Cpia no autorizada

MAIO/1992

NBR 12614

ABNT-Associao Brasileira de Normas Tcnicas

Sede: Rio de Janeiro Av. Treze de Maio, 13 - 28 andar CEP 20003-900 - Caixa Postal 1680 Rio de Janeiro - RJ Tel.: PABX (21) 210-3122 Fax: (21) 220-1762/220-6436 EndereoTelegrfico: www.abnt.org.br

guas - Determinao da demanda bioqumica de oxignio (DBO) - Mtodo de incubao (20C, cinco dias)

Mtodo de ensaio Origem: Projeto 01:602.04-003/87 CEET - Comisso de Estudo Especial Temporria de Meio Ambiente CE-01:602..04 - Comisso de Estudo de Anlises Orgnicas NBR 12614 - Biochemical oxygen demand determination incubation method (20C, five days) - Method of test Descriptors: Water. Biochemical. Oxygen demand Palavras-chave: gua. Oxignio. DBO 5 pginas

Copyright 1992, ABNTAssociaoBrasileirade NormasTcnicas Printed in Brazil/ ImpressonoBrasil Todos os direitos reservados

SUMRIO
1 Objetivo 2 Documentos complementares 3 Definio 4 Aparelhagem 5 Execuo do ensaio 6 Resultados

NBR 11958 - guas - Determinao de oxignio dissolvido - Mtodo do eletrodo de membrana - Mtodo de ensaio

3 Definio
Para os efeitos desta Norma adotada a definio de 3.1. 3.1 Demanda bioqumica de oxignio (DBO) Quantidade de oxignio necessria para a oxidao biolgica e qumica das substncias oxidveis contidas na amostra, nas condies do ensaio.

1 Objetivo
Esta Norma prescreve o mtodo de determinao da demanda bioqumica de oxignio (DBO) em amostras de colees lquidas em geral, efluentes domsticos e industriais, lodos e gua de mar.

2 Documentos complementares
Na aplicao desta Norma necessrio consultar: NBR 9898 - Preservao e tcnicas de amostragem de efluentes lquidos e corpos receptores - Procedimento NBR 10357 - guas - Determinao da demanda qumica e oxignio (DQO) - Mtodos de refluxo aberto, refluxo fechado-titulomtrico e refluxo fechadocolorimtrico - Mtodo de ensaio NBR 10559 - guas - Determinao de oxignio dissolvido - Mtodo iodomtrico de Winkler e suas modificaes - Mtodo de ensaio NBR 10664 - guas - Determinao de resduos (slidos) - Mtodo gravimtrico - Mtodo de ensaio

4 Aparelhagem
Na aplicao deste mtodo utilizada a seguinte aparelhagem: a) incubadora a ar ou um banho de gua termostatizada (20 1)C, sem luz; b) frascos de DBO de vidro de borossilicato, boca estreita, volume 250 mL - 300 mL, tampa esmerilhada, com selo dgua; c) provetas de 1000 mL, com tampa; d) bquer de 500 mL, 1000 mL e 2000 mL; e) pipetas volumtricas, capacidades diversas; f) bales volumtricos, capacidades diversas.

Cpia no autorizada

NBR 12614/1992

5 Execuo do ensaio
5.1 Reagentes e solues
5.1.1 gua destilada

5.1.10 Inibidor de nitrificao 2-cloro-6 (triclorometil) piridina 5.1.11 gua de diluio sem semente

Contendo menos que 0,01 mg/L de cobre, isenta de cloro, cloraminas, alcalinidade de hidrxidos, matria orgnica e cidos.
Nota: Alternativamente, usar gua deionizada. 5.1.2 Soluo-tampo de fosfatos

Estocar a gua destilada a 20C no escuro, em recipiente de vidro com tampa de algodo, por 24 h, para satur-la de oxignio; no momento do uso, adicionar 1 mL de cada uma das solues-tampo de fosfatos (5.1.2), sulfato de magnsio (5.1.3), cloreto de clcio (5.1.4) e cloreto frrico (5.1.5) por litro de gua destilada. Estocar a (20 1)C. A gua de diluio sem semente no deve consumir mais que 0,2 mg O2/L num perodo de incubao de cinco dias.
Nota: Alternativamente, saturar de oxignio a gua destilada por aerao com ar comprimido limpo (pode-se usar bomba de ar do tipo da usada para aqurio). Aguardar aproximadamente 30 min para evitar o uso de gua supersaturada de oxignio. 5.1.12 gua de diluio com semente

