Introducere

Oferta pmntului romnesc este deosebit de generoas, fie prin variabilitatea condiiilor orografice, a climei, a solurilor, fie prin diversitatea favorabilitii tehnologiilor aplicate n practica agricol. Astfel, de la nivelul Mrii Negre (cota 0), pn la punile alpine de la Rucr-Bran (cota 2000), energia de relief sub 150 de metri cuprinde 47% din teritoriu, fragmentarea reliefului este ntre 0,40 km/km2 la cmpie i 3,00 km/km2 la munte. Aceast diversificare orografic se afl ntr-o total dependen cu diversitatea condiiilor de clim i sol. Pe o orizontal de cteva sute de kilometri distan (ex. Constana-Braov), vom identifica aproape toat gama solurilor i condiiilor de microclimat menionate mai sus. Mai adugm la aceast analiz i diversitatea practicilor agricole, a cerinelor, a obiceiurilor locale i chiar nivelul de instruire a populaiei care ocup i exploateaz aceste spaii ecologice. Rezult astfel necesitatea i oportunitatea activitii de creare a noilor soiuri i hibrizi specializai, capabili s valorifice pe deplin diversitatea ecologic i s satisfac cerinele de consum agro-alimentar intern i extern. Nu n ultimul rnd, menionm i necesitatea ca smna i materialul sditorsingurul factor realizat de agricultori pentru agricultur-s fie nlocuite la intervale de timp mai mari (soiurile la 2-3 ani) sau mai mici (hibrizii F0-anual). Toate aceste consideraii precum i cerina agriculturii de a realiza progrese evidente n obinerea unor produse agro-alimentare diversificate, ecologice, calitative i n cantiti suficiente, ne-au determinat s elaborm prezentul manual. n strategia dezvoltrii economico-sociale a Romniei, agricultura trebuie s nregistreze transformri profunde, astfel ca aceasta s devin o variant a activitii industriale, pe un circuit nchis (producie industrializare/semiindustrializaredesfacere), pn la nivelul localitilor, unitilor agricole/proprietarilor, n care implementarea tehnologiilor neconvenionale/biotehnologiilor s reprezinte o dominant major. Aceasta ar nsemna: obinerea de soiuri/hibrizi specializai dup folosine, cu potenial de producie ridicat i cu o rezisten activ sporit la stres; asigurarea necesarului de smn i material de plantat cu o valoare biologic ridicat; diversificarea bazei tehnico-materiale din amonte i din avalul agriculturii; structuri organizatorice elastice i rentabile; dezvoltarea i extinderea creditului agricol i o legislaie stimulativ. Astfel, n domeniul obinerii de noi soiuri i hibrizi, precum i n producerea i multiplicarea seminelor, metodele convenionale de genetic i ameliorare, dei au adus i nc mai aduc un aport major, totui, caracterul limitat al acestora impune ca, n cel mai scurt timp s se adopte tehnologii moderne neconvenionale care se bazeaz pe marile descoperiri n domeniul biologiei generale, celulare i moleculare, a geneticii moleculare, a biochimiei, a microbiologiei, a ingineriei genetice etc. Acestea vizeaz, n principal, modificarea materialului genetic prin lrgirea variabilitii sale n sensul obinerii de caracteristici utile, i opereaz la nivel de organisme ntregi, de celule i esuturi sau la nivel molecular. Ca surse de hran, n decursul istoriei, omenirea a folosit aproape 3000 de specii diferite dar, din acestea, doar puin peste 10%, adic 200 de specii au fost domesticite/cultivate. n prezent, cea mai mare pondere n hrana omului o au cinci cereale ( gru, orez, porumb, orz, sorg) cu 60-70%, urmeaz tuberculiferele (cartof, topinambur) cu 10%; zahariferele (trestia i sfecla de zahr) cu 5% i leguminoasele boabe cu aproape 10%. Ecuaia cea mai atent urmrit pe plan mondial, dar i n ara noastr, este: Cerin]ele de consum ale PRODUC}IA DE ALIMENTE omului, aflate `n continu\ Se poate realiza i pstra echilibrul sistemului ?

Acest raport nu depinde numai de creterile cantitative ale recoltelor, dimpotriv mai intervin: -dezvoltarea inegal social-economic a omenirii, pe zone naturale; astzi, 25% din populaia globului reprezint populaia civilizat i produce 75% din necesarul de alimente; n acelai timp, 75% din populaia subdezvoltat produce numai 25% din alimentele necesare; -repartizarea inegal i inechitabil a bogiilor naturale; numai 25% din cele 1.500 milioane hectare teren arabil pe glob se afl n zone cu clim favorabil agriculturii; restul de 75% din terenul arabil se afl n zone aride, ori cu exces de umiditate (nefavorabile). -ritmul de cretere a produciei principalelor specii este foarte diferit de la o zon geografic la alta, de la o etap istoric la alta i de la un an la altul, n funcie de factorii naturali, sociali-economici etc. REZOLVAREA const n: 1. Progresul tehnic i tehnologic (ngrminte, irigaii, pesticide, mecanizarea lucrrilor solului). Aceste msuri sunt realizate de persoane care activeaz n afara sistemului. 2. Progresul genetic (biotipurile cultivate) realizate de cei ce lucreaz n i pentru sistem = AMELIORATORII. Exemplu: Creterea produciei la porumb-n ultimii 50 de ani-se datoreaz: Specificare 1. Progres tehnic i tehnologic 2. Progres genetic TOTAL NEIRIGAT 70% 30% 100% IRIGAT 30% 70% 100% TOTAL 100% 100% -

IMPORTANA AMELIORRII PLANTELOR, PRODUCERII I MULTIPLICRII SEMINELOR I MATERIALULUI SDITOR

Cursul de Ameliorarea plantelor completeaz pregtirea specialitilor din Agricultur i Montanologie cu urmtoarele aspecte: 1. - Tehnici i tehnologii specifice pentru amelioratori, care desfoar studii i activiti de genetic aplicativ: crearea de noi soiuri i hibrizi; testarea omologarea viitoarelor forme biologice performante etc. 2. - Tehnici i tehnologii specifice de ameliorare pentru fiecare specie mai important: modul cum acestea au evoluat n ara noastr, cunoaterea structurii genetice a soiurilor i hibrizilor cultivai n raport cu nivelul productivitii acestora. Se tie c obiectivul major al fiecrui ameliorator const n creterea capacitii de producie. Acest obiectiv se afl sub un strict control poligenic i sufer aciunea/interaciunea factorilor de mediu, procesele fiziologice, biochimice, ale metabolismului etc. La nceput, omul-ameliorator a eliminat progresiv unele defecte cu care se prezentau soiurile i hibrizii. n prezent, i mai ales n viitor, omul-ameliorator trebuie s-i confecioneze un IDEOTIP urmnd ca pe parcurs, prin metode noi de ameliorare s identifice indivizii ELIT care se aseamn ct mai mult cu ideotipul. 3. - Cunoaterea unor metode pentru obinerea de categorii biologice superioare cu care s se continue multiplicarea 2

Aceste activiti poart denumirea de PRODUCERE a seminelor i materialului sditor; sunt realizate numai n Staiunile de Cercetri Agricole i sub supravegherea atent a amelioratorilor. 4. - Cunoaterea tehnologiilor specifice loturilor semincere i de hibridare. Mai putem folosi i termenul de MULTIPLICARE (nmulire) a seminelor i materialului sditor. Aceast activitate o realizeaz toi agenii economici autorizai ca multiplicatori (nmulitori) de semine. n esen, cursul de ameliorarea plantelor cuprinde dou pri: Partea I : CREAREA DE NOI SOIURI/HIBRIZI-se ncepe cu materialul iniial, se continu cu cmpurile de ameliorare i se finalizeaz cu omologarea i zonarea noului soi/hibrid. Partea a-II-a: PRODUCEREA I MULTIPLICAREA SEMINELOR se ncepe cu soiul omologat i zonat, se continu cu cmpurile de producere/multiplicare.

