DETERMINACIN DEL HEMATOCRITO, HEMOGLOBINA E NDICES ERITROCITARIOS

Objetivos
Objetivo General
Determinar los distintos valores de los ndices eritrocitarios que se obtendrn utilizando los diferentes valores obtenidos en el laboratorio tales como ser los valores de hematocrito, hemoglobina y recuento de eritrocitos.

Objetivos Especficos
Conocer el significado de los distintos ndices eritrocitarios y relacionar con la importancia que presentan estos. Saber la importancia que radica en el valor diagnostico que se obtendr por el valor de los ndices eritrocitarios. Aprender a realizar los clculos que se necesiten para determinar los distintos valores. Reportar e interpretar los resultados obtenidos segn el clculo que se realice. Identificar los principales problemas que se pueden presentar cuando los valores de los ndices no se encuentran entre los parmetros normales.

Marco Terico
Los ndices eritrocitarios llamados secundarios son los que relacionan el hematocrito con el numero de hemates y la concentracin de hemoglobina, denominados a su vez ndices eritrocitarios primarios. Son fundamentalmente tres: a) b) c) El volumen corpuscular medio (VCM) La hemoglobina corpuscular media ( HCM) Concentracin corpuscular media de hemoglobina (CCHM)

Su determinacin es muy til en la valoracin y orientacin diagnostica de las anemias y pueden calcularse a partir de los tres ndices eritrocitarios primarios citados anteriormente. En la actualidad la mayora de auto analizadores que se emplean en hematologa suministran todos los ndices eritrocitarios de forma sistemtica.

Volumen corpuscular medio

El volumen corpuscular medio es un parmetro usado en el estudio de la sangre (Biometra Hemtica). Es la media del volumen individual de los eritrocitos (glbulos rojos).1 El volumen corpuscular medio es calculado de la siguiente manera:

VCM = (Hct / RBC) * 10, donde Hct es el hematocrito, en porcentaje y RBC es el conteo de eritrocitos, expresado en millones de clulas por microlitro. Los rangos normales de VCM para varones es de 87+7 fL (fentolitros) y en mujeres de 90+9 fL. De acuerdo al valor en el que se encuentre este parmetro, se desprenden dos conceptos; microctico y macroctico (micro=pequeo, macro=grande, ctico=clula). Para un hombre o mujer con un volumen corpuscular medio de 120 es considerado macroctico, mientras que un VCM de 98 se considera macroctico slo para hombres. Un paciente con una variacin muy grande en el tamao de sus eritrocitos, se dice que tiene anisocitosis (an=falta de, iso=igual, cito=clula, osis=condicin de), en otras palabras clulas desiguales. Este parmetro es calculado por los instrumentos automatizados de biometra hemtica, los cuales caracterizan, cuentan y miden el tamao de las clulas sangunes utilizando, en su mayora el Mtodo Coulter.

Hemoglobina corpuscular media

La hemoglobina corpuscular media, o hemoglobina celular media (HCM), es una medida de la masa de la hemoglobina contenida en un glbulo rojo. Es reportada como parte de un conteo completo de sangre estndar. Est disminuida en anemias microcticas, y aumentada en anemias macrocticas. Es calculada dividiendo la masa total de la hemoglobina por la cuenta de RBC. HCM = (Hgb * 10) / RBC Un valor normal en seres humanos es de 26.3 a 33.8 picogramos/clula.

Concentracin corpuscular media de Hemoglobina

La CCMH corresponde a la concentracin de hemoglobina en 1 decilitro de hemates y se calcula a partir de la concentracin de hemoglobina por litro (L) en sangre y del valor hematocrito.

Valores normales de ndices eritrocitarios

Anemia

Frote de sangre en un paciente con anemia por deficiencia de hierro. Los (eritrocitos) estn plidos por falta de hemoglobina y tienen variado tamao y forma. Tambin se observa un glbulo blanco (la clula ms grande y con ncleo) y 3 plaquetas (pequeas de color morado). La anemia es una enfermedad hemtica (sangunea) que es debida a una alteracin de la composicin sangunea, determinada por una disminucin de la masa eritrocitaria que condiciona una concentracin baja de hemoglobina (ver los parmetros estndares). Rara vez se registra en forma independiente una deficiencia de uno solo de estos factores. La anemia es una definicin de laboratorio que entraa un recuento bajo de eritrocitos (vase hematocrito) y un nivel de hemoglobina menor de lo normal.

