Sunteți pe pagina 1din 12

STUDIUL PROPRIETILOR FUNDAMENTALE ALE INIMII CU PROGRAMUL DE SIMULARE SIMHEART Aspecte Teoretice.

Modelul experimental de inim izolat imaginat de Oskar Langendorff n 1895 a permis studiul proprietilor fundamentale ale cordului i modul n care aceste proprieti sunt influenate de adosul n lichidul de perfuzie a unor substane, precum si de variaiile de pH sau de temperatur. Tehnica Langendorff prezint avantajul utilizrii cordului de mamifer, tetracameral i cu circulaie coronarian. Animalele de experien cele mai utilizate sunt: obolanul, iepurele i cinele. Spre deosebire de modelul de cord izolat de broasc care poate funciona chiar i 30 ore, cordul izolat de mamifer are parametri de funcionare constani pentru o durata de numai 3-4 ore. n modelul Langendorff, inima este scoas din organism si conectat la un perfuzor (la nivelul aortei) prin care circul o soluie de perfuzare nclzit i oxigenat, la o presiune constant de 60 mm Hg, care menine cordul viabil. Soluia de perfuzie va nchide sigmoidele aortice i va trece prin arterele coronare hrnind miocardul. Tot prin acest perfuzor se vor administra diferii modulatori farmacologici. n ventriculul stng (prin valva mitral) se introduce un transductor de presiune. Acesta transform modificarile de presiune n for de contracie izometric. Programul de fiziologie virtual SimHEART este o alternativ la experimentul clasic Langendorff efectuat pe animal. SimHEART este de fapt un laborator virtual care reproduce pe calculator componentele si etapele de lucru din modelului experimental. Programul simuleaz proprietile vitale ale unei inimi izolate de obolan, dup modelul Langendorff, reproducnd astfel comportamentul fiziologic al inimii in situ. Scopul acestor experimente este evidenierea efectelor pe care diferiti mediatori chimici sau substane cu aciune farmacologic le au asupra proprietilor fundamentale ale inimii. Proprietile fundamentale ale cordului sunt: 1. Automatismul funcia cronotrop; 2. Excitabilitatea funcia batmotrop; 3. Conductibilitatea funcia dromotrop; 4. Contractilitatea funcia inotrop; 5. Tonicitatea funcia tonotrop). Principiul lucrrii. Transductorul plasat n ventriculul stng convertete modificrile de presiune generate de contraciile cadiace n semnale electrice, care sunt amplificate i redate grafic sub forma unei cardiomecanograme. Analiza parametrilor cardiomecanogramei permite evidenierea efectelor pe care mediatorii

chimici ai sistemului nervos simpatic i parasimpatic, precum i diverse substane cardioactive le au asupra proprietilor miocardului. Parametrii nregistrai n cursul experimentului. Analiza traseului obinut se face cu ajutorul parametrilor: Frecven (numrul de contracii cardiace/minut) Amplitudine 1 mV/2 mmHg; 5 mV/div =10mmHg/div. Poziia fa de linia diastolic. Variaia acestor parametri fa de valorile iniiale, de referin permite evaluarea efectelor diverselor substane asupra proprietilor inimii. Variaiile de frecven ne dau relaii despre efectele substaelor folosite asupra funciilor: cronotrope, batmotrope i dromotrope: creterea frecvenei - efect cronotrop pozitiv scderea frecvenei - efect cronotrop negativ Variaiile de amplitudine - ne dau relaii despre efectele substaelor folosite asupra funciei inotrope creterea amplitudinii - efect inotrop pozitiv (crete fora de contracie) scderea amplitudinii - efect inotrop negativ (scade fora de contracie) Modificarea poziiei graficului fa de linia diastolic - semnific efectele asupra funciei tonotrope: supradenivelarea - efect tonotrop pozitiv subdenivelarea - efect tonotrop negativ Substanele utilizate n experimentul SimHEART sunt:
1. Epinefrina (EPI) sau adrenalina. Face parte, alaturi de noradrenalin sau