Dissolver 8,5 g de fosfato monobsico de potssio p.a. (KH2PO4); 21,75 g de fosfato dibsico de potssio p.a. (K2HPO4); 33,4 de fosfato dibsico de sdio heptaidratado p.a. (Na2HPO4.7H2O); e 1,7 g de cloreto de amnio p.a. (NH4Cl) em 500 mL de gua destilada. Diluir a 1000 mL. O pH da soluo deve ser 7,2 sem ajuste.
5.1.3 Soluo de sulfato de magnsio

Dissolver 22,5 g de sulfato de magnsio heptaidratado p.a. (MgSO4.7H2O) em gua destilada e diluir a 1000 mL.
5.1.4 Soluo de cloreto de clcio

Preparar a gua de diluio conforme 5.1.11. No momento do uso, adicionar uma quantidade adequada de semente (5.1.13) gua de diluio, de modo que a DBO da gua de diluio com semente seja da ordem de 0,6 mg O2/L a 1,0 mg O2/L.
Nota: A quantidade de semente a ser adicionada gua de diluio pode ser determinada atravs de: P= Onde: A = demanda qumica de oxignio (DQO) da semente, mg O2/L, conforme NBR 10357 P = % de semente na gua de diluio V = volume da semente (mL) a acrescentar a 1 L de gua de diluio 5.1.13 Semente 60 ; V = 10 P A

Dissolver 27,5 g de cloreto de clcio p.a. (CaCl2), em gua destilada, e diluir a 1000 mL.
5.1.5 Soluo de cloreto frrico

Dissolver 0,25 g de cloreto frrico hexaidratado p.a. (FeCl3.6H2O), em gua destilada, e diluir a 1000 mL.
Nota: Desprezar as solues anteriormente mencionadas, assim que for observada qualquer alterao, especialmente sinais de desenvolvimento biolgico. 5.1.6 Soluo de hidrxido de sdio 1 N

Dissolver 40 g de hidrxido de sdio p.a. (NaOH), em gua destilada isenta de gs carbnico (CO2), e diluir a 1000 mL. Guardar em frasco de polietileno ou em frasco de vidro borossilicato com rolha de borracha.
5.1.7 Soluo de cido sulfrico 1 N

Diluir 28 mL de cido sulfrico concentrado p.a. (H2SO4) a 1000 mL, com gua destilada.
5.1.8 Soluo de sulfito de sdio 0,025 N

A finalidade da semente introduzir uma populao biolgica capaz de oxidar a matria orgnica biodegradvel da amostra. Na presena de microorganismos na amostra, como no caso de esgotos, gua de superfcie e alguns efluentes no-clorados, no preciso empregar semente. Na ausncia ou presena de pequenas quantidades de microorganismos na amostra, em virtude da temperatura elevada, altas diluies, condies extremas de pH e efluentes industriais no-tratados, preciso empregar semente.
Nota: A sememte deve ser testada quanto sua atividade com uma diluio a 2% da soluo de cido glutmicoglicose (5.1.9). Caso a DBO do teste no esteja entre (200 37)mg O2/L, rejeitar qualquer resultado analtico obtido com esta semente e gua de diluio. Verificar as causas. 5.1.13.1 O material de preferncia empregado como semente o efluente do sistema de tratamento biolgico da amostra a analisar, sem desinfeco. A semente deve ser aclimatada a 20C. Nota: Alternativamente, poder se obter semente da gua receptora, preferencialmente 3 km a 8 km a jusante do lanamento.

Dissolver 1,575 g de sulfito de sdio p.a. (Na2SO3) em 1000 mL de gua destilada. Preparar diariamente. (1 mL desta soluo elimina 0,5 mg de cloro residual.)
5.1.9 Soluo de cido glutmico-glicose

Secar aproximadamente 200 mg de glicose p.a. e 200 mg de cido glutmico p.a. em estufa a 103C por 1 h. Pesar 150 mg de glicose e 150 mg de cido glutmico, dissolver em gua destilada e diluir a 1000 mL. Preparar imediatamente antes do uso.
Nota: Esta soluo apresenta uma DBO terica de aproximadamente 200 mg O2/L.

