Sunteți pe pagina 1din 7

1

7 Ingineria genetic
Unul din capitolele cele mai fascinante ale geneticei moderne este reprezentat de posibilitile omului de a a modifica intit genomul fiinelor vii In cursul istoriei umanitii nc din neolitic cnd s-a nceput domesticirea animalelor i plantelor,omul a acionat asupra materialului genetic,ns numai indirect, prin metoda hibridrilor selective. Toate rasele i variantele de animale i plante realizate de agricultori i pstori nu sunt dect rezultatul manipulrilor genetice efectuate prin mperecheri gndite pentru un anumit scop Ceea ce ns se numete inginerie genetic se refer la intervenii directe asupra ADN-ului Ea este un imens succes al omului modern dar a i deschis perspective nebnuite pn acum n agronomie,zootehnie,medicin,i n anumite ramuri de producie

INGI

Secionarea moleculei de ADN

Cu toate acestea a strnit i multe proteste genernd chiar un important capitol de bioetic In linii foarte generale ingineria genetic i propune s execute un fel de microintervenii chirurgicale asupra moleculelor de ADN,scond dintr-o spiral un fragment pentru a-l ndeprta sau pentru a-l introduce n structura ADN-ului altei fiine .Pentru aceasta e nevoie de anumite bisturiecu care lanurile de ADN s fie tiate n locuri precise, i posibilitatea de a suda ntre ele fragmente de ADN

INGINERIE
Bisturiile respective sunt reprezentate de enzimele de restricie descoperite de Werner Arbers,n 1960 pentru care au luat n 1979 premiul Nobel mpreun cu D.Nathans i H.Smith E vorba de nite enzime care taie la un anumit loc (pe care-l recunosc),ambele lanuri de ADN fr s lezeze bazele azotate,S-au descoperit un numr mare de astfel de enzime care secioneaz ADN-ul la locul dorit
Sudarea a dou fragmente de ADN

Sudarea a dou fragmente de ADN se realizeaz printr-o alt clas de enzime numite ligase la descoperirea crora a contribuit n special Martin Gellert i Minnie Bullok n 1970
Aceste ligase (numite uneori sintetaze)conecteaz ntre ele fragmente de ADN cataliznd formarea unor legturi carbon-carbon,carbon-hidrogen,carbon-oxigen.carbon-sulf,carbon-azot etc.cu consum de eenergie produs de ATP sau NTP

Sudarea u

Ingineria genetic n sensul ei modern ncepe n 1973 cnd Herbert Boyer i Stanley Cohen au reuit cu ajutorul unor enzime de restricie s izoleze un fragment de ADN i s-l insereze ntr-o plasmin cu care au transformat genetic o bacterie Ei s-au bazat pe cercetrile lui P.Berg(n.1926 premiu Nobel 1980) care n 1972 a reuit s creeze prima molecul hibrid de ADN insernd n ea un fragment din alt molecul. Ingineria genetic care este n plin dezvoltare i propune 1. S realizeze o molecul de ADN cu o secven eliminat sau blocat din punct de vedere funcional realiznd un cariotip transgenic sau knock out 2. S creeze un ADN cu o secven suplimentar (un hibrid) 3. S nlocuiasc ntr-o molecul de ADN o secven cu alta(o himer) 4. S obin un ADN care sintetizeaz molecule fluorescente Toate aceste modificri ale ADN-ului presupun o tehnic extrem de sensibil astzi facilitat de faptul c enzimele necesare(enzimele de restrici,ligazele)se pot obine din biblioteci sau librrii speciale

