UNIVERSIDAD DE LA CAADA BIOTECNOLOGA Practica 1 Propagacin del hongo Ganoderma lucidum. Ma. Teresa Zambrano Rodrguez, Ma.

de Lourdes Farfn Martnez

INTRODUCCIN La investigacin de microorganismo es una de las reas ms importantes debido a la produccin de antibiticos, enzimas, hormonas entre otras, ya que estudia la aplicacin controlada y deliberada de agentes biolgicos sencillos (clulas vivas o muertas, o componentes celulares) en operaciones tcnicamente beneficiosas, bien sea de fabricacin de productos o como operacin de servicio. Para que los microorganismos sean viables, es importante conocer los diferentes medios en las que puedan propagarse, la cual posea los nutrientes necesarios para el crecimiento de los mismos. A continuacin se presenta la clasificacin de los medio de cultivo: [1] - De acuerdo a su consistencia; lquidos, slidos, semislidos. - De acuerdo a su composicin; definidos y complejos. - De acuerdo a su funcin; Selectivos, diferenciales, medio de enriquecimiento y medio enriquecido. Un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos, es el agar papa dextrosa (pda) Beauveria, Paecilomyces, Lecanicillium (Verticillium) y Metarhizium, los ms importantes hongos parsitos de insectos, al igual que los parsitos de plantas y los hongos saprofitos crecen muy bien y esporulan en este medio. Cuando se aslan hongos a partir de insectos colectados del suelo, es recomendable acidificar el medio con cido lctico al 25%. Se agregan 3 4 gotas sobre el agar solidificado de la placa con el objeto de evitar el desarrollo de bacterias.Con los mismos ingredientes, excluyendo el agar, se obtiene el medio lquido de Papa Dextrosa (PD), muy utilizado para la preparacin del inoculo en forma masiva [1]. Uno de los hongos que se propago en el medio PDA fue Ganodermalucidum, es un tipo de hongo que crece en la zona ms al norte de los bosques orientales. Consumido por los humanos desde hace ms de cuatro mil aos se ha considerado como el Rey de los productos naturales por sus mltiples propiedades preventivas y curativas y por estimular la longevidad.El crecimiento de este hongo va de 5 a 7 das. [3]

Nomenclatura y clasificacin
Categora: Basidiomycetes Sinnimos: Boletuslucidus Etimologa de lucidum: Del latn lucidum= brillante, lucido. En Ganoderma, por la lustrosidad de superficie. [2]

28 de Noviembre de 2011

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Reino Fungi Divisin Basidiomycota SubfilumAgaricomycotina Clase Agaricomycetes Subclase Incertaesedis Orden Polyporales FamiliaGanodermataceae Genero Ganoderma Especielucidum. [2]

Descripcin Es un hongo suave (en estado verde), coriceo, y plano, con un sombrero conspicuo rojo barniz, arrionado en forma de tapa y de color blanco o marrn en la zona de los poros. [3] Microscopa: basidiomas de coriceos a leosos, con una estipe (estructura de soporte) en posicin central o lateral, concntricamente, de 3 a 10 cm de longitud y 2-3cm de espesor; margen obtuso y algo incurvado, ondulado, blanquecino, amarillento o rosado, ms claro que los tubos. La superficie estrilest cubierta por una capa ms o menos brillante como la laca, no resinosa, crnea al final, que puede ser cuarteada con una ua y que se funde ante una fuente de calor; esta capa tiene un espesor de unas 100m y es de color amarillo anaranjado al principio y luego pardo rojizo, prpura e incluso negruzco al envejecer, figura1. [2]

Figura 1.Ganoderma lucidum Microscopa: Las hifas generativas son hialinas y ramificadas, con paredes delgadas, septadas, de hasta 2.5m de dimetro. Hifas vegetativas sin septos, con paredes de espesas a solidas, de 4 a 6m de dimetro en el contexto; estn formadas por un tramo hifal no ramificado y por otro tramo muy ramificado. La cutcula est recubierta en su parte externa de un estrato brillante compuesto por elementos cilndricos-clavados. Basidios hialinos, ampliamente elipsoidales, basiodiosporasms o menos ovoidales, con el pice truncado, color pardo claro, con el exosporio hialino y el endosporio pardo claro y verrugoso, figura 2 y 3. [2]

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UNIVERSIDAD DE LA CAADA BIOTECNOLOGA Practica 1 Propagacin del hongo Ganoderma lucidum. Ma. Teresa Zambrano Rodrguez, Ma. de Lourdes Farfn Martnez Hbitat Es un hongo frecuente que crece a finales de primavera a otoo, en la base de troncos de diversos planifolios en especial de arceo en ocasiones sobre conferas(figuras 2 y 3). [2]

Figura 2 y 3. Esporas y micelios de Ganodermalucidum Bioqumica Es la nica fuente conocida de un grupo de triterpenos, conocido como cidos ganodricos (figura 4), que tienen una estructura molecular similar a las hormonas esteroides(figura 5). [2]

Figura 4. Acido ganodrico

Figura 5. Hormonas esteroides

Es una fuente de polisacridos biolgicamente activa con propiedades medicinales, y contiene tambinvitaminas y minerales.[2] A diferencia de muchos otros hongos, que tienen hasta un 90% de contenido de humedad, esta slo contiene alrededor de 75% de agua [2].

