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ENTRE ET SORTIE DU LABORATOIRE

Entre dans le laboratoire


Le professeur ouvre la porte du laboratoire et autorise lentre des lves. 1. Dposer le sac sous la paillasse de son poste de travail 2. Accrocher ses vtements dans le vestiaire 3. Revtir sa blouse 4. ter bagues, bracelets, montre et les ranger soigneusement 5. Attacher les cheveux 6. Dcontaminer la paillasse avec de la javel, laisser scher 7. Se laver les mains 9. Installer sur la paillasse le matriel personnel indispensable, le reste tant dans le sac ou sur le haut de paillasse.

Sortie temporaire du laboratoire


1. ter sa blouse et la plier sommairement sur le tabouret du poste de travail 2. Se laver les mains 3. Remettre ventuellement ses vtements dextrieur.

Retour aprs une sortie temporaire


1. Accrocher ses vtements dans le vestiaire 2. Revtir sa blouse 3. Se laver les mains.

Sortie du laboratoire en fin de TP


1. Ranger ses affaires personnelles dans le sac 2. Dcontaminer la paillasse avec de la javel, laisser scher 3. Vider la poubelle de paillasse dans la grande poubelle 4. Ranger les diffrents lments du poste de travail dans le bac dissection attribu chaque poste (vrifier concordance des N) 5. ranger la blouse dans le vestiaire 6. Se laver les mains! 7. Remettre ses bagues, bracelets, montre 8. Reprendre ses vtements et son sac 9. Sortir du laboratoire. Le professeur referme la porte de la salle.

Mise en place des Bonnes Pratiques de Laboratoire (BPL) au laboratoire de Microbiologie au LTIDStphanie MAS professeur stagiaire de Biotechnologies Biochimie-gnie biologique IUFM de TOULOUSE-FRANCE

MOYENS DE PROTECTION DU MANIPULATEUR


Protection passive
Blouse propre et ferme Cheveux attachs en arrire, les mches et franges retenues laide de barrettes.

Protection active
Respect des rgles de scurit et des procdures Nettoyage systmatique des matriels, quipements et surfaces de travail Conscience permanente de ntre pas seul dans le laboratoire Matriels spcifiques, bien utiliss et bien entretenus

LE LAVAGE DES MAINS


Ouvrir le robinet mouiller les mains se savonner les mains pendant au moins 30 secondes sans oublier les espaces interdigitaux et les ongles rincer soigneusement

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GESTION DES RISQUES CHIMIQUE ET BIOLOGIQUE Risque chimique


En cas de contamination personnelle
Cesser tout mouvement garder son calme informer immdiatement lenseignant qui dirige la suite des oprations o une partie non sensible (mains) du corps est concerne!: lavage abondant o une partie sensible du corps est concerne il: retrait immdiat dventuels lentilles de contact, lavage abondant, paupires maintenues cartes. Rinage final abondant des yeux avec un collyre ou dfaut avec de leau physiologique bouche: rinage abondant leau ds lintervention, linfirmire est informe

En cas de contamination de son environnement


Informer (faire informer) lenseignant suivre les consignes donnes par lenseignant se laver les mains en fin dopration

Risque biologique
En cas de contamination personnelle
Cesser tout mouvement garder son calme informer immdiatement lenseignant qui dirige la suite des oprations o une partie non sensible (mains) du corps est concerne: lavage abondant avec un dtergent o une partie sensible du corps est concerne: oeil: retrait immdiat dventuels lentilles de contact, lavage abondant, paupires maintenues cartes. Rinage final abondant des yeux avec un collyre ou dfaut avec de leau physiologique, bouche: rinage abondant leau, ds lintervention, linfirmire est informe o les vtements touchs sont systmatiquement ts et traits laide dun dtergent (et lavs ultrieurement).
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o se laver les mains en fin dopration.

