Fertilizantes inorgnicos

Los fertilizantes inorgnicos se fabrican a partir de la transformacin de diferentes elementos presentes en la naturaleza, en nutrientes asimilables por las plantas (Garca et al., 2010).

Fertilizantes nitrogenados

El proceso actual de produccin de fertilizante nitrogenado se conoce como HaberBosch y se caracteriza por requerir un elevado consumo energtico para lograr fijar en materiales inertes el nitrgeno, y de esta forma, ser utilizado por los productores (Aguirre et al., 2009; Estrada et al., 2009). El amonio es la base de los fertilizantes nitrogenados y se obtiene por este proceso, que consiste en la reaccin directa entre el nitrgeno y el hidrgeno gaseosos (IDAE, 2007): N2 (g) + 3H2 (g) 2NH3 (g) La energa utilizada en el proceso de fabricacin deriva de fuentes no renovables, como petrleo, gas o carbn. La energa necesaria para elaborar 1 kg de fertilizante nitrogenado son 80 MJ 11.2 kWh (Aguirre et al., 2009). Los fertilizantes ntrico amoniacales son uno de los tipos de fertilizantes ms utilizados en agricultura debido a que contienen nitrgeno ntrico, de disponibilidad inmediata, y nitrgeno amoniacal, de accin ms prolongada (Garca et al., 2010).

Bacterias del gnero Azotobacter sp

El gnero Azotobacter comprende un grupo de especies de bacilos grandes, Gram negativos, aerobios estrictos, fijadores de nitrgeno de vida libre, y que se han encontrado en relacin estrecha con las races de las plantas; adems son capaces de promover el crecimiento de las plantas a travs del mejoramiento del desarrollo de las races (Celis y Gallardo, 2008). La primera especie del gnero fue descubierta por el microbilogo holands M. W. Beijerinck a principios del siglo XX, utilizando cultivos de enriquecimiento arobicos con N2 atmosfrico como fuente de nitrgeno. La mayora de estas bacterias son alfa o gamma Proteobacteria (Madigan et al., 2004).

Se reproducen por fisin binaria, viven en suelos y en aguas frescas, son clulas ovoides y grandes de 1.5 a 2.0 m de dimetro. Son pleomrficas, variando su morfologa desde bacilos hasta clulas en forma de cocos. Algunas especies como A. vinelandii y A. chrocoocum sufren un proceso de diferenciacin para formar quistes resistentes a la desecacin. Se mueven por flagelos pertricos, son aerobios, pero pueden crecer en concentraciones de oxgeno bajas. Algunas cepas producen pigmentos solubles o insolubles en agua. Son quimioorganotrficas, utilizan azcares, alcoholes y sales inorgnicas para crecer. Estas bacterias fijan al menos 10 mg de N2 por gramo de carbohidrato (glucosa) consumido. Utilizan nitrato y sales de amonio y ciertos aminocidos como fuentes de nitrgeno y el rango de pH en el que crecen en presencia de nitrgeno combinado es 4.8-8.5.

Fijacin de nitrgeno

El nitrgeno (N) es un elemento esencial para las plantas, ya que forma parte de compuestos tan fundamentales como protenas, cidos nucledos y clorofila, necesitndose principalmente en los tejidos vegetales en crecimiento (Urza, 2005). Este elemento no se encuentra formando parte de los compuestos minerales del suelo, la fuente mayoritaria de nitrgeno es el aire ya que las rocas contienen cantidades insignificantes de ste nutriente (Garca et al., 2010). Segn Urza (2005) la va normal de ingreso de nitrgeno a las plantas proviene del suelo, y para ser absorbido, se debe encontrar mineralizado, como nitrato (NO3) y amonio (NH3). Sin embargo, debido a que se acumula principalmente en formas orgnicas en el suelo, se hace necesaria su transformacin microbiana, conocida como mineralizacin de nitrgeno, para dejarlo disponible para las plantas El nitrgeno se encuentra principalmente en la atmsfera, donde constituye aproximadamente el 80%, existiendo en la forma NN; sin embargo, el N2, debido al triple enlace entre los dos tomos de nitrgeno, que hace a la molcula casi inerte, no puede ser aprovechado por la mayora de las formas vivientes, sino por un pequeo grupo de microorganismos altamente especializados, que incluyen algas, bacterias y actinomicetos. Para ser utilizado en el crecimiento, ste debe ser primero reducido y luego fijado en la forma de iones amonio (NH4+) o nitrato (NO3-). El proceso a travs del cual esos microorganismos reducen el nitrgeno hasta una forma utilizable es

