ales la tineretul cabalin, probabil nepatogen; tipul 3 sau virusul exantemului coital, agent al unor infecii genitale asociate cu localizri respiratorii inaparente sau benigne. Rinopneumonia equin este o infecie foarte contagioas, care afecteaz numai cabalinele i evolueaz mai grav la tineret. Avortul viral (forma abortigen a aceleiai entiti etiologice) se produce de regul n a 2-a jumtate a gestaiei, n lunile 8-10. n condiii experimentale sunt sensibili hamsterul i oarecele sugar, la care virusul produce grave leziuni hepatice i cobie gestante, care avorteaz. Imunizarea activ s-a practicat iniial cu vaccinuri inactivate preparate din avortoni. ntruct acestea provocau o boal hemoragic la mnji, ele au fost nlocuite cu vaccinuri vii atenuate prin adaptare pe hamster i oarece. Alte herpesvirusuri, patogene pentru mamifere, semnalate n literatur, sunt urmtoarele: Virusul mamitei ulcerative a bovinelor (Herpesvirus mammilitis) este constituit dintr-o nucleocapsid de 80 nm nvelit de un peplos, virionul avnd n ansamblu lui un diametru de 250 nm; se cultiv ntr-o mare varietate de celule, 156

Virusologie general producnd sinciii ce pot conine pn la 40 de nuclei i incluzii de tip Cowdry A. Infecia natural afecteaz sfrcurile ugerului i se caracterizeaz prin tumefacia i cianoza acestora, urmat de formarea de vezicule, ulcere i cruste. Vindecarea este spontan i se produce ntr-un interval care variaz ntre 10 zile mai multe sptmni. Virusul Allerton (Herpesvirus bovin 2) este morfologic identic cu celelalte herpesviride; virionul are 130-150; se cultiv n diverse sisteme celulare i este antigenic identic cu virusul mamitei ulcerative. La bovine produce o infecie a straturilor superficiale ale dermului, caracterizat prin ngrori cu aspect nodular, localizate mai frecvent n regiunile facial, dorsal i perineal. Pot fi prini i ganglionii, care prezint leziuni de limfadenit, uneori generalizat. Herpesvirusul canin 1 se aseamn morfologic cu virusul rinopneumoniei bovine, mai ales prin imaginea electronooptic n form de stea sau cruce a genomului viral. Virionul este de 115-175 nm, iar nucleocapsida de 90-100 nm. Izolarea reuete cel mai bine n culturi de celule renale de cine, iar efectul citopatic apare la 2-3 zile. Infecia natural se ntlnete la cei sub 4 sptmni i are caracterul unei boli febrile generale; leziuni hemoragice i necrotice se gsesc n ficat, rinichi, pulmon i alte organe. Virusul rinotraheitei feline (Herpesvirus felin 1) nu are nici o particularitate morfologic deosebit de celelalte herpesvirusuri; se cultiv n celule renale, testiculare i pulmonare de pisic, n care produce efect citopatic. Virusul este monopatogen pentru pisic, la care produce o infecie acut, febril n care predomin simptome i leziuni ale cilor respirotorii anterioare. Procentul de mortalitate este ridicat mai ales la tineret.

Citomegalovirusurile Aceste virusuri constituie un grup heterogen sub aspect ecologic i al potenialului patogen, avnd ns mai multe caractere comune i anume: 157

Virusologie general afinitate deosebit pentru celulele glandelor salivare i cele renale. un tip endosimbiotic de evoluie n celulele gazd, asemntor ntructva celui ntlnit la virusurile orfane; n rarele cazuri n care produc mbolnviri, acestea au caracterul unor infecii latente sau cronice; celulele infectate sunt adesea mrite n volum, modificare histopatologic care a inspirat numele citomegalo. Morfologic, aceste virusuri nu pot fi deosebite de alte herpesvirusuri. ADN viral are masa molecular de 4 x 107 daltoni. Cultivarea reuete numai n celulele provenind de la specia animal gazd. Fibroblastele ofer in vitro condiii mai bune de multiplicare comparativ cu epiteliile, invers dect in vivo. n celulele infectate se gsesc att incluzii intranucleare cu diametrul de 15 microni, ct i incluzii intracitoplasmatice mai mici de 2-4 microni, situate de regul limitrof nucleului. Purttorii de citomegalovirusuri sunt foarte frecveni att la om, ct i la numeroase specii animale, printre care porcul, oaia, cinele, maimua, hamsterul, oarecele, etc. n rare cazuri citomegalovirusurile produc forme clinice de boal. La om au fost descrise infecii neonatale, care evolueaz mortal n primele 6 luni de la natere. n Africa de Sud au fost identificate citomegalovirusuri ca ageni etiologici ai unor infecii genitale, care pot fi nsoite de sterilitate, la bovine. O infecie mai bine conturat ca entitate nosologic este rinita cu incluzii a suinelor. Virusul rinitei cu incluzii Considerat ca citomegalovirus, numit i Herpesvirus porcin 2, are caracterele specifice genului. Virionii se evideniaz electronooptic n seciunile ultrafine din mucoasa nazal a animalelor infectate; se observ att nucleocapside cu dimensiuni de 45-65 nm sau 90-100, ct

158

Virusologie general i particule virale nvelite de pericapsid cu diametrul de 120150 nm. Virusul poate fi cultivat n culturi de celule obinute din mucoasa nazal,din glandele salivare, celule renale, testiculare de origine porcin recoltate de la purcei infectai experimental; s-au reuit, de asemena, treceri n serie pe celule pulmonare de porc. Interesant este constatarea c virusul poate fi izolat din esutul renal de la porci aparent sntoi, dar nu i din mucoasa nazal ale acelorai animale. Efectul incluziogen in vivo sau in vitro se caracterizeaz prin prezena de incluzii mari rezultate din agregarea unor formaii granulare ovale sau sferice localizate n nucleoplasm. n interiorul unor nuclei se observ mase reticulare de material incluzional, care se presupune a reprezenta stadiul final al ciclului infecios din celul. Infecia natural se ntlnete la purceii de 2 pn la maximum 4 luni. ntre aceleai limite de vrst este posibil i transmisia experimental a bolii. procentul de mortalitate este relativ redus, depind rareori 20%. Vindecarea survine spontan n 3-4 sptmni. Virusul rinitei cu incluzii a fost incriminat i ca agent posibil al complexului etiologic al rinitei atrofice (boala rtului strmb). n ultimul timp se nclin ns din ce n ce mai mult spre a considera, ca agent principal al acestui sindrom, specia bacterian Bordetella bronchiseptica i endotoxinele speciei Pasterurella multocida. Virusul adenomatozei pulmonare a ovinelor (Jaagsiekte) Adenomatoza pulmonar a ovinelor este o boal tumoral semnalat prima oar spre sfritul secolului al XVIIIlea - nceputul secolului al XIX-lea n mai multe ri din Europa i n Africa de Sud. n ultimele decenii s-a constatat c boala are o arie geografic foarte larg, n care se include i ara noastr. Cercetrile pentru stabilirea etiologiei bolii au dus la evidenierea n macrofagele cultivate din pulmonii oilor cu leziuni a incluziilor caracteristice herpesvirusurilor. Ulterior, sa demonstrat prin examene electronooptice i prezena intracelular a virionilor de form hexagonal, cu diametrul de 159

Virusologie general 95-115 nm. Unele particule virale erau nvelite n pericapsid. Alte detalii ultrastructurale ale virusului, care au putut fi observate sunt urmtoarele: forma alungit a capsomerelor, dimensiunile genomului viral de 50-65 nm, prezena ocazional a unor structuri filamentoase paracristaline asociate cu conglomerate de particule virale mici, cu diametrul de 30 nm (dup Buxton i Fraser, 1977). Pe baza acestor nsuiri, agentul adenomatozei pulmonare a fost inclus n grupa herpes, fiind numit i herpesvirus bovin 4. Infecia natural se ntlnete la oi n vrst de peste 3 ani i se caracterizeaz prin prezena de focare nodulare de culoare roiatic, uneori confluente, n interiorul crora examenul histologic relev acumulri masive de mononucleare i leziuni hiperplazice ale celulelor pereilor alveolari i bronici. Procesul tumoral are un caracter progresiv-malign i tendina de metastazare.

HERPESVIRUSURI PATOGENE PENTRU PSRI

Virusul bolii lui Marek Virusul bolii lui Marek, denumit astfel dup autorul care, n 1907, n Ungaria o descrie primul, a fost relativ trziu ncadrat printre herpesvirusuri, el fiind mult vreme situat alturi de virusul leucozelor aviare. Asocierea dintre virus i celula gazd este foarte strns, izolarea i separarea virusului n stare pur fiind mai dificil, comparativ cu alte virusuri. Virionii evideniai electronooptic n seciuni ultrafine au o form hexagonal, dimensiunile ntregii particule virale sunt de 150-170 nm, iar al nucleocapsidei de 85-100 nm. Cultivarea reuete pe ou embrionate n care virusul se multiplic n sacul vitelin i n membrana corioalantoidian, n grosimea creia se formeaz uneori discrete leziuni proliferative. Dup ecloziune puii provenii din ou inoculate 160

Virusologie general fac boala n cteva sptmni. Unele tulpini au reuit s fie cultivate i n culturi celulare. pe fibroblaste de embrioni de gin, unde au produs efect citopatic. n celulele infectate se observ incluzii de tip Cowdry A. n condiii naturale i experimentale, virusul determin apariia de anticorpi precipitani; prin imunodifuzie i imunoflorescen au fost identificate trei fraciuni antigenice notate A, B i C. Antigenii B i C sunt cei mai persisteni, fraciunea A pierzndu-se prin treceri repetate. nrudiri antigenice exist ntre virusul bolii lui Marek i alte numeroase herpesvirusuri, printre care virusul herpes simplex, al bolii lui Aujeszky, etc. Virusul este patogen pentru galinacee i n mai rare cazuri pentru alte specii de psri. Infecia natural, cunoscut i sub numele mai vechi de neurolimfomatoz, se caracterizeaz cel mai frecvent printr-o inflamaie cronic a nervilor periferici, pe traiectul crora apar infiltraii limfocitare, edeme i uneori leziuni cu caracter neoplazic sub forma unor nodoziti. n afara formei clasice sau neurale, boala poate evolua i n alte forme: ocular, visceral. Imunizri active fa de virusul bolii lui Marek se pot realiza prin vaccinare cu tulpini atenuate sau nrudite antigenic, ca virusul herpetic de curc (HVT = herpes virus turkey) care conine 2 antigeni A i mai muli antigeni comuni cu virusul Marek. Prepararea vaccinului HVT i introducerea lui n unitile aviare de cretere industrial, iniiat la noi n ar de Ptracu I., s-a aplicat cu rezultate mulumitoare. Virusul laringotraheitei infecioase a ginilor Virusul are caracterele generale ale familiei, virionii icozaedrali avnd diametrul de 100-110 nm. Cultivarea este posibil pe ou embrionate de 10 zile i n culturi de celule renale de gin. Embrionii mor n proporie de 50% prezentnd hemoragii, edeme i necroze, mai ales pe membrana corioalantoidian, n al crei epiteliu se gsesc i incluzii intranucleare de tip Cowdry A. Tulpinile sunt omogene din punct de vedere antigenic. Patogen pentru psri i fazani, virusul produce o laringotraheit contagioas cu putere de difuziune enzootic, caracterizat printr-un tablou clinic n care predomin 161

Virusologie general dificultile respiratorii i leziuni laringotraheale de tip hemoragic, edematos sau difteroid, n funcie de forma de evoluie a bolii. Imunitatea activ este posibil cu vaccinuri vii i virulente sau atenuate. Alte herpesvirusuri aviare Herpesvirusul columbar 1 este agentul unei infecii a porumbeilor, cunoscut i sub numele de boala cu incluzii a porumbeilor. Asemntor morfologic cu virusul laringotraheitei infecioase a ginilor, este antigenic diferit de acesta; se multiplic n celule renale i hepatice de embrioni de gin. Patogen exclusiv pentru porumbei, produce mai ales la tineret o infecie n care predomin leziuni ale cilor respiratorii anterioare, ale tractusului digestiv; se gsesc aproape constant focare necrotice n ficat i mai rar n rinichi. Virusul pestei raelor avnd morfologia caracteristic celorlalte herpesvirusuri, este cultivabil n ou embrionate de ra de 9-12 zile i produce la diferite specii de palmipede o infecie general, asemntoare n linii mari cu bolile numite pest, contagiozitatea i procentul de mortalitate sunt ridicate. Mai sensibili sunt bobocii de ra. Leziunile hemoragice domin tabloul morfopatologic.

Familia HEPADNAVIRIDAE

Familia Hepadnaviridae cuprinde dou genuri: - genul Orthohepadnavirus virusul B al hepatitei umane (HBV) - genul Avihepadnavirus virusul hepatitei B la palmipede (DHBV) Genul Avihepadnavirus Virionul are o form sferic cu diametrul de 20-40 nm prezentnd un genom alctuit din ADN cu o structur 162

Virusologie general particular (circular i parial bicatenar), o capsid cu o simetrie icozaedral alctuit din 180 capsomere i o anvelop de natur lipoproteic. La particula viral complet se mai gsete o protein viral solubil numit antigen(-e) (DHBe) prezent n serul bobocilor de ra i gsc. Cultivarea virusului este posibil pe embrioni de gin i de ra i n culturi celulare. Prin pasaje repetate pe embrioni, capacitatea infectant se atenueaz iar pe culturi celulare nu produce efect citopatic. Toate tulpinile sunt rezistente la eter, cloroform, tripsin i pH 3. Virusul are proprieti hemaglutinante iar antigenic se disting dou serotipuri. n condiii naturale produce hepatita la bobocii de ra n vrst de 1-30 zile i la bobocii de gsc de 2-4 zile. Infecia evolueaz n focare enzootice fr manifestri clinice semnificative. Bobocii infectai natural sau experimental dezvolt un rspuns imun prin anticorpi anti-DHBV iar cei infectati congenital devin imunotolerani , nu dezvolt un rspuns imun i devin purttori i eliminatori de virus. Pentru diagnosticul etiologic se recomand izolarea i identificarea virusului, reproducerea infeciei experimentale i reacii serologice dintre care cele mai sensibile sunt; seroneutralizarea virusului, reacia ELISA i imunodifuzia, folosind seruri mono- sau policlonale. Virusul are proprieti imunogene, iar prin vaccinare pe cale oral sau intramuscular, se obin stri de imunitate relativ solide, transmisibile prin ou.

Familia ADENOVIRIDAE

Adenovirusurile au o structur icozaedral, sunt nude, au diametrul de 70-90 nm. Capsida este constituit din 250 capsomere cu diametrul de 7-9 nm fiecare.Capsomerele din vrfuri sunt antigenic distincte de celelalte; la nivelul lor au n punctul de emergen cte 1 sau 2 expansiuni filamentoase de 10-25 nm lungime, i 2 nm diametru. 163

Virusologie general Genomul este format dintr-o singur molecul ADN dublu catenar, masa de 20-30 x 106, proporia de G + C este 4861%. Sediul biosintezei i ansamblrii virionilor este nucleul. Unele adenovirusuri aglutineaz globulele roii ale diferitelor specii animale. Sediul adenovirusurilor l constituie esuturile adenoide, mai ales amigdalele celelalte compartimente ale inelului luiWaldeyer, sediu care a inspirat i denumirea taxonului. La acest nivel, ele duc n majoritatea cazurilor o existen biofit, dezvoltnd infecii latente sau inaparente. Puine adenovirusuri produc boli cu caracter de entiti nosologice bine conturate. n unele condiii determin un efect transformant oncogen. n infecii mixte cu parvovirusuri ndeplinesc rolul de virusuri ajuttoare (helper). Tulpinile mamiferelor sunt antigenic distincte de cele aviare, fapt care a dus la crearea a dou genuri n cadrul familiei.

Genul MASTADENOVIRUS n acest taxon sunt ncadrate adenovirusurile izolate de la mamifere. Speciile animale de la care pot fi izolate astfel de virusuri sunt foarte numeroase: bovine, ovine, suine equine, canine etc.; nu au fost identificate pn n prezent adenovirusuri la pisic. Rolul lor n afeciunile din care se izoleaz nu poate fi totdeauna stabilit cu certitudine. Ele sunt de obicei condiionat patogene, producnd infecii n condiii de dezechilibru fiziologic sau infecii secundare. Adenovirusuri bovine Adenovirusurile bovine sunt considerate ca ageni poteniali ai unor infecii respiratorii, mai frecvente la tineret; mai rar au fost izolate tulpini din pneumonii, enterite i poliartrite. Infeciile produse de adenovirusuri apar la taurine n condiii ntructva similare cu cele produse de virusurile ECBO. Coman (1972), cercetnd la noi n ar frecvena celor 164

Virusologie general dou categorii de ageni, izoleaz mult mai rar adenovirusuri comparativ cu virusurile ECBO. Cultivarea reuete cel mai bine pe celulele renale i testiculare bovine, iar aspectul citopatic este asemntor cu cel produs de alte adenovirusuri, fiind caracterizat prin rotunjirea celulelor i apariia de incluzii mari intranucleare bazofile sau acidofile; nu se multiplic pe ou embrionate. Hemaglutinarea este pozitiv pe globulele roii de obolan. Animalele de laborator sunt n general nereceptive, unele tulpini producnd ns tumori la hamster. Antigenic au fost identificate trei serotipuri. Adenovirusuri suine Se izoleaz pe culturi de celule renale de porc, din tubul digestiv al animalelor aparent sntoase sau cu tulburri digestive. Ca o raritate, o tulpin a fost izolat i din creerul unui purcel mort cu simptome de encefalit. Antigenic se disting patru serotipuri. Adenovirusuri canine Se izoleaz din boli bine definite ca entiti nosologice. Acestea sunt hepatita infecioas a cinilor i encefalita vulpilor, dou boli diferite produse de acelai agent etiologic i laringotraheita cinilor. Virusul hepatitei infecioase a cinilor encefalitei vulpilor (Rubarth) Virionul icozaedral are diametrul n jurul a 55-80 nm; este rezistent la cldur, la pH acid, la eter i cloroform. Produce hemaglutinarea hematiilor de om de grup O i a celor de cobai. n culturi celulare renale i testiculare de cine, dihor, bursuc porc, cobai, virusul se multiplic i produce efectul citopatic caracteristic adenovirusurilor. Cultivarea este posibil i pe embrioni de gin. Virusul produce un efect incluziogen cu valoare diagnostic, mai ales n infecia natural. Incluziile sunt situate intranuclear. Antigenic nu se constat fenomenul de pluralitate ntlnit la celelalte adenovirusuri. n serul animalelor bolnave sunt prezeni anticorpi precipitani i fixatori de complement. 165

Virusologie general Virusul produce dou boli contagioase distincte: hepatita infecioas a cinilor, care poate afecta i lupii, fa de care receptivitatea maxim o manifest tineretul n vrst de 2-6 luni, caracterizat prin febr, icter, tulburri digestive, rareori nervoase; encefalita vulpilor n care predomin tulburrile respiratorii i mai ales cele nervoase. Imunizarea activ este posibil cu vaccinuri preparate din suspensii de organe recoltate de la ceii infectai experimental, inactivate prin formol i cldur. Virusul laringotraheitei infecioase Este asemntor cu virusul bolii lui Rubarth de care este apropiat i antigenic, nrudire evideniabil prin RFC. Seroneutralizarea i inhibarea hemaglutinrii permit ns diferenierea celor dou virusuri. Tot diferit de virusul lui Rubarth este i absena acinunii hemaglutinante fa de hematiile de cobai. Virusul produce la cine o infecie subacut sau cronic prin tulburri ale cilor respiratorii anterioare (laringit, traheit, bronit). Imunizarea este posibil cu vaccinuri inactivate. n ultimii ani se preconizeaz utilizarea unor vaccinri combinate antihepatit-laringotraheit infecioas i antileptospiric.

Familia IRIDOVIRIDAE

Familia cuprinde trei genuri: Iridovirus, Ronavirus i Lymphocystivirus. Din genul Iridovirus fac parte numeroase specii patogene pentru insecte iar din celelalte dou genuri virusuri parazite pentru vertebrate i amfibii. Numele familiei i al genului este inspirat de Iris, zeitate greac a curcubeului, din cauza faptului c unele materiale bogate n mas viral au un aspect irizat. 166

Virusologie general Genomul este constituit din ADN dublu catenar cu masa molecular 130-160 x 106, reprezentnd 12-16% din particula viral; proporia G + C este de 30-58%. Capsida este icozaedral, format din aproximativ 1.500 capsomere. Dimensiunile particulei virale sunt de 130-300 nm. Unele specii prezint uneori nveli pericapsidal i compui lipidici pn la 14%.

Familia ASFAVIRIDAE

Genul ASFIVIRUS Virusul pestei porcine africane.Virionii au aproximativ 175-220 nm diametru, iar genomul viral, plasat sub forma unui ghem n centrul capsidei icozaedrale, este de 70-90 nm. Numrul probabil de capsomere este de 812 i eventual mai mare. Virionii sunt inactivai la 550C n 30 minute i la 600C n 10 minute. Virusul se cultiv pe embrioni de gin i n culturi de celule, de mduv osoas, de leucocite i de celule renale de porc. Embrionii inoculai mor n 6-7 zile, dac n prealabil virusul a fost pasat de mai multe ori alternativ pe porc i iepure. n culturi celulare are efect hemadsorbant fa de hematiile de porc, hemadsorbia fiind utilizat n scop de diagnostic. Studiul proprietilor antigenice a permis identificarea a 20 variante imunologice distincte. Virionii au un grad nsemnat de rezisten fa de factorii ecologici, mai ales inclui n sngele animalelor bolnave i al cadavrelor, rezistnd sub aceast form, chiar n stare uscat, pe suprafaa obiectelor pn la 70 zile, iar n sol o perioad i mai lung. n carne i preparate de carne virusul a fost pus n eviden la intervale de 15 sptmni n carcase refrigerate, 5 luni n unc, 6 luni n mduva osoas. Virusul este monopatogen pentru porcine, n cursul infeciei avnd loc o multiplicare abundent nsoit de difuzarea virusului prin snge, la nivelul tuturor organelor. 167

Virusologie general Concentraia de virus n sngele porcilor bolnavi poate ajunge att de mare, nct doza minim infectant s fie de 10-11 ml. Virusul se poate multiplica i n organismul unor cpui din genul Ornithodorus, care au un rol important n meninerea focarelor. Pentru diagnosticul etiologic al bolii se pot utiliza testul de hemadsorbie i reaciile serologice de imunodifuzie n gel de agar i imunoflorescen, alturi de ncercri de izolare a virusului n culturi celulare. Virusul nu se preteaz pentru prepararea unui vaccin eficient, avnd o capacitate imunogen relativ redus. Chiar dac capacitatea imunogen a virusului este bun, perioada de njumtire a titrului de anticorpi este scurt de aproximativ 30-45 zile. Acest aspect ar impune o repetare a vaccinrii la intervale prea scurte de timp. Familia PAPOVAVIRIDAE

Numele familiei deriv din ansamblarea silabelor iniiale a celor 3 cuvinte care desemneaz categorii de boli, leziuni sau ageni n care sunt implicate virusurile din aceast familie: PApilomatoz, POlioma, agent VAcuolizant. Virusurile sunt nude, de dimensiuni mici, 45-50 nm, de form icozaedral, uneori i filamentoas. Capsida este constituit din 72 capsomere. Genomul este o singur molecul de ADN dublu catenar cu masa molecular de 3-5 x 106, iar proporia de G + C este 41-49%. Sediul multiplicrii este nucleul. Majoritatea speciilor sunt n mod curent efectiv sau potenial oncogene. Interaciunea virus-celul poate fi la papovirusuri de dou feluri: a) virusul evolueaz intracelular determinnd un ciclu productiv urmat de obicei de un efect litic sau, b) infecia are un caracter abortiv. n celulele transformate genomul viral codific sinteza a 2 antigeni: unul tumoral (T) i altul de transplantare. Primul 168

Virusologie general este prezent mai ales n nucleu, iar al doilea n membrana celular. Responsabilitatea pentru sinteza acestor antigeni revine ADN viral integrat, incapabil s determine sinteza de noi virioni. Reversia genomului integrat poate fi provocat prin iradiere cu ultraviolete sau fuziune ntre celule permisive cu celule nepermisive prin co-cultivarea lor n prezena virusului Sandai inactivat. Unele papovavirusuri sunt hemaglutinante. Toate speciilr sunt rezistente la eter, acizi i cdur. n cadrul familiei se deosebesc dou genuri: Papillomavirus i Polyomavirus, cunoscute i sub denumirile de papovavirus-A i papovavirus-B.Dup al VII-lea Raport al Comitetului Internaional de Taxonomie viral (vezi tabelul 5), familia Papovaviridae nu mai apare ca atare divizndu-se n dou familii care o compuneau de fapt, i anume familia Papillomaviridae i familia Polyomaviridae.

Familia PAPILLOMAVIRIDAE

Genul PAPILLOMAVIRUS Virusurile din acest taxon sunt mai mari comparativ cu genul Polyomavirus; au diametrul de 55 nm, iar masa molecular a genomului este de 5 x 106. Genul cuprinde: - virusul papilomului lui Shope i - virusurile care produc papilomatoza la diferite specii: bou, cal cine i mai rar capr, oaie, hamster, om. Papilomatozele se caracterizeaz la toate speciile prin formarea de tumorete sesile sau pediculate, relativ benigne la nivelul pielii i uneoari al mucoasei bucale (cal, cine). Virusul papilomului lui Shope Se prezint sub form icozaedral, uneori filamentoas i produce la o specie slbatic de iepure Sylvilagus floridanuspapilomatoz cu localizare exclusiv cutanat. Nu se cunosc localizri bucale. La iepurele de cas (Oryctolagus) virusul poate fi transmis experimental prin scarificare, dar tumorile 169

Virusologie general regreseaz spontan.La iepurele de cas virusul pare a se comporta ca un virus defectiv sau mascat, n celulele tumorale fiind posibil evidenierea de genomuri virale i a unor enzime noi (arginaz),dar nu i de virus infecios. Virusul papilomatozei bucale a iepurelui Este diferit de virusurl lui Shope i produce mici tumorete benigne, cu diametrul pn la 5 nm pe gingii sau pe faa inferioar a limbii. Virusul papilomatozei bovine Cel mai important pentru patologia veterinar din cadrul genului, a fost studiat electronooptic n seciuni ultrafine, dovedindu-se a avea o form icozaedral, diametrul de 43-53 nm, capsida constituit din 72 capsomere alungite de 7,5 nm lungime i 5-6 nm lime. Multiplicarea virusului n-a reuit pn n prezent nici n ou embrionate, nici n culturi celulare, dar s-au realizat infecii neproductive a unor culturi celulare. Virusul se integreaz i este capabil s determine n 6-8 sptmni efectul transformant in vitro al unei game destul de variate de celule (celule embrionare de bou, hamster i oarece). n condiii naturale virusul poate afecta taurinele de toate vrstele. Papiloamele de mrimi i forme variate de la mici formaiuni nodulare pn la tumori mari conopidiforme, pot fi localizate pe mameloane, la nivelul buzelor, n jurul ochilor, urechilor, la ceaf etc. Un studiu amplu al transmiterii experimentale a bolii n cadrul speciei natural receptive a fost executat de Vlduiu i col. (1964). Aplicnd excizia papiloamelor, autorii constat c n paralel cu operaia chirurgical are loc i un fenomen de autoimunizare activ antiviral. Mai recent s-a demonstrat receptivitatea n condiii experimentale a hamsterului sugar i a unor linii de oareci (C3H/eB). n aproximativ 100 de zile de la inoculare se formeaz noduli fr tendina de metastazare, care persist timp de 4-6 luni. Virusul papilomatozei equine afecteaz mai des caii ntre 1 i 3 ani, producnd tumorete caracteristice de 2-10 nm n numr variabil, localizate mai ales pe botul animalului i n 170

Virusologie general jurul buzelor, care persist timp de aproximativ 18 luni. La examenul histopatologic se observ incluzii intranucleare. Virusul papilomatozei canine Determin formarea de papiloame cu localizare exclusiv la nivelul buzelor i pe mucoasa bucal (gingii, limb, vlul palatin, farinx). infecia este mai frecvent la tineret.

Familia POLYOMAVIRIDAE

Genul POLYOMAVIRUS Poliomavirusurile sunt mai mici dect virusurile papilomatozelor, au diametrul de 54 nm i un genom cu masa molecular de 3 x 106 daltoni. Un fenomen interesant observat la unele din aceste virusuri l constituie faptul c efectul transformant este absent la gazda natural receptiv, dar prezent la alte specii infectate experimental sau n culturi celulare. Relativ constant efectul oncogen se manifest la hamsteri nou nscui cu stri de deficit imunologic. Transformarea malign se datorete integrrii genomului viral n cromozomul celulei gazd. Virusul polyomei se ncadreaz morfologic n caracterele specifice genului: are proprieti hemaglutinante. Prezent sub form biofit la oarecii slbatici, produce rareori tumori maligne la specia care-i servete ca biotop. In vitro poate fi izolat n culturi celulare primare i secundare de oarece, obolan i hamster, producnd plaje n celulele permisive i efect oncogen n cele nepermisive. Virusul SV40 (Simian vacuolating virus 40) s-a izolat n 1960 din celule renale normale de maimu. n culturi celulare produce leziuni vacuolizante n citoplasm. n celule nepermisive determin efect oncogen. Alte specii identificate n cadrul genului Polyomavirus sunt: 171

Virusologie general virusul K (al pneumoniei oarecelui), agentul unor leziuni pulmonare sau hepatice la oarece, capabil de efect oncogen numai n culturi celulare; virusul tumorilor renale, cu efect oncogen asupra esutului renal n condiii naturale la diferii peti de aquarium (Pristella riddlei, Labistes reticulatis etc.); virusul vacuolant al esutului renal de iepure, asemntor morfologic cu virusul SV40, hemaglutinant pentru globulele roii de cobai, agentul unor infecii latente la unele specii de iepure la care produce efectul vacuolant caracteristic.

