IMPLICAIILE INFLAMAIEI I STRESULUI OXIDATIV N DIABETUL ZAHARAT B. Vrgolici, V.

Rdoi Studii recente demonstreaz c markerii de inflamaie anticipeaz sau/i sunt asociai cu diabetul zaharat de tip 2. Principalul mecanism prin care semnalul inflamator duce la rezistena la insulin este inhibarea semnalizrii n aval a receptorului insulinic. Se tie c, n condiii fiziologice, insulina afecteaz celulele prin legarea la receptorul ei de pe suprafaa celulelor. Receptorul insulinic se autofosforileaz, procesul de fosforilare cuprinznd i membrii ai familiei substratului receptorului insulinic (IRS), iniiind astfel o serie de evenimente de semnalizare n aval. Expunerea celulelor la TNF- sau la concentraii crescute de acizi grai liberi conduce la inhibarea fosforilrii reziduurilor de tirozin din structura IRS-1, inhibnd aciunea insulinei. 1.Cascada kinazelor serin-threonin (JNK, IKK, PKC) Recent, s-a demonstrat c activarea cilor de semnalizare ale inflamaiei este realizat att de stresuri metabolice cu origine din interiorul celulelor, ct i de molecule extracelulare semnal (citokine). De exemplu, obezitatea suprasolicit capacitatea funcional a reticulului endoplasmic (RE) din adipocite, deoarece esutul adipos este supus unor schimbri puternice ale arhitecturii, creterii sintezei de proteine i lipide precum i unor perturbri n fluxul intracelular al nutrienilor i al energiei. Att n celulele de cultur ct i la animale, stresul RE duce la activarea cii JNK (c-Jun NH2terminal kinaz). JNK a fost identificat iniial ca o kinaz ce fosforileaz proteina cJun. cJun plus cFos formeaz factorul de transcriere AP1. Proteinele JNK sunt implicate n

apoptoz i diferenierea limfocitelor T. JNK activat se asociaz i fosforileaz substratul receptorului insulinic IRS-1 pe un rest de serin (Ser307) i nu pe restul fiziologic de tirozin, mpiedicnd astfel aciunea insulinei. La obezi, activitatea JNK este crescut n ficat. Pierderea JNK-1 previne dezvoltarea rezistenei la insulin i a diabetului att la modelul genetic ct i la modelul oriceilor devenii obezi prin diet. n plus, o mutaie a JNK-interacting protein-1 (JIP1), protein care leag JNK i i regleaz activitatea, a fost identificat diabetici. Alturi de JNK, exist i alte dou kinaze inflamatorii, IKK i PKC, care joac un rol important n contracararea aciunii insulinei, n particular, ca rspuns la metaboliii lipidici. S-a demonstrat c perfuzia cu lipide conduce la o cretere a metaboliilor intracelulari ai acizilor grai cum ar fi diacilglicerol (DAG) i acil CoA. Aceast cretere este corelat cu activarea PKC i creterea fosforilrii IRS-1 la serina din poziia 307. PKC (prin izoforma) poate bloca aciunea insulinei prin activarea unei alte kinaze serin/threonin, i anume, IKK (IkB kinaza). IKK poate avea un impact asupra sensibilitii la insulin prin cel puin dou ci. Prima, const n fosforilarea direct a IRS1 pe reziduurile de serin. A doua cale const n fosforilarea inhibitorului NF-kB (IkB), activnd astfel NF-kB, factor de transcriere care, pe lng alte inte, stimuleaz producerea a multiplii mediatori ai inflamaiei, incluznd TNF- i IL-6. oriceii heterozigoi pentru IKK sunt protejai parial fa de rezistena la insulin indus de perfuzia cu lipide, de dieta bogat n grsimi sau de obezitatea genetic. Mai mult, inhibarea IKK n diabetul uman printr-un tratament cu aspirin n doz mare mbuntete sensibilitatea la

insulin, dei la acest doz, nu este clar dac i alte kinaze sunt de asemenea afectate. 2. Calea SOCS(suppressor of cytokine signaling) Proteinele intracelulare SOCS1, SOCS3, SOCS6 au fost implicate n inhibarea sensibilitii la insulin, mediat de citokine. Aceste molecule par s inhibe sensibilitatea la insulin prin intirea IRS1 i IRS2 pentru degradare proteozomal. SOCS3 regleaz aciunea leptin central. Reducerea expresiei SOCS3 n tot corpul (inclusiv la nivel neuronal) determin rezisten la obezitatea indus printr-o diet bogat n grsimi i reducerea rezistenei la insulin. 3.stresul oxidativ n prezent nu se tie dac stresul oxidativ determin diabetul zaharat, dar diabetul este nsoit de stres oxidativ. Semnificaia stresului oxidativ n patologia diabetului zaharat este echivoc, dar cu probabilitate mare, stresul oxidativ contribuie la: accelerarea ateroclerozei, la formarea cataractei, la leziunile renale, la retinopatie i neuropatie. F2izoprostanii au fost propui recent ca markeri de stres oxidativ ( markeri ai peroxidrii lipidice) la diabetici. Ei constau dintr-o serie de compui tip prostaglandin F2, formai n timpul peroxidrii acidului arahidonic printr-un mecanism independent de calea ciclooxigenazei. Concentraia plasmatic a unuia dintre ei, 8- epi PGF2- este crescut la subiecii cu diabet non-insulino dependent. Un proces intens de peroxidare lipidic poate fi observat n stadiile timpurii ale diabetului zaharat. De obicei, sindromul metabolic precede diabetul zaharat i este asociat cu obezitatea abdominal. n stadiul de prediabet F2-izoprostanii au deja valori plasmatice mari i speciile reactive ale oxigenului pot contribui la rezistena la insulin. Obezitatea abdominal (factor de risc n diabetul

