BIOENERGETIC I METABOLISM OXIDATIV

Metabolismul reprezint totalitatea proceselor chimice din organism n cadrul crora un numr variat de substane se convertesc n energie i produi specifici. 5.1. Bioenergetic i metabolism Procesele metabolice se desfoar n sensul realizrii urmtoarelor obiective: obinerea energiei chimice din molecule combustibil sau din energia solar; conversia substanelor nutritive exogene n precursori ai componentelor celulare;

asamblarea compuilor simpli (monomeri) n proteine, acizi nucleici, poliglucide;

formarea i degradarea biomoleculelor necesare diferitelor funcii specifice. Sursele de energie i de materie prim sunt diferite i, n funcie de acestea, organismele se mpart n mai multe grupe: a) n funcie de forma chimic a carbonului folosit: - organisme autotrofe care folosesc drept surs dioxidul de carbon (se hrnesc singure), de exemplu plantele, unele bacterii; - organisme heterotrofe care folosesc carbonul din mediu ntr-o form redus (ex. glucoza), cum sunt animalele, microorganismele. Celulele heterotrofe pot fi aerobe, folosind ca acceptor final oxigenul, i anaerobe, folosind ali acceptori. Multe celule heterotrofe sunt facultative, adaptndu-se la condiii aerobe sau anaerobe. b) n funcie de sursa de energie folosit, organismele pot fi: - fototrofe, organismele ce folosesc lumina; - chemotrofe cele care folosesc reacii de oxidoreducere. Reaciile metabolice din organism se desfoar n etape la care particip diferite substane denumite intermediari metabolici. Metabolismul are dou aspecte fundamentale contrastante: catabolism i anabolism. Catabolismul cuprinde toate procesele degradative pe care le sufer moleculele nutritive (glucide, lipide, proteine) provenite din alimente sau din rezervele celulare. Degradarea principiilor alimentare se caracterizeaz prin convergen i se realizeaz n mai multe stadii (Figura 5.1):

71

Stadiul I nutrienii sunt descompui n unitile constituente caracteristice; Stadiul al-II-lea unitile de baz (aminoacizi, glucoz, acizi grai) sunt degradate la un compus unitar, mai simplu, acetilCoA; Stadiile al-III-lea i al IV-lea reprezint respiraia celular i cuprinde procesele prin care acetilCoA este transformat n dioxid de carbon i ap. Prin transformrile realizate se formeaz cea mai mare parte din energia celular sub form de ATP. Pe lng amoniac, dioxid de carbon, ap, ca produi finali ai catabolismului mai rezult acid lactic, uree, acid uric, creatinin, etc.

Figura 5.1. Stadiile catabolismului - convergen Anabolismul se refer la totalitatea reaciilor prin care se constituie din precursori biomoleculele complexe (proteine, acizi nucleici, polizaharide, lipide). Formarea noilor legturi necesit o mare cantitate de energie furnizat de ATP-ul generat din procesele catabolice. Cile anabolice se caracterizeaz prin divergen, de la un intermediar metabolic simplu putndu-se obine pe ci diferite compui cu funcii biologice specifice. Anumite ci metabolice centrale ale metabolismului intermediar (de exemplu ciclul Krebs) au att rol catabolic ct i anabolic, fiind denumite ci amfibolice, ci prin care dintrun compus simplu se formeaz o mare varietate de constitueni celulari.
72

