Dorel Lucian RADU, MD, PhD Conferentiar universitar UMF Carol Davila

Hematopoieza

(haima=sange, poiesis=formare)

Hematopoieza

Hematopoieza are functia de a produce elementele si celulele din sangele periferic. Hematopoieza are rolul de a mentine homeostazia elementelor sanguine.

Hematopoieza

Celulele stem pluripotente eritropoieza productia eritrocitelor granulocitopoieza (mielopoieza) productia granulocitelor monocitopoieza megacariocitopoieza - trombocitopoieza limfopoieza productia de limfocite

Hematopoieza

Celule stem pluripotente Celule progenitoare (CFU unitati formatoare de colonii) Celule precursoare (......blast, .....cite) Procese celulare: proliferare, diferentiere, moarte Celule stem pluripotente sunt apte de autoreinoire si totodata genereaza toate tipurile de celule sanguine (dupa o serie de procese la nivelul maduvei osoase)

Celule implicate in hematopoieza

Organizare
Celule stem pluripotente

Celule progenitoare

Celule precursoare

)Celule diferentiate (mature

Celulele stem
1.

Celulele stem au capacitatea de autoreinnoire Celulele stem formeaza tipuri celulare diferite si diferentiate ireversibil. Celulele stem pot functional sa reconstituie un tesut in vivo

1.

1.

Tipuri de celule stem

Celule totipotente Celule stem pluripotente Celule stem multipotente

Originea celulelor stem

Celulele stem embrionare (ESCs)

Deriva din embrion in special din stadiul de blastocit Au capacitate de autoregenerare Mentin capacitatea de a forma celule stem pluripotente Sunt parte a celulelor tesuturilor specifice a organismului dupa nastere Sunt celule destinate sa se diferentieze Exista mai multe tipuri de celule stem adulte identificate: hematopoietice, mesenchimale, neurale, hepatice, muschi, etc.

Celule stem (somatice)

Hemangioblastul
Studiile au demonstrat existenta unor celule la embrion ce au potential de formare atat a celulelor sanguine cat si a celulelor endoteliale vasculare. Celulele au fost numite hemangioblaste si apar din mezodermul embrionar.

Hematopoieza in stadiile precoce ale embriogenezei

1. Hemangioblaste in insule de celule sanguine la nivelul sacului vitelin. 2. Hemangioblastele sunt responsabile pentru hematopoieza de la nivelul ficatului fetal si a maduvei osoase hematogene.

Originea celulelor la nivelul tesuturilor hematopoietice

1.

2.

3.

Hematopoieza la nivelul sacului vitelin apare in saptamana 3-6 de dezvoltare embrionara. Se gasesc eritrocite nucleate, granulocite si macrofage, nu sunt observate limfocite. Hematopoieza la nivelul embrionului (ficat si splina) apare intre saptamanile 6 - 22 de gestatie. Sunt prezente eritrocite anucleate, seriile mieloide si limfocite. Maduva osoasa hematogena apare din saptamana 20 de gestatie si este prezenta pe toata durata vietii. Exista toate tipurile de celulele sanguine. Limfocitele T se dezvolta in timus.

Hematopoieza la nivelul mezodermului sacului vitelin

Sacul vitelin este primul loc al hematopoiezei unde celulele mezenchimale se vor diferentia in celule numite hemangioblaste. Aceste celule formeaza celulele endoteliale si celulele sanguine.

Hematopoieza la nivelul ficatului embrionar

Ficatul este colonizat de celule hematopoietice stem Toate tipurile de celule sanguine cu exceptia limfocitelor T se vor diferentia in ficatul si splina din stadiul organismului de embrion

Celule la nivelul ficatului embrionar Neutrofile (n)

Maduva osoasa hematogena

Celulele stem vor coloniza canalele medulare ale oaselor lungi si in cavitatile oaselor spongioase. Toate seriile celulelor sanguine (exceptie limfocitele T) se vor diferentia in maduva osoasa hematogena

Recoltare de maduva osoasa

Procedura sterila dupa anestezie locala Creasta iliaca posterioara Stern, Tibia Aspirat: lichid si celule Biopsie

Maduva osoasa hematogena

Doua tipuri de lame pentru microscopie:

Sectiuni tisulare: arata toate componentele (stroma + vase sanguine + adipocite + cordoane hematopoietice) Aspirat -> frotiu: sunt evidentiate celulele din seriile celulare si progenitorii.

Maduva osoasa hematogena

Coloratia May Grunwald Giemsa Coloratia Wright

Maduva osoasa hematogena

Maduva osoasa - organ vascular Maduva osoasa rosie Maduva osoasa galbena

MO rosie

MO galbena MADUVA OSOASA

Maduva osoasa hematogena

Structura maduvei hematogena - stroma (colagen tip I si III, fibronectina, laminina si proteoglicani) - cordoane hematopoietice - capilare sinusoidale Stroma : 3D retea de fibre de reticulina, in cadrul careia se gasesc celule reticulare, celule hematopoietice, macrofage.