zaharat) este asociat, de asemenea, cu concentraii crescute de F2-izoprostanii, deoarece esutul adipos abdominal i hepatocitele din ficatul gras elibereaz citokine care determin un status inflamator. Glucoza avnd concentraii crescute plasmatice, la diabetici, se leag la componenta proteic (apoB) a LDL sau modific structura lipidelor din LDL, favoriznd oxidarea acestor lipoproteine. Stresul oxidativ contribuie via LDL oxidate i prin interacia produilor de glicare avansat (AGE) cu receptorii si (RAGE), la accelerarea progresiunii aterosclerozei la diabetici. De exemplu, expunerea celulelor endoteliale la AGE, activeaz NF-kB, crete sinteza moleculei de adeziune VCAM-1, a factorului tisular procoagulant, a endotelinului (vasoconstictor) i scade concentraia GSH. Aceste modificri sunt adiionale celor produse n mod direct de hiperglicemie asupra celulelor endoteliale. Receptorii RAGE sunt exprimai n leziunile ateroslerotice, n special la diabetici i sunt implicai n migrarea i activarea monocitelor ca rspuns la AGE. RAGE asigur macrofagelor capacitatea de a recunote i prelua eritrocitele modificate prin glicare. La RAGE se leag i ali liganzi, precum -amiloidul i proteine proinflamatorii eliberate din celule necrotice. Speciile reactive ale oxigenului i azotului, n diabetul zaharat, sunt reprezentate de: -apa oxigenat (H2O2), format prin oxidare peroxizomal n condiiile

hiperlipidemiei i dislipidemiei; -anionul superoxid (O2.-)format n mitocondrii, n urma inhibrii complexului III din lanul respirator de ctre excesul de NADH format n condiiile excesului de substrate (glucoz i acizi grai) metabolizate; formarea anionului superoxid la nivel mitocondrial,

n condiiile unei hiperglicemii cronice, poate fi datorat i glicrii proteinelor din lanul respirator, cu funcionarea defectuoas a acestuia -anionul superoxid, apa oxigenat i radicalul hidroxil (HO.) produse de autooxidarea glucozei i de ctre produi de glicare avansat (AGE) -monoxidul de azot (NO) i anionul superoxid care vor forma peroxinitritul (ONOO-); hiperglicemia determin activarea NF-kB, care va crete expresia NADPH oxidazei (responsabil de formarea O2.-) i a nitricoxid sintazei inductibile (responsabil de formarea NO) Disfuncia endotelial din diabetul zaharat poate fi pus pe seama -inactivrii enzimei NOS endoteliale (eNOS) i prostaciclin sintazei endoteliale; studiile experimentale au demonstrat o scdere a activitii eNOS cu 65% i a activitii prostaciclin sintazei cu 95% n aorta animalelor diabetice; -scderii disponibilitii NO prin consumul acestuia n reacia cu anionul superoxid, cu reducerea eficacitii relaxrii vasculare i implicit perturbarea homeostaziei tonusului vascular; mai mult, NOS endotelial, n condiii de hiperglicemie va sintetetiza anion superoxid n loc de NO -peroxinitritul rezultat n urma combinrii NO cu O2.- este o specie radicalic foarte agresiv, ce lezeaz endoteliul vascular n diabetul zaharat la sinteza crescut de specii reactive se adaug o aprare antioxidant redus, demonstrat de: -valorile sczute ale glutationului i vitaminei C n snge i esuturi;