Obiectivul este creerea unui genom modificat. Sunt cazuri cnd este nevoie s se introduc ntr-un organism deficitar o anumit gen sau secven de ADN. Pentru aceasta este nevoie n primul rnd s se identifice gena respectiv de pe un ADN i s se detaeze cu ajutorul unor enzime de restricie. Fragmentul astfel obinut se poate eventual nmuli prin polimerizare n lan Aceast gen trebuie apoi introdus n genomul celulelor organismului care are nevoie de ea. Pentru aceasta sunt mai multe metode. Cea mai simpl este s se foloseasc un tun genetic care bombardeaz celulele a cror genom trebuie modificat cu granule de aur sau tungsten de care sunt ataate genele respective din care unele ptrund n nucleul celulei int. Alt metod const n ataarea genei respective de un vector ceea ce duce la formarea unui ADN recombinat care este apoi introdus n celula creia i este destinat. Aceasta metod se numete transfecie La ora actual adesea nu este nevoie s detam gena de care avem nevoie cci o gsim gata pregtit n biblioteci accesibile n ingineria genetic se folosesc dou tipuri de vectori. Avem plasminele care sunt nite molecule circulare de ADN ale unor bacterii i viruii(adenovirui,retrovirui i bacteriofagi) Se mai folosesc ca vectori i liposomii care sunt nite vezicule (de civa nm diametru) cu perei fosfolipidici ce pot ptrunde n celul prin membrana acestora i introduce n citoplasm coninutul lor n care se plaseaz gena ce trebuie altoitTehnica se mai numete lipofecie. Aceste transfecii se pot face n celula unui organism complex,ntr-o levur(drojdie de bere) care este o Eucariot sau ntr-o bacterie care este o Procariot
Graie unei astfel de transfecie se pot de exemplu crea bacterii care sintetizeaz insulina sau hormonul de cretere. Pentru aceasta se izoleaz din genomul unei celule glandulare umane gena ce sintetizeaz hormonul respectiv i se introduce n inelul unei plasmine extrase dintr-o bacterie .Inelul astfel preparat este apoi introdus ntr-o bacterie care se nmulete i fabric hormonul dorit. De asemenea se pot prelua celule de la un pacient cu un deficit genetic n care se introduce o plasmin sau un retrovirus cruia i s-a ataat gena de care are nevoie care a fost preluat din genomul unei persoane normale. Celula deficitar mpreun cu vectorul respectiv este apoi reintrodus n corpul bolnavului care va beneficia acum de prezena genei ce-i lipsea

Ingineria genetic dintr-o tehnic de laborator a devenit acum o metoda cu largi aplicaii. In primul rnd continu s fie folosit n cercetrile de laborator ca metod de lucru definind ceea ce s-a numit ingineri genetic galben. Cea mai vast aplicaie a ei este n domeniul agronomiei i zootehniei unde a dus la realizarea diferitelor specii sau organisme modificate genetic nc controversate .Aceast aplicaie formeaz ingineria genetic verde. Cu o rspndire tot att de

mare este i aplicarea ei n diferite ramuri de producie din industria biochimic formnd ingineria genetic neagr. Extrem de interesante sunt ns aplicaiile ingineriei genetice roii din medicin. Ele permit diferite testri genetice,fabricarea unor hormoni,obinerea de celule stem i de vaccinuri,edificarea unei farmacologii noi bazate pe animale transgenice i a deschis porile spre o nou form de terapie cea genic Tot ingineria genetic a pus la punct tehnica reproducerii prin clonare .Am vzut c orice fiin eucariot provine din doi prini fiecare din ei contribuind cu cte un set haploid de cromozomi n reproducerea prin clonare care presupune o tehnologie foarte avansat - se obine o fiin nou cu materialul genetic provenind de la un singur printe. Cum acest material genetic al noii fiine numai sufer nici un mixaj el rmne identic cu cel al printelui su ca n cazul frailor gemeni univitelini(monozigotici)provenii dintr-un singur zigot(ou)
De aceea relaia dintre fiina ce a donat genomul su i nou fiin creat n laborator este ambigu cci este n acelai timp vertical de tip filiaie,dar i orizontal de fratern

n biologie se vorbete de o clonare molecular ce const n multiplicare unei molecule sau unui fragmente de molecul de ADN sau ARN(d.ex prin aciunea unei polimeraze)De asemenea se menioneaz o clonare celular care const n a obine populaii de celule provenite prin mitoze dintr-o singur celul iniial(aa cum se obine n culturile de bacterii sau de celule)n acest capitol am abordat ns clonarea de organisme ceea ce este ceva diferit i mult mai complex Termenul de clonare vine de la cuvntul grecesc clon() care nseamn ramur