Turnover celular. Componentele celulare nu rmn intacte pe ntreaga durat de via a celulei. Ele se afl ntr-un echilibru dinamic n care viteza relativ mare de sintez este contrabalansat de o vitez la fel de mare de degradare. Relaia dintre acestea este denumit turnover metabolic. Turnoverul este rapid n esuturile obligate s se adapteze modificrilor substanelor nutritive exogene (de ex., ficat, mucoasa intestinal). Pentru proteine hepatice, t1/2 este de 5-6 zile, n timp ce pentru cele musculare 30 zile. Reacii exergonice, endergonice i cuplate. Procesele metabolice se desfoar fie n sensul obinerii de energie, fie pentru a folosi energia n reacii specifice. Energia necesar activitii organismului este preluat din mediu ca energie chimic sau solar i trebuie transformat n energia chimic din ATP. Pentru a descrie schimburile de cldur, energie i materie i a stabili dac un proces este spontan sau nu trebuie aplicate legile termodinamicii. Organismele vii sunt sisteme deschise, schimb energie i materie cu mediul nconjurtor. n funcie de valoarea variaiei de energie liber (G), reaciile biochimice pot fi: a) reacii exergonice, G<0, procesul se desfoar spontan n sensul indicat, cu eliberare de energie; b) reacii endergonice, G>0, procesul are nevoie de energie pentru a se desfura n sensul dorit, desfurndu-se spontan n sens invers; c) reacii cuplate, reacii prin care un proces nefavorabil termodinamic (G) este transformat n unul favorabil cu ajutorul unui intermediar comun. De exemplu: A B + C, G = 13 kcal/mol BD, G = - 20 kcal/mol Reacia final: A C + D are G = - 7 kcal/mol Un numr mare de compui mediaz transferarea energiei de la reaciile exergonice la cele endergonice: coenzimele reduse (NADH,H+, FADH2) i compuii macroergici. Compui macroergici. Sunt compui cu structur chimic variat ce conin legturi bogate n energie (Figura 5.2). a) Anhidride al acidului fosforic i acizilor carboxilici: 1,3-difosfoglicerat (1,3 DPG); b) Enolfosfai: fosfoenolpiruvat (PEP); c) Fosfoguanidine cu rol de depozit de energie: creatinfosfat, argininfosfat; d) Nucleotid polifosfai cu rol de depozit de energie: ATP, CTP, GTP, UTP; e) Esteri tiolici: acetilCoA f) Nucleotide ciclice: AMPc, GMPc g) Glucide i aminoacizi activai: S-adenozilmetionina, UDP-glucoza etc.
73

NH2 N N N O H H H OH OH N

O C O~ PO3H2 CHOH CH2OPO3H2

COOH C O ~ PO3H2 CH2 acid fosfoenolpiruvic

NH ~ PO3H2 H2N=C-N-CH2-COOH CH3 creatinfosfat

O-P ~ O-P ~ O-P-O-H2C - OO O H

acid 1,3-difosfogliceric

acid adenozintrifosforic (ATP)

( G= -35,7 kJ/mol)

Figura 5.2. Structura unor compui macroergici n procesele biochimice, principalul intermediar comun ce nmagazineaz energia este acidul adenozintrifosforic (ATP). ATP are n molecul dou legturi fosfat macroergice ce se pot scinda n mod diferit: ATP + H2O ADP + Pi, G0 = - 7,3 kcal/mol ATP + H2O AMP + PPi, G0 > - 10 kcal/mol ATP ocup o poziie central n energetica celular funcionnd ca intermediar ntre donorii de energie i acceptorii de energie metabolici.
ADP ADP Glucozo-6-fosfat Glicerol-3-fosfat ADP ADP AMP Acceptori de grupe fosfat Donori de grupe fosfat ATP acid fosfoenolpiruvic acid 1,3 difosfogliceric creatinfosfat

ATP este principalul compus macroergic care furnizeaz energia pentru reaciile metabolice, contracia muscular, excitaia nervoas, transportul activ prin membrane. 5.2. Respiraia celular Prin oxidarea unor compui biologici rezult piruvat odat cu eliberarea unei pri din energia nmagazinat. n condiii de aerobioz, catabolismul piruvatului continu pn la CO2 i ap prin respiraie celular, cu eliberarea complet a energiei nmagazinate. Respiraia celular reprezint procesul general spre care converg reaciile de catabolism al tuturor principiilor alimentare (glucoz, acizi grai, aminoacizi) i include: a) ciclul Krebs (ciclul acizilor tricarboxilici, ciclul acidului citric); b) lanul transportorilor de hidrogen i electroni (lanul respirator); c) fosforilarea oxidativ (procesul de sintez a ATP).
74