Cpia no autorizada

NBR 12614/1992

5.1.13.2 Na impossibilidade de se utilizar o recomendado

em 5.1.13.1, usar esgoto domstico, decantado no mnimo por 1 h e no mximo por 36 h a 20C. A semente deve ser livre de partculas em suspenso. Se necessrio, filtrar em algodo.
Nota: Alternativamente, usar como semente uma suspenso de solo rico em material orgnico ou lodo ativado. 5.1.13.3 Quando o material orgnico presente na amostra no facilmente oxidvel pelos microorganismos do esgoto domstico, utilizar semente adaptvel em laboratrio, procedendo da seguinte forma:

deve ser feito a -20C no perodo mximo de 30 min, e a amostra dever ser acondicionada em vrios frascos, com volumes prximos daqueles que sero utilizados na anlise da DBO, pois descongelamentos sucessivos ocasionam queda no ttulo da semente. A semente conservada pelo processo de congelamento poder necessitar de reaclimatao atravs de aerao, podendo ser utilizada por um perodo mximo de seis meses. 5.2 Princpio do mtodo A demanda bioqumica de oxignio um teste emprico que corresponde diferena entre as concentraes de oxignio no incio e no fim do perodo de incubao, em condies especficas do ensaio. A temperatura de incubao padronizada em 20C e o tempo de incubao em cinco dias. Admite-se que nestas condies 80% da matria orgnica carbonada j estejam mineralizados e comeando a nitrificao. Uma oxidao total, em geral, leva cerca de 20 dias. 5.3 Interferentes
5.3.1 Substncias inorgnicas redutoras, como sulfeto e

a) colocar aproximadamente 10L de esgoto sanitrio bruto em cuba de vidro e fazer aerao com sistema de agitao mecnica durante cinco dias, mudando a cada dia 50% do volume do esgoto aerado, aps decantao de 1h. O lodo resultante desta operao encontra-se ativado. O pH do lquido equalizado situa-se entre 7,6 e 8,6; b) completados os cinco dias de aerao, deixar o lquido decantar e retirar todo o sobrenadante, permanecendo o lodo no fundo da cuba de aerao; c) completar o volume original com uma mistura de 70% de esgoto sanitrio bruto e 30% da amostra a analisar, a qual teve o seu pH ajustado para 7,0. Fazer aerao durante trs dias; d) aps este perodo, um tero do lquido equalizado esgotado e o restante deixado decantar por 1h. Retirar o lquido sobrenadante, permanecendo o lodo ativado no fundo da cuba. A unidade reintegrada ao volume original pela adio de uma mistura de 50% de esgoto sanitrio e 50% da amostra a analisar. Fazer aerao durante trs dias; e) esgotar novamente um tero do lquido equalizado e o restante decantar por 1h. Retirar o lquido sobrenadante, permanecendo o lodo ativado no fundo da cuba de aerao. Reintegrar ao volume original adicionando uma mistura de 30% de esgoto sanitrio bruto e 70% da amostra a analisar. Fazer aerao durante cinco dias; f) ao final deste perodo, a semente esta pronta para uso (lquido equalizado), normalmente possuindo as seguintes caractersticas: DQO - 60 mg O2/L a 150 mg O2/L DBO - 30 mg O2/L a 100 mg O2/L g) o exame biolgico deve indicar a presena de nmero considervel de protozorios (ciliados fixos); h) para conservar a semente, retirar de cinco em cinco dias um tero da semente aerada equalizada e recolocar na cuba um volume igual ao retirado de uma mistura de 70% da amostra a ser analisada (com ph ajustado para 7,0) e 30% de esgoto sanitrio bruto. A aerao dever ser contnua; i) outro processo de conservao da semente consiste no congelamento desta. Este congelamento

ferro ferroso, ocasionam erros positivos.

5.3.2 O pH da amostra interfere no comportamento dos

microorganismos, devendo permanecer entre 6,5 e 7,5.

5.3.3 Elevadas quantidades de algas ocasionam erros

positivos.
5.3.4 O cloro que interfere no desenvolvimento dos microorganismos da amostra deve ser eliminado atravs da adio de soluo de sulfito de sdio (5.1.8). 5.3.5 Amostras supersaturadas de oxignio contendo mais

de 9 mg O2/L a 20C podem apresentar perda de oxignio durante a incubao. Reduzir o teor de oxignio saturao pela agitao da amostra.
5.3.6 A presena de microorganismos capazes de oxidar a

matria nitrogenada, no perodo de cinco dias, aumenta o resultado final. Para evitar esta interferncia, adicionar 3,333mg do inibidor de nitrificao (5.1.10) a cada frasco de incubao.
Nota: Alternativamente, adicionar 10mg do inibidor de nitrificao (5.1.10) por litro de gua de diluio. 5.3.7 Interferem ainda outros fatores dificilmente contro-

lveis, tais como: a) durao da fase de crescimento dos micro-organismos; b) velocidade de utilizao do oxignio pelos interferentes; c) atividade e concentrao desconhecida dos microorganismos; d) presena de txicos. 5.4 Procedimento Existem variaes do mtodo, podendo-se adapt-lo aos diversos tipos de amostras, a saber:

