BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA VICERRECTORA DE DOCENCIA DIRECCIN GENERALDE EDUCACIN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LICENCIATURA EN FARMACIA REA: ANALSIS CLNICOS

ASIGNATURA: LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR DE LA CLULA

CDIGO: FARM-014 L ELABORADO POR: MC Ma. De Lourdes Martinez Moreno MC Sara Silvia Domnguez Baez DC Bertha Alicia Len Chvez MC Marisela Torres y Soto MC Aida Osorno Tecpa MC Rafael Muoz Bedolla MC Martha Alicia Salgado Jurez MC Rosa Maria Aguilar Garduo

FEBRERO 2009

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PRCTICA 1. FUNDAMENTO FSICO, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO. APLICACIONES DEL MICROSCOPIO INTRODUCCIN.El microscopio es el aparato ms importante e indispensable en un laboratorio de Biologa, su funcin es permitir observar la imagen considerablemente aumentada de un objeto u organismo que a simple vista pasa desapercibido. La palabra microscopio proviene de dos races griegas: Micros ; que quiere decir pequeo y scopein ; que significa observar. En la actualidad existe toda una ciencia dedicada a estudiar las caractersticas de estos aparatos que cada vez son mas precisos y espectaculares, nos referimos a la creacin de la microscopa; sta es cada da mas importante, ya que el conocer las caractersticas de un microscopio nos permite sacar el mayor provecho de l, dndole una mayor aplicacin. Existen dos tipos bsicos de microscopio: el simple y el compuesto. El microscopio simple est formado tan solo por una lente convergente a la que tambin se le llama "lupa", la cual nos proporciona una imagen virtual y aumentada. El microscopio compuesto esta constituido por dos sistemas de lentes: 1.- El sistema que est constituido por los objetivos, que son las lentes quedan ms cerca del objeto de observacin. 2.- El sistema constituido por los oculares, que son las lentes que quedan ms cerca del observador. Cada sistema proporciona un aumento independiente y el producto de estos aumentos parciales dados por oculares y objetivos, determina el aumento total del microscopio. Para manejar con mayor eficiencia un microscopio, es necesario conocer cmo est constituido. Las partes que lo constituyen se agrupan en tres sistemas: mecnico, ptico, y de iluminacin. A) El sistema mecnico est formado por: una base, la columna, el tubo del microscopio, la platina, los tornillos para el enfoque y el revolver. B) El sistema ptico est representado por las lentes oculares y las lentes objetivos. C) El sistema de iluminacin est representado por la fuente de luz (foco), el condensador y el diafragma. Debemos recordar que el objetivo y el ocular del microscopio funcionan como lentes convergentes biconvexas, por lo que la imagen final que nos proporciona el microscopio compuesto es virtual, aumentada e invertida. Toda imagen proporcionada por el sistema ptico de un microscopio, debe reunir tres caractersticas: poseer un buen poder de resolucin, de penetracin y de definicin. El poder de resolucin (P.R.): es la caracterstica del microscopio que permite ver con claridad las estructuras finas y muy cercanas entre si; podemos ver que este poder de resolucin es directamente proporcional a la longitud de onda media de la luz blanca (550 nm) (1 nm= 10 -6 mm ) e inversamente proporcional a la apertura numrica (A.N.) del objetivo. Esto es: P.R. = O.61 A.N. Donde P.R.: es la distancia mnima entre dos puntos de la muestra que permite verlos separados; 0.61 es una constante que representa la diferencia mnima en contraste que es detectable; es la longitud de onda de la luz empleada y A.N: la apertura numrica de la lente del objetivo. Si las estructuras que se desean precisar, estn colocadas a una distancia menor una de otra, necesitaremos un objetivo de mayor apertura numrica.

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La apertura numrica (A.N.): es una medida del ngulo mximo con que los rayos provenientes del objeto inciden en la lente del objetivo del microscopio y de ah son llevados al ojo del observador. Ahora bien, hay dos factores que determinan la apertura numrica: el ngulo que forman los rayos que penetran por el objetivo y el ndice de refraccin del medio que exista entre el objeto a observar y el objetivo, dicho de una manera matemtica, la apertura numrica es el producto del seno del semi ngulo de abertura (que mide la capacidad de la lente para concentrar la luz) por el ndice de refraccin del medio que existe entre el objetivo y el objeto a observar. Todos los objetivos traen grabada la apertura numrica. El poder de penetracin: es la caracterstica que permite definir simultneamente las estructuras existentes a diferentes niveles de la preparacin; esto solo se puede lograr con objetivos de pequeo aumento, a medida que aumenta el poder del objetivo y la apertura numrica, es menor el poder de resolucin. El poder de definicin: es la caracterstica que permite una imagen clara, precisa y con bordes definidos; para esto, el microscopio debe presentar lentes bien pulidas, con sus aberraciones cromtica y de esfericidad, corregidas. El ndice de refraccin: es una medida de la velocidad comparativa de luz en un medio. Cuando existe aire entre la lente y el cubreobjetos, parte de la luz proyectada a travs de la muestra es desviada (refractada), por lo que a medida que se usa un objetivo de mayor aumento, la prdida de resolucin tiene un efecto significativo sobre la calidad de la imagen. El uso de aceite de inmersin (que tiene el mismo ndice de refraccin que el vidrio) entre la muestra y la lente del objetivo de inmersin, evita el cambio del ndice de refraccin, y por lo tanto, mejora la resolucin. OBJETIVO.- Que el alumno identifique cada uno de los componentes del microscopio y sepa qu funcin desempea cada uno, que logre paso a paso un enfoque correcto y que aprenda a detectar los errores de manejo para corregirlos; adems aprender a tener los cuidados correspondientes al microscopio. MATERIAL.- Microscopio ptico, portaobjetos, cubreobjetos y alguna muestra para observar al microscopio. PROCEDIMIENTO.- a) Seale cada componente del microscopio y anote su funcin y a qu sistema pertenece. b) Observe los grabados en los oculares y en los objetivos y anote su significado. c) Ensaye el enfoque una preparacin, empezando con el objetivo de menor aumento, anotando el aumento total que logra de su imagen en cada caso. d) Indique cul es el poder de resolucin de cada objetivo. e) Mida el grosor, largo y ancho del portaobjetos y del cubreobjetos. f) Ensaye la iluminacin Khler AJUSTE.- en la actualidad casi todos los microscopistas practican la iluminacin basada en los principios establecidos por Khler, conocida como iluminacin de Khler. Su finalidad es obtener una distribucin homognea de la iluminacin, sobre el espcimen a observar, a pesar de las irregularidades de la fuente de luz. Pasos a seguir para la iluminacin de Khler: 1. Prender la fuente de luz (foco). 2. Enfocar la preparacin con el objetivo de menor aumento (10X) 3. Subir el condensador hasta el tope, con mucho cuidado. 4. Cerrar por completo el diafragma de la lmpara ( o diafragma de campo) colocado en la base del microscopio (de dnde sale la luz). 5. Cerrar por completo el diafragma de Iris. 6. Observar la figura geomtrica que aparece en el campo (hexgono), y a la cual se le llama diafragma. 7. Bajar el condensador lentamente hasta lograr la mxima nitidez de los bordes de la figura geomtrica o diafragma

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8. Si no est centrado el diafragma en el campo, entonces: 9. Centrar el diafragma en el campo con los tornillos de centrado que estn en el condensador, movindolos simultneamente y lentamente, para evitar que el diafragma salga del campo. 10. Abrir el diafragma de campo luminoso (o de la lmpara) hasta obtener iluminada un rea igual al campo visual. 11. Si el diafragma est centrado en el campo, ningn vrtice debe salir del campo y los espacios que hay entre vrtice y vrtice, deben ser iguales. 12. Si no es el caso, debe cerrarse un poco el diafragma de campo luminoso y repetir los pasos 9, 10 y 11. 13. Abrir completamente el diafragma de campo luminoso. (ste debe estar siempre, completamente abierto o ligeramente cerrado, slo se cierra cuando se hace la iluminacin Khler). 14. Abrir poco a poco el diafragma de Iris, hasta obtener una iluminacin que no lastime a los ojos. 15. Ajustar la intensidad de la luz con el tornillo de control de la intensidad, hasta donde no lastime a los ojos. 16. Ajustar la altura del condensador dependiendo del objetivo a utilizar. 17. Verificar el ajuste observando por el ocular, el campo debe estar iluminado total y homogneamente. Pasos a seguir para enfocar el espcimen o muestra: 1) Con los tornillos macromtricos, bajar con cuidado la platina hasta el tope. 2) Con el revolver, colocar el objetivo de menor aumento (seco dbil) en direccin del orificio de la platina. 3) Colocar el portaobjetos que contiene la muestra, en la platina, centrndolo en el rea del orificio de la platina. 4) Asegurar el portaobjetos con las pinzas que hay en la platina. 5) Con los tornillos macromtricos, sin ver por los oculares, subir lentamente la platina hasta que llegue al tope (actualmente la mayora de los microscopios compuestos tienen un tope slo para el objetivo seco dbil, se recomienda verificar esto antes de colocar un portaobjetos). 6) Sin ver todava por los oculares, verificar hacia que sentido (si es hacia mi, o hacia fuera) se tienen que mover los tornillos macromtricos para bajar la platina. 7) Prender la fuente de luz (lmpara o foco). 8) Con los tornillos macromtricos, bajar la platina lentamente hasta obtener una imagen del espcimen. 9) Afinar la imagen con los tornillos micromtricos. 10) Ajustar la altura del condensador. 11) Ajustar la cantidad de luz con el diafragma de iris. 12) Ajustar la intensidad de luz con el tornillo de control de la intensidad. 13) Observar la muestra. Si se va a observar con los otros objetivos: 14) Con el revolver cambiar primero al objetivo seco fuerte y seguir los pasos 9 a 13. 15) Con el revolver cambiar al objetivo de inmersin y seguir los pasos 9 a 13 16) Antes de colocar el objetivo de inmersin en direccin de la muestra, debe siempre colocarse una gotita de aceite de inmersin.

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Recomendaciones para el uso de los objetivos: Caracterstica Altura del condensador Cantidad de luz (Diafragma de Iris) Intensidad de luz (Tornillo de control de intensidad) Objetivo Seco dbil Aproximadamente de 1- 2 cm por debajo de la platina Poca X Objetivo Seco fuerte Aproximadamente de 1- 2 cm por debajo de la platina Media XX Objetivo de Inmersin Condensador pegado a la platina

Mucha XXX

Baja X

Media XX

Alta XXX

X: significa una medida cualitativa a manera de comparacin.

MICROSCOPIO COMPUESTO Y SUS COMPONENTES PRINCIPALES OCULARES CABEZAL REVOLVER OBJETIVOS BRAZO DESPLAZAMIENTO PLATINA MACROMTRICO MICROMTRIC O CONDENSADOR

PLATIN A FOCO BASE

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PROCEDIMIENTO: - Identificar cada componente del microscopio, sealar su funcin. - Observar y anotar las cifras grabadas en el ocular y objetivos. - Enfoque de varias preparaciones. Reporte: Elabore una matriz de informacin.

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PRCTICA NO. 2 LA CLULA VEGETAL. INTRODUCCIN. Es de todos conocida la importancia que representa el Reino Vegetal. Los vegetales son casi los nicos seres vivos capacitados para captar energa, la cual, en unin de las sustancias inorgnicas que toman del aire y del suelo la emplean para la elaboracin de sus propios alimentos; la energa as utilizada la obtienen de la luz solar. Los otros organismos como las plantas no verdes y los animales, obtienen esa energa de los alimentos que toman de otros seres vivos, donde sta se encuentra almacenada y en estado potencial. Por lo tanto casi toda la energa contenida en las substancias de que se hallan compuestas los organismos, inclusive el hombre, procede en ltimo trmino de la luz solar captada por los vegetales verdes. Por consiguiente los vegetales verdes son e capital importancia para el mantenimiento de la vida. Los vegetales comprenden desde plantas unicelulares, por ejemplo levaduras y algunas algas verdes, hasta las plantas mayormente diferenciadas. Para apreciar la organizacin de los procesos bioqumicos comprendidos en la produccin de los metabolitos primarios y secundarios de la plantas es necesario tener conocimiento de la delicada estructura de la clula vegetal. OBJETIVO: Que el alumno conozca algunas estructuras de la clula vegetal y pueda identificarlas. MATERIAL: Microscopio, bistur, agujas, cuentagotas, portaobjetos, cubreobjetos, caja petri, pipetas Pasteur. MATERIAL BIOLGICO: Trocitos de cebolla, papa, pltano, semillas de legumbres, cereales, tallos y ptalos de flores, cscara de ctricos, lechuga, jitomate, zanahoria, pera, aceituna. REACTIVOS: Solucin de nitrato de plata al 0.1N. soln de lugol, soln de EDTA 0.1 M, glicerina verde de metilo actico, cido actico, alcohol de 70 carmn alumnico, vede , brillante. PROCEDIMIENTO: a) Limpie la cebolla de las hojas exteriores secas, separe una de las hojas internas y desprenda la membrana tenue que est adherida por su cara interna cncava. Lleve esta muestra al portaobjetos evitando que se formen burbujas de aire. Squelo al aire, vierta unas gotas de verde de metilo actico por 5 minutos, lave con agua para quitar el exceso de colorante, agregue una gota de glicerina, coloque encima el cubreobjetos y observe al microscopio. Observar las clulas de formas alargadas y bastante grandes. La pared celular celulsica se destaca muy clara teida por el colorante. Los ncleos son grandes y muy visibles, en su interior pueden llegar a observarse granulaciones; son los nucletidos. El citoplasma tiene aspecto bastante claro, en el que se distinguen algunas vacuolas grandes coloreadas dbilmente.

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b) Tome una hoja externa seca de la cebolla y corte un trocito de 1 cm cuadrado, depostelo sobre un portaobjetos que contenga una gota de glicerina y observe al microscopio. Observar capas de clulas secas, con poco contenido celular y las membranas de unas capas de clulas con otras superpuestas. Al enfocar con cuidado observar unas formas polidricas transparentes con aspecto cristalino, si enfoca en distintos planos, podr observar las caras de cristales de oxalato de calcio. Estos son abundantes en los vegetales y tienen formas variadas, agujas, prismas alargados y puntiagudos, etc. En la cebolla presentan aspecto de prisma. c) Para hacer evidentes los cloroplastos y poderlos observar fcilmente, podemos usar una sustancia que puede ser reducida por ellos, (capacidad reductora de los plstidos) como el nitrato de plata. Extender nuevamente un pedacito de membrana de la cebolla en un portaobjetos evitando que se formen burbujas, agregar una gota de solucin de nitrato de plata 0.1N y observe a 40X. Espere el efecto de ennegrecimiento de los cloroplastos. d) Los amiloplastos son importantes porque representan la sustancia de reserva (almidn), de la clula vegetal, se puede encontrar en mayor proporcin en los cereales y semillas de legumbres, as como algunos tubrculos o frutos, para identificarlos parta y raspe el cereal, leguminosa o tubrculo con el bistur, deposite el producto obtenido en el portaobjetos. Agregue una gota de agua y una de lugol, coloque el cubreobjetos y observe. Los granos de almidn se tien de color violeta intenso debido al lugol que contiene yodo. e) Los cromoplastos contienen substancias del tipo de los carotenos y pueden observarse de la siguiente forma: Coloque una pequea muestra de jitomate en un portaobjetos sin agregar agua, coloque el cubreobjetos y comprima suavemente, observe al microscopio. La pulpa del jitomate muestra por lo general las clulas bastante sueltas unas de otras, se percibe en el citoplasma una serie de grnulos rojizos- anaranjados que son los cromoplastos. Tambin puede obtener un corte fino de zanahoria, depostelo en un portaobjetos, agregue una gota de agua, colquele el cubreobjetos y observe al microscopio. En las clulas de la zanahoria se observan una multitud de corpsculos irregulares de color rojizo dbil hasta anaranjado. f) Los tallos o pecolos de las plantas tienen una resistencia mecnica relativa y sirven de sostn, debido a que las clulas tienen gran cantidad de celulosa que las engruesa. A este tejido se le da el nombre de colnquima y est formado por clulas alargadas. Corte secciones transversales de tallo o pecolos de malva lo ms finamente posible, fije con alcohol de 70 durante dos minutos, lave con agua y tia con carmn alumnico por 15 minutos, lave abundantemente con agua y monte el corte en un portaobjetos con una gota de glicerina, cubra y observe. Con seco dbil observar una especie de granulado de puntos rojos, cambie a seco fuerte y despus a inmersin.

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g) El mesocarpio del fruto de la pera y la aceituna representan el esclernquima. Este tejido est formado por grupos o nidos de clulas impregnadas de lignina a esto se debe la dureza de los frutos cuando no estn maduros. La Lignina se tie con verde brillante. Perta la pera y la aceituna y obtenga un raspado de cada uno por separado, colquelo en un portaobjetos y agregue una gota de verde brillante, dejarlo actuar por un minuto y lavar cuidadosamente con agua, seque el exceso con papel filtro y ponga una gota de glicerina, cubra y observe al microscopio. h) La cscara o pericarpio de los frutos ctricos (naranja, mandarina, limn, toronja, etc) poseen cavidades hechas por las mismas clulas y estn llenas del aceite esencial al que deben su aroma. Haga cortes delgados de la cscara de los frutos, coloque la muestra en un portaobjetos, agregue una gota de agua, cbralo y observe con poco aumento. i) Los tallos de lechuga o acelga tienen vasos llenos de ltex que los hace menos transparentes. Haga cortes longitudinales del tallo de la lechuga o acelga, colquelos en el portaobjetos con una gota de agua, se observan ramificaciones irregulares que tienen color ms oscuro que el resto de las clulas que corresponden a los vasos de ltex. Reporte: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.

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PRCTICA N 3. OBSERVACIN DE CLULAS PROCARITICAS Y SUS CARACTERSTICAS TINTORIALES INTRODUCCION.- La fijacin de las clulas o tejidos puede ser definida como el procedimiento que permite la preservacin selectiva de su organizacin morfolgica y de su composicin qumica para ser observados al microscopio. Los mejores fijadores contienen una o ms sustancias que precipitan las protenas de las clulas, o que las hacen insolubles sin llegar a precipitarlas. Segn cual sea el fijador y las condiciones bajo las cuales se lo utilice, la fase slida de protoplasma se separa de la acuosa en forma de fibrillas, grnulos, redes o vacuolas. La separacin de la fase slida se produce esencialmente debido a las uniones entre las molculas proteicas, aumentando de esta manera su estabilidad para los tratamientos posteriores y la observacin El fijador usado debe ser seleccionado de acuerdo a su actividad qumica especfica, de manera que aquellas estructuras que se deseen conservar, sean preservadas con exclusin de otros materiales que podran interferir con el efecto deseado. Es necesario tambin evitar toda destruccin del material que va a ser estudiado y distribuir el efecto del fijador uniformemente en toda la clula. Por otro lado, la seleccin de un colorante para el estudio de las clulas por medio del microscopio ptico, depende de distintos factores, que incluyen la naturaleza del material a estudiar, el tipo de fijador utilizado y la reactividad qumica del colorante. La tincin de las bacterias por el mtodo de Gram, permite clasificar a las bacterias selectivamente en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. Las primeras retienen el colorante cristal violeta sin decolorarse por los reactivos diferenciadores que se aplican en la tcnica de tincin. Las bacterias Gram positivas aparecen en visin microscpica teidas de un color morado intenso, por el cristal violeta, debido a la capa gruesa de peptidoglicanos Las bacterias Gram negativas, aparecen en visin microscpica teidas de un color sonrosado dbil, por la Safranina., debido a la capa fina de peptidoglicanos. OBJETIVO.- Que el alumno conozca a las bacterias como el principal ejemplo de clulas procariticas y que aprenda a emplear la tcnica de tincin de Gram para bacterias, como introduccin a la identificacin morfolgica y afinidad de las clulas a los colorantes. MATERIAL BIOLGICO: Ndulos de las races de leguminosas, alfalfa, trbol, soya, etc. Vino agriado, yogurt, infusin vegetal. REACTIVOS: Alcohol etlico al 96 o alcohol etlico-acetona 1:1, safranina, aceite de inmersin. cristal violeta, lugol,

PROCEDIMIENTO: 1. Se lavan los ndulos de las races de leguminosas, se parten y colocan sobre portaobjetos, se agrega una gota de agua, se quitan los residuos y se fijan a la llama del mechero, se colocan en el puente de tincin y se tien.
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2. Con una asa se toma una pequea porcin de la superficie del vino agriado y se extiende sobre un porta con una gota de agua, se fija a la llama del mechero y se tie. 3. Con una pipeta Pasteur se toma una pequea gota de de yogurt y se coloca en el portaobjetos en el que previamente se deposit una gota de agua destilada, se mezcla y se hace una extensin delgada y se seca a la llama del mechero. Lavar la preparacin con xilol por escurrimiento, para eliminar la grasa que contiene el yogurt y dejar que se seque al aire. 4. Se toma una pequea porcin de la pelcula fina que aparece en la superficie de la infusin, haciendo un frote sobre un portaobjetos, se seca a la llama del mechero y se tie. TCNICA DE TINCIN DE GRAM 1.. Coloque la laminilla en el soporte de la tina de tincin, cuidando que quede completamente horizontal. 2.. Agregue unas gotas del colorante cristal violeta, cubriendo la extensin; el tiempo de actuacin del colorante es de dos minutos. 3.. Lave con agua destilada para arrastrar el colorante, se hace por goteo con una pipeta Pasteur, sin exceder el lavado y nunca directamente sobre el extendido para evitar el arrastre del mismo. 4.. Vuelva a colocar la laminilla en el soporte de la tina de tincin. 5.. Agregue solucin de lugol, cubriendo el frotis y deje actuar durante un minuto. 6.. Lave nuevamente con agua destilada. 7.. Agregue unas gotas de alcohol etlico al 96 o alcohol etlico-acetona 1:1, cubriendo el frotis y deje actuar de 30 segundos a un minuto, para arrastrar el colorante que queda libre y decolorar. 8.. Lave cuidadosamente con agua destilada. 9.. Agregue unas gotas de safranina cubriendo el frotis y deje actuar durante un minuto. 10.. Lave con agua destilada. 11.. Seque al aire, perfectamente . 12..Agregue una gotita de aceite de inmersin y observe a 100 X. Identifique en cada muestra la forma de las bacterias y, por el color cules son Gram negativas y cules son Gram positivas. PREPARACIN DE SOLUCIONES Solucin A: Cristal violeta 2 gr. Alcohol etlico 20 ml. Solucin B Oxalato de amonio 0.8 gr H2O destilada 80 ml. Mezclar A y B para madurarlo y filtrar.
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Lugol Yodo 1 gr. Yoduro de potasio 2 gr H2O destilada 300 ml Alcohol etlico-acetona 1:1 Safranina. REPORTE: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.

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PRCTICA 4. CLULAS EUCARITICAS Y SU DIVERSIDAD INTRODUCCIN.- Las clulas vivas son entidades dinmicas, que cambian y se mueven constantemente. Las clulas fijadas y teidas son estables, y ya no cambian. Cuando mucho, las imgenes obtenidas con material fijado solo pueden ser "instantneas" de las clulas dinmicas. A menudo es necesario reconstruir una cadena de acontecimientos por el estudio cuidadoso de muchas de estas instantneas a intervalos diversos. Las clulas procariticas por su tamao no pueden ser observadas tan fcilmente sin fijar y teir En cambio las clulas eucariticas pueden observarse en movimiento como algunos seres unicelulares, por ejemplo; los protozoarios, si es que se cuida de conservarlos bajo las condiciones de su medio natural. Pero la clula vegetal es ms fcil de observar debido a su tamao y a la pared celular que recubre a la membrana plasmtica. Puede teirse para contrastar sus estructuras ms importantes, tales como ncleo y plstidos. El uso de colorantes adecuados para resaltar determinadas estructuras es frecuente, tomando en cuenta la composicin qumica de tales estructuras. OBJETIVO.- Que el alumno identifique algunos organismos unicelulares (protozoarios) como ejemplo de clula viva, obtenidos de medios adecuados, y que observe clulas vegetales para identificar en ellas caractersticas que las hacen tan diferentes de las clulas procariticas. Adems de que conozca e identifique mohos, como ejemplo de hongos. MATERIAL.- Microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, pipetas Pasteur con chuzo, navaja, alfileres o agujas. Como material biolgico: agua estancada (de florero con agua "podrida"), clulas de cebolla o ptalos de flor, pan o tortilla con moho. PROCEDIMIENTO.- A) Con la pipeta Pasteur tome una gota de agua estancada y colquela en un portaobjetos; cbrala inmediatamente con un cubreobjetos y observe a seco dbil. Una vez enfocada la muestra, puede pasar a mayor aumento. Bajo el microscopio podr ver muchas especies de organismos unicelulares nadando activamente en la gota de agua. Estos organismos son protozoarios que han estado viviendo en el medio adecuado para su crecimiento y proliferacin. Trate de identificarlos con ayuda de los esquemas anexos. B) Tome ahora la cebolla o el ptalo de una flor y haga una incisin que le permita separar una capa delgada para obtener un trocito y extenderlo perfectamente sobre el portaobjetos. A la clula de la cebolla puede agregarle una gota de colorante como el verde de metilo. Con ste se teirn los ncleos. Al corte de flor no es necesario teirla pues las clulas poseen una vacuola de pigmento coloreado que las hace muy visibles con su contorno bien delimitado por la pared celular. C) Con la punta de un alfiler o de una aguja, tome una porcin muy pequea del moho del pan o de tortilla, colquelo en un portaobjetos que previamente tendr una gota de agua destilada, luego agregue una gota de colorante azul de metileno. Identifique las partes que constituyen al moho.

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PRCTICA NO 5. PERMEABILIDAD CELULAR. INTRODUCCIN: Una membrana celular es una capa de macromolculas que encierra todas las clulas y muchos organelos, se denomina membrana plasmtica cuando forma el lmite exterior de una clula, Todas las membranas, sin considerar el tipo de organismo o clula, se construyen del mismo modo a partir del mismo modo, a partir de dos tipos de macromolculas: los fosfolpidos que proveen la estructura; y las protenas, que proveen las funciones especficas de la membrana. Las membranas animales tambin contienen el colesterol, que estabiliza la capa de fosfolpidos. La estructura nica de una membrana celular se describe frecuentemente como un mosaico fluido. Es un fluido porque antes que un slido, el fosfolpido es un lquido, es un mosaico a causa de la disposicin de diversas protenas dentro de la capa de fosfolpidos. Una membrana celular es una barrera selectivamente permeable: algunos materiales cruzan de manera libre y otros cruzan slo en ciertos momentos. El paso es controlado por la misma bicapa de fosfolpidos, y por el particular ordenamiento de las protenas en ella empotradas. La estructura fosfolipdica es impermeable a muchos materiales. Slo materiales muy pequeos o sin ninguna carga elctrica pueden penetrar esta barrera. Los materiales cruzan las membranas celulares de cuatro maneras: difusin simple, difusin facilitada, transporte activo y transporte de volumen, y se resumen en la siguiente tabla: TIPO DE TIPOS DE TRANSPORTE MATERIALES Difusin simple Esteroides, grasa, O2, CO2, H2O Difusin facilitada Glucosa, Iones DIRECCIN REQUISITOS Ninguno Protena de canal, protena receptora Protenas de transporte, energa Energa, algunas veces protenas receptoras.

Altas a bajas concentraciones Altas a bajas concentraciones Transporte activo Aminocidos Bajas a altas concentraciones Transporte de Hormonas no Dentro o fuera de partculas en esteroideas, la clula segn suspensin enzimas, moco, necesidad microbios, neutronsmisores, residuos

OSMOSIS: La difusin de agua a travs de una membrana celular tiene un nombre especial, smosis. Las molculas de agua son suficientemente pequeas para difundirse mediante orificios en la estructura de fosfolpidos, mientras que muchas molculas e iones no lo son. El agua se difunde desde el lado de la membrana donde se concentra ms (es decir, donde hay menos materiales disueltos) al lado donde es menos concentrada (es decir, donde hay ms materiales disueltos). La direccin de la smosis es muy importante
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para la clula. El hecho de que el agua entre o salga de una clula depende de las concentraciones relativas de materiales disueltos dentro y fuera de la clula. Tres trminos describen estas concentraciones relativas: isotnico, (mismo), hipertnico, (por encima de), e hipotnico (por debajo de). Estas concentraciones y sus efectos de definen en la siguiente tabla: TRMINO CONCENTRACIN DE MATERIALES DISUELTOS Ambiente isotnico Igualdad dentro y fuera de la clula Ambiente Ms alta fuera de la Hipertnico clula Ambiente Ms baja fuera de Hipotnico la clula CONCENTRACIN DIRECCIN NETA DE AGUA DE FLUJO DE AGUA Igualdad dentro y Ninguna fuera de la clula Ms baja fuera de Fuera de la clula la clula Ms alta fuera de la Dentro de la clula clula

OBJETIVO: Que el alumno compruebe la funcin de permeabilidad de la membrana citoplasmtica, y su funcin de separar dos medios, el intracelular y el extracelular, tanto en clulas animales como en clulas vegetales, as como observar los efectos que sobre la clula ejercen sustancias diferentes al medio intracelular. MATERIAL: Microscopio, tubos de ensaye, lancetas, portaobjetos, cubreobjetos, bistur, pipetas Pasteur. MATERIAL BIOLGICO: Sangre capilar, o sangre venosa con anticoagulante (para observar eritrocitos), ptalos de flores, de preferencia de color fuerte, para que las vacuolas de antocianinas sean ms visibles con el efecto de las soluciones. REACTIVOS: Anticoagulante, solucin salina isotnica, solucin salina hipertnica y solucin salina hipotnica, agua destilada. PROCEDIMIENTO: 1. Obtenga unas gotas de sangre, por puncin en la yema del dedo, y depostelas en un tubo con anticoagulante. 2. Marque sus tubos como 1, 2, 3 y 4 y coloque unas gotas de solucin isotnica en el primer tubo, hipotnica en el segundo, hipertnica en el tercero y agua destilada en el cuarto. 3. Agite suavemente (para no romper los eritrocitos) y mezcle. Tome una gota y depostela en un portaobjetos, cbralo con un cubreobjetos y observe a seco fuerte y anote sus resultados. 4. Tome un ptalo y haga una incisin con el bistur hasta la mitad del grosor del ptalo y desprenda la capa aterciopelada. 5. Coloque en portaobjetos un fragmento de esta capa, 3 cortes en cada uno y agregue al primero solucin isotnica, al segundo solucin hipertnica y al tercero, solucin hipotnica. Observe a seco fuerte y anote sus resultados. Reporte :Explique los resultados de cada observacin

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PRCTICA NO. 6. DIVISIN CELULAR POR MITOSIS INTRODUCCIN: Toda clula procede de otra clula preexistente. Las clulas vegetales crecen debido sobre todo a la toma de agua. Cuando alcanzan un tamao determinado se dividen, formando cada una de ellas dos clulas hijas idnticas. Las diversas partes de la clula a menudo estn distribuidas asimtricamente y han de repartirse entre las dos clulas hijas de tal modo que las nuevas clulas sean copias exactas de la clula original. En los eucariontes, el material hereditario forma parte de cromosomas complejos, la reparticin equitativa de este material requiere por tanto un mecanismo ms complicado, mediante el cual los cromosomas se dupliquen, se separen y se distribuyan de una manera precisa entre dos clulas hijas, este mecanismo es la MITOSIS. La mitosis o divisin celular, apareci evolutivamente como una solucin al problema de asegurar una reparticin equitativa del material nuclear entre las clulas hijas, en los organismos eucariticos. Es un proceso continuo que convencionalmente se divide en cuatro fases principales, profase, metafase, anafase y telofase. En el tiempo antes y despus de la mitosis la clula est en interfase. En la mitosis los cromosomas aparecen como largas fibras estiradas que se van acortando a medida que avanza su enrollamiento y que se dirigen hacia el centro de la clula cuando se han contrado completamente. Entonces se escinden longitudinalmente en las dos mitades idnticas, las cuales son llevadas a los polos opuestos de la clula mediante una serie de microtbulos. En estos dos grupos equivalentes genticamente, los cromosomas se desenrollan y se establecen en los ncleos de las clulas hijas. Una planta conserva la mayora de las clulas que se forman durante su vida y va produciendo otras nuevas en regiones en activa divisin celular, localizadas en los pices de las ramas y las races. En los pices se localizan reas especializadas de divisin celular activa, llamadas meristemas (del griego meristos = dividido). En el extremo de cada tallo hay un meristema apical que produce un flujo continuo de clulas hijas a medida que el tallo se alarga ms y ms. Este alargamiento es el resultado no solo de la divisin celular, sino tambin de que las clulas nuevas absorben agua y aumentan de tamao. Luego las clulas se diferencian en formas adaptadas a la funcin que desempean en la planta adulta. El meristema apical de la raz produce clulas hijas hacia delante y hacia atrs. Hacia delante originan la pilorriza, una cubierta dura de clulas que se desgasta continuamente a medida que la raz avanza a travs del suelo y que es regenerada desde atrs por divisin celular por el sistema apical. OBJETIVO: Que el alumno observe en clulas vegetales las diferentes etapas de la mitosis.. MATERIAL.- Microscopio, tubos pyrex chicos, portaobjetos, cubreobjetos, bistur o navaja de un filo nueva y 2-4 agujas largas, aplicadores de madera, pinzas para los tubos, mechero Bunsen, caja de petri. MATERIAL BIOLOGICO.- Un bulbo de cebolla tierna (de cambray), con raz.
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REACTIVOS.- Solucin de acetocarmn en frascos goteros, esmalte transparente para uas. PROCEDIMIENTO: 1. Con tres das de anticipacin a la prctica, coloque un bulbo de cebolla (fresca y que tenga races largas de ms de 3 cm) en un recipiente con agua, para estimular el crecimiento de las races. 2. Elija la parte final de una raz de 4 cm de longitud, crtela por la base con un bistur y colquela sobre un portaobjetos. 3. Sujtela por la base y con el bistur elimine perfectamente la cofia (cubierta protectora cuyas clulas no estn en divisin). 4. Inmediatamente por debajo de la cofia se encuentran ya las clulas meristemticas, corte con el bistur una porcin de 0.5 cm de la parte apical y colquela dentro de un tubo de ensaye pyrex. Es recomendable procesar de 2 a 3 races, para asegurar el obtener clulas en divisin. 5. Agregar la solucin carmn-actico a que cubra la porcin de raz (aproximadamente 2 ml). 6. Se calienta el tubo hasta que la solucin carmn-actico entre en ebullicin y se mantiene durante 15 segundos. Tenga cuidado de que no se bote el contenido del tubo. 7. Transcurrido este tiempo se pasa el contenido a una caja Petri y se coloca la raz con una pinza sobre un portaobjetos. 8. Coloque sobre el portaobjetos que contiene la-s races otro portaobjetos y presione firmemente para lograr el aplastamiento y por lo tanto la separacin de las capas celulares. 9. Retire con mucho cuidado el portaobjetos de encima de la raz, coloque un cubreobjetos y presione nuevamente, cuidando de no romperlo. 10. Selle los bordes del cubreobjetos con el esmalte para uas, transparente. (Para evitar que se seque la muestra y que al enfocar con los objetivos se vaya a mover el cubreobjetos y las capas celulares) 11. Examine al microscopio con objetivo de inmersin, colocando una pequea gota de aceite de inmersin sobre el cubreobjetos, para observar clulas meristemticas en mitosis 12. Tenga paciencia para revisar clula por clula en busca de las diferentes fases de la divisin celular. REPORTE: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.

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PRCTICA NO. 7 MEDICIONES EN EL MICROSCOPIO INTRODUCCIN.- La medicin de objetos microscpicos es relativamente sencilla, aunque implica el empleo de los siguientes medios auxiliares o accesorios: ocular de medicin, micrmetro objetivo y micrmetro ocular. El micrmetro objetivo: es un portaobjetos de 76 x 25.5 mm, en cuyo centro se halla grabada una escala. La escala es por lo general, de 1 a 2 mm de longitud, y presenta de 100 o 200 divisiones, respectivamente, cada una de las cuales mide 10 micras. El micrmetro ocular: es un disco de vidrio de 12 mm de dimetro o bien un ocular especial, ambos presentan grabada una escala de 5 mm, cada milmetro tiene 10 divisiones de 100 micras cada una. En el caso del disco, ste se coloca sobre el diafragma de cualquier ocular. Y en el caso del ocular ste debe ser del mismo modelo del microscopio. Coeficiente micromtrico: es una cifra que expresa la equivalencia en micras de una divisin de la escala del micrmetro ocular, al emplear cada objetivo del microscopio. Suele denominarse factor y la operacin para obtenerlo, calibracin del microscopio. El coeficiente micromtrico es inversamente proporcional al poder de amplificacin de los objetivos utilizados. Usualmente se obtienen tres coeficientes micromtricos para cada microscopio, uno para cada tipo de objetivo (10X, 40X y 100X). Una vez que ha sido calibrado el microscopio, no deben intercambiarse ni el ocular micromtrico ni los objetivos del mismo con los oculares micromtricos u objetivos de otro microscopio. Aplicacin de las mediciones en el microscopio: en algunas reas y/o disciplinas es muy importante hacer la medicin de ciertas estructuras, por ejemplo en Parasitologa mdica para diferenciar un parsito de otro, hay que medirlos, ya que producen enfermedades diferentes y su tratamiento y complicaciones difieren. En Hematologa la medicin de clulas permite diferenciar cierto tipo de anemias. En el rae de Farmacia se requiere de cierto de tamao de las partculas de las suspensiones, para que stas cumplan con su funcin. En el rea de alimentos por ejemplo los corpsculos de grasa deben tener cierto tamao para que puedan ser absorbidos a nivel intestinal. OBJETIVO.- Que el alumno aprenda a tomar medidas microscpicas y las distintas aplicaciones que se tienen en diversas disciplinas. MATERIAL.biolgicasMicroscopio, micrmetro ocular, micrmetro objetivo, preparaciones

PROCEDIMIENTO.I) 1.- Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se enfoca como cualquier preparacin con el objetivo seco dbil, con cuidado se localiza la escala y se enfoca hasta que las lneas de la escala se vean claramente. 2.- Se coloca el micrmetro ocular en el ocular de medicin Si el microscopio es biocular, se elige uno de ellos). Si se trata del disco micrmetro, se desenrosca primero la parte inferior del ocular y despus se inserta la plaquita del micrmetro (con la divisin hacia
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arriba y evitando tocar la escala con los dedos), dejndolo caer suavemente y se vuelve a enroscar la parte inferior del ocular. Si se trata del ocular especial, se sustituye por el ocular normal. 3.- Se corrige el enfoque de ambas escalas (del objetivo y del ocular) hasta que aparezcan igualmente ntidas. 4.- Luego se colocan paralelas las escalas, muy prximas entre s o superpuestas, ayudndose con el movimiento de la platina y girando el ocular . 5.- Es necesario hacer coincidir o superponer exactamente dos lneas de ambas escalas empezando por las lneas de cero de ambas escalas, 6.- Luego busque hacia la derecha de las lneas de cero que otra lnea coincide de una escala con la otra. 7.- Cuente el nmero de divisiones que hay para cada escala entre las dos lneas coincidentes (entre el cero y la lnea de la derecha). 8.- Aplique la siguiente frmula matemtica para obtener el coeficiente micromtrico: C.M. = NDMOB x 10 / NDMO En donde NDMOB = nmero de divisiones del micrmetro objetivo; NDMO = nmero de divisiones del micrmetro ocular y 10 son las micras que mide exactamente cada una de las divisiones del micrmetro objetivo y C.M. = es el nmero de micras de una divisin de la escala del micrmetro ocular. Ejemplo: Se hacen coincidir las dos escalas de los micrmetros como en la figura siguiente, cuando la lnea 0 del micrmetro objetivo coincide con la lnea 0 del ocular, luego la lnea 27 del ocular coincide con la lnea 20 del objetivo, por lo tanto, sustituyendo en la frmula: C.M. = 20 x 10 / 27 = 7.4 micras Recuerde: El valor micromtrico encontrado de esta manera, vale nicamente para el objetivo con el cual se ha efectuado la calibracin.

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9.- Retire el micrmetro objetivo de la platina. II) Repita los pasos del 1-9 para el objetivo seco fuerte y luego para el objetivo de inmersin. III) Coloque en la platina alguna muestra que le proporcione su profesora-or, enfoque y mida una clula con la escala del micrmetro ocular, con el objetivo seco dbil, contando el nmero de divisiones que ocupa o abarca la clula de inters y aplique la siguiente expresin matemtica: NDMOM X C.M. = Talla de la estructura medida expresada en micras Donde NDMOM: es el nmero de divisiones de la escala del ocular que ocup o abarc la clula o estructura de inters; C.M.: es el factor que obtuvo para se objetivo dnde midi la estructura. IV) Repita el anterior proceso con la misma clula pero con el objetivo seco fuerte y luego con el objetivo de inmersin. V) Anote sus resultados en la siguiente hoja y haga un anlisis de los mismos. 1.- Con el objetivo 10X (seco dbil), el nmero de divisiones coincidentes con el micrmetro objetivo fueron: _________ y el nmero de divisiones coincidentes con el micrmetro ocular fueron:________ . Por tanto sustituyendo en la frmula el Coeficiente Micromtrico para ste objetivo fue: ___________________________ 2.- Con el objetivo 40X (seco fuerte), el nmero de divisiones coincidentes con el micrmetro objetivo fueron: _________ y el nmero de divisiones coincidentes con el micrmetro ocular fueron:________ . Por tanto sustituyendo en la frmula el Coeficiente Micromtrico para ste objetivo fue: ___________________________ 3.- Con el objetivo 100X (inmersin), el nmero de divisiones coincidentes con el micrmetro objetivo fueron: _________ y el nmero de divisiones coincidentes con el micrmetro ocular fueron:________ . Por tanto sustituyendo en la frmula el Coeficiente Micromtrico para ste objetivo fue: ___________________________ 4.- El tamao de la estructura que med con el objetivo seco dbil fue de _________ micras. 5.- El tamao de la estructura que med con el objetivo seco fuerte fue de _________ micras. 6.- El tamao de la estructura que med con el objetivo seco de inmersin fue de _________ micras.

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REPORTE: Informar los resultados obtenidos para cada objetivo

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PRCTICA NO. 8 IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS, PROTENAS Y LPIDOS. INTRODUCCIN: Los compuestos orgnicos ms importantes de las clulas son: los carbohidratos, las protenas, los lpidos, las vitaminas y los cidos nucleicos. Dentro de ellos, algunos como los carbohidratos y lpidos son necesarios como fuente de energa, las protenas tambin se pueden considerar como fuente de energa, pero no directamente, puesto que esencialmente actan como reguladoras del metabolismo (enzimas) o para preservar la integridad de las clulas (protenas estructurales), y como anticuerpos del sistema inmune. La protenas son los constituyentes orgnicos ms abundantes y hay varios tipos. En casi todas las partes de la clula, las protenas estn presentes de alguna manera. Ciertos tipos que se encuentran en el citoplasma, constituyen el ingrediente principal de los geles protoplsmicos, entre ellos se incluyen las globulinas. Otras protenas simples se encuentran en el ncleo, como las histonas, importantes en cuanto a la estructura y funcin de los cromosomas, algunas protenas son complejos formados por una protena y otra sustancia. Estas protenas se llaman protenas conjugadas. Las nucleoprotenas del ncleo y del citoplasma, las lipoprotenas de la membrana citoplasmtica, las cromoprotenas como la hemoglobina y muchas enzimas, constituyen ejemplos de este tipo. Los carbohidratos incluyen varios azcares, almidones y celulosa de la pared de las clulas vegetales. Los lpidos son componentes estructurales de las membranas citoplasmticas y aparecen tambin como inclusiones insolubles en el hialoplasma. Los fosfolpidos son compuestos importantes que se encuentran en distintos organelos celulares. OBJETIVO Comprobar la presencia (macroscpicamente), de carbohidratos, lpidos y protenas en productos comestibles. MATERIAL: Gradilla, tubos de ensaye, pinzas para tubo, mortero, parrilla elctrica, Vaso de precipitado de 600 ml. MATERIAL BIOLGICO: Muestras de pan, frutos, cereales, semillas, frutas secas y frescas, lcteos, ... REACTIVOS: Benedict, cido ntrico, solucin de yodo 0.1N, cloroformo, Sudn III, solucin de sacarosa, de almidn y de gelatina. PROCEDIMIENTO: 1. Marque 4 tubos y en ellas realizar las reacciones testigo o patrn que le permitir observar fcilmente la presencia de azcares, lpidos, y protenas. Tubo 1. Deposite 5 ml de solucin de sacarosa y agregar 1 ml de reactivo de Benedict. Caliente a bao mara y observe el cambio de color. Tubo 2. Deposite 5 ml de solucin de almidn y agregue 1 ml de solucin de yodo 0.1N. Observe el cambio de color. Tubo 3. Deposite 5 ml de solucin de gelatina, agregue 1 ml de cido ntrico y caliente el tubo. Anote el cambio de color. Tubo 4. Deposite 1 ml de aceite y agregue 3 ml de agua y 3 de cloroformo, enseguida agregue unas gotas e Sudn III y agite cuidadosamente. (LEJOS DE CUALQUIER MECHERO O FLAMA) y observe el resultado.
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Los 6 tubos restantes le servirn para determinar en los comestibles que llev, triturndolos previamente en un mortero, la presencia de protena, lpidos, carbohidratos sencillos y polisacridos, Anote sus resultados y compare con sus determinaciones testigo. Las pruebas anteriores demostrarn macroscpicamente, las substancias orgnicas que se encuentran en forma ms abundante en los productos comestibles que le permitirn relacionar a stos con su origen qumico. REPORTE: ALIMENTOS Y ENERGA. ESTIMA: Cada da hay que ingerir un cierto nmero de caloras si se desea mantener una buena condicin fsica. La energa que tu necesitas depende de tu edad , sexo, tamao, y el tipo de actividades que realizas. En promedio, una persona como tu requiere cerca de 1 800 kcal al da solo para mantener el calor del cuerpo y asegurar que continen todas las funciones metablicas, (metabolismo basal). Esto es lo mnimo que tienes que tomar para sobrevivir durmiendo todo el da en una cama. Pero si haces otras cosas, hay que sumar las caloras extras que se necesitan. La siguiente tabla indica el consumo de caloras al realizar algunas actividades: ACTIVIDAD Sentado(ver tv leer) Sentado (comiendo) De pie Caminar Correr Subir escaleras Baarse KCAL POR HORA o 25 35 40 100 400 800 25 ACTIVIDAD Tender la cama Nadar Bailar Andar en bicicleta Jugar ftbol Jugar basquetbol Jugar voleibol KCAL POR HORA 230 320 400 200 520 400 120

Haz una lista de tus actividades diarias y del nmero de horas que gastas en cada una de ellas. Estima la cantidad del total de caloras que requieres para hacer cada una de ellas y anota tus resultados en la siguiente tabla. ACTIVIDAD NO. HORAS KCAL ACTIVIDAD NO. HORAS KCAL REQUERIDAS REQUERIDAS

A) Cuntas kcal extras requieres al da? B) Cuntas kcal totales requieres al da? Esta energa la obtienes de los alimentos que ingieres, consulta un libro de nutricin donde encontrars el contenido de carbohidratos, grasas y protenas de algunos alimentos comunes. Organzate en equipo con tus compaeros de equipo y usen esta informacin para disear un men balanceado (desayuno, comida y cena) que les proporcione las caloras que requieren al da.
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PRCTICA N 8 OBSERVACIN DE CROMOSOMAS INTRODUCCIN En biologa, se denomina cromosoma (del griego , - chroma, color y , - soma, cuerpo o elemento) a cada uno de los pequeos cuerpos en forma de bastoncillos en que se organiza la cromatina del ncleo celular durante las divisiones celulares (mitosis y meiosis). La cromatina es un material microscpico que lleva la informacin gentica de los organismos eucariotas y est constituida por ADN asociado a protenas especiales llamadas histonas. Este material se encuentra en el ncleo de las clulas eucariotas y se visualiza como una maraa de hilos delgados. Cuando el ncleo celular comienza el proceso de divisin (cariocinesis), esa maraa de hilos inicia un fenmeno de condensacin progresivo que finaliza en la formacin de entidades discretas e independientes: los cromosomas. Por lo tanto, cromatina y cromosoma son dos aspectos morfolgicamente distintos de una misma entidad celular. Cuando se examinan con detalle durante la mitosis, se observa que los cromosomas presentan una forma y un tamao caractersticos. Cada cromosoma tiene una regin condensada, o constreida, llamada centrmero, que confiere la apariencia general de cada cromosoma y que permite clasificarlos segn la posicin del centrmero a lo largo del cromosoma. Otra observacin que se puede realizar es que el nmero de cromosomas de los individuos de la misma especie es constante. Esta cantidad de cromosomas se denomina nmero diploide y se simboliza como 2n. Cuando se examina la longitud de tales cromosomas y la situacin del centrmero surge el segundo rasgo general: para cada cromosoma con una longitud y una posicin del centrmero determinada existe otro cromosoma con rasgos idnticos, o sea, casi todos los cromosomas se encuentran formando parejas. Los miembros de cada par se denominan cromosomas homlogos. En la figura de la derecha se presentan todos los cromosomas mitticos de una nia, ordenados por parejas de homlogos y por su longitud, lo que se denomina cariotipo. Puede observarse que en ese cariotipo hay 46 cromosomas (o sea, 2n=46) que es el nmero cromosmico de la especie humana. Se puede advertir, tambin, que cada cromosoma tiene una estructura doble, con dos cromtidas hermanas que yacen paralelas entre s y unidas por un nico centrmero. Durante la mitosis las cromtidas hermanas, que son idnticas, se separan una de otra hacia dos nuevas clulas. Las parejas de cromosomas homlogos que se observan en la imagen tienen, adems, una semejanza gentica fundamental: presentan los mismos genes situados en los mismos lugares a lo largo del cromosoma (tales lugares se denominan locus o loci en plural). Esto indica que cada miembro del par de homlogos lleva informacin gentica para las mismas caractersticas del organismo. En organismos con reproduccin sexual, uno de los miembros del par de cromosomas homlogos proviene de la madre (a travs del vulo) y el otro del padre (a travs del espermatozoide). Por ello, y como consecuencia de la herencia biparental, cada organismo diploide tiene dos copias de cada uno de los genes, cada una ubicada en uno de los cromosomas homlogos. Una excepcin importante en el concepto de parejas de cromosomas homlogos es que en muchas especies los miembros de una pareja, los cromosomas que determinan el sexo o cromosomas
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sexuales, no tienen usualmente el mismo tamao, igual situacin del centrmero, la misma proporcin entre los brazos o, incluso, los mismos loci. En la imagen puede observarse, por ejemplo, que el cromosoma Y (que determina el sexo masculino en humanos) es de menor tamao y carece de la mayora de los loci que se encuentran en el cromosoma X. Para conocer o estudiar los cromososmas, se pueden usar distintos tejidos o muestras biolgicas, ya sea de humanos, vegetales o animales; por ejemplo, en el humano, sangre perifrica, medula sea, fluido amnitico y productos de la concepcin (para fines de diagnstico). En vegetales el clsico estudio se hace en clulas de cebolla. Y en animales el clsico estudio se hace en la mosca de la fruta o del vinagre, Drosophila melanogaster. Aunque las tcnicas especficas difieren segn el tejido usado, el mtodo bsico para obtener preparaciones de cromosomas es as:

Recoleccin de la muestra y preparacin inicial. Cultivo celular. Adicin de un inhibidor de la mitosis para detener las clulas en metafase. Recogida de las clulas. Este paso es muy importante para obtener preparaciones de alta calidad. Implica exponer las clulas a una disolucin hipotnica, seguida de una serie de disoluciones fijadoras. Esto hace que las clulas se expandan, de modo que los cromosomas se extiendan y puedan examinarse individualmente. Tincin de las preparaciones cromosmicas para detectar los posibles cambios numricos y estructurales.

OBJETIVO.- Que el alumno conozca los cromosomas, su morfologa e importancia a nivel biolgico, as como el que aprenda a realizar una tcnica de estudio de los cromosomas. MATERIAL.- Microscopio, laminillas de coleccin permanentes, material de acuerdo a la tcnica a realizar y de acuerdo al material biolgico (sangre, cebolla o la mosca de la fruta o del vinagre, Drosophila melanogaster) Procedimiento: Cuando se trata de los glbulos blancos, se toma una muestra de sangre por su fcil accesibilidad. Siembra: se realiza agregando aproximadamente 1 mililitro de sangre entera heparinizada a un medio de cultivo enriquecido con suero fetal bobino, antibiticos y mitgenos, lo cual estimular el crecimiento y divisin de las clulas. Incubacin: Se mantiene a 38.0 grados centgrados con una atmsfera de CO2 al 5 % y humedad por 72 horas idealmente. Cosecha: Se agrega colchicina a la muestra para detener los ncleos ceulares en metafase, posteriormente se cenfrifuga la mezcla para retirar el sobrenadante (suero sanguneo y medio de cultivo). Se agrega solucin hipotnica de cloruro de potasio para romper las membranas celulares y para finalizar el paso de la cosecha se realizan 3 lavados con una solucin de metanol-cido actico 3:1. Goteo: Posterior a los lavados, por medio de centrifugacin, se obtiene un botn celular blanco, el cual se suspende en la misma solucin fijadora metanol-cido actico 3:1 y se
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procede a gotear en un portaobjetos a unos cuantos centmetros, esto es con el objetivo de "reventar" las clulas y obtener los cromosomas. Envejecimiento: En este paso se espera a que los cromosomas pierdan humedad. Se puede aplicar calor al portaobjetos para deshidratar la muestra. Tincin: Existen muchos tipos de tinciones para observar los cromosomas. La ms utilizada es la tincin con colorante Giemsa, se conoce como tcnica de bandas GTG. En este caso se expone la muestra del portaobjetos a tripsina, con el objetivo de desnaturalizar algunas de las protenas constitucionales de los cromosomas. Posteriormente se tien con dos colorantes, Giemsa y Wrigth, en algunos laboratorios puede emplearse un solo colorante, pero el empleo de los dos mejora la calidad del resultado, puesto que facilita el anlisis al microscopio para el citogenetista creando un contraste de color en las bandas que se formaron al emplear la tripsina. Por medio de estas bandas podemos distinguir las caractersticas de un cromosoma y determinar si es normal o presenta alguna anomala estructural. Existen otras tcnicas de tincin, como bandas NOR, ICH, bandas Q, bandas R, tcnicas para teir centrmero y heterocromatina. Con este tipo de tcnicas se puede llegar a realizar un diagnstico citogentico acerca de una enfermedad cromosmica. Lectura: El ltimo paso consiste en leer por lo menos 20 metafases, es decir 20 clulas reventadas y formar un cariotipo o cariograma, donde se acomodan los cromosomas por grpos segn el tamao y la localizacin del centrmero. REPORTE: Dibuje los cromosomas que observo y anote los nombres de cada de las partes que lo constituyen.

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CRITERIOS DE EVALUACIN
La acreditacin del Laboratorio de Citologa te da derecho a la evaluacin de la Teora. Asistencia 100%. (dos retardos equivalen a una falta). Elaboracin en equipo de un mapa conceptual de cada sesin de laboratorio. Exmenes parciales Exposiciones por equipo

BIBLIOGRAFA
1- Thompson, James S. Gentica mdica . Barcelona : Salvat Editores, 1975 2- Wells, Albert Laurence The microscope made easy . New York : Frederick Warne, 1957 3- Bernis Matev, J. Atlas de microscopa . Barcelona : Juver, 1973. 4- De Haro Vera, A. Atlas de biologa / Barcelona : Jover, 1974. 5- Castillo, Luis Felipe del. El fenmeno mgico de la smosis / Mxico : F.C.E. ; 1986, reimpresin 6- Herrath, Ernest Von. Atlas de citologa, histologa y anatom Barcelona : cientifico medica, 1975. 7.- Karp Gerald. Biologa celular y molecular. Edit. Mc Graw-Hill Interamericana. 8.- Albert Bruce, Bray Denis. Biologa molecular de la clula. Edit. Omega. 9.- De Robertis, Eduardo D.P. Biologa molecular. Edit. El Ateneo. ltima edicin 10.- Lodish, Harvey. Biologa molecular y celular. Edit. Mdica Panamericana. 11.- Paulsen Douglas F.. Histologa Bsica. Edit. Manual Moderno 12.- Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiologa mdica. Edit. Manual Moderno

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Reglamento del Laboratorio de Biologa

El alumno deber: 1- Siempre presentarse con bata blanca, incluso si en la sesin slo se llevan a cabo seminarios y o exmenes. 2- Cumplir con las actividades y o tareas solicitadas por la profesora. 3- Asistir puntualmente a las sesiones, slo tendr 10 minutos de tolerancia, una vez que se pase lista, si llega despus, se considerar como falta. 4- Colocar fuera de las mesas de trabajo, mochilas, suteres, chamarras u otros objetos que no requiera para la realizacin de la prctica. 5- Traer el material biolgico o de otro tipo solicitado por la profesora. 6- Siempre traer guantes, cubreboca y perilla para las pipetas. 7- Siempre traer jabn y papel sanitario para el aseo de las manos y para la limpieza del material de vidrio y de las mesas de trabajo. 8- Solicitar el material que requiere para las prcticas por medio de un vale, ya sea a la profesora o a la persona encargada del rea del material y reactivos. 9- Manejar con mucho cuidado el material, las soluciones o reactivos. 10- Siempre pipetear las soluciones, con la perilla correspondiente y nunca con la boca. 11-Dejar los frascos de las soluciones en el lugar de donde los tom, despus de su uso. 12-No desechar soluciones de colorantes, papeles, muestras biolgicas slidas (vegetales), ni material de vidrio roto (portaobjetos, cubreobjetos, tubos) en las tarjas. 13- No dejar pipetas contaminadas directamente sobre las mesas. 14-Colocar el material contaminado en las bolsas o recipientes correspondientes, de acuerdo a la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin ambiental-Salud ambiental- Residuos peligrosos biolgicos infecciosos- Clasificacin y especificaciones de manejo. 15-Manejar y cuidar los microscopios de acuerdo a la informacin proporcionada al inicio del curso. 16-Anotarse en la libreta que est al lado del microscopio que utilice, y en su caso reportar cualquier anomala o desperfecto hallado en el microscopio antes o durante su manejo. 17-Limpiar el aceite de inmersin de los objetivos del microscopio, de acuerdo a las indicaciones dadas por la profesora. 18-Al trmino de la prctica, dejar desconectados los microscopios, cubrir el microscopio con su correspondiente funda y dejar cerrada la caja con llave. 19-Al trmino de la prctica, dejar limpias las mesas, libres de papeles, material biolgico o de otro tipo. 20- Al concluir la prctica, entregar el material que emple segn las indicaciones de la profesora, as como solicitar la devolucin del vale. 21- En caso de romper algn material, deber reponerlo a la brevedad posible, para lo cual se le retendr el vale. 22- En caso de algn incidente o accidente, deber informarle a la profesora, para que se tomen las medidas pertinentes. 23-Antes de retirarse del laboratorio, checar que no se le olvide algo, ya que la profesora no se har responsable por manuales, celulares, libros, batas, etc, olvidados.
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