Organizarea intern a celulei Fiziologie celular

Citoschelet
Reea de filamente din citosol
Ajut la pstrarea formei celulei Servete ca sistem de ghidaj pentru micrile intracelulare ale organitelor

Schelet celular sugereaz ideea unei structuri permanente n interiorul celulei

Pentru unele celule este adevrat
Neuroni neurofibrilele transport vezicule sinaptice, mitocondrii i componente ale mebranei de la i pn la terminalul sinaptic

Majoritatea celulelor nu au o form fix

Trebuie s rspund la semnale care le cer s-i modifice forma sau s se divid O structur permanent ar deveni un dezavantaj

Citoscheletul este un element dinamic

Cel mai bun exemplu este fusul mitotic

Celulele se i deplaseaz, prin micri amoeboide

Sunt realizate prin formarea i decompunerea de structuri dinamice

Caracteristici comune ale componenilor citoscheletului

Unitatea de baz: monomeri Structura de baz se numete protofilament Proteinele asociate: puni i motoare Reglare prin asamblare i dezasamblare

 Exist 3 tipuri de structuri citoscheletice

Iniial numite microfilamente
La ora actual se numesc filamente de actin Actina - protein globular ce poate polimeriza liniar Monomerii de actin se cupleaz n 2 benzi lungi ce se nfoar n jurul unei structuri helicoidale numit actin filamentoas Procesul este reversibil Un filament are polaritate sau direcie capt minus, capt plus

Imagine de imunofluorescen
Actina filamentoas citoscheletic i mitocondrii pe celule cultivate de fibroblaste CV-1. Actina este marcat cu Alexa Fluor 488 conjugat cu faloidin (emisie fluorescent verde i MitoTracker Red CMXRos. (rou). Nucleii sunt colorai cu DAPI (emisie albastr).

Funciile actinei sunt mediate de mai multe clase de proteine anexe Miozine complexe contractile Proteine de legare leag citoscheletul de membran - integrine Proteine de ncruciare stabilizeaz reeaua - filamin, a-actinin, spectrin, distrofin, fimbrin Proteine de stabilizare polimerizare-depolimerizare capping, gelsolin, cofilin, profilin

Proteinele de Capping acoper capetele filamentelor Tropomodulinele acoper captul minus Proteinele CapZ se leag la captul plus inhibnd polimerizarea.

Controlul formei i micrilor celulare de ctre actin

Microtubuli
Microtubulii sunt benzile transportoare din celule Tuburi proteice cu diametre de aprox. 25 nm Mic veziculele, granulele, organite precum mitocondriile i cromosomii cu ajutorul unor proteine speciale de fixare Dpdv structural, sunt polimeri liniari de tubulin, protein globular. Aceti polimeri liniari sunt numii protofilamente. Mai multe protofilamente formeaz un microtubul, care poate exista izolat sau se poate cupla prin intermediul altor proteine pentru a forma structuri mai complexe, numite Cili Flageli Centrioli Toi microtubulii din celulele animale provin din aceeai surs - centrosomul

Filamente intermediare
Au diametre medii (cca. 10 nm) mai mari dect actina (8nm) i mai mici dect microtubulii (25 nm) Sunt mai frecvente n celulele care trebuie s suporte stress mecanic Dou diferene majore fa de celelalte 2 tipuri de filamente:
Nu exist substane care folosesc filamentele intermediare ca suport pentru micare
Spre deosebire de miozine ,pentru filamentele de actin sau kinezine i dyneine pentru microtubuli nu au motoare moleculare Se consider ca au numai rol structural

Filamentele intermediare sunt mai stabile dect celelate tipuri.