conocido como Fijacin Biolgica de Nitrgeno (FBN). El proceso puede ser llevado a cabo por los microorganismos en vida libre o en simbiosis con plantas, y el mismo no slo permite usar el nitrgeno atmosfrico sino tambin revertir o reducir la degradacin del suelo. La FBN es mediada por el complejo nitrogenasa, presente en los organismos fijadores, el cual cataliza la conversin del N2 a NH4+ bajo la reaccin general: N2 + 10H+ + 8e- + nMgATP 2NH4+ + H2 + nMgADP + nPi (n>16) Esta requiere de grandes cantidades de poder reductor y energa (ATP), y la reduccin obligada de protones con un mnimo de 1 mol de H2 producido por mol de N2 reducido. La actividad del complejo enzimtico puede ser mermada por el oxgeno, de tal manera que los organismos fijadores poseen mecanismos (alta tasa respiratoria, compartamentalizaciones o proteccin conformacional) que les permiten mantener bajas concentraciones de ste a fin de mantener la enzima funcionando (Mayz, 2004).

Relacin Carbono- Nitrgeno (C-N)

El carbono y el nitrgeno son nutrientes muy importantes para los microorganismos en el proceso de compostaje. En primer lugar, el carbono provee energa y el nitrgeno es usado para la reproduccin y la sntesis de protenas. En general cerca de 25 veces ms de carbono es necesitado por un organismo comparado con la necesidad de nitrgeno por lo cual es necesario tener una proporcin adecuada de ambos elementos (25:1-30:1) (Sherman.,1999).

Medio de cultivo Un medio de cultivo una solucin acuosa que contiene varios nutrientes en concentraciones adecuadas para el crecimiento de microorganismos (Madigan et al., 2001). Para tener xito en el cultivo de un microorganismo especifico es de gran importancia conocer sus requerimientos nutricionales los cuales deben ser suministrados en una forma adecuada para que estos puedan sintetizar productos o metabolitos de inters (Plazas et al., 2007). Los requerimientos nutricionales se basan en la composicin qumica de la clula, las cuales contienen grandes cantidades de molculas y macromolculas. Aunque existen muchos elementos, la masa celular se forma primordialmente de carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y de otros elementos presentes en menor cantidad pero que tambin son importantes para el desarrollo celular como fsforo, azufre, potasio, magnesio, sodio, calcio, hierro entre otros.(Madigan et al.,2001).

Diseo de medios de cultivos

Diseo de medios de cultivos ptimos para el desarrollo de procesos fermentativos es un aspecto de suma importancia. Para ello se utilizan las tcnicas de diseo experimental, pues con la menor cantidad posible de experimentos se puede estudiar la influencia de varios factores y diferentes concentraciones de nutrientes sobre un proceso dado, que pudiera ser por ejemplo el crecimiento mximo del microorganismo o la produccin mxima de un metabolito de inters (Borrego et al.,2004).

madigan A las bacterias con forma cilndrica se les denomina cocos. A las bacterias con forma esfrica u ovoide se les denomina bacilos. Algunos bacilos se curvan en forma espiral, y se llaman entonces espirilos. Las clulas de muchos procariotas se mantienen juntas despus de la divisin celular formando grupos, y estas asociadas frecuentemente son caractersticas de diferentes organismos. Varios grupos de bacterias pueden ser inmediatamente reconocidas gracias a sus formas peculiares. Por ejemplo, las espiroquetas, que son bacterias con forma de sacacorchos, las bacterias con apndices, que presentan protuberancias celulares en forma de largos tubos o tallos, o las bacterias filamentosas, que forman clulas largas y delgadas o cadenas de clulas.

