Experimento # 15 Anlisis Orina patolgica II: orina patolgica Objetivos: Analizar una muestra de orina patolgica Mediante ensayos

sencillos. Aplicar ensayos conocidos a la determinacin de compuestos anormales en la orina. Marco terico: El anlisis de la orina comienza con su inspeccin visual, para comprobar si a simple vista se observan clculos, hematuria, coloracin oscura o coluria por eliminacin excesiva de Urobilingeno, aspecto claro o turbio de la orina, lo que facilita, el diagnstico de infeccin urinaria. Mediante el anlisis elemental de la orina puede saberse si existe o no glucosa en ella, su densidad y pH, el exceso de cuerpos cetnicos, iones en orina, la existencia de clulas, pus o bacterias, bilirrubina y urobilingeno excesivos, la presencia o ausencia de protenas, as como la deteccin de sustancias diversas (cannabis, herona, cocana, benzodiacepinas y otros frmacos). En condiciones normales no debe haber glucosa en la orina. Aunque una pequea parte de la poblacin elimina glucosa con la orina sin padecer ningn trastorno, si aparece suele indicar que es muy elevado el nivel de glucosa en la sangre, por lo que interesa especialmente en el diagnstico de la diabetes, intolerancia hidrocarbonada y algunas alteraciones renales. La densidad de la orina debe estar entre 1003 y 1030. Su pH debe ser de entre 4,6 y 8 segn la dieta: si aumenta, la orina se hace ms bsica y facilita la infeccin por algunos microorganismos y la formacin de clculos. Si hay un exceso de cuerpos cetnicos, posiblemente se deba a una cetoacidosis, diabtica en la mayora de los casos. Cuantificar los iones sodio y potasio sirve para conocer si la persona toma diurticos. Si aparecen glbulos rojos en la orina, visibles al microscopio o a simple vista, ms que tratar los sntomas a nivel local debe buscarse las causas, Podemos encontrarnos ante una hematuria en estos casos: Nefropata, clculos, procesos infecciosos, quistes renales, hidronefrosis, traumatismos, etc. La existencia de pus en orina, es patolgica, se conoce como piuria, y obliga a pensar en infeccin del tracto urinario. Existe leucocituria si la cifra de leucocitos en orina es mayor de 2000 clulas. Puede ser debida a un proceso inflamatorio, causado a su vez por un proceso infeccioso o por una enfermedad inflamatoria, ante una cifra alta de leucocitos, solicita un cultivo de orina,

para comprobar si hay o no infeccin, y si stos son positivos, pondremos el tratamiento oportuno. Sin embargo si los cultivos son negativos, hay que investigar la posibilidad de una enfermedad inflamatoria o de una infeccin no bacteriana. Materiales y reactivos Orina patolgica, reactivo benedict, cido al 2%, solucin de nitroprusiato de sodio, cido ntrico concentrado, H2O2 al 3%, azufre en polvo, (NH4) SO4 , NH4OH concentrado y bencidina. Reaccin de Benedict En qumica, la reaccin o prueba de Benedict identifica azcares reductores, como la lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solucin alcalina como Cu2O de color rojo-naranja. El reactivo de Benedict consta de: Sulfato cprico

Citrato de sodio Carbonato anhidro de sodio. Adems se emplea NaOH para alcalinizar el medio.

NITROPRUSIATO DE SODIO Indicaciones: Hipertensin severa y crisis hipertensivas. Insuficiencia cardaca congestiva. Cardiopatas congnitas con hipertensin pulmonar. Estabilidad: Frasco ampolla: conservar entre 15-30 C en recipiente resistente a la luz. No utilizar si el color pasa del marrn al azul, proteger de la luz ultravioleta. Factor de riesgo cuando se administra en el embarazo: Categora C.

cido ntrico (HNO3) estado de agregacin Lquido Apariencia Lmpido transparente (si es puro) o amarillento (si posee residuos de la sntesis industrial) Densidad 1500 kg/m3; 1,5

Toxicologa Ingestin: Corrosivo. Dolor abdominal, sensacin de quemazn, shock. Inhalacin: Corrosin del tracto respiratorio, tos, dificultad respiratoria, prdida del

g/cm3 Masa molar 63.012 g/mol Punto de fusin 231 K (-42 C) Punto de ebullicin 356 K (83 C

conocimiento. Piel Puede causar graves quemaduras. Ojos: Quemaduras graves e irritacin ocular.

