Tax n leucemii

Activatorul transcrip ional (trans-acting) p40tax este cel mai important factor care contribuie la stadiile ini iale ale transform rii celulelor T mediate de infec ia HTLV-I (1). Proteina tax se cupleaz slab la elementul responsiv Tax1 (TRE) din LTR-ul viral i poate transactiva dramatic expresia prin interac iunea cu factorii de transcrip ie activa i, ATF/CREB (cyclic AMP response element binding proteins), proteina de cuplare CREB(CBP/p300) i factorii implica i n aparatul de transcrip ie (1). Promotorul HTLV-I con ine 3 copii ale elementului responsiv tax (TRE-1), fiecare din ele posed un miez care reprezint un element de r spuns la CAMP (CRE). Proteina CREB, care cupleaz elementul de r spuns la CAMP, de asemenea, cupleaz TRE-1 i mediaz asocierea proteinei tax cu promotorul viral i transactivarea acestuia din urm . Aceste fenomene depind de secven ele DNA care flancheaz miezul CRE. De i CRE este g sit ntr-o varietate de promotori celulari, CRE celular variaz n secven la nivelul TRE-1, n special, n regiunile de flancare i, n general, nu este responsiv la Tax. Baza molecular pentru r spunsul diferen ial Tax al CRE viral i celular nu a fost nc determinat . Conforma ia CREB este influen at de secven a de nucleotide a elementului s u de cuplare a DNA. CREB expune o sensibilitate alterat de proteazele tripsin si chemotripsin cnd se cupleaz la elementul TRE-1 HTLV-1, fa de cuplarea la elementul CRE somatostatin de la obolan. Starea de fosforilare a CREB nu influen eaz sensibilitatea sa laproteaze pe fiecare element. S-a demonstrat ca sensibilitatea la proteaze este specificat de secven ele care flancheaz situsul de cuplare CRE din fiecare element. ntruct secven elede flancare TRE-1 moduleaz , de asemenea, asocierea tax cu CREB i transactivarea de c tre tax a transcrip iei LTR dependent CREB, se sugereaz c abilitatea tax de a cupla CREB este determinat de conforma ia CREB (16). n leucemia indus prin infec ia HTLV-I, tax ac ioneaz , reglnd expresia genelor celulare prin interac iunea direct sau indirect cu o varietate de factori transcrip ionali celulari i cu molecule de trascrip ie a semnalului celular care conduc n cele din urm la dereglarea prolifer rii celulare (1). S-a observat c IL-2 se exprim constitutivn celulele T leucemice infectate cu HTLV-I presupunndu-sereglarea autocrin a cre terii prinintermediul IL-2 ca mecanism de baz al leucemogenezei asociat HTLV-I. Acest proces s-a verificat n numeroase tipuri celulare printre care HUT, MT-2, Jurkat, HSB-2 . Celulele infectate cu HTLV-I produc frecvent o mare cantitate de limfokin activ (TNF-beta) i de mRNA TNF-beta, limfokin care contribuie la transformare. Dele iile n promotorul genei TNF-beta, n prezen a HTLV-I relev reducerea produc iei de limfokin demonstrnd astfel stimularea produc iei via p40 tax . De asemenea, s-a demonstrat ca p40 poate supresa poten ialul de transactivare a proteinei cmyb, proteina codificata de protooncogena c-myb care este nalt exprimata n cteva tipuri de leucemie(18). O diminuare a transcrip iei indusa de promotorul c-myb endogen a fost observata n multe linii celulare T, transformate de HTLV-I. S-a presupus ca mecanismul prin care tax supreseaza transactivarea c-Myb se bazeaza pe competi ia pentru cuplarea CBP/p300. Studii

ulterioare sus in ca represarea mediata de tax a promotorului c-myb este independenta de competi ia directa ntre c-myb i tax, pentru recrutarea CBP/300.

celulele liniei Jurkat transfectate cu gena tax care prezinta un promotorcare raspunde la cadmiu (18).