-capacitatea sczut a tioredoxinei de a capta speciile reactive ale oxigenului, deoarece n condiii de hiperglicemie crete concentraia proteinei inhibitoare, ce interacioneaz cu tioredoxina; -activitatea sczut a enzimelor antioxidante modificate prin glicare Metalele tranziionale catalizeaz formarea SRO, iar disponibilitatea acestora crete n diabetul zaharat. Ionii de cupru, prooxidani, pot fi eliberai n urma fragmentrii superoxid-dismutazei i ceruloplasminei modificate prin glicare. Stresul oxidativ i inflamaia coexist n procesele patologice i se poteneaz reciproc. De exemplu, leziunile oxidative de la nivel endotelial, n esutul adipos, pot atrage celule inflamatoare cum ar fi macrofagele, exacerbnd astfel inflamaia local. Hiperglicemia stimuleaz, de asemenea, producerea ROS n adipocite, ceea ce duce la creterea produciei citokinelor proinflamatorii. 4. Alte ci Stimularea citokinelor inflamatorii induce activarea iNOS. Supraproducia de monoxid de azot pare s contribuie la scderea aciunii insulinei n celulele musculare i la scderea funciei celulelor pancreatice, la obezi. Scderea iNOS previne afectarea sensibilitii la insulin n muchi cauzat de o diet bogat n grsimi. Totui, chiar i n absena obezitii, administrarea prin perfuzie de citokine inflamatorii sau lipide, la animale, poate produce rezisten la insulin. n plus, oamenii cu o alt condiie cronic inflamatorie sunt predispui riscului de a face diabet; de exemplu, aproape o treime din pacienii cu hepatit cronic C dezvolt diabet de tip 2, i concentraii ridicate de TNF- sunt implicate n aceast relaie. Artrita reumatoid predispune de asemenea la diabet i n particular la boli cardivasculare, i exist dovezi

ce indic o legtur ntre boala inflamatorie a plamnului i riscul crescut pentru boal cardiovascular i diabet. n final, scderea mediatorilor inflamaiei sau componente ale cii, cum ar fi TNF-, JNK i IKK, protejeaz mpotriva rezistenei la insulin la oriceii obezi. Tratamentele ce intesc aceste ci, cum ar fi salicilaii, mbuntesc sensibilitatea la insulin, la om. Astfel, datele disponibile sugereaz cu trie c diabetul de tip 2 este o boal inflamatorie i c inflamaia este o cauz a: rezistenei la insulin corelat cu obezitatea, a hiperglicemiei i a hiperlipidemiei.

Modificri genetice, inflamaia i diabetul zaharat Cteva studii au raportat asocieri intre diabet i polimorfisme ale promotorilor pentru TNF- i IL-6. Cel mai acceptat polimorfism asociat cu diabetul tip 2 este cel al genei ce codific PPAR. PPARs (peroxisome proliferator-activated receptors) sunt proteine receptor nucleare care funcioneaz ca factori de transcriere, ce regleaz expresia unor gene. PPAR are activitate antiinflamatorie, suprimnd sinteza de TNF-.

Activarea PPAR inhib genele ce controleaz inflamaia n macrofage i adipocite n mare parte datorit supresiei NF-kB. inte antiinflamatorii terapeutice Liganzi sintetici au fost produi pentru toate cele 3 izoforme PPAR ca i pentru LXR-, dei numai liganzii pentru PPAR i PPAR au fost aprobai pentru tratamentul clinic. Tiazolidindionele, liganzi cu afinitate mare pentru PPAR, care sunt administrai clinic ca ageni de sensibilizare a insulinei, mbuntesc aciunea insulei prin mecanisme multiple, incluznd att activarea metabolismului lipidic ct i reducerea produciei de mediatori ai inflamaiei cum ar fi TNF-. Liganzii sintetici ai PPAR, fibraii, sunt

folosii pentru a trata hiperlipidemia. Aceste medicamente par s actioneze predominant prin stimularea oxidrii acizilor grai, dei au Este posibil ca descoperirea inhibitoriilor individuali ai mediatorilor inflamaiei s nu fie o strategie foarte eficient pentru inhibarea inflamaiei i implicit pentru tratarea rezistenei la insulin i a diabetului, deoarece componeni redundani pot fi capabili s continue s propage calea inflamatorie. De exemplu, intirea citokinelor inflamatorii individuale nu este foarte eficient, pe cnd intirea kinazelor inflamatorii JNK i IKK genereaz o aciune antidiabetic puternic deoarece aceti factori integreaz semnale ai multiplilor mediatori ai inflamaiei. Pe de alt parte, dac la un proces important, mediatorul poate fi identificat, acesta ar fi o int mult mai atractiv. Calea stresului la nivelul RE ar putea fi un astfel de proces central, deoarece aceast cale este capabil s activeze att JNK ct i IKK; astfel, administrarea de chaperoni cu efect inhibitor pe rspunsul celular la stresul RE ar putea s dezactiveze ambele ci ale inflamaiei, salvnd astfel aciunea insulinei. S-a demonstrat, recent, c oriceii la care chaperonul ORP150 este supraexprimat transgenic sau adenoviral prezint o reducere a stresului RE i o toleran a insulinei mbuntit comparativ cu grupul de control, pe cnd reducerea expresiei acestei molecule n ficat duce la creterea stresului RE i a rezistenei la insulin. Fraza de final...................................

LEGENDA LA Nk-kB Dimerul NF-kB este meninut n citoplasm sub form inactiv de ctre proteina IkB. n prezena unui semnal extracelular care poate fi reprezentat de citokine, fosforilarea proteinei IkB de ctre IKK determin eliberarea dimerului ce coincide cu activarea NF-kB. Factorul de transcriere activat va favoriza transcrierea unor gene proinflamatorii.