Cap.1. OBIECTIVELE AMELIORRII PLANTELOR

1.1. DEFINIRE : Obiectivele ameliorrii plantelor reprezint o nsumare la
un singur individ (plant) a unui numr ct mai mare de nsuiri i caractere valoroase, ce confer posibilitatea acestuia de a fi cultivat de om, pe areale mai mari sau mai mici. 1.2. CE REPREZINT UN SOI/HIBRID NOU: o populaie de plante cultivate, denumit CULTIVAR, care depete cu cel puin 10% soiul/hibridul martor omologat i zonat, la unul sau mai muli indicatori de productivitate, calitate, rezistene, prelucrare etc. Soiul/hibridul nou trebuie s se mai caracterizeze prin: distinctibilitate, omogenitate, stabilitate biologic i genetic. Distinctibilitate se difereniaz de soiurile cunoscute prin cel puin un caracter important care se manifest constant i poate fi uor definit sau descris. La hibrizi, distinctibilitatea const n identificarea uoar a caracterelor la prini precum i formula original de mperechere a acestora. Omogenitate ansamblul caracterelor/nsuirilor luate n considerare la identificare (distinctibilitate) se manifest n mod uniform la majoritatea indivizilor ce compun cultivarul (soiul cultivat). Stabilitate-n urma reproducerii succesive caracterele i nsuirile eseniale specifice se menin la valorile iniiale sau apropiate acestora.

1.3. CLASIFICAREA OBIECTIVELOR AMELIORRII

Multitudinea i diversitatea obiectivelor ameliorrii plantelor, care pot avea prioriti diferite n funcie de mediul ambiental, cerine social-economice, nivelul dezvoltrii tehnice i tehnologice etc. impune o grupare n funcie de cerinele fundamentale pe care trebuie s le ndeplineasc noul soi/hibrid: distinctibilitate, omogenitate i stabilitate biologic i genetic. Aceste cerine pot fi materializate, total sau parial, la un singur soi/hibrid, dac se acioneaz prin ameliorarea componentelor urmtoarelor grupe de obiective: 1.3.1. Ameliorarea componentelor capacitii de producie 1.3.2. Ameliorarea componentelor calitii 1.3.3. Ameliorarea nsuirilor de rezisten activ la stresuri 1.3.4. Ameliorarea reaciei favorabile a plantelor la intensivizare. Amelioratorii experimentai cunosc faptul c nu se poate aciona n modificarea pozitiv i concomitent a unui numr mare de caractere i nsuiri pentru acelai individ, datorit controlului genetic foarte riguros al tuturor caracterelor i nsuirilor la plante. Pentru atingerea obiectivului principal, se va aciona n procesul de ameliorare numai asupra componentei, a crei modificare pozitiv determin modificri n lan (condiionate) i la alte caractere/nsuiri. Msura are la baz cunoaterea cu precizie a corelaiilor pozitive/negative ce se manifest n aciunea/interaciunea factorilor genetici, tehnologici sau naturali. La majoritatea plantelor cultivate se cunosc aciunile/interaciunile ce condiioneaz corelaii pozitive sau negative. La un numr mai redus de specii s-au ntocmit deja hri genetice la care se cunoate rolul i contribuia fiecrui cromozom. Succesul n ameliorarea plantelor mai depinde i de bogia materialului iniial, de diversitatea acestuia i de prezena unei variabiliti genetice ereditare pronunate. Cu obiective de ameliorare clare, bine cunoscute i delimitate, cu un material iniial bogat ce prezint o variabilitate genotipic pronunat, cu metode de ameliorare precise i riguros aplicate, cu o munc tenace, perseverent i laborioas, orice ameliorator poate s-i vad ideotipul realizat ntr-un interval de timp mai scurt. Fr ndeplinirea 4

acestor cerine, amelioratorul poate dovedi c este un valoros funcionar, dar fr nici o creaie proprie pentru care a activat, uneori, o via ntreag. 1.3.1. Ameliorarea componentelor capacitii de producie DEFINIRE capacitatea de producie, productivitatea sau producia unei plante, ori grup de plante cultivate (cultivar) se definete ca fiind totalitatea produciei obinute ntr-un ciclu de vegetaie. Capacitatea de producie este cel mai important obiectiv al cultivrii plantelor, i cel mai important obiectiv de ameliorare, la toate speciile cultivate. Acest obiectiv este riguros controlat genetic printr-o multitudine de corelaii pozitive i negative, ca urmare a controlului poligenic i al linkajului genetic. Factorii naturali i tehnologici neereditari modific semnificativ nivelul produciei de la un an la altul i acoper contribuia factorilor genetici-ereditari. De aceea, se identific mai greu aportul separat i n interaciune al tuturor factorilor ce contribuie la realizarea produciei (productivitii). a) Componentele capacitii de producie sunt elementele morfo-productive ce contribuie la obinerea produciei totale, principale sau secundare. Aceste componente difer de la o specie la alta i se compun dup cum urmeaz: - La gru, orz, secar: nr. spice/m2; nr. boabe/spic; greutatea boabelor din spic; MMB;lungimea spicului, nr. flori fertile etc. - La porumb boabe: nr.tiulei/plant, nr. rnduri boabe/tiulete; lungimea tiuletelui; diametrul tiuletelui; nr. boabe/tiulete; greutatea boabelor/tiulete; greutatea total a tiuletelui; MMB; randament n boabe/tiulete etc. - La leguminoase boabe: nr. ramificaii tulpinale; nr psti/plant; nr. boabe/pstaie; nr. boabe/plant; greutatea boabelor/plant; MMB etc. La realizarea produciilor mai contribuie: b) Densitatea plantelor la unitatea de suprafa-plantele cu talie mare, cu habitusul dezvoltat, dei prezint componente productive individuale ridicate, pierd prin densitatea mai redus la unitatea de suprafa. Dimpotriv, plantele cu talie mic, cu habitusul redus, permit o densitate mai mare i compenseaz semnificativ nivelul indicilor productivi. c) Raportul dintre tardivitate precocitate reprezint un factor ce influeneaz producia. Se tie c plantele tardive (cu perioad lung de vegetaie ) sunt mai productive n comparaie cu plantele precoce (cu perioada scurt de vegetaie); ntre aceste dou componente, la acelai individ existnd o corelaie negativ (invers). Handicapul formelor precoce, mai slab productive, poate fi nlturat prin creterea densitii plantelor la hectar, datorat taliei mai reduse. Ruperea corelaiei negative dintre precocitate i productivitate s-a realizat pentru prima dat n Romnia, la specia ORZ DE TOAMN, la soiul MIRAJ. EXPRIMARE capacitatea de producie a unei plante dintr-un cultivar se exprim n funcie de scopul i destinaia produciei. a) Dup destinaia produciei avem: producie principal i secundar. Producia principal-producia destinat consumului uman, industrializrii sau furajrii (ex. producia de boabe la cereale, leguminoase boabe, plantele uleioase etc.). Producie secundar-diferena de producie nregistrat la partea supraterestr (aerian) a plantei: tulpini, frunze, inflorescene etc. i care pot avea folosin n industrie, furajare i chiar consum uman (ex. paiele, cocenii, vrejii, frunzele rdcinoaselor, inflorescenele plantelor medicinale, aromatice, hamei, cornul secarei). b) Dup modul de nregistrare avem: producie total nregistrat sub form de substan uscat, unde se include i producia de rdcini (PRODUCIA TOTAL = PRODUCIA SUPRATEREST + PRODUCIA SUBTERAN); producia fizicproducia principal brut i producie util (STAS) producia recalculat pe baza unor parametri convenionali (legali). 5

