Rezultatele cercetrilor privitoare la structura i proprietile funcionale ale antigenelor, la condiiile care influeneaz aceste proprieti i-au gsit

utilitatea n producerea de vaccinuri. Vaccinarea are ca scop stimularea activ a sistemului imunitar (S.I.), cu scopul de a obine instalarea strii de imunoprotecie antiinfecioas/antitoxic a organismului. IMUNITATEA - FUNCIE BIOLOGIC ESENIAL Imunitatea este o proprietate esenial a tuturor sistemelor biologice, cu diferite grade de complexitate i eficien. Imunitatea poate fi: nnscut sau neadaptativ (=rezistena natural) - este o proprietate de specie ce const n capacitatea unui organism normal de a rmne neafectat de un anumit agent patogen cu care vine n contact; - Dobndit sau adaptativ - proprietate inductibil, individual si poate fi dobandita: - Natural - activ- prin infecie - aparent (simptomatic) starea de boal; - inaparent (asimptomatic)-starea de purttor; - pasiv prin transplacentar (IgG) sau prin secreia lactat (sIgA); - Artificial - activ prin vaccinare ; - pasiv prin seroterapie (administrare de imunoseruri); - prin transfer de celule imunocompetente (transplant de mduv hematogen). Imunitatea innascuta (rezistenta naturala) a organismului la infecii Strategiile de aprare ale organismului gazd fa de infecii, indiferent de natura agenilor infecioi (microorganisme parazite i virusuri) aparin la dou categorii de mecanisme de aprare: cu aciune nespecific, care nu se bazeaz pe recunoaterea agentului infecios, prin care este blocat penetrarea i/sau multiplicarea agenilor patogeni indiferent de proprietile lor de patogenitate, virulen sau de structura antigenic i cu aciune specific, bazat pe recunoaterea specific a agentului infecios. Mecanismele nespecifice sau neadaptative de aprare acioneaz ntotdeauna la fel, pe o cale fix, care nu se mbuntete la al doilea contact i urmtoarele cu acelai agent infecios sau substan strin, n general. Aceste mecanisme sunt reprezentate de bariere mecanice (tegumente si mucoase, descuamarea epiteliilor), celule i molecule (pH-ul acid al pielii, lizozim, proteinele sistemului complement etc.) care pot bloca nespecific ptrunderea sau multiplicarea microorganismelor. Aceste mecanisme primare de aprare sunt motenite, fiind prezente nc de la cele mai simple organisme. De pild, la vertebrate, funcia fagocitar de aprare fa de particule strine este atributul unor celule de origine mezemchimal care i pstreaz rolul de
1

nglobare i de degradare a materialului ingerat, rol evoluat din cel nutriional. n decursul evoluiei filogenetice, n afar de aceste mijloace primitive, care acioneaz imediat i n acelai mod indiferent de natura agentului infecios, au aparut i altele mai evoluate. Celulele nespecifice ale S.I. sunt leucocitele polimorfonucleare (PMN), care fagociteaz i distrug n totalitate toate substanele non-self, ca si macrofagele care fagociteaz i diger parial microorgansimele, pstrnd intaci epitopii imunogeni pe care i prezint limfocitelor. Celule nespecifice sunt i celulele NK (engl. natural killer), celule limfoide (non-T, non-B) care distrug microorganisme de dimensiuni mari, ca i celulele tumorale, pe cale nefagocitar. Limfocitele T sau B fac parte dintre mecanismele specifice de aprare, adaptative, fiind celule cu o remarcabil specificitate de recunoatere, datorit unor receptori membranari specifici pentru diferii epitopi din structura antigenelor, constituind clone de limfocite capabile, fiecare dintre ele, s recunoasc teoretic un singur epitop dintre toi cei existeni n natur. De asemenea sunt capabile de a pstra amintirea primului contact cu un antigen, reacionnd pe o cale mbuntit (mai rapid i mai intens) al doilea contact i urmtoarele cu acelai antigen, n afar de celulele imunitare specifice, n organismul uman sunt sintetizate diferite molecule care pot neutraliza specific diferite antigene: imunoglobuline cu funcie de anticorpi, ca si molecule care pot controla i regla funciile sistemului imunitar: interleukine (IL), interferoni etc. Aadar, n natur exist un conflict permanent ntre agenii infecioi pe de o parte, reprezentai prin virusuri, bacterii, microfungi, parazii i gazdele lor pe de alt parte, care sunt folosite de agenii infecioi ca habitat, surs de hran i energie necesare pentru perpetuarea genelor lor i meninerea n natur. Organismul gazd la rndul su, dispune de un arsenal de mijloace de aprare complexe fa de agenii infecioi i factorii lor de virulen evoluai chiar sub presiunea acestor mecanisme de aprare ale gazdei.
Barierele fizice cutaneo-mucoase, att timp ct sunt intacte, nelezate de ageni fizici sau chimici, reprezint o barier eficient pentru agenii patogeni. Aceasta este expresia funcional a unor mecanisme biologice multiple, deoarece blocarea ptrunderii agenilor infecioi n esuturi nu se datoreaz doar rolului de barier mecanic i chimic, ci este i rezultatul funciilor unor molecule cu rol de receptori existeni la nivelul barierelor respective. Dac agentul patogen nu gsete situsul specific de aderen, este eliminat fr a se putea localiza n organism. Astfel, este cazul bacteriei Salmonella typhi (agentul patogen al febrei tifoide) ca i a altor ageni infecioi, virali (virusul variolei, oreionului, poliomielitei) i bacterieni (Shigella dysenteriae, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae etc.), care reprezint o surs de mbolnvire doar pentru om, dar nu i pentru alte animale, dei att omul ct i alte specii animale posed aceleai bariere mecanice.
2