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UNIVERSIDAD DE LA CAADA BIOTECNOLOGA Practica 1 Propagacin del hongo Ganoderma lucidum. Ma. Teresa Zambrano Rodrguez, Ma. de Lourdes Farfn Martnez OBJETIVO Propagar el hongo Ganoderma lucidum, en cajas Petri.

EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS Equipo Campana de flujo laminar Parrilla con agitador Incubadora Materiales 1 caja petri 2 tubos de ensaye 1 bistur 1 matraz 1 agitador magntico 1 mechero de alcohol Algodn Manta de cielo Reactivos Agar papa dextrosa Alcohol Benzal

METODOLOGA Preparacin del medio de cultivo: 1. Se pes 19.5g de agar PDA en 500ml de agua destilada. 2. Se calent la mezcla hasta su completa clarificacin, y se dejo hervir aproximadamente 1 minuto. 3. Se esteriliz el preparado en la olla exprs al igual que todo el material a utilizar, a una temperatura de 121C y una presin de 1 atm durante 15min. 4. El preparado se vaci en las cajas petri (50ml c/u), tubos de ensaye (8ml c/u) y matraces elermeyer (60ml c/u). 5. Para los tubos de ensaye se tuvieron que ponerlas inclinadas antes de su refrigeracin. 6. Despus de un tiempose tomo una caja petri y se coloco en la incubadora durante 24 horas a una temperatura de 35C, para la prueba de esterilidad. 7. Todo el material con agar se coloco en el refrigerador.

Resiembra de Ganoderma lucidum 1. Se limpio el rea de trabajo (flujo laminar) con benzal y los utensilios con alcohol. 2. Se sembr la G. lucidum en 4 cajas petri con la ayuda de un bistur estril, inoculando un botn de micelio del hongo. 3. Se prendi el mechero de alcohol para esterilizar el asa que se utilizo. 4. Se sembr la G. lucidum en 3 matraces elermeyer con la ayuda de una asa bacteriolgica. 5. Se sembr la G. lucidum en 15 tubos de ensaye con la ayuda de una asa bacteriolgica por el mtodo de salpicado.

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RESULTADOS El crecimiento del hongo es tardado ya que se sealiza que el crecimiento va desde los 5 a 7 das. El crecimiento del hongo resembrado Ganoderma lucidum es el resultado de la fase de crecimiento en que se presento la muestra. En el cuadro (Tabla 1) de abajo se muestra las cantidades que se resembraron, de las cuales hubieron contaminados y no contaminados. Resiembra Tubo de ensaye Matraz Erlenmeyer Caja Petri Tabla 1. La propagacin del hongo Ganoderma lucidum libre de contaminacin en los tubos de ensaye con agar PDA fue del 46.66 %, en el matraz elermeyer fue del 0% y en las cajas petri fue del 0% tambin, ya que se contaminaron. Cantidad 15 3 4 Contaminados 8 3 4 No contaminados 7 0 0

DISCUSIN Existen diversos factores que pudieron influir en la contaminacin de los tubos de ensaye, matraz elermeyer y cajas petri, por ejemplo: La contaminacin del bistur en el proceso de resiembra, ya que en las primeras dos cajas petri no presentaron contaminacin alguna y las posteriores resiembras se observaron contaminacin de otros microorganismos. La contaminacin pudo haber ocurrido por estar hablando y sin utilizar el mechero de alcohol. Pudo haberse alejado del rea de esterilidad. Tambin podra haber sido por no esterilizar bien el asa bacteriolgica o por tocar las superficies de las cajas y tubos.

La contaminacin de los medios de cultivo fueron posiblemente bacterias, para poder identificarlas, un mtodo fcil, accesible y rpido es una tincin de Gram.

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CONCLUSIN Se quera hacer esporular a G. lucidum y posteriormente como un microorganismo fermentador. Pero este hongo no esporula in vitro si no en su forma crecida a la intemperie (forma fructfera). Si se quera saber su forma de crecimiento se tena que resembrar dos veces para luego tomar una muestra y estandarizar su concentracin, posteriormente resembrarla otra vez.

BIBLIOGRAFA

[1] MCD-LAB, S. A. de C. V. Especificaciones de agar dextrosa y papa, disponible en: http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_dextrosa_papa.pdf [15/11/11] *2+Mndez V. Juan. L. Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst, Asturnatura.com *en lnea+. Num. 255. Disponible en: http://www.asturnatura.com/especie/ganoderma-lucidum.html#mas-informacion[14/11/11] [3] Ganoderma: La pgina dedicada al conocimiento y a la informacin permanente sobre los estudios cientficos del Ganoderma lucidum. Disponible en: www.ganoderma.es [19/11/11]

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