DETERMINARE-n procesul de ameliorare, cnd numrul de plante-elit este redus, capacitatea de producie se determin i se raporteaz pe un singur individ. Atunci cnd materialul biologic valoros obinut (seminele) este ntr-o cantitate mai mare i satisfctoare, se poate obine capacitatea de producie prin cntrire direct. Avem deci, determinarea produciei pe baz de componente, la nceputul ameliorrii cnd producia se raporteaz la un singur individ (cmpul cu material iniial, cmpul de hibridare, cmpurile de inducere a mutaiilor, poliploidiei, cmpurile de selecie cu hibrizi-F1; mutante, poliploizi etc.); i determinarea produciei prin cntrire direct i raportat la unitatea de suprafa. Datele obinute se exprim sub form de: -greutate: - grame/ spic, calatidiu, pstaie, tiulete, panicul etc. - grame/plant - kilograme pe plant; pe m2; pe hectar etc. -volume: -mas hectolitric/mas volumetric; -mas 1000 boabe etc. -dimensiuni: - lungime/grosime tiulete, spic, panicul etc. - diametre calatidii, rdcini sfecl, tuberculi etc. -indicatori sintetici:- valori relative (procente) la creteri/scderi de producie; diferene etc. -coeficieni, indici, raporturi etc. Toate aceste moduri de exprimare se pot aplica n acelai fel la producia total, producia principal, producia secundar i la alte tipuri de determinare a capacitii de producie. Capacitatea de producie potenial-reprezint producia maxim realizat de soi/hibrid, obinut pe cmpurile de testare i nscris n caracteristicile de baz la Registrul de Stat cnd a fost omologat i zonat. Potenialul maxim de producie al unui soi/hibrid se obine atunci cnd sunt asigurai n optim toi factorii ambientali: cldur, umiditate, fertilizante, protecie la boli/duntori, epoc optim la lucrrile tehnologice etc., dar i valoarea biologic maxim a cultivarului (indivizilor cultivai), exprimat prin puritatea biologic egal cu 100. Capacitatea de producie real-reprezint producia total obinut de cultivatori. Potenialul maxim de producie al unui soi/hibrid este considerat ca nivelul de referin, egal cu 100 (smna autorului), de la care se apreciaz toate etapele obinerii categoriilor biologice superioare (PRODUCEREA SEMINELOR), a categoriilor biologice inferioare (MULTIPLICAREA SEMINELOR), precum i modul cum se respect de ctre cultivatori cerinele tehnologice specifice. Cercetrile din ara noastr evideniaz c nivelul actual de dezvoltare a tehnicii i tehnologiei din agricultur ofer condiii ca un soi/hibrid nou s produc aproximativ 6070% din potenialul su productiv. La aceasta trebuie s mai adugm i faptul c pe o durat mare de timp soiurile/hibrizii sufer efectele negative ale eroziunii genetice sub aciunea factorilor distructivi ai structurii genetice. Rezult astfel obligativitatea amelioratorilor de a crea noi soiuri/hibrizi care s-i nlocuiasc pe cei vechi, precum i obligativitatea cultivatorilor de a preschimba smna i structura soiurilor/hibrizilor cultivai. Capacitatea de producie de perspectiv-reprezint producia viitoarelor soiuri/hibrizi obiectiv de ameliorare, la care trebuie s se ajung n urma finalizrii, prin omologare, a procesului de ameliorare. n prezent, amelioratorii nu mai folosesc metoda eliminrii defectelor actualelor soiuri/hibrizi, ci i construiesc un ideotip (tip de plant perfect, imaginar) i apoi ncep s construiasc folosind metode adecvate. n esen, formarea recoltelor sub aspect cantitativ i calitativ, se realizeaz n creuzetul numit plant (fenotip F), care 6

valorific aciunea i interaciunea factorilor genetici (G) i a factorilor de mediu (M); adic: F = G + M. O productivitate ridicat se va realiza, n mod firesc, numai dac cerinele plantelor, pe ntreaga perioad de vegetaie, sunt satisfcute la nivel optim. ETAPELE CRETERII PRODUCIEI-la principalele plante cultivate din Romnia, pot fi urmtoarele: a) Etapa soiurilor locale provenite prin selecie din populaiile locale i care asigur producii satisfctoare la nivelul unor areale geografice mici i n condiiile unor tehnologii deficitare. b) Etapa soiurilor ameliorate i a hibrizilor extensivi provenite prin: - selecie individual repetat n cazul soiurilor polimorfe; - selecie recurent cu testarea capacitii combinative n cazul formelor parentale ce compun hibrizii extensivi. Nivelul capacitii de producie, prin cultivarea acestor forme biologice, cu structuri genetice mai bogate, a crescut de 23 ori fa de soiurile locale. Dispunem i astzi n cultur de soiuri polimorfe la gru, orz, secar, leguminoase boabe etc., precum i hibrizi extensivi la porumb, floarea soarelui, sorg etc. c) Etapa soiurilor i hibrizilor intensivi obinui prin: - selecie individual repetat practicat n cadrul generaiilor segregante ale hibrizilor (F2; F3; F4 etc.) pentru identificarea formelor transgresive i compunerea soiurilor multiliniale pentru autogame; - selecie recurent i convergent cu testarea capacitii combinative i a intensitii heterozisului n F1, la hibrizii alogamelor. Nivelul produciilor la soiurile/hibrizii intensivi a crescut de 4-5 ori fa de soiurile locale i s-a dublat fa de formele extensive. Este cazul soiurilor multiliniale de gru, orz etc. i a hibrizilor simpli de porumb, floarea soarelui, poliploizii de la secar, trifoi, sfecl i soiurile sintetice de la gramineele i leguminoasele furajere perene. d) Etapa soiurilor/hibrizilor superintensivi cu niveluri ale produciei de 6 7 ori superioare soiurilor locale sau cu o dublare fa de formele intensive. Acest nivel al produciilor nseamn peste 1315 t/ha la porumb boabe, peste 10 t/ha la gru etc. i constituie obiectivul major pentru amelioratorii tuturor speciilor.

1.3.2. Ameliorarea calitii produciei Calitatea, ca i capacitatea de producie, este o nsuire foarte complex i de mare importan n activitatea de ameliorare i este conferit de: a. Coninutul n substane de baz (proteine, glucide, grsimi). b. Coninutul n principii active (lizin, triptofan, metionin etc.). c. nsuiri tehnologice (grad de extracie, nsuiri culinare i de panificaie, calitatea fibrei etc.). Trebuie s facem precizarea c exist o interaciune permanent ntre componentele productivitii i cele ale calitii, dup cum se nregistreaz numeroase interaciuni ntre cantitate, calitate i condiiile agroecologice i tehnologice. 1.3.2.a. Ameliorarea coninutului n substane de baz Ameliorarea coninutului de proteine reprezint cel mai important obiectiv calitativ, deoarece constituie componentul de baz al protoplasmei celulelor i contribuie la formarea, creterea, dezvoltarea, rennoirea i repararea organismului. n plus, proteinele intr n componena tuturor enzimelor, condiionnd buna desfurare a proceselor metabolice care stau la baza vieii. Rolul plastic i fiziologic al proteinelor n viaa organismelor este att de mare, nct lipsa sau insuficiena acestora afecteaz cel mai profund i cu cele mai grave consecine sntatea organismului. 7