norepinefrin din grupul catecolaminelor. Este deopotriv hormon sintetizat n medulosuprarenal i neuromediator eliberat la nivelul terminaiilor sistemului nervos vegetativ simpatic. Acioneaz pe receptorii alfa i beta adrenergici. n acest lucrare este utilizat ca agonist al receptorilor 1 adrenergici de la nivelul cordului. 2. Propranolol (PRO) - blocant neselectiv al receptorilor adrenergici. Ca mediacament se folosete n tratamentul aritmiilor, al hipertensiunii arteriale, al fenomenelor vegetative din anxietate, etc. 3. Fentolamin (PHE) sau regitina - blocant neselectiv al receptorilor adrenergici. Ca mediacament se folosete n urgenele hipertensive. 4. Acetilcolina (ACH) - mediatorul chimic al parasimpaticului, agonist al receptorilor M2 colinergici. 5. Atropin (ATR) - blocant al receptorilor colinergici. Atropina este un alcaloid natural extras din planta Atropa belladona (mtrguna). Are aciune anticolinergic sau antimuscarinic prin blocarea receptorilor M, colinergici. 6. Verapamil (VER) - blocant al canalelor de Ca2+ de tip L din: membrana celulelor cardiace. Acest tip de canale sunt concentrate mai ales n nodulul sino-atrial i atrio-ventricular, motiv pentru care, verapamilul este folosit pentru a reduce conductibilitatea prin NAV i a proteja astfel ventriculele de tahicardiile cu punct de plecare atrial. membrana fibrelor musculare netede din structura vaselor, motiv pentru care este folosit ca vasodilatator. n afara administrrii separate a fiecrei substane, metoda Langendorff permite i introducerea simultan n experiment a substanelor cu efecte

antagonice asupra proprietilor inimii. Datorit acestei faciliti se pot studia dou mecanisme fiziologice: antagonismul fiziologic dintre epinefrin i acetilcolin inhibiia competitiv dintre: epinefrin i propranolol - pentru receptorii - adrenergici acetilcolin i atropin - pentru receptorii M2 - colinergici Programul are 3 seciuni: Preparation: care prezint nregistrarea video a diseciei obolanului, obinerea inimii izolate , cuplarea ei la perfuzor i introducerea transductorului. Getting started: care permite pregtirea soluiilor care se vor utiliza ntru-un laborator virtual de chimie. Nu va fi utilizat n aceast lucrare. Practical course: conine laboratorul de fiziologie virtual n care studenii vor efectua experimentele. Dup deschiderea programului

Click pe Preparation pentru a viziona pregtirea cordului izolat de obolan, dup care dai click pe exit. Click pe Practical course pentru a pregti i a efectua experimentul

Organizarea laboratorului SinHEART Laboratorul SimHEART cuprinde componentele prezentate n Fig.1.

Fig.1. Organizarea Laboratorului SimHEART

Sistemul de fixare i perfuzare a inimii izolate - inima izolat i canulat la nivelul aortei este fixat de un sistem de perfuzare permanent cu soluie Krebs oxigenat, cu debit constant de 10 ml/min i la temperatura de 37C. Prin aceeai canul ajung n inima izolat substanele utilizate n experiment.

Transductorul de presiune - este conectat cu ventriculul stng prin intermediul unui cateter. o Traductorul nregistreaz variaiile de presiune din ventriculul stng, pe care le amplific i n acelai timp le transform n semnale electrice, redate grafic cu ajutorul sistemului inscriptor. Perfuzorul permite adugarea substanelor folosite n experiment o Prezint dou poziii de plasare a eprubetelor. Cnd se utilizeaz consecutiv dou substane, prima eprubet se plaseaz ntotdeauna n poziia din dreapta. o Fiecare poziie permite stabilirea debitului substanei (l/min) i are trei trepte de funcionare: pregtire - activare buton sgeat vertical > bec culoare verde; activare (activare buton cu sgeat orizontal); oprire (activare buton STOP). Stativul cu eprubete - cuprinde substanele ce pot fi utilizate pentru experiment n diverse concentraii iniiale (Mi). Pentru a uura munca n laborator toate substanele utilizate au concentraia iniial de 10-3 M, dup care, concentraia se modific prin schimbarea debitului de perfuzie. Sistemul de inscripionare - permite nregistrarea n timp real a modificrilor induse de utilizarea diverselor substane. o Prezint un sistem de etalonare a nregistrrii ca vitez (Speed cm/s) i amplitudine (Resolution - mV/Div), precum i un sistem de schimbare a culorii peniei (Pen Color) ce poate fi utilizat atunci cnd se studiaz interaciunea dintre dou substane. o Cu aJutorul butonului POWER On/Off sistemul de inscripionare se pornete cnd se nregistreaz efectele unei substane i se oprete cnd inima trebuie "splat" de substanele introduse n experiment. o Cu ajutorul cursorului vertical plasat la marginea din dreapta a sistemului de inscripionare se stabilete poziia liniei diastolice a nregistrrii.
SIM HEART

