CROISSANCE BACTERIENNE

Prsent par Dr DJRO AGBA AIME

PLAN
Introduction I-LE CYCLE CELLULAIRE BACTERIEN 1) cycle 2) courbe de croissance II- FACTEURS DE CROISSANCE Conditions physico-chimiques III-MOYENS DETUDE DE LA CROISSANCE BACTERIENNE A- Milieux de culture B- Principales techniques de numration bactrienne Conclusion

INTRODUCTION

-Etat vgtatif -Etat de repos Croissance: augmentation de volume des cellules augmentation du nombre de cellules.
-

LE CYCLE CELLULAIRE BACTERIEN

3tapes l'initiation (B) : ARNm et protines la rplication de l'ADN chromosomique (C) la division cellulaire (D)

LE CYCLE CELLULAIRE BACTERIEN

bactries Gram positif paroi est riche en peptidoglycane AUTOLYSINE cellules filles

Mode de regroupement

2) courbe de croissance bactrienne

Interprtation
Phase stationnaire croissance exponentielle phase stationnaire :

N ! No v 2
-d= temps de doublement de la population, -No=la population initiale -T=le temps

t d

Figure2 Multiplication de Escherichia coli

II-FACTEURS DE CROISSANCE
Conditions physico-chimiques de la croissance Temprature pH activit de leau pression osmotique concentration en oxygne pression

Temprature (C):
Psychrophile0 20 Msophile20 45 Thermophile45 plus de 70 Psychrotrophe0 35 Thermorsistante 65 hermophile70 prs de 110 Cryophile 4C Thermophile thermorsistante 45 et 60

Noms

Tempratures de croissance Exemples (C)

Psychrophile Msophile Thermophile Psychrotrophe (ou psychrophile

0 20 20 45 45 plus de 70 0 35

Pseudomonas marina Escherichia coli Thermus aquaticus Bacillus psychrophilus, Pseudomonas fluorescens

facultatif) Thermorsistante Supportent des tempratures de 65 C pendant quelques minutes Hyperthermophile cryophiles Thermophile thermorsistante 70 prs de 110 4C Ont une temprature optimale de croissance entre 45 et 60 ET supportent de hautes tempratures pendant un moment Entrocoques et Streptocoques (sans faire des spores) Archobactrie Pyrolobus fumarii Germes ou spores de Bacillus et Clostridium

pH
Majorit pH=7 Les bactries mdicales : pH optimum= 77,6 acide alcalin : vibrio .

activit de leau (aw)

eau pure a une aw de 1 addition sucre, sel autre solut diminue aw,

pression osmotique

isotoniques milliosmoles

[NaCl]=9g/l soit 300

Mycoplasmatales :paroi espces marines :35 g de NaCl /l

 bactries non-halophiles: [NaCl] <0,2 M. halophiles [NaCl] > 0,2 M pour les moins halophiles et 5,2 M pour les plus halophiles halotolrantes :staphylocoque

Exemple

Exemple

concentration O2
Arobie: O2 fermentatif : un substrat organique. respiration anarobie : cytochrome+phosphorylation oxydative compos minral

Barotolrant

Croissance entre 1 et 500 atm.

Colwellia hadaliensis Pas trouv dexemple Pas trouv dexemple

Modrment barophile

Croissance optimale 5000 m et encore possible 1 atm. pression

Barophile extrme

Ils requirent au minimum 400 atm ou plus pour leur dveloppement.

Milieux de culture
milieu solide: agrgation cellules colonies isoles
l

glatine : 25C et bactrie glose ou agar-agar: +produits biologiques

Milieux de culture
En milieu liquide : dispersion Boullon de culture

Milieux de culture
Les milieux naturels ou empiriques Trs utiliss constituants d'origine animale (macrations ou
dcoctions de tissus, peptones, uf, glatine, lait,.)

vgtale (pomme de terre, levure, soja, )

Les milieux synthtiques

chimiquement dfinis milieu ure-indole

Les milieux semi-synthtiques

substances chimiques + produits naturels exemple, la glose lactose au bromocrsol pourpre (BCP) :
5 g de peptone+3 g d'extraits de viande+10 g de lactose+15 g d'agar-agar +0,025 g de pourpre de bromocrsol.

Autres milieux
milieux d'isolement milieux d'enrichissement et les milieux slectifs milieux d'identification milieux de conservation

techniques de numration

Techniques ne permettant pas de diffrentier les bactries vivantes des bactries tues

Numration directe
- Numration en chambre gradue

-Numration en cellule de Breed -Compteurs lectronique de particules

Numration indirecte sur lame (mthode de Wrhigt)

pour la numration des suspensions vaccinales

Milieu de culture non renouvel

Mthode directe Dtermination par rapport au poids sec Ou biomasse 1mg=qq milliards debactries

Milieu de culture non renouvel

Numration totale Numration viable

Milieu de culture non renouvel

Mthodes indirectes Msure optique tubidimtrique Dosage par absorption du CO2 libr Dosage de N2 bactrien Activit enzymatique bactries

Nphlomtrie
soit une gamme talon partir dune suspension bactrienne titre - soit une gamme dalbumine

Techniques applicables uniquement aux bactries vivantes

Numration milieu solide par ensemencement dans la masse principe : on parle de CFU= Colonie Formant Unit, UFC=Unity Forming Colony

Technique lanse calibre dite de platine ou ose 1 ose = 15mg de bactries cultives sur milieu solide Diamtre moyenne 23mmm 4,8mm vol = 20UI 3,5mm vol =10UI 2,25 vol = 4UI 2,1mm vol = 3UI

 technique de la lame immerge Plaquettes commercialises : - sur une surface CLED ( pour dnombrement de cocci et bacilles) - sur lautre surface Mac Conkey ( pour les Bacilles Gram (-) - interprtation des rsultats laide dabaques

Contrle de pollution de surface

- par empreinte sur glose - Ou frotter sur une aire bien limite Mthodes de stries

 c) Numration en milieu liquide Dtermination du NPP= Nombre le Plus Probable =mthode de Mc Crady d) Numration par filtration sur membranes e) Ensemencement automatique : Ex : appareil de Steers

 Dnombrement des bactries par la technique des dilutions

Conclusion
L'tude de la nutrition et de la croissance bactrienne est riche d'applications : Elle permet de dfinir les paramtres assurant une culture optimale des bactries (atmosphre gazeuse, temprature, pression, etc.). Elle permet la confection de milieux servant cultiver, isoler et identifier les bactries ainsi qu' tudier leur sensibilit aux antibiotiques