Cile principale de asigurare cu proteine sunt: - crearea de noi soiuri i hibrizi cu coninut ridicat de proteine; - dezvoltarea efectivelor de animale i furajarea acestora cu proteine care nu se folosesc n alimentaia uman. Se cunoate c pentru 1 kg protein de origine animal se consum 3,03,5 kg proteine vegetale coninute n cereale i leguminoase boabe, care ar putea s fie utilizate direct n consumul uman; - utilizarea proteinelor din subprodusele rezultate prin industrializarea crnii, laptelui etc.; - extinderea i diversificarea proteinelor din flora i fauna acvatic (peti, molute, crustacee, alge etc.); - obinerea proteinelor prin biosintez microbiologic; - obinerea de proteine i aminoacizi prin sintez chimic. Sursa cea mai important o constituie ns, n continuare, tot crearea de soiuri i hibrizi cu un coninut ridicat de proteine, bineneles i cu realizarea unei capaciti de producie mari. Factorii care influeneaz coninutul de proteine al plantelor sunt: factorii genetici, condiiile ecologice (clima, solul) i condiiile tehnologice, n special ngrmintele cu azot. Un rol important n variabilitatea coninutului de proteine aparine interaciunii dintre constituia genetic a soiului i condiiile ecologice de cultur, n sensul c genotipurile dotate cu homeostazie genetic pronunat reacioneaz puin la factorii externi, n timp ce genotipurile nzestrate cu plasticitate fenotipic mare valorific mai eficient condiiile de clim favorabile creterii i dezvoltrii, sporindu-i astfel coninutul n substane proteice. De exemplu la gru, cercetrile din ara noastr arat c la soiurile cu plasticitate fenotipic ridicat contribuia genotipului la producia total de proteine este cuprins ntre 4050%, n timp ce la genotipurile homeostatice aceast contribuie a genotipului este mai mare, peste 5060%. Cel de-al doilea factor condiiile de mediu se prezint cu influene certe asupra coninutului de proteine, iar interaciunea genotip x mediu s-a dovedit semnificativ. Al treilea factor condiiile tehnologice, n special ngrmintele cu azot, i fosfor mresc coninutul genotipurilor n proteine. Ameliorarea coninutului n glucide prezint interes deosebit pentru speciile i produciile folosite n fabricarea amidonului, dextrinei, a zahrului, spirtului etc. Privitor la controlul genetic al coninutului n amidon, cercetrile au artat c aceast nsuire este determinat de un numr mare de gene, iar bogia n amidon se manifest dominant. Soiurile de cartof bogate n amidon sunt heterozigote pentru genele care controleaz coninutul n amidon. Ameliorarea coninutului de grsimi ca i cel de proteine, se afl sub influena acelorai factori: genetici, de mediu i tehnologici. Diferena const n intensitatea cu care acioneaz fiecare factor n parte. Coninutul i calitatea uleiului sunt n mai mare msur influenate de factorii tehnologici dect coninutul n proteine. Cu toate c principalele plante care produc ulei n ara noastr au n general un coninut satisfctor n ulei, totui, acest caracter poate fi substanial mbuntit att prin lucrri sistematice de ameliorare, ct i prin aplicarea unor tehnologii de cultur corespunztoare. Cel mai spectaculos rezultat al ameliorrii coninutului de ulei, pe cale genetic, s-a nregistrat la floarea soarelui, unde, fa de 4549% ct se gsea la vechile soiuri, s-a ajuns la 6368% la cei mai buni hibrizi simpli obinui ntre liniile consangvinizate. Se prevede ca procentul de ulei s creasc la porumb cu 1% (la 78% n anul 2000 fa de 67% n 1990), la soia cu 2% (de la 2526% la 2728%), la floarea soarelui cu 2% (de la 5455%, la 5657%), la ricin cu 2% (de la 5657%, la 5859%), iar la inul de ulei tot cu 2% (de la 4446% la 4648%). Ameliorarea coninutului n substane de baz-ntmpin urmtoarele dificulti: 8

- corelaia negativ ce se manifest ntre producia de semine i coninutul n substane utile. Astfel, la gru, soiurile productive prezint un coninut mai redus n proteine, acelai lucru ntlnindu-se i la porumb; - corelaia negativ ce se manifest ntre coninutul de proteine i coninutul de ulei, situaie ntlnit la porumb, soia, floarea soarelui; - lipsa unor cunotine precise cu privire la controlul genetic al sintezei i depunerii acestor substane utile, face foarte grea stabilirea unei strategii adecvate pentru ameliorarea acestor nsuiri. 1.3.2.b. Ameliorarea coninutului n principii active eseniale Un obiectiv deosebit de important al ameliorrii este reprezentat de mbuntirea coninutului produciiilor n principii active eseniale, deosebit de utile i necesare organismului uman. Asfel, n cazul proteinelor, intereseaz n mod deosebit proporia acizilor aminici eseniali ca: arginina, fenilalanina, histidina, izoleucina, leucina, lizina, metionina, treonina, triptofanul i valina. Lipsa unui aminoacid din seria celor 10 menionai mai sus mpiedic formarea proteinelor chiar dac ceilali nou sunt prezeni. Mai precizm c cei 10 aminoacizi eseniali nu pot fi sintetizai de organismul animal (cu excepia rumegtoarelor). Singura surs de sintez o reprezint plantele. Coninutul n lizin-la germoplasma mondial a grului este ntre 2,2 4,2 g/100 g protein; la orz este ntre 2,8-5,9 g/100 g protein; la porumb ntre 2,05,0 g/100 g protein, iar la leguminoase boabe este ntre 6,07,5 g/100 g protein. Dac la gru coninutul n lizin este mai greu de modificat pe calea hibridrilor, la orz, prin identificarea genei recesive lys care controleaz sinteza lizinei, s-a obinut soiul Hiproly, care la o producie medie de 810 t/ha boabe realizeaz i un coninut mediu de lizin egal cu 4,04,3 g/100 g proteine. Acesta este i motivul pentru care orzul concureaz cu mult succes porumbul n anumite zone de cultur. La porumb boabe, prin descoperirea n 1964 a genelor opaque 2 i floury 2 care controleaz sinteza lizinei, s-a reuit ca prin lucrrile de ameliorare, coninutul n lizin s creasc de la 23 g/100 g protein la porumbul normal, la 45 g/100 g protein la hibrizii noi de porumb. Din pcate, s-a descoperit c gena opaque 2 provoac i unele efecte negative asupra porumbului atunci cnd se acioneaz pe intensificarea activitii acestei gene n modificarea coninutului de lizin. Coninutul n triptofan dei modest, fiind ntre 0,41,2 g/100g protein la porumb i ntre 1,01,5 g/100 g protein la mazre, fasole, linte, soia, se prezint cu efecte foarte bune att n proteinogenez, dar mai ales n metabolismul uman. Coninutul n metionin-la leguminoasele boabe este cuprins ntre 1,01,5 g/100 g proteine i are efect limitativ n proteinogenez atunci cnd acest aminoacid lipsete. De asemenea, metionina se gsete ntr-o proporie de 1,31,6 g/100 g proteine n seminele de rapi, iar la floarea soarelui, fructele conin metionina ntr-o proporie de 3,03,2 g/100 g proteine. 1.3.2.c Ameliorarea nsuirilor tehnologice Printre nsuirile tehnologice, ca obiective majore pentru ameliorare avem: la gru: calitatea glutenului ca element esenial la morrit i panificaie; la orzoaic: coninutul ridicat n amidon, redus n proteine i bobul mare cu uniformitate ridicat; la leguminoase boabe: mbuntirea capacitii de fierbere i reducerea procentului de coji; la floarea soarelui: creterea proporiei acidului linoleic fa de acidul linolenic; la inul ulei: creterea gradului de sicativitate a uleiului; la inul i cnepa pentru fibre: lungimea tehnic, fineea, elasticitatea, flexibilitatea i rezistena la torsionare; 9