Localizare intracelular. Enzimele implicate n acest proces sunt localizate fie n matricea mitocondrial, fie n diferite zone ale membranei mitocondriale. Membrana mitocondrial nu este selectiv pentru piruvat, astfel c acesta poate ptrunde n mitocondrie pentru a se transforma n acetilCoA prin decarboxilare oxidativ. Decarboxilarea oxidativ a piruvatului reprezint veriga ntre procesele ce genereaz piruvat (n special, glicoliza) i ciclul Krebs. Transformarea piruvatului n acetilCoA se realizeaz treptat, sub aciunea unui sistem multienzimatic denumit piruvat dehidrogenaz care reprezint asocierea necovalent a trei enzime: piruvat dehidrogenaza decarboxilant coenzim tiaminpirofosfat (TPP), lipoilreductaz transacetilaza, acid lipoic ca i coenzim, i dihidrolipoil dehidrogenaza, coenzim FAD. La procesul de decarboxilare mai particip coenzima A (CoASH) i NAD +, ce acioneaz independent n procesul ireversibil al decarboxilrii piruvatului.

Corelaii clinice. Avitaminoza B1 determin o decarboxilare defectuoas a

piruvatului, acesta se acumuleaz n organism, n special n creier, determinnd o serie de tulburri neurologice (sindromul Wernicke-Korsakoff). Simptome asemntoare pot s apar n cazul consumului cronic de alcool. Ciclul Krebs (ciclul acizilor tricarboxilici, ciclul acidului citric) Ciclul Krebs este calea metabolic prin care acetilCoA se oxideaz cu formare de dioxid de carbon odat cu cedarea hidrogenului unor echivaleni de reducere (formele reduse ale coenzimelor NAD+ i FAD). Procesul se desfoar n mai multe etape, enzimele ce le catalizeaz fiind localizate, majoritatea n matricea mitocondrial. n figura 5.3. este prezentat schematic secvena de reacii din ciclul Krebs, enzimele ce intervin fiind numerotate astfel: 1. citrat sintaza; 2. aconitaza; 3. izocitrat dehidrogenaza;
4.

-cetoglutarat dehidrogenaza;

5. succinil tiokinaza; 6. succinat dehidrogenaza;

7.

fumaraza;

8. malat dehidrogenaza Succinat dehidrogenaza este singura enzim a ciclului Krebs ce nu se gsete n matrice ci este legat de membrana intern mitocondrial. Aceasta conine grupe Fe-S ce rein electronii de la FAD i i cedeaz lanului transportorilor de H+ i e- din membran.
75

Figura 5.3. Secvena reaciilor din ciclul Krebs Pe parcursul ciclului Krebs sunt 4 etape ireversibile din care rezult echivaleni de reducere ce vor alimenta lanul transportorilor de H+ i electroni: etapele 3, 4, 6 i 8:
2 izocitrat 2 + 2NAD + + 2NAD + 2 cetoglutarat + 2NADH,H + +

cetoglutarat

2 succinilCoA + 2NADH,H 2 fumarat + 2FADH 2 2 oxalilacetat + 2 NADH,H +

2 succinat + 2FAD 2 L-malat + 2 NAD +

Echivalenii de reducere conserv energia rezultat la oxidarea acetil-CoA. Ciclul Krebs - cale amfibolic. Ciclul Krebs reprezint calea catabolic final n transformarea glucozei, aminoacizilor i acizilor grai rezultai prin hidroliza principiilor alimentare dup metabolizarea specific la acetil CoA. Totodat unii intermediari ai ciclului Krebs sunt precursori importani n biosinteza unor compui cu activitate biologic, ciclul Krebs avnd i un rol anabolic. a) Citratul poate s ias din mitocondrie n citoplasm unde genereaz acetilCoA necesar biosintezei acizilor grai i steroizilor. b) -cetoglutaratul i oxaloacetatul particip la reacii de transaminare, fcnd legtura cu metabolismul proteic; c) SuccinilCoA este precursorul protoporfirinei IX din structura hemului; d) Unii intermediari ai ciclului Krebs sunt verigi importante n metabolismul aminoacizilor (Figura 5.4).
76

