Curs de Biofizic

3
Metode de studiu n Biofizic

Clasificare:
I. METODE GENERALE
II. METODE SPECIFICE

I. METODE GENERALE:

A) Observaia tiinific

B) Experimentul tiinific
tiina este o u i cercetarea este cheia acesteia.

- Anton Pann

Observaia tiinific

Natura rspunde doar celui pregtit s o aud.

Hippocrate: observaia tiinific

Hippocrate a fost fondatorul colii medicale ale Kos i numele lui este strns legat de prima perioad a medicinii tiinifice. Diagnosticul lui se bazeaz pe sistemul de raionament logic, pe observaie clinic atent, o abordare uman a pacientului, pe logic.

Hippocrate:
Printele medicinii Jurmntul lui Hippocrate Bazele cercetrii tiinifice: observaia Fia medical - Foaia de observatie, continu s fie cel mai important document al pacientului (primele observaii clinice Hippocrate). Tratamentul pe baze tiinifice.

Observaia tiinific
intenional: scop metodic: metod organizat, cercetare sistematic valoare cognitiv depinde de calitile cercettorului fr intervenia cercettorului - poate fi: 1. direct (bazat pe percepia senzorial) 2. indirect (intermediat de un instrument - stetoscopul)

Experimentul tiinific aceleai caracteristici, dar cu intervenia cercettorului

poate fi:

1. in vivo (pe modele animale) 2. in vitro (pe celule, culturi de celule)

nu poate fi aplicat pe om.

II. Metodele specifice biofizicii

Clasificare bazat pe trei criterii:
I. Principiul fizic/biofizic al metodei (prezentat extensiv) II. n relaie cu modul de utilizare:

metode de separare metode analitice (de analiz)

III. n relaie cu complexitatea biosistemului : atomi, molecule celule esuturi organe, sisteme fiziologice.

De ce metode de separare pentru medic?

Analiza unei anumite proteine dintr-un esut complex necesit separarea acesteia.
Schema a unei celule animale tipice, care arat componentele subcelulare. Organite: (1) nucleoli (2) nucleu (3) ribozom (4) vezicul (5) reticulul endoplasmatic (ER) (6) aparatul Golgi (7) citoscheletul (8) reticulum endoplasmatic (9) mitocondrii ( 10) vacuole (11) citoplasma (12) lizozom (13) centriol.

Proteom - ansamblul de proteine produse de genom (aproximativ 60.000 de proteine la om).

Separarea-purificarea proteinelor
Scop Studiul proprietilor unei proteine Determinarea secventei de aminoacizi Determinarea structurii tridimensionale
Dificultate Celulele conin, de obicei mai mult de 1000 diferite tipuri de proteine. Fiecare proteina are abundena medie mai puin de 1 / 1000 Soluie Diferenele biochimice i ale proprietilor fizico-chimice ale proteinelor: solubilitate, dimensiuni, punct izoelectric, hidrophobicitate, afinitate pentru anumii liganzi.

I. Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

L.P.! 1. Metode electrokinetice : Electroforeza i immunoelectroforeza

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

2. Metode cromatografice: (adsorbie,

partiie, schimb de ioni, afinitate)

3. Centrifugare i ultracentrifugare
L.P.!

4. Metoda de liofilizare

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

5. Metode kinetice:

Viscozimetrie Osmometrie Msurarea tensiunii superficiale

L.P.! L.P.!

L.P.!

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

6. Metode optice:

Fotocolorimetrie L.P.! Turbidimetrie Nefelometrie Fluorimetrie L.P.! Polarimetrie Rfractometrie L.P.! Flame-fotometrie

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

7. Metode electrice:

Polarografie pH-metrie Conductometrie

L.P.!

8. Difracie cu raze X

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

9. Microscopia optic: Microscopul optic

L.P.! L.P.!

Microscopul cu contrast de faz Microscopul cu fluorescen Ultramicroscopul Microscopul polarizant Microscopul cu imersie
L.P.!

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

10. Microscopul electronic, microanaliza nuclear i alte tehnici n relaie.

Grupele principale de metode n raport cu principiul fizic/biofizic

11. Metode de Spectrometrie optic :

spectrometrie ultraviolet-vizibil spectrometrie Raman L.P.! NMR spectrometrie spectrometrie de mas

L.P.! 14. Metode radio-izotopice 15. Metode pentru studiul semnalului L.P.! bioelectric (metoda patch-clamp - canale ionice i l.p.)