Familia PARVOVIRIDAE

Subfamilia PARVOVIRINAE

Parvo sau picodnavirusurile constituie un grup restrns de virusuri, caracterizat prin dimensiuni foarte mici, de 18-26 nm diametru, cu capsida icozaedral compus din 32 capsomere i diametrul de 3-4 nm. Genomul este constituit dintr-o molecul de ADN monocatenar, cu masa molecular de 1,5-2,2 x 106; proporia G + C este de 41-53%. Numele de parvovirusuri este inspirat de dimensiunile foarte mici (parvus = mic), iar cel de picodnavirusuri de dimensiuni mici, plus natura genomului (pico = mic; dna = DNA). Virusul este rezistent la eter i termostabil. Multiplicarea are loc n nucleu i este condiionat de anumite activiti ale celulei gazd sau de intervenia unor virusuri ajuttoare (helper). Parvoviridele se mpart n trei genuri: - Parvovirus; 172

Virusologie general Erythrovirus: Virusul B19 Dependovirus: Virusul 2 adenoasociat

Genul PARVOVIRUS Include parvovirusurile capabile de autoreplicare prin mijloace proprii: din aceast categorie fac parte: virusul latent al obolanului (Kilham); virusurile osteolitice H ale hamsterului; virusul leucopeniei infecioase a pisicilor; virusul hepatitei bobocilor de gsc i unele parvovirusuri bovine i suine. Virusul panleucopeniei pisicilor Virionii corespund morfologic caracterelor genului i familiei. Dimensiunile lor sunt de 20-25 nm; capsida este icozaedral, pericapsida absent, iar genomul constituit din ADN dublu catenar este principalul argument pentru ncadrarea acestui virus n grupa parvo; este rezistent la eter, cloroform i tripsin; conine o hemaglutinin, legat de capsid i activ fa de globulele roii de porc. Virusul se cultiv n celule renale de pisic, n care produce efect citopatic vizibil numai dup colorarea monostratului; nu se cultiv pe ou embrionate. n condiii naturale, virusul este patogen pentru pisici, la care produce o infecie cunoscut sub denumirile: panleucopenie, enterit infecioas, agranulocitoz, jigodia pisicilor i pentru vidre, la care produce o enterit infecioas. Aceste boli sunt caracterizate printr-o capacitate mare de difuziune, un procent ridicat de mortalitate i un tablou clinic n care principalele simptome sunt anorexia, vomismentele, febra mare i leucopenia. La nevoie se pot prepara vaccinuri inactivate din organe i esuturi ale pisicilor infectate experimental, cu adaos de adjuvant sau vaccinuri vi atenuate pe culturi de celule renale de pisic.

173

Virusologie general Virusul parvovirozei canine Virionul are o structur izomeric, fr nveli pericapsidal, cu dimensiuni de 18-26 nm i o simetrie icosaedric. Iniial a fost izolat de Binn n 1970 denumit i CV-1 (Canin Parvovirus tip 1) ulterior de Eugster i colab. fiind denumit CPV 2 (Canin Parvovirus tip 2). Parrish i colab. n SUA descriu dou variante ale virusului CPV-2 denumite CPV-2 a i CPV-2b. Tipul CPV-2 este considerat agentul etiologic al gastroenteritei hemoragice a carnasierelor i este nrudit antigenic cu virusul panleucopeniei infecioase feline. Parvovirusurile porcine izolate prima oar n 1967, sunt mici, icozaedrale, avnd caractere identice cu celelalte parvovirusuri. Nepatogene pentru embrion, sunt cultivabile pe celule renale de porc. Patogene mai ales pentru embrioni, aceste virusuri se izoleaz n special din avortoni, mucus vaginal i sperm, atribuindu-se un rol etiologic n unele stri de sterilitate la suine. Din acest gen mai fac parte virusul enteritei virotice a nurcilor, virusul plasmocitozei nurcilor (Boala de Aleutine) i virusul bolii lui Derszy.

Genul DEPENDOVIRUS Cuprinde Parvovirusurile adeno-asociate, considerate n ultimul timp ca gen aparte i numite aa, din cauza caracterului lor defectiv care le face dependente de un hepter care, n majoritatea cazurilor, este un adenovirus. Parvovirusuri adeno-asociate au fost identificate la om (trei tipuri), bovine, cine i psri. n condiii de laborator aceste virusuri sunt cultivabile n culturi celulare, tot numai n asociaie cu helperul.

174

Virusologie general

CLASA RIBOVIRA
Familia CORONAVIRIDAE

Membrii acestei familii sunt polimorfi, cu un diametru de 100 nm i prezint la exterior un peplos format din peplomere uniforme cu aspect de mciuc, care proemin la suprafaa particulei virale. Genomul este format dintr-o singur molecul de ARN monocatenar cu masa +de 9 x 106. Multiplicarea are loc n citoplasm, iar eliberarea virusului din celula gazd are loc prin nmugurire. Familia cuprinde un singur gen- Coronavirus. Prefixul familiei i genul vine de la corona = n limba latin coroan, corelat cu aspectul morfologic rezultat din forma i modul de aezare al peplomerelor. Familia cuprinde dou genuri: Coronavirus i Torovirus

Genul CORONAVIRUS Caracterele genului se identific cu ale familiei. El cuprinde mai multe specii patogene pentru mamifere sau psri. Mai importante pentru medicina veterinar sunt: virusul bronitei infecioase a puilor de gin;virusul diareei epizootice porcine, virusurile encefalomielitei porcine, virusul gastroenteritei infecioase a porcului, Coronavirus bovin, ecvin, canin, felin i a curcilor. Virusul bronitei infecioase a puilor de gin Structural, virusul corespunde caracterelor generale ale familiei. Virionii au 80-120 nm n diametru i sunt deseori polimorfi, fiind semnalat i prezena unor forme pedunculate sau mciucate. Pe suprafaa peplosului sunt prezente expansiuni lungi de 20 nm, asemntoare cu cele ale myxovirusurilor. 175

Virusologie general Cultivarea se realizeaz pe embrioni de 9-12 zile inoculai pe membrana corioalantoidian sau intraamniotic. Virusul necesit o etap de adaptare, dar dup 5-10 treceri oarbe, embrionii ncep s prezinte leziuni caracteristice (se micoreaz, se ratatineaz) i mor ntr-o proporie pn la 50%. Dup un numr mai mare de treceri pe embrioni, virusul se atenueaz fr a-i modifica proprietile antigenice. Unele tulpini au fost cultivate n celule embrionare de gin, iar altele i n celule renale de maimu. Tulpina Beaudette adaptat pe ou embrionate a produs sinciii din fuziunea celulelor renale de gin, fenomen urmat de formarea de plaje. n condiii variate in vivo i in vitro, virusul bronitei infecioase se interfereaz cu virusul de Newcastle, fenomen care i-a gsit n ultimul timp i o aplicaie n scop de diagnostic (testul de interferen). Antigenic au fost descrise 6 tipuri, mai rspndite i mai cunoscute fiind tipul Connecticut i Massachusetts. Virusul este sensibil fa de factorii fizici i chimici. Prin nclzire se inactiveaz n 15 minute la 500C. Soluiile dezinfectante distrug virusul n concentraii uzuale. Sub form congelat, ntr-o soluie de glucoz 10%, virusul rezist n embrioni timp de ani de zile. Infecia natural se ntlnete la gini, cu o simptomatologie i evoluie n funcie de vrst. Formele cele mai grave cu evoluie enzootic i procent ridicat de mortalitate sunt caracteristice puilor. Tabloul anatomopatologic se caracterizeaz prin semne i leziuni inflamatorii la nivelul mucoaselor respiratorii, nazal, traheal, bronic, a sinusurilor i a sacilor aerieni. La ginile adulte, infecia evolueaz deseori inaparent sau prin tulburri ale ouatului, consecutiv localizrii virusului n organele de reproducere (Taga i col., 1965). Seroneutralizarea, imunodifuzia i imunoflorescena direct sunt reacii deosebit de sensibile utilizabile n serodiagnostic. Vaccinarea se poate face att cu vaccinuri inactivate, ct i cu vaccinuri vii atenuate prin treceri repetate pe embrioni. Sau experimentat cu succes i vaccinuri vi atenuate mixte n care virusul bronitei infecioase este asociat cu un virus de Newcastle. La noi n ar se folosete un vaccin viu atenuat sub 176

Virusologie general form liofilizat, preparat dintr-o tulpin de tip Massachusetts. Vaccinurile inactivate dau n general rezultate slabe, cu excepia celor cu betapropiolacton. Virusul gastroenteritei infecioase a porcului Structura virionului este icozaedral, diametrul de 90200 nm, iar capsida este format din 252 capsomere. Expansiunile mciucate de pe suprafaa pericapsidei au 18-24 nm, iar dilataiile distale ale acestora au 10 nm n diametru. Virusul este sensibil la eter, cloroform, acizi i dezoxicolat de sodiu. Cultivarea este posibil n culturi celulare embrionare sau adulte de porc n care majoritatea tulpinilor, cu excepia unora, se multiplic fr a produce efect citopatic. Prin treceri pe culturi celulare, virusul se atenueaz i poate fi folosit pentru prepararea de vaccinuri. Cultivarea pe embrioni nu a reuit pn n prezent. Unele tulpini interfereaz n culturi celulare cu virusul bolii lui Aujeszky i cu virusul bolii mucoaselor. Interferena cu acesta din urm i-a gsit o utilizare n identificarea tulpinilor necitocide de virus al gastroenteritei transmisibile. Virusul este sensibil fa de factorii de mediu i se conserv cel mai bine la temperatura de 200C. Infecia natural afecteaz numai porcinele i se caracterizeaz prin leziuni edematoase, hemoragice i necrotice n stomac i intestin i modificri degenerative n rinichi. Boala evolueaz mai grav, cu un procent de mortalitate de 100% la purceii sugari, n primele zile dup ftare. La porcii aduli, infecia evolueaz benign sau inaparent. Reaciile serologice pot fi utilizate pentru diagnosticul etiologic al bolii; cea mai sensibil este seroneutralizarea n culturi celulare a unui virus citopatogen de referin cu seruri de la animale trecute prin boal. Prin imunoflurescen, antigenul viral poate fi pus n eviden n amprente din organele mai bogate n virus amigdale, intestin, ganglioni. Imunizarea activ este posibil cu vaccinuri preparate din tulpini vii i atenuate. Vaccinurile inactivate au un grad de eficien mai redus.

177

Virusologie general Virusul diareei epizootice porcine se deosebete antigenic de virus gastroenteritei transmisibile ct i de alte coronavirusuri ( citat de Penaezt i col., 1978). El se gsete constant n coninutul intestinal al purceilor bolnavi i n citoplasma celulelor epiteliale. Virusul encefalomielitei de Ontario Semnalat n mai multe ri din America de Nord i n Anglia, este agentul unei boli a purceilor, caracterizat prin vomismente violente, slbire i emanciere progresiv urmat de o encefalomielit cu evoluie fatal. Virusul are 150 nm, iar expansiunile de pe suprafaa pericapsidei sunt lungi de 20 nm; se cultiv n celule renale de porc determinnd formarea de sinciii. Coronavirusurile bovin, ecvin, canin i a curcilor sunt implicate n enteritele tineretului n primele 3 sptmni de via. Virusul peritonitei infecioase feline este antigenic nrudit cu virusul gastroenteritei transmisibile a porcului i coronavirusul canin. n structura virusului s-au identificat 3 tipuri de antigene: P (proteine din peplomere), M ( proteine din nveli) i N (proteine capsidale). ntre tulpinile de Coronavirus felin exist diferene de antigenitate i patogenitate. Astfel, unele tulpini determin o form mortal de peritonit infecioas felin, dar cu o frecven sporadic, iar altele determin o enterit benign sau mai frecvent o infecie asimptomatic (Eliot, 1994) citat de Perianu T., 1997.

Genul TOROVIRUS n acest gen sunt ncadrate Torovirusul ecvin (specia tip a genului) i virusul Breda care determin enterita cu virusul Breda la viei. Virusul Breda s-a izolat n 1974 n timpul unui episod de diaree neonatal la viei n Jawa ( Woode i col. 1974). S-a constatat c difer antigenic de celelalte virusuri bovine cunoscute i n special de coronavirusuri. Prin testele de hemaglutinare, inhibarea hemaglutinrii, E.L.I.S.A. i 178

Virusologie general imunoelectronomicroscopie s-au evideniat dou serotipuri, serotipul 1 (Jawa) i serotipul 2 (Ohio), care este nrudit antigenic cu virusul Berne, izolat n Elveia de la un cal n 1972. Virusul Berne, are structura morfologic i chimic apropiate de virusul Breda ceea ce a permis ncadrarea lor n genul Torovirus.

Familia PARAMYXOVIRIDAE

Prima parte a prefixului para are n limba greac semnificaia de alturi de, n sensul sublinierii existenei unor abateri de la nsuirea tipic (orthos) a entitii respective. Virusurile din aceast familie au un grad mai accentuat de polimorfism i sunt mai mari ca orthomyxovirusurile. Virionii au de obicei forma sferic sau neregulat globuloas, cu diametrul de 150-250 nm. Nucleocapsida este filamentoas, are structura helical-flexibil, este mai groas comparativ cu cea a orthomyxovirusurilor, avnd diametrul de 17-18 nm. Lungimea variaz ntre 500-1.000 nm. Fiecrei spirale a helixului i corespunde aproximativ 15 capsomere, numrul lor total fiind n funcie de lungime. Din structura nveliului face parte constant un peplos lipoproteic, dublu stratificat, cu proeminene la suprafa, care nvelete nucleocapsida helical pliat sub forma unui ghem. Pe suprafaa sa se gsesc hemaglutininele de natur glicoproteic i uniti de neuraminidaz. Genomul viral, constituit dintr-o singur pies este o molecul de ARN monocatenar cu masa molecular de 5-8 x 106. Biosinteza virusurilor n celula gazd se realizeaz prin transcrierea de pe genomul viral a informaiei genetice printr-o ARN polimeraz ARN dependent pe un ARNm complementar. Analiza chimic cantitativ a paramyxovirusurilor a demonstrat c proteinele reprezint 70% din masa total viral, lipidele 20-40%, iar ARN aproximativ 0,9%. Activitatea hemaglutinant la paramyxovirusuri se transform n timp spre deosebire de orthomyxovirusuri ntruna hemolitic. 179

Virusologie general Eterul, cloroformul i pH 3 le inactiveaz, iar temperatura de 370C nu le asigur un grad suficient de stabilitate; sunt sensibile la aciunea actinomicinei D. La 700C se pot conserva timp de mai muli ani, adugarea de ser de bou 0,5% are un efect stabilizant. Majoritatea paramyxovirusurilor se multiplic n ou embrionat de gin dup cum i n diferite celule i produc incluzii oxifile intraplasmatice i n unele cazuri, intranucleare. Recombinrile genetice ntre specii sunt extrem de rare. Paramyxovirusurile sunt antigenic stabile. Familia cuprinde dou subfamilii i zece taxoni de rangul genului i anume: Paramyxovirus, Morbilivirus, Rubulavirus, Respirovirus; Subfamilia Pneumovirinae cu genurile: Pneumovirus, Metopneumovirus; Subfamilia Rhabdovirinae cu genurile: Veziculovirus, Lyssavirus, Ephemerovirus, Novirhabdovirus.

Genul RUBULAVIRUS Virusul pseudopestei aviare (Newcastle) Istoric. Primele semnalri dateaz din 1926 Kraneveld n Djawa i Doyle n Newcastle; Burnet i Fevry (1934) reuesc primii s cultive virusul. La noi n ar diagnosticul i prima descoperire, sub numele de boala de Filaret aparine lui Pop i col., 1943. Structura i proprietile virionului. Virionul are n ansamblul lui o form globuloas, de 100-250 nm. Nucleocapsida este helical, cu diametrul transversal de 17 nm. Genomul este constituit dintr-un lan de ARN lung de 1 micron. Pericapsida prezint pe suprafa expansiuni lungi de 8 nm. Prin tratare cu eter se produce dezagregarea virusului, rezultnd rozete mai mari i mai neregulate ca n cazul virusului pestei clasice, cu diamtrul de 35-65 nm. Datorit componentelor lipidice ale pericapsidei, virusul este sensibil la eter i cloroform. Cultivabilitate. Multiplicarea este abundent att n ou embrionate ct i n culturi celulare embrionare de pasre. 180

Virusologie general Vrsta optim a embrionilor este de 3-14 zile. Dup inoculare, ei mor n 24-48 ore cu leziuni hemoragice la nivelul mebranei corioalantoidiene i pe suprafaa embrionului, mai ales n regiunea capului i gtului. Deseori, pe membrana corioalantoidian apar i zone de opacifiere n care, histologic, se observ stratificarea epiteliului nsoit de degenerarea balonizant a acestuia i prezena de incluzii oxifile. n componentele embrionului i mai ales n lichidul alantoamniotic virusul este prezent n cantiti foarte mari, titrul hemaglutinant i infectant al lichidului ajungnd la 10-10. Multiplicarea virusului este posibil i n embrioni ai unor specii mai puin receptive ra, gsc. Virusul se multiplic n diferite sisteme celulare. Condiiile cele mai bune le ofer n acest scop celulele embrionare de gin; pot fi ns utilizate i diferite celule mamifere, ca cele de iepure, viel, porc, maimu, rinichi de hamster sugar (BHK), linia HeLa. Titrul obinut n culturi celulare este ns cu un logaritm mai mic coparativ cu cel din compartimentele menionate ale embrionului de gin. Efectul asupra celulelor se reflect n formarea de sinciii, apariia incluziilor intracitoplasmatice, efect citopatic. Uneori culturile celulare fac infecii cronice, producnd virus, fr apariia efectului citopatic. Evidenierea virusului n oul embrionat i n culturi celulare este uor posibil prin reaciile de hemaglutinare i hemadsorbie. Proprieti hemaglutinante. Materialul viral aglutineaz chiar n concentraii foarte mici eritrocitele de pasre. Dintre hematiile mamiferelor cel mai bine sunt aglutinate cele de cobai i de om de grup O. Efectul hemaglutinant se manifest i fa de globulele roii de oaie i bou. Hematiile de cal sunt aglutinate numai de tulpinile lentogene. n concentraii mari, virusul are chiar un efect hemolitic fa de globulele roii de pasre, oaie i om.. Titrul hemaglutinant variaz de la tulpin la tulpin, ntre limite largi, 1/160-1/5.000. Proprieti antigenice. Prin tratare cu eter pot fi separate 2 feluri de antigeni virali: antigenul V reprezentat de rozetele de hemaglutinine i antigenul S constituit din nucleoprotein. Ei sunt identici la toate tulpinile, virusul caracterizndu-se prin omogenitate antigenic; n-au fost 181

Virusologie general descrise pn n prezent tipuri imunologic distincte. n serul psrilor bolnave sau trecute prin boal se deceleaz anticorpi specifici al cror titru variaz ntre 1/10 la 1/200 i chiar mai mult. Reaciile cele mai sensibile pentru evidenierea anticorpilor sunt inhibarea hemaglutinrii i seroneutralizarea in vitrope un virus cunoscut, verificat apoi prin inoculare pe embrioni. Sensibilitatea fa de factorii ecologici. Comparativ cu alte virusuri rezistena virusului de Newcastle fa de factorii naturali ai mediului exterior este relativ mai mare. n stare uscat virusul se conserv la 200C timp de 1-3 ani, n carcase congelate timp de 134-180 zile, n cadavre ngropate pn la 30 zile. n ap virusul rmne viu timp de 2 sptmni. Saramurarea i afumarea nu afecteaz viabilitatea virusului. Sub aciunea factorilor artificiali - nclzire, dezinfecie, virusul este distrus relativ uor. La 550C este inactivat n 45 de minute, iar substanele ca hidroxid de sodiu 2%, clorura de var 5%, sublimatul 1% etc. l distrug n cteva minute. Lizolul, fenolul i crezolul n concentraii de 2-3 % au acelai efect n 5 minute. Aciunea formolului este dependent de temperatur. n incubatoare efectul sterilizant sub form de vapori este asigurat de o concentraie de 0,1% ntr-un interval de 6 ore. n soluie, adugat n proporie de 1/5.000, inactiveaz virusul purificat ntr-o or. Patogenitatea. Se manifest n condiii naturale fa de psri i numai n condiii excepionale fa de om sau alte mamifere. La om au fost semnalate conjunctivite din care s-a izolat virusul. n condiii experimentale, este nepatogen pentru oarece i alte mamifere, cu excepia hamsterului. Tulpinile izolate din cazuri de boal natural pot prezenta grade diferite de patogenitate, pe baza acestui criteriu deosebindu-se trei tipuri: tipul velogen, care cuprinde tulpinile cu virulen plin. Acestea sunt egal patogene, att pentru psrile adulte ct i pentru pui. Ele produc epizootii n care procentul de mortalitate i morbiditate este foarte ridicat n cazul neaplicrii msurilor adecvate de profilaxie i combatere. tipul mezogen, care cuprinde tulpinile de virulen mijlocie, patogene pentru pui pn la aproximativ 2 182

Virusologie general luni, dar nepatogene pentru psrile adulte. Tulpinile pot fi folosite ca vaccinuri la psrile adulte. tipul lentogen, care cuprinde tulpini total atenuate, incapabile s infecteze n condiii naturale i nici experimentale puii dup ecoloziune. Ele i pstreaz patogenitatea numai pentru embrioni i sunt utilizate pentru vaccinarea puilor. Criteriile accesibile examenului de laborator, pe baza crora se poate stabili dac o tulpin este velo, mezo sau lentogen, sunt urmtoarele: - intervalul de timp n care tulpina produce maortea embrionilor n vrst de 10 zile; - patogenitatea pentru puii de o zi inoculai intracerebral; Factorii de care depind diferenele de patogenitate n-au putut fi stabilii cu precizie. Bercea i col. (1977), ncercnd s stabileasc o eventual corelaie ntre patogenitate i compoziia n aminoacizi a tulpinii, ajung la concluzia c cele trei tipuri de virus Newcastle conin aceiai aminoacizi n proporii apropiate i emit ipoteza existenei unor eventuale diferene n secvena aminoacizilor din lanurile polipeptidice componente ale proteinei virale. Proprieti imunogene. Virusul de Newcastle este imunogen i confer stri de imunitate solide care depind de patogenitatea tulpinii, cantitatea de virus i calea de administrare. n practic imunoprofilaxiei pseudopestei aviare, se aplic imunizarea activ; n acest scop poate fi utilizat o gam larg de vaccinuri, dup cum urmeaz: vaccinuri vii i atenuate vaccinurile preparate din virusuri lentogene, cum sunt: tulpina B1 izolat de Hitchner i Johnson (1948); tulpina F de Aspin, (1952) i LaSota de Winterfield i col. (1957); aceasta din urm este utilizat n momentul de fa la noi n ar; pentru imunizarea activ a puilor se aplic metode de vaccinare colectiv, virusurile mai sus menionate fiind administrate prin aerosoli sau n apa de but.; vaccinuri preparate din virusuri mezogene, cum sunt: tulpinile MK (Mukteswar), 107 (Lederle), 183

Virusologie general Roakin, Komorov i H (Hertfordshire); aceasta din urm s-a folosit cel mai mult la noi n ar pentru vaccinarea psrilor adulte i a puilor peste 2 luni; se exploateaz n prezent i posibilitatea utilizrii n acelai scop a tulpinilor Roakin; vaccinuri inactivate, preparate din embrioni infectai cu o tulpin velogen, n care inactivarea virusului se face cu formol, dup care se adaug ca adjuvant hidroxid de aluminiu dup tehnica preconizat de Traub i modificat la noi n ar de Suhaci i col. Imunitatea pasiv cu seruri antipseudopestoase aviare este posibil ntruct titrul protector al serului psrilor hiperimunizate ajunge la valori superioare, dar nu se aplic n teren din motive economice. Din genul Rubulavirus mai face parte virusul Oreionului, care determin parotidita epidemic (oreionul) la om. Are fore sferice cu diametru de 90-180 nm. Virusul urlian poate fi izolat din saliv, snge i lapte de femei i se cultiv cu uurin pe sacul amniotic al oulor embrionate pe celulele HeLa unde produce i efecte citopatice vizibile.

Genul PARAMYXOVIRUS Virusurile parainfluenelor Pe baza structurii antigenice, a specificitii de gazd i a patogenitii se deosebesc 4 biotipuri: - tipul 1 patogen pentru om i oarece, - tipul 2 pentru om, maimu, cine i psri, - tipul 3 pentru om, cal i bou, - tipul 4 pentru om. Morfologic, ele nu se deosebesc de celelalte paramyxovirusuri. Cultivarea este posibil n diferite sisteme celulare. Efectul citopatic este relativ ters, dar prezena virusurilore este decelabil prin imunoforescen i hemadsorbie (monostratul n care s-a multiplicat virusul adsoarbe globulele roii de cobai). Tipurile 1 i 3 determin formarea de incluzii oxifile intranucleare n celulele infectate. Tipurile 1-3 pot fi 184

Virusologie general adaptate pe ou embrionate prin treceri n serie. Tipul 4 n-a reuit s fie adaptat pe embrion. Virusul parainfluenei 1 Cuprinde un tip uman caracterizat printr-o hemaglutinin distinct (HA-2). Cultivarea este posibil n ou embrionate i n diferite sisteme celulare cu particularitile deja menionate n caracterizarea general a virusurilor parainfluenelor. Tipul HA-2 uman este implicat, singur sau asociat cu ali ageni, ca factor etiologic n lariongotraheite i alte afeciuni respiratorii la copii i mai rar la aduli. Mai recent, virusul a fost izolat din creier de la bolnavi de scleroz, fr a i se putea atribui un anumit rol etiologic. Virusul parainfluenei 2 Este nrudit cu virusurile simiene SV5 i SV41 i cu virusul pojarului, dar distinct antigenic de alte myxovirusuri. Cultivarea reuete uor n ou embrionate, dar titrul hemaglutinant al lichidului alantoamniotic este redus; n culturi celulare de om, maimu i cine se multiplic producnd efect citopatic n 3-4 zile, cu formarea de sinciii i incluzii intracitoplasmatice. n condiii naturale, virusul produce o laringo-traheobronit acut la copii. Majoritatea tulpinilor sunt patogene experimental pentru cobai i hamster pe cale intranazal. Virusul parainfluenei 3 (PI 3) Este cel mai important pentru medicina veterinar. El are o nucleocapsid helical cu diametrul de 110-240 nm, nvelit de peplos. Diametrul ntregii particule virale poate ajunge la 300 nm. n diferite sisteme celulare produce celule gigante multinucleate sau sinciii. Tulpinile bovine se multiplic cel mai bine n celule de viel, bivol, capr, cal i n celule renale de porc, dup cum i pe liniile HeLa i HEp 2. n celulele infectate se formeaz incluzii intracitoplasmatice i intranucleare. Tulpinile umane nu produc incluzii intranucleare n celulele HEp 2. 185

Virusologie general Tulpinile adaptate n culturi celulare se dezvolt bine i n ou embrionate n care sunt evideniabile hemaglutininele. Virusurile de origine equin se izolaeaz mai greu, necesitnd o prealabil adaptare, virusul parainfluenei 3 poteneaz n unele sisteme celulare virusul de Newcastle, aciunea celor dou virusuri fiind sinergic. Virusul parainfluenei 3 prezint trei subtipuri, nrudite antigenic, cu celelalte paramyxovirusuri, dar distincte de orthomyxovirusuri. Subtipul uman este agentul unor afeciuni la copii; el poate fi difereniat serologic de celelalte dou subtipuri prin RFC, seroneutralizare i inhibarea hemaglutinrii i prin absena incluziilor. Subtipul bovin, cel mai important pentru patologia veterinar, produce n condiii de stres (transporturi, aglomerri, temperaturi sczute etc.) afeciuni respiratorii. Boala este cunoscut sub numele de parainfluen, febr de transport sau boala de Umea (numele unei localiti din SUA). Virusul parainfluneei 3 este nepatogen pentru animalele de laborator. Deseori virusul acioneaz sinergic cu alte virusuri cum este virusul VD-MD, cel al rinotraheitei infecioase sau cu bacterii din genul Pasteurella. n practic se folosete un vaccin inactivat care poate fi aplicat singur sau simultan cu alte vaccinuri. Subtipul equin produce afeciuni respiratorii la cabaline i este mai frecvent n Canada i SUA. Virusul parainfluenei 4 A fost izolat de la copii cu infecii respiratorii; se cultiv pe celule renale de maimu; cuprinde dou subtipuri notate cu A i B; este nrudit antigenic cu virusul pojarului.

Genul RESPIROVIRUS Virusul Sendai se gsete de obicei ntr-o form latent la oarece, dar prin treceri pe cale intranazal i exalt 186

Virusologie general patogenitatea i produce pneumonii asemntoare cu cele caracteristice virusului gripal.