En cas de contamination de son environnement


Traiter largement, sil ny a pas de risque dextension de la contamination, la zone contamine laide de javel

UTILISATION COURANTE DES MICROSCOPES


Dbut de sance
Prendre un microscope dans larmoire le sortir de sa bote nstaller le microscope au niveau du poste de travail. Connecter lampoule de lappareil au secteur les microscopes doivent tre manipuls avec beaucoup de dlicatesse o ne pas faire glisser le microscope, o soulever lgrement le microscope par la base du statif et par la partie arrire de la potence inspection rapide du microscope, parties optiques incluses Utilisation du microscope Objectif immersion: 100X; 90X ncessitent de lhuile immersion autres objectifs: 10X, 40X. Ils sont altrs par lhuile. En cas derreur!: o procder au nettoyage selon les consignes fournies, Il faut imprativement respecter les rgles suivantes: effectuer la mise au point initiale laide de lobjectif 10X passer lobjectif 40X ou passer lobjectif 100X sans dplacer la platine (un simple rglage micromtrique fin suffit). Nettoyage Lors de chaque utilisation, et chaque fois que ncessaire (objectif sec souill par de lhuile) avec du xylne
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Fin de sance
Nettoyer soigneusement les oculaires et les objectifs avec du papier de texture fine. Cette opration est remplace par le nettoyage lther de fin de journe Dbrancher lampoule et la ranger soigneusement en veillant ne pas endommager le filtre et lampoule Remettre le microscope dans la bote o vous lavez pris

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3RB

Prvention des Risques Biologiques Protocole de Bonnes Pratiques de Laboratoire - fiche n11

Conduite tenir en cas d'accident


exposant un produit potentiellement infectieux Livret Scurit Rester calme

Donner immdiatement les premiers soins


En cas de projection sur les muqueuses et dans les yeux
Rincer abondamment l'eau (eau courante ou lave-il si eau change quotidiennement) ou au srum physiologique (si port de lentilles de contact, laisser l'eau les dcoller)

En cas de contact avec la peau (sans lsion provoque)


Nettoyer la zone atteinte l'eau et au savon, puis rincer. Dsinfecter avec de l'eau de Javel 1,2 degrs chloromtriques ou de l'alcool 70

En cas de piqre ou blessure


Nettoyer la zone cutane lse l'eau et au savon, puis rincer Dsinfecter par un bain prolong (au moins 5 minutes) dans un dsinfectant (eau de Javel 1,2 degrs chloromtriques ou alcool 70)

Appeler ou faire appeler les services de soin et d'urgence

Traiter les surfaces et les matriels contamins

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3RB

Prvention des Risques Biologiques Protocole de Bonnes Pratiques de Laboratoire fiche n0

Livret Scurit

Rgles de base
Respecter les bonnes pratiques de laboratoire
Porter une blouse non inflammable, propre, couvrante (en particulier les manches), ferme et rserve au laboratoire. Avoir les cheveux attachs et les ongles courts. Ne porter aucun bijou aux poignets ou aux doigts. Se laver les mains rgulirement. Ne rien mettre la bouche (ni boire, ni manger, ni mcher du chewinggum, ni fumer). Ne jamais pipeter la bouche. Utiliser du matriel adapt et conforme. Limiter et remplacer dans la mesure du possible le matriel coupant et piquant. Eliminer les produits et matriels contamins. Utiliser des moyens de protection collective (PSM : Poste de Scurit Microbiologique) et individuelle (gants, lunettes, masques,...)lorsquils sont ncessaires et connatre leurs limites. Nettoyer et dsinfecter paillasse et matriel aprs manipulation.

Avoir une attitude rflchie


Considrer la salle de Travaux Pratiques comme un laboratoire Grer le temps et lespace. Organiser le poste de travail et les manipulations : Analyses de Protocoles. Grer llimination des dchets sans oublier le risque chimique.