Cpia no autorizada

NBR 12614/1992

a) mtodo A - incubao sem diluio, - aplica-se a guas superficiais pouco poludas, que contm microorganismos prprios e oxignio suficiente para que, aps cinco dias de incubao, ainda haja oxignio na amostra; b) mtodo B - incubao com diluio, - aplica-se a guas superficiais poludas, efluentes e guas residuais que tm microorganismos prprios, mas no oxignio suficiente para que, aps cinco dias de incubao, ainda haja oxignio dissolvido na amostra; c) mtodo C - incubao com diluio e semeadura, - aplica-se a guas residuais e efluentes que no possuem microorganismos prprios, nem oxignio na amostra; d) mtodo D - suspenso e incubao com diluio e semeadura, - aplica-se a lodos.
Nota: Coletar a amostra para determinao da DBO conforme NBR 9898. 5.4.1 Mtodo A - Incubao sem diluio 5.4.1.1 Ajustar o pH da amostra entre 6,5 e 7,5 e eliminar os

Onde: P1, P2, P3 e P4 = percentagem de amostra da primeira quarta proveta, respectivamente V1, V2, V3 e V4 = volume (mL) de amostra da primeira quarta proveta respectivamente 5.4.2.3 Transferir, por sifonao, a amostra diluda de ca-

da proveta para dois frascos de DBO, at transbordar. Tampar com cuidado sem deixar bolhas de ar no interior deles. Obtm-se ento duas sries iguais de diluies da amostra.
Nota: Alternativamente, preparar as diluies diretamente em frascos de DBO aferidos, efetuando a correo de volume no clculo final. DBO = (ODi - OD5)d Onde: ODi = oxignio dissolvido inicial em mg/L, determinado antes da incubao OD5 = oxignio dissolvido em mg/L, determinado aps cinco dias de incubao a 20C d= volume do frasco de DBO, em mL volume da amostra utilizado, em mL

5.4.2.4 Aps 15 min, determinar a concentrao de oxignio dissolvido, OD1, em uma das sries de frascos. 5.4.2.5 Incubar a outra srie de frasco por (120 2) h a 20C no escuro. Em seguida, determinar a concentrao de oxignio dissolvido, OD5. 5.4.2.6 Efetuar um controle da gua de diluio sem semente (5.1.11). Encher frascos de DBO e medir a concentrao de oxignio dissolvido de um deles e a do outro aps cinco dias de incubao. 5.4.3 Mtodo C - Incubao com diluio e semeadura 5.4.3.1 Proceder conforme 5.4.2.1 a 5.4.2.5, empregando gua de diluio, com semente (5.1.12). 5.4.3.2 Proceder com a semente conforme 5.4.2.2 a

interferentes, se necessrio, conforme 5.3.

5.4.1.2 Transferir por sifonao a amostra homogeneizada para dois frascos de DBO, at transbordar, e tampar com cuidado sem deixar bolhas de ar no interior deles. 5.4.1.3 Aps 15 min, determinar a concentrao de oxignio dissolvido OD i, em um dos frascos, conforme NBR 10559 ou NBR 11958. 5.4.1.4 Incubar o outro frasco por (120 2) h a 20C no

escuro. Em seguida, determinar a concentrao de oxignio dissolvido, OD5.

5.4.2 Mtodo B - Incubao com diluio 5.4.2.1 Ajustar o pH da amostra entre 6,5 e 7,5 e eliminar

5.4.2.5.
5.4.4 Mtodo D - Suspenso e incubao com diluio e semeadura 5.4.4.1 Preparar uma suspenso de quantidade conhecida de lodo mido, aproximadamente 20 g em 1 L de gua destilada. 5.4.4.2 Ajustar o pH da suspenso entre 6,5 e 7,5, se necessrio. 5.4.4.3 Proceder com a suspenso conforme 5.4.2.2 a 5.4.2.5, empregando gua de diluio, com semente (5.1.12). 5.4.4.4 Proceder com a semente conforme 5.4.2.2 a

os interferentes, se necessrio, conforme 5.3.