Genul MORBILIVIRUS Virusurile aparinnd acestui gen sunt nvelite de peplos, care conine hemaglutinine, dar spere deosebire de genul Paramyxovirus, nu conin neuraminidaz. Nucleocapsida este helical cu diametrul de 18 nm. Genul cuprinde trei specii foarte diferite sub aspectul spectrului de patogenitate i al caracterului infeciilor pe care le produce, dar foarte apropiate antigenic; acestea sunt: virusul pojarului, virusul pestei bovine i virusul jigodiei. Virusul pojarului Specie patogen exclusiv pentru om; produce pojarul la copii, boal caracterizat curent prin febr i erupie cutanat i mai rar prin inflamaia cataral a mucoaselor i encefalomielit. Virusul se cultiv pe celule de om i maimu n care formeaz celule sinciiale gigante cu incluzii intranucleare. Efectul citopatic apare mai rapid i este mai caracteristic dup o prealabil adaptare prin mai multe treceri. Virusul reacioneaz ncruciat prin imunoflorescen i RFC cu virusul pestei bovine i al jigodiei (bolii lui Carr). Vaccinarea contra pojarului este posibil cu virusuri inactivate sau atenuate. Rezultatele bune s-au obinut cu tulpina avianizat Edmonston, cultivat pe embrioni de gin sau celule renale de cine. Virusul pestei bovine Virusul are caracterele generale ale genului. Virionul are o form corpuscular i diametrul de 90-250 nm. Filamentele nnucleocapsidei pot ajunge la 500-1.000 nm lungime. Diametrul dublu al helixului este de 18 nm. Cultivarea lui este posibil n culturi celulare i pe embrioni de gin. n diferite sisteme celulare produce sinciii cu incluzii mai oxifile n citoplasm i uneori altele mai mici intranucleare. Fa de factorii fizici i chimici uzuali este mai sensibil comparativ cu 187

Virusologie general alte virusuri; se conserv un timp mai ndelungat cteva lunin carnea congelat, imediat dup sacrificare. Virusul este patogen pentru diferite specii de rumegtoare domestice i slbatice, dar mai ales pentru taurine. Pesta bovin este o infecie grav caracterizat prin leziuni catarale i necrotice ale mucoaselor, mai ales a mucoasei intestinale, cu un grad ridicat de contagiozitate i un procent mare de mortalitate i morbiditate. n condiii experimentale, virusul poate fi adaptat pe oaie, capr, iepure, hamster i oarece. n organismul hamsterului interfereaz cu virusul febrei vii lui Rift; tulpinile virulente pot interfera cu cele atenuate, fenomen care alturi de rspunsul imun concur la efectul vaccinurilor atenuate. Proprietile imunogene ale virusului au determinat prepararea i experimentarea mai multor feluri de vaccinuri. Tulpinile vaccinale se obin prin adaptarea virusului pe specii nereceptive n condiii naturale. Prin adaptarea pe capr s-a obinut vaccinul caprinizat, pe iepure vaccinul lapinizat i pe embrioni de gin vaccinul avianizat. ara noastr este, pn n prezent, indemn de pest bovin.

Virusul jigodiei (bolii lui Carr) Structura i proprietile virionului sunt cele caracteristice genului. Dimensiunile particulei virale sunt de 90-250 nm. Cultivarea reuete n bune condiii n culturi celulare renale de cine i dihor. Efectul se caracterizeaz prin formarea de celule gigante i prezena incluziilor intracitoplasmatice. Cultivarea pe embrioni de gin se realizeaz mai greu, necesitnd mai multe treceri oarbe prealabile. Efectul hemaglutinant este mai slab i mai inconstant dect la alte myxovirusuri. Tulpinile avianizate n condiiile unei concentraii ridicate de virus produc aglutinarea hematiilor de pasre i cobai. Date incerte exist i cu privire la aglutinarea globulelor roii de om i broasc. Virusul este sensibil fa de factorii de mediu. Virusul este omogen din punct de vedere antigenic i nrudidt cu celelalte dou specii din genul Morbilivirus. Relaiile 188

Virusologie general antigenice sunt ilustrate prin urmtoarele fenomene i reacii imunologice ncruciate: - cinii i dihorii vaccinai cu virusul pojarului se imunizeaz contra jigodie; - n serul cinilor trecui prin jigodie se gsesc anticorpi fa de virusul pojarului, iar n serul oamenilor vindecai de pojar se gsesc anticorpi neutralizani fa de virusul jigodiei; - virusul pestei bovine produce un grad de imunitate fa de virusul jigodiei; - serul bovinelor cu imunitate antipestoas conin anticorpi neutralizani fa de virusul pojarului. Virusul este patogen pentru canide (cine, vulpe, lup etc.), mustelide (dihor, vidr, nurc, nevstuic etc.) i procyonide (bursuc etc.). n faza incipient, virusul manifest un pneumotropism evident, primele simptome fiind respiratorii. Ulterior sunt afectate i alte aparate i sisteme, mai ales cnd evoluia bolii este mai lung. n astfel de cazuri pot apare modificri anatomo-clinice digestive, nervose, cutanate etc. Pentru diagnosticul etiologic al bolii se poate utiliza, n vederea pentru evidenierea virusului n amprente din diferite organe pulmon, creier, stomac, mucoas palpebral, vezic urinar etc. reacia de imunoflorescen, imunodifuzie i RFC. Infecia experimental poate fi reprodus pe dihor, nevstuic sau cei. Dihorul este cel mai sensibil, folosirea lui pentru bioprob fiind considerat ca un test de certitudine. Inocularea se face cu suspensii de splin, pulmon i creier, recoltate de la cadavre sau cu snge de la animale bolnave. n imunoprofilaxia jigodiei se poate aplica att imunizarea activ cu diferite vaccinuri, ct i cea pasiv cu ser antijigodios. Vaccinurile se prepar din embrioni de gin sau culturi celulare n care s-au multiplicat tulpini avianizate sau lapinizate. Datorit strnsei nrudiri antigenice cu virusul pojarului, acesta poate fi utilizat ca vaccin antijigodios. Vaccinul aplicat la noi n ar se prepar din tulpina avianizat Onderspoort-Haig. La efectul vaccinurilor atenuate concur, pe lng aciunea imunizant i interferena dintre tulpinile atenuate i cele virulente. 189

Virusologie general

Subfamilia PNEUMOVIRINAE

Genul PNEUMOVIRUS Genul Pneumovirus se deosebete de genurile Paramyxovirus i Morbillivirus prin absena hemaglutininei i a neuraminidazei din peplos. Nucleocapsida este helical i are un diametru de 14 nm. Virusurile din acest gen se cultiv relativ uor n culturi celulare provenite de la specii natural receptive, unde produc efect sinciial. Sinciiile prezint numeroi nuclei i incluzii mici intracitoplasmatice. Culturile n care s-a multiplicat virusul sunt lipsite de proprieti hemaglutinante i hemadsorbante. n cadrul unor clasificri nc n circulaie aceste virusuri sunt reunite n grupa metamyxovirusurilor, fiind considerate ca o grup aparte, separat de orto i paramyxovirusuri. Virusul sinciial respirator Izolat pentru prima oar de la cimpanzeu, este specia reprezentativ a genului Pneumovirus. Virusul are 90-120 nm. Nucleocapsida are diametrul transversal de 12 nm; expansiunile de pe suprafaa pericapsidei au 10-14 nm. Virusul se cultiv n diferite sisteme celulare, n funcie de originea tulpinii. Tulpinile umane se cultiv de preferin pe linii celulare HeLa, KB, Ep 2 etc.; tulpinile bovine n culturi renale, testiculare i pulmonare bovine. Dovada multiplicrii virusului l constituie formarea sinciiilor i prezena incluziilor. Efectele hemaglutinant, hemadsorbant i hemolitic sunt absente; lipsete de asemenea neuraminidaza. Virusul produce infecii respiratorii la om, maimu i bou. La bovine boala are un caracter acut, febril, cile respiratorii fiind afectate cu precdere. Infecia este mai sever la animalele adulte dect la tineret. 190

Virusologie general Reaciile serologice cu cea mai mare valoare diagnostic pentru evidenierea anticorpilor fa de virusul sinciial respirator sunt seroneutralizarea i reacia imunoenzimatic ELISA.. Un alt agent ncadrat n genul Pneumovirus este virusul pneumoniei oarecelui.

Subfamilia RHABDOVIRINAE

Virusurile din aceast subfamilie se caracterizeaz printr-o form alungit (rhabdos = b, baghet, n limba greac), cu diametrul circular, avnd o extremitate tiat drept i una rotunjit, virionul caracterizndu-se printr-un aspect asemntor cu o ghiulea. Lungimea rhabdovirusurilor variaz ntre limite largi; cel mai mic reprezentant al familiei virusul Kern-Canyon- are 130 nm, iar cel mai mare virusulMarburgpoate ajunge la 2.600 nm. Diametrul transversal este cuprins ntre 65-90 nm. Structura virusului este complex. La exterior prezint un nveli pericapsidal de natur lipoproteic, constituit din peplomere virus specifice, uniforme i dispuse regulat. La interiorul peplosului se gsete nucleocapsida, de form tubular, cu o simetrie helical. Virionii conin 5 proteine majore printre care se gsete o ARN polimeraz ARN dependent. Genomul viral este constituit dintr-o singur molecul de ARN monocatenar cu masa molecular de 3,5-4,6 x 106. Virusurile din subfamilia Rhabdovirinae se multiplic n gazde diferite: unele sunt parazite pentru vertebrate, unele pentru insecte, altele pentru plante. Unele rhabdovirusuri pot parazita mai multe categorii de gazde. Subamilia este compus din 4 genuri: - Veziculovirus, - Lyssavirus, - Ephemerovirus; - Novirhabdovirus;

191

Virusologie general Genul VEZICULOVIRUS Din acest gen fac parte mai multe virusuri patogene pentru vertebrate sau vertebrate i insecte. Specia reprezentativ, important i pentru medicina veterinar, este virusul stomatitei veziculoase. Virusul stomatitei veziculoase Virionul are form de ghiulea, o lungime de 150-180 nm i un diametru transversal de 50-70 nm. Peplomerele, uniform distribuite la suprafaa virionului, au 10 nm. n preparatele electronooptice au fost observate dou feluri de virioni, unii mai lungi particule B (bullet-shaped = n form de ghiulea) i altele scurte particule T (truncated = trunchiate). Cultivarea sa este posibil pe embrioni de gin i n culturi celulare. Embrionii mor n 1-2 zile i pot prezenta leziuni ale membranei corioalantoidiene asemntoare cu cele determinate de poxvirusuri. n culturi celulare virusul produce un efect citopatic evident, care mbrac forma plajelor n monostraturile de celule renale.Din punct de vedere antigenic au fost descrise dou tipuri imunologic distincte: tipul Indiana i tipul New-Jersey. Speciile receptive sunt cabalinele, bovinele i porcinele, la care boala se manifest asemntor cu febra aftoas prin formarea de vezicule pe mucoasa bucal, la nivelul gladei mamare i n regiunea plantar. Infecia are un nalt grad de contagiozitate i evolueaz de regul benign. Ovinele i caprinele sunt refractare n condiii naturale. Diagnosticul etiologic al bolii i diferenierea virusului de alte virusuri care produc tablouri de boal asemntoare (virusul febrei aftoase, al exantemului veziculos i al bolii veziculoase) se face serologic prin RFC, seroneutralizare sau imunodifuzie. n rile n care boala are o extindere mare, se utilizeaz un vaccin preparat pe baza acelorai principii i metode ca vaccinul antiaftos.

192

Virusologie general Genul LYSSAVIRUS Genul cuprinde mai multe specii patogene pentru vertebrate i insecte. Cea mai important specie pentru medicina uman i veterinar este virusul turbrii. n genul Lyssavirus se cunosc 4 serotipuri: virusul adevrat al rabiei ( serotipul 1), virusul Lagos al liliecilor (serotipul 2), rabdovirusul Mokola (serotipul 3) i rabdovirusul Duvenhage (serotipul 4). n cadrul fiecrui serotip au fost descrise numeroase serotipuri.(Perianu, 1997) Virusul turbrii Istoric. Efectele acestui virus pot fi recunoscute din cele mai vechi documente. Descrieri aproape fidele ale turbrii se ntlnesc n operele lui Homer, Aristotel, Democrit etc. n 1804 Zinke reuete transmiterea bolii prin saliva animalelor bolnave. Pasteur (1884) demonstreaz infeciozitatea substanei nervoase, transform virusul de strad n virus fix prin treceri seriate pe iepure prin inoculri intracerebrale, prepar cu virusul fix primul vaccin antirabic i intuiete natura agentului etiologic ca fiind un microb foarte mic, inaccesibil mijloacelor optice de amplificare din acea vreme. Remlinger demonstreaz n 1903 filtrabilitatea agentului etiologic. n acelai an, Negri descrie incluziile intracitoplasmatice specifice, a cror prezen n neuronii din cornul lui Ammon fusese ns semnalat de Victor Babe nc din 1888. Prioritatea romneasc de necontestat ndreptete pe deplin apelativul Babe-Negri pentru desemnarea acestor incluzii i nu numai Negri cum se mai poate ntlni prin unele manuale strine. Tot Babe organizez la noi n ar institutul antirabic (al doilea de acest fel din lume). Tot la noi n ar s-a iniiat, de ctre Popovici i Stamatin Ludmila (1957), prepararea unui vaccin eficace din virusul fix adsorbit pe hidroxid de aluminiu destinat imunizrii animalelor. Structura virionului. Morfologic, virusul turbrii se aseamn n mare parte cu virusul stomatitei veziculoase. Virionul are o form de clopot sau ghiulea cu lungimea medie de 180-250 nm i diametrul de 75 nm. Capsomerele de la 193

Virusologie general suprafaa virionului prezint la examenul electronnooptic aspectul unor hexamere. Protuberanele exterioare, asemntoare cu cele ale myxovirusurilor, au 6-7 nm lungime. n structura capsidei intr dou fraciuni proteice specifice. Nucleocapsida dublu helical formeaz aproximativ 30 de spirale. Acidul ribonucleic viral este monocatenar. Proprieti hemaglutinante. Virusul cultivat pe celule renale de pui de hamster BHK-21 (baby hamstr kidney) produce n anumite condiii de pH (6,2) i temperatur (0-40C) hemaglutinarea eritrocitelor de pasre, n special a celor de gsc. Cultivabilitate. Virusul este neurotrop, multiplicnduse cel mai bine n neuroni. De aceea, cultivarea pe embrioni sau n culturi celulare s-a realizat mai trziu i mai greu dect la alte virusuri. Culturi pozitive s-au obinut iniial n suspensii de creier de embrion de iepure, oarece, obolan sau gin. O multiplicare mai slab a fost posibil i pe celule renale de cine, pisic, cobai i porc. Rezultatele din ce n ce mai bune s-au obinut n cultivarea virusului pe celule renale de hamster i oarece i pe fibroblaste de oarece. Mai eficient s-a dovedit utilizarea anumitor linii celulare ca de exemplu tulpina WI-26 de celule umane diploide i celule renale de pui de hamster BHK 21 clona 13. n cazul acestor linii, celulele n proporie de 100% au multiplicat virusul, care a produs efecte citopatice evidente. Pe celule de pui de hamster titrul maxim de virus se obine n 6-7 zile, n condiii de incubare la 33-350C. Concentraia de virus obinut a permis chiar abordarea preparrii de vaccinuri din virusul produs n culturi celulare. ncepnd din 1938 s-au fcut primii pai n adaptarea virusului pe embrioni de gin. Leach (1939) adapteaz pe puii de o zi o tulpin de virus rabic izolat de la o feti de 14 ani numit Flury. Koprowsky i Cox (1958), prin 126 de treceri pe pui, reuete s adapteze tulpina Flury pe embrioni de 7 zile. Dup nc 40-50 de treceri, tulpina inoculat intramuscular la cine s-a dovedit incapabil de a mai produce turbarea dar imunizant; n aceast variant tulpina Flury (este cunoscut sub simbolul Flury) LEP (low-egg-passage). Dup nc 180 treceri tulpina s-a atenuat i mai mult, fiind notat Flury HEP (high-egg-passage). Aceste experimente au deschis perspectiva 194

Virusologie general preparrii de vaccinuri antirabice din tulpini avianizate, varianta HEP putnd fi utilizat ca vaccin i la om. O tulpin avianizat cu proprieti asemntoare, numit Kelev, a fost obinut n 1953 de Komarov i Hornstein. Rezistena fa de factorii ecologici. Virusul este sensibil fa de factorii fizici i chimici. La 1000C este distrus n 2 minute, iar la 560C rezist timp de 15-30 minute; radiaiile ultraviolete, formolul 1%, crezolul 3% i sublimatul 0,1% l inactiveaz pn n maximum 15 minute. Fenolul, cloroformul i eterul 20% acioneaz i ele virulicid, dar mai lent. Efectul betapropiolactonei 1/6.000, care inactiveaz virusul n 2 ore, este valorificat n ultimii ani n tehnologia preparrii vaccinurilor. Glicerina 50% constituie un bun conservant, asigurnd persistena virusului n esutul neros timp de mai multe luni. n cadavre virusul poate supravieui timp de 45 zile, iar n mediul ambiant, sub form uscat, rezist 10-14 zile. Structura antigenic. La virusul rabic s-au descris antigene solubile, puse n eviden n lichidul de cultur a celulelor infectate i antigene legate de particula viral. Virusul prezint dou antigene majore: antigene de suprafa, reprezentate de proteinele de nveli, ce induc anticorpii neutralizant, protectori i hemaglutinoinhibani i antigene nucleoproteice reprezentate de nucleocapsid, care induc anticorpi fixatori de complement, precipitani pentru imunofluorescen. Analizele efectuate cu ajutorul anticorpilor monoclonali a pus n eviden deosebiri antigenice ntre tulpinile de virus rabic slbatic izolate din diferite zone ale globului. Aceste diferene antigenice ridic problema selectrii tulpinilor virale pentru prepararea vaccinului antirabic n funcie de zona geografic. Diferene antigenice au fost semnalate i la tulpinile de virus rabic folosite la preparearea vaccinurilor. Infecia natural. Virusul rabic are un spectru de patogenitate foarte larg. Practic sunt receptive toate mamiferele iar uneori chiar psrile. Rezervorul natural de virus l constituie ns cinii vagabonzi, carnasierele slbatice, mai ales vulpile i n unele ri diferite specii de lilieci hematofagi (vampiri). Virusul fiind neurotrop, ntregul tablou anatomo-clinic se caracterizeaz prin semne i leziuni nervoase. Mecanismul patogenetic al infeciei rabice const n 195

Virusologie general capacitatea virusului de a se propaga centripet pe calea filetelor nervoase de la periferie spre neuronii din sistemul nervos central. Aceast nsuire a fost numit de virusologul romn {tefan S. Nicolau neuroprobazie. Viteza de naintare a virusului de-a lungul axonilor este de 3 mm pe or. Leziunea specific pentru virusul rabic o constituie incluziile Babe-Negri, din neuronii piramidali de tip Betz, din coarnele lui Ammon, evideniabili n amprente sau seciuni histologice prin metode speciale de colorare sau prin imunoflorescen. Incluziile nu sunt ns constant prezente, formarea lor depinznd de gradul de virulen al tulpinii infectante. Efectul incluziogen este de regul o caracteristic a tulpinilor cu un grad mai redus de virulen, care produc infecii cu o evoluie mai lent. ntre indivizii speciilor receptive virusul se transmite prin muctur, fiind prezent n saliva animalelor bolnave cu 14 zile nainte de moarte; mult mai rar este infecia consecutiv traversrii de ctre virus a mucoaselor infectate ori prin aerosoli. Un caz clasic n care virusul a produs infecia pe calea mucoaselor este cel al fetiei Flury, menionat anterior, de la care s-a izolat prima tulpin adaptat pe embrioni de gin. Transmiterea prin aerosoli este posibil mai ales n peterile n care-i are sediul un numr mare de lilieci hematogafi infectai. Infecia experimental. Virusul rabic este patogen pentru numeroase specii de animale de laborator, cele mai receptive fiind oarecele, hamsterul, cobaiul, obolanul i iepurele. Cile de inoculare cele mai severe sunt calea intracerebral i inocularea n camera anterioar a ochiului. Animalele infectate experimental fac de obicei forma de turbare paralitic. Uniform sensibili sunt oarecii n vrst de 3-6 sptmni din linia Swiss Albino, dup cum i hamsterii tineri, la care perioada de incubaie este de 5-7 zile. Evoluia bolii experimentale dureaz de obicei n jur de 17 zile. Virusurile rabice fixe, sunt tulpini de laborator obinute dup modelul pesteurian de treceri intracerebrale repetate pe specii de animale sensibile. Virusurile fixe clasice se obin pe iepure. Virusurile fixe nu au un grad redus de patogenitate comparativ cu virusurile slbatice sau de strad, dimpotriv, ele sunt mai virulente n special pentru specia animal pe care au fost fixate. Spre deosebire de virusurile de strad, ele au pierdut ns capacitatea de a nainta pe calea 196

Virusologie general nervilor periferici spre centrii nervoi (neuroprobazia). De aceea, virusurile fixe sunt patogene numai n condiii experimentale i inoculate numai intracerebral, cnd produc infecii grave i cu o evoluie mai rapid; inoculate ns subcutanat, sunt nepatogene. Termenul virus fix (virus fix) a fost inspirat de perioada fix de incubare, de 4-9 zile la iepure a acestor tulpini, spre deosebire de virusurile de strad a cror perioad de incubaie variaz ntre limite largi. Alte caracteristici ale virusurilor fixe sunt urmtoarele: - produc numai forma clinic paralitic; - titrul infectant pentru oarece pe cale intracerebral se situeaz la o diluie mai mare cu 2-5 x 101; - efectul incluziogen este absent; - virusul nu ajunge n gladele salivare i este rareori prezent n nervii periferici. Proprieti imunogene i metode de imunizare. De la primul vaccin aplicat de Pasteur, n 1885, prepararea vaccinurilor antirabice a nregistrat o mare diversitate de variante metodologice. n funcie de substrat, vaccinurile antirabice pot fi mprite, dup Toma (1970), n urmtoarele categorii: Vaccinuri preparate din esut nervos: la rndul lor acestea se pot clasifica n: - vaccinuri vii obinute din virusuri fixe, cum este cel folosit pentru imunizarea animalelor la noi n ar, dup reeta preconizat de Popovici I. i Stamatin Ludmila (1957), constituit din substana celular de oaie adsorbit pe hidroxid de aluminiu, care conine virusul fix, tulpina Babe; - vaccinuri inactivate; de-a lungul timpului au fost experimentai numeroi ageni inactivani fizici (cldura, razele ultraviolete) i chimici (fenolul, glicerina fenolat, eterul, cloroformul, formolul i, mai recent, etilen-imina, betapropiolactona i fuenzalida). Vaccinuri inactivate calitativ superioare, cu valoare imunogen apropiat de a celor vii, s-au obinut din creier de oarece nou nscut. Vaccinuri avianizate preparate pe embrioni de gin cu virus viu aparinnd tulpinilor Flury (LEP i HEP), Kelev sau pe embrioni de ra cu virus inactivat. 197

Virusologie general Vaccinuri vii sau inactivate, preparate din culturi celulare cu diverse virusuri adaptate la diferite sisteme de celule ca cele renale de cine sau porc, celule diploide umane sau linii celulare (NIL2, de fibroblaste de hamster). Serul antirabic, de fapt primul ser imun preparat de Babe i Lepp (1889), nu i-a gsit o aplicaie imunoprofilactic. Serurile imune marcate cu substane fluorocrome i-au gsit ns n ultimii ani o sfer larg de utilizare n diagnosticul curent al turbrii.

Genul EPHEMEROVIRUS Virusul febrei efemere bovine (febrei de trei zile), are forma caracteristic de ghiulea, dimensiunile de 120140/80 nm, este cultivabil pe linia celular BHK-21 i pe celule de maimu. Singura specie natural receptiv o reprezint bovinele, la care produce o maladie de scurt durat, caracterizat prin febr, pareze i rigiditate muscular. Boala evolueaz enzootic, cu un procent redus de morbiditate (5%) n Africa, Asia i unele regiuni din Australia. Virusul se transmite prin artropode.

Genul NOVIRHABDOVIRUS (Rhabdovirusuri patogene pentru peti) Au fost identificai ca ageni etiologici ai unor entiti nosologice bine definite, dup cum urmeaz: Agentul septicemiei hemoragice virotice cunoscut i sub numele de virusul Egtved, dup o localitate din Danemarca unde boala a fost diagnosticat pentru prima oar, produce la pstrvi i alte salmonide n vrst pn la 2 ani o infecie subcutanat, cu capacitate de difuziune enzootic mai frecvent n anotimpurile reci.

198

Virusologie general Agentul viremiei de primvar a crapului producE o infecie contagioas acut la crapi, caracterizat prin hidropizia cavitii abdominale i inflamaia veziculelor nnottoare (aerocistit). Virusul necrozei infecioase a sistemului hematopoetic este agentul etiologic al unei boli a salmonidelor n care predomin leziunile histologice ale esutului hematopoetic.

Famila BUNYAVIRIDAE

Aceast familie cuprinde virioni de 90-100 nm, cu capsida probabil helical i un nveli pericapsidal care conine un glicopeptid specific. Genomul este format din ARN monocatenar, construit din 3 segmente. Virusul se multiplic n citoplasm i este eliberat din celula gazd prin nmugurire n vezicula din apropierea aparatului Golgi. Familia are patru genuri : Phlebovirus, Noirovirus, Bunyavirus i Montavirus. Numele familiei i al genului Bunyavirus au fost date dup localitatea Bunyamwera, din Uganda, unde a fost izolat specia considerat ca reprezentativ pentru aceti taxoni. Genurile i speciile cele mai importante, patogene pentru vertebrate sunt cele care produc boala de Nairobi i febra vii Rift.

Genul NAIROVIRUS Virusul bolii de Nairobi este agentul unei boli infecioase a ovinelor i caprinelor, caracterizat printr-o puternic reacie febril i gastoroenterit hemoragic. Boala a fost deiagnosticat prima oar n 1910 n apropiere de localitatea Nairobi din Africa de Est. 199

Virusologie general Virionul poate fi sferic, cu diametrul de 70 nm sau alungit, avnd 500 nm lungime i 60 nm diametrul transversal. Cultivarea reuete cel mai bine n celule renale de pui de hamster. Virusul a fost iniial ncadrat n genul Flavivirus din familia Togaviridae. Transmiterea virusului are loc curent prin cpui, mai ales cele din genul Rhipicephalus. La cpui virusul se transmite la descendeni, fiind evideniabil att la formele adulte ct i n larve i nimfe. Datorit acestui mod de transmitere, agentul bolii de Nairobi este considerat un arbovirus.

Genul PHLEBOVIRUS Virusul febrei vii Rift sau al hepatitei enzootice, este agentul unei infecii la ovine, bovine i alte specii, caracterizat de regul prin avorturi ale femelelor gestante, tulburri generale, necroze hepatice i un procent ridicat de mortalitate la tineret. Boala a fost diagnosticat n 1912 n valea Rift din Kenya, iar virusul a fost izolat n 1931. Virionii au diametrul de 60-75 nm, iar pe suprafaa lor se gsesc numeroi spiculi de form cilindric. Virusul este hemaglutinant fa de globulele roii de pasre, oarece, cobai i cele de om din grupa A. Cultivarea reuete bine n ou embrionate i culturi celulare renale de miel, dup cum i n celule de pasre, oarece, hamster i alte specii. Virusul se transmite n condiii naturale prin nari i pe cale digestiv n condiii de coabitare. Genul BUNYAVIRUS Virusul Akabane a fost izolat de la nari i alte insecte hematofage (Culicoides brevitaris i Culicoides nebeculosis), n organismul crora se replic (Jennings i col., 1989). Determin boala de Akabane sau Arthrogrypos i Hydroencephalia enzootic bovin, caracterizat prin afeciuni congenitale (rigiditate articular, congenital, hidroencephalie), avorturi i mortalitate neonatal. La infecie sunt receptive bovinele, ovinele i caprinele, cabalinele i bubalinele care fac infecii 200

Virusologie general asimptomatice. Testul ELISA s-a folosit cu bune rezultate n diagnosticul serologic al infeciilor (Iale i col., 1989).

