Fsicos: Congelacin: Se utiliza como mtodo para la fijacin el enfriamiento por congelacin del tejido es el mtodo de eleccin para

realizar estudios morfolgicos o funcionales en los que se requiere conservar intacta la estructura antgena del tejido o su contenido enzimtico. La clave para una correcta fijacin por congelacin del tejido es que su realizacin sea instantnea porque un enfriamiento lento provoca la formacin de microcristales titulares de hielo que pueden agregarse con el paso del tiempo produciendo roturas titulares que dificulten el diagnosticoEl procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste en utilizar ISOPENTANO a menos de 50C como agente de congelacin y realizar una fragmentacin suficiente de la muestra que se vaya a congelar. Normalmente se preparan bloques de no ms de 3 cm. cuadrados de superficie y 3 mm de espesor de modo que el proceso de congelacin instantnea no requiera ms de 10 segundos. El mantenimiento continuo de isopentano debe realizarse en un congelador programado a -70C para que quede compensado la subida inmediata de la temperatura que se produce al extraer el lquido del congelador. Al enfriar tanto no actan bacterias ni enzimas y el tejido se endurece para cortar estos tejidos utilizamos el microtomo de congelacin o un aparato ms evolucionado o criostato el cual tiene como ventajas que la temperatura se mantiene ms baja y se pueden realizar cortes ms finos entre 2 y 15 micras. Criodesecacin o filiacin: Consiste en someter al tejido a dos procesos el primero es la fijacin instantnea por congelacin en Nitrgeno lquido y el segundo desecacin por sublimacin directa del agua confiada a vapor en una bomba de vaco es un proceso complicado y costoso pero tiene una ventaja muy importante y es que al eliminar totalmente el agua tisular, paraliza la autolisis y produce una conservacin indefinida, adems evita que se produzcan enlaces qumicos entre el tejido y el fijador, conservando asila estructura antignica tisular. Criosustitucin: es la sustitucin lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por un lquido fijador que en ocasiones puede actuar simultneamente como medio de inclusin. Tras la congelacin instantnea del tejido con nitrgeno lquido o isopentano a -50C se coloca el tejido congelado en el medio de sustitucin, este medio est formado por una mezcla de alcohol etlico, acetona y propiln- glicol. Enfriado a -40C, el intercambio del agua tisular por el lquido de sustitucin, se realiza dentro de un congelador y debe procurarse que la temperatura no disminuya del punto de congelacin del lquido de sustitucin.

Qumicos: Caractersticas fundamentales de un lquido fijador: Los fijadores por mtodos qumicos son normalmente qumicos y deben poseer unas caractersticas que son las siguientes: Deben tener la capacidad de bloquear de inmediato la autolisis, paralizando la actividad enzimtica del tejido. Poseer un efecto microbicida, que impide la accin bacteriana responsable de la putrefaccin. Son capaz de no provocar sobre el tejido retracciones o distorsiones que generen anomalas en su estructura. Sea capaz de inducir cambios en la textura y composicin tisular que favorezcan la inclusin, el corte y la coloracin del material histolgico (favorecer la coloracin posterior es decir tienen carcter mordiente) De todas estas caractersticas la ms importante es la capacidad de bloquear la autolisis de inmediato y se va a relacionar con dos cualidades del agente fijador: Velocidad de penetracin: y se refiere a la rapidez con lo que un fijador se difunde en el interior de un tejido de manera que el tamao de una pieza que se pretende fijar ha de ser proporcional a la velocidad de penetracin del agente fijador que se va a utilizar. La velocidad de fijacin: se refiere al tiempo que cada fijador tarda en estabilizar los componentes qumicos de los tejidos. La velocidad de fijacin de un agente qumico no siempre es proporcional a su velocidad de penetracin.

Cuando se utilizan y ventajas: La citologa, permite examinar grupos celulares de diferentes partes del organismo, convirtindola enana herramienta diagnstica muy importante para el clnico. La coleccin de muestras citolgicas es muy sencilla, econmica y segura para el paciente. Desventajas:Para el diagnstico de tumores malignos, se basa fundamentalmente en los caracteres celulares de malignidad (heterotipa); el extendido no permite ver directamente la distorsin de la microarquitectura ni la invasin.