Sunt aprox. 5 clase

Vimentine Neurofilamente Keratine Lamin menine integritatea membranei nucleare

 Tipuri de filamente intermediare

Tip I i II: keratine acide i bazice Tip III: vimentin, desmin, GFAP (Glial Fibrillary Acidic Protein), peripherin Tip IV: neurofilamente (I,M,G), internexin, philensin, phakinin Tip V: lamine nucleare A, B i C

Asocierea filamentelor intermediare cu alte proteine

IFAP (intermediate filament associated protein) ataeaz FI la alte structuri - Plectina cupleaz FI cu microtubulii Se poate cupla i cu MAP (Microtubule associated proteins) precum spectrina. Receptorul pentru Lamin B : cupleaz Lamina cu membrana nuclear intern Ankyrina: leag actina de FI la baza celulei Desmoplakina: leag FI la nivelul desmozomilor i hemidesmozomilor

Motoare Moleculare
Asigur micarea intracelular ATP-aze de 100-500 kDa ce se ataeaz de ncrctur Exist 2 tipuri:
Care se mic de-a lungul microtubulilor Care se mic de-a lungul actinei

Kinezina molecul cu cap dublu care-i mic ncrctura ctre capul + MT Dyneinele au dou capuri
Dyneina citoplasmic are funcie similar cu a kinezinei, dar mic particulele ctre captul al microtubulilor Dyneina Axonemal oscileaz permanent i sunt responsabile pentru micarea flagelilor i cililor

Miozinele formeaz puni transversale ctre filamentele de actin Miozina I este asociat cu actina la nivel subcelular Miozina II este forma prezent n fibrele musculare scheletice

Flageli i cili minuni tehnice

Flagelul prezint un motor rotativ ce propulseaz un filament de aprox 15 microni Se rotete cu aprox. 20000 rpm (!) Consum 10-16 W Eficiena de conversie a energiei se apropie de 100%.

Moleculele de adezivitate celular

Celulele se ataeaz de lamina bazal (membrana bazal) i de alte celule prin intermediul moleculelor de adeziune celular (CAM) - Foarte studiate n ultimii ani
datorit rolului pe care l au n:
dezvoltarea embrionar Formarea esuturilor i organelor Meninerea integritii celulare Inflamaie i vindecarea plgilor Metastazare i oncogenez

Multe trec prin membrana celular i se ataeaz de citoschelet Altele se leag de molecule similare de pe alte celule (ataare homofil) sau pe molecule diferite (ataare heterofil) Majoritatea se cupleaz cu lamininele (molecule mari, n form de cruce, cu multiple domenii-receptor)

 Nomenclatura n domeniul CAM e nc haotic (domeniu n permanent expansiune) 4 familii

Integrine Molecule din superfamilia IgG (imunoglobuline) Caderine molecule dependente de Ca2+ Selectine

Prezena CAM este important nu numai mecanic, dar i pentru semnalizare

Celulele care pierd contactul cu vecinii intr n apoptoz Fr CAM agregarea i adeziunea plachetar nu sunt posibile Marginaia, diapedeza, fagocitoza

Conexiuni intercelulare
Jonciunile intercelulare sunt de 2 tipuri:
De fixare Comunicante gap

Jonciunile de fixare sunt

Strnse zonula occludens leag celulele una de alta Zonele apicale ale epiteliilor

Sunt impermeabile

Desmozomi

Zonula adherens

Hemidesmosomi

Adeziuni focale

Patologie indus de citoschelet

Insuficiena cardiac dystrophin

Microtubule-associated protein (MAP) t (tau) n boala Alzheimer. EspH, protein citoscheletic efectoare n infecia cu Escherichia coli enterohemoragic i enteropatogenic Ubiquitina, ca i component a filamentelor din boala Alzheimer Scleroza lateral amiotrofic

Membrane intracelulare

Reticulul Endoplasmic
RE neted
Detoxificarea xenobioticelor Metabolismul hidrocarbonailor Depozitarea calciului

RE rugos
Biosinteza membranelor
Vezicule (sistemul endomembranar) Proteinele de schimb ale fosfolipidelor Flippazele (asimetria compoziiei lipidice)