Familia ORTHOMYXOVIRIDAE

Prefixul taxonului de la cuvintele greceti orthos = drept, corect i myxa = mucus. El se coreleaz cu afinitatea acestor virusuri pentru mucusul cilor respiratorii. Aceast familie cuprinde virusurile care produc influena la om i diferite specii animale. Virionii sunt polimorfi, prezentndu-se sub forme sferice sau alungite. Virionul n ntregime (inclusiv pericapsida) are o form aproximativ sferic, cu diametrul variind ntre 80120 nm. Nucleocapsida se gsete pliat sub forma unui ghem la interiorul pericapsidei. Ea are o simetrie helicoidal; eliberat din peplos prin tratare cu eter sau eter n amestec cu Tween 80 i depliat are o form filamentoas. Pericapsida este constituit din peplomere de 10-14 nm lungime, cu diametrul de 4 nm; n compoziia lor chimic intr proteine, glucide i lipide. Expansiunile de pe suprafaa pericapsidei sunt de dou feluri att ca aspect morfologic ct i al funciei lor biologice. Hemaglutininele (HA), n form de bastonae de 1014/4 nm, triunghiulare pe suprafaa de seciune; separate de restul componentelor virale din faza apoas a suspensiilor de virus tratate cu eter i purificate prin adsorbii i eluri succesive pe globule roii, HA se prezint n mici agregate radiare avnd aspectul unor rozete cu diametrul de 30-40 nm. HA sunt antigenice i reacioneaz cu anticorpii specifici n reacii de seroneutralizare i inhibarea hemaglutinrii. Unitile de neuraminidaz (NA) sunt mai scurte i mai subiri comparativ cu HA; au 9 nm lungime i diametrul de 5 nm; suprafaa lor de seciune este circular. NA sunt i ele antigenice. Rolul lor n mecanismul infeciei virale este controversat. Ele acioneaz asupra membranei celulei gazd, dup 201

Virusologie general unele preri nlesnind ptrunderea virusului, dup altele, fiind responsabile de eliberarea virionului din celul. Nucleocapsida sau ribonucleoproteina are o form filamentoas, este flexibil i are structura helicoidal. Diametrul ei este de 10 nm, iar lungimea variaz ntre limite destul de largi. De regul este de aproximativ 600 nm, dar s-au evideniat i forme filametoase care ajung pn la 4.000 nm. Antigenic, ribonucleoproteina carespunde antigenului g (gebundenes Antigen = antigen legat), care mpreun cu antigenii solubili formeaz un antigen mixt desemnat cu simbolul S. Genomul viral este reprezentat de ARN monocatenar, constituit din 7 piese (segmente) cu masa molecular total de 4 x 106. ntre membrii familiei Orthomyxoviridae sunt posibile recombinri genetice, absente la Paramyxoviridae. Virionul conine o enzim virus-specific, care intervine n replicarea genomului viral i anume o ARN polimeraz ARN dependent. Principalele proprieti fizico-chimice ale acestui grup de virusuri constau n: stabilitate maxim la 700C i la condiii de pH 7-8; sensibilitate la eter, cloroform i pH 3; formolul, spunurile i detergenii au aciune inactivant. Toate orthomyxovirusurile au proprieti hemaglutinante, datorate adeziunii virionilor pe suprafaa eritrocitelor prin afinitatea chimiotactic ntre receptorii mucoproteici de pe suprafaa globulelor roii i hemaglutininele din structura pericapsidei virionilor. Cultivarea este uor realizabil n cavitatea amnitotic i alantoidian a oulor embrionate de gin cu excepia virusurilor gripale de tip C care nu se multiplic dect n cavitatea amniotic. Majoritatea othomyxovirusurilor se multiplic i n diferite culturi celulare. Efectul incluziogen este absent. Cu rare excepii, aproape toi membrii taxonului se caracterizeaz prin tropismul lor pentru cile respiratorii pe tractul crora produc leziuni de tip inflamator. Familia cuprinde patru genuri: Influenzavirus A., Influenzavirus B., Influenzavirus C. i Thogavirus. 202

Virusologie general

Genul INFLUENZAVIRUS Prefixul influenza este un cuvnt italian care-i are originea n cel latin influentia influen cu semnificaie de epidemie n ideea c epidemiile erau considerate n antichitate ca fiind rezultatul unor influene astrologice sau oculte. Din genul Influezavirus fac parte mai multe virusuri care produc infeciile gripale (influenele) la om i diferite specii animale. Ele se clasific pe baza mai multor criteriii anume: - nucleoproteina specific -NP; - proteinele matricei M; - tipul de hemaglutinine HA; - tipul de neuraminidaz -NA; - proprieti anitgenice; - gazda receptiv. Pe baza acestor criterii, virusurile gripale au fost mprite n trei seruri: Influenzavirus A., Influenzavirus B i Influenzavirus C. Genul INFLUENZAVIRUS A Conine NP i M identice i specifice. HA i NA sunt i ele specifice, dar pe baza lor se pot distinge mai multe variante sau subtipuri, dup cum urmeaz: - variantele HA (H) n numr de 15, notate astfel: HO sau H 3 uman,H sw 1 suin, H eq 1 i H eq 2 ecvin, H av 1 H av 8 aviare; - variantele NA (N) n numr de 9, notate astfel: N1 i N2 umane, N eq 1 i N eq 2 equine, N av 1 N av 5 aviare. Virusurile influenelor se caracterizeaz n general print-o mare labilitate antigenic i mai ales imunogenic, asemntoare ntructva celei menionate la virusul febrei aftoase, care duce la apariia de noi variante antigenice pe parcursul aceleiai epizootii. Aceast stare de lucruri creaz mari dificulti n imunizarea antigripal. Infeciile gripale au deseori un caracter epidemic sau chiar pandemic la om i epizootic, uneori panzootic la animale, calea curent de transmitere fiind cea aerogen. Cele mai 203

Virusologie general importante i mai frecvente infecii gripale ale animalelor sunt influena suinelor, cea a ecvinelor i diferite infecii ale psrilor dintre care cea mai important este pesta aviar clasic. Orthomyxovirusuri ale mamiferelor, aparinnd n majoritatea cazurilor genului Influenzavirus A sunt: Virusul influenei suinelor se izoleaz uor pe ou embrionate, este patogen pentru oarecele tnr pe cale intranazal, producnd o pneumonie caracteristic, aglutineaz globulele roii i poate fi identificat prin reacii serologice ca inhibarea hemaglutinrii i RFC. Aciunea patogen a virusului influenei n infecia natural la porc este potenat prin asocierea sa cu specia bacterian Haemophilus influenzae-suis, iar transmiterea sa de la un individ la altul se realizeaz, pe lng calea aerogen i prin metastrongili. Transmiterea la om sau alte specii animale este puin probabil cel puin n ultimele decenii, cu toate c anticorpii specifici virusului influenei suine au fost decelai n seruri de om, iar pandemia de grip din 1918-1919 s-a dovedit a fi de origine suin. Prezena anticorpilor n serul de om poate fi corelat cu starea de purttor. Virusul influenei ecvine (tusei de Hoppegarten) are diametrul de 100 nm i se aseamn din punct de vedere al comportrii pe embrionul de gin i al patogenitii pe cale intranazal pentru oarece cu virusul influenei suine. El este ns mai apropiat de virusul influenei umane din punct de vedere antigenic i al patogenitii. Apariia unor mbolnviri la om, n timpul unor enzootii de influen ecvin au fost corelate cu patogenitatea acestuia pentru om, experienele pe voluntari care au acceptat injectarea experimental cu virusul influenei ecvine i care au fcut forme clinice de boal, nsoite de rspunsul imunologic specific, au demonstrat n mod convingtor patogenitatea pentru om a virusului ecvin. La virusul influenei ecvine au fost identificate dou tipuri antigenice: equi 1/Praga/56 i equi 2/Miami/63. n cazul preparrii unor vaccinuri se recomand ca ele s fie preparate din ambele tipuri. Vaccinarea n-a intrat nc, n practica larg, mai ales c n timpul epizootiilor au loc variaii antigenice 204

Virusologie general episodice. Mardari (1975), cercetnd o epizootie pe teritoriiul Moldovei, constat prezena iniial a tipului clasic A/Equi 1/Praga/56, care dup ce a afectat ntregul efectiv de cabaline imunizndu-l, este dezlocuit de o nou variant panepizootogen A/Equi/Iai/1/68. Virusul influenei umane, asemntor cu virusurile animale, prezint mari varieti privind patogenitatea. Tulpinile cu virulen plin au ns o capacitate foarte mare de difuziune, gripa uman evolund uneori pandemic i chiar cu cazuri mortale (virusul de tip asiatic). Virusul influenei umane poate fi patogen n unele cazuri pentru cabaline. n Europa i America de Nord au fost descrise mai multe enzootii de influen ecvin, produse de virusul uman. Experimental, sunt foarte sensibili oarecele tnr i dihorul. Antigenic, toate tulpinile au un antigen fixator de complement comun i se caracterizeaz printr-o mare variabilitate antigenic a hemaglutininelor. Vaccinuri antigripale au fost preparate i experimentate n multe ri; ele se administreaz intranazal subacut sau intramuscular i produc o imunitate activ de scurt durat; eficacitatea lor este condiionat de meninerea aceleai variante antigenice pe parcursul epidemiei. Orthomyxovirusuri aviare ncadrate n genul Influenzavirus A.. Din infeciile respiratorii ale psrilor au fost izolate mai multe virusuri identice morfologic i avnd antigeni comuni cu virusurile influenelor de tip A. Studiul serologic al acestora a permis mprirea lor n 5 tipuri antigenic distincte i anume: tipul 1, reprezentat de virusul pestei aviare clasice; tipul 2, n care se ncadreaz tulpini izolate de la ra n Cehoslovacia i Anglia; tipul 3, identificat tot la ra n Anglia, distinct de tipul 2; tipul 4, izolat din enfecii asemntoare cu pesta clasic de la puii de gin, n Scoia i n Africa de Sud;

205

Virusologie general tipul 5, cunoscut sub numele de virusul Wilmot, identificat ca agent al unei infecii respiratorii benigne la curci n Canada. Tipul cel mai bine cunoscut i mai important pentru patologia aviar este tipul 1, respectiv virusul pestei aviare clasice. Virusul pestei aviare, a fost mult vreme aezat i tratat comparativ cu virusul pseudopestei aviare (Newcastle), trecut acum n familia Paramyxoviridae, genul Rubulovirus. Pesta aviar a fost descris n 1878 de Perroncito i a produs timp de muli ani importante pagube economice. n ultimele decenii aria ei geografic s-a limitat considerabil, mai ales n Europa. Virusul pestei aviare este mic, diametrul virionului fiind de 80-100 nm. Cultivarea se realizeaz uor pe ou embrionate, pe culturi celulare embrionare de origine aviar sau mamifer (celule de iepure, bou, om), pe celule HeLa. Antigenic, virusul pestei aviare reacioneaz ncruciat prin RFC cu celelalte virusuri ale influenei de tip A; prin reacia de inhibare a hemaglutinrii nu d ins dect slabe reacii ncruciate cu virusul influelei equine. Tot pe baza inhibrii aglutinrii s-a reuit identificarea n cadrul speciei a cinci tipuri antigenice. Pe baza antigenelor pericapsidale, hemaglutinine (H) i neuroaminidaze (N) la virusul pestei aviare s-au descris 14 subtipuri antigenice H (H1 H14) i 9 subtipuri N (N1- N9). Toate tulpinile virulente izolate au fost ncadrate n subtipurile H5 i H7 (Perianu, 1997). Speciile sensibile n condiii naturale sunt ginile i curcile, mai rar raele i gtele; sunt receptive i diferite specii de psri slbatice. n condiii experimentale pot fi ns infectate, mai ales pe cale intracerebral i diferite specii de mamifere oarecele, dihorul, iepurele, pisica etc. Porumbelul pare a fi, dintre psri, singura specie nereceptiv. Virusul influenei raelor, a fost identificat n Cehoslovacia i Anglia ca agent al unei infecii enzootice 206

Virusologie general caracterizate prin inflamaia sinusurilor infraorbitare. Serologic, s-a demonstrat c el posed antigenul fixator specific pentru tipul A, dar prin reacia de inhibare a hemaglutinrii n-a reacionat ncruciat cu virusul pestei aviare. Cultivarea se realizeaz uor n culturi celulare pe embrion de gin, ra, viel etc. Alte orthomyxovirusuri avnd antigenul fixator de complement A descrise ca ageni ai unor infecii la psri sunt: un virus izolat de la pui n Scoia i n Africa de Sud, care produce un tablou anatomo-clinic asemntor cu pesta aviar, dar este distinct antigenic de acesta; virusul Wilmot nrudit antigenic cu tipul Miami/63 al virusului influenei equine i virusul influenei raelor, agentul unei boli benigne la curcani n Canada i virusul N izolat n Germania de la pui dintr-un focar cu evoluie asemntoare pestei.

Genul INFLUENZAVIRUS B Genul Influenzavirus B conine NP i M specifice i analog tipului A, poate fi mprit n mai multe variante antigenice pe baza HA i NA. Virusurile gripale de tip B sunt patogene pentru om, la care produc o infecie gripal asemntoare cu virusul de tip A, dar puterea de difuziune este mai redus, evoluia bolii mai bening i se ntlnete mai rar. Totui, n prepararea vaccinurilor antigripale umane se include de regul i virus de tip B. Semnalrile de infecii cu tipul B la animale sunt o raritate. Takatsy (1967, citat de Volintir, 1975) descrie o epizootie cu virusul B la porc.

Genul INFLUENZAVIRUS C Genul Influenzavirus C conine polipeptide structurale asemntoare cu ale tipurilor A i B. NP sunt ns antigenic specifice. n culturi celulare, virusurile C produc deseori efectul de fuziune celular. n unele sisteme celulare interfereaz cu virusul de tip B i cu virusul de Newcastle, iar n organismul oarecelui infectat experimental interfereaz i cu virusul de vest al encefalomielitei infecioase a calului. 207

Virusologie general n condiii naturale produce sporadic infecii benigne la om i este nepatogen pentru animale.

Familia ARENAVIRIDAE

Virionii au 50-300 nm diametru, sunt polimorfi, predominnd formele sferice. Structura virionilor este asemntoare n unele privine cu cea a virusurilor variolice. nveliul este constituit dintr-o membran lipidic bistratificat. n componena proteinelor virale au fost identificate 2 glicopeptide i 2 polipeptide. Genomul este constituit din mai multe segmente de ARN monocatenar, din care 4 mari i 1-3 mici. Prefixul taxonului este inspirat din cuvntul latin arenosus = nisipos, coresponznd aspectului particulelor virale la examenul electronooptic. Familia cuprinde un singur gen: Arenavirus, din care fac parte diferite specii, majoritatea patogene numai pentru rozotoare, la care produc viremie i/sau virurie. Merit a fi menionate din acest grup virusul coriomeningitei limfocitare a oarecelui, care a servit ca model pentru lmurirea mecanismului toleranei imunologice i virusul Lassa patogen pentru om. Virusul coriomeningitei limfocitare are dimensiuni variabile (50-200 nm); ARN are masa molecular de 3,5 x 106daltoni. Simetria capsidei nu este bine precizat. Virusul se multiplic n membrana corioalantoidian a embrionului de gin far s produc leziuni evidente i n diferite sisteme celulare, n care produce de regul efect citopatic numai dup o prealabil adaptare. {oarecele ete gazda la care virusul se gsete cel mai frecvent sub form endosimbiotic; mai poate fi izolat de la cobai, cine, porc etc. Tulpinile difer ca virulen. Infeciile clinice mbrac forme variate printre care predomin pneumoniile i encefalitele. Mecanismul patogenetic este deosebit de interesant. De la prini cu infecii inaparente, virusul se transmite transplacentar la descendeni, la care 208

Virusologie general dezvolt n timpul vieii embrionare o stare de toleran imunologic. La vrsta de aproximativ 10 luni oarecii fac o encefalit progresiv, n creer gsindu-se o cantitate considerabil de virus. Totodat se produc leziuni de glomerulo-nefrit asemntoare cu cele din boala nurcii Aleutine. Virusul febrei Lassa produce o boal grav, de obicei fatal la om, n unele zone din Africa. Se presupune c rezervorul natural este reprezentat tot de roztoare. Virusul este nrudit antigenic cu agentul coriomeningitei limfocitare.

Genul ARTERIVIRUS n acest gen sunt ncadrate virusurile arteritei ecvine i a sindromului respirator i de reproducie la suine, alturi de virusul dehidrogenezeiu lactice i a febrei hemoragice simiene (Benfield i col. 1992). Virusul arteritei ecvine are dimensiunile cuprinse ntre 50-70 nm/ 30-40 nm, conine ARN i este sensibil la eter i cloroform. Virusul este cultivabil pe culturi celulare renale de mnz, hamster i iepure pe care produce un efect citopatic n 24 48 h. Este sensibil la variaiile de pH i la temperaturi de peste 560C. Arterita ecvin sau febra tifoid a calului este o boal contagioas specific solipedelor, caracterizat clinic prin febr, abatere, catar oculo-nazal, edeme subcutanate, icter i avort. Virusul sindromului respirator i de reproducie la porcine (virusul Lelystad) a fost izolat de la porcii mistrei n Olanda. Este un virus mic (45-55 nm) care conine ARN i se cultiv preferenial pe macrofage alveolare de purcel (Wensvoort i col., 1991). Infecia natural este o boal mai nou, caracterizat prin tulburri de reproducie la scroafe i respiratorii la purcei.

209

Virusologie general Familia TOGAVIRIDAE

Denumirea taxonului deriv de la toga n baza analogiei dintre mantia roman i pericapsida viral prezent la membrii acestei familii. O parte din togavirusuri sunt membrii vechii grupe a arbovirusurilor (ARthropod-BOrnepurtat de artropode). Virionii au o form icozaedral i sunt nvelii de o pericapsid lipoproteic. Praticula viral n ntregime are o form sferic i un diametru de 40-70 nm. n structura peplosului intr o glicopeptid virus specific. Genomul este constituit dintr-o singur molecul de ARN monocatenar cu masa de 4 x 106. Virusurile se multiplic n citoplasm i sunt eliberate din celul prin nmugurire. Din aceast familie fac parte 2 genuri: Alphavirus i Rubivirus

Genul ALPHAVIRUS n acest gen sunt ncadrate virusurile constituente ale vechii grupe A de arbovirusuri. Virionii sunt mici, nedepind 40-80 nm; genomul viral are diametrul de 20-50 nm i este acoperit de o capsid format de 32 capsomere inelare. ARN viral are masa molecular de 3 x 106 daltoni. Pericapsida prezint pe suprafaa ei hemaglutinine sub forma unor proemineane. Toate speciile sunt nrudite antigenic. Virusul encefalomielitei infecioase americane a calului Encefalomielita infecioas american poate fi produs de trei virusuri apropiate, dar totui distincte i anume: virusul de vest sau californian, mai frecvent n California, Canada i Argentina; virusul de est sau de Virginia, rspndit n SUA, Canada, Mexic, Cuba, Brazilia, mai patogen comparativ cu virusul de vest; 210

Virusologie general virusul venezuelian, prezent mai ales n Venezuela i Columbia mai rar n Florida i Mexic; sub aspectul patogenitii este mai apropiat de virusul de vest. Toate cele trei virusuri se cultiv pe ou embrionate de 9-11 zile , producnd leziuni hemoragice i moartea embrionilor n 24-48 ore, dup cum i n culturi celulare de oarece, hamster, embrioni de gin i alte specii , determinnd un marcant efect citopatic. Efectul hemaglutinant se manifest cel mai bine la pH 6,1. Reaciile de seroneutralizare i RFC sunt foarte sensibile pentru identificarea anticorpilor specifici n ser, chiar i dup o singur inoculare. Natural receptive sunt n primul rnd cabalinele, urmate de om i psri. Anatomo-clinic, boala se manifest prin simptome de excitaie sau paralizie i leziuni de encefalit n diferite compartimente ale sistemului nervos central. Agenii transmitori sunt narii i cpuile. n condiii experimentale sunt receptive mult mai numeroase specii de animale. Pentru stabilirea diagnosticului de laborator sunt de regul utilizai oarecele, iepurele i cobaiul. n condiii naturale, cel mai patogen este virusul de est, iar experimental pentru animalele de laborator, virusul venezuelian.

Genul RUBIVIRUS Caracteristicele acestui gen sunt: dimensiunile de 100 nm n diametru, netransmisibilitatea prin artropode i proprietile hemaglutinante datorate prezenei pe suprafaa pericapsidei a proeminenelor asemntoare cu cele ale alpha i flavivirusurilor. n genul Rubivirus se ncadreaz agentul rubeolei, o boal specific omului, caracterizat printr-o erupie cutanat asemntoare pojarului, dar mai benign.

Familia FLAVIVIRIDAE

Flavivirusurile au dimensiuni de 45-50 nm, sunt nvelite cu dubla membran lipidoproteic, prevzut cu emargene 211

Virusologie general polipeptidice de 45 nm lungime. Ele conin ARN iar nucleocapsida are o simetrie cubic. Replicarea are loc n citoplasm iar maturarea la nivelul membranei celulare. Gazdele naturale sunt reprezentate de vertebrate i unele nevertebrate (insecte, artropode). La om provoac infecii inaparente sau boli mortale cum ar fi encefalita de cpui i febra galben. Pentru animale, cele mai semnificative entiti morbide provocate de asemenea virusuri sunt encefalita ecvin japonez, looping IPP (encefalomielita infecioas ovin) i meningoencefalita curcilor. Familia cuprinde 3 genuri: Flavivirus, Pestivirus i Hepacivirus

Genul Flavivirus Virusurile din acest gen au aproximativ aceeai structur ca alphavirusurile, dar sunt mai mici, avnd diametrul de 20-50 nm. Vectorii pentru unele flavivirusuri sunt narii,iar pentru altele cpuile. Virusul febrei galbene considerat ca specie tip a genului Flavivirus, virionul are structura i celelalte componente morfologice caracteristice acestui gen. Cultivarea este posibil pe diferite culturi de celule n care produce efect citopatic i n ou embrionate, dup o prealabil adaptare pe oarece sau pe culturi celulare. Febra galben este o antropozoonoz. Rezervorul natural l constituie diferite specii de maimue de la care virusul se transmite la om prin nari. Aria geografic a bolii este zona tropical a Africii i Americii de Sud. Procentul de mortalitate este de 5-10%. Tabloul anatomo-clinic se caracterizeaz prin necroze ale parenchimului hepatic, care determin un icter accentuat i gastroenterit hemoragic. Parenchimul hepatic necrozat conflueaz formnd mase hialine cunoscute sub numele de corpusculii lui Council man. Virusul produce incluzii intranucleare limitrof nucleolilor (incluziile Torres). 212

Virusologie general Pentru imunizarea activ contra febrei galbene se utilizeaz un vaccin viu atenuat preparat din tulpina 17 D pe embrioni de gin. Complexul virusurilor encefalitelor de cpue n acest grup sunt cuprinse virusurile vehiculate prin cpui, care produc encefalite diverse, din care cele mai cunoscute sunt: febra hemoragic de Omask, encefalitele ruseti de primvar-var i din estul ndeprtat, encefalita din Europa Central, Negishi, Langat, Powassan, boala de Kyasanur i Louping-ill, care este cea mai imporant din punct de vedere al frecvenei i al implicaiilor economice poteniale. Virusul Louping-ill Structura i constantele fizico-chimice ale virionului sunt cele comune tuturor flavivirusurilor. Proprietile hemaglutinante se evideniaz mai ales fa de eritrocitele de gsc. Cultivarea este posibil n ou embrionate intravitelin sau pe membrana corioalantoidian n grosimea creia virusul produce leziuni proliferative discrete. n culturi celulare ovine, bovine, umane, n celule HeLa i alte linii celulare virusul se multiplic determinnd un marcant efect citopatic. n monostrat de celule renale de porc formeaz plaje. Antigenic este nrudit cu alte flavivirusuri, fiind cel mai apropiat de virusul encefalitei din Europa Central. Infecia natural, caracteristic ovinelor, este cunoscut sub mai multe denumiri, din care, cu o circulaie mai larg sunt: Luoping-ill, encefalomielita infecioas a oilor, encefalomielita scoian. Cuvntul louping are ntr-un vechi dialect scoian semnificaia de salturi i se refer la unul din simptome. Alte manifestri clinice ale bolii constau n ataxie, tremurturi, torticolis, pareze i paralizii, consecin a leziunilor meningoencefalitice care domin n tabloul histopatologic. n afara ovinelor mai sunt receptive taurinele, rareori caninele i cabalinele. Vectorul este cpua Ixodes ricinus. Virusul este imunogen pretndu-se la prepararea de vaccinuri vii atenuate sau inactivate capabile s confere animalelor vaccinate o stare de imunitate satisfctoare, transmisibil pasiv de la oile mame la miei. 213

Virusologie general Genul PESTIVIRUS Pestivirusurile au pericapsida neted i de aceea sunt lipsite de proprieti hemaglutinante. Genul cuprinde specii nrudite antigenic, unele de importan major pentru patologia veterinar, care urmeaz a fi tratate n continuare pe larg. Virusul bolii mucoaselor diareii virotice a bovinelor (VD-MD = virotic diarrhea mucosal disease) Virusul are caracteristicele generale ale flavivirusurilor. Virionul are o form sferic cu diametrul de 45-65 nm, cu un smbure central (inima virusului) de 24-30 nm. Studii electronooptice mai recente au permis evidenierea a trei tipuri de particule virale distincte din punct de vedere al dimensiunilor: particule mari, de 80-100 nm, polimorfe, corespunznd virusului matur; mijlocii, de 30-50 nm i mici de 15-20 nm, considerate ca particule precursoare i fiind formate probabil din ribozomi. Se presupune c posibilitatea existenei sub forma unor fragmente cu potenial infecios, diferite ca dimensiuni, ar fi o nsuire general a nonarboflavivirusurilor. Virusul este sensibil la eter, cloroform, la pH 3 i la nclzire la 560C. Prin liofilizare i la 700C poate fi conservat mai muli ani. Virusul este cultivabil n culturi celulare renale embrionare bovine, unde produce efect citopatic. Pe embrioni de gin, virusul se adapteaz mai greu, producnd uneori leziuni pe membrana corioalantoidian. Virusul este neuniform antigenic; au fost identificate 7 serotipuri, ntre care exist ns i diferite grade de nrudiri antigenice. Pe baza reaciilor de seroneutralizare i imunoflorescen s-a demonstrat c tulpinile cu un grad mai redus de patogenitate sunt mai apropiate ntre ele din punct de vedere antigenic. Virusul VD-MD este nrudit antigenic cu virusul pestei porcine, n sensul c porcii imunizai cu virusul VD-MD devin rezisteni fa de virusul pestei porcine. Bovinele inoculate cu virusul pestei porcine nu se imunizeaz ns fa de virusulVD-MD. Infecia natural se caracterizeaz printr-un accentuat polimorfism anatomo-clinic, fapt care a determinat iniial pe 214

Virusologie general infecioniti s considere fiecare form clinic o boal virotic distinct. Ulterior, s-a demonstrat c nu este vorba de boli diferite ci de o afeciune complex din punct de vedere morfopatologic i clinic, produs de un agent etiologic unic. Principalele localizri i manifestri ale bolii sunt ns din partea aparatului digestiv.Animalul de laborator cel mai sensibil este iepurele, dar inocularea virusului trebuie precedat de o prealabil injectare de cortizon. n diagnosticul etiologic al bolii se pot utiliza metode serologice ca: imunodifuzie, imunoflorescen i mai ales seroneutralizarea virusului cu seruri de la animale trecute prin boal. n scopuri imunoprofilactice se pot folosi vaccinuri preparate cu virus VD-MD sau vaccinuri polivalente n care virusul VD-MD se poate asocia cu virusul parainfluenei III i virusul rinotraheitei. Uneori vaccinarea antivirotic cu acest complex antigenic se poate asocia cu vaccinarea antipasteurelic. Pe baza acelorai principii se preconizeaz astzi prepararea serului antiviral (VD-MD, parainfluen III, rinotraheit) care poate fi administrat singur sau mpreun cu serul antipasteurelic. Virusul pestei porcine Istoric. Iniial s-a crezut c pesta porcin este o bacterioz n urma izolrii n 1885-1886 de ctre Salmon i Smith a unei bacterii pe care autorii au numit-o B. suipestifer. Mai trziu s-a dovedit c bacteria este un agent de infecie secundar, ea fiind omologat n genul Salmonella (dup Salmon). n 1903, Schweinitz i Dorset demonstreaz etiologia virotic a bolii pe baza transmiterii ei n serie prin inocularea de filtrate. Structura virionului. Particula viral are o form sferic i un diametru de 40 nm, cu un smbure (inim) de 2030 nm. Pericapsida are o grosime de 6 nm. Restul caracterelor sunt comune cu ale celorlalte nonarbo-flavivirusuri. Proprieti fizico-chimice. Virusul este etr i cloroform sensibil i moderat sensibil la trispsin; pH 4,8-5,5 are asupra virusului un efect conservant superior celui neutru; are un 215

Virusologie general important grad de termostabilitate fiind inactivat n 30 de minute la 690C i n 60 minute la 660C. Cultivabilitate. Timp de muli ani virusul pestei porcine a putut fi ntreinut numai pe specia natural receptiv prin inoculri la purcei. n 1939, Alexandru Vechiu adapteaz virusul pestei porcine pe iepure, obinnd primul virus lapinizat. Mai trziu virusurile lapinizate i-au gsit o larg utilizare n prepararea vaccinurilor antipestoase. Din 1959 s-a reuit adaptarea virusului n culturi celulare, rezultatele cele mai bune obinndu-se pe esuturi de porc bogate n celule ale sistemului reticulo-histiocitar mduv osoas, splin, leucocite, esut hepatic. Virusul a mai putut fi cultivat i pe celule testiculare de iepure tnr. Multiplicarea este abundent n culturi celulare, dar efectul citopatic este slab sau absent. Cultivat mpreun cu virusul de Newcastle, se constat o potenare a efectului citopatic. Unele tulpini au putut fi adaptate pe embrioni de ra i de gin. Proprieti antigenice. Virusul este nrudit antigenic cu virusul VD-MD. Variante antigenice au fost semnalate fr a se ajunge la crearea unor tipuri imunologic distincte. Rezistena fa de factorii ecologici. Virusul are un nsemnat grad de rezisten fa de factorii ecologici, care este n general mai mare cnd virusul este nglobat n materialul organic. La procesul de putrefacie rezist 3-4 zile. n mduva osoas i pstreaz infeciozitatea timp de 15 zile. Frigul are un efect conservant, virusul putnd supravieui n carnea congelat pn la 4 ani. Comparativ cu alte virusuri, ceilali factori fizici uscciunea, lumina solar etc.- sunt i ei mai puin activi fa de virusul pestei porcine. Sensibilitatea fa de factorii chimici este de aproximativ 2-6 ori mai redus fa de alte virusuri. Infecia natural. Virusul este monopatogen pentru specia porcin. Pesta porcin este o infecie grav, caracterizat prin leziuni hemoragice, inflamatorii i n final necrotice la nivelul intestinului i pulmonului, n procesele de necroz intervenind ca ageni secundari Pasteurella multocida i Salmonella cholerae suis. Boala este contagioas, cu capacitate de difuziune epizootic i un procent ridicat de morbiditate i mortalitate. Trecerea prin boal poate crea purttori. 216

Virusologie general Infecia experimental. Se practic pe purcei din rase ameliorate. Bioproba se aplic de obicei ca ultim prob n cazul cnd celelalte metode de evideniere a virusului n-au fost suficient de concludente. Tehnici de diagnostic etiologic. n cazurile atipice, cnd examenul clinic i mai ales cel morfopatologic nu sunt suficiente pentru stabilirea diagnosticului, se impune aplicarea diferitelor metode de evideniere direct sau indirect a virusului.printre care cele mai importante sunt: seroprecipitarea n gel de agar, dup tehnica Ouchterlony, care are un nalt grad de specificitate, dar nu este suficient, fiind pozitiv n aproximativ 50% din cazuri; imunoelectroprecipitarea cantitativ prin care se evideniaz cantitatea de globulin alfa2 care crete aproape ntotdeauna la porcii bolnavi (Popa M. i col., 1973); medulograma este o metod foarte sensibil preconizat de Manolescu i col. (1975), care const n evidenierea metaplaziei paralimfoblastice la nivelul mduvei hematopoetice a porcilor bolnavi; imunoflorescena este o tehnic sensibil, permind evidenierea prezenei virusului n esuturi, chiar n fazele incipiente ale infeciei; cele mai bune rezultate se obin prin metoda direct aplicat pe medulogram sau concentrat leucocitar (Popa M. i col. 1979). Alte teste de laborator experimentate cu rezultate variabile- sunt: seroneutralizarea, RFC, hemaglutinarea pasiv, conglutinarea, potenarea efectului citopatic a virusului de Newcastle (Kumagai, 1958) sau a virusului bolii de Teschen (Bool i Ressang, 1966), interferena cu virusul encefalitei equine (Shimizu i col., 1965), testul Taylor, bazat pe capacitatea virusului pestos de a inhiba amilaza pancreatic. Bioproba pe purcei i menine valabilitatea de test de cert valoare diagnostic. Imunizarea antipestoas. Este realizabil att activ ct i pasiv.