Imunitatea dobndit artificial activ Imunitatea dobndit n mod artificial i activ se realizeaz prin vaccinare, procedeu care a fost acceptat nc din perioada pasteurian ca o parte a modului nostru de via, constituind confirmarea practic a cunotinelor fundamentale de imunologie i un exemplu de manipulare, de modulare a activitii sistemului imunitar. Vaccinuri convenionale Imunologia ca tiin a debutat prin aplicaii practice, mai exact prin vaccinri sau imunizri active empirice. ncepnd de la Jenner din 1798, se realiza protecia antivariolic, prin inocularea oamenilor prin scarificare, cu pulbere obinut din crustele de vaccin, boal infecioas a vacilor, asemantoare cu variola (numit i vrsatul negru), dar mult mai puin grav. Aceste inoculri au primit numele de vaccinare, de la termenii latineti vacca = vac i vaccinia boala specifica a bovinelor. Clasificarea vaccinurilor convenionale a) Dup modul de obinere:

Vaccinuri atenuate. Bazele tiinifice ale vaccinrii au fost puse de L. Pasteur, care a stabilit principiul atenurii virulenei agenilor patogeni. Primele vaccinuri folosite au fost cele reprezentate de ageni patogeni viabili, slbatici, respectiv din bacterii sau virusuri intacte, dar cu virulen atenuat, astfel inct s nu mai poat determina boala la om, dar s rmn capabile s iniieze o infecie inaparent, dar imunogen, deci capabil s determine starea de imunitate. Vaccinurile atenuate s-au utilizat mult n secolul al XX-lea determinnd o scdere semnificativ a morbiditii i mortalitii datorate bolilor infecioase i se folosesc i n prezent, cu respectarea unei condiii importante: atenuarea virulenei agenilor patogeni s fie stabil i ireversibil. n practic se folosesc vaccinuri vii cu mutante bacteriene sau virale cu virulen atenuat, care determin o infecie, dar nu i boala, avantajul vaccinurilor antivirale (ca i fa de bacterii parazite intracelular) obinute pe aceast cale fiind c stimuleaz i imunitatea celular, nu doar pe cea umoral. Atenuarea se obine fie prin cultivarea n alte gazde dect cele naturale, fie n condiii suboptimale de cultivare in vitro, care s le atenueze pn la anulare patogenitatea, cu pstrarea proprietii de imunogenitate. Ex.: - vaccinul antirabic obinut prin treceri n serie pe animal;
- vaccinul BCG (Bacilul Calmette-Gurin), antituberculos, obinut prin numeroase (230) pasaje repetate n decursul a 13 ani, ale unei tulpini de Mycobacterium bovis
3

(specie patogen la bovine, dar transmisibil i omului) pe un mediu nefavorabil (mediu cu cartof glicerinat i adaos de bil bovin) i care determin i imunoprotecie fa de Mycobacterium tuberculosis, agentul patogen al tuberculozei umane; - vaccinul antirujeolic (confer protecie fa de rujeol sau pojar); - vaccinul antioreion (mpotriva parotiditei epidemice); - vaccinul antipoliomielitic (varianta Sabin);