Detoxifierea xenobioticelor
Se realizeaz cu ajutorul hidroxilrii (monoxigenaze)
Adugarea de radicali OH la molecule acceptor

Citocromul P-450
este redus de ctre NADPH i poate transfera OH la moleculele acceptor

Arilhidrocarbonhidroxilaza (AHCH)
Metabolizeaz hidrocarburile policiclice Poate aciona ca promoter al carcinogenezei

Metabolismul glucidic

Glucozo-6-fosfataza este localizat aici

Semnalele citosolice de calciu

Nivelele de calciu citosolic ntr-o celul nestimulat sunt de aprox. 10000 ori (10-7 fa de 10-3 M) mai mici dect n exteriorul celulei Acest gradient de Ca2+ este meninut de: Permeabilitatea limitat a membranei pentru Ca2+ Transportori de calciu care menin eflux permanent de Ca2+ Pompe de calciu n organitele intracelulare Proteine citoplasmice i din organite care cupleaz calciu pentru tamponarea variaiilor acestuia

Creterea nivelelelor citosolice de Ca2+ se face:

Deschiderea canalelor de calciu voltaj dependente Canale de calciu dependente de fosforilarea prin PkA sau PkC

Canale reticulare de Ca2+

Calciul este stocat n reticulul endoplasmic neted cisterne La intrarea n aciune, canalele reticulare elibereaz Ca2+ n citosol Canalul de Ca2+ IP3dependent Receptorul pentru ryanodin al doilea tip de canale de Ca+ Ambele canale sunt reglate prin feed-back pozitiv (CICR)

Meninerea Ca2+ n RE
Este realizat de o serie de proteine chaperon din RE
Calsequestrin Calcineurin Calreticulin Calnexin

Reducerea nivelelor de Ca2+ citosolic:

Reintroducerea Ca2+ n RE se face prin intermediul unei ATP-aze numite SERCA (pompa de calciu) Eliminarea Ca2+ din citosol ctre exteriorul celulei se face cu ajutorul unei ATP-aze numit PMCA (Plasma membrane calcium ATPase) antiport inconstant Ca2+/H+ SPCA (Secretory Pathway Calcium ATP-ase) mai puin cunoscut

Funciile calciului intracelular

Contracie muscular striat, neted - Secreie glandular Metabolism celular - Proliferare celular - Excitabilitate neuromuscular - Apoptoz

Semnalele citosolice de calciu

Aparatul Golgi
Parte a sistemului endomembranar Locul modificrii i sortrii proteinelor Discuri diferite au funcii i proprieti membranare diferite Principala modalitate de micare ntre discuri este prin vezicule Esle alctuit din saci membranari numii cisterne De obicei sunt ntre 5 i 8, dar uneori au putut fi observai pn la 60 n jurul cisterenelor principale exost un numr de vezicule sferice care au nmugurit din cisterne Stivele de cisterne au 5 regiuni funcionale (reele): Reeaua cis-Golgi cis-Golgi Golgi medial, trans-Golgi, Reeaua trans-Golgi.

Fiecare regiune conine diferite enzime, care modific selectiv coninutul veziculelelor

Traficul vezicular ntre componentele sistemului membranar

 Aparatul Golgi modific, sorteaz i mpacheteaz substanele secretate pentru exocitoz sau folosire n celule Modific proteinele produse de RER, este implicat n transportul lipidelor i formarea lizozomilor Transformrile chimice sunt Glicozilare Fosforilare adugare de manozo-6-fosfat la proteinele lizozomale sinteza de proteoglicani GAG glicozaminoglicani polizaharizi liniari neramificai care se ataeaz la proteine pentru a forma proteoglicani sulfatarea proteoglicanilor pentru formarea de acid sialic, heparan-sulfat i condroitinsulfat (componeni de baz ai es. conjunctiv) -Fosforilarea moleculelor -Fosforileaz apolipoproteina producnd VLDL