217

Virusologie general Pentru imunizarea activ poate fi folosit o gam larg de vaccinuri, unele vii i atenuate preparate fie cu virusuri lapinizate, fie cu tulpini adaptate pe culturi celulare, altele inactivate. a) Vaccinuri preparate cu tulpini lapinizate: - vaccinul C, importat din China care poate fi administrat printr-o singur inoculare, datorit valorii sale imunogene ridicate i nu necesit asocierea cu serul antipestos tulpina vaccinal fiind total atenuat; - vaccinurile Hudson i Koprowsky pstreaz un grad de virulen; administrarea lor necesti asocierea cu ser antipestos; operaia se numete serovirulizare sau serolapinizare i se practic n plin focar n scopul opririi energice a extinderii epizootice a bolii; cele dou tulpini sunt foarte asemntoare din punct de vedere al gradului de virulen i al valorii imunogene; n prezent la noi n ar se folosete tulpina Hudson. b) Vaccinuri preparate din culturi celulare; Unele tulpini au fost adaptate direct n diferite sisteme celulare, altele abia dup o prealabil adaptare pe iepure. n cazul ambelor conduite tulpinile s-au atenuat parial sau total. - vaccinul Celvivac, obinut dintr-o tulpin atenuat i adaptat pe culturi celulare, a nceput s fie preparat i aplicat la noi n ar paralel cu vaccinul C. c) Vaccinurile inactivate Preparate din snge i triturate de organe, la care se adaug o substan inactivant i una adjuvant; din aceast categorie s-au utilizat la noi n ar de mai muli ani dou vaccinuri. - vaccinul formolat 0,1% i adsorbit pe hidroxid de aluminiu, dup o reet preconizat de Wynohradnyk (1947); - vaccinul cu cristal violet 2,5% cu adaus de glicerin i fenol. Pentru imunizarea pasiv se poate utiliza serul antipestos omolog. n practic, serul nu se utilizeaz ns singur, ci numai asociat cu un virus lapinizat de tipul Hudson sau Koprowsky. 218

Virusologie general

Alte flavivirusuri descrise n literatur sunt: Virusul bolii de grani (Border disease) a mieilor este de dimensiuni mici, n jur de 27 nm, este cultivabil n celule de origine ovin i produce, n Australia i Noua Zeeland, o boal congenital la miei, caracterizat printr-o supraproducie capilar n momentul ftrii, subdezvoltare i semne nervoase care dispar treptat la numrul redus de animale care nu mor nainte de nrcare. Virusul bolii de Wesselsbron. Particula viral are diametrul n jurul a 30 nm; cultivarea este posibil n ou embrionate, fr a omor ns cu regularitate embrionii i n culturi celulare de rinichi de miel, n care determin formarea de incluzii intracitoplasmatice. Gazdele cel mai frecvent afectate sunt oile ntr-un stadiu avansat de gestaie, mieii i rareori taurinele. La cabaline i suine infecia este inaparent. Lucrtorii din laboratoarele n care se lucreaz cu acest virus fac uneori o infecie asemntoare clinic cu influena. Artropodele care ndeplinesc rolul de vectori sunt narii din genul Ades. Virusul dehidrogenazei lactice (LDH-V, virusul Riley) a fost izolat din saliv, fecale urin de la oareci fr semne aparente de boal. Numeroasele studii executate pe acest virus se datoresc interesului pe care-l prezint din punct de vedere biologic general. El constituie exepmlul calsic al unui agent persistent i tolerat i un caz singular n care prezena unui virus determin intensificarea unor activiti enzimatice n organismul infectat. Familia RETROVIRIDAE

Familia cuprinde virusurile tumorale cu ARN. Prefixul retro n limba latin invers, napoi se refer la proprietatea acestor virusuri de a transcrie invers informaia

219

Virusologie general genetic. Alte denumiri n circulaie pentru desemnarea lor sunt: - Leucovirusuri = majoritatea speciilor produc leucoze, - Oncornavirusuri = virusuri oncogene al cror genom este ARN. Prin simetrie cu prefixul oncorna se utilizeaz i cel de Oncodna pentru virusurile cu ADN capabile s produc efectul transformant. n categoria Oncornavirusurilor se ncadreaz familiile Adeno, Herpet, Papova i Polyomaviridae descrise anterior. Virionii retroviridelor sunt constituii dintr-o nucleocapsid helical constituind inima sau smburele virusului, nvelit de un peplos lipoproteic. Diametrul particulei virale este n medie de aproximativ 100 nm, cu posibiliti de variaie ntre 70-110 nm, ajungnd n rare cazuri la 200 nm. Genomul este format dintr-o singur molecul de ARN monocatenar cu masa molecular de 7-10 x 106, uor disociabil n 2-3 fragmente. n celula gazd informaia genetic este transcris de pe ARN viral ntr-o dubl caten de ADN previral de neoformaie printr-un fenomen de transcriere invers cu ajutorul unei invers transcriptaze, care este o ADN polimeraz ARN dependent (antigenic la virusurile leucozelor aviare). Transcrierea invers este sensibil la factorii inhibitori ai sintezei ADN n primele 6 ore de la infecie i permanent fa de actinomicina D. ADN previral integrat n genomul celulei gazd poart responsabilitatea efectului oncogen. Extras din celula gazd, este lipsit de infeciozitate. Maturarea i eliberarea virionilor din celula gazd are loc prin nmugurire. Retroviridele au o capacitate antigenic i imunogen relativ redus, dar n serurile animalelor bolnave pot fi decelai anticorpi fixatori de complement, neutralizani i precipitani. Principalii determinani antigenici sunt trei polipeptide, din care dou sunt glicopeptide componente ale pericapsidei. n cadrul familiei Retroviridae au fost ncadrate urmtoarele genuri: Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gamaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus, Soumavirus i Lentivirus. ncadrarea ulterioar a retroviridelor se oprea la 220

Virusologie general trei subfamilii: Oncovirinae, Spumavirinae i Lentivirinae. n continuare, pentru a fi mai pragmatici, vom folosi ambele ncadrri taxonomice.

Subfamilia ONCOVIRINAE

Prefixul deriv de la cuvntul grecesc onkos = tumor. Particula viral este constituit dintr-un peplos, un smbure sau o inim delimitat de un nveli propriu i din nucleocapsida propriu-zis dispuse concentric. Electronooptic pot fi deosebite trei tipuri morfologice: tipul A, cel mai mic, de aproximativ 75 nm, cu aspect de gogoa; intracelular este localizat cel mai frecvent n vecintatea aparatului Golgi; tipul B, cel mai mare, formele mature extracelulare ajungnd la 200 nm i nveliul constituit din dou straturi; tipul C, mijlociu, de 85-110 nm, avnd centrul cu un grad de electronoopacitate mai mare comparativ cu tipul B i nveliul format dintr-un singur strat. Agenii etiologici ai bolilor leucozice la animale aparin tipurilor B i C; infeciozitatea particulelor este incert. Virionul conine ase tipuri de proteine , inclusiv glicoproteinele antigenice de origine pericapsidal. Genomul viral este ARN cu masa molecular de 7 x 106, uor disocialbil n dou segmente cu nsuirile a dou genomuri complete, identice. ARN-ul oncovirusurilor prezint similitudini de structur cu ADN-ul celulelor gazd. Din subfamilia Oncovirinae fac parte numeroase genuri caracterizate printr-o mare complexitate i diversitate. Majoritatea acestora produc boli cu caracter neoplazic, mai ales leucemii sau sarcoame la numeroase specii de mamifere i psri. Multe celule normale, la diverse specii animale, conin integrate n genomul lor, sub form de provirus, copii ale genomurilor diferitelor oncovirusuri. Acestea nu-i exprim totdeauna fenotipic mesajul oncogenetic, rmnerea lor n celula gazd fiind posibil, sub aceast form, un timp nedefinit. 221

Virusologie general Genomurile previrale pot fi ns reactivate prin ageni fizici i chimici sau prin suprainfecii cu alte oncovirusuri, consecutiv activrii, exprimndu-se fenotipic efectul lor transformant. La oncovirusuri se ntlnete relativ frecvent fenomenul de defectivitate viral suplinit prin intervenia complementar a diferitelor virusuri helper.

GRUPA ONCOVIRUS TIP C Oncovirusurile de tip C se caracterizeaz prin prezena unui nveli unistratificat al inimii virusului. Compoziia proteinelor acestui nveli a determinat mprirea oncovirusurilor C n dou subgenuri: primul cuprinznd oncovirusurile patogene pentru mamifere, caracterizate prin prezena proteinei p 30 i la doilea,din care fac parte oncovirusurile aviare, caracterizate prin prezena proteinei p 27. Toate oncovirusurile de tip C, indiferent de originea lor, mamifer sau aviar, conin trei polipeptide structurale majore i dou glicopeptide derivate din peplos. Ele implic trei categorii de antigene specifice:gs-acaracteristic oncovirusurilor aviare, gs-1 marker antigenic al speciei gazd (pasre, oarece etc.) i gs-3 prezent la toate virusurile mamifere. Oncovirusurile de tip C patogene pentru mamifere. n cadrul acestei grupe au fost descrise numeroase genurii care produc boli tumorale la bovine, suine, feline, murine etc. Criteriul de baz al gruprii acestor virusuri n acelai taxon este prezena proteinei p 30 cu proprieti antigenice specifice. Specia cea mai important n momentul de fa, pentru medicina veterinar, este virusul leucozei enzootice a bovinelor.

222

Virusologie general Genul DELTARETROVIRUS Virusul leucozei bovine Istoric. Boala produs de acest virus a fost diagnosticat i descris de ctre Leisering (1858). Etiologia ei a fost lmurit mult mai trziu, transmiterea experimental fiind realizat abia n 1960 de ctre Vasiliev. Primele ncercri de izolare a virusului au fost fcute de Montemagno Papparella i Catallani (1957) pe embrioni de gin. Miller (1969) cultiv primul virusul n limfocite recoltate de la taurine bolnave. Structura virionului. La examenul electronooptic virionii au aspectul unor corpusculi sferici cu diametrul de 130 nm i cu tendina de grupare n rozete. Cultivabilitate. Virusul poate fi cultivat n culturi celulare renale de viel, n culturi de leucocite, producnd efect citopatic la aproximativ 4 zile dup inoculare. Cu lichidul de cultur pot fi apoi infectai embrioni de gin. Sensibilitatea fa de factorii de mediu. Virusul este sensibil la eter i cloroform i are un grad relativ ridicat de rezisten la temperatur; rezist la 560C, fiind inactivat abia la 600C prin nclzire timp de 30 minute. Temperaturile sczute, pn la 370C, au un efect conservant asupra virusului. Patogenitate. Infecia natural ntlnit la bovine se caracterizeaz prin procese neoplazice n organele hematopoetice, modificri numerice i morfologice ale unor celule din seria alb, urmate deseori de procese metaplazice n organele parenchimatoase. Infecia are o evoluie cronic i capacitate de difuziune enzootic. Transmiterea bolii la alte specii, n condiii naturale, n-a fost semnalat pn n prezent. Bhrer (1972) a reuit transmiterea experimental a leucozei bovine la oi. Diagnosticul infeciei. S-a bazat muli ani i se practic i n prezent, n majoritatea laboratoarelor, pe numrarea leucocitelor i limfocitelor, interpretat dup diferite chei leucozice, a lui Goetze, Bendixen etc. n ultimii ani a aprut tendina, pe plan mondial i n ara noastr, de nlocuire a examenului hematologic cu reacii serologice cu un grad mult mai ridicat de specificitate. Imunoflorescena a fost experimentat cu rezultate promitoare, dar mai de perspectiv pare a fi imunodifuzia. n prezent,n laboratoarele 223

Virusologie general veterinare centrale i judeene, se utilizeaz pentru diagnosticul serologic al L.E.B., imunodifuzia orizontal dubl (Ouchterlany) i reacia imunoenzimatic E.L.I.S.A., ultima avnd un grad ridicat de sensibilitate i specificitate. Alte virusuri leucozice la mamifere sunt: Virusul leucozei porcine este mai puin cunoscut iar incidena bolii este redus. Diagnosticul se stabilete cu precdere pe baza examenului morfopatologic macro i microscopic i hematologic. Boala a fost semanalat la noi n ar de Srbu i col. (1963), Adameteanu I. i Adameteanu Constana (1966). Virusul leucozei feline produce, de obicei, forme cu caracter de limfosarcoame localizate n timus sau n limfonozii mezenterici. Imaginile electronomicroscopice ale celulelor canceroase relev prezena virionilor de form rotund sau oval cu diametrul de 100-110 nm. Smburele central de 50-65 nm. In vitro izolarea este posibil pe diferite sisteme celulare de origine felin, canin, porcin i uman. Sarcomul venerian al cinelui cunoscut i sub denumirea de sarcomul lui Sticker, este o tumor care evolueaz de cele mai multe ori benign i se transmite prin contact sexual.Electronooptic s-au evideniat n celulele tumorale particule virale de tip C. Vlduiu i col. (1960, 1969, 1970), Vlduiu i Ciurea (1961), au realizat un studiu complex al acestei tumori, dezvoltat de Paca Doina (1971) care experimenteaz cu bune rezultate o metod de imunoterapie activ prin transplante de tumor iradiat cu 800 R. Alte infecii cu caracter leucemic produse de oncovirusuri de tip C se ntlnesc la om, oarece (mai multe virusuri) cobai, maimu etc.

224

Virusologie general Genul ALPHARETROVIRUS Virusurile leucozelor aviare Istoric. Boala a fost semnalat prima oar de Roloff (1869) i transmis experimental cu filtrate din materialul infecios de Ellermann i Bang (1908). Izolarea virusurilor s-a realizat de Beard (1956) din leucoza mieloid i Burmester i col. (1954-1957) din leucoza limfoid. Proprietile virionilor. Aspectul electronooptic al particulelor virale este asemntor cu al myxovirusurilor, argument care a determinat mentinerea lor timp de muli ani clasificate n acest grup. Diametrul virionilor este de 80-110 nm cu smbure central de 45 nm. Genomul, reprezentat de ARN monocatenar, are masa molecular neobinuit de mare, de 1,3 x 107 daltoni. Virusurile sunt sensibile; la 560C sunt inactivate n 30 de minute; comparativ cu alte virusuri oncogene aviare, sunt mai rezistente la ultraviolete. Cultivabilitate. Virusurile pot fi cultivate att pe embrioni de gin ct i n culturi celulare. Embrionii inoculai nu mor dect n proporii foarte reduse. Puii eclozionai din oule inoculate se mbolnvesc aproape cu regularitate n timpul vieii. Celulele cele mai adecvate pentru multiplicarea virusului sunt cele hepatice, n care virusurile sunt sintetizate fr s produc efect citopatic. Rezultate la fel de bune se obin i pe fibroblaste embrionare de gin. Cu toate c nu produc efect citopatic virusurile leucozelor aviare pot fi puse n eviden i identificate n culturi de fibroblaste pe baza capacitii lor de a interfera cu alte virusuri sau serologic. Interferena. cu virusul sarcomului lui Rous descoperit de Rubin (1960) a dus la imaginarea testului RIF care a intrat n practica diagnosticului de laborator al leucozelor aviare. Testul RIF (resistance inducing factor) const n suprainfectarea culturilor de fibroblaste embrionare de gin, infectate iniial cu un virus leucozic, cu virusul sarcomului Rous. Acest virus produce cu regularitate efect citopatic n culturi de fibroblaste. Celulele care conin ns virusul leucozic nu mai sunt receptive i nu se mai modific sub aciunea virusului Rous. Absena efectului citopatic constituie prin 225

Virusologie general urmare, n cazul testului RIF, o dovad indirect a prezenei n celul a unui virus leucozic aviar. Proprieti antigenice. Virusurile leucozice sunt nrudite antigenic ntre ele dup cum i cu virusul sarcomului lui Rous, care face parte din acelai gen. Prin reacii ncruciate de seroneutralizare i imunoflorescen au fost identificate dou grupe serologice notate cu A i B; se preconizeaz, n timpul din urm i admiterea unui al treilea grup. nrudirea antigenic ntre virusurile leucozelor aviare cu virusul sarcomului lui Rous a dus la punerea la punct a unui test serologic foarte sensibil pentru identificarea virusurilor leucozice, cunoscut sub denumirea de testul COFAL, bazat pe observaiile lui Sarma, Turner i Huebner (1964). Testul COFAL (complement fixation avian leucosis) const n utilizarea de seruri recoltate de la mamifere (hamster, cobai) infectate experimental cu virusul Rous (tulpina SchmidtRuppin). Anticorpii din serurile respective fixeaz ns complementul nu numai cu antigenul Rous, dar i cu unele virusuri leucozice aviare, mai ales cele ale leucozei mieloide i eritroide. Rezistena fa de factorii de mediu. Virusurile leucozelor aviare au un grad mai mare de rezisten fa de factorii naturali de mediu, comparativ cu alte virusuri. Sub form uscat rezist uneori chiar pn la un an. Temperaturile sczute au un efect conservant. Patogenitate. Bolile produse de aceste virusuri afecteaz mai ales galinaceele i se caracterizeaz fie prin modificri numerice i calitative ale elementelor figurate ale sngelui (forme leucemice), fie prin apariia de tumori n diferite esuturi i organe (forme aleucemice). n funcie de categoria elementelor albe afectate, leucozele pot fi: eritroid, mieloid sau limfoid. Boala lui Marek i agentul ei etiologic, situat mult vreme alturi de leucoze, este considerat astzi ca entitate etipatogenetic total distinct de ele. Dup Prtacu (1979), testele COFAL, RFC, imunodifuzie, imunoflorescen i seroneutralizare pot fi utilizate cu bune rezultate pentru identificarea i studiul virusurilor tumorale aviare. Virusurile leucozelor fiind slab imunogene, nu se preteaz pentru prepararea de vaccinuri. 226

Virusologie general Pentru profilaxia leucozelor aviare se merge pe metoda seleciei de linii genetic nereceptive, fa de aceste virusuri. Virusul sarcomului lui Rous Tumora numit astzi sarcomul lui Rous este primul proces neoplazic cruia i s-a demonstrat, de ctre Peyton Rous, n 1910, etiologia virotic. Morfologic este identic cu virusurile leucozelor aviare; masa molecular a genomului este de 9,6 x 106. n structura virionului a fost identificat revers-transcriptaza ca protein virus specific component structural a nucleocapsidei. Foarte sensibil la temperatur, virusul este inactivat n 15 minute la 550C, prezint n schimb un remarcabil grad de rezisten fa de razele X i ultraviolete. Antigenic se constat o pluralitate, trei dintre serotipuri fiind considerate clasice; ele sunt reprezentate de tulpinile Schmidt-Ruppin, Praga i CarrZibler. Tulpina Schmidt-Ruppin este nrudit antigenic cu virusurile leucozelor aviare. Cultivarea se realizeaz uor pe membrana corioalantoidian a embrionului de gin, n grosimea cruia se formeaz focare proliferative i n culturi de fibroblaste de pasre. Infecia natural se ntlnete numai la psri i are un caracter sporadic. Tumorile pot avea diferite localizri, iar caracterul lor este malign. n condiii experimentale, transmiterea bolii este posibil i la mamifere.

GRUPA ONCOVIRUSURILOR TIP B Grupa B cuprinde un numr restrns de virusuri, de mai mic importan pentru practica veterinar, care produc tumori mamare la oarece, cobai i posibil i la alte specii.

Genul BETARETROVIRUS Virusul tumorii mamare a oarecelui (Bittner) Este cel mai bine studiat; n imaginile electronooptice ale celulelor infectate se gsesc att particule A de 70 nm 227

Virusologie general situate exclusiv intracelular, ct i forme B mature de 100-110 nm cu dublu nveli, prezente i extracelular.Efectul cancerigen al virusului transmisibil prin lapte se dezvolt i se exercit exclusiv la nivelul esutului mamar.

SUBFAMILIA SPUMAVIRINAE

Genul SPUMAVIRUS Virusurile din acest gen nu se deosebesc morfochimic de celelalte retroviride, dar sunt lipsite de efect transformant tumoral. Ele produc la diferite specii om, maimu, bou, pisic, hamster etc,- infecii persistente asimptomatice, fr importan deosebit pentru patologie. n culturi celulare determin aproape constant formarea de sinciii. Unele specii sunt cunoscute i sub numele de virusuri spumoase, de unde a derivat numele taxonului.

SUBFAMILIA LENTIVIRINAE

Genul LENTIVIRUS Lentivirinele au caracterele generale morfologice i chimice ale familiei Retroviridae, dar la fel ca spumavirinele, nu au efect oncogen. Virionii sunt lipsii de a doua membran intern a smburelui viral. Infeciile pe care le produc au un caracter lent sau cronic, nsuire dup care lentivirinele i-au primit numele. Virusul Visna Maedi este agentul a dou boli specifice ovinelor, diferite sub aspectul lor anatomo-clinic, descrise n 1930 n Islanda sub denumirile de Visna i Maedi, produse ns de acelai factor etiologic. Mai trziu au fost omologate n cadrul aceleai entiti etiologice i alte boli, descrise n diverse ri sub diferite denumiri (Zwoegerziekte n Olanda, la Bonhite n Frana, boala pulmonar de Lekipia n Kenya etc.). 228

Virusologie general Virionii au form aproximativ sferic, cu diametrul de 80-120 nm. Pe suprafaa particulei virale se gsesc expansiuni lungi de 8-10 nm. Nucleocapsida helicoidal are diametrul de 78 nm. Virusul este sensibil la eter, cloroform, pH 4,2; la 500 C este inactivat n 30 minute; este lipsit de proprieti hemaglutinante i hemadsorbante. Cultivat n celulele renale, de plex coroidian i glande salivare de oaie, produce constant efect citopatic, cu formare de sinciii. Poate fi multiplicat i n celule de cerebel de oarece, celule traheale de embrion de vac i celule renale embrionare de porc. Tulpinile Visna se multiplic mai lent dect Maedi. Infeciile naturale au urmtoarele trsturi caracteristice: visna este o encefalomielit demielinizant afebril, cu simptome nervoase care ajung progresiv la paraplegii, paralizii i moartea animalului, iar maedi este o pneumonie progresiv, simptomul predominant fiind dispneea (maedi), urmat de debilitare treptat i acelai sfrit fatal. Seroneutralizarea i RFC sunt reacii cu un nalt grad de specificitate, care permit identificarea virusului i diagnosticul etiologic al infeciilor. Virusul anemieie infecioase a calului Structura virionului nu difer de alte lentivirine, forma este sferic, iar dimensiunile aproximative de 90-140 nm. Smburele are diametrul de 40-63 nm. Exterior se gsete un nveli pericapsidal de 9 nm grosime. Natura genomului a fost stabilit pe baza absenei efectului inhibant al IUDR (5-iodo-2-deoxiuridinei) i acesta este reprezentat de ARN. Totodat, innd seama de sinteza de ADN care are loc n celulele infectate n scurt timp de la infecie s-a admis aciunea invers transcriptazei. Cultivarea se realizeaz relativ greu i numai n cazul unor tulpini, n culturi celulare de cal. ncepnd din 1960-1961 s-au obinut rezultate mai bune pe monostraturi de celule de mduv osoas i pe limfocite de cal. n ambele sisteme celulare virusul a produs efect citopatic. Fotografiile electronooptice au relevat prezena virusurilor n curs de 229

Virusologie general eliberare din celule sub forma unor muguri de 90-150 nm pe suprafaa limfocitelor. Virusul se caracterizeaz printr-o deosebit rezisten fa de factorii fizici i chimici. Temperatura de 57-600C l distruge abia ntr-o or. La lumina solar direct rezist pn la 2 ore, n gunoiul de grajd timp de 2-3 luni, iar n stare uscat, inclusiv n ser sau alt material organic, pn la 7 luni. Eterul, cloroformul i glicerina sunt inactive fa de virusul anemiei infecioase. Comparativ cu alte virusuri, dezinfectantele uzuale l distrug n concentraii mai ridicate sau ntr-un timp mai ndelungat. Virusul anemiei infecioase ecvine are 6 structuri antigenice, din care 4 sunt de natur polipeptidic, incluznd i revers transcriptaza (p9, p11, p.15, p26), iar altele dou de natur glicoproteic (gp45, gp90), (Karek, 1990). Antigenul G, descris anterior, corespunde proteiunei p26. Fiind descris la toate tulpinile virale mai este denumit i antigen comun, avnd drept caracteristic rezistena la eter (Coggins i colab., 1971) Virusul este patogen pentru cabaline, la care produce o boal cronic contagioas caracterizat rpin modificri hematologice, mai ales prin distrugerea masiv a hematiilor. Patogenitatea pentru alte specii este discutabil. Porcul, chiar dac nu face forme anatomo-clinice evidente, poate fi purttor i diseminator al virusului. Infecia experimental se face pe mnji sub vrsta de 6 luni i constituie o prob de diagnostic concludent. Alte teste de diagnostic etiologic n anemia infecioas sunt: imunodifuzia n gel de agar, prin care pot fi detectai anticorpii specifici din ser, folosind ca antigen un extract preparat dup tehnica preconizat de Coggins, a crui preparare a fost iniiat recent i la noi n ar n cadrul INMV Pasteur; imunodifuzia are un nalt grad de specificitate i sub aspect economic este avantajoas fa de bioprob; anticorpii fixatori de complement apar n ser la 2-4 sptmni de la infecie, dar titrul lor este prea redus pentru a putea utiliza RFC n scop de diagnostic. 230

Virusologie general reacia imunoenzimatic E.L.I.S.A. i imunofluorescena; examenul leucoconcetratului, preconizat de Manolescu N. (1976), care se bazeaz pe modificrile din formula leucocitar, foarte caracteristice, fr a fi ns strict specifice pentru acest virus. Acest test are n schimb avantajul de a fi cel mai simplu, mai rapid i mai uor de executat. Virusul este lipsit de proprieti imunogene, din care cazu nu se preteaz pentru prepararea de seruri i vaccinuri. n familia Retroviridae, genul Lentivirus mai sunt ncadrate i alte virusuri cum ar fi: virusul CAEC ( complexul arterit- encefalit caprin), virusul imunodeficienei bovine (BIV); virusul imunodeficienei feline (FIV); virusul imunodeficienei umane (HIV) i virusurile imunodeficienei canine i psrilor. FAMILIA REOVIRIDAE Reovirusurile sau diplornavirusurile au o capsid icozaedral cu diametrul de 60-80 nm, sunt lipsite de obicei de nveli pericapsidal, dar n jurul virionilor se observ uneori pseudomembrane, probabil dependente de celula gazd. Genomul viral este constituit din ARN dublu catenar format din 10-12 fragmente; greutatea molecular total este de10-16 x 106, iar proporia de G + C este de 42-44%. Virionii conin o ARN polimeraz ARN dependent. Numele de retrovirusuri rezult din asamblarea a trei iniiale REO (r = respirator; e = enteric; o = orfan), adic virusuri respiratorii enterice orfane, iar cel de diplornavirusuri deriv din structura dublu catenar a ARN constituient al genomului (diplo = dublu; rna = ARN). Comparativ cu virusurile enterocitopatogene orfane (ECHO), reovirusurile sunt mai mari, au alt structur a genomului, produc alt tip de efect citopatic i au un antigen fixator de complement diferit. Reovirusurile se mpart n patru genuri: 231

Virusologie general Orthorevirus (Reovirus), Orbivirus, Rotavirus. Aquareovirus

Genul ORTHOREVIRUS (REOVIRUS) Genul Reovirus se difereniaz de Orbivirus prin prezena unei capside duble i prin categorii de gazde pe care le paraziteaz. Capsida are 92 de capsomere aeazate n dublu strat. Reovirusurile i au sediul n organismul a numeroase specii de mamifere i psri, n organismul crora duc o existen endosimbiotic, iar incosntant, condiionat de anumii factori de mediu, provoac i infecii clinice. ntre reovirusurile diferitelor specii nu exist diferene morfologice. Majoritatea reovirusurilor se dezvolt bine n ou embrionate, celule HeLa i alte linii celulare. Efectul citopatic apare la 7-14 zile de la nsmnare. Antigenic se constat o pluralitate corelat cu specificitatea de gazd. Astfel, reovirusurile mamiferelor se mpart n trei tipuri serologice (1, 2 i 3), evideniabile prin reaciile de seroneutralizare i inhibare a hemaglutinrii. Toate trei tipurile au fost izolate de la om i bovine. Unul sau altul din tipuri au fost izolate de la cine, pisic, porc, oaie i alte specii. La psri au fost identificate 11 serotipuri. Proprietile hemaglutinante fa de globulele roii ale diferitelor specii animale sunt corelate cu serotipul. Infeciile naturale nu sunt entiti etiologice precis definite. Reovirusurile se izoleaz din procese pneumonice, sindroame hepatice, gastroenterice i nervoase de la speciile amintite, dar mai frecvent de la taurine. Infeciile cu reovirusuri la psri sunt larg rspndite, ele fiind izolate din infecii respiratorii cronice (Petek, 1957), artrite i tenosinovite (Olson, 1957), enterite, pericardite, perihepatote, etc. Dei sunt foarte rspndite pn n prezent la puii de gin a fost descris o singur entitate morbid produs de reovirusuri i anume artrita viral.