EFECTUAREA EXPERIMENTULUI
ORICARE DINTRE ETAPELE DE LUCRU

OPERAIUNI VALABILE PENTRU

Se stabilete rezoluia (amplitudinea) la 5 mV/div i viteza (speed), care poate fi de: 1 cm/sec n aceast situaie 5 div.= 1 secund sau 2 cm/sec - n aceast situaie 10 div.= 1 secund Se stabilete poziia liniei diastolice a nregistrrii prin micarea n jos a cursorului, n jumtatea inferioar a hrtieiinscriptorului. Din stativul cu eprubete se alege eprubeta cu soluia dorit, n concentraie de 10-3M i se plaseaz n locul din dreapta al perfuzorului; dac se utilizeaz i a doua substan aceasta se plaseaz n locul din stnga al perfuzorului; se stabilete debitul (1, 10 sau 100 l/min) pentru fiecare substan a) la un debit de 1 l/min., concentraia substanei va fi de 10-7 M b) la un debit de 10 l/min., concentraia substanei va fi de 10-6 M

c) la un debit de 100 l/min., concentraia substanei va fi de 10-5


M se pregtete perfuzorul (lumina roie - lumin verde). se alege culoarea dorit pentru inscriptor (albastru, negru, rou sau galben); se pornete osciloscopul (POWER/ON); la nceputul fiecrei etape trebuie nregistrat un scurt traseu de repaus; se activeaz perfuzorul (butonul cu sgeat vertical) cu substana dorit; se ateapt obinerea efectului i stabilizarea traseului; se oprete OBLIGATORIU administrarea substanei (STOP) i nregistrarea traseului (POWER/OFF). Aceast manevr se repet dup fiecare etap deoarece soluia Krebs care perfuzeaz permanent inima izolat trebuie s "spele" substana utilizat.

Pentru Analiza datelor se activeaz tasta ANALYSIS cu ajutorul butonului din stnga al mouse-ului care se ine apsat se "trage" de nregistrare pn la segmentul dorit; se determin: o FC = nr. vrfuri din 5 diviziuni x 60. Dac se lucreaz cu viteza de 2 cm/sec. > nr. vrfuri din 10 diviziuni x 60 o Amplitudinea = 10 mm Hg/diviziune; se noteaz valorile obinute n tabelul corespunztor fiecrei etape; se copiaz pe caiet graficele obinute i se marcheaz momentul administrrii substanei, precum i molaritatea utilizat (Mfinal); pentru revenirea la etapa de nregistrarea se activeaz tasta Lab; se completeaz tabelul cu rezultate finale.

ETAPELE DE LUCRU 1. ACIUNEA EPINEFRINEI ASUPRA PROPRIETILOR INIMII Principiu: se administreaz EPI n 2 doze diferite i se noteaz efectele obinute. Se stabilete viteza i rezoluia (1 cm/sec i 5 mV/div)) Se alege eprubeta cu EPI 10-3 M i se pune n perfuzor. Se alege debitul de 1 l/min, la care concentraia substanei va fi de 10-7 M (click pe plus) Se pregtete perfuzorul: click pe becul rou -> verde Se porneste osciloscopul (POWER/ON); Se nregistreaz un scurt traseu de repaus Se activeaz perfuzorul: click pe sageata orizontala -> verde i se ncepe administrarea EPI. Se asteapt stabilizarea traseului, se schimb concentraia la 100 l/min=10-5 M i se pornete din nou perfuzorul. Dup cca 15 secunde se oprete (STOP) perfuzorul i osciloscopul. Se trece pe modulul ANALYSIS i se determin: o FC = nr. vrfuri pe 5 diviziuni x 60 o Amplitudinea = 10 mm Hg/diviziune;

Rezultatele se trec n tabel i se copiaz pe caiet graficele obinute, cu marcarea momentului n care s-a administrat substana Paramet FC (b/min) Amplitudine (mm Hg) Denivelare (mm Hg)

ri REPAU S EPI 10-7 M EPI 10-5 M

Tabel nr. 1. Efectele EPI asupra frecvenei i amplitudinii contraciilor pe cordul de obolan. 1.1. Efectele EPINEFRINEI n prezena altor substane Principiu: se administreaz EPI n doz de 10-7 M, se ateapt stabilizarea traseului i apoi fr a opri administrarea EPI se adaug, n etape cte una dintre substanele: Propranolol (PRO) Fentolamin (PHE) i Verapamil (VER) n doze de 10-6 M. ETAPA 1. Relaia epinefrin- propranolol - inhibiia competitiv Se revine n LAB Se verific viteza si rezoluia Se pun eprubetele: POZIIE EPRUBET dreapta: EPI 10-3 M cu debit 1 l/min -> 107 M POZIIE EPRUBET stnga: PRO 10-3 M cu debit 10 l/min -> 10-6 M Se pornete osciloscopul Se nregistreaz un scurt traseu de repaus Se activeaz perfuzorul cu EPI Se ateapt stabilizarea traseului i se activeaz perfuzorul cu PRO. Se recomand schimbarea culorii de nregistrare la adugarea PRO Dup cca 15 secunde se opresc perfuzoarele i osciloscopul Se trece pe modulul ANALYSIS i se face analiza parametrilor Rezultatele se trec n tabel i se copiaz pe caiet graficele obinute, cu marcarea momentului n care s-au administrat substanele. Parametri REPAUS EPI 10-7 M PRO M Tabel nr. 2. Efectele Propranololului asupra modificrilor induse de Epinefrin - inhibiia competitiv pentru receptorii -adrenergici.