Figura 5.4. Ciclul Krebs cale amfibolic Lanul transportorilor de H+ i electroni Lanul transportorilor de H+ i electroni este etap a respiraiei celulare ce continu oxidarea echivalenilor de reducere formai, mai ales, n ciclul Krebs. Acest proces este posibil cu participarea unor componente ale membranei mitocondriale, majoritatea proteinenzime, ce realizeaz reoxidarea echivalenilor de reducere (NADH, FADH2), energia obinut fiind canalizat ulterior spre sinteza de ATP prin procesul de fosforilare oxidativ. Procesul const n reacii de oxidoreducere prin care electronii i protonii (H+), se deplaseaz de la formele reduse NADH, H+ pn la oxigen, acceptorul final al lanului, cu formare de ap. Reacia global este: NADH,H+ + O2 NAD+ + H2O Reacia poate fi mprit n dou reacii pariale: NAD+ + 2H+ + 2e- NADH,H+ + H2O, E0 = - 0,32 V O2 + 2H+ + 2e- H2O, E0 = 0,82 V Variaia de potenial este mare, E0 = E0acceptor (o2) E0 donor (NAD+) = 1,14V. Lanul transportorilor de H+i electroni permite trecerea treptat a celor 2e- de la cuplul cu potenialul cel mai electronegativ (NADH/NAD+) la cel cu potenialul cel mai electropozitiv (O2) prin implicarea mai multor cupluri redox ale cror poteniale sunt intermediare ntre cele dou valori. Energia eliberat este stocat de-a lungul membranei interne a mitocondriei sub forma unui gradient de protoni (H+) ce furnizeaz energia necesar sintezei de ATP.
77

Componentele lanului respirator se deosebesc din punct de vedere al naturii lor: a) flavinenzime (flavoproteine); b) coenzima Q (ubiquinona), component liposolubil; c) citocromii; d) proteine Fe-S ; e) proteine cu cupru. Coenzima Q (ubiquinona) este o chinon liposolubil. Funcioneaz ca transportor mobil de electroni, deoarece fiind liposolubil se poate deplasa prin membrana mitocondrial.
O H3CO H3CO CH3 [CH2-CH=C-CH2]n-H O CoQ CH3 + 2H 2e H3CO H3CO OH CH3 [CH2-CH=C-CH2]n-H OH CoQH 2 CH3

Dac n=10, forma este a coenzimei Q10 Citocromii b i c1 sunt hemoproteine localizate n lan ntre CoQ i citocromul c. Citocromii a i a3 funcioneaz mpreun formnd complexul citocrom oxidazei. Citocromii funcioneaz prin transferul de electroni cu modificarea valenei atomului de metal coninut (fier sau cupru). Prin solubilizarea membranei mitocondriale s-au izolat patru complexe membranare pe care le formeaz aceste componente, ce se gsesc distribuite n membrana mitocondrial n poziii fixe (Figura 5.5). Complexul I: NADH - CoQ oxidoreductaza. Accept electroni de la NADH,H+ i face legtura ntre ciclul Krebs, oxidarea acizilor grai, glicoliz i lanul transportor de H+ i electroni. La nivelul acestui complex sunt expulzai 4 H+ n membrana mitocondrial.