232

Virusologie general

Genul ORBIVIRUS Principala deosebire fa de reovirusuri const n structura capsidei, format dintr-un singur strat de 32 capsomere. Speciile cele mai importante sunt virusul limbii albastre i al pestei ecvine. Virusul limbii albastre (Blue-tongue) Este agentul unei infecii la oi, transmisibil prin artropode, caracterizat prin inflamaia mucoasei bucale i gastrointestinale. Virionul are diametrul de 53-60 nm; este lipsit de proprieti hemaglutinante i hemadsorbante. Cultivarea este posibil pe ou embrionate a cror moarte o produce n 4-8 zile cu leziuni hemoragice extinse. n culturi celulare se multiplic cel mai bine n monostraturi primare de celule renale de miel. Efectul citopatic apare n 24-72 ore. Experimental, virusul poate fi adaptat pe oarece i hamster, pe cale intracerebral. Imunizarea activ a oilor se realizeaz prin vaccinuri preparate din virusuri vii i atenuate, prin pasaje pe oi sau prin avianizare. Virusul pestei ecvine este asemntor cu cel al limbii albastre, are diametrul de 55 nm i prezint la exterior un fel de pericapsid, constituit din proteine specifice de gazd. Prin RFC se evideniaz prezena unor antigeni comuni de grup, dar inhibarea hemaglutinrii i seroneutralizarea sunt strict specifice; au fost identificate 9 serotipuri. Virusul se cultiv pe celule renale de pui de hamster i pe unele linii celulare. n condiii experimentale este patogen pentru oarece , obolan, cobai. Infecia natural, rspndit mai ales n Africa i n Asia de Sud, afecteaz cabalinele i se caracterizeaz prin febr, leziuni edematoase subcutanate i pulmonare, hemoragii n organele interne i acumulri de lichide seroase n caviti.

233

Virusologie general ncadrai provizoriu printre reovirusuri, sunt agenii care produc boala crestei albastre, bursita infecioas i pancreatita infecioas necrotic a pstrvilor. Virusul bolii crestei albastre (Blue comb) Cu privire la etiologia acestei infecii, numit i monocitoza aviar, care afecteaz mai ales ginile i curcile n perioada nceperii ouatului, planeaz nc unele incertitudini datorit faptului c alturi de tulpini cu nsuiri morfochimice caracteristice reovirusurilor, se izoleaz uneori de la psrile bolnave i alte virusuri.

Genul ROTAVIRUS Virusul diareei neonatale a vieilor, purceilor, mnjilor, iepurilor, cinilor, la diferite specii de psri i la copii sunt implicate n apariia unor sindroame gastroenterice cu evoluie acut. Prezint unele diferene n structura capsidei, comparativ cu genurile Reo i Orbivirus. Virionul, cu diametrul de 60-66 nm, are un smbure (genom) format din ARN dublu catenar, cu diametrul de 36-38 nm. nconjurat de o membran pe care sunt aezate radiar capsomerele de form cilindric n dublu strat. Asemnarea virionului cu o roat a inspirat numele genului. n fecalele copiilor nou-nscui au fost identificate rotavirusuri identice morfologic cu cele ale vieilor. n prezent, pe baza anticorpilor neutralizani ai glicoproteinelor capsidale (VP-6), rotavirusurile mamifere sunt mprite n patru grupe (Bridger i col., 1982) notate cu literele mari ale alfabetului (A,B,C,D). n serogrupul A sunt ncadrate rotavirusurile tipice deoarece posed un antigen comun, care le deosebesc de rotavirusurile atipice. Rotavirusurile atipice au fost mprite ulterior n 7 serotipuri antigenice distincte (Oedles i col., 1983)

234

Virusologie general Familia BIRNAVIRIDAE

Familia Birnaviridae Avibirnavirus i Aquabirnavirus

cuprinde

dou

genuri:

Genul AVIBIRNAVIRUS Virusul bursitei infecioase (Gumbaro) Afecteaz cu precdere tineretul aviar, producnd leziuni de tip limfoproliferativ edematos, hemoragic, necrotic. Organul cel mai afectat este bursa lui Fabricius; de aceea, pe parcursul bolii se instalez o stare de imunosupresie. Factorul etiologic a crui ncadrare taxonomic este nc distrus, are majoritatea caracterelor unui reovirus. n celulele infectate, unii autori au pus n eviden i particule mai mici, asemntoare cu parvovirusurile defective adenoasociate, dat rolul etiologic al acestora pare a fi nensemnat.

Genul AQUABIRNAVIRUS Virusul pancreatitei infecioase necrotice a pstrvilor Afecteaz tineretul diferitelor specii de pstrvi. Virionii sunt icozaedrali, au dimensiunile de 45-65 nm i capsida constituit din 92 capsomere.

Familia PICORNAVIRIDAE

Picornavirusurile sunt cele mai mici virusuri, cu diametrul de 20-30 nm. Capsida este icozaedral i constituit din 60 capsomere, compuse din polipeptide diferite. Genomul este un singur lan de ARN monocatenar cu greutatea molecular de 2,5 x 106. Multiplicarea lor are loc n citoplasm. 235

Virusologie general Studiul genelor identificate n ARN viral a demonstrat c ele codific biosinteza de proteine structurale i numai una sau dou ARN replicaze. Familia Picornaviridae are 6 genuri: - Enterovirus, - Cardiovirus, - Aphtovirus, - Rhinovirus - Hepatovirus; - Parechovirus; Genul ENTEROVIRUS Genul cuprinde numeroase specii patogene pentru vertebrate, unele de importan major pentru patologia uman i animal. Enterovirusuri umane Virusul poliomielitei este patogen pentru om fiind localizat la nivelul tubului digestiv. Majoritatea indivizilor se imunizeaz la o vrst foarte fraged, infeciile clinice sub form de paralizie infantil producndu-se la un numr foarte restrns de gazde. n prezent se cunosc trei serotipuri, toate cultivabile n culturi celulare de om i alte primate, dup cum i n diferite linii celulare. n monostraturi formeaz plaje. n serul bolnavilor sunt decelabili anticorpi fixatori de complement i neutralizani. Vaccinarea cu virusuri atenuate, dup metodele Salk i Sabin, confer stri de imunitate solide, iar aplicarea lor organizat n ultimii ani a dus la restrngerea sensibil a cazurilor de poliomielit. Virusurile coxsackie sunt numite astfel dup o localitate din statul New York, sunt asemntoare cu virusul poliomielitei i se izoleaz din tubul digestiv al copiilor, mai ales n perioada de var i toamn. Uneori produc forme clinice de boal, caracterizate prin simptome i leziuni variate ca: exantem al extremitilor, leziuni vezicular-ulcerative la nivelul faringelui, tulburri respiratorii, miocardite, orhite etc. Virusurile coxsackie se mpart n dou grupe: A i B, distincte prin tipul de celule pe care se cultiv, simptomele i 236

Virusologie general leziiunile produse la organismele infectate. Tipul A se multiplic n culturi celulare i un numr redus de tulpini sunt patogene pentru embrioni, n timp ce tipul B se dezvolt bine n culturi celulare. Fiecare grup conine mai multe serotipuri. Toate virusurile coxsackie sunt patogene experimental pentru oarecele sugar, care poate fi utilizat n scopul izolrii tulpinilor. Enterovirusuri porcine Virusurile bolii de Teschen, particula viral are dimensiuni de 30 nm. Capsida icozaedral constituit din 32 capsomere; sunt eter i coloroform rezistente i sensibile la congelare; pierzndu-i patogenitatea; nu au proprieti hemaglutinante. n prezent se cunosc dou tipuri de virus de Teschen: 1 i 2. Ambele se cultiv pe embrioni de gin i n culturi celulare renale de porc, producnd efect citopatic. n condiii experimentale sunt patogene numai pentru porc, iar n condiii naturale sunt patogene pentru suine i uneori la ovine. Infecia natural este cunoscut sub denumirile de encefalomielita infecioas a suinelor, boala de Teschen, dup numele localitii unde a fost diagnosticat prima oar, n Cehoslavacia, sau boala de Talfan, dup cel al localitii engleze unde a fost diagnosticat mai trziu; virusul de Talfan a fost considerat la nceput distinct de cel de Teschen, ca apoi s se constate identitatea celor dou virusuri. Pentru diagnosticul etiologic al bolii se impune izolarea virusului n culturi celulare renale de porc i identificarea lui prin seroneutralizare cu un ser cunoscut. Imunizarea efectivelor n pericol de contaminare se face prin vaccinare cu vaccinuri vii atenuate sau inactivate. Virusul bolii veziculoase a porcului Acest virus produce o infecie epizootic la suine asemntoare anatomoclinic cu febra aftoas. Virionul are o structur corpuscular i diametrul de 3032 nm. Capsida, de simetrie icozaedral, este constituit din capsomere cilindrice. Virusul este rezistent la pH 5 i la eter. 237

Virusologie general Antigenic omogen, el este total distinct de virusul febrei aftoase. Unele tulpini sunt hemaglutinante. Cultivarea este posibil pe celule renale primare i secundare de porc; produce efect citopatic i microplaje. Virusul este patogen pentru suine i n condiii naturale i experimentale; nu se preteaz pentru prepararea de vaccinuri, fiind slab imunogen. n laboratoarele n care se lucreaz n cantiti masive cu acest virus s-au semnalat infecii la om, asemntoare cu cele produse de unele virusuri coxsackie. Enterovirusuri aviare Virusul encefalomielitei infecioase a psrilor particula viral are 20-30 nm. Cultivarea virusului este posibil pe embrion de gin i n culturi celulare. Infecia pe embrion reuete cel mai bine n cazul inoculrii intracerebrale, intravenoase, intraviteline, intraamniotice sau intraalantoidiene. Embrionii mor ntr-un interval de 9-11 zile. Uneori, n cazul cnd embrionii supravieuiesc, puii manifest, dup ecloziune, semnele bolii. n culturi celulare (nevroglii, fibroblaste embrionare sau celule renale de pui) virusul se multiplic fr s produc efect citopatic evident; celulele tind spre forme sferice, iar citoplasma lor devine granular. Prin treceri seriate, producia de virus devine din ce n ce mai intens, dar este nsoit de atenuarea patogenitii. Antigenic nu se constat diferene ntre tulpini. n condiii naturale virusul produce infecii grave la tineretul aviar, transmisibile prin contact, cu difuziune enzootic. Boala, numit encefalomielita infecioas a psrilor, se caracterizeaz printr-un procent ridicat de mortalitate. Pentru diagnosticul etiologic al bolii se impune izolarea virusului, verificarea experimental a patogenitii lui pentru pui, pe cale intracerebral i identificarea lui prin reacia de seroneutralizare cu seruri specifice. Virusul are proprieti imunogene i se preteaz pentru prepararea de vaccinuri vii sau inactivate, care dau bune rezultate n imunoprofilaxia bolii. n cazul vaccinrii ginilor outoare, imunitatea se transmite prin ou.

238

Virusologie general Enterovirusuri orfane La mai multe specii animale om, maimu, bovine, suine etc.- au fost izolate enterovirusuri care n culturi celulare produc efect citopatic i al cror rol etiologic n producerea unor infecii la speciile de la care au fost izolate este incert. Aceste virusuri se izoleaz deseori de la animale clinic sntoase. Ele sunt virusuri temperate, se multiplic de regul n celulele tubului digestiv, fr a perturba funcionalitatea normal a celulelor respective, infecia fiind de tip endosimbiotic. n anumite condiii sunt ns capabile s produc infecii digestive, respiratorii, nervoase etc. Pentru desemnarea acestor virusuri se folosesc curent iniialele: E = enterovirus, C = citopatogen; iniiala speciei animale la care virusul se gsete n stare biofit (H = uman, B = bovin, S = suin, M = maimu); O = orfan, rezultnd urmtoarele grupe de simboluri: ECHO, ECBO, ECSO, ECMO. Virusurile ECHO au fost identificate pentru prima oar n culturile renale de maimu n timpul unor ncercri de izolare a poliovirusurilor; se multiplic bine ntr-o gam destul de larg de celule, producnd un efect citopatic evident, nsoit de formarea de plaje; nu se cultiv pe embrioni de gin; au efect hemaglutinant asupra hematiilor umane din grupa O. Antigenic au fost identificate peste 30 de serotipuri. Potenial i inconstant patogene, produc uneori encefalite la om. Virusurile ECBO a fost izolate din coninutul intestinal de la taurine sntoase i din focare n care animalele manifestau simptome respiratorii sau avorturi. Unele tulpini aglutineaz globulele roii de bou, iar altele pe cele de cal, oaie, cobai. Toate tulpinile se multiplic n culturi celulare renale de viel, producnd un efect citopatic evident. nrudiri antigenice au fost semnalate cu virusul ECHO i cu poliovirusul de tip II. n condiii experimentale produc uneori avorturi la cobie gestante i leziuni asemntoare celor produse de virusul Coxsackie A la oareci i hamsteri. Virusurile ECSO (ECPO) au sediul n tubul digestiv la suine, rolul lor n determinarea unei stri patologice fiind incert; uneori ele sunt omologate cu virusurile bolii de Teschen. 239

Virusologie general

Genul APHTOVIRUS Genul Aphtovirus, nou creat n 1979, a fost propus de comitetul internaional de taxonomie a virusurilor pentru virusul febrei aftose, ncadrat pn atunci n genul Rhinovirus. Virusul febrei aftoase Istoric. Virusul febrei aftoase a fost primul virus zoopatogen descoperit n anul 1898 de ctre Lffler i Frosch, care au demonstrat posibilitatea transmiterii infeciei cu filtrate din leziuni. Valle i Carr demonstreaz, n 1922, pluralitatea antigenic a virusului. Waldmann (1920) reproduce primul infecia experimental pe cobai prin inoculare intraplantar, iar mai trziu (1938) iniiaz, mpreun cu Kbe, prima metod de preparare n cantiti industriale a vaccinului antiaftos obinut din mucoasele linguale recoltate de la taurine infectate experimental. Frenkel (1947) pune la punct o metod de cultivare a virusului in vitro pe mucoase linguale de bou n stare neproliferant, meninute n stare vie ntr-un mediu adecvat, metod care i astzi se mai folosete n unele ri pentru prepararea vaccinului antiaftos. Hoffmann (1942) demonstreaz receptivitatea n condiii experimentale a oarecelui sugar, nsuire care a determinat iniial pe virusologi s aeze virusul febrei aftoase alturi de enterovirusuri i care i-a gsit o aplicaie n practica tipizrii virusului prin seroneutralizare. Alexandru Ciuc (1928) demonstreaz posibilitatea utilizrii n acelai scop a reaciei de fixare a complementului. Structura virionului. Virusul febrei aftoase este unul din cele mai mici virusuri; dimensiunile lui variaz ntre 10-30 nm, fiind de regul de 20-25 nm. Genomul viral este constituit din ARN monocatenar cu masa molecular de 2,8 x 106 daltoni. Forma particulei virale este icozaedral, n unele imagini electronooptice prezetndu-se i cuboidal sau sferic. Capsida este constituit din aproximativ 32 capsomere de form cilindric, mai mari comparativ cu capsomerele altor picornavirusuri. Examenele electronooptice executate din depozite de ultracentrifugare de material viral purificat au relevat prezena 240

Virusologie general a dou categorii de particule antigenic identice, dar distincte sub aspectul mrimii i al infeciozitii; unele mici, de 7 nm, lipsite de proprieti infecioase i altele mai mari, de 25 nm, cu care poate fi reprodus infecia. Proprieti fizico-chimice. Virusul este rezistent la eter, cloroform, detergeni, sruri biliare, la valori ale pH de 3 i 7,4-7,6, manifestnd un grad de labilitate la pH 5. La 560C este inactivat n 30 minute. Cultivabilitate. Fiind un virus epiteliotrop, se multiplic cel mai bine n celulele epiteliului lingual. Timp de mulia ani sa cultivat n laborator dup metoda lui Frenkel, n epitelii linguale de bou neproliferante in vitro. n ultimii ani s-a reuit i s-a extins cultivarea virusului aftos n culturi celulare. Cele mai adecvate sunt celulele renale de viel i purcel. Virusul se multiplic n bune condiii att n celulele meninute n suspensii ct i n monostrat, unde produce efect citopatic. Obinuit nu se multiplic n ou embrionate; poate fi ns adaptat, mai ales prin treceri seriate pe cale intravenos la embrioni n vrst de 14 zile. Proprieti antigenice. Virusul febrei aftoase se caracterizeaz prin existena unui numr mare de tipuri i variante antigenice. Tipurile clasice propuse de Valle i Carr sunt: - O (dup localitatea Oise), - A (dup denumirea francez a Germaniei Allemagne), - C (fiind al treilea tip, a fost notat cu a treia liter a alfabetului). n cadrul fiecrui tip s-au evideniat mai trziu mai multe subtipuri sau vairante, dup cum urmeaz: - 11 n cadrul tipului O, - 32 n cadrul tipului A, - 5 n cadrul tipului C. Brooksby i Galloway (1958), studiind tulpinile de virus aftos izolate n diverse epizootii pe continentul african, identific 3 tipuri antigenice, iar mai trziu un al 4-lea tip n Asia. Autorii desemneaz tulpinile africane cu iniialele SAT (Southern African Territories), urmat de numrul de ordine al tipului: SAT 1, SAT 2 i SAT 3. Pentru tipul izolat n Asia se utilizeaz apelativul Asia 1. n cadrul tipurilor africane i asiatic 241

Virusologie general s-au descris, de asemenea, mai multe subtipuri sau variante: 7 la SAT 1, 3 la SAT 2, 4 la SAT 3 i 3 la Asia 1. Tipurile i subtipurile pot uneori s se transforme dintrunul n altul. Cel mai stabil este tipul O. Pluralitatea antigenic a virusului febrei aftoase prezint o importan deosebit pentru evoluia epizootiilor de febr aftoas i prepararea vaccinurilor antiaftoase. n cursul unei epizootii se pot schimba variantele i uneori chiar tipurile. Pentru identificarea tipurilor i subtipurilor se poate folosi seroprotecia pe oareci sugari sau cobai i RFC. Fr a fi la fel de sensibil ca RFC, poate fi aplicat pentru serotipizare i imunodifuzia. Rezistena fa de factorii ecologici. Virusul rezist cel mai bine n epiteliile aftelor (pn la 2 luni n tipul iernii). Temperatura de 80-1000C l distruge instantaneu, iar la 55560C rezist pn la 40 minute. Expus la lumina solar direct rezist pn la 5 ore. n sol, n funcie de umiditate i temperatur, rezist 25-50 zile. n stare uscat, pe prul animalelor, furaje sau obiecte ntre 5-20 sptmni, iar n gunoiul de grajd, pn la 43 zile. n timpul iernii, n gunoiul ngheat sau n interiorul cpielor de paie i fn i pstreaz infeciozitatea peste 100 zile. n carnea refrigerat se pstreaz pn la 80 zile, iar n cea congelat pn la 6 luni. n lapte, dup Buxton i Fraser (1977), virusul este omort n 15 secunde la 700C, n 30 secunde la 650C, n 24 ore la 370C, n 6 zile la temperatura camerei (18-220) i n 12 zile la temperatura frigiderului (4-70); n unt rezist 8 zile. Substanele cele mai active fa de virusul febrei aftoase sunt: hidroxidul de sodiu 1-2%, formolul 1/10, acidul sulfuric N/10 i sublimatul 1/3.000. Infecia natural. Gazdele receptive sunt speciile biongulate demestice: boul, capra, oaia i porcul ct i cele exotice sau slbatice: cmila, renul, antilopa, girafa etc. Localizrile cele mai frecvente sunt cele bucale i podale. Procentul de mortalitate este redus, gravitatea infeciei constnd n procentul foarte ridicat de mortalitate, datorit extraordinarei puteri de difuziune a virusului n efectivele speciilor sensibile. Fr luarea prompt a unor msuri eficiente de combatere i profilaxie, infecia poate avea o extensie epizootic sau panzootic. 242

Virusologie general Infecia experimental. Speciile natural receptive sunt sensibile i n condiii experimentale. Animalul de laborator cel mai sensibil este oarecele sugar n vrst de 7-9 zile care, pe cale intraperitoneal, manifest la 2-3 zile de la inoculare simptome caracteristice constnd din paralizia spastic a trenului posterior i slbiciunea musculaturii cefei. Examenul histopatologic relev prezena de leziuni necrotice n musculatura striat i miocard. esuturile oriceilor infectai conin virus ntr-un titru ridicat. Cobaiul, a crui receptivitate a fost descoperit mai devreme a trecut ns n ultimii ani pe planul al doilea n practica experimentrii cu virusul febrei aftoase, nu toate tulpinile fiind patogene pentru aceast specie. Inocularea se face intraplantar, leziunile primare apar la locul de inoculare, dup care se genereaz la celelalte membre i la mucoasa bucal n 2-12 zile. {obolanul, hamsterul, iepurele, cinele i pisica, dei ceva mai greu, pot fi de asemenea infectate n condiii experimentale. Proprieti imunogene i metode de imunizare. Virusul febrei aftoase are o ridicat valoare imunogen i se preteaz la obinerea de vaccinuri i seruri cu o bun capacitate imuizant. n prepararea acestora trrebuie s se in totdeauna seama de tipul i subtipul antigenic izolat din focar. Vaccinul antiaftos concentrat i saponinat s-a preparat la noi n ar muli ani dup metoda Waldmann i Kbe, iar n prezent se prepar din culturi celulare. Serul antiaftos se obine prin hiperimunizarea bovinelor i are o valoare protectoare ridicat.

Genul RHINOVIRUS Prin reaezarea taxonomic a virusului febrei aftoase, au rmas ncadrate n genul Rhinovirus specii cu o pondere relativ minor pentru patologia veterinar. Rhinovirusuri equine Au fost izolate din focare enzootice n care animalele prezentau o rinofaringit acut nsoit de reacii febrile. Cultivarea acestor virusuri a fost posibil n culturi de celule de cal, iepure, om etc., n care produc efect citopatic. 243

Virusologie general Serologic s-au putut distinge trei tipuri antigenice, din care tipul 1 are cel mai ridicat grad de inciden.

FAMILIA CALICIVIRIDAE.

Familia cuprinde 3 genuri comune: Calicivirus, Lagovirus i Vesivirus. Genul CALICIVIRUS Particulele virale sunt de 35-45 milimicroni, au o capsid icozaedral, constituit din 32 capsomere, genomul este format din ARN monocatenar cu greutatea molecular 2,8 x 106. Calicivirusurile sunt rezistente la eter i la pH 5. Din acest gen fac parte; virusul exantemului veziculos al porcului virusul bolii hemoragice a iepurelui i virusul calicivirozei feline. Calicivirusuri feline Au fost izolate n culturi de celule renale de pisic cu afeciuni respiratorii primare sau asociate cu simptome de panleucopenie, dup cum i din conjunctivite i stomatite. ncadrarea acestor ageni n genul Calicivirus se bazeaz pe similitudinea lor cu virusul exantemului veziculos la examenul electronooptic, dup cum i a unei stabiliti cu caracter intermediar ntre entero i rhinovirusuri la pH 3. Virusul bolii hemoragice a iepurelui, ncadrat iniial n picornovirus sau parvovirus, este ncadrat astzi de Oblinger i colab., 1990 i Studdert 1994 n genul Calcivirus, familia Calciviridae. Particula viral conine ARN avnd dimensiuni de 40 nm. Boala afecteaz iepurii domestici i slbatici i se caracterizeaz printr-un sindrom hemoragipar, necroze hepatice, procese de coagulare intravenoas diseminat i mortalitate de 50-90%. Genul VESIVIRUS 244

Virusologie general

Virusul exantemului veziculos al porcului Virionul icozaedral are 13-20 milimicroni. Virusul este necultivabil pe ou embrionate, ci numai n culturi celulare embrionare de porc. Structura antigenic este heterogen, constatndu-se, ca i la virusul febrei aftoase, un grad accentuat de pluralitate; au fost descrise 13 tipuri imunologice notate cu literele alfabetului. Ele sunt ns cantonate n California, n restul lumii fiind prezent numai tipul B. Virusul este sensibil fa de agenii fizici i chimici uzuali. n carnea refrigerat i congelat rezist 4-18 sptmni. Infecia natural prezint multe asemnri cu febra aftoas, att sub aspectul anatomo-clinic, ct i epizootologic, virusul avnd ns o capacitate de difuziune ceva mai redus, comparativ cu virusul febrei aftoase. Prepararea vaccinului fiind posibil numai pe porc, este prea costisitoare i nu s-a introdus n practic. VIROIZII O form acelular de via, mai simpl dect virusurile i de dimensiuni incomparabil mai mici, este reprezentat de viroizi. Denumirea lor arat nrudirea cu virusurile, ei fiind n esen molecule mici de acid nucleic neprotejat de nveliul proteic denumit capsid i nici de nveliul exterior ce conine lipide i proteine,aa cum este cazul la unele virusuri. n 1971 au fost evideniate pentru prima oar nite maladii ale plantelor, provocate de un tip special de ageni patogeni subvirali denumii viroizi. Printre aceste maladii ale plantelor pot fi citate: boala stelrii tuberculilor de cartof, nanismul i ptarea clorotic a crizantemelor, cloroza castraveilor, boala cadang-cadang a palmierilor de cocos, etc. Primul viroid a fost descoperit de ctre cercettorul american T.O. Dienner la Beltsville (SUA) n urma unor cercetri efectuate n perioada 1967-1071 la cartof. Viroizii sunt un tip special de ageni patogeni, similari virusurilor, dar cu o organizare mai simpl i de dimensiuni mult mai mici. 245

Virusologie general Viroizii sunt forme acelulare de via, alctuite din molecule de ARN de talie mic, neprotajate de proteine. De pild, viroidul cartofului care provoac deformarea tuberculilor are un genom reprezentat de o molecul circular de ARN cu regiuni mono- i dublu catenare, alctuit dintr-o secven de 359 de nucleotide. Este pentru prima oar c se identific o astfel de structur circular format din ARN monocatenar. n general s-a constatat c viroizii sunt localizai n nucelul celulelor, unde se replic cu ajutorul unei enzime de tipul replicazelor din celula gazd. La plante s-au identificat secvene de nucleotide din ADN-ul nuclear complementare cu ARN-ul viroizilor, dar se pare c replicaia viroizilor nu se realizeaz prin intermediul ADN. Cercetri noi arat c n celulele vegetale exist o multitudine de enzime, care pot replica moleculele de ARN, folosind ca matri chiar moleculele de ARN ale virionului. Originea viroizilor nu este prea bine cunoscut. Pornindu-se de la observaia c genele plantelor i animalelor sunt alctuite din regiuni informaionale, denumite exoni i regiuni non-informaionale, denumite introni, care sunt eliminai n procesul de activare al genelor, s-a emis ipoteza c viroizii ar proveni din introni nedegradai. Capacitatea patogen a viroizilor se datoreaz interreaciei lor cu genomul celulei gazd, probabil prin perturbarea mecanismelor de reglaj genetic ale acesteia. Ca urmare, se consider c viroizii sunt la limita inferioar a vieii, fiind sisteme genetice autoreplicative, care posed un program genetic redus la minim. Recent s-a demonstrat c i unele maladii umane sunt provocate de viroizi. Astfel la un trib din Noua Guinee a fost identificat maladia Kuru, care provoac degenerescena creierului. O alt maladie similar, denumit Kreutzfeld-Jacob, provoac degenerarea progresiv a esuturilor cerebrale, iar la oi este cunoscut cpiala, care afecteaz sistemul nervos. Pn acum, aceste maladii erau considerate ca fiind provocate de aa-numitele virusuri lente, cu o evoluie ndelungat. Cercetri mai noi arat c unele sunt provocate de viroizi. Investigaii efectuate n Anglia, la Institutul de Cercetri asupra Bolilor Animalelor, au demonstrat prezena unei mici molecule de acid nucleic n esuturile cerebrale de la oile bolnave de cpial. n 246

Virusologie general acest caz se pare c este vorba de un viroid alctuit dintr-o molecul mic de acid nucleic, autoreplicativ, neprotejat de proteine, sau de anvelopa n care este nchis uneori capsida viral. n concluzie, viroizii pot fi considerai o noua clas de ageni patogeni subvirali, alctuii exlusiv dintr-o molecul de acid nucleic, cei mai mici cunoscui pn n prezent. Ei sunt forme nrudite cu virusurile, dar foarte primitive. Caracteristicile lor denot existena unei distane filogenetice apreciabile fa de virusuri.