FC (b/min)

Amplitudin Denivelar e (mm Hg) e (mm Hg) -

10-6

ETAPA 2. Relaia EPI Fentolamin. Administrarea de Fentolamin nu modific efectul stimulator al EPI, deoarece la nivelul cordului nu exist receptori adrenergici.

o Se repet aceleai etape de lucru, numai c n loc de propranolol se adaug fentolamin o Se completeaz tebelul i se deseneaz traseul Parametri REPAUS EPI M PHE 10-6 M Tabel nr. 3. Lipsa de modificare a efectelor induse de Epinefrin la administrarea de Fentolamin - absena receptorilor adrenergici

FC (b/min)

Amplitudin Denivelar e (mm Hg) e (mm Hg) -

10-7

ETAPA 3. Relaia EPI Verapamil Blocarea canalelor lente de Ca++ din membrana celulelor pace-maker priveaz aceste celule de un ion depolarizant, astfel c efectele stimulatorii ale EPI sunt anulate. o Se repet aceleai etape de lucru, numai c acum se adug Verapamil o Se completeaz tebelul i se deseneaz traseul PARAMET RI REPAUS EPI M VER 10-6 M Tabel nr. 4. Relaia de antagonizare necompetitiv dintre EPI si VER

FC (b/min)

Amplitudin e (mm Hg)

Denivelare (mm Hg) . -

10-7

ETAPA 4. Repetai administrarea Verapamilului n absena epinefrinei i observai efectele deprimante asupra proprietilor inimii! o STOP EPI o Ateptai cca. 1 minut. Cnd frecvena i amplitudinea au sczut foarte mult, renimai inima cu EPI. o Desenai traseul i marcai adugarea substanelor

2. ACIUNEA ACETILCOLINEI ASUPRA PROPRIETILOR MIOCARDULUI Principiu: se administreaz ACH i se noteaz efectele obinute. o Se lucreaz la fel ca la EPI, doar c se administreaz o singur doz cu un debit de 10 l/min. -> 10-6 M.
o

Dup ntreruperea perfuzoarelor i a osciloscopului se trece n modul ANALYSIS, se completeaz tabelul i se deseneaz traseul Parametri REPAUS ACH 10-6 M FC (b/min) Amplitudin Denivelar e (mm Hg) e (mm Hg) -

Tabel nr. 5. Efectele ACH asupra frecvenei i amplitudinii contraciilor pe cordul de obolan. 2.1. Efectele ACETILCOLINEI n prezena altor substane Principiu: se administreaz acetilcolin (ACH) n doz de 10-6M, se ateapt stabilizarea traseului i fr a opri administrarea ACH se adaug epinefrin (EPI). Se repet operaiunea cu atropin n doz de 10-6M . ETAPA 1. Relaia Acetilcolin-Epinefrin antagonismul fiziologic. o Se repet aceleai operaiuni de pregtire. o Se perfuzeaz ACH 10-3 M cu debit 10 l/min -> 10-6 M (eprubet dreapta) o Se ateapt obinerea efectului i apoi, dup cteva secunde se adaug EPI 10-3 M cu debit 1 l/min -> 10-7 M o Dup cca 10-15 secunde se opresc perfuzoarele i osciloscopul i se trece n modulul ANALYSIS pentru calcule. o Se completeaz tabelul i se deseneaz traseul

Parametri REPAUS ACH 10-6 M EPI M 10-7

FC (b/min)

Amplitudine (mm Hg)

Tabel nr.6. Efectele Acetilcolinei asupra proprietilor inimii i interaciunea cu Epinefrina - antagonismul fiziologic. ntruct efectele epinefrinei i acetilcolinei se produc prin activarea unor tipuri diferite de receptori, antagonismul dintre cele dou substane este unul fiziologic i nu competitiv.