Diverse variante de alterri suferite de proteine la nivelul diverselor discuri ale aparatului Golgi

Materialele sunt transportate ntre compartimente cu ajutorul veziculelor

Veziculele nmuguresc cu ajutorul proteinelor specifice

Proteinele din vezicule comunic pentru a realiza sortarea i nmugurirea

Cuplarea veziculelor
Dup formare, mbrcmintea este eliminat Aceasta expune markerii rab i SNARE ce permit recunoaterea i fuziunea cu membrana int

Exist mai multe tipuri de proteine de acoperire pentru diversele etape ale traficului vezicular

Semnalele veziculare manozo-6-fosfatul ca semnal

Endocitoza

Peroxizomii
Au fost descrii prima dat n 1954, n teza unui student suedez (J. Rhodin) ca microsomi n 1966, echipa lui Christian de Duve separ peroxisomi izolai Christian de Duve primete n 1974 premiul Nobel mpreun cu George E. Palade i Albert Claude). Se gsesc att la plante ct i la animale Sunt implicai n detoxifiere, folosind apa oxigenat Funcia metabolic major este oxidarea AG cu lanuri lungi (mai lungi de 18 carboni), ce alimenteaz procesele mitocondriale de b-oxidare Prima etap a b-oxidrii cuprinde formarea de peroxid de hidrogen La nivelul peroxizomilor se produc primele reacii din sinteza plasmalogenului, care este cel mai abundent fosfolipid din mielin. Multe tulburri peroxisomice duc la boli neurologice

Apariia peroxisomilor se face prin fisiune

Lipidele se sintetizeaz local sau sunt importate din RE folosind PEP

Mitocondria

Substructurile mitocondriale
2 membrane separate de un spaiu Sunt membrane unitare tipice n interior, ntre membrane, se gsete matricea
Prezint ADN Ribosomi Granule proteice, etc

Membrana interioar prezint criste

Conin i organizeaz enzimele lanului de transport electronic i pompele cu ATP Separ matricea de spaiul ce conine protoni, permind apariia gradientului protonic Cu ct celula este mai activ energetic, cu att cristele sunt mai multe

Replicarea mitocondriilor
Mitocondriile se replic precum bacteriile. Cnd devin prea mari, se rup fisiunea Aceasta implic plierea membranei, urmat de diviziune nainte de diviziune, mitocondria trebuie s-i replice ADN-ul. Mitocondriile au propriul lor ADN i ribosomi i pot sintetiza proteinele proprii ADN-ul mitocondrial este circular i se afl n matrice, n structuri punctate structures numite "nucleoizi". Fiecare nucleoid poate conine 4-5 copii ale ADNului mitocondrial (mrDNA). ADN-ul mitocondrial uman are 16,569 bp;

Motenirea Mitocondrial

La mamifere, 99.99% din ADN este matern. Spermatozoidul are doar 100 mitocondrii, deci doar 1 parte la 104 sau 0.01% of din ADN este paternal. Mutaiile mtDNA pot trece de la mam la copil implicaii n clonare Exemple de boli cu transmitere mitocondrial:
Neuropatia optic Leber mutaia genei ce codific subunitatea 4 a NADH-C0Q reductazei. Boala fibrelor musculare zdrenuite" asociat cu micri spastice inseria ARNt mitocondrial al lizinei Sindromul Kaerns-Sayre : defecte oculare, ritmuri cardiace anormale, degenerescen a SNC.

Distribuia haplogrupurilor mitocondriale n lume

Viaa i moartea mitocondriilor

Numrul de mitocondrii se controleaz prin autofagie Controlul numrului constituenilor celulari cu ajutorul lizozomilor Procesul ncepe prin nfurarea membranelor RE n jurul mitocondriei Veziculele apar din ap. Golgi i intr n vacuola autofagic aceste vezicule conin hidrolaze, ce distrug mitocondria