Figura 5.5. Complexele lanului respirator

78

Complexul II: succinat - CoQ oxidoreductaza include succinat dehidrogenaza, enzim ce intervine n ciclul Krebs, reprezentnd o legtur direct ntre acest proces metabolic i lanul respirator. Neavnd suficient energie, complexul al II-lea nu poate s expulzeze H+ pe faa dinspre citoplasm a membranei, aa cum se realizeaz n cazul complexului I. Complexul III: CoQ - citc oxidoreductaza. Complexele I i II cedeaz electronii coenzimei Q ce reprezint substratul pentru complexul III. La nivelul complexului III se realizeaz expulzarea a 4 H+spre membran. Complexul IV: citocrom c oxidaza reoxideaz citocromul c, reducnd oxigenul la O2- din ap. i la acest nivel sunt expulzai 2 H+n spaiul intermembranar. Odat cu transportul electronilor prin lanul respirator, zece ioni H+ sunt eliberai n spaiul intermembranar, se acumuleaz pe faa dinspre citosol genernd un gradient de H+ ce reprezint o surs enorm de energie potenial care va fi folosit pentru sinteza ATP-ului odat cu revenirea acestora n matricea mitocondrial (fora motrice a protonilor). Fosforilarea oxidativ n lanul respirator exist trei etape ce decurg cu o scdere a energiei mai mare de 7,3 kcal ct sunt necesare pentru sintetiza unei legturi macroergice n ATP. 1. NADH,H+ CoQ, G0 = - 12,2 Kcal/mol 2. citb citc, G0 = - 9,9 Kcal/mol 3. citc O2, G0 = - 23 Kcal/mol Complexul mitocondrial ce realizeaz sinteza ATP-ului se numete ATP-sintaza (F1 ATP-az). Enzima are dou componente: F1, o protein periferic de membran, care catalizeaz sinteza ATP-ului, i F0, o protein integral, care reprezint porul membranar ce formeaz canalul prin care sunt transportai H+ n matricea mitocondrial. Enzima este localizat majoritar pe faa dinspre matrice a membranei. Unii metabolii (piruvat, izocitrat etc.) pot determina sinteza a circa 3 moli de ATP pentru fiecare atom de oxigen redus, n timp ce oxidarea altor substraturi (succinat etc.) determin sinteza a aproximativ 2 moli, deoarece intr n lan dup primul situs de fosforilare. Inhibitorii lanului transportorilor de H+ i electroni i ai fosforilrii oxidative Procesul de respiraie celular poate fi afectat de anumii compui ce mpiedic transferul H+ i electronilor prin lanul respirator sau cuplarea cu fosforilarea oxidativ. a) Inhibitori ai complexului I: rotenona(insecticid), amital (barbituric), unele antibiotice, mercuricele, demerolul (analgezic);
79

b) Inhibitori ai complexelor II i III (blocheaz transportul electronilor): antimicina (antibiotic din Streptomyces griseus); c) Inhibitori ai complexului IV (blocheaz transportul electronilor de la citocromul a3 la oxigen: cianura, azida, monoxid de carbon; d) Inhibitori ai ATP-azei: oligomicina. Agenii de decuplare sunt compui care acioneaz prin disiparea gradientului de H+ din membrana intern mitocondrial, de ex. 2,4-dinitrofenolul, dicumarolul. Au posibilitatea de a funciona ca transportori de H+ de pe faa citosolic spre cea dinspre matrice a membranei, n locul ATP-sintazei. Energia eliberat de transferul de electroni este disipat sub form de cldur. Animalele nou-nscute, cele adaptate la frig i cele care hiberneaz au capacitatea de a genera cantiti mari de cldur prin decuplarea fosforilrii oxidative. esutul adipos al acestora conine multe mitocondrii (care-i dau culoarea brun - esut adipos brun). Membrana intern a mitocondriilor din celulele esutului adipos brun conin o protein endogen denumit termogenin sau UCP-1 (uncoupling protein 1, proteina decuplant mitocondrial) care formeaz canalul pentru trecerea H+ dinspre citosol spre matrice, decuplnd ATP-sintaza.

80