Maduva osoasa hematogena

Maduva osoasa hematogena

~5,000,000 eritrocite/ L ~5 L de sange (persoana de 70 Kg) = 5 x 106 L X 5 x 106 ~ 25 x 1012 eritrocite in organism Durata de viata a eritrocitelor = 120 zile astfel ~2 x 1011 eritrocite/zi sau ~8,000,000,000 eritrocite/ora

Maduva osoasa hematogena

~10,000 leucocite/ L (~1/2 limfocite, ~1/2 PMNs) ~5 L de sange (persoana de 70 Kg) = 5 x 106 mL ~ 5 x 1010 leucocite in organism (fara cele din MO) Viata medie a leucocitelor este variabila PMNs ~ 24 ore, limfocite de la zile la ani (celule memorie) Estimare ~ 2 X 1010 celule noi/zi Productia de eritrocite creste in anemie si de leucocite in sepsis

Studii asupra celulelor stem hematopoietice

In mod extensiv pe modele murine Se pot recolta

Adult maduva osoasa, sange periferic Peri-natal sange din cordonul ombilical

Teste functionale

in vitro test clonogenic (formare de colonii) in vivo la soareci transplant de celule

Markeri de suprafata
Folositi pentru caracterizare, cuantificare si izolare

Positive pentru CD34, c-Kit, Thy-1, Flk-2/Flt-3, AC133

Sistem de cultura in Methyl Cellulose

Sistem de cultura in mediu semisolid in vitro Sursa fiind Celulele Stem Hematopoietice

Aspirat de la nivelul MO (3-4%) Sange periferic (2%) Sange CO (10%)

Formarea coloniilor: coloniile celulelor stem multipotente ori coloniile tipurilor celulelor angajate specific Unitate formatoare de colonii (CFU)

Cultura in Methylcellulose
CD34+ Cells
CFU-GM BFU-E CFU-Mix

Controlul hematopoiezei

Factori de crestere si stimulare a coloniilor

Factori de crestere si stimulare a coloniilor

Colony Stimulating Factors (CSF) Se definesc prin capacitatea de a stimula cresterea coloniilor celulare Glicoproteine Exista receptori specifici la nivelul celulelor Au activitate biologica intensa

Citokine

Citokinele au functie pleiotropica Pot stimula sau inhiba cresterea celulelor hematopoietice

Factorii de reglare a hematopoiezei

Sunt produsi de mai multe tipuri celulare

Celule endoteliale, fibroblaste, macrofage, limfocite

Celulele stem exprima in mod simultan receptori pentru mai multi factori Cei mai multi factori sunt activi pe mai multe linii hematopoietice Polifunctionali

Proliferare, angajare catre o linie celulara, maturare, afectare a functiilor celulare.

Factori de crestere
Name Stem cell factor Interleukin-3 Interleukin-6 Function Hematopoiesis Hematopoiesis Hematopoiesis Source Stromal cells Activated T & B cells Monocytes & fibroblast T cells; Endo Macrophage; CFU-M mitosis Leukocyte; Endothelium Kidneys

GM-CSF CFU-GM mitosis G-CSF CFU-G mitosis Endothelium M-CSF Macrophage; Endothelium Interleukin-8 Neutrophil migration EPO CFU-E differentiation; BFU-E mitosis

TPO Interleukin-11

CFU-meg differentiation Liver CFU-meg differentiation

Abbreviations: GM-CSF, granulocyte monocyte colony stimulating factor; M-CSF, monocyte CSF.

G ranulocyte Colony-S timulating F actor G-CSF

Principala citokina cu rol hematopoietic asupra productiei neutrofilelor, diferentiere si activitate celulara. Stimuleaza cresterea celulelor progenitoare angajate catre linia neutrofilelor Stimuleaza maturarea neutrofilelor Activeaza functia fagocitara a neutrofilelor mature

G-CSF scurteaza timpul de maturare a neutrofilului

Multipotent HSC

Neutrophil precursors

Post-mitotic maturation neutrophils

4-5 days

Blood

normal

1 day

Blood

G-CSF treated

Utilizarea clinica a G-CSF

Larg utilizat pentru tratarea neutropeniei

Dupa chemoterapie in cancer Dupa transplant de maduva osoasa

Mobilizarea celulelor progenitoare in sangele periferic Neutropenia congenitala

Eritropoietina

Produsa predominant la nivel renal Stimuleaza sinteza de ARNm si globina Accelereaza angajarea celulelor stem pluripotente catre dezvoltarea seriei eritroide