la cartof: nsuirile culinare, coninutul n amidon; la sfecla de zahr: reducerea substanelor nezaharoase din suc, gradul de extracie al zahrului; la plantele furajere: creterea digestibilitii i reducerea coninutului de celuloz, lignin i alcaloizi. Detaliile privind ameliorarea acestor nsuiri vor fi prezentate la fiecare specie n parte. 1.3.3. Ameliorarea rezistenei active a plantelor Prin rezistena plantelor se nelege capacitatea plantelor de a anihila aciunea direct sau indirect a factorilor de stress ntr-o anumit zon geografic, i de a continua procesele vitale n mod normal. Rezistena plantelor poate fi ereditar i momentan, neereditar. Rezistena pasiv se datoreaz lipsei de sincronizare ntre aciunea negativ a factorului stresant i faza critic a plantei pentru factorul stresant respectiv. De exemplu, rezistena la secet a genotipurilor precoce, rezistena la anumite boli prin depirea fazei critice de atac sau prin lipsa condiiilor favorabile atacului etc. Rezistena activ se datoreaz lipsei de sensibilitate pe care o manifest genotipul la aciunea stresant a factorului respectiv, chiar dac acesta acioneaz n momentul critic sau are condiii favorabile de manifestare. Distingem urmtoarele forme de rezisten: a. Rezistena plantelor la stresuri climatice b. Rezistena plantelor la stresuri fitopatologice a Ameliorarea rezistenei plantelor la stresuri climatice Odat cu domesticirea plantelor, multe dintre nsuirile de rezisten la stresurile climatice s-au pierdut datorit faptului c atenia amelioratorilor a fost concentrat mai mult pe capacitatea de producie. Aa se explic de ce unele soiuri i chiar hibrizi cu capacitate mare de producie prezentau rezistene slabe la stresurile climatice. n comparaie cu ameliorarea rezistenei la boli i duntori, ameliorarea rezistenei la stresurile climatice se face mult mai uor, deoarece sursele mondiale de germoplasm asigur genele necesare pentru toate formele de rezisten la condiiile nefavorabile de mediu, iar acestea, introduse n noile genotipuri, se menin de la o generaie la alta. Rezistena la temperaturile sczute primvara, dup nsmnarea culturilor i uneori chiar dup rsrirea culturilor, se ivesc numeroase cazuri cu temperaturi sczute sau chiar cu zpad. n aceast situaie plantele termofile ca: porumbul, sorgul, fasolea, soia etc., suport efectul negativ al unor stresuri climatice deosebite, fie indirect prin aciunea temperaturii, fie direct prin ngheare. O rezisten real sporit la aceste specii ar avea efecte pozitive deosebite, fie prin sigurana vegetaiei plantelor, dar mai ales prin avansarea epocii optime de semnat i decalarea fazelor critice la efectele nocive ale secetei pe timpul verii. Rezistena la iernare constituie o nsuire complex, cu un determinism genetic complicat. Totui, s-a demonstrat c la baza acestei rezistene se afl o serie de reacii biochimice i procese fiziologice condiionate genetic, dar i influenate semnificativ de condiiile mediului ambiant. nsuirea de rezisten la iernare este controlat poligenic, dar, la rndul lor, nsuirile elementare sunt i ele controlate genetic. Acest tip de rezisten intereseaz mai mult cerealele de toamn (gru, secar, orz), lucerna i alte culturi care, pe durata iernii, n zonele de step i silvostep cu strat de zpad subire, pot fi distruse de ngheurile i efectele negative ale temperaturilor sczute. Rezistena la secet, itvire prezint interes deosebit n ameliorarea soiurilor destinate zonelor sudice i estice ale rii, adic pentru zonele unde se manifest mai pregnant efectele negative ale secetei. 10

Se cunoate c rezistena la secet este o nsuire complex, pentru care particip un numr nsemnat de gene. Astfel, dintre nsuirile care mresc rezistena la secet sunt: dezvoltarea sistemului radicular puternic i adnc, capacitatea mare de absorbie a sistemului radicular, intensitatea redus a transpiraiei, capacitatea mare de sintez a substanei uscate, coagularea albuminei la temperaturi ct mai ridicate etc. n ansamblu, rezistena la secet se manifest prin ntrzierea apariiei ofilirii, prin meninerea pe o durat lung de timp a ofilirii reversibile i prin revenirea uoar la turgescena normal atunci cnd regimul hidric se mbuntete. Germoplasma valoroas pentru aceast rezisten se afl n zonele cu precipitaii reduse. b Ameliorarea rezistenei plantelor la stresuri fitopatogenice Pe plan mondial, pagubele anuale produse de boli i duntori, numai la culturile de cereale, reprezint 1820% din total producie. Cauzele care produc aceste pagube sunt urmtoarele: introducerea n cultur a soiurilor i hibrizilor intensivi, cu capacitate mare de producie, dar la care nu s-a lucrat pentru ameliorarea rezistenelor la stresuri; cultivarea pe suprafee mari a unui numr restrns de soiuri/hibrizi; migrarea din zonele de inocul primar a raselor fiziologice noi; apariia de noi rase fiziologice prin recombinare, mutaii, heterocarioz etc.; nerespectarea rotaiilor prevzute n tehnologiile clasice; aplicarea unilateral a dozelor mari de azot i practicarea neraional a irigaiilor; utilizarea pe scar larg a rezistenei verticale n defavoarea rezistenei orizontale; imunorezistena specific mrit a unor ageni fitopatogeni; contactul brusc dintre gazd i patogen, desprii cndva (iniial) prin spaii geografice mari. Prin acest contact se asigur extinderea rapid a bolii. Agresivitatea puternic a agenilor fitopatogeni este cauzat de: creterea numrului speciilor, subspeciilor i raselor de ageni fitopatogeni prin recombinri, mutaii i alte procese genetice; variabilitatea genetic foarte ridicat a agenilor patogeni; capacitatea mare de adaptare a noilor rase fiziologice la condiiile variabile ale mediului ambiant; tolerana ridicat a agenilor fitopatogeni la anumite concentraii ale tratamentelor fitosanitare aplicate fie preventiv, fie curativ; prolificitatea ridicat i posibilitile mari de migrare ale agenilor fitopatogeni. Toate aceste neajunsuri pot fi rezolvate prin urmtoarele ci: - perfecionarea metodelor de combatere i a sortimentului de pesticide; - crearea de noi soiuri i hibrizi cu rezisten activ sporit. Ultima soluie, de mare perspectiv, este economic, nepoluant, dar necesit folosirea unei germoplasme adecvate i metode specifice de ameliorare. Sursele de germoplasm, cu genotipuri rezistente la stresurile fitopatogenice se gsesc la populaiile locale, la soiurile autohtone i n mod deosebit n centrele genice ale fiecrei specii de plante cultivate. n aceste centre genice pot fi identificate numeroase gene care s controleze n mod difereniat toate rezistenele plantelor la atacul de boli i duntori. Ca metode specifice de ameliorare a acestor rezistene, se folosete cu mult succes hibridarea simpl de tip backcross sau hibridarea repetat. Ameliorarea rezistenei la boli ameliorarea rezistenei la boli, nceput dup 1900, a cptat o activitate cu caracter tiinific dup ce s-au lmurit i explicat ntrebrile legate de modul de atac i evoluie a bolii, faptul c paraziii i boala prezint aceeai evoluie i sunt supuse acelorai legi ca i cele ale plantelor pe care le atac. n prezent, n ameliorarea rezistenei la boli se au n vedere dou tipuri de rezisten: rezistena vertical i rezistena orizontal. 11

Rezistena vertical-se realizeaz atunci cnd noul soi/hibrid manifest o rezisten activ mai mare pentru o anumit ras fiziologic, fa de alt ras a aceluiai agent patogen. Ea mai poate fi definit ca nsuirea patogenului de a se modifica, motiv pentru care aceast rezisten vertical este temporar. Prezena rezistenei verticale n planta-gazd ntrzie apariia bolii, cantitatea de inocul se reduce semnificativ i de aici prezena atacului este nesemnificativ. Cu ct vor apare noi soiuri/hibrizi cu rezisten vertical sporit, cu att i agenii patogeni se vor diversifica i i vor mri virulena, chiar dac la nceput se nregistreaz o rezisten vertical semnificativ. De aceea, rezistena vertical este mai eficient n cazul plantelor anuale comparativ cu cele perene, precum i n cazul patogenilor nespecializai comparativ cu patogenii specializai. Cu privire la controlul genetic al rezistenei verticale se cunoate c acest tip de rezisten este de regul monogenic i n cazuri rare poate fi poligenic. Rezistena vertical are deci o durabilitate i o stabilitate redus. Att timp ct patogenul nu dezvolt o nou ras fiziologic, mai virulent, rezistena vertical se menine i este total. n momentul apariiei unei noi rase fiziologice, rezistena vertical se pierde, motiv pentru care sunt necesare noi lucrri de ameliorare pentru obinerea de noi genotipuri cu rezisten activ la noul agent patogen. Rezistena orizontal-se realizeaz n cursul filogeniei plant-gazd cnd aceasta i-a creat o rezisten natural activ, fiind permanent n contact cu atacul patogenului. Se mai definete ca rezisten permanent sau stabil. Aceast form de rezisten este comun i se gsete la toate plantele vechi existente n cultur. La soiurile noi introduse n cultur rezistena orizontal este slab. Controlul genetic al acestei rezistene este poligenic, numrul genelor care concur la exprimarea ei fiind de la cteva pn la sute de mii. Aceast form de rezisten prezint anumite avantaje ca: - prezint o mare stabilitate i permanen; - este cumulativ i progresiv, uurnd astfel lucrrile de ameliorare; - nu produce poluarea mediului, ntruct nu necesit tratamente fitosanitare intense, comparativ cu rezistena vertical. Ameliorarea rezistenei la duntori pierderile anuale de recolt, pe plan mondial, datorate atacului duntorilor se ridic la aproape 30 miliarde dolari (circa 14%). n Romnia pierderile anule medii prin atacul duntorilor sunt de 12% la gru, 8% la ovz, 3% la orez, 14% la porumb, 15% la cartofi, i cte 10% la sfecl, legume, floarea soarelui, leguminoase boabe i plante furajere. Msurile de combatere a duntorilor, pentru a se reduce volumul acestor pierderi se grupeaz astfel: crearea de soiuri/hibrizi cu rezisten activ la stresul duntorului, combaterea chimic i combaterea tehnologic. Dintre toate aceste metode, crearea de soiuri/ hibrizi rezisteni la duntori constituie cea mai eficient i nepoluant metod. Dei dificil, aceast metod prezint i alte avantaje: durabilitatea mare (odat dobndit se transmite ereditar, generaie dup generaie peste 100 ani) i relaia invers dintre extinderea genotipurilor rezistente i reducerea numrului duntorilor. Sursele de germoplasm pentru acest tip de rezisten se gsesc mai nti la speciile slbatice i apoi la speciile nrudite. Cu toate acestea puine sunt cazurile de rezisten activ la atacul duntorilor.