PRIONII

Prionii sunt ageni patogeni fr precedent care genereaz un grup de boli neurovegetative printr-un mecanism complet nou. Bolile prionice se pot caracteriza ca dereglri genetice, sporadice sau infecioase, cauzate de dereglri ale proteinei prionice (PrP) (de la acronomul i anagrama din limba englez Proteinaceous infectious particle ). Prionul este o particul infecioas proteic care rezist la tratamente draconice (formol, sterilizare clasic iradiaii). Americanul Stanley Prusiner (premiant Nobel n medicin, 1997) a descoperit n 1997 acest germene neconvenional care provoac encefalopatii spongiforme transmisibile (EST), boli cunoscute la oaie nc din 1732 (scrapie) i la om din 1920 (MCJ). Encefalopatiile spongiforme transmisibile (EST),sunt boli ale omului i ale mamiferelor sunt caracterizate prin: - perioada de incubaie lung, de ordinul anilor; - simptomatologie exclusiv nervoas i evoluie clinic lent, ce dureaz sptmni, cel mai adesea luni, uneori ani, ntotdeauna cu sfrit letal; - transimisibilitatea pe cale parenteral sau digestiv, la aceeai specie sau la alte specii, atunci cnd se folosete ca material infectant esutul nervos, uneori i alte esuturi recoltate din cazuri de boal;

247

Virusologie general absena oricrui rspuns imun fa de agentul transmisibil, dei gazda i pstreaz nealterat competena imunologic fa de alte antigene; - leziuni degenerative ale encefalului, reprezentate prin vacuolizri ale pericarionilor i ale neuropilului, necrobioz neuronal, proliferri gliale (astrocitoz) i uneori formarea de plci amiloide; frecvena i localizarea acestor modificri variaz n mare msur n funcie de specia i rasa animalului gazd i de tulpina agentului transmisibil. EST ale animalelor i ale omului semnalate pn n prezent sunt expuse n tabelele 1 i 2. -

248

Virusologie general

Tabelul nr. 6 Encefalopatiile spongiforme transmisibile ale animalelor Entitatea nosologic Scrapie Encefalopatia transmisibil a nurcilor (ETN) Boala cronic cahectizant a cervideelor Encefalopatia spongiform bovin (ESB) Specii afectate n condiii naturale, mod de transmitere Oi, capre; contagiozitate redus, se transmite de la mam la ft i prin nvelitorile fetale Nurca de cresctorie; necontagioas, transmis prin hrana contaminat cu agenii scrapie (?) sau ESB Trei specii de cervidee din America de Nord; semnalat la animale n captivitate, dar i la exemplare n libertate; suspect a fi contagioas Bovine domestice; aprut n 1985 n Regatul Unit, ulterior semnalat i n alte ri; transmis cu fin de carne-oase; necontagioas, dar se suspecteaz un procent redus de infecii transplacentare; argumente circumstaniale n favoarea ipotezei transmiterii la felide i la om (v.BCJ) {apte specii de Bovidae slbatice n captivitate; transmis prin fina de carneoase, foarte probabil -pisici domestice i 4 specii de feline slbatice n captivitate; aprut n 1990, foarte probabil n urma contactului cu agentul ESB

Encefalopatia exotice Encefalopatia felin (ESF)

ongulatelor spongiform

249

Virusologie general

Tabelul nr.7 Encefalopatiile spongiforme transmisibile ale omului Entitate nosologic Boala Kuru Mod de transmitere ntlnit la o anumit populaie din Papua-Noua Guinee; asociat cu un canibalism ritual i a disprut odat cu acesta. Boala Creutzfeld-Jacob (BCJ) Uniform rspndit pe glob, cu o prevalen anual medie de 1 x 10-6; se cunosc forme familiale, iatrogene i sporadice, n general este semnalat la vrsta medie de 65 ani i dureaz cca.4 luni. Boala Gertmann-Straussler Forme familiale asociate cu o mutaie a genei Prn-p; evoluie morfoclinic Scheinker (BGSS) diferit de BCJ; vrsta apariiei 35-55 ani, durata bolii 2-10 ani, simptomele spino-cerebeloase preced demena Insomnia fatal familial Semnalat din 1992, forme familiale asociate cu o mutaie a genei Prn-p. (IFF) Varianta bolii Creuttzfeld Din 1994 pn n prezent au fost semnalate 21 cazuri n Regatul Unit i 1 caz Jacob (v. BCJ) n Frana, la indivizii ntre 19 i 41 ani ( media = 21 ani), cu o durat a evoluiei de 7,5 22,5 luni; tabloul morfoclinic diferit de BCJ; argumente circumstaniale n sprijinul ipotezei c este asociat i produs de agentul ESB.

250

Virusologie general Dintre aceste boli, scrapia este cunoscut de mult i cel mai intens studiat. Cunotinele actuale privind etiopatogenez EST se bazeaz n bun parte pe studiul acestei boli. Astfel, scrapia a fost prima EST n care s-a demonstrat transmisibilitatea att la oaie, ct i la oarece (Chandler, 1961, citat de 39) iar ulterior i la alte specii. n 1959 Hadlow (citat de 43) atrage atenia asupra asemnrii modificrilor histologice din scrapie cu cele ntlnite n Kuru, boala a crei etiologie era pn atunci necunoscut. Aceast observaie a determinat reluarea experimentelor de transmitere a acestei la primate i ulterior la alte specii. Rezultatele pozitive obinute au inaugurat un nou capitol al patologiei omului, acela al demenelor transmisibile (Gajdusck D.C. et al., 1966 citai de 21). Modelul oferit de scrapie a permis aprofundarea etiopatogenezei celorlalte EST, precum i a mecanismelor moleculare implicate. Cteva date privind agentul scrapiei Numit PrPsc ( de la scrapie) sau proteina PrPres ( de la rezisten) ce provine nu din expresia unei gene, ca toate proteinele, dar din pcate replicndu-se n specia unei proteine prezente la suprafaa numeroaselor tipuri celulare, de la neuroni pn la spermatozoizi. Rolul acestei proteine normale numit PrPc, rmne insuficient cunoscut, cu excepia creierului unde ea este implicat n transmisia semnalelor ntre celule (rol neurotransmitor). Descoperirea transmisibilitii bolii a condus la ipoteza implicrii n etiologie a unui virus. Toate ncercrile de a demonstra prezena acestuia i eventualul rspunsul imun al organismului la infecie au euat (43) Ipoteza etiologiei virale a fost zdruncinat i de descoperirea rezistenei deosebite a agentului scrapiei ulterior i a agenilor altor EST la aciunea aldehidei formice i a altor factori chimici sau fizici ce inactiveaz toate virusuri cunoscute. Astfel s-a demonstrat c infectivitatea suspensiilor de creier este pstrat, dei mult diminuat, n urma expunerii la 3600C timp de 60 minute. Tratamentul prealabil cu aldehid formic mrete rezistena la aciunea factorului termic. (11).

251

Virusologie general Lucrrile de purificare i fracionare a suspensiilor de esut nervos recoltat de la animale bolnave au demonstrat c infectivitatea maxim este asociat cu o protein de tipul amiloidului, cu greutate molecular de 27- 30 kDa. Aceast molecul proteic infectant a fost denumit prion, termen derivat din proteinaceus infectious particle, sau protein prionic, desemnat cu acronimul PrP27-30 (Prusiner et al., 1982, citai de 44). Teoria prionic n etiopatogeneza EST a determinat i denumirea acestor afeciuni ca boli prionice. n aceleai fraciuni cu infectivitate maxim, obinute n urma tratrii suspensiilor de esut nervos infectat cu ajutorul unor detergeni, s-au pus n eviden fibrele cu o grosime variind ntre 4 i 16 nm i o lungime ce poate atinge 500 nm (35-36). Ele au fost denumite fibrile scrapie-asociate (SAF). Ulterior s-a demonstrat c SAF sunt constituite din PrP27-30 care, n anumite condiii experimentale, formeaz agregate fibrilare de pn la 1000 molecule (Diringer et al., 1983, citai de 26) Prezena PrP27-30 i a SAF a fost demosntrat n cazul tuturor EST cunoscute i a devenit un criteriu de confirmare a diagnosticului clinic. Aceeai protein este i componenta principal a plcilor amiloide ntlnite n unele EST. Este de menionat c amiloidul prezent n cazul EST este chimic i antigenic diferit de cel semnalat n sistemul nervos central la subiecii senili sau n cazul altor demene, netransmisibile, ale omului, ca de exemplu boala Alzheimer. (22) PrP27-30 este o fraciune rezistent la proteaza K, fapt pentru care este desemnat cu simbolul PrPres i rezult din clivarea enzimatic a unei proteine precursoare cu greutatea molecular 33-35 kDa (PrP33-35) (Bolton et al. 1982, citai de 9; Oesh N. et al., 1985, citai de 11,46,47) n anul 1985, Oesh et al. (citai de 9) descoper c proteina prionic PrP33-35 din cazurile de EST este o form izomeric a unei proteine normale produs de celulele neinfectate. Aceast descoperire senzaional este confirmat de alte colective (Hay et al, 1987; Bedheim et al, 1988, citai de 9) Pentru a diferenia cele dou forme s-a propus terminologia urmtoare: -PrPsc (sc de la scrapie) pentru proteina precursoare PrP 25,25,30,35 252

Virusologie general -PrPc (c de la cell= celul) pentru proteina prionic normal, denumit i PrPsen (sensibil la proteinaza K) Gena care controleaz conteza PrPc a fost desemnat prin acronimul Prn-p.

Gena Prn-p i produsul su de expresie Gena care controleaz expresia PrPc a fost identificat la numeroase specii de vertebrate ( om, oaie, capr, hamster, oarece, obolan, broasc) la unele nevertebrate (nematode, drosofila) i probabil la levuri (53). La om ea este localizat pe braul scurt (p) al cromozomului 20 (Robakis N.K. et al., 1986, citai de 12). Homologia secvenelor nucleotidice la diferite specii este de 80-90% (18) Faptul c aceast gen este nalt conservat pe scara filogenetic sugereaz c produsul su de expresie are un rol important n organism, dei nc necunoscut. Proteina prionic normal este o glicoprotein de suprafa. Ea are multe asemnri structurale cu proteina ce moduleaz receptorii de acetilcolin (Harris et al., 1989, citai de 12). Se presupune c ar interveni n recunoaterea celular (44). Rolul central al genei Prn-p i al proteinei prionice n patogeneza EST este demonstrat de faptul c oareci la care aceast gen a fost deletat nu mai sunt receptivi la infecia cu agenii EST (Bueler H. et al. 1993, citai de 15). Pe de alt parte, oarecii transgenici, la care gena Prn-p a fost nlocuit cu gena similar de hamster, n urma infeciei experimentale, produc prioni cu caracterele celor de hamster (Scott M. et al., 1989, citai de 44) Cnd proteina normal (PrPc) se transform n agent infecios (PrPsc), ce schimb forma, constituienii si de baz, acizii aminai, au tendina de a se suprapune n foi n loc s se ruleze n elice. Aceast structur numit, n foi bete, rezist la degradarea enzimatic i s-a constatat acumularea sa n creier, fr s se tie cum agentul infecios ctig acest organ. Acumularea proteinelor PrPsc antreneaz moartea neuronilor, cum o arat autopsia creierelor victimelor encefalitei spongiforme transmisibile.

253

Virusologie general Dar dup experienele realizate in vitro, moartea neuronal ar fi mai degrab programat de ctre mici celule vecine cu neuronii, celulele microgliale care prolifereaz la indivizii bolnavi. Funcionnd ca macrofage, aceste celule reacioneaz la prezena proteinelor PrPsc, secretnd semnale chimice, toxice, capabile s bulverseze funcionarea normal a organismelor. Cercettorii francezi, reuesc ntradevr, s demonstreze c proteinele PsPsc prezente la suprafaa neuronilor, regleaz transmisia semnelor nervoase. Celulele infectate de ctre prioni sunt de asemenea mult mai sensibilizate la stressul oxidativ (responsabil de mbtrnire celular), confirm Sylvain Lehmann de la Institutul de Genetic Uman Montpelier, care demonstreaz aceasta pe culturi celulare de neuroni de oarece, infectai de prioni Forma patologic a proteinei prionice PrPsc, are secvena aminoacizilor identic cu aceea a formei normale PrPc (Stahl et al., 1993, citai de 45) Cele dou proteine se deosebesc prin structura secundar a lanului polipeptidic. PrPc are o configuraie predominant helicoidal (42%) i probabil este lipsit de structuri betaplisate. Structurile alfa-helix sunt distribuite n patru regiuni, cunoscute ca H1-H4 (figur).

81/82

117 129

171

219

51

91 105

145

178

219

253

H1

H2

H3

H4

Gena prionic uman Sgeile indic zonele de polimorfism. Parantezele marcheaz regiunile cu conformaie alfa-helix. Paranteza ngroat indic amplasarea a 5 secvene repetitive ce codific cte un octapeptid.

254

Virusologie general Situsurile corespunztoare acestor regiuni sunt situate ntre codonii 105-145 (H1 i H2) i codonii 178-219 (H3 i H4) (45) Dimpotriv PrPsc prezint o configuraie predominant beta-plisat (43%) structurile alfa-helix constituind doar 30% (Pan K.M. et. al. 1993, citai de 15). Aceast configuraie este caracteristic amiliodului i n general, proteinelor fibrilare. Modificarea conformaional a PrPc confer PrPsc rezultat proprieti diferite, precum lipsa de solubilitate n detergeni, rezistena la proteoliz i capacitatea de a forma agregate (45). PrPsc ia natere prin transformarea PrPc dup ce lanul polipeptidic al acesteia din urm a fost asamblat. Acest proces post-translaional se realizeaz prin despiralarea structurilor alfa-helix i replierea catenei de aminoacizi n structuri betaplisate (Borchelt et al. 1990, citai de 45) Spre deosebire de PrPc, PrPsc nu este transportat n exteriorul celulei. Ambele forme pot fi identificate prin Western blot n membranele microsomale i sinaptosomale ale neuronilor (47). Sub aciunea enzimelor proteolitice, lanul polipeptidic al PrPsc se scurteaz, rmnnd doar secvena cuprins ntre poziiile 680232 care reprezint fraciunea rezistent la proteaze i constituie PrP27-30 (8) Aceast rezisten mpiedic metabolizarea i duce la acumularea n sistemul nervos central cu declanarea vacuolizrii pericarionului, a proceselor dendritice i axoniale i n mai mic msur, a astrocitelor i a oligodendrocitelor (Prusiner S.B. et al., 1987, Gajdusek D.C., 1988, citai de 47). Astfel, modificrile conformaionale ale proteinei prionice normale din structuri alfa helix n structuri betaplisate este elementul central n formarea prionilor i n patogeneza EST (45) Intervenia genotipului gazdei n expresia morfoclinic a EST Prima demonstraie a interveniei genomului gazdei n patogeneza EST a fost realizat n 1959 de ctre Gordon (citat de 39), care a infectat 1027 oi din 24 rase cu acelai agent al scrapiei. Dup doi ani de observaie autorul a constatat c 255

Virusologie general procentul de morbiditate a variat de la zero la Dorset-Down, la 78% la rasa Herdwick. Cercetrile ulterioare au demonstrat c perioada de incubaie i rezistena n boala experimental sunt controlate de o gen Sip (= scrapie incubation period) cu dou alele: sA (short) i pA (prolonged). Majoritatea oilor cu alela sA, dominant pentru susceptibilitate, fac boala dup infecia experimental, perioada de incubaie fiind mai scurt la homozigoi, care sunt i cei mai receptivi la infecia n condiii naturale. n schimb, oile homozigote pentru alela pA fac rareori boala, chiar dup infecia intracerebral. Heterozigoii sA/pA sunt relativ rezisteni la infecia natural. Rolul polimorfismului genei Prn-p a fost amnunit studiat n etiopatogena EST umane. Cercetrile au pornit de la observaiile privind epidemiologia bolii Creutzfeld-Jacob (PCJ), cea mai cunoscut din aceast grup. BCJ este relativ uniform rspndit pe glob, avnd o prevalen anual de cca 1/1 milion, dei se cunosc cteva grupri de cazuri n rndul populaiilor cu o anumit origine etnic. Pn n prezent boala nu a putut fi asociat cu EST ale animalelor. Din punct de vedere epidemiologic, se recunosc trei forme de BCJ (16,45) -forma iatrogen (5%) n care infecia se realizeaz prin contactul cu unele esuturi ale indivizilor bolnavi (transplant de cornee sau de duramater, electrozi de electroencefalografie, tratamentul cu hormon somatotrop preparat din hipofize recoltate de la cadavre); -forma familial (10%) este ntlnit la mai muli descendeni ai aceleiai familii; -forma sporadic (85%), care nu poate fi asociat cu nici un element al celorlalte dou forme. Alte dou forme morfoclinice de EST ale omului, boala Gerstmann-Straussler-Scheinker (BGSS) i insomnia familial fatal (IFF) au, de asemenea, un caracter familial. Aceste observaii au condus la concentrarea cercetrilor asupra genotipului cazurilor familiale i sporadice de EST umane. n toate formele ereditare de EST umane (BGSS, IFF i BCJ cu evoluie familial) au fost identificate mutaii n cadrul deschis de lectur al genei Prn-p. 256

Virusologie general

Formarea i multiplicarea prionilor Mecanismul intim al transformrii proteinei prionice normale PrPc n forma sa patologic PrPsc nu este pe deplin cunoscut. Datele obinute pn n prezent, n special cele furnizate de experimentele pe oareci transgenici i cu peptide sintetice, permit unele ipoteze plauzibile. Acestea ncearc s explice formarea i multiplicarea prionilor n cele trei forme ale EST cunoscute: infecioas (exogen), ereditar i sporadic. Majoritatea datelor ce vin n sprijinul acestor ipoteze provin din rezultatele infeciilor experimentale cu ageni ai EST, n special cu cel al scrapiei. O prim ipotez a ncercat s explice formarea prionilor printr-o eroare de translaie a cadrului de lectur (56). Ca urmare ar rezulta proteina anormal PrPsc. Ipoteza a fost abandonat n momentul n care s-a demonstrat c transformarea PrPc n PrPsc este un proces posttranslaional (Borchelt et al., 1990, citai de 45). Dup sinteza PrPc, aceasta migreaz spre membrana plasmatic. Transformarea ei n forma patologic are loc ntr-un compartiment bogat n colesterol al membranei (Gorodinsky A i Harris D.A., 1995, Tarabulos et al., 1995, citai de 45). Infectivitatea maxim a fraciunilor obinute din suspensiile de creier infectat este asociat cu membranele microsomale i sinaptosomale (48,49). n cazul infeciei experimentale, a fost demonstrat (42) prezena n aceste zone a unui complex cu o greutate molecular de cca 60 Kda alctuit din PrPc i forma sa patologic PrPsc (48). Formarea acestui dimer este o faz intermediar obligatorie n conversia PrPc n PrPsc (Prusiner S.B., 1990, citat de 45. El a fost obinut n vitro ntr-un experiment n care PrPc marcat a fost pus n contact cu PrPsc n exces. Proteina marcat a fost transformat ntr-o protein cu structur beta-plisat, rezistent la proteoliza i cu tendina de a forma agregate fibrilare (Kocisko D.A. et al., 1994, citai de 5). Formarea complexului PrPc PrPsc este facilitat cnd secvena de aminoacizi a celor dou forme izomere este identic (Prusiner S.B. et al. 1990, citai de 15, Scott M., et al. 1993, citai de 45) 257

Virusologie general Toate aceste rezultate demonstreaz c interaciunea dintre cele dou forme ale proteinei se produce la nivelul primelor dou regiuni alfa-helix (H1 i H2). Cuplarea PrPsc la PrPc are drept rezultat transformarea structurii secundare a acesteia din urm ntr-o structur betaplisat. Astfel s-a emis ipoteza c PrPsc se prezint sub forma unui dimer. Ea explic unele rezultatele obinute n infecia experimental a oarecilor transgenici (Carlson G.A. et al. 1994, citai de 45) i este sprijinit de lucrrile privind rezistena prionilor la radiaiile ionizante care indic o int de cca 55 kDa (Alper T et al, 1966, Bellinger Kawahara C.G. et al, 1988, citai 45) Datele prezentate sprijin ipoteza conform creia PrPsc servete drept matri pentru transformarea conformaiei PrPc din alfa-helicoidal n beta-plisat. Acest proces se desfoar n lan, fiecare molecul de PrPsc nou format servind drept matri pentru convertirea altei molecule de PrPc. Recent a fost emis ipoteza c n procesul de amplificare a sc, un rol important ar putea reveni trombocitelor care, sub PrP aciunea unor agoniti, cum ar fi colagenul, exprim intens PrPc, la nivelul membranei celulare (40). Tromocitele ar putea constitui un loc ideal pentru procesul de conversie a PrPc n PrPsc, fiind totodat i un transportor al acesteia din urm n ntregul organism.. Un argument n favoarea acestei ipoteze este observaia c, la dou sptmni de la infecia pe cale intracerebral a oarecelui, infectivitatea maxim nu se constat n creier, ci n splin, sediul principal de distrugere i catabolizare a trombocitelor (Kimberlin R.H. i Walker C.A., 1988, citai de 27) Datele de mai sus explic formarea PrPsc n organismul infectat cu prioni. Aceasta se poate ntmpla n cazul EST la animale i a unor forme de boal la om: Kuru i forma iatrogen a BCJ. Formarea PrPsc n cazurile ereditare i n cele sporadice, cunsocut pn n prezent doar la om, este explicat prin alte mecanisme. Cazurile de EST cu caracter ereditar pot fi explicate prin mutaiile cunoscute. Acestea sunt responsabile pentru codificarea unei PrPc care, prin modificrile punctuale n secvena de aminoacizi, i pierde n mod spontan conformaia 258

Virusologie general alfa-helix, fiind convertit n PrPsc cu conformaie beta-plisat (45). O confirmare a ipotezei conversiei spontane a proteinei prionice n cazul mutaiilor menionate n tabelul 4, este oferit de oarecii transgenici cu mutaia Pro 120 Lcu, ntlnit n BGSS la om. Aceste animale fac o boal neurodegenerativ identic cu scrapia i produc de novo prioni (Hsiao K et al. 1990, citai de 15). Rmne de explicat mecanismul formrii prionilor n BCJ sporadic ce reprezint peste 85% din totalul cazurilor i o prevalen anual de cca 1 x 10-6. n aceste forme nu s-au constatat mutaii ale genei Prn-p. Proteina proteic normal PrPc conine dou regiuni potenial convertibile n configuraie beta-plisat. n mulimea acestor molecule se gsesc entiti cu o structur apropiat de pragul necesar conversiei structurii alfa- helicoidale n betaplisat. n mod accidental, una din aceste molecule traverseaz acest prag, devenind PrPsc. Odat format, molecula de PrPsc servete drept matri pentru conversia posttranslaional a altor molecule de PrPc produse continuu de celule. Aceast conversie se produce spontan, printr-un proces stocastic sau este declanat de o molecul anorganic prezent n celul ( de ex. siliciu i aluminiu), ipotez spirjinit de rezistena neobinuit a prionilor la aciunea temperaturii ridicate (11). Astfel, procesul de formare a PrPsc ar putea fi comparat cu cel al creterii cristalelor n jurul unui nucleu de cristalizare sau cu polimerizarea, dar nu identic. Astfel de procese spontane se produc n populaia uman cu o frecven anual de cca. 1 x 10-6, ceea ce corespunde cu prevalena BCJ sporadice. Transmisibilitatea EST i bariere de specie ncercrile de transmitere experimental a scrapiei i a altor EST la specii diferite de aceea de origine au relevat existena unei bariere de specie, experimentat fie prin lipsa total de receptivitate, fie printr-o perioad de incubaie prelungit la primul pasaj pe noua gazd, perioad care n pasajele urmtoare se scurteaz i se stabilizeaz (Dickinson A.G., 1976, Kimberlin R.H. et al, 1989, citai de 34). Revenirea la gazda de origine este, de asemenea, nsoit de o perioad prelungit de

259

Virusologie general incubaie la primul pasaj, sugernd adaptarea agentului patogen la noua gazd (Kimberlin R.H., et al, 1987, citai de 34) n infecia experimental a tuturor speciilor receptive, cea mai sever este calea intracerebral, urmat, n ordine descresctoare, de cile intraperitoneal, sucutanat i digestiv. n cazul infeciei cu agentul scrapie la hamsteri, dozele necesare pentru infeciile parenterale i digestive sunt de 105 i respectiv 109 ori mai mari dect doza pentru infecia intracerebral (44) Posibilitatea transmiterii experimentale a agenilor EST la alte specii dect aceea de origine a ridicat ntrebarea dac aceste boli pot fi transmise intersepecific n condiii naturale. Primul exemplu cunoscut este cel oferit de encefalopatia transmisibil a nurcii (ETN), semnalat pentru prima dat ntr-o cresctorie din SUA (Hartsough G.R. i Burger D., 1965, citai de 34), iar ulterior n Canada, Finlanda, Germania, Rusia (34). Iniial s-a crezut c boala este consecina alimentaiei cu organe provenite de la oile cu scrapie. Totui infecia experimental a nurcilor nu a reuit pe cale digestiv cnd s-a folosit material patologic provenit de la cazuri de scrapie de origine american. Infecia pe cale intracerebral cu acelai material a reprodus boala numai dup o perioad de incubaie de 11-24 luni. De asemenea, n focarul de ETN descris n Canada (Ontario) exist certitudinea c nurcile mbolnvite nu au consumat carne sau deeuri de abator rezultate de la ovine. (Hadlow W.J., Karstad L., 1968, citai de 34) ntr-un focar de ETN din SUA, alturi de cresctoria de nurci exista i o ferm de taurine cu frecvente cazuri de sindrom al vacii culcate. Carnea i organele acestora erau folosite ca hran pentru nurcile care nu aveau nici un contact cu oile sau cu produse ale acestora. Inocularea intracerebral a suspensiei din creierul nurcilor bolnave la doi turai, a reprodus la acetia o encefalopatie spongiform dup o perioad de incubaie de 1819 luni. Administrarea pe cale digestiv a creierului turailor la nurci a reprodus boala dup o incubaie de doar 7 luni, sugernd c esuturile bovinelor bolnave sunt puternic infectate pentru nurc (Marsh R.F. i Hartsough G.R., 1985m 1988, citai de 34) Odat cu apariia ESB n Regatul Unit, s-au reluat experimentele de transmitere a tulpinii de origine bovin la 260

Virusologie general nurci. Boala a fost reprodus la acestea dup o perioad de incubaie de 15 luni, n cazul infeciei pe cale digestiv sau de 12 luni dup inocularea intracerebral (Robinson M.M et al, 1994, citai de 34). Datele prezentate dovedesc c agentul ESB poate fi transmis la nurc, traversnd cu uurin aceast barier de specie. Problema a cptat noi valene dup apariia ESB n anii 1985-1986. Demonstrndu-se c sursa de infecie a bovinelor a fost fina de carne-oase din furajul combinat, s-a emis iniial ipoteza c boala este produs de o tulpin de agent de scrapie ovin care a traversat bariera de specie. Datele acumulate ulterior nu confirm aceast ipotez i scot n eviden numeroase diferene ntre agentul ESB i cel al scrapiei. Infecia experimental cu izolatele de scrapie prezint o mare diversitate sub raport morfoclinic, att la oaie, ct i la animale de laborator. Aceast diversitate este reprezentat prin durata perioadei de incubaie, tipul de localizarea leziunilor. Aceste diferene se ntlnesc la cele cca. 15 tulpini europene de agent al scrapiei. Dimpotriv, toate izolatele din cazurile de ESB din Europa, indiferent de ara de origine, se comport identic n infecia experimental a bovinelor sau a animalelor de laborator. Ele i pstreaz proprietile iniiale chiar i dup trecerea la alte specii (3) n infecia experimental a oarecilor aparinnd aceluiai genotip, cronologia evenimentelor patogenetice este diferit n cazul scrapiei de aceea observat dup inocularea agentului ESB.(31) ncercrile de a transmite pe cale digestiv agentul scrapiei la bovine nu au reuit pn n prezent (3,4,38) Cele de mai sus pun sub semnul ntrebrii ipoteza c ESB este consecina traverrii barierei de specie de ctre o tulpin de agent al scrapiei. Este mai plauzibil ipoteza alternativ, c epizootia a fost declanat de o tulpin de origine bovin aprut spontan i amplificat ulterior prin includerea finii de carneoase n furajarea aceleiai specii. (4,38) Dup cum se tie, apariia i extinderea bolii a fost favorizat i de unele modificri

261

Virusologie general n procesul de fabricaie a acestui produs, modificri ce au diminuat efectul distructiv asupra prionilor (6,52). De asemenea, au aprut cazuri sporadice de EST la felinele slbatice n captivitate: ghepard (Acinonyx jubatus), tigru (Panthera tigris), ocelot (Felis pardalis), puma (Felis concolor).(37) ncepnd din anul 1990, au fost semnalate cazuri de EST la pisici, nregistrndu-se pn n 1995, un numr de 80 de cazuri, majoritatea n Regatul Unit, cteva n alte ri europene (13,37). Cercetrile retrospective au demonstrat c aceast nou entitate morbid, encefalopatia spongiform a felinelor (ESF), nu a existat ninte de anul 1986.(38) Tulpinile izolate de la pisici, nyla i kudu, inoculate la oareci, au reprodus la acetia leziuni identice cu cele induse de tulpina de ESB (Bruce M.E. et al., 1994, citai de 52; Fram et al., 1994, citai de 13) ncepnd din februarie 1994, s-au nregistrat n Regatul Unit i apoi n Frana cazuri de BCJ cu un tablou morfoclinic total diferit de cel cunoscut pn atunci. Diferenele constau n vrsta medie a apariiei bolii (29 ani fa de 61 ani), tabloul clinic, aspectul electronoencefalogramei, taboul histopatologic i histochimic (14, 30, 51, 55). Aceste diferene au determinat individualizarea acestei noi entiti morbide ca varianta BCJ . Pn n prezent s-au nregistrat n total 21 de cauzuri. Datele prezentate susin ipoteza c agentul ESB este diferit de cel al scrapiei i are capacitatea de a traversa bariera de specie, trecnd de la bovinele domestice (bos taurus) la alte specii ale aceleiai familii, la felide i probabil la om. Dei, pn n prezent, nu exist dect cteva dovezi circumstaniale ale ipotezei c la originea v. BCJ este ESB, aceasta rmne cea mai plauzibil i, desigur, cea mai alarmant, declannd ceea ce mass-media a numit criza vacii nebune (2,17,38,50) Dei agentul ESB pare s aib un spectru de gazd mai larg dect ali ageni ai EST, bariera de specie se manifest i n acest caz n diferite grade. Astfel, el poate fi transmis pe cale digestiv i pe cale intracerebral la oarece, oaie, capr, nurc, pisic (7,19). Infecia porcului i a marmosetei (Callithrix jacchus, maimua din America de Sud), reuete doar pe cale intracerebral, n timp ce administrarea n hran a unor doze

262

Virusologie general foarte mari, de material infectant rmne fr efect (1,3,50). Hamsterul nu este receptiv nici pe cale intracerebral (3,7) Bariera de specie se poate explica, prin caracterul relativ specific al prionilor produi de fiecare specie. Eficiena cu care un prion heterolog va induce trnsformarea PrPc a gazdei n PrPsc depinde de apropierea secvenei aminoacizilor PrP a celor dou specii. Diferenele vor fi exprimate prin prelungirea perioadei de incubaie n primele pasaje, prin receptivitatea doar la inocularea intracerebral sau prin absena total a receptivitii. Astfel, nurca (Mustela vison) este receptiv la scrapie i la ESB, n timp ce ruda sa foarte apropiat, dihorul (Mustela putorius) nu este (Bartz J.C. et al., 1994, citai de 37) De asemenea, atrage atenia faptul c, dintre numeroasele specii carnivore ce au fost potenial expuse contactului cu esuturile infectate cu agentul ESB, numai cinci nu au fcut EST. De exemplu, cinele a fost expus n msur cel mai puin egal cu pisica domestic, fr a se nregistra nici un caz de boal (37, 38) O explicaie a acestor date ar putea fi oferit de compararea secvenei PrPc la diferite specii. Secvenionarea acesteia s-a realizat pn n prezent doar la un numr limitat de specii. Rezultatele obinute demonstreaz c gena Prn-p nu este un indicator fidel al nrudirii filogenetice a speciilor, n sensul c unele specii, apropiate dup caracterele controlate de totalitatea genomului, pot prezenta diferene remarcabile n ce privete gena Prn-p. Pe de alt parte, cu ct dou specii sunt mai apropiate sub raportul acestei gene, cu att mai uor va fi traversat bariera de specie dintre ele. (38) Analiza unei dendograme privind secvenele proteinei PrPc la cteva specii, demonstreaz apropierea genei Prn-p a nurcii (fam. Mustelidae) de genele diferiilor reprezentani ai familiei Bovidae: vaca domestic, oaia, capra, kudu (38). Pe de alt, aceeai dendogram situeaz omul la fel de departe att fa de oaie, ct i fa de bovine. Totui, dac exist o certitudine c omul nu este receptiv la scrapie, nu se poate afirma acelai lucru i fa de ESB. Encefalopatiile spongiforme transmisibile au deschis capitolul bolilor prionice, o nou frontier n patologia infecioas (50) Pentru prima dat se descoper c modificarea structurii secundare a unei proteine normale a organismului o transform 263

Virusologie general ntr-o form patologic ce se comport ca un agent infecios, transmisibil la indivizi din aceeai specie sau din alte specii. Conversia proteinei prionice normale se poate produce fie sub aciunea formei sale patologice ptruns n organism (infecia exogen), fie ca urmare a unei mutaii a genei prionice sau a unui proces stocastic n care o molecul i schimb spontan structura secundar, transformndu-se n forma sa patologic. Ulterior ea devine o matri pentru conversia n cascad a altor molecule. Astfel, n majoritatea cazurilor cunoscute, bolile prionice poart dubla amprent de boli genetice i infecioase. Studiul etiopatogenezei encefalopatiilor spongiforme transmisibile a deschis cteva noi domenii n cercetarea biomedical. Unul din acestea este verificarea ipotezei conform creia mecanisme moleculare similare celor ntlnite n bolile prionice ar putea fi implicate n etiopatogeneza nc neelucidat a altor boli, ntre care, pe primul loc, se situeaz boala Alzheimer, boala Parkinson i scleroza amiotrofic lateral (45). n faa unui tablou clinic al bolii, nu exist din pcate alt alegere pentru a confirma presupusa ESB, dect s ateptm moartea animalului. De fapt, agentul infecios trebuie s fie destul de concentrat pentru a putea fi detectat i acestea nu se ntmpl dect atunci cnd creierul se gsete n stadiul terminal al bolii. Datorit faptului c nu se pot vizualiza protinele PrPsc, s-a recurs la dou metode complementare pentru a le putea identifica. Observarea la microscop a esutului cerebral. Depozitele de proteine PrPsc a prionilor ce determin EST, formez plci numite florale care au forma unor flori n care corola apare ntre leziuni. Marcarea cu ajutorul anticorpilor a proteinelor anormale PrPsc: chiar n esuturi (teste imunohistochimice) sau n extracte de creier infecios.

