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ECLIA & EIA

LIC. T.M. FERREYRA HURTADO, CHRISTIAN Y .

ECLIA
HISTORIA:
La luminiscencia ha sido conocida proximadamente desde 1667. La existencia de la bioluminiscencia fue reconocida por Boyle en Alemania la describi como luz caliente. En 1887, Rad Ziszewki descubri algunos componentes qumicos que tienen propiedades luminiscentes.

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En 1928, Abrech descubri las propiedades del luminol un componente el cual cuando se oxida por medio de perxido de hidrgeno emite luz como fotones individuales. El primer ensayo de quimioluminiscencia fue descrito en 1976 con un reporte de Schroeder et. al.; este ensayo utiliz como

ECLIA
TECNOLOGA DEL ECLIA:
La tecnologa del eclia se basa principalmente en la utilizacin de dos componentes principales: Tris-bipiridil-rutenio Tripropilamina. Ambos componentes mencionados participan activamente en el proceso de excitabilidad de la reaccin electro-

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Para el desarrollo de los inmunoensayos se utiliza un ester de Nhidroxisuccinimida de un complejo de Rutenio (bpy)3. Este componente tiene la facilidad de acoplarse a los grupos aminos de los protidos, haptenos, AN, etc.

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Reaccin de ECLIA:
La reaccin de ECLIA tiene lugar en la superficie de los electrodos de platino. En est superficie se forma un campo elctrico por la utilizacin de un voltaje determinado. Los componentes ya mencionados sufren excitacin por perdida de un electrn en su configuracin electrnica.

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Este voltaje transforma la tripropilamina en radical TPA, debido a la perdida de un electrn y un protn. En el caso de rutenio hay solo la perdida de un electrn este componente formado recibe el nombre de catin de rutenio.

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El catin rutenio reacciona de esta manera con el radical TPA, produciendose un fenmeno llamado reduccin.

3 3

2 3

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A travs de est reduccin se produce la emisin de fotones a una longitud de onda de 620 nm. El cual el fotomultiplicador los capta y transforma en absorvancia. Est seal final resultante lo enfrenta al factor de calibracin para encontrar una concentracin conocida con COI.

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Principios utilizados por CLIA:

Competitivo Sndwich Formacin de puentes.

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PARTES FUNDAMENTALES DEL COBAS e 411:

ESTACIN DE MUESTRAS. ESTACIN DE PROCESAMIENTO. ESTACIN DE PROGRAMACIN.

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Estacin de muestras:
Se distinguen los siguientes componentes:
Guia A,B,C. Bandeja de entrada. Bandeja de salida

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Estacin de procesamiento:
Pipetas de hamiltom Pipeta s/r Pipeta de procesamiento. Gripper. Cmara de incubacin. Cmara de reactivos. Set pro cell, clean cell Copas de lavado

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REACTIVOS:
Los reactivos del equipo cobas e 411 y las otras generaciones de la marca ROCHE, se ordenan de la siguiente forma:
Microparticulas paramagneticas unido a streptavidina Ag/Ac unido a biotina Ag/Ac unido a ritenio.

mp

Ag/Ac - b Ag/Ac - R

EIA

ELISA
La tcnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay). Se basa en la deteccin de un antgeno inmovilizado sobre una fase slida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reaccin cuyo producto por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotomtricamente.

Dispositivos empleados en ELISA

Fase solida L o s le cto re s E L IS A so n e sp e ctro fo t m e tro s

Fases de un ensayo ELISA

Tipos de ELISA
Competitivo No competitivo
Directo

Indirecto

ELISAs HETEROGENEOS para detectar anticuerpos Competitivo


Detector limitante

No competitivo
Detector en exceso

Ag marcado Trazador Muestra < Marca > Ac especfico > Marca > Ac especfico

Muestra

Fase slida

Ag Ac anti Fc

Conjugado Muestra

> Marca

> Ac especfico

Ag

ELISAs para detectar anticuerpos Directo


Fosfatasa alcalina; para nitro fenilfosfatasa Enzima Peroxidasa.

Indirecto
Anticuerpo conjugado anti-especie s
E

s E P

Ag

Fase slida

Fase slida

Ag

Elisa. 1. Generacin: Primeros ensayos usaban lisados de VIH purificado, a menudo les faltaba sensibilidad y especificidad. 2. Generacin: Los ensayos mejorados basados en protenas recombinantes y/o los peptidos sintticos, que tambin permitieron la produccin de VIH 1 y 2 combinado. 3. Generacin: tipo sndwich, usan un antgeno marcado como conjugado, muy sensibles. 4. Generacin: detectan antgenos y anticuerpos, reducen el perodo de ventana.

Prefiramos tener 1 amigo verdadero en donde compartamos momentos de alegra y algazara donde la vida sea cada vez mas fcil y sencilla de ver y luchar A mi amigo kike el verdadero amigo.