1.3.4. Ameliorarea reaciei favorabile la intensivizare a plantelor n condiiile unei agriculturi intensive, noile soiuri i hibrizi vor trebui s ndeplineasc anumite cerine specifice cum ar fi: 12

a Reacie favorabil la condiii de irigare i fertilizare. b Reacie favorabil la condiii de mecanizare. a-Pe suprafeele irigate genotipurile ce se vor cultiva trebuie s ndeplineasc urmtoarele cerine: - s posede o mare capacitate de producie; - s valorifice superior apa i ceilali factori de vegetaie; - s prezinte rezistene sporite la stresurile fitopatogenice. La noi n ar obinerea de soiuri/hibrizi specifici numai pentru suprafeele irigate se afl n faza iniial. Dispunem de puine soiuri specifice pentru condiii de irigare la gru, soia, hibrizi de porumb, de floarea soarelui, de sorg, precum i unele creaii noi de plante furajere perene. b Reacia favorabil la mecanizare pentru mecanizarea integral a tehnologiilor de cultivare se impune ca noile genotipuri s ndeplinesc cerinele: s prezinte portul plantei erect, compact; s dezvolte un sistem radicular puternic i profund; inseria tiuleilor pe planta de porumb s fie la o nlime uniform; inseria primelor psti pe tulpina leguminoaselor boabe s fie la o distan ct mai mare fa de sol; maturizarea boabelor (fructelor) s fie ct mai uniform; s prezinte o rezisten ridicat la scuturare i cdere; boabele (fructele) s reziste la turaii sporite ale aparatului de treier etc. Ameliorarea rezistenei plantelor la cdere Rezistena plantelor la cdere este o nsuire important, fiind obligatorie pentru cerealele pioase, porumb, floarea soarelui i pentru plantele textile, deoarece, n lipsa acesteia, chiar n condiiile unor producii ridicate, la recoltarea mecanizat se nregistreaz pierderi foarte mari. S menionm i faptul c, prin cdere, plantele sunt uor atacate de boli i duntori, se ntrzie maturizarea i se grbete deprecierea produciei sub raport cantitativ i calitativ. Rezistena la cdere este o nsuire ereditar, controlat poligenic, dar, n acelai timp, este influenat foarte puternic de condiiile de mediu i cele tehnologice. Printre factorii a cror ameliorare poate asigura o rezisten activ la cdere sunt: - dezvoltarea unui sistem radicular puternic i profund; - dezvoltarea pe tulpin a esuturilor mecanice care asigur o bun elasticitate tulpinii. Aceast elasticitate este dat de raportul dintre celuloz i lignin. Se tie c ngrmintele cu potasiu reduc coninutul n celuloz din tulpin; - mbuntirea tehnologiei de cultivare: densitatea plantelor s fie optim, raportul NPK optim, regimul hidric din sol normal etc. S-au identificat gene care controleaz talia plantelor caracter a crui reducere mrete semnificativ rezistena plantelor la cdere. Ameliorarea rezistenei plantelor la scuturare Pierderile de recolt prin scuturare pot avea loc nainte de recoltare, pe timpul recoltrii i n timpul transportului plantelor atunci cnd treieratul se face staionar. Ca obiectiv al ameliorrii prezint interes deosebit la cerealele pioase i la leguminoasele pentru boabe, la care, fie prin ntrzierea recoltrii, fie prin maturizarea ealonat, se nregistreaz mari pierderi. Se pot scutura: boabe, spiculee, spice, capsule, calathidii etc. Rezistena activ la scuturare este controlat poligenic, fiind influenat i de: structura anatomic a paleilor, modul de inserie a glumelor, natura esutului mecanic ce se dezvolt n glume, palei, n rahis, gradul de nclinare a inflorescenei, forma i mrimea seminei (fructului) etc.
* * *

13

Obiectivele ameliorrii plantelor prezentate anterior corespund etapei actuale a dezvoltrii acestor cercetri, n condiiile din ara noastr. Dar, n viitorul nu prea ndeprtat, corespunztor nevoilor economiei naionale, ameliorarea plantelor va trebui s-i modifice profund metodele de investigare i s realizeze noi tipuri de plante care s depeasc limitele biologice actuale sub raportul productivitii i calitii i mai ales sub raportul rezistenelor. Noile metode neconvenionale de inginerie genetic constituie, deja, pentru multe state practici concrete cu care se realizeaz noi obiective ale ameliorrii plantelor ca: - realizarea de genotipuri de gru, porumb, floarea soarelui etc., cu capacitatea de fixare pe cale simbiotic sau asimbiotic a azotului atmosferic; - realizarea de hibrizi somatici care nu manifest segregare.

1.4. FACTORII CARE HOTRSC ALEGEREA OBIECTIVELOR AMELIORRII PLANTELOR

n ameliorarea plantelor, cunoaterea precis a obiectivelor i alegerea judicioas a acestora prezint o mare importan. Complexul de factori, n funcie de care se aleg obiectivele ameliorrii plantelor, se clasific n factori naturali i factori social-economici. 1.4.1. Factorii naturali Grupele principale de factori naturali care influeneaz n mare msur alegerea obiectivelor ameliorrii plantelor sunt urmtoarele: Condiiile de clim-deosebit de diversificate, de la nivelul mrii pn la cele mai mari altitudini, influeneaz foarte puternic problematica ce trebuie rezolvat pentru aceeai specie de plant cultivat. Noile soiuri sau hibrizi, intensivi sau superintensivi, vor trebui s valorifice foarte eficient specificul condiiilor locale de clim pentru o anumit zon de cultur. De exemplu n cazul hibrizilor extratimpurii i timpurii de porumb, dei fac parte din aceei grup de precocitate, obiectivele ameliorrii i particularitile biologice ale genotipurilor se difereniaz atunci cnd se cultiv drept cultur succesiv n sudul rii, fa de situia cnd se cultiv n ogor propriu n zonele nordice i intramontane. Aa se explic de ce pentru zona de sud programul de ameliorare a porumbului timpuriu i extratimpuriu aparine ICCPT Fundulea, iar pentru zona de nord a rii acelai program aparine SCA Suceava i SCA Turda. Condiiile de sol au o importan minor n determinarea obiectivelor ameliorrii. Avem totui cazuri cnd se impune crearea de noi genotipuri specifice cultivrii solurilor podzolice (SCA Albota), a solurilor srturate i cu exces de ap (SCA Brila), a solurilor nisipoase (SCA Caracal), a terenurilor erodate (SCA Podu Iloaiei, SCA Turda), a solurilor cu aport freatic (SCA Lovrin) etc. 1.4.2. Factorii social-economici Principalii factori social-economici, n funcie de care, ntr-o anumit etap, se stabilesc principalele obiective ale ameliorrii plantelor sunt: Nivelul tehnic al dezvoltrii forelor de producie din agricultur. Atunci cnd agricultura dispune de o puternic baz tehnico-material, de cantiti suficiente de ngrminte, pesticide i mari suprafee amenajate pentru irigaii, se impune obligativitatea amelioratorilor de a crea noi soiuri i hibrizi care s valorifice din plin aceste condiii deosebit de favorabile. Nu prezint interes i nici nu se recomand folosirea unor genotipuri extensive n condiiile practicrii unei agriculturi intensive, dup cum nu este eficient nici situaia invers. 14