5.4.2.2 Preparar no mnimo quatro diluies adequadas da

amostra, em provetas de 1000 mL, enchendo-as parcialmente com gua de diluio sem semente (5.1.11). Acrescentar a cada proveta volume de amostra correspondente, para obterem-se as diluies. Completar a 1000 mL com gua de diluio (5.1.11), homogeneizando sem formao de bolhas de ar.
Nota: Sugesto prtica para determinao das diluies adequadas: 500 P3 = ; V3 = 10 P3 DQO da amostra P4 = 2 P3 ; V4 = 10 P4 P2 = P1 = P3 P2 P3 P4 ; V2 = 10 P2 ; V1 = 10 P1

5.4.2.5.
5.4.4.5 Determinar o teor de resduo total do lodo. Consultar NBR 10664.

Cpia no autorizada

NBR 12614/1992

6 Resultados
6.1 Expresso dos resultados
6.1.1 Mtodo A: A expresso do resultado da DBO :

= relao entre os percentuais de semente presente na amostra e na semente-controle, ou seja: f= % semente na amostra % semente-controle

mg O2/L = ODi - OD5 Onde: ODi = oxignio dissolvido inicial em mg/L, determinado antes da incubao OD5 = oxignio dissolvido em mg/L, determinado aps cinco dias de incubao a 20C
6.1.2 Mtodo B: A expresso do resultado da DBO para

Nota: Para obter o resultado final, observar nota de 6.1.2. 6.1.4 Mtodo D: A expresso do resultado da DBO para

cada diluio : mg O2/L = Onde: ODi = oxignio dissolvido inicial da amostra em mg/L, determinado antes da incubao OD5 = oxignio dissolvido da amostra em mg/L, determinado aps cinco dias de incubao a 20C ODis = oxignio dissolvido inicial da semente em mg/L, obtido atravs de diluies adequadas e medido separadamente para controle OD5s = oxignio dissolvido da semente em m g/L, aps cinco dias de incubao a 20C, obtido atravs de diluies adequadas e medido separadamente para controle p = frao volumtrica da amostra usada para realizar as diluies = relao entre os percentuais de semente presente na amostra e na semente-controle, ou seja: f= Q % semente na amostra % semente-controle (ODi - OD5) - (ODis - OD5s) f p.Q.T

cada diluio : mg O2/L = Onde: ODi = oxignio dissolvido inicial em mg/L, determinado antes da incubao OD5 = oxignio dissolvido em mg/L, determinado aps cinco dias de incubao a 20C
Nota: Escolher, para clculo do resultado da DBO, aquela diluio ou a mdia das diluies que apresentarem um consumo de 40% a 70% da quantidade inicial de oxignio. As diluies escolhidas devem apresentar no mnimo 1 mg/L de oxignio dissolvido aps cinco dias de incubao, e o consumo mnimo de oxignio deve ser superior a 2 mg/L. Para determinar a percentagem de OD consumido, empregar a seguinte frmula: % O2 consumido = (ODi - OD5) 100 ODi

(ODi - OD5) 100 % amostra

6.1.3 Mtodo C: A expresso do resultado da DBO para

= quantidade de lodo mido com que foi preparada a suspenso, em g/L = teor de slidos do lodo, em g/g

cada diluio : mg O2/L = Onde: ODi = oxignio dissolvido inicial da amostra em mg/L, determinado antes da incubao OD5 = oxignio dissolvido da amostra em mg/L, determinado aps cinco dias de incubao a 20C ODi = oxignio dissolvido inicial da semente em mg/L, obtido atravs de diluies adequadas e medido separadamente para controle OD5s = oxignio dissolvido da semente em mg/L, aps cinco dias de incubao a 20C, obtido atravs de diluies adequadas e medido separadamente para controle p = frao volumtrica da amostra usada para realizar as diluies (ODi - OD5) - (ODis - OD5s) f p T

Nota: O resultado expresso na base seca.

6.2 Preciso e exatido

6.2.1 No existe, at a presente data, padro para se de-

terminar a exatido do teste de DBO.

6.2.2 Conforme o Standard Methods of the Examination of Water and Wastewater, 16 edio, num estudo interlaboratorial envolvendo de 86 a 102 laboratrios, foi analisada DBOs em amostras sintticas preparadas atravs de uma mistura de 1:1 de cido glutmico com glicose (5.1.9), numa concentrao que varia de 5 mg/L a 340 mg/L. A equao da regresso para mdia X e para o desvio-padro s foi:

X = 0,665 (quantidade de padro acondicionado - 0,149) s = 0,120 (quantidade de padro adicionado + 1,04) P ara um a m istura de padro prim rio de 300 m g/L, a m dia de D B O s foi 199,4 m g/L com desvio-padro de 37,0 m g/L.