El azufre Es un elemento esencial para la fisiologa de los vegetales. La forma de comercializacin ms conocida es en forma de un polvo muy fino, de un color amarillo caracterstico. Es accesible, de bajo precio y su aplicacin es muy sencilla. En el cultivo de plantas se usa como acaricida, funguicida y para acidificar los suelos y sustratos

Hidrxido de amonio Hidrxido de amonio, tambin conocido como agua de amonaco o amonaco acuoso es una solucin de amonaco en agua. Tcnicamente, el trmino "hidrxido de amonio" es incorrecto debido a que dicho compuesto no es aislable (solo lo encontramos como ion amonio e ion oxidrilo, es decir ya disociado). Sin embargo, dicho trmino da una fiel descripcin de cmo se comporta una solucin de amonaco, siendo incluso este trmino usado por cientficos e ingenieros. El agua de amonaco se encuentra comnmente en soluciones de limpieza domstica; tambin existen equipos de qumica que contienen restos de esta sustancia.

El sulfato de amonio es una sal cuya frmula qumica es (NH4)2SO4. Color: gris claro. Aspecto: granos Se utiliza como floculante y, adems, como un reactivo en qumica molecular para precipitar protenas solubles. En bioqumica, se usa para precipitar fraccionadamente las globulinas que no son solubles en agua y para diferenciarlas de las albminas. Las globulinas se pueden re disolver para hacer subsecuentes anlisis, como puede ser la extraccin de una protena en particular por cromatografa de afinidad con NaCl. El sulfato de amonio es excelente componente para la llamada precipitacin fraccionada, porque, entre otras cosas, hace que el agua compita entre la disolucin de esta sal o de la protena (formada por muchos grupos carboxilo y amonio), causando que precipite la protena.

Procedimiento:

presencia de carbohidratos en una muestra de orina patolgica

A 5mL de ractivo de benedict para anlisis cualitativo en un tubo de ensayo

agregar 8 gotas de orina libre de protena.

hervir por medio minuto o colocar en un bao de agua

Deteccin de cuerpos cetnicos con la rueba de Rothera

A 5mL de orina aadir sulfato de amonio en cristales hasta que la orina se encuentra saturada de

agregar luego 2 3 gotas de una solucin fresca de nitroprusiato de sodio al 5%

y 1 2 mL d3e solucin concentrada de de hidroxido de amonio.

un color prpura indica la presencia de acetona.

presencia de protenas en una muestra de orina patolgica

calentar 5mL de la orina clara hasta la ebllicin. La formacin de un precipitado se debe a la coagulacin de las protenas presentes.

aadirmos 5 gotas cido actico al 2% si desaparece el precipitado se debe a la presencia de fosfatos y no a las protenas.

debe evitarse la adicin de un exceso de cido.

presencia de sales biliares (prueba de Hay)

espolvornoar un poco de flor de azufre sobre la superficie de 10mL de orina patolgica colocada en un vaso qumico de 50mL. la orina no debe contener ni tolueno, ni timol

5 ml de orina patolgica aadir sulfato de amonio en cristales hasta saturar

un color prpura indica la precencia de cetonas

Deteccin de cuerpos cetnicos con la prueba de rothera

agregar 2 o 3 gotas de solucin fresca de nitroprusiato de sodio

1 o 2 mL de la solucin de NH4OH

Resultados: 1. Presencia de carbohidratos en una muestra de orina patolgica: Positiva, color verde oscuro

2. Presencia de protenas en una muestra de orina patolgica: Positiva, formacin de un precipitado.

3. Deteccin de pigmentos biliares en la orina patolgica: Positiva, presencia de pigmentos biliares

4. Presencia de sales biliares (prueba de hay): Negativa, indicativo de tensin superficial

5. Deteccin de cuerpos cetnicos con la prueba de rothera Positiva, color morado

Discusiones: El anlisis rutinario de orina es una medicin por mtodos fsicos y qumicos para medir diferentes parmetros qumicos y microscpicos para diagnosticar la presencia de infecciones urinarias, enfermedades renales, y otras enfermedades generales que producen metabolitos en la orina. Se utiliza para evaluar la funcin de los riones, de las diferentes hormonas que lo regulan, y situaciones de la regulacin de lquidos en el cuerpo humano. El anlisis de orina se realiza como estudio rutinario para discriminacin del estado de salud, para el diagnstico precoz de diferentes enfermedades, para el control de la diabetes o enfermedades renales. Tambin para diagnosticar infecciones urinarias o la presencia de enfermedades renales. En esta parte del estudio se describe la presencia de:

Interpretacin de la apariencia y color de la orina, pueden aparecer diversas variaciones, orina clara, turbia, amarilla clara, marilla oscura, roja, verde, azul,etc.) Presencia de bilirrubina en orina Presencia de glucosa en orina Hemoglobina en orina Cetonas en orina Nitritos en orina Medicin del pH Protenas en orina Densidad de la orina Urobilingeno en orina

Presencia de carbohidratos: Los niveles de glucosa superiores a lo normal pueden ser un signo de:

Diabetes mellitus Secrecin anormal de glucosa de los riones en la orina (glucosuria renal)

