EPURAREA TOXICELOR Epurarea toxicelor/medicamentelor are loc prin biotransformare (metabolizare) i excreie.

Pentru unele medicamente depozitarea tisular constituie de asemenea o form de epurare. Biotransformarea reprezint totalitatea transformrilor pe care compuii xenobiotici le sufer n organism, transformri n urma crora se formeaz metabolii, cu structuri chimice, proprieti fizico-chimice i aciuni farmacodinamice diferite. n general, biotransformrile decurg n sensul apariiei de metabolii cu activitate biologic diminuat sau anulat, cu hidrosolubilitate ridicat , ceea ce crete viteza de eliminare prin rinichi sau transpiraie. Exist i excepii: medicamente nemetabolizate (puine): substane gazoase i volatile (narcoticele), substane anorganice hidrofile, sau medicamente / toxice care formeaz metabolii cu toxicitate egal sau mai mare cu a compusului iniial ori cu aciune terapeutic diferit (exemple: acidul acetilsalicilic se transform n salicilat la fel de activ, fenacetina prin oxidare se transform n paracetamol mai activ, codeina prin oxidare n morfin mai activ etc.). Principalul sediu al metabolizrii este ficatul, ns unele toxice pot fi biotransformate la nivelul unor esuturi / organe (plasm, rinichi, piele, plmni, splin, mucoasa ocular etc.) i chiar naintea absorbiei i trecerii lor n snge i limf. Exemple: acidul clorhidric din stomac descompune carbonaii i bicarbonaii de sodiu (cu formare de CO2, aprnd pericolul perforrii mucoasei), carbonatul de bariu (cu eliberarea Ba2+ foarte toxic); inactiveaz unele medicamente: penicilina, insulina, heparina, vaccinurile, ACTH (hormon adrenocorticotropic) etc. - esterazele din sucul gastric hidrolizeaz heroina, acidul acetilsalicilic (producerea de microhemoragii de ctre acidul saliclic, cu pKa = 3 - bacteriile din colon favorizeaz transformarea compuilor cu sulf n H2S, scindarea prin reducere a coloranilor azoici, hidroliza unor compui organici etc

- n plmni unele toxice ce ptrund pe cale respiratorie se pot combina cu CO2 sau cu apa - esterazele din plasm hidrolizeaz atropina, cocaina, procaina, iar unele metale se combin cu proteinele plasmatice urmnd apoi depozitarea lor n organe. Biotransformarea toxicelor/medicamentelor este catalizat de enzime

microzomiale i nemicrozomiale. Enzimele microzomiale se mai numesc i enzime xenobiotice sau xenometabolice; se gsesc n principal n ficat (la nivelul reticulului endoplasmatic rugos), dar i n celelalte organe (plmni, rinichi, glande suprarenale,splin, pancreas, inim, mucoasa intestinal etc.) i n esuturi. Sunt localizate preponderent n microzomi i n fraciunea solubil a citoplasmei (citosol). Sunt puin numeroase, nu au specificitate i se activeaz sub efectul direct al toxicelor, iar la invazia unor cantiti mari de toxic se pot sintetiza cantiti suplimentare de enzime inducie enzimatic (explicaia mririi de volum a ficatului). Enzimele xenometabolice aparin majoritar clasei oxidazelor (microzomale cu funciuni mixte), dar exist i reductaze i hidrolaze. Sunt responsabile de reactii de oxidare, reducere i glucuronoconjugare. Enzimele oxidative (monooxigenaze) au drept component principal o hemoprotein numit citocrom P450, reacia ce are loc fiind: MH + (NADPH + H+) + O2 MOH + NADP + H2O) Enzimele nemicrozomiale sunt enzimele biochimice (parametabolice), din clasa dehidrogenazelor, decarboxilazelor, colinesteraze etc. Acestea se gsesc n special n ficat i n plasm. Catalizeaz reacii de oxidare, hidroliz, transulfurare, metilare, reacii de conjugare cu glutation