Valores normales
Los rangos de normalidad son muy variables en cada poblacin, dependiendo de factores ambientales (nivel sobre el mar) y geogrficas. A nivel del mar encontraremos valores normales mnimos, y a gran altura los valores normales debern ser ms altos (la menor presin parcial de oxgeno (O2) obliga al

organismo a optimizar su transporte). Adems, hay variaciones de sexo, observando valores menores en las mujeres (posiblemente por la prdida de eritrocitos y contenido sanguneo en cada ciclo menstrual).

Sexo

Nmero de Eritrocitos Hematocrito Hemoglobina

Hombres 4,2-5,4 x 106/mm3

42-52 %

13-17 g/dl

Mujeres

3,6-5,0 x 106/mm3

36-48 %

1216 g/dl

MCV:

80-100 fl.

MCHC:

31-37 g/dl.

MCH:

27-31 pg/clula.

RDW:

11,5-14,5

En general, se establece como normal para un varn un hematocrito entre 42% y 52%, hemoglobina entre 13 y 17 g/dl, y para una mujer: hematocrito entre 36% y 48%, y hemoglobina entre 12 y 16 g/dl. Estos niveles son algo arbitrarios, pues existen lmites en los valores normales. Por ejemplo, un sujeto puede tener una disminucin de 1 a 2 g/dl en su hemoglobina, y aun as estar dentro de los lmites normales.

Expresin clnica
Los sntomas y signos de la anemia se correlacionan con su intensidad, su rapidez de instalacin y el sitio donde se produce. Otros factores influyentes en el cuadro sintomtico son la edad, el estado nutritivo, cardiovascular y respiratorio. Los sntomas que se observan en la anemia aguda se denominan sndrome anmico, e incluyen: debilidad (astenia), palpitaciones y falta de aire (disnea) con el esfuerzo. Frecuentemente y sobre todo en las anemias severas se observa esplenomegalia, hepatomegalia, petequias, equimosis, y/o ictericia. Tambin puede incluir sntomas propios de otros sistemas, como cardiovascular (taquicardia, disnea de esfuerzo marcada, angor, claudicacin intermitente), digestivo (dispepsia, disfagia, anorexia, diarrea) o neuropsiquitrico , depresin, cambios de carcter como irritabilidad. En la prdida sbita de sangre (hemorragia aguda) y en particular si es voluminosa (aprox. 2 L o 40% del volumen sanguneo), predominan los sntomas de inestabilidad vascular por hipotensin, contraccin vascular, aparecen los signos del shock

hipovolmico, tales como confusin, respiracin de Kussmaul, sudoracin, y taquicardia.

Diagnstico
Es fcil diagnosticar un estado de anemia, pero la labor mdica debe orientarse a caracterizarla, para as establecer su causa (etiologa). Para ello se deben estudiar a fondo las caractersticas de los glbulos rojos, de los reticulocitos, leucocitos y plaquetas que circulan en la sangre mediante un hemograma o citometra hemtica, verificando el hematocrito, y las caractersticas de las series hematopoyticas mediante un mielograma. Generalmente salen moretones en la cadera, tambin conocida como peltre.

Sntomas
La anemia afecta si el paciente no presenta suficiente hemoglobina o eritrocitos por litro de sangre. Desde los sntomas tempranos de la anemia, es suave, es fcil confundir los sntomas de la anemia desde sntomas de una cierta enfermedad seria. Los sntomas importantes de la anemia incluyen: palpitacin de corazn, fatiga, vrtigos, prdida de concentracin, respiracin rpida del corazn y piel plida. La falta de nimo y la depresin podan tambin ser un sntoma importante de la anemia. El pulso del dolor de cabeza, de la irritabilidad, del sncope y de limitacin son tambin sntomas de la anemia. Las muestras observables de la anemia son: taquicardia, edema perifrico suave, murmur sistlico de la eyeccin y ronquidos venosos. Los pectoris de la angina entre la gente mayor son una muestra clara de la anemia. Las mujeres tienden para desarrollar la menstruacin y el amenorrea anormales si la anemia los afecta mientras que los varones desarrollan impotencia y disminuyen la libido. La anemia podra o ser el resultado de un desorden heredado o podra resultar debido a su ambiente, tal como infeccin o exposicin a una toxina o a una droga.

Clasificacin
Anemia

ndice de produccin de

ndice de produccin

reticulocitos inadecuada respuesta productora a la anemia.

reticulocitos con respuesta adecuada productora = hemolisis o prdida de sangre sin problemas en la produccin de reticulocitos.

Sin hallazgos clnicos de hemolisis o prdida de sangre: Alteracin de la produccin.

Hallazgos clnicos y MVC anormal: Hemolisis o prdida y alteracin crnica de la produccin*.

Hallazgos clnicos y MVC normal: Hemolisis aguda o prdida sin tiempo para compensar por la mdula sea**.