- vaccinul antivariolic cu un virus nrudit cu cel mpotriva cruia se face vaccinarea; o campanie de vaccinare n mas iniiat n 1967 i finanat de ctre
O.M.S. (150 milioane USD) a condus la eradicarea variolei n lume, a acestei boli grave care a fost declarat nvins n 1978, la 3 ani dup raportarea ultimului caz (Somalia). La succesul acestei campanii au contribuit anumite proprieti structurale i epidemiologice ale virusului variolic: 1) vindecarea clinic este nsoit i de eliminarea virusului, deci nu exist starea de purttor; 2) omul este singura gazd, deci nu exist vectori; 3) vaccinul este foarte eficient, datorit stabilitii genetice i antigenice a virusului (Mims i colab., 1998);

-campaniile de vaccinare n mas au fost organizate cu scopul reducerii morbiditii pn la eradicare ; in prezent exista programme de eradicare a poliomielitei si rujeolei, boli grave cu complicaii neurologice i invalidante (panencefalita sclerozant subacut PASS n cazul rujeolei, paralizia flasc poliomielitic).

Vaccinuri cu ageni infecioi neviabili

Metoda s-a folosit iniial pentru virusuri, inactivate prin caldur i ageni chimici, pentru a le anula infeciozitatea. Aceste vaccinuri stimuleaz eficient sinteza de anticorpi, dar nu mai pot stimula imunitatea celular. Aa se obin vaccinurile antigripal, antirabic, antipoliomielitic (vaccinul Salk), anti-HAV (virusul hepatitei A), dar i vaccinuri antibacteriene; se utilizeaz suspensii de celule bacteriene omorte prin nclzire la temperaturi superioare celei de 60C sau sub aciunea formolului sau fenolului (acesta avnd i rol de prezervant). Ex.: vaccinul antiholeric, antistafilococic (anti Staphylococcus aureus), anti E. coli. Riscul administrrii de vaccinuri inactivate este reprezentat de posibilitatea ca unele particule infecioase s supravieuiasc procedeelor de inactivare (aa cum s-a ntmplat cu vaccinul antipoliomielitic n 1950). n prezent se utilizeaz inactivatori mai fiabili care acioneaz asupra materialului genetic, de tipul -propiolactonei sau hidroxilaminei.

Anatoxinele sunt vaccinuri obinute prin tratarea exotoxinelor (de natur proteic) cu formol 4%o i nclzire (37 - 40C), condiii n care toxinele i pierd complet toxicitatea, dar i pstreaz imunogenitatea. Ex.: anatoxina difteric, tetanic, stafilococic etc.

b) Dup coninutul lor, vaccinurile pot fi: - monovalente obinute dintr-o singur specie bacterian sau serotip viral (vaccinul antistafilococic);
4

- bi-, tri- i polivalente ex. : vaccinul DiTePer, este un trivaccin compus din anatoxin difteric, tetanic i celule atenuate de Bordetella pertussis, agentul patogen al tusei convulsive (n prezent se utilizeaz i Ag acelular; chiar dac bacteria este Gram negativa, s-a obinut i anatoxina pertussis, din pertussis toxin PT o exotoxin); Polidinul este un polivaccin; c) Dup proveniena agenilor patogeni folosii la prepararea vaccinurilor: - autovaccinuri un autovaccin este preparat cu o tulpin bacterian izolat de la un bolnav i folosit pentru vaccinarea aceluiai individ; vaccin anticolibacil, anti-stafilococic, anti-piocianic, n cazul unor infecii cronice, recidivante, rebele la tratamentul cu antibiotice. - stock- vaccinuri- produse in general din mai multe tulpini bacteriene sau virale i destinate pentru imunizari n mas; ex.: vaccinurile antigripal, antirujeolic, DiTePer, antistafilococic etc. Toate aceste tipuri de vaccinuri reprezint vaccinuri convenionale, care s-au dovedit a fi n ultimul secol instrumente importante n profilaxia i limitarea unor boli infecioase cu rspndire endemic sau epidemic i chiar n eradicarea unor boli. Dar aceste vaccinuri, pe lng rolul lor pozitiv incontestabil, pot avea i efecte secundare nedorite: unele pot genera accidente postvaccinale, cum ar fi declanarea unor reacii de autoagresiune sau alergice sau, dac agenii patogeni sunt incorect atenuai, pot determina boala. Uneori, componentele unui vaccin pot competiiona ntre ele sau vaccinurile pot conine, pe lng componentele imunogene i substane supresoare ale rspunsului imun (de ex. prezervani). Relativ recent, au fost semnalate accidente postvaccinale i infecii cu virusul poliomielitic (n Africa, Madagascar), datorate recombinrii virusului atenuat, cu tulpini slbatice. Vaccinurile atenuate sunt contraindicate la anumite grupuri de populaie cu risc, cum ar fi femeile nsrcinate, persoanele imunosupresate sau cele suspecte de leucemii i limfoame, ca i n cursul unor infecii simptomatice. Vaccinuri moderne Pentru evitarea efectelor adverse ale vaccinurilor convenionale au fost imaginate procedee de obinere a unor noi tipuri de vaccinuri, bine definite i cunoscute la nivel molecular, care s induc numai rspunsul imun dorit, nu i reacii secundare, adverse. Astfel de vaccinuri moderne sau vaccinuri ale viitorului se obin prin diferite metode i tehnologii: Vaccinuri produse prin tehnologia ADN recombinant: - vaccinuri corpusculare: vaccinul corpuscular holeric care are inactivat gena pentru subunitatea A a toxinei holerice; Ag carcinoembrionic recombinat (pentru tratarea cancerului de colon i de sn);
5