Muchos procariotas necesitan algn tipo de compuesto orgnico como fuentes de carbono. Los estudios nutricionales han demostrado que las bacterias pueden asimilar varios compuestos orgnicos carbonados y usarlos para hacer nuevo material celular. Los aminocidos, los cidos grasos. Los cidos orgnicos, los azucares, las bases nitrogenadas, los compuestos aromticos y un sinfn de compuestos orgnicos de otro tipo pueden ser usados por una u otra bacteria. Algunas procariotas son auttrofos, capaces de construir todas sus estructuras orgnicas a partir del dixido de carbono (CO2) con la energa obtenida de la luz o de compuestos inorgnicos. En peso seco, una celula tpica contiene un 50% de carbono es el principal elemento de todas las clases de macromolculas. Despus del carbono, el siguiente elemento ms abundante en la clula es el nitrgeno. En una bacteria tpica alrededor del 12% de su peso seco es nitrgeno, este elemento es importante en las protenas, en los cidos nucleicos y en otros constituyentes celulares. En la naturaleza., el nitrgeno no se presenta en forma inorgnica y organica (Tabla---).

Sin embargo, la mayor parte del nitrgeno natural disponible est en forma inorgnica, como amoniaco (NH3), nitratos (NO3-) o N2. Las mayoras de las bacterias son capaces de usar amoniaco como nica fuente de nitrgeno y otras muchas pueden usar nitratos. El nitrgeno gaseoso (N2) puede ser usado como nica fuente de nitrgeno por algunas bacterias, las bacterias fijadoras de nitrgeno.

Tcnica asptica Dado que los microorganismos son ubicuos, los medios de cultivo deben ser esterilizados antes de usarse. Para la mayora de los medios de cultivo esto se realiza por calor, habitualmente mediante calor hmedo en un gran recipiente a presin llamado autoclave.

Medidas directas del crecimiento microbiano: recuento de clulas totales y viables El crecimiento de poblaciones se mide estimando los cambios en el nmero de clulas, en la cantidad de algn componente de las mismas o en el peso total seco de las clulas. Existen varios mtodos de contar el nmero de clulas o de determinar la masa celular, adecuados para diferentes organismos o diferentes situaciones.

Recuento de clulas totales El nmero de clulas de una poblacin se puede determinar contando una muestra con el microscopio mediante el mtodo de recuento directo. El recuento directo se puede hacer de dos formas, en muestras secas sobre porta o en muestras lquidas. Con muestras lquidas se emplea cmaras de recuento especiales que, en esencia, son portas, cavados modificados, sobre cuya superficie de vidrio.

Recuento de clulas viables

En el recuento microscpico directo se cuentan tanto clulas vivas como muertas. En muchos casos interesa contar slo las clulas vivas, y con este fin se han desarrollado mtodos de recuento de clulas viables. Una clula viable se define como aquella que es capaz de dividirse y dar lugar

A una descendencia; y el mtodo usual para realizar una determinacin de clulas viables se basa en contar el nmero de clulas de la muestra que es capaz de formar colonias sobre un medio slido adecuado. Por esta razn, el recuento de clulas viables tambin se llama recuento de colonias. En este procedimiento se supone que cada clula viable puede formar una colonia. Hay dos maneras de realizar un recuento en placa para viables: el mtodo de extensin en placa y el mtodo de vertido en placa. Mtodo de extensin en placa

En el mtodo de extensin en placa un cierto volumen de cultivo diluido, que no suele ser superior a 0.1 ml, se extiende sobre la superficie de una placa con medio slido utilizando un asa estril de extensin. La placa se incuba despus hasta que aparecen las colonias y se cuenta su nmero. Es importante que la superficie del medio est seca de modo que el lquido de la muestra se absorba. No se suelen usar volmenes mayores