Anemia macroctica (VCM>100)

Anemia normoctica (80<VCM<100)

Anemia microctica (VCM<80)

Anemia Drepanoctica: Los glbulos rojos adoptan forma de hoz en estados de bajo oxgeno (hipoxia) debido a una alteracin en la hemoglobina (HbS) y de su membrana; aumentando su fragilidad y subsecuente destruccin intravascular. La clasificacin fisiopatolgica est basada en el mecanismo que conlleva al estado de anemia, diferencindolas en:

Anemias mediadas por trastornos en la produccin de glbulos rojos

o o o o

Endocrinopatas Proceso inflamatorio crnico Fallo renal crnico Anemia aplsica

Eritropoyesis inefectiva:
o

Defecto en la sntesis de cidos nucleicos: deficiencia de cido flico y cobalamina (anemia con macrocitosis: los reticulocitos no se dividen y de ah el aumento de tamao de los eritrocitos). Defecto en la sntesis del grupo hemo: anemia microctica por dficit de hierro y anemia sideroblstica Defecto en la sntesis de las globinas: talasemia beta y anemia drepanoctica

Anemias por prdida de sangre

o o

Prdidas agudas (repentinas) Prdidas crnicas (hemofilias, lesiones gastrointestinales, trastornos de la menstruacin, etc.)

Anemias hemolticas
o o o o o o o

Talasemia alfa Anemia drepanoctica o de clulas falciformes Esferocitosis hereditaria Anemia por dficit de la enzima G6FD Anemia por hemoglobinopatas Anemia por infecciones (paludismo) Anemia por agresiones mecnicas (anemia microangioptica, coagulacin intravascular diseminada, prpuras trombocitopnicas, etc.) Anemias autoinmunes (anemia perniciosa, anemia paroxstica nocturna, anemia inmunohemoltica)

Parte Experimental
Determinacin de hemoglobina Materiales, reactivo y equipos
Tubos capilares de vidrio

 Cera o plastilina. Microcentrifuga Abaco o regla Muestra: sangre con EDTA Algodn Alcohol MUESTRA Sangre con anticoagulante o sangre tomada por puncin cutnea en capilar heparinizado (2 UI).

Procedimiento
I.- Mezclar la muestra por inversin (20 veces). 2.- Llenar por capilaridad el tubo hasta los 2/3 a 3/4, mnimo 2 capilares por paciente. 3.- Sellar un extremo con plastilina. 4.- Colocar los tubos en la centrfuga con el extremo sellado hacia fuera 5.- Centrifugar 5 minutos a 10 g. (aproximadamente 12.000 r.p.m.) 6.- En hematocritos superiores a 60 % se debe centrifugar por 5 minutos ms para disminuir el plasma atrapado.

LECTURA Si se usa la escala de l e c t u r a (Abaco): se enrasa a 0 con la base de la columna (l mi te con la p l as t i l i n a ) ya 100 con el tope de la muestra (plasma). Se lee el nivel superior de los eritrocitos, no se debe i n c l u i r la capa leuco plaquetaria.

Con la regla recta primero se debe enrasar el capilar a nivel 0 con el lmite de la plastilina y con una line recta se pone al 100 con el final de la muestra y se lea dnde termina la capa eritrocitaria.

Recuento de eritrocitos

Material, reactivos y equipos.

Liquido de dilucin para glbulos rojos solucin de Hayem Pipetas dilutoras o para glbulos rojos Cmara de Neubauer Porta Objetos Gradillas Tubos de hemolisis Micropipetas de 20 ul y 400 ul Pipetas gasa Microscopio

Procedimiento
En tubo:

Depositar 3.980 ul de solucin fisiolgica en un tubo de ensayo. Absorber 20 microlitros de la muestra. Limpiar la superficie externa de la puntilla y depositar en la solucin de tal manera que quede completamente limpia. Dilucin 1/200. 1. Cargar la cmara con la mezcla, cuando se emplea pipeta dilutora desechar las tres primeras gotas, cuando se emplea dilucin en tubo, mezclar muy bien para el cargado. 2. Dejar sedimentar 2 a 3 minutos. 3. Leer en microscopio con objetivo de 10 X se efecta el recuento en los cuadrados grandes de las cuatro esquinas (1 mm2 cada uno) se incluyen las clulas que estn dentro de estos y las que estn en contacto con la primera lnea.