- vaccinuri cu vectori recombinai, obinui prin clonarea genelor pentru anumite proteine imunogene virale sau bacteriene n virusuri, celule procariote sau eucariote (levuri) atenuate; de ex., aa s-a obinut vaccinul anti hepatit tip B pe celule de levuri; vaccinul antivariolic, prin inserarea unor gene ale virusului variolei, n virusul vaccinei; vaccinul BCG recombinat, care exprim proteina major (antigenul 85B) antigenic, prezent la Mycobacterium tuberculosis;

Vaccinuri ADN cercetri recente au artat c atunci cnd se injecteaz ADN i.m.,

celulele musculare expuse pot exprima mesajul respectiv i sintetiza proteine imunogene. Practic, ADN-ul este reprezentat de o plasmid, plus un promotor care asigur sinteza unei cantitai mari de protein imunogen. Acest tip de vaccinuri stimuleaza imunitatea umoral i celular, sunt foarte stabile i nu necesit pstrare la frigider. Numeroase vaccinuri produse pe aceast cale sunt n curs de verificare (Wood, 2001).

Vaccinuri subunitare utilizeaz ca Ag subuniti, componente ale agenilor infecioi:

- vaccinuri ribosomale- sunt reprezentate de ribozomi bacterieni izolai (70S). S-a constatat c

mai imunogene sunt subunitile ribozomale separate (30S i 50 S), modul lor de aciune fiind incomplet elucidat; ipoteze: proteinele ribozomale ar fi imunogene, prezena LPS contaminante i a ARNr, substane care ar avea un efect adjuvant; - vaccinul anti-hepatit B, cu AgHBs (Ag Australia, componenta de suprafa a virusului); - vaccinuri sintetice (polipeptide) sunt potenial cele mai sigure, ieftine i uor de pstrat; este dificil de depistat ns care sunt cei mai imunogeni epitopi din structura agenilor patogeni (ntr-un polipeptid se inser epitopi recunoscui de limfocitele CD4+, B i CD8+); - vaccinuri anti-adezine: obinute fa de adezinele bacteriene, structuri de suprafa care mediaz aderena bacteriilor patogene la substratul celular sensibil, fenomen care constituie prima faz, sine qua non, a unui proces infecios. De ex. vaccinuri anti-antigenele capsulare de la Haemophilus influenzae (agentul cauzal al unei infecii influenza-like), anti-Neisseria meningitidis (unul dintre agenii poteniali ai unor meningite fatale). Antigenele capsulare sunt adesea de natur polizaharidic, astfel c nu stimuleaz limfocitele Th i determin doar sinteza de IgM. Pentru a evita acest neajuns, antigenele polizaharidice se conjug cu anatoxin tetanic. Dificultatea major de obinere a unor vaccinuri eficiente este uneori efectul fenomenului de variaie antigenic a agenilor patogeni, un mecanism de evitare a rspunsului imun al gazdei. Un alt motiv de insucces al vaccinurilor anti-adezine n general, l constituie, concentraia mic a anticorpilor specifici la nivelul mucoaselor ;
Vaccinuri antiidiotipice sunt constituite din Ac din setul 2 (antiidiotipici), anti- Ac1, a cror sintez se datoreaz unicitii structurale a situsurilor combinative ale anticorpilor i caracterului antigenic al idiotipului acestora (vezi Subcap. Heterogenitatea idiotipic a Ig-lor).