Cerinele economiei naionale este unul din factorii social-economici care influeneaz n mare msur prioritile obiectivelor ameliorrii plantelor. Atunci cnd se trece de la o agricultur extensiv la o agricultur intensiv, ameliorarea plantelor trebuie s rezolve ntreaga constelaie de obiective ce vizeaz mrirea capacitii de producie a noilor soiuri i hibrizi. Realizndu-se etapa de agricultur intensiv, obiectivul major al ameliorrii se ndreapt spre creterea calitii produciei i odat cu aceasta la realizarea de soiuri i hibrizi specializai. Este cazul soiurilor de gru destinate industriei pastelor finoase (Triticum durum), a soiurilor de gru pentru consum uman, a hibrizilor de porumb pentru consum uman, a hibrizilor de porumb pentru furajarea animalelor, a celor folosii n industria amidonului, n extragerea uleiului etc. La toate aceste considerente mai este necesar i solicitarea industriei prelucrtoare pentru anumite genotipuri de plante cu caliti deosebite n prelucrare (fibre, uleiuri etc.) sau cu grad ridicat de extracie (zahr, amidon etc.). Nivelul de pregtire profesional-al celor care activeaz n agricultur imprim alegerea unor anumite obiective specifice ale ameliorrii plantelor. Astfel, greutile ntmpinate n asigurarea forei manuale care s execute rritul la sfecla de zahr au determinat crearea soiurilor monogerme etc.

15

Cap. 2. STUDIUL MATERIALULUI INIIAL

Dintre speciile plantelor existente pe glob, n decursul istoriei, omul a cultivat i folosit un numr foarte mic i, dintre acestea, numai pe cele mai productive i uor de cultivat. Tendina reducerii numrului de plante cultivate este att de mare nct, n prezent, aproape ntreaga existen a omenirii este dependent numai de patru specii: gru, orez, porumb i cartof. Dup datele FAO, n producia total mondial a speciilor de plante cultivate, primele patru specii menionate anterior dein peste 55%, pentru ca restul de 45% s aparin produciei unui numr de peste 30 de specii cultivate. Aceast situaie face ca omul zilelor noastre s devin tot mai vulnerabil, ntruct aprovizionarea i, deci, existena lui depinde de succesul sau insuccesul produciei celor patru specii de plante cultivate. n aceast privin, situaia nu este chiar att de alarmant ntruct majoritatea statelor lumii au gsit i pun n aplicare soluii eficiente care urmresc sigurana recoltelor, dar i msuri de diversificare a fondului genetic vegetal util omului. Dezvoltarea tehnicii i tehnologiilor determin introducerea i extinderea noilor metode neconvenionale n ameliorarea plantelor, ceea ce vor permite obinerea unor genotipuri cu mult mai productive i mai puin dependente de factorii naturali. Principalele obiective ale specialitilor care activeaz n domeniul asigurrii fondului genetic vegetal (germoplasm) utilizat ca material iniial n procesul de ameliorarea plantelor sunt: - asigurarea surselor de gene necesare sporirii capacitii de producie la actualele specii de plante; - ameliorarea nsuirilor de rezisten la boli, duntori, factorii nefavorabili de mediu i mbuntirea calitii produciei; - asigurarea unei mai mari diversiti de specii, care pe baza unor analize din punct de vedere genetic, biochimic, botanic i agronomic s poat fi utilizate ca surse noi de materii prime, fie n industria alimentar, fie n industria farmaceutic, fie n industria chimic; - depistarea printre speciile slbatice a unor specii susceptibile s devin noi plante de cultur, introducerea lor n procesul de ameliorare, creterea indicilor de productivitate, nct s devin competitive cu vechile specii cultivate.

2.1. IMPORTANA MATERIALULUI INIIAL

Materialul iniial folosit n ameliorarea plantelor se definete prin formele spontane i cultivate de plante, cu care se ncepe procesul de creare a noilor soiuri i hibrizi destinai mbuntirii sortimentului existent. Succesul procesului de ameliorare se datoreaz n mare msur valorii i abundenei materialului iniial, ansamblului genelor valoroase a cror acumulare se urmrete n genotipurile noi create. Instituiile i persoanele care se ocup cu ameliorarea plantelor trebuie s dispun de un material iniial bogat i valoros, ceea ce nseamn c trebuie s ndeplineasc urmtoarele cerine: - fondul genetic trebuie s determine valori foarte mari ale componentelor productivitii plantelor comparativ cu martorul omologat i zonat; - nsuirile de rezisten s prezinte valori maxime, la nivelul cerinelor viitoarelor soiuri ce urmeaz a nlocui soiurile existente; - s conin o variabilitate genetic foarte ridicat (coeficientul de eritabilitate s prezinte valori mari); 16

s corespund, sub toate aspectele, obiectivelor ameliorrii. Termenul de material iniial are o accepiune asemntoare cu cel de germoplasm, acesta din urm ctignd din ce n ce mai mult teren. Dup calculul efectuat de James E. 1961, n Statele Unite, 70% din coleciile de soia, 98% din cele de trifoliene i 66% din cele de ovz au fost pierdute. De asemenea, Reitz L. P. i Cradoock J.C. 1969, menioneaz c 75% din formele de orez i peste 75% din formele de secar au disprut. La gru pierderile sunt mai mici. Constatm deci o eroziune genetic evident i semnificativ. Pentru a se micora sau chiar anula aceste pierderi cauzate de eroziunea genetic se ncearc, din ce n ce mai insistent, constituirea unor organisme i instituii care s se ocupe de colectarea i conservarea de germoplasm n bnci de gene. Bncile de gene sunt organizate n 44 state, includ 145 de instituii specializate n care se conserv aproape 200.000 forme de porumb i peste 100 forme de teosinte. Din cele 145 de instituii specializate pe plan mondial numai 14 dein condiii de climatizare cu umiditate i temperatur controlat. Din aceste 14 instituii specializate, n America sunt 8, n Asia 4 i n Europa 2. n Romnia, prospectarea, colectarea, evaluarea, conservarea i folosirea resurselor genetice proprii se realizeaz la ICCPT Fundulea, SCA Turda, SCA Podu Iloaiei, iar la SCA Suceava se gsete deja prima Banc de gene, cu peste 10.000 de forme biologice.

2.2. FORMELE MATERIALULUI INIIAL

Orice material biologic care posed gene utile procesului de ameliorare i din care se pot separa, prin selecie, genotipuri noi, constituie un material iniial de perspectiv. Crearea soiurilor i hibrizilor corespunztori obiectivelor ameliorrii este condiionat de existena, la specia cultivat sau la cele nrudite, a genelor dorite sau de posibilitatea obinerii acestor gene prin mutaii, precum i de transferarea lor cu uurin la noile forme biologice. Variabilitatea genotipic a materialului iniial poate fi natural sau creat artificial de ctre ameliorator. De asemenea, variabilitatea artificial poate fi obinut de ameliorator folosind metodele clasice (convenionale) sau metodele moderne ale ingineriei genetice (neconvenionale). Clasificarea materialului iniial folosit n ameliorarea plantelor se prezint astfel: 1. Material iniial de baz: a. Flora spontan; b. Populaiile locale; c. Soiurile locale; d. Soiurile ameliorate. 2. Material iniial nou, creat de ctre ameliorator: 2.1. Folosind metode convenionale: a. Populaiile hibride; b. Liniile consangvinizate; c. Formele mutante; d. Formele poliploide. 2.2. Folosind metodele neconvenionale: a. Materialul folosit n tehnologia ADN recombinat; b. Materialul rezultat prin culturi de celule i esuturi in vitro; c. Materialul folosit n obinerea haploizilor; d. Materialul folosit n hibridrile somatice. La toate aceste categorii de material iniial folosit n ameliorarea plantelor mai menionm materialul autohton sau din import. 17

Privit\ `n contextul transform\rilor permanente ale plantelor, adaptarea, dup\ N. Ceapoiu 1988 reprezint\ un proces dinamic, activ, de transformare, ce se desf\[oar\ `n timp, `n direc]ii [i cu viteze variabile.