264

Virusologie general

BIBLIOGRAFIE
1. ANGHELESCU S. I col. Actualiti privind clasificarea i diagnosticul leucozei taurinelor. Revista de creterea animalelor, 1976,26,nr.6. 2. BARLOW R.M. Border disease or congenital tremor in lambs. The veterinary Annual, 1970, 11. 3. BARNA I. Folosirea metodelor serologice n diagnosticul leucozei bovine. Sintez n Culegere de medicin veterinar:, 1978,3,p.23 4. BARNA I., PRVU GHE., IUGA C.- Leucozele i bolile de imunosupresie SIDA/AIDS like la animale. Ed. Ceres, Bucureti, 1995. 5. BRNAURE G. Studiul biologiei virusului pestei porcine pe culturi celulare. Bucureti, Tez doct., Fac. Med.Vet., 1974, 168 6. BRNAURE G. Aplicarea n practic a vaccinului viu antipestos porcin Celvivac preparat pe culturi de celule. Revista de creterea animalelor, 1978, 28, nr.9, p. 55 7. BERBINSCHI C. Metode de laborator privind diagnosticul bolii lui Aujeszky i de depistare a animalelor trecute prin infecia cu acest virus, Revista de Zootehnie i Medicin veterinar, 1970, 20,nr.8 8. BERBINSCHI C. i col. Cu privire la evoluia gastroenteritei virotice la porcine. Revista de creterea animalelor, 1977, 27, nr.4 9. BERBINSCHI C. i col. Diagnosticul bolii Aleutine i mijloacele de asanare. Revista de creterea animalelor, 1978, 28, nr,3 10. BERCEA I. i col. Componena n aminoacizi a fraciunilor proteice separate cromatografic din virusul bolii de Newcastle. Lucrri tiinifice IANB, seria C, Medicin veterinar, 1974. 11. BOWNR J.G. Bluetongue Disease, Advances in Veterinary Science and Comparative Medicine, 1971, 15. 12. BRAN L. i col. Cercetri asupra valorii imunizante pentru porc a vaccinului contra bolii lui Aujeszky avianizat, atenuat, n comparaie cu aceea a vaccinului saponinat, inactivat. Revista de Zootehnie i Medicin Veterinar, 1969, 19, nr.9. 13. BURNET F.M. Principles of Animal Virology, 2-nd, New York and London, Academic Press, 1960, 490. 14. CAROL DUMITRIU EMILIA Studiul imunobiologic al tipurilor de virus variolic aviar. Bucureti, Teza de doctorat, Fac.Med.Vet., 1970, 459. 15. CAROL DUMITRIU EMILIA i col. Bursita infecioas (boala de Gumboro) la puii de carne. Revista de creterea animalelor, 1978, 28. 16. CARP-CRARE M. i col. Unele aspecte ale examenului electronomicroscopic n Difterovariola aviar. Sesiunea tiinific de Medicin Veterinar, Iai, 1994. 17. CARP-CRARE M. Microbiologie, Curs.Lito (pentru uzul studenilor. Institutul Agronomic Ion Ionescu de la BradIai., 1991 18. CARP-CRARE M., GUGUIANU ELEONORA, DORINA TIMOFTE- Lucrri practice de Microbiologie Veterinar; U.A.M.V., uz intern, Iai, 1997.

265

Virusologie general
19. CERNESCU C. Virusologie medical. Ed. Medical., Bucureti, 1995. 20. CHELEMEN N.- Rolul jucat de diferitele specii animale n epidemiologia gripei umane. Revista de Zootehnie i Medicin veterinar, 1970, 20, nr.5 21. COMAN I., - Relaii fag-bacterie la grupul fagic CAM, Bucureti, Tez doct., Fac.Med.Vet., 1972 22. COMAN I. Viroze respiratorii, digestive i genitale la taurine. Bucureti, Centrul de material didactic i propagand agricol, 1978. 23. CURE C. Difuziunea i persistena virusului bolii lui Aujeszky n organismul animalelor infectate experimental. Bucureti, Tez de doctorat. Fac.Med.Vet., 1970. 24. DALTON A., HAGUENAU FRANCOISE Ultrastructure of animal viruses and bacteriophages., New York and London, Academic Press, 1971 25. DEREVICI ADELINA Adenovirusuri, adenoviroze. Bucureti, Litera, 1971, 260 26. DRAGANESCU N. Arbovirusuri, Bucureti, Acad.RSR, 1970, 418 27. DRGHICI D. STNUIC D. Epizootologia, diagnosticul i combaterea gastroenteritei transmisibile a porcului. Revista de creterea animalelor, 1976, 26, nr.8 28. DUNNE H.W. Hog Cholera (European Swine Fever), Advances in Veterinary Science and Comparative Medicine, 1973, 17, 29. FENNER F. i col. The biology of animal viruses, New York, London, Academic Press, 1974 30. FENNER F. i col. Classification and nomenclature of viruses, Second report of the International Committee of Taxonomy of viruses, Intervirology, 1976, nr.7 31. GILLESPIE J.H., SCOTT F.W. Feline viral infections Advances in Veterinary Science and Comparative Medicine, 1973, 17 32. GRDINARU D.A. i col. Cu privire la diagnosticul serologic al leucozei enzootice bovine (LEB). Revista de cresterea animalelor, 1977 33. HANNOUN C. Microbiologie generale 2-les, Paris, Ediscience, Mc Fraw Hill, 1976. 34. HORZINEK M.C. Compendium der allgemeinen Virulogie, Berlin und Hamburg, Verlag Paul Parey, 1975 35. IFTIMOVICI R. Pasul antientropic.Contemporanul, 26 mai 1975 36. ISAACS A. Interferon, Advances Virus Res., 1963 37. ISHII S., ISHITANI R. Equine infectious anemia. Advances in Veterinary Science and Comparative medicine, 1975 38. ISTRATE N. i col. Utilizarea testului de microimunodifuzie n gel de agar pentru diagnosticul anemiei infecioase ecvine (AIE). Revista de creterea animalelor, 1978 39. ISTRATE N. i col. Diagnosticul serologic al infeciilor cu virusul rinotraheitei i vulvovaginitei pustulare infecioase bovine (IBR-IPV) prin testul de microimunodifuzie n gel de agar modificat (MIDM). Revista de creterea animalelor, 1979,29 40. JARRETT W.F.H. Cat leukemia and its viruses Advances in Veterinary Science and Comparative Medicine ,1975 ,19 ,p. 165 41. JOUBERT L., MACKOWIAK C., - le virus Aphteux. Fondation Merieux, 1968, 1973

266

Virusologie general
42. KAPLAN A. The Adenoviruses, New York, San Francisco, London, Academic Press, 1973, 43. KOOPMANS M., CREMERS H., WOODE G., HORZINEK M.C.; Bredavinuvirus (Toroviridae) infection and systemic antibody response in sertinel calves: American J.Vet.Vol. 5;9/1990, pag.1443. 44. LAUTIE R. La Maladie dAujeszky. LExpansion editeur, 1969 45. LAURIA S.E., DARNELL J.E. JR. General Virology. New York, London, Sydney, Jon Wiley and Sons, Inc., 1968 46. LWOFF A. Lysogeny. Bact. Rev., 1853, 17 47. LWOFF A. The Concept of Virus, J. of Gen.,, Microbiology, 1957, 17 48. LWOFF A. Death and Transfiguration of a Problem, Bact. Rev., 1869, 33, nr.3 49. MANOLESCU N. i col. Metod rapid de diagnostic n pesta porcin (studiul medulogramei ). Revista de creterea animalelor, 1975, 25, nr.7 50. MANOLESCU N. i col.- The leukoconcentrate in classical hog cholera and its aspects in cell cultures, Rev. Roum, Virol, 1975, 26, 1 51. MANOLESCU N. i col.- Tehnica leucoconcentratului n diagnosticul rapid al anemiei infecioase a cabalinelor. Revista de creterea animalelor, 1976, 26, nr.11. 52. MANOLESCU N. i col. Electronoptical aspects of the equine infectious anemia (EIA) virus in lymphocyte cultures. Archiva Veterinaria, 1978, 13. 53. MARDARI A. Contribuii la studiul epizootologic, clinic i de laborator al gripei ecvine. Iai, Tez de doctorat, IMF, 1975, 54. MAYR A. Interferonsierung: Eine neue Moglichkeit fur die prophylaxe und Therapie von Infektionskrankheiten, Berl, Munch, Tier, Wschr, 1974, 87 55. MAYR A i col. Virologische Arbeitsmethoden. Bd.I. Zelkulturen Bebrutate Huhnereiree.Jena, G. Fischer, 1974 56. MRGINEANU C. Curs de virusologie. Cluj Lito IMF., 1972 57. MICLEA E. i col. Leucozele animalelor domestice. Bucureti, Ed. Ceres, 1978, 58. MOHD NOR N.M., GAN C.H., ONG B.L. Infecia cu virusul Nipah la porci n Malaezia peninsular, Rev. Sci. tehn. Off.Int. Epiz., 2000, 19 (1), 160-165. 59. MURRAY P, KOBAYASHI G., PLAFFER M.; ROSENTHAL K. Medical Microbiology, Second Edition International Student Edition published, 1994, London, England 60. ONE E. Studiul actual al cunotinelor privind complexul leucozelor aviare. Sintez in Culegere de medicin veterinar, 1978, 3 61. ONE E. Virusuri i viroze animale, Ed. Dacia, Cluj Napoca, 1982. 62. PA{CA DOINA Cercetri privind etiopatogenia i imunopatologia sarcomului Sticker. Bucureti, Tez de doctorat, 1971. 63. PAUL I. Etimorfopatologie veterinar. Ed. ALL, Bucureti, 1996 64. PLTINEANU D. i col. Aplicarea testului de imunofluorescen n diagnosticul leucozei enzootice bovine (LEB). Revista de creterea animalelor, 1978. 65. PTRA{CU I. Cercetri privind diagnosticul serologic al leucozei limfoide aviare (complexul leucozelor aviare), Bucureti, Tez de doctorat. Fac.Med.Vet., 1978

267

Virusologie general
66. PERIANU T., - Bolile infecioase ale animalelor; Viroze, Vol.II. Ed. Fundaia Chemarea, Iai, 1997. 67. PETZOLDT K. Equine Herpesvirusinfektionen, Jena, G. Fischer,1974 68. PRVU G i col. Concentratul leucocitar metod suplimentar n diagnosticul hemopatiilor n general i al leucozelor n special. Revista de creterea animalelor., 1978. 69. PRVU G i col. Microprecipitarea n gel de agar n diagnosticul leucozei enzootice bovine. Revista de creterea animalelor, 1979, 29 70. POP M. Studiul epizootologic, clinic, anatomopatologic asupra febrei catarale maligne n R.S.Romania i cercetri privind terapia acestei boli. Bucureti, tez de doctorat, Fac.Med.Vet.1972 71. POPA M., CHI{IU N.St Test de imunoelectroprecipitare cantitativ aplicat n diagnosticul pestei porcine. Revista de Zootehnie i Medicin Veterinar, 1971, 21, nr.7 72. POPA M., CHI{IU N.St.- Appreciation de la concentration relative dun antigene du complexe moleculare du serum sanguin de porc par l'mmuniosmophorese quantitative. Archiva veterinaria, 1971 73. POPA M., MANOLESCU N. Rolul mduvei hematoformatorii n etiopatogenia pestei porcine clasice. Revista de creterea animalelor, 1975, 25 74. POPA M i col. Diagnostic rapid n pesta porcin clasic prin imunofluorescen pe frotiu de concentrat leucocitar (LCT). Revista de creterea animalelor, 1979. 29 75. POPOVICI V. Mecanisme moleculare n etiopatogeneza encefalopatiilor spongiforme transmisibile SCMV, INMV Pasteur, 1997, p.7-20 76. POPOVICIU A. Bolile porcilor cu sindrom vezicular. Sintez In Culegere de medicin veterinar, 1977,2 77. PURCHASE H.G. Metode de diagnostic al bursitei infecioase aviare. Revista de creterea animalelor, 1978. 78. RADU O i col. Metode de diagnostic al bursitei infecioase aviare. Revista de creterea animalelor, 1978, 28. 79. RAICU P., STOIAN VERONICA Gene i cromozomi, Ed. {tiinific i Enciclopedic, 1989. 80. RDUCNESCU H., - Microbiologie veterinar, Institutul Agronomic N.Blcescu-Bucureti, FMV, Curs Lito- pentru uzul studenilor., vol. 1 i 2, 1984 81. RDUCNESCU H. Microbiologie veterinar. Lito, (uzul studenilor), vol.2, Institutul Agronomic N.Blcescu, Bucureti, 1980. 82. ROHRER H. Handbuch der Virusinfecktionen bei Tieren, Jena, VEG Gustav Verlag, 1865, 5 volume. 83. STARKE G., HLINAK P. Grundriss der Algemeinen Virologie, 2 Aufl, Jena, G. Fischer, 1974 84. SERBAN O. Cercetri privind proprietile imunogene ale virusului rabic fix, Bucureti, Tez de doctorat, Fac.Med.Vet., 1975 85. STIRBU C i col. Obinerea unei culturi de celule stabilizate de origine bovin infectat cronic cu VLB (virusul leucozei bovine). Revista de creterea animalelor, 1978, 28

268

Virusologie general
86. STIUBE P. Morfologia i biologia fagilor CAM psicrofili, Bucureti, Tez de doctorat, Fac.Med.Vet, 1969 87. TEU{DEA V. Febra aftoas. Studiu monografic, Bucureti, Ed.Academiei, RPR, 1960 88. TOMESCU VENERA Etude sur le probleme de linterferon. Premiere communication: Le virus dAujeszky en tant quinducteur et inducteur de linterferon. La Clinica Veterinaria, 1971, 94 89. TIBREA S. Cercetri privind valoarea diferitelor metode de hiperimunizare n pesta porcin. Bucureti, Tez de doctorat. Fac.Med.Vet. 90. VIOR C i col. Folosirea testului de seroprecipitare n gel de agar n diagnosticul bronitei infecioase aviare. Revista de Zootehnie i Medicin Veterinar, 1971. 91. VIOR C. i col. Aplicarea vaccinrilor asociate n profilaxia pestei porcine i rujetului. Revista de creterea animalelor, 1976. 92. WANDERA J.G. Sheep Pulmonary Adenomatosis (Jaagsiekte). Advances in Veterinary Science and Comparative medicine, 1971, 15 93. WESTBURDY H.A. Boala produs de virusul Hendra la cabaline, Rev. Sci. tehn. Off.Int. Epiz., 2000, 19 (1), 151-159. 94. ZARNEA G. Tratat de Microbiologie generala. Vol.I, Virologie general, Anatomie bacterian. Ed. Academiei, RSR, 1983

BIBLIOGRAFIE PRIONI
1. BAKER II.F., RIDLEY R.M.., WELLS G.A., 1993 Experimental transmisson of BSE and scrapie to the common marmoset. Vet. Rec. April, 17, 403. 2. BARALON PH., GARY F., 1996 Filiere bovine: consequences economigues de la crise de vache folle sur la filiere bovine. La Point veterinaire, 28, 179, 9 3. BARON T., MADEC J.Y., 1996 Lagent infectieux des encephalopathies spongiformes et sa transmissibilite. Le Point veterinaire, 28, 179, 9. 4. BELLI P., COUDERT M., 1996 Encephalopathie spongiforme bovine: ESB ou maladie de la vache folle. Sci. Vet,.med. Comp, 98, 5 5. BEY REUTHER K. MASTERS C.L., 1994 Catching the culprit prion nature 370, 11 aug. 419 6. BRADLEY R., 1997. Aetiology, pathologenesis and surveillance of BSE. Argentine Sci. Adv. Common BSE ( 1 st meeting), Buenos Aires, p.15 7. BRADLEY R., 1997. Species barrier, transmizzibility and inactivation of BSE. Argentine Sci Adv. Common BSE ( 1 st meeting), Buenos Aires, p.33 8. BROWN P., 1990 The Phantassmagoric Immunology of Transmissible Spongiform Enceephalopathy. In Immunologic Mechanisms in neurologic and Psychiatric Disease ed. B.H. Waksman Raven Press, Ltd. NY. 9. BROWN P., 1990. Review. A therapeutic panorama of the spongiform encephalopathies Antiviral Chemistry & Chemotherapy 1(2), 75

269

Virusologie general
10. BROWN P., 1990 Transmissble Spongiform Encephalopathy in Humans: Kuru, Creutzfeld-Jacob Disease and gerstmann-Straussler-Scheinker Disease Can,J,Vet,Res. 54, 38 11. BROWN P., 1990., LIBERSKI P.P, WOLFF A., GAJDUSEK D.C., 1990. Resistance of Scrapie Infectivitu to Steam Autoclaving after Formaldehyde Fixation and Limited Survival after Ashig at 3600C. Practical and Theoretical Implications. J. Infect.Dis, 161, 467 12. BROWN P., GOLDFARB L..G., GAJDUSEK D.C., 1991. The new biology of spongiform encephalopathy: infectious amyloides with a genetic twist. The Lancet, 337, Aoril, 27, p.1019 13. CADORE J.L., 1996 Lencefalopathie spongiforme du chat. Le point vet. 28 178, 49. 14. CHAZOT G,M, BROUSSOLLE E., LAPRAS CL., BLATTLER T., ADUZZI A., KOPP N., 1996 new variant of Creutzfeld Jacob disease in a 260year-old French man. The Lancet, 347 (April 27), 1181 15. COHLEN F.E., PAN K.M. HUANG Z., BALDWIN M., FLETTRICK R.J., PRUSINER S.B., 1994. Structural Clues to Prion Replication Science , 264, 22 april, 530. 16. COLLINGE J., 1996, new diagnostic tests for Prion Deseases. The New England Journal of medicine, 335, 11, 963 17. DORMONT D., SAVEY M., 1996, Encephalopathies sponfigormes transmissible et pathologie comparee. Le Point Veterinaire, 28, 179, 1 18. ELSSEN J.M., NUTIEN KHANG J., CLOUSCARD C., 1996 Sensibilite genetique aux encephalopathies spongiformes subygues transmissible. Le Point Vet, 28, 179, 27 19. FOSTER J.D., HOPE J., FRASER H., 1993. Sensibilite genetique aux encephalopathy to sheep and goats. Vet.Rec. October, 2,339 20. FOSTER J.D., WILSON M., HUNTER N., 1996 Immunolocalisation of the prion protein (PrP) in the brains of sheep with scrapie. Vet.Rec. November, 23, 512. 21. GAJDUSEK D.C., 1987. The transmissible Dementia and Other Brain Disorfers Caused by Unconventional Viruses. Relationship of transmissible to Nontransmissible Amyloidosis of the Brain. InViruses, Immunity an Mental Disorders Plenum Publishing NY, p.3 22. GAJDUSEK D.C., GIBBS C.J., 1990. BRAIN A Amyloidoses. Precursor proteins andf the Amyloids of Transmissible and Nontransmissible Dementias. Biomedical Advances in Aging *(ed. Allan Goldstein) Plenum Publishing Corp, p.3 23. GIBBS C.J., 1997 Sporadic familial and new variant Creutzfeld-Jackob disease. Argentine Sci.Adv.Comm on BES, Buenos Aires, p.57. 24. GOLDFARB L.G. BROWN P., GOLDGABER D., ASHER D.M., GAJDUSEK D.C., 1990. PRIP gene mutations in transmissible spongiform encephalopathies, VIII th International Congress off Virusology-Berlin August, 26031 25. HUNTER N., GOLMANN W., FOSTER J.D., CAIRNS D., SMITH G., 1997 Natural Scrapie and PrP genotype; case control studies in british sheep. The Vet. Rec. Aug.9.137

270

Virusologie general
26. KIMBERLIN R.H., 1984 Scrapie: the disease and the infections agent. Trend in Neurosciences, 7,1, 312 27. KIMBERLIN R.H., 1990 Tranmissible Encephathies in animals. Can J.vet. Res, 54, 30 28. KIMBERLIN R.H., 1992. Spongiform encephalophathies in animals. OIE. 60th general Session Comprehensive reports on technical items presented to the International Committee ir to Regional Commissions, p.27 29. KIRKWOD J.K., CUNNINGHAM A.A., WELLS G.A.H., WILESMITH J.W., BARNET J.E.F., 1993 Spongiform encephalopa in a herd of greater Kudu ( Tragelapbus strepsiceros): epidemiological observation. Vet.Rec. October, 9,.360 30. KOPP N., STREICHENBERGER N., 1996 La nouvelle variante de la maladie Creutzgeld0Jacobs. Le Point veterinaire, 18, 179, 43 31. LASMEZAS C.I., DESLYS J.P., DEMAIMAY R., ANJOU K.T.M, HAUW JJ, DORMONT D., 1996 Strain specific and common pathogenic events in murine models of scrapie and bovine spongiform encephalopathy. J.gen Cvirol, 77, 1601. 32. LASMEZAS C.I., DESLYS J.P., DEMAIMAY R., ANJOU K.T.M, HAUW JJ, DORMONT D., 1996 BSE tranbsmisssion to macaques . nature, 381, 27 June 743 33. MARSH R.F., 1990 Bovine spongiform encephalopathy in the United States JAVMA, 196, 10, 1677 34. MCKENZIEE D., BARTZ J.C., MARSH R.F., 1996 Transmissible mink encephalopathy. Virologu (seminars in), 7, 201 35. MERTZ P.A., SOMMERVILLE R.A., WISNIEWSKU H.M., IQBAL K., 1981 Abnormal fibrils from scrapie infected brain. Acta neuropathol (Berl), 54, 63 36. NERTZ P.A. SOMMERVILLE R.A., MANUELIDIS I., MANUELIDIS E.E., 1984 Scrapie associated fibrils in Creutzfeldt-Jacob disease. Nature. 306, 474 37. MOUTOU F., SAVEY M., 1996 Zoologie et encephalopathies spongiformes subagues transmissibles. Le Point vet, 28, 179, 17 38. PASTORET P.P., HAMERS C., BROCHIER B., 1997. Le transmissibilite interspecifique des encephalopathies spongiformes. Ann. Med.Vet, 141, 5 39. PATTISON I.H., 1988 Fifty years with scrapie: A protein released by plates. The Labcetm 347m 9015m 1635 40. PERRINI F., FRANGIONE B, 1996 Prion protein released by plateles. The lancest, 347, 9015, 1635 41. PICARDO P. SEILER C., DLOUHY S.R., YOUNG K. FARLOW M.R., PRELLI F., FRANGIONE B., TAGLIAVINI F., GHETTI B., 1997 Straussler-Scheinker Disease, Argentinbe Sci Adv Comm on BSE ( 1st meeting), Buenos Aires, p.77 42. PRIOLA S.A., CAUGHEY B., WEHRLY K., CHESEBRO B., 1995 A 60-kDa prion protein (PrP) with proprerties of Both the Normal and Scrapieassociated Forms of PrP. J.Biol.Chemistry, 270, 3299 43. PRUSINER S., 1984 Les prions. Pour la Science, 86, 92. 44. PRUSINER S.,TORCHIA MM., WESTAWAY D., 1991 Molecular biology and genetics of prion- replications for sheep scrapie. Mad cow and the BSE epidemic. Cornell vet. 81, 2, 85

271

Virusologie general
45. PRUSINER S.B., TELLING G., COHEN E.F., DERAMOND S.J., 1996 prion disease of humans and animals. Seminars in VIROLOGY, 7, 159 46. SAFAR J., WANG W., PADGETT M.P., CERONI M., PICARDO P., ZOPF D., 1990 Molecular mass, biochemical composition and physicochemical behavior of the infectious form of the scrapie precursor protein monomer. Procv Natl. Acad. Sci, USA, 87, 6373 47. SAFAR J., CERONI M. PICCARDO P., 1990 Scrapie associated precursor proteins: antigenic relationnship between species and immunocytochemical localization in normal, scrapie and Creutzfeldt0Jacobs disease brain, Neurology, 40, 513 48. SAFAR J., CERONI M. PICCARDO P.,LIBERSKI P.P. MIYAZAKI M., GAJDUSEK D.C., GIBBS C.J. 1990 Subcelulklar distribution and physicochemical propertiers of scrapie-associated precursor protein and relationship with scrapie agent. Neurology, 40, 3, 503 49. SAFAR J. CERONI M. ,GAJDUSEK D.C., GIBBS C.J. 1991 Differences in the Membrane Interaction of Scrapie Amyloid proteins in Normal and Scrapie- or Creutzfeldt-Jacob Disease-Infected Brains J.Infect Dis., 163, 488 50. SAVEY M., 1996 Une nouvelle frontiere de la pathologie infectieuse. Le Point veterinaire, 28, 177 51. TABRIZZI S.J., SCARAVILLI F., HAWARD RE.S., COPLLINBGE J., ROSOR M.N., 1996 Creutsfeld-Jacob disease in a young woman. The Lancet, 347, (April 6,)945 52. TAYLOR D.M., WOODGATE S.L., 1997 Bovine spongiform encephalopathy the causal role of ruminant-derived protein in cattle diets. Rev.Sci. Off.int.Epiz.16, 1,187 53. WEISSMANN CH,. 1994 The Prion Connection: Now in Yeast? Science, 264, 22 Apr.528 54. WELLS G., DAWSON M., HAWKINS S., GREEN R., DEXTER UI., FRANCIS M., SIMMONS M., AUSTIN A., HORING M., 1994 Infectivity in the ileum of cattle orally with bovine spongiforme encephalopathy. Vet.Rec.135, 40 55. WILL R.G., IRONSIDE J.W., ZEIDLER M., COUSENS S.N., ESTIBEIRO K., ALPEROVITEH A., POSER S., POCCHIARI M., HORFMAN A., SMITH P.G., 1996 A new variant of Creutzfeldt-Jacob disease in the UK. The Lancet, 347 (April 6), 921 56. WILLS P.R., 1989 Induced frameshiftying mechanism of replication for information-carrying scrapie prion. Microbial Pathogenesis 6, 235.

272