VIRUSUL RUBEOLOS

Metode de diagnostic

Autori: Profesor coordonator: Ardelean Lucia-Raluca Teaha Monica Medicin general Grupa I Universitatea Oradea 1

Virusul rubeolos
Virusul rubeolos face parte din familia Togaviridae, genul Rubivirus, este membru unic al genului, agent etiologic al rubeolei, maladie de gravitate medie, dar important prin aceea c la gravide infecia poate produce concomitent leziuni ale fetusului i malformaii congenitale. Rubeola a fost recunoscut ca entitate nozologic distinct de rujeol i scarlatin din 1881.Etiologia viral a fost confirmat Hiro Y i Tosaka S, Habel K. Considerat mbolnvire minor, autolimitant, rubeola a intrat n atenia lumii medicaleca infecie cu urmri severe dup studiile efectuate de oftalmologul Gregg N. n 1940.Aceasta a constatat, dup un episod epidemic de rubeol n Australia, apariia a numeroase malformaii oculare i cardiace la copiii nscui din mame cu rubeol recent. Potenialul teratogen a propulsat mbolnvirea cu rubeol n rndul problemelor medicale importante. Virusul rubeolic a fost izolat n culturi de celule de ctre Parkman D. i colaboratorii, ca i de Weller i Neva A. n 1962.

Relaii virus-celul gazd

Cultivarea se face n :culturi de celul: virusul rubeolos se cultiv n: culturi primare de rinichi sau rinichi de iepure, cuturi diploide de origine uman, simian sau de iepure, linii celulare continue-RK13, SIRC(iepure)etc. :animale-maimuele(Macaca mullata) inoculate pe diverse ci(nazal,subcutan muscular venos cu snge rubeolic dezvolt o mbolnvire uoar similar celei umane.Dup8-10 zile se nregistraz febr, erupie macular uneori asociat cu leucopenie i viremie. :ou embrionate:inocularea virusului rubeolos nu determin modificri morfologice evidente .

Diagnostic de laborator
Produse patologice necesare: secreii rinofaringiene, lacrimi, snge, urin, lichid cefalorahidian, materii fecale; fragmente de esuturi, prelevate post-mortem, n rubeola congenital, lichid amniotic, placent, esuturi fetale(post-abortum);probe de snge recoltate la debut i dup 2,3 sptmni de la mbolnvire. A.Examen direct ARN-ul viral este detectat n rubeola congenital n esuturile fetale sau n aspirate din cristalin, post-abortum sau la necropsie n vilozitile corionice placentare (biopsie in utero) i n lichidul amniotic prin RT-PCR.Nu este tehnic de rutin. B.Izolare i identificare Se practic pentru diagnosticul rubeolei congenitale sau n formele grave complicate. Culturi celulare-prelevatele se inoculeaz n culturi celulare primare de maimu(AGMK) sau liniile celulare continue RK-13 i Vero.E.c.p. n majoritatea cazurilor este absent, mai bine exprimat n RK-13 i Vero, dezvoltndu-se ncet i manifestndu-se dup pasaje repetate. Pentru detectarea rapid a virusului, se efectueaz: 1) teste de interferen la interval de 9-11 zile de la inocularea cu produse patologice, culturile celulare reprezentnd nicio modificare lezional de tip e.c.p., determinat de virusul interferent nu va aprea dei n culturile-martore acesta este evident; 2) HAD cu hematii de pui de o zi este test orientativ.
2

Identificarea se face: a) imunofluorescen indirect pe monostraturile infectate, esutul fiind sensibil i specific, b) seroneutralizare n culturi celulare cu seruri specifice standard. C.Diagnosticul serologic Pentru infecia cu virusul rubeolos, diagnosticul serologic constituie metod de selecie. Prezena anticopilor se detecteaz: 1) Reacia de hemaglutinoinhibare(HAI)- aplicat n practica de zi cu zi, a fost folosit extensiv.Are avantajul de a detecta anticorpii HAI imediat dup debutul bolii i apoi pe durata ntregii viei, fiind indicator de infecie rubeoloas n antecedente. Inconvenientul principal n prezna hibrizilor serici nespecifici(betalipoproteine).Acurateea n ndeprtarea acestora prin pretratarea serurilor cu heparin sau adsorbie pe hematii, condiionez absena rezultatelor fals pozitive 2) Hemaglutinare pasivHAP- are avantajul de a fi un test rapid, avnd sensibilitatea similar SN sau Reacia de fixare a complementului. 3) Hemoliza radial n gel-se aplic pentru evaluri de seroprevalen. 4) Latex aglutinarea-este rapid, uor realizabil. 5) ELISA-se efectueaz cu truse disponibile n comer, att pentru evidenierea Ig G ct i a Ig M. 6) Imunofluorescen indirect-se fectueaz n culturi celulare infectate, ce conin antigene virale. Anticorpii specifici sunt detectati prin utilizarea de imunoglobuline anti-om conjugate cu fluorescein.Dei rapid i relativ ieftin, reacia are dezavantajulde a fi interpretat subiectiv. 7) Detectarea Imunoglobulinei M-este important pentru diagnosticul infeciei recente, mai ales la gravide. Prezena Ig M este atestat prin separarea n gradient de densitate sau prin RHAI, ELISA; IF, RIA. 8) Testul de transformarea a limfocitelor-folosete mononucleare crioprezervate. La copiii seropozitivi, asocierea cu un test negativ de transforamare specific sugereaz rubeol congenital. Diagnosticul de rubeol este pozitiv cnd pe probe duble de ser prelevate la debut i apoi la interval de 3-4 sptmni, titrul anticorpilor specifici crete de patru ori.Evaluarea corect a rezlutatelor are semnificaie special: 1) La gravide ascensiune titrurilor anticorpilor n dinamic i prezena Ig M confirm infecia rubeoloas recent. 2) La nou-nscui suspeci de rubeol congenital: n cazul acesta prezenaIg M n circulaie confirm infecia congenital, deoarece Ig M materni nu trec bariera placentar. Ig M antirubeoloase sunt prezente n infecia congenital 90% dintre copiii n vrst de 3-6luni i 50% la cei de 6-12 luni disprnd dup 1 an.Absena Ig M specifice infirm boala congenital. Existena unor titruri mari persisitente de Ig G dup vrsta de 6 luni, cnd Ig G materni dispar, este un argument n plus. Diagnosticul cert de infecie congenital necesit n plus izolarea virusului ruboelos.Cum acesta este relativ dificil, prezena ARN viral poate fi detectat cu RT-PCR n secreiile nazofaringiene sau n aspiratele de cristalin cu cataract.

Bibliografie: Elvira Snziana Ciufecu Virusologie medical, Editura Medical Naional 2003 www.google.com www.justmed.eu
3