Biotransformarea decurge, n majoritatea cazurilor, n dou etape/faze. Nu toate xenobioticele toxice necesit dou faze pentru biotransformare, spre exemplu etanolul se metabolizeaz n prima faz, iar fenolul numai n faza a doua. n general, un compus chimic poate fi metabolizat pe mai multe ci conducnd la metabolii diferii (att ca structur ct i ca activitate toxic i biologic). Faza I: au loc reacii de oxidare, reducere, hidroliz n urma crora n molecula toxicului sunt introduse grupri reactive(polare): OH, NH2, SH, COOH; n aceast etap se pot obine metabolii cu proprieti toxice/ farmacodinamice identice sau diferite cu a substanei iniiale i rezult o cretere mic a hidrofiliei (solubilitii). Reaciile sunt catalizate de enzime xenobiotice. Aceast prim faz conduce, n majoritatea cazurilor, la metabolii mai puin activi sau chiar inactivi (de exemplu metaboliii antipirinei, clorpromazinei, fenobarbitalului). Exist i situaii contrare, n care metaboliii au activitate mai mare (fenacetin, hidratul de cloral, paration, dicloroetilena etc.). De asemenea, toxicitatea metaboliilor poate fi mai mic sau mare fa de a substanei mam; formarea metaboliilor mai toxici/mai activi explic faptul c unele substane sunt inactive in vitro dar i manifest toxicitatea/activitatea in vivo. Unii metabolii pot avea aciune biologic diferit de a medicamentului din care provin, spre exemplu: codeina (cu proprieti analgezice),prin transformare parial n morfin, dobndete i proprieti narcotice; iproniazida, transformndu-se n izoniazid capat i proprieti antituberculoase, alturi de cele antidepresive; primidona se oxideaz parial la fenobarbital i capt astfel i proprieti sedative alturi de cele anticonvulsivante. - faza a II-a: conjugarea sau sinteza const n reacia dintre forma mai reactiv chimic a toxicului obinut n etapa anterioar i un compus de natur endogen: aminoacizi i derivai (glicocol, taurin, cistein, glutamin), acid glucuronic, glutation, rest sulfat etc. Reaciile sunt catalizate de enzime parametabolice (sintetaze) cu specificitate ridicat. n aceast etap rezult n general compui netoxici / inactivi biologic i cu hidrosolubilitate crescut ce pot fi eliminai din organism; exemple: fenolul se conjug

cu acidul sulfuric i acidul glucuronic, acidul salicilc se conjug cu glicocolul, clorobenzenul cu glutationul, ionul cian se transform n tiocianat etc. Metaboliii reultai n aceast faz sunt excretai n urin (cazul aminoacid- i sulfat-conjugailor) sau n bil, de ctre ficat (glucuronoconjugaii). Exist i situaii nefericite n care n urma biotransformrii rezult compui toxici, prin aa-numitele sinteze letale n urma crora xenobioticul sau metabolitul fazei I ajung s imite un metabolit intermediar natural - exemplu: fluoroacetatul imit acetatul (molecul endogen) pe care l nlocuiete n ciclul Krebs, blocndu-l prin generare de acid fluorocitric. Modificarea activitii Medicament activ Metabolit inactiv Compus inactiv Metabolit activ terapeutic Medicament activ Metabolit cu acelai efect terapeutic Medicament activ Metabolit cu efect terapeutic crescut Medicament activ Metabolit cu alt efect terapeutic Medicament activ Metabolit toxic Medicamentul
Morfina conjugare oxidare oxidare Morfina gluconurid Normetanefrina Hidroxifenobarbital Noradrenalina Fenobarbital

conjugare 6-Mercaptopurina 6-mercaptopurina ribonucleotid Proguanil oxidare derivat tiazinic activ hidroliza Salicilat

Acid acetil salicilic oxidare oxidare

Codeina Fenacetina

Morfina

Fenilbutazona

Paracetamol oxidare metabolit II (uricozuric) paraoxon (insecticid)

Paration

oxidare

Principalele reacii ce au loc n faza I sunt: 1. Reacii de oxidare sunt catalizate de oxidaze i de peroxidaze (n procesele de cooxidare) microzomiale dintre care cele mai importante sunt: citocrom P 450 i FMO (flavinmonooxigenaze), PSH (prostaglandin-H-sintaza) sau nemicrozomiale: monoaminoxidaza (MAO) n mitocondrii; diaminooxidaza (DAO) n citosol Necesit de regul cofactori (coenzime): NADH (nicotinamid adenin dinucleotida), NADPH (nicotinamid adenindinucleotida fosfat), piridin-nucleotida etc. Tipuri de reacii de oxidare: 1) epoxidare 3) dezaminarea oxidativ 5) desulfurarea oxidativ 7) N-oxidare 9) dehidrogenri 11) cooxidri 2)hidroxilarea- alifatic, aromatic, Nhidroxilare 4) dehalogenarea oxidativ 6) dezalchilarea (O-, S-, N-dezalchilare) 8) S-oxidare 10) oxidri cu deschidere de cicluri 12) alte oxidri