Activitate biologica

Stimuleaza cresterea clonala in seria eritroida Supresia apoptozei in progenitorii seriei eritroide Induce eliberarea reticulocitelor din MO Induce sinteza globinei in precursorii seriei eritroide

Utilizarea terapeutica

In momentul scaderii nivelului eritropoietinei

Insuficienta renala cronica

Necesitatea cresterii eritropoiezei

Pacientii dupa chemoterapie

Mai rar utilizat AIDS, dupa proceduri chirurgicale, copii nascuti prematur, unele afectiuni cronice inflamatorii

Eritropoieza

Celulele implicate in acest proces: proeritroblast -> eritroblast bazofil -> eritroblast policromatofil ->eritroblast ortocromatofil (acidofil) -> reticulocite -> eritrocite Aspecte generale : 1. Toate celulele blast au nucleu 2. Celulele nu au granulatii citoplasmatice

Eritropoieza

Proeritroblast - 20-25 m, celula mare, nucleu rotund, cromatina laxa dantelata, nucleoli prezenti, citoplasma bazofila cu o zona mai deschisa perinuclear. Ertroblast bazofil - 16-18 m, nucleu rotund cu heterocromatina, citoplasma intens bazofila (numar mare de poliribozomi).

Eritropoieza

Eritroblast policromatofil : 9 -12 m, nucleu rotund heterocromatic, citoplasma albastru/roz deschis datorita inceperii acumularii de hemoglobina Eritroblast ortocromatofil (acidofil) : 8 - 9 m, nucleu foarte mic si intens colorat, citoplasma acidofila. Reticuloc i t e contine numar redus de poliribozomi ce se coloreaza cu albastru de cresyl briliant E r i t roc i te

Granulocitopoieza

Celulele implicate in acest proces: mieloblaste, promielocite, mielocite, metamielocite, granulocite nesegmentate, granulocite mature (segmentate) Aspecte generale: 1. Celulele blast au nucleoli, celulele cite nu au nucleoli, cu exceptia promielocitelor 2. Scaderea volumului celular pe parcursul diferentierii, exceptie la promielocit 3. Prezenta de granule azurofile si granule specifice in functie de stadiul maturarii

Granulocitopoieza

Mieloblast - 15-20 m, nucleu rotund cu

1 -4 nucleoli, citoplasma bazofila si fara granule citoplasmatice.

Promielocite - 20-25 m, nucleu ce

poate contine nucleoli; citoplasma abundenta si bazofila cu granule azurofile

Granulocitopoieza

Mielocite trei tipuri celulare, nucleul rotund se condenseaza si este mai intens colorat decat la promielocit, citoplasma mai putin bazofila si prezinta granule specifice : 1. Neutrofil e- 15-20 m, numeroase granule neutrofile 2. Eozinofile - 20-25 m, granule mari rosu-portocaliu 3. Bazofile - 13-15 m, granule ( cu dimensune de 0,5 m) ce se coloreaza metacromatic.

Granulocitopoieza

Metamielocite nucleu reniform, citoplasma asemanatoare mielocitelor Granulocite nesegmentate (nucleu in banda) nucleu in forma de U sau S, citoplasma acidofila Granulocite segmentate (mature) nucleu complet segmentat

Mieloblast si promielocit

Promielocite, mielocite si metamielocite

Originea trombocitelor

Megacarioblaste, megacariocite, megacariocite adulte formatoare de trombocite Megacarioblastul 15-50 m, nucleu mare oval sau reniform, prezenta nucleolilor, citoplasma bazofila. Megacariocitul 35-150 m, nucleu lobulat neregulat, cromatina macrogranulara , nu se observa nucleoli, citoplasma acidofila sau bazofila. Megacariocitul adult dimensiune pana la 150 m, nucleu lobulat si la nivelul citoplasmei acidofile se formeaza invaginatii ale membranei plasmatice.

Megacariocite la nivelul maduvei osoase

Monocitopoieza

Monoblast caracteristici morfologice asemanatoare mieloblastului Promonocite - 10-20 m, nucleu (ce prezinta o mica indentatie) unde cromatina este dantelata si nucleoli prezenti , citoplasma bazofila. Monocite 12- 15m, nucleu cu o dimensiune de 50% din suprafata celulei, citoplasma cu granule azurofile.

Limfopoieza

Limfoblast - 10-18 m, nucleu eucromatic cu 1-2 nucleoli,citoplasma bazofila. Unele limfocite din maduva osoasa se diferentiaza in limfocite B, alte limfocite din maduva osoasa migreaza in timus unde se diferentiaza in limfocite T. Limfocitele B si T migreaza catre organele limfoide secundare. Lymphocyte