ETAPA 2. Relaia Acetilcolin-Atropin inhibiie competitiv. o Se repet operaiunile de la etapa precedent. n loc de EPI se pune ATR cu un debit de 10 l/min. o Se face analiza traseului i se notez n tabel. Se deseneaz traseul. PARAMET RI REPAUS ACH 10-6 M ATR 10-6 M FC (b/min) Amplitudine (mm Hg)

Tabel nr.7. Efectele Atropinei asupra modificrilor induse de Acetilcolina inhibiia competitiv

Completai tabelul cu: (+) inhibiie, (x) - fr efect

efect de stimulare; (-) efect de

Substane
Epinefrin Propranolol Verapamil Fentolamin Acetilcolin Atropin

Cronotropism

Tonotropis m

Inotropism

Concluzii
1. EPINEFRINA mediatorul chimic al SNV simpatic. are efece stimulatoare asupra tuturor proprietilor miocardului prin

aciunea asupra receptorilor beta1-adrenergici.

Efectul cronotrop pozitiv se manifest prin creterea frecvenei cardiace Efectul batmotrop pozitiv se manifest prin creterea excitabilitaii care se poate exprima att prin creterea frecvenei cardiace, ct i prin apariia unor aritmii de tipul extrasistolelor atriale sau ventriculare, fibrilaiei atriale, etc. Efectul inotrop pozitiv se manifest prin creterea forei de contracie. Urmarea este creterea debitului cardiac i a presiunii arteriale. Efectul dromotrop pozitiv se manifest prin accelerarea conducerii stimulilor.

Blocarea receptorilor cu beta-blocante (propranolol) anuleaz efectul

stimulator al EPI prin fenomenul de inhibiie competitiv la legarea pe aceeai receptori. Administrarea terapeutic a betablocantelor scade frecvena cardiac, regularizeaz ritmul inimii (efect antiaritmic) i, prin vasodilataie scade tensiunea arterial.
Blocarea receptorilor alfa-adrenergici cu Fentolamin nu influeneaz

efectele EPI, deoarece la nivelul cordului avem numai receptori 1.


Verapamilul blocant al canalelor lente de Ca ++ are aciune antagonic

epinefrinei, scznd frecvena i amplitudinea contraciei, dar NU prin inhibiie competitiv ca beta-blocantele, ci prin scderea influxul depolarizant de Ca++ la nivelul nodulilor de automatism. Administrarea terapeutic are efecte antiaritmice i hipotensoare. 2. ACETILCOLINA - mediatorul chimic al SNV parasimpatic

are efece deprimante asupra tuturor proprietilor miocardului prin

aciunea asupra receptorilor muscarinici M2. Se elibereaz la nivelul terminaiilor vagale care inervez n special atriile.

Efectul cronotrop negativ se manifest prin scderea frecvenei cardiace. La o stimulare puternic vagal, cordul se poate opri n diastol (stop cardiac) Efectul batmotrop negativ se manifest prin scderea excitabilitaii Efectul inotrop negativ se manifest prin scderea forei de contracie. Urmarea este scderea debitului cardiac i a presiunii arteriale. Efectul dromotrop negativ se manifest prin ncetinirea conducerii stimulilor, cu posibilitatea apariiei blocurilor atrio-ventriculare.

Efectele deprimante ale acetilcolinei (i ale SNV parasimpatic) pot fi

prevenite prin administrarea de atropin, care blocheaz receptorii muscarinici prin inhibiie competitiv.
Acetilcolina i epinefrina au efecte antagonice de tip funcional i nu prin

competiie pentru aceeai receptori.

Exemple de trasee

Fig.2 Inhibiia competitiv pe receptorii B1 adrenergici ntre EPI i propranolol. Propranololul anuleaz efectele stimulatoare ale EPI.

Fig.3. Lipsa de modificare a efectelor induse de Epinefrin la administrarea de Fentolamin - absena receptorilor adrenergici la nivelul cordului.

10

Fig.4. Efectele Verapamilului asupra modificrilor induse de Epinefrin. Chiar n prezena EPI, verapamilul scade frecvena i amplitudinea contraciilor.

Fig.5. Efectele Verapamilului fr administrarea prealabil a Epinefrinei.

Fig.6. Efectele Acetilcolinei asupra proprietilor inimii i interaciunea cu Epinefrina - antagonismul funcional

Fig.7.Efectele Atropinei asupra modificrilor induse de Acetilcolina - inhibiia competitiv TEME Consultnd un dictionar explicai termenii: in situ, in vivo, in vitro i antagonism.

11

Explicai ce nseamn: efect cronotrop pozitiv, efect batmotrop pozitiv, efect dromotrop pozitiv.

12