Determinacin de hemoglobina Materiales, reactivo y equipos

o o Equipo: Espectrofotmetro o foto colormetro. Material: Micro pipeta de 20 microlitros

tips Tubos de ensayo Gradillas para tubos Pipetas volumtricas de 10 ml Pro pipetas Algodn Alcohol Papel secante Reloj parafilm o Reactivos: Solucin de Drabkin modificada y estndar de hemoglobina. o MUESTRA .-Sangre venosa o capilar con anticoagulante

Procedimiento
Colocar 5 ml de la solucin de Drabkin en un tubo de 10ml Mezclar bien la muestra (por inversin suave sin formar espuma) Tomar 0.02 ml (20 microlitros) de la muestra, limpiar la parte externa de la pipeta.

 Expulsar suavemente la muestra en la solucin Mezclar bien por inversin varias veces (o en vortex) esperar segn tiempo de Drankin. Leer a 540 nm o con filtro amarillo-verde. Una vez obtenidos los tres resultados realizamos los clculos correspondientes con la ayuda de las frmulas y analizamos cada caso.

Resultados
Volumen Corpuscular medio

Se tiene una moderada microcitosis Hemoglobina corpuscular media

Se observa una leve hipocroma Concentracin corpuscular de hemoglobina media

Se encuentra dentro de los parmetros normales. El paciente se encontrara con una anemia microcitica hipocrmica.

Esta es la patologa ms frecuente del mundo. Los siguientes datos son para que se hagan una idea de su importancia:
El 50% de las embarazadas tienen dficit de Fe El 20% de las mujeres en edad frtil tienen dficit de Fe Un 10-15% de los nios tienen un dficit de Fe

Conclusiones
Se realiz los clculos de ndices eritrocitarios con los datos obtenidos de la determinacin de la concentracin de hemoglobina, hematocrito y recuento de eritrocitos segn las formulas indicadas analizando y determinando los resultados segn las diferentes patologas. Estas pruebas son muy importantes en un anlisis especialmente para el rea de hematologa y conocer estas es fundamental.

Cuestionario
1. De qu factores depende una hemoglobina alta o baja. Hemoglobina alta La hemoglobina alta es normalmente debido a un aumento del nmero o anormalidad de los glbulos rojos. Las causas incluyen: Vivir en una gran altura Fumar Enfermedad cardaca congnita El incumplimiento de la parte derecha de su corazn (cor pulmonale) Cicatrices y engrosamiento del tejido pulmonar (fibrosis pulmonar) Un raro trastorno de la mdula sea (policitemia vera) La deshidratacin, como de la diarrea severa o sudoracin excesiva La enfermedad renal El uso de esteroides anabolizantes Hemoglobina Baja
Los niveles de hemoglobina por debajo de los niveles normales pueden deberse a:

- Anemia (diversos tipos) - Sangrado - Deficiencia de eritropoyetina (por enfermedad renal, por ejemplo) - Intoxicacin con plomo - Desnutricin - Deficiencias nutricionales de hierro, folato, vitamina B12 y vitamina B6 - Sobrehidratacin - Destruccin de los glbulos rojos asociada con una reaccin a transfusin

2. Qu puede provocar en la muestra un anticoagulante lquido en exceso qu y cmo influye en la determinacin de hematocrito? Empleo de una relacin sangre/anticoagulante incorrecta. El exceso de EDTA en relacin a la cantidad de sangre produce un falso descenso del hematcrito por retraccin de los hemates. La falta de suficiente anticoagulante puede producir una coagulacin parcial. 3. Cundo hay retraso en la lectura del hematocrito con formacin de pico de flauta que acciones deben realizarse? Retraso en la realizacin de la determinacin despus de extrada la sangre (falso aumento del valor hematcrito). 4. Qu indica el volumen corpuscular medio? Es la media del volumen individual de los eritrocitos (glbulos rojos). 5. Indique cuales son las interferencias para la determinacin de CCMH. La principal interferencia que se presenta en la determinacin de CCMH es que los valores que se presentan para la realizacin de clculos no estn correctos, no se encuentren en las unidades deseadas, y fallos en el clculo matemtico. 6. Qu clulas se encuentran entre la columna de glbulos rojos y plasma? Se encuentra una capa de clulas de leucocitos y plaquetas.

Bibliografa
Mabry-Hernandez IR. Screening for iron deficiency anemia--including iron supplementation for children and pregnant women. Am Fam Physician. 2009 May 15;79(10):897-8. Alleyne M, Horne MK, Miller JL. Individualized treatment for irondeficiency anemia in adults. Am J Med. 2008;121:943-948. Brittenham G. Disorders of Iron Metabolism: Iron Deficiency and Iron Overload. In: Hoffman R, Benz EJ, Shattil SS, et al, eds. Hematology: Basic *Principles and Practice. 5th ed. Philadelphia, Pa: Elsevier Churchill Livingstone; 2008:chap 36