2. Reacii de reducere sunt catalizate n principal de ctre citocrom P450, NADHchinon-oxidoreductaz, carbonilreductaze, alcool dehidrogenaze, microflora intestinal. Drept coenzime particip NAD(P)H, reaciile fiind inhibate de oxigen. Tipuri de reacii de reducere 1) azoreducerea 3) reducerea grupei C=O 5) reducerea sulfoxizilor 2) nitroreducerea 4)dehalogenarea reductiv 5) alte reduceri

3. Reacii de hidroliz sunt catalizate de esteraze, dezacetilaze, peptidaze etc. Tipuri de reacii de hidroliz: 1) dezesterificarea 3) transesterificarea 5) hidroliza epoxizilor 2) dezacetilarea 4) dezamidarea 6) hidroliza glicozizilor i a conjugailor

Principalele tipuri de reacii de conjugare sunt: 1) Sulfoconjugarea n multe cazuri are loc n paralel cu glucuronoconjugarea, fiind catalizat de sulfotransferaze ce acioneaz avnd drept cofactor 3-fosfoadenosin5-fosfosulfatul (PAPS) format prin reacia dintre ATP i un rest sulfat (acest rest provine doar ntr-o mic msur din acid sulfuric i mai mult din oxidarea aminoacizilor cu sulf). Se formeaz un ester al acidului sulfuric (solubil n ap), prin transferul unui ion SO32 de la cofactor la molecula xenobioticului. Reacia are loc preponderent n fraciunea solubil a hepatocitelor. Substraturile cele mai frecvent implicate n aceast conjugare sunt cele cu grupe OH alcoolice i fenolice, dar pot avea loc sulfoconjugri i la azot, la o grup NH 2 din amine primare aromatice sau la grupe NOH rezultate printr-o hidroxilare anterioar.

NH2 N O R (Ar) OH + O

NH2 N O R O (Ar) S O O- +
-

O O P O CH2 O

N O O P O CH2 O

N N

S O

PAPS

OH

PO32

OH

PO32 3'-Fosfoadenosin-fosfat

2)Glucuronoconjugarea reprezint o cale major de biotransformare a xenobioticelor, ntruct acidul glucuronic (format din glicogen prin oxidarea grupei CH2OH a glucozei) i enzimele implicate n reacie sunt prezente n majoritatea organelor i esuturilor. Are loc n special n ficat i mai puin n rinichi, intestin i piele, prin reacia dintre un rest de acid glucuronic i grupe hidroxil, sulfhidric, carboxil, amid (ce conin un atom nucleofil) din moleculele xenobioticului, conducnd la glucuronide. Reacia este catalizat de uridin-difosfat-glucuroniltransferaza (UDP-GT) avnd drept cofactor acidul uridin-5-difosfo--D-glucuronic (UDP-GA) care cedeaz restul glucuronil.
COOO OH HO OH O O P O O O P O CH2 O O N O NH O

OH

OH

Acid uridin-5'-difosfo--D-glucuronic (UDP-GA)

Glucuronoconjugaii sunt compui polari, solubili n ap, solubilitate favorizat i de grupa COO. Se excret prin urin (M < 250) sau bil (M > 350). Glucuronoconjugarea constituie, ns, n unele cazuri i o surs generatoare de toxicitate.

Exemple: * viteza sczut a acesteia, la nou-nscui, duce la apariia icterului i la cianoz sever (sau chiar moarte) n cazul utilizrii cloramefenicolului. * aminele aromatice care produc cancer al vezicii urinare sau al colonului (naftilamin, 4-aminobifenil) sufer o reacie de N-hidroxilare (n ficat) i apoi o Nglucuronoconjugare n loc de O-glucuronoconjugare. N-glucuronidele formate n urina din vezic sunt hidrolizate (O-glucuronidele sunt mai stabile la hidroliza acid) la Nhidroxilaminele corespunztoare. Acestea, fie direct, fie prin activarea altor metabolii reactivi, acioneaz asupra AND-uli, producnd astefl tumori. * numeroase antiinflamatoare nesteroidiene AINS (printre care diclofenac, ketoprofen) formeaz acilglucuronide reactive care induc hepatitele imune. 3) Conjugarea cu aminoacizi are loc n ficat, de preferin n cazul xenobioticelor ce conin o grup carboxil (legat drect sau indirect de un rest aromatic) sau sulfonic prin reacie cu aminoacizi i derivai ai acestora ca: glicocol, taurin, glutamin. Aceast conjugare este o altenativ la conjugarea glucuronic, avnd avantajul c duce ntotdeauna la produi netoxici. Mai rar, are loc i reacia de conjugare ntre grupa OH a unei hidroxilamine aromatice i grupa COOH a unui aminoacid ca serina sau prolina n acest caz procesul este o activare toxic i nu o detoxicare. 4) Glutation conjugarea (conjugarea mercapturic) se aplic n special hidrocarburilor aromatice i derivailor lor halogeni (dar i multor metabolii cu structur de intermediari reactivi rezultai din faza I). Glutationul este o tripeptid cu o concentraie mare n ficat, alctuit din acid glutamic, cistein i glicin. Acidul glutamic nu este legat prin COOH din poziia ci cu cel din .
NH CO CH2 CH2 CH
CO NH CH2 COO