2.2.1.a. Materialul iniial reprezentat prin flora spontan - se compune din speciile spontane, nrudite cu specia la care se lucreaz pentru ameliorare. Fiind rezultatul unui ndelungat proces de selecie natural, speciile spontane sunt bine adaptate i dotate cu nsuiri valoroase ca: rezisten la ger, rezisten la secet, rezisten la boli, plasticitate ecologic ridicat. n acelai timp ns, speciile din flora spontan prezint numeroase caracteristici nevaloroase ca: rezisten slab la scuturare, maturizare neuniform (ealonat), capacitate de producie redus, calitate inferioar i germinaie neuniform.

ADAPTAREA este deci ansamblul de transform\ri structurale, func]ionale [i comportamentale pe care le sufer\ planta ca individ, o popula]ie de plante cultivate (cultivar), o specie, prin care se asigur\ supravie]uirea [i reproducerea acestora `n mediul `n care tr\iesc. Adaptarea este una dintre `nsu[irile fundamentale ale organismelor. Ea este universal\ [i afecteaz\ `ntreaga materie vie. ~n adev\ratul ei `n]eles, adic\ `n sensul evolutiv, adaptarea este un proces care se bazeaz\ pe schimb\ri `n patrimoniul genetic al organismelor. ~n acest context, cei ce sus]in c\ adaptarea `nseamn\ perfec]ionarea structurilor [i func]iilor, c\ adaptarea formeaz\ organisme perfecte, trebuie s\ accepte [i faptul c\ adaptarea este un proces dinamic, `ntr-o contiunu\ desf\[urare [i permite ajustarea armonioas\ a vie]ii organismelor la factorii ambientali. ~n caz contrar, presiunea selec]iei naturale mare, ar determina dispari]ia acestora. Variabilitatea pronun]at\ existent\ `n cadrul acestor specii din flora spontan\ a permis crearea prin selec]ie a unor forme valoroase, care ulterior au fost introduse `n cultur\. Asemenea realiz\ri `ntlnim la unele plante furajere [i plante medicinale. Cea mai larg\ folosire a speciilor din flora spontan\ se afl\ `n hibridarea lor cu plantele de cultur\ - `n special hibridarea de tip backcross pentru a le transmite acestora `nsu[irile de rezisten]\ la ger, secet\, boli precum [i `nsu[irile de rusticitate. Valoarea acestei categorii de material ini]ial de baz\ impune exploatarea, prin expedi]ii [tiin]ifice a diferitelor zone ale globului, pentru depistarea de noi resurse genetice, utile procesului de ameliorare. Fiecare Sta]iune Experimental\ posed\ colec]ii bogate din flora spontan\ pentru speciile cu care lucreaz\ `n domeniul amelior\rii. 2.2.1.b. Materialul iniial reprezentat prin populaiile locale create prin selecie natural, dar i rezultat al seleciei empirice efectuat de ctre om. Formate timp ndelungat, n diferite zone naturale, populaiile locale se caracterizeaz prin: rezisten mare la aciunea factorilor nefavorabili, o mare plasticitate ecologic datorat numrului mare de biotipuri componente etc. Variabilitatea ridicat existent n cadrul acestui material iniial a permis obinerea a numeroase soiuri ameliorate, numai pe baza seleciei individuale repetate (ex. soiul de fasole F-51, F-332, la in-soiul Deta, la orz Cenad-345 etc.). Populaiile locale de porumb au furnizat linii consangvinizate. Aceste popula]ii locale, `n prezent, constituie o germoplasm\ valoroas\ aflat\ `n posesia tuturor Sta]iunilor de Cercet\ri Agricole care activeaz\ pentru ameliorarea speciilor respective. 2.2.1.c. Materialul iniial reprezentat prin soiuri locale este asemntor populaiilor locale, cu deosebirea c soiurile locale sunt obinute prin metode specifice ameliorrii i sunt nregistrate n Registrul de Stat pentru Soiuri i Hibrizi. Soiurile locale, omologate i zonate sunt cuprinse n Lista Oficial de Soiuri i Hibrizi, pot fi multiplicate i comercializate de ctre agenii specializai. La soiurile locale multiplicarea i comercializarea se poate face numai la formele nscrise n Lista Oficial. 18

2.2.1.d. Materialul iniial reprezentat prin soiurile ameliorate obinute n mod deliberat de ctre om prin folosirea metodelor tiinifice de ameliorare, constituie fondul cel mai valoros al materialului de baz. Cunoscndu-se originea soiului, metoda specific de obinere i toate caracteristicile agroproductive, soiurile ameliorate se caracterizeaz prin: - capacitate de producie ridicat; - indici de calitate superiori; - nsuiri de rezisten valoroase etc. Avndu-se n vedere aceste caliti deosebite, soiurile ameliorate constituie un material iniial de baz folosit cu precdere n lucrrile de hibridare fie direct ca linii pure (autogame), fie indirect, ca linii consangvinizate (alogame). Uniformitatea ridicat a soiurilor ameliorate, ca urmare a lucrrilor anterioare de selecie, nu permite separarea prin selecie a unor genotipuri noi. Acesta este i motivul pentru care n lucrrile de hibridare, soiurile ameliorate devin un material iniial, de baz, deosebit de valoros. 2.2.2. Materialul iniial nou, creat de ctre ameliorator Variabilitatea genotipic natural a materialului iniial de baz, n majoritatea cazurilor se dovedete insuficient pentru realizarea de noi genotipuri, la nivelul cerinelor actuale i de perspectiv ale agriculturii. n consecin, orice ameliorator folosete i alte metode convenionale sau neconvenionale pentru provocarea pe cale artificial a variabilitii genotipice. n succesiunea lor, metodele folosite pentru obinerea variabilitii genotipice artificiale au existat mai nti cele convenionale ca: hibridarea, consangvinizarea, mutageneza, poliploidia dup care mai ales n ultima perioad s-au extins metodele neconvenionale, cuprinse n termenul de inginerie genetic. 2.2.2.1. Materialul iniial nou creat prin metode convenionale 2.2.2.1.a. Populaiile hibride ca material iniial nou creat de ameliorator, aflate n curs de segregare (F2F6) reprezint o important surs de variabilitate genotipic, n special la plantele autogame. n afara indivizilor care ntrunesc caracteristicile dorite ale genitorilor, n urma segregrii apar i unele transgresiuni, deosebit de importante pentru ameliorare. Condiia esenial pentru obinerea unor forme segregante valoroase o constituie alegerea judicioas a genitorilor, care trebuie s fie ct mai difereniai genetic. n acest scop se folosesc hibridrile ndeprtate, att ntre speciile cultivate, ct i ntre cele cultivate i speciile din flora spontan. Astfel, la gru, se fac hibridri ntre Triticum aestivum i Agropyron pentru obinerea formelor rezistente la rugina brun. De asemenea, la secar, pentru obinerea de forme rezistente la iernare se fac hibridri ntre Secale cereale i Secale montanum, iar la cartof, rezistena la temperaturi sczute se capt prin hibridarea ntre Solanum tuberosum i Solanum acaule. Populaiile hibride, ca material iniial de ameliorare, n generaiile segregante (F2 F4) se mai numesc i material de ciclul II, iar obiectivul principal const n obinerea de noi linii consangvinizate, linii care datorit recombinrilor de gene i procesului segregrii pot s ntruneasc o combinaie de gene mai favorabil, fa de liniile iniiale folosite n obinerea hibrizilor respectivi. 2.2.2.1.b. Liniile consangvinizate ca material iniial nou creat de ameliorator reprezint cel mai valoros material iniial pentru plantele alogame. Aceste organisme homozigote sunt rezultatul desfacerii materialului iniial, heterozigot, n biotipurile constituente, ca urmare a autopolenizrilor repetate. Dup cum se tie, liniile consangvinizate, ca organisme homozigote, nu se folosesc ca atare n procesul de ameliorare, deoarece prezint o vitalitate redus. n schimb, liniile consangvinizate ofer posibilitatea obinerii de hibrