P. 1
Anti Bio Gram A

Anti Bio Gram A

|Views: 254|Likes:

More info:

Published by: Monica Alexandra Poenaru on Nov 27, 2011
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOC, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

03/12/2015

pdf

text

original

MICROBIOLOGIE ANTIBIOGRAMA

DEFINITIE : metoda de testare a sensibilitatii/ rezistentei la antibiotice si substante chimioterapice, a unei tulpini bacteriene izolate si identificate, dintr-un prelevat patologic. INDICATIILE antibiogramei : - in infectii cu etiologie bacteriana, determinate de germeni cu sensibilitate variabila la antibiotice, - in infectii bacteriene severe, sistemice (septicemii, endocardite, meningite, peritonite etc) care necesita spitalizare si tratament de lunga durata, - in infectii bacteriene localizate, cu tendinta la cronicizare (infectii urinare, biliare, otice, osteomielite, escare etc) in care exista riscul selectarii de tulpini rezistente la antibiotice, datorita persistentei indelungate in organism si supuse permanent presiunii selective a diverselor scheme de administrare a antibioticelor, - in infectii intraspitalicesti : determinate de tulpini bacteriene (Staphylococcus aureus meticilino- rezistent/ MRSA ; Enterococcus faecium rezistent la vancomicina/ VRE ; E. coli, Klebsiella pneumoniae producatoare de beta lactamaze cu spectru extins/ ESBL ; Acinetobacter baumanni, Pseudomonas aeruginosa multultidrog rezistenti etc,) selectate in sectii de terapie intensiva sau diverse profile chirurgicale, datorita tratamentelor cu antibiotice cu spectru larg si de lunga durata, CONTRAINDICATIILE antibiogramei: - agentul etiologic microbian are o sensibilitate cunoscuta si deocamdata constanta : Ex : sensibilitate la penicilina a tulpinilor de Streptococcus pyogenes (Str. beta hemolitic grup A), in infectii cu evolutie clinica usoara, tendinta de vindecare spontana, in care tratamentul antibiotic este standard, conform protocoalelor de tratament, Conditii pentru obtinerea unor informatii corecte: - stabilirea cu exactitate ca germenul izolat este agentul etiologic real (corelarea rezultatelor microscopiei/ morfologia si colorabilitatea bacteriilor intra- si extraleucocitare, cu caracterele culturale si manifestarile clinice), * bacteriile izolate din situsuri anatomice normal sterile (LCR, sange, lichid pleural, peritoneal, colectii inchise etc) sunt de cele mai multe ori, agentul cauzal al infectiei, * bacteriile patogene izolate in culturi mixte, cu flora de asociatie saprofita, trebuie diferentiate, identificate si testate pentru cunosterea sensibilitatii la antibiotice, - germenul testat pentru aprecierea sensibilitatii la antibiotice si chimioterapice, trebuie sa fie obligatoriu, in cultura pura,

1

.substante antimicrobiene: antibiotice si chimioterapice (microcomprimate de 6 mm. care contine factori de crestere. metode cu citire automata (Microscan.pentru testarea sensibilitatii hemofililor.compozitie standard si consistenta corespunzatoare. nu contine inhibitori ai actiunii substantelor antimicrobiene). din jurul microcomprimatului impregnat cu antibioticul de testat. 2 .10%). neisseriilor. prezentand o scadere constanta a gradientului de concentratie. .asigura reproductibilitate de la lot la lot.4. ajunsa in solutie.2 – 7.METODE: 1. de la marginea discului spre periferie. . . . se utilizeaza pentru antibiograma un mediu special.geloza Mueller Hinton (valoarea nutritiva permite dezvoltarea majoritatii germenilor. .este izotonic pentru sangele care trebuie adaugat in anumite situatii (testarea sensibilitatii streptococilor beta – hemolitici. METODE DIFUZIMETRICE (KIRBY BAUER) 2. V. Cu tehnica difuzimetrica nu se pot testa decat germenii cu crestere rapida si constanta. criteriile de interpretare.contine concentratii adecvate de Ca si Mg. care. .test. ATB Expression/bio Merieux etc) 1. deci.microcomprimatul absoarbe apa din mediu. impregnate cu anumite cantitati. va difuza in mediu conform legilor fizice ce conditioneaza difuziunea moleculelor in gelul de agar. X.Hinton se suplimenteaza cu sange berbec 5. Vitek. Sensibilitatea bacteriei la un anumit antibiotic este apreciata dupa marimea diametrului zonei de inhibitie a cresterii.pH : 7. .necesara dizolvarii substantei antimicrobiene active. au loc urmatoarele procese fizico – chimice : . Mediul de cultura : geloza Mueller . . tehnica E. geloza Mueller. 1. . Tehnica difuzimetrica Kirby Bauer: * Materiale necesare: germenul de studiat (inocul). * Principiul metodei : consecutiv depunerii de microcomprimate impregnate cu antibiotic pe suprafata unui mediu solid insamantat cu cultura bacteriana. pneumococilor.asigura o dezvoltare buna a majoritatii germenilor patogeni cu crestere rapida. METODE CANTITATIVE: tehnica dilutiilor in medii de cultura solide sau lichide.compozitie definita.Hinton .nu exercita antagonism fata de agentii antimicrobieni. diferite. de substanta antibacteriana activa. * Standardizarea conditiilor tehnice si a reactivilor de lucru : Fiecare din componentele ce concura la efectuarea antibiogramei pot influenta diametrul zonei de inhibitie si.

Germenul de testat : . se mentin la temperatura camerei 30 min pentru echilibrare termica. . lichid pleural.se va respecta o distanta de 15 mm de la marginea placii si aprox.cu ajutorul unui tampon steril de vata se inoculeaza placa. . . se obtine o cultura bacteriana uniform confluenta. si indeosebi. stocarea indelungata duce la aparitia determinantilor de rezistenta. NOR etc.interzisa folosirea comprimatelor cu termen de valabilitate depasit. . 5μg…30 μg). pentru a ajunge toata suprafata lui in contact cu cultura sau cu ajutorul unui dispozitiv numit « dispencer ».set de microcomprimate pentru bacili Gram (-) izolati din infectii digestive. urina). eventual incarcatura de antibiotic pe microcomprimat : 1μg.selectionarea setului de microcomprimate pentru antibiograma : . Substante antimicrobiene : .inainte de utilizare. .pe o placa de 90 mm diametru se pot pozitiona 8 comprimate. . . pana la acoperirea uniforma a suprafetei mediului.contraindicata efectuarea antibiogramei din flora bacteriana mixta. .unul pentru infectii urinare.unul pentru germeni Gram – pozitivi.asezarea spatiala a microcomprimatelor se face pe grupe de agenti antimicrobieni. 2. . . . preparat din 4 – 6 colonii identice.grosimea stratului de geloza : 4 mm (25 ml mediu pentru diametrul placii de 90 mm). caldura.5 unitati MacFarland).depunerea microcomprimatelor se face cu pensa oftalmologica. - 3 .2 sau 3 seturi prin combinarea truselor de microcomprimate distribuite : . tip Iris.antibiograma efectuata imediat ce se izoleaza si identifica germenul .daca inoculul si insamantarea placilor s-a efectuat corect.antibiograma direct din produs se face in cazul produselor biologice normal sterile si contaminate cu un singur germen ( LCR. umiditate.placile insamantate se lasa la temperatura camerei pentru uscarea inoculului inainte de depunerea microcomprimatelor.agentul etiologic de testat sa fie in cultura pura. . CIP.sunt comprimate cu diametrul de 6 mm. . . . * Inoculul : . acelea care au tendinta de a castiga rapid rezistenta fata de medicamentele de uz clinic. . .sa fie reprezentativ. . hemocultura. marimea inoculului riguros standardizata nefelometric (turbiditate standard : 0.se testeaza numai bacteriile cu dezvoltare rapida. iar pe fata este imprimat simbolul respectiv (simbolul denumirii antibioticului: A. 24 mm intre marginile comprimatelor sau 30 mm distanta intre centrele lor.efectuarea antibiogramei indicata pentru acele specii bacteriene a caror CMI nu e o constanta dinainte previzibila. 3. prin rotare in 3 directii diferite.unul pentru germeni Gram – negativi. TE. . uniforma.insamantarea inoculului pe placi se face la max 15 min de la momentul prepararii.conservarea microcomprimatelor : la adapost de lumina. . presand usor fiecare microcomprimat.

intermediar/ I. pneumocilor. timp de 18. . in lumina reflectata. ale caror antibiotice sunt strict necesare. dupa indepartarea capacului cutiei Petri. in functie de felul germenilor si localizarea infectiei. . bazat pe interpretarea conform Standardului CLSI 2008. testarea pe culturi mixte. lipsa controlului de calitate.pe mediile fara sange masurarea diametrului se face direct pe fundul placii. dupa care se efectueaza citirea. . 4 . in categoriile: sensibil/ S. masurand diametrul zonei de inhibitie. In Laboratorul de Microbiologie Clinica se folosesc seturile mentionate. predominant sensibile. colonii ce reprezinta mutante rezistente in cadrul unei populatii microbiene. aparute in zona de inhibitie.exprimarea rezultatelor se face in acord cu standardul CLSI. prin incadrarea marimii diametrului de inhibitie a cresterii culturii. folosirea microcomprimatelor cu termen de valabilitate depasit. retesta sensibilitatea la antibiotice. pe germeni cu dezvoltare lenta.daca s-a adaugat sange. perioada de incubare prea scurta. . Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. cu tulpini de referinta.20 ore. E. suplimentata cu 5% CO2 (exicator cu lumanare sau plicuri geeneratoare de CO2). . rezistent/ R. in aerobioza. exprimarea si interpretarea rezultatelor : . intre aplicarea lor si incubare. se incubeaza in atmosfera aeroba. depasirea intervalelor de timp intre prepararea inoculului si insamantare. produse pluricontaminate. * Se iau in consideratie : .10 % sange de berbec.citirea se efectueaza cu ochiul liber. Placile cu mediu Mueller Hinton cu 5. zona de inhibitie se determina prin masurarea la suprafata. folosite pentru testarea sensibilitatii streptococilor. se foloseste programul WHONET de interpretare si raportare a rezistentei germenilor la antibiotice. in diferite directii. in mm. bine dezvoltate. inocul nestandardizat.astfel de colonii se vor rerepica. meningococului etc. in lumina reflectata. mediu necontrolat din punct de vedere al pH – ului.se supun citirii numai placile care prezinta o cultura corespunzatoare dpdv al puritatii si densitatii. identifica. de 2-3 ori. Control de calitate : tulpini de referinta – Staphylococcus aureus ATCC 25923. intre insamantare si aplicarea comprimatelor.Placile de antibiograma se incubeaza la 37ºC. * Surse de eroare : alt mediu decat geloza Mueller – Hinton.colonii mari. cu o rigla. coli ATCC 25922. citire inexacta a diametrelor zonelor de inhibitie sau transcrierea lor eronata. * Citirea.

incubare 18-20 ore la 37ºC.5 MacFarland). * CMB: concentratia minima bactericida (cantitatea cea mai mica de antibiotic care determina efect bactericid). * Indicatiile determinarii CMI: . din tulpina de testat. ! CMB corespunde ultimei concentratii de antibiotic care a determinat distrugerea completa a bacteriilor (efect bactericid). .antibiogramele cantitative exprima valoarea CMI si CMB: * CMI: concentratia minima inhibitorie (cantitatea cea mai mica de antibiotic. meningite purulente. . sub forma de sectoare de cerc: in fiecare sector se descarca o ansa calibrata incarcata cu inocul standardizat (0. de tulpina bacteriana de testat. * Curbele de concordanta: evidentiaza relatia existenta intre diametrul zonei de inhibitie a cresterii si CMI. ! Ultima dilutie care a inhibat cresterea bacteriana corespunde valorii CMI (ultimul tub ramas limpede) Pentru determinare CMB se fac subculturi (treceri) pe medii solide. endocardite. osteomielite etc. Ca în orice altă 5 . . .dilutiile de antibiotic se realizeaza in geloza Mueller Hinton. . Metode cantitative : .CMI: sectorul de placa care contine ultima dilutie de antibiotic. în acelaşi timp.germenii care au un CMI <= 3 mg/L se considera ca sunt influentati de tratamentul cu antibioticul respectiv si procesul inflamator are o evolutie favorabila. fara antibiotic * Martor (-): bulion cu antibiotic. c) Tehnica E. * Interpretare: . ce inhiba cresterea bacteriana. capabila sa inhibe dezvoltarea bacteriilor).infectii sistemice. grave: septicemii. din tuburile ramase vizibil limpezi (fara crestere bacteriana). .se adauga in fiecare tub cantitate fixa..CMI si CMB se exprima in mg/ L sau μg/ mL a) Tehnica dilutiilor in mediu lichid: . standardizata ca densitate a inoculului.se folosesc martori: * Martor (+) de crestere a culturii/ bulion MH cu tulpina de testat.se prepara in bulion Mueller Hinton dilutii binare. fara cultura bacteriana.2. . b) Tehnica dilutiilor in mediu solid: .20 ore la 37ºC.incubare 18.test se bazează pe combinarea celor două principii: de diluţie şi difuzie a diferitelor gradiente de concentraţii de antibiotic. de antibiotic (concentratii descrescande de substanta antibacteriana).placa se imparte in cadrane.

metoda E.test sunt marcate cu scala valorilor MIC în µg/mL.5 – 1) are loc un transfer imediat al antibioticului de pe suportul inert. creşterea bacteriană a devenit vizibilă. Stripurile de plastic E. iar gradientul de antibiotic predefinit exponenţial este fixat şi stabilizat pe suprafaţa stripului. 6 . în mediul agarizat. gradul de sensibilitate microbiană.test exprimă direct. mai puţin în jurul unei elipse. de plastic. cantitativ. După incubare. prin valori CMI.metodă bazată pe diluţii. Când stripul este aplicat pe suprafaţa mediului de cultură inoculat cu suspensia bacteriană standardizată nefelometric (0.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->