COO NH3+

HS CH2

CH

Glutation

Formarea glutationului are loc n dou etape, fiind catalizat de dou enzime. Legarea acidului glutamic de cistein este catalizat de -glutamilcistein-sintetaza, iar legarea glutamil-cisteinei de glicin este catalizat de glutation-sintetaza. Cele dou reacii folosesc energia furnizat de cte o molecul de ATP. Astfel, glutationul nmagazineaz o cantitate de energie care l face mult mai reactiv dect cisteina singur, la aceasta adugndu-se i activarea grupei SH de ctre resturile glutamil i glicil, atrgtoare de electroni. Glutationul se gsete n cantitate foarte mare n ficat, conjugarea fiind catalizat de glutation-S-transferaze (prezente preponderent n ficat, intestin, rinichi, glande suprarenale, plmni), fiind localizate n special n citoplasm. Constituie cel mai abundent antioxidant endogen cu mas molecular mic i unul dintre cei mai importani antioxidani plasmatici intra-i extracelular, datorit posibilitii sale de a exista att n form oxidat(GSSG) ct i redus (GSH). Exist dou tipuri principale de mecanisme: i) substituia unei grupe atrgtoare de electroni (Cl, NO2, SO42-, PO43-) din molecula substratului ii) adiia la o legtur dubl activat sau la un ciclu tensionat i) n cazul derivailor halogenai, conjugarea decurge mai rapid dac atomul de halogen este legat de un atom de carbon alilic sau benzilic. Conjugaii formai n ficat sunt excretai n bil sau sunt transformai n acizi mercapturici la nivelul rinichilor de unde sunt excretai n urin. O parte din cistein-conjugat trece ntr-un tiol care se va transform aulterior prin metilare sau glucuronidatre. ii) Conjugarea prin adiie la o dubl legtur necesit activarea acesteia sau formarea ciclului tensionat prin reacii de biotransformare anterioare. Exemplu: activarea alcolului alilic n ficat i a alilaminei n esutul vascular, la acrolein (produce lezare/necroz hepatic, respectiv lezare vascular i/sau ateroscleroz). Conjugarea cu glutationul reprezint o cale important de detoxifiere a organismului deorece ndeprteaz din organism compui electrofili, ce se pot combina

cu nucleofili ca proteinele i acizii nucleici, determinnd leziuni tisulare i mutaii genetice. Si n acest caz exist situaii opuse cnd are loc creterea toxicitii unor xenobiotice conjugarea glutationului cu chinone, chinonimine, izotiocianai, conjugaii rezultai fiind degradai n rinichi la metabolii toxici. Astfel se explic nefrotoxicitatea bromobenzenului (acesta este oxidat n ficat de CYP450 la bromohidrochinon) sau a aminofenolului (care se transform n p-benzochinonimin) Eliminarea toxicelor/medicamentelor reprezint procesul de ndeprtare din