Embarazo

Presencia de protenas en muestra de orina patolgica: Principalmente es un indicador de problemas renales, como la glomerulonefritis, como la prdida de protenas disminuye la presin onctica se suele acompaar de edemas intersticiales, lo que se llama sndrome nefrtico. Deteccin de pigmentos biliares en la orina patolgica: se denomina coluria e indica una obstruccin de la va biliar, intra o extra heptica (hepatitis, clculos, cncer de pncreas o de la va biliar) Prueba de Hay: Pigmentos y sales biliares: cuando se encuentran en la orina, son expresin de enfermedades que comprometen las funciones del hgado y de los conductos biliares. Los pigmentos bilirrubina y biliverdina son productos de degradacin de la hemoglobina y se encuentran presentes en la ictericia, anemia y enfermedades hemticas y biliares. Deteccin de cuerpos cetnicos con la prueba de rothera: La cetonuria es un trastorno mdico caracterizado por una alta concentracin en la orina de cuerpos cetnicos, como la acetona. Varias enfermedades pueden producir una acetonuria, en especial aquellas que producen cuerpos cetnicos como resultado del uso de vas alternas de energa metablica. Se ve cetonuria en la inanicin o, con mayor frecuencia, en la diabetes mellitus descompensada. La produccin de cuerpos cetnicos es una respuesta normal a un dficit de glucosa. Una cetonuria puede verse en estados de acidosis metablica llamada cetoacidosis. Conclusiones: La orina patolgica: Aspecto: La orina patolgica suele ser turbia La turbidez se presenta como resultado de infecciones urinarias La orina tambin se enturbia por la presencia de eritrocitos, leucocitos y bacterias. Olor: La orina de los pacientes con diabetes sacarina suelen tener un olor dulce por la cetosis. Las infecciones de vas urinarias producen fetidez urinaria por la presencia de bacterias. La orina de los lactantes con una enfermedad hereditaria del metabolismo de los aminocidos huele a arce o azcar quemada 2 enfermedad de jarabe de arce.

La cistinuria y homo cistinuria producen orina con olor a azufre. En al fenilcetonuria la orina tiene olor a moho o a ratn. La tirosimenia se caracteriza por orina con olor a col o pescado. Color: La orina color vino tinto oscuro puede observarse en individuos afectados de enfermedades hepticas, mientras que en el melanosarcoma, la orina tiene un color marrn Cuestionario 1. Por que se requiere que la muestra de orina patolgica que se analiza con el reactivo de Benedict no contenga protenas? Ya que el benedict es un reactivo para determinar azucares simples, es especficos para glucosa. La glucosa en la orina suele acompaarse de presencia de cuerpos cetnicos, que aparecen en exceso en la diabetes no controlada, pero las protenas no deben estar presentes cuando se realiza la prueba de Benedict, porque altera la reaccin y puede alterar los resultados. 2. Porque el azufre en presencia de sales biliares en la orina patolgica precipita al fondo del vaso qumico? El azufre precipita al fondo del vaso en presencia de sales biliares, porque los cidos biliares son agentes que reducen la tensin superficial, esto provoca que el azufre precipite y no quede en suspensin, la precipitacin indica que hay presencia de sales y cidos biliares. 3. Mtodos que se emplean hoy en da en los laboratorios clnicos y que ahorran tiempo. Tira reactiva de orina: anlisis de una pquela muestra de orina mediante el empleo de una tira reactiva introducida en la muestra. Se realiza en la misma consulta. Los resultados se obtienen en 5-10 minuto. Se utiliza como prueba de screening ya que aporta informacin bsica. Utilizadas para descartar o confirmar embarazo, detectar infeccin de la orina, descomprensin diabtica, entre otras. Coloracin de un frotis de orina no centrifugada mediante el mtodo de Gram, constituye un ndice practico para diferencias entre infeccin y contaminacin urinaria. El Urocultivo: se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un mtodo excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario.

Estudio del Sedimento Urinario: una de las determinaciones de laboratorio que nos dan ms informacin de la patologa renal. Teste de Drogas: prueba muy sencilla, utilizada para la determinacin de los metabolitos de las distintas drogas presentes en la orina, en caso de consumo de estas sustancias. Test de Embarazo. Test de Glucosa.

Bibliografas: Stryer L, Berg JM, Tymoczko JL (2003) Estructura y funcin de las protenas. En: Bioqumica, 5 ed. Editorial Revert (Barcelona, Espaa), pp. 41-76. Luisot P (1982). Bioqumica Estructural, 2 Ed. Editorial AC. Smith I, Feinberg JG (1965) Paper & Thin Layer Chromatography and Electrophoresis. Shandon Scientific Company Ltd. Desarrollo histrico de la tcnica y aplicaciones.