Abilitatea tax de a represa direct promotorul endogen c-Myb a fost demonstrata n

Infec ia in vitro a celulelor T cu HTLV-I i II releva inducerea expresiei constitutive a ICAM-1. Astfel, n liniile celulare transformate HTLV-I (MT-2, MOT, C8166) s-au exprimat nivele nalte ale mRNA ICAM-1 comparativ cu liniile celulelor T neinfectate (A301). Cotransfec ia liniei celulelor T neinfectate A301 cu plasmidul care exprima constructul ICAM i tax I i II, conduce la o cre tere a activita ii promotorului. Se demonstreaza ca o regiune ntre -88 i -53p.b., legata de situsul START al transcrip iei este suficienta pentru expresia CAT indusa de tax. Acest segment include un element palindromic de 11 p.b. (TTTCCGGGAAA) care poseda omologie de secven a cu elementul de raspuns IFN-gamma i IL-6. Aceste date sus in ca expresia constitutiva a ICAM-1 n celulele infectate HTLV-I este influen ata de proteina virala transactivatoare tax. Aceasta proteina cre te expresia ICAM-1 n celulele infectate HTLV i poate juca un rol important n limfoproliferarea asociata HTLV (19). Spre deosebire de celulele hematopoietice normale liniile celulare infectate cu HTLV-I produc constitutiv nivele nalte ale mRNA IL-1alpha i secreta aceasta citokina n mediul de cultura. De asemenea, s-a observat ca celulele leucemice provenite de la pacien ii cu leucemie/limfom a celulelor T produc mRNA IL-1alpha. Se considera ca n reglarea transcrip iei expresiei IL-1alpha sunt implicate proteinele tax ale virusurilor HTLV-I i II, de asemenea, se considera ca mecanismul implica NF-kB (20). Se verifica astfel, tot mai mult faptul ca transformarea celulelor T primare infectate cu HTLV-I se datoreaza, cel putin n parte, efectelor proteinei tax asupra genelor implicate n controlul proliferarii celulare. Dovezi recente sus in c tax inte te reglatorii cheie ai G1/S i ai progresiei M cum ar fi P161 NK4a, ciclina D1, ciclina D3-cdk i punctele de reglare ale fusului mitotic. Astfel tax influen eaz progresia celulelor n diferite faze ale ciclului celular: 1. prin asocierea direct tax poate abroga func ia inhibitorie a p161 NK4a n G1-cdK 2. Tax poate influen a direct activit ile D-cdK prin interac ia protein -protein 3. Tax inte te Hs MAD1 proteinele de reglare ale asambl rii fusului mitotic (17). Exist studii care sus in c n dezvoltarea limfomului virus asociat, cum este cazul celui asociat cu infec ia HTLV-I dar i celui asociat cu infec ia EBV, sunt implicate att cre terearatei de proliferare celular dar i diminuarea mor ii celulare programate a celulei. Aceste deregl ri se datoreaz att hiperexpresiei genei antiapoptotice bcl-2 ct i expresiei proteinelor din familia TNF-R, proteine considerate molecule cheie n dezvoltarea limfomului, ntruct expun diverse efecte asupra prolifer rii celulare i apoptozei pe calea desemnalizare mediat de NF-Kappa B (21). Mecanismele prin care proteina tax stimuleaz genele sunt indirecte i implic activarea factorilor transcrip ionali celulari cum sunt NF-kappa B i CREB/ATF. NF-Kappa B a fost ini ial identificat ca mediator al genei lan ului u or K n celulele B. Ulterior, s-a constatat c activeaz transcrip ional i alte gene celulare care con in elemente nrudite. NF-Kappa B joac un rol pivotal i n activarea celulelor T normale dar i n transformarea celulelor T indus de HTLV. Activarea NF-Kappa B prinsemnale costimulatorii ale celulelor T i prin proteina tax HTLV implic stimularea kinazei I Kappa B (IKK). Experimentele care examineaz activarea NF-Kappa B s-au realizat pe linie celular Jurkat mutant , linie care expune o blocare specific a c ii de semnalizare IKK

dar care p streaz viabile c ile kinazelor MAP i c-Jun. Aceast linie celular mutant nu prezint expresia IKK gamma ntruct nu posed component non-catalitic a complexului IKK. Expresia IKK exogen restabile te, n celulele mutante, activitatea NF-Kappa B prin tax ceea ce demonstreaz necesitateaIKK gamma n semnalizarea NF-Kappa B indus de proteina tax HTLV-I(22). Activarea NF-kappa B de c tre p.tax induce transcrierea genelor care con in elemente de r spuns la NF-Kappa B, cum sunt IL-2, receptorul IL-2 alpha i LTR-HIV-I, IL-1 alpha(20). S-a stabilit c gena tax-HTLV induce transcrierea genelor c-myc murine i umane, prin activarea promotorilor acestora, proces pentru care p.tax reclam factorii de cuplare la promotorii DNA c-myc, unul dintre ace tia fiind NF-Kappa B. Se sus ine c gena c-myc murin posed dou situsuri de cuplare pentru NF-Kappa B: unul localizat pe promotorul P1 (1101-1081 pb)- URF i cel lalt este internn exonul E1, localizat ntre +440pb i +459 pb. Este cunoscut faptul c c-myc i exercit activitatea n procesele regl rii i prolifer rii celulelor mamaliene. Reglarea se faceprin stimularea de c tre NF-Kappa B i a altor gene celulare prin ac iuneaproteinei tax care contribuie la reglarea prolifer rii limfocitelor T. Deci proteina tax induce proliferarea continu a celulelor T primare, prin expresia genei c-myc care intervine n imortalizarea i leucemogeneza celulelor T . n celulelenon B, NF-Kappa B este activat de IL-1, TNF- alpha i forbol-ester, agen i care pot induce transcrierea genei c-myc. n concluzie, proteina tax transactiveaz secven ele amplificatoare din propriul LTR dar i din alte gene celulare cum sunt: R-IL-2 alpha, IL-2, TNF-beta, c-fos (23). Transformarea celulelor Tse datoreaz transactiv rii prin intermediul tax att a genelor celulare ct i a celor virale (2).