organism a toxicelor/medicamentelor absorbite, ca atare sau sub form de metabolii. Principalele ci de eliminare sunt: calea renal, calea digestiv i calea respiratorie, la care se mai adaug calea cutanat, secreiile lactat, salivar, lacrimal. Calea i gradul de eliminare, ca i viteza i durata acesteia depind de mai muli factori, printre care: proprietile fizico-chimice ale toxicului/metabolitului, calea de ptrundere n organism, legarea de proteine, starea funcional a respectivei ci. a) Eliminarea renal are loc la nivelul nefronilor, ce au drept principale elemente componente corpusculul Malpighi (format din glomerulul Malpighi, cu rol n filtrarea glomerular i formarea urinei primare) i tubii renali (contort proximal, ansa Henle i contort distal), cu funcii de secreie i reabsorbie tubular i de formare a urinei finale. Ca urmare, exist trei mecanisme de excreie renal: filtrarea glomerular, reabsorbia tubular i secreia tubular. Substanele care se elimin pe aceast cale sunt: substane hidrosolubile (prin filtrare glomerular), substane liposolubile (prin secreie tubular pasiv), substane cu structuri speciale - acide sau bazice (prin secreie tubular activ, cu ajutorul sistemelor membranare active). *cu ct greutatea molecular este mai mic i hidrosolubilitatea mai mare cu att gradul de eliminare prin urin este mai mare; * toxicele sunt mai nti filtrate la nivelul glomerulului; cele nepolare, fr sarcini electrice i liposolubile se reabsorb (reabsorbie tubular) trecnd din nou n snge,

eliminarea prin urin fiind mic; substanele polare i cele ionice se reabsorb n proporie mic avnd un grad de eliminare mult mai mare; compuii liposolubili sunt reasorbii pn cnd sunt biotransformai complet n metabolii hidrosolubili. * substanele cu mase moleculare mari i cele legate de proteinele plasmatice scap filtrrii glomerulare; pH-ul fiziologic al urinei este cuprins ntre 4,5-7,5 (cel mai frecvent 6,3); la acest pH se elimin cel mai uor substanele cu caracter slab bazic (exemple: amfetaminele, amitriptilina, antipirina, procaina, chinina, cafeina, teofilina, acetanilida etc) b) Eliminarea pe cale digestiv poate avea loc: * pe cale rectal se elimin substane, solubile sau insolubile, neabsorbite dup administrarea pe cale oral: antibiotice aminoglicozidice (streptomicina), sulfamide antimicrobiene intestinale, crbune, antiacide adsorbante etc. * prin secreie biliar (cu ajutorul unor mecanisme fiziologice active) n general pentru substane cu masa molecular mare, substane polare, diveri conjugai legai de proteine plasmatice etc. Exemple: antibiotice, substane de contrast utilizate n radiologie, glicozizii cardiotonici, glucuronoconjugai, sruri ale metalelor grele etc. Excreia n bil este urmat de trecerea n intestin unde exist posibilitatea reabsorbiei; aceasta are loc n pondere destul de mic (din cauza lipofiliei sczute a conjugailor), substanele respective eliminndu-se prin fecale. * prin secreie salivar pe aceast cale se elimin diveri alcaloizi (stricnin, chinin, atropin), ioduri, unele metale etc. Excreia n saliv nu constituie o cale real de eliminare ntruct salva este nghiit i astfel compuii pot fi reabsorbii din nou din tractul gastro-intestinal. Prezint ns importan practic n cazul medicamentelor a cror concentraie n saliv este asemntoare cu cea plasmatic, putndu-se efectua astfel dozarea medicamentului fr recoltarea sngelui din ven (de exemplu n pediatrie sau pentru dozarea formei nelegate de proteine). * prin mucoasa gastric cazul medicamentelor bazice nedisociate la pH-ul plasmei care trec din snge n stomac, prin difuziune simpl, unde se acumuleaz n

sucul gastric sub form ionizat (exemple: reserpina, alcaloizii care astfel pot fi eliminai din stomac prin splturi gastrice). c) Eliminarea pe cale respiratorie este caracteristic toxicelor gazoase, volatile i celor sublimabile. Are loc prin epiteliul alveolar, prin secreiile nazale sau bronice. d) Eliminare pe cale cutanat prin secreia glandelor sudoripare sau o dat cu celulele cornoase ale pielii i cu fanerele. Se elimin astfel substane volatile, uree, chinin, ioduri, bromuri, arsen, metale grele i derivai ai acestora, antimicotice precum griseofulvina. e) Eliminare prin secreie lactat eliminare nedorit n urma creia toxicele ajung de la mam la sugar; utilitate practic pentru toxicologia alimentar. n lapte se acumuleaz preponderent substane bazice dar i lipofile, cu grad ridicat de toxicitate. Exemple: insecticide organoclorurate, dibenzodioxine, bifenili i furani polihalogenai, aflatoxine, metale i metaloizi, alcaloizi, alool, cafeina, medicamente precum unele antibiotice, barbiturice, sulfamide, purgative etc.