Reaccin de Biuret Los pptidos y protenas producen una reaccin coloreada muy usada para la valoracin de los mismos,

llamada reaccin del Biuret. Las protenas por sus uniones peptdicas reaccionan con los iones cpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. Se necesitan 2 ms uniones peptdicas para que se forme el complejo coloreado. Esta prueba sirve para la identificacin de tripptidos en adelante. (Wharton 1972) Un color violeta resulta cuando los iones cpricos en medio alcalino se complejan con los electrones no saturados de los tomos de nitrgeno y oxgeno de los enlaces de todas las protenas. La cantidad de color producido es proporcional a la concentracin de protenas y es medida espectrofotomtricamente a 550 nm. (Wharton 1972)

En soluciones alcalinas Cu+2 se complejan con las uniones de pptidos de protenas resultando en la formacin de un color morado. La intensidad del color es proporcional a la concentracin de protenas. Este mtodo es generalmente aplicable porque el nmero de enlaces peptdicos por unidad de peso para todas las protenas es casi el mismo. Sin embargo, el mtodo es un poco insensible siendo el lmite menor de 0.25mg de protenas. Los buffers tris as como otras sustancias encontradas en extractos de tejidos crudos interfieren con esta prueba. (Wharton 1972)

Las sustancias que dan el color violeta tienen dos grupos CONH2 unidos directamente o por un carbono o nitrgeno. Los compuestos que contienen CH2NH2, -C(NH)NH2 Y CSNH2 en lugar de los grupos CONHH2. Las estructuras peptdicas se encuentran en protenas y sus derivados contienen enlaces peptdicos tambin dan positivo para la prueba de Buiret. (Stawnton, 1967)

H -CO-NH-C-CO-NH-

R De los aminocidos, la histidina da positivo. Los dipptidos dan pruebas negativas. Las protenas dan color morado o violeta mientras que las proteosas o peptonas dan un color rosado y los pptidos dan un color rosado claro. La gelatina da un color casi azul. La presencia de sulfato de magnesio y muchas sales de amonio interfieren con la prueba. Este efecto puede disminuirse con la adicin de base. (Stawnton, 1967)