Savoir agir en cas daccident

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Rflexion sur la prise en compte d'attitude scuritaire au moment des examens


Prise en compte systmatique de la scurit en regard du risque biologique lors des preuves pratiques des examens de l'ducation nationale aux laboratoires de biochimie- biologie

Consignes respecter
Les consignes indiscutables :
Blouse couvrante, ferme mise l'entre du laboratoire et enleve sa sortie. Lavage des mains avant la sortie du laboratoire Aucun objet port la bouche dans le laboratoire (pipette ou stylo) Organisation de la paillasse et gestion des matriels souills (papiers ou gants) adaptes

Ces consignes, si elles ne sont pas respectes, donnent lieu une pnalit prcise sur le barme de notation du sujet, ce dernier portant la mention "les rgles de scurit courantes seront respectes ; dans le cas contraire, le candidat pourra tre sanctionn de points". Un seul manquement donne lieu l'intgralit de la pnalisation.

Les autres consignes :


Port de gant usage unique pour tenir le matriel contenant du sang ou un driv
sanguin (exemple : remplissage de capillaire pour microhmatocrite, confection de frottis sanguin) Pas de contact des gants usags avec parties de la peau ou vtements non protgs ou matriel personnel utilis hors du laboratoire Pas de contact des gants usags avec du matriel commun (clavier d'ordinateur, de spectrophotomtre, microscope,)

Ces consignes, plus difficiles valuer au cours d'une preuve (erreurs fugitives ou non consensuelles) pourront faire l'objet d'une valuation ponctuelle, le sujet intgrant l'valuation positive d'un ou plusieurs gestes scuritaires lors de l'examen des candidats sur une technique prcise, le barme en faisant alors explicitement mention.

Commentaires
Il est parfois difficile de s'accorder sur la qualit scuritaire ou antiscuritaire d'un geste ou d'une attitude. Aussi, pour guider la rflexion, ayons l'esprit que d'une manire gnrale, il s'agit de : Respecter les bonnes pratiques de laboratoire afin d'viter la contamination des autres, de soi-mme et du produit tudier Ne porter des quipements de protection individuelle (EPI) que lorsqu'ils n'interfrent pas avec la prvention collective ou qu'ils n'entranent pas un dplacement du risque (latexchaleur). Pour rflchir au port des gants en particulier, on peut s'aider des tableaux suivants Rflexion sur le port des gants en microbiologie en milieu scolaire
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Rflexion sur le port des gants

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3RB

Document de synthse 3RB


Renseignements pratiques en Microbiologie
o

Lutage et tat frais

La pratique du lutage des tats frais na pas de signification dun point de vue scuritaire. Au contraire, elle impose un surcrot de manipulation de lchantillon, donc ce titre augmente le risque ventuel. Elle nest plus utilise pour les tats frais de faon gnrale, y compris dans le cas de ltude des dermatophytes comme dans celui des germes anarobies (pour ces germes, quand bien mme labsence de lutage nuirait la mobilit, ce qui nest pas certain, ce caractre nest pas ncessaire lidentification...). Il est cependant parfois utilis pour conserver certaines prparations rares, notamment en parasitologie. Dans tous les cas, il convient d'adapter la taille du dpt la taille de la lamelle afin dviter tout dbordement.

Chocs thermiques

Louverture dampoules ou de tubes par choc thermique nest plus une mthode utilise en laboratoire. De plus elle nest pas exempte de risques de brlures et de projections de produits ou de verre. Cette technique est donc dconseiller.

Fixation lalcool chaud ou froid ?

La fixation des talements microbiens lalcool se fait par les deux mthodes. Il semble ici sagir dune question dhabitude de laboratoire. Il est difficile de recommander une mthode plutt quune autre, on peut nanmoins observer que la fixation chaud avec flambage de lalcool prsente plus de risques que la fixation froid, risques de brlure et de projections de contaminants. Il est prciser que la fixation chaud est dconseille lors de fixation de produits pathologiques car les cellules qu'ils contiennent seraient abmes rendant la lecture difficile. Lors dune fixation froid, le temps de contact avec l'alcool doit tre suprieur ou gal 3 minutes. Voir le document Viabilit bactrienne aprs fixation

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