Tong Dizhou

I Wilmut i Dolly

Reproducerea prin clonare nu este un lucru foarte recent. Prin 1938 marele embriolog H.Spemann a prevestit c se vor face experiene fantastice de procreaie uniparental. Termenul de clonare a fost lansat de J.B.S. Haldane n 1953 dup ce R.Briggs i T King au reuit prima clonare a unui animal(o broasc)n 1952 pornind ns de la celule embrionare. Se pare c Haldane a preluat termenul de la botanistul H.J. Weber care l-a folosit n 1903 pentru a desemna o multiplicare asexuat la plante. Primul pete clonat(un crap) a fost realizat n 1963 de chinezul Tong Dizhou ( ) denumit printele clonrii chineze.Primii oareci au fost

clonai de K Ilmensee i P Hoppe n 1981 iar prima oaie de S. Willadsen n 1984 toate folosind celule embrionare. n 1997 a fost clonat prima oaie(Dolly)pornind de la celule adulte n institutul Roslin din Edinbourg de I.Wilmut i K Campbell. n general se consider aceast ultim clonare drept prima clonare modern nmulirea prin clonare este un mod natural de reproduce,poate cel mai rspndit, cci l ntlnim la toate fiinele procariote i la unele eucariote monocelulare. De asemenea toate celulele unui organism se nmulesc prin mitoze ce asigur o reproducere prin clonare. nmulirea prin clonare artificial se bazeaz pe transferul ntr-o celul ou din care a fost eliminat nucleul a unui nucleu provenit de la o celul somatic adult( somatic nuclear cell transfer sa SNCT)care are o garnitur cromozomial diploid Este uor de vzut c noua fiin nu poate fi o copie identic(la indigo)a fiinei de la care provine nucleul In primul rnd nucleul are un genom care a suferit unele mutaii inerente vieii pn la stadiul adult. Apoi celula ou dispune de mitocondrii care conin un material genetic diferit de cel al donatorului nucleului. Ideea identitii absolute dintre clon i donatorul genomului ei este un mit fr baz tiinific In realitate o fiin clonat provine dintr-un donor de citoplasm i unul de nucleu Clonarea se poate face cu dou scopuri. n clonarea terapeutic se obine un embrion care nc n starea de blastul este sacrificat pentru a se prelua celulele din care este format i care sunt celule stem ce pot fi apoi difereniate i folosite drept grefe pentru vindecarea unor boli cu determinare genetic .n clonarea reproductiv embrionul este lsat s se dezvolte pn ce devine o fiin adult

Principiul clonrii

Donorul genomului

6 S-a mai discutat despre o clonare de nlocuire care const n clonarea unui corp uman n care apoi se transpune creerul unui adult a crui corp era devastat de o afeciune grav. Unii au susinut doar transferarea acelor poriuni din creer care sunt implicate n memorie i conservarea identitii.sinelui Pn acum aceast clonare este doar o ficiune

Ambele tpuri de procreaie normal i prin clonare

Trebuie s specificm c pn n prezent nu s-a realizat nici un experiment de clonare uman reproductiv.E drept c au circulat tiri despre astfel de realizri care nu au fost ns niciodat confirmate. Ele au fost vehiculate n special de micarea realian a lui Claude Vorilhon (care susine c toate fiinele terestre sunt rezultatul unor inginerii genetice realizate de nite extrateretri) i de societatea de clonaj uman Clonaid a lui Brigitte Boisselier care s-au compromis prin mediatizri nedovedite

Un nou domeniu de aplicare a clonrii ar fi cel al reconstituirii speciilor disprute folosind ADN-ul din fosile .Acesta teoretic ar putea fi transplantat n celula ou a unui animal prezent. Clonarea reproductiv este unul din procedeele folosite de oamenii de tiin care a fost i este extrem de contestat. Creierea unei fiine umane prin procedee complet diferite de cele naturale a constituit o agresiune cultural fa de care societatea uman nu este pregtit s-i fac fa .De aceea este interzis n multe ri dintre care majoritatea sunt la un nalt nivel de dezvoltare Nici clonarea terapeutic n ciuda posibilitilor de vindecare a unor boli astzi incurabile pe care o ofer nu a scpat de interdicii culturale,mai ales din partea teologilor care consider utilizarea celulelor stem din embrion drept

Tatl

asasinarea unei fiine umane dei blastula este doar o grmad de cteva sute de celule stem(nedifereniate). De aceea acest procedeu este i el interzis n unele state ale lumii :E drept c poziia fa de clonarea terapeutic este mai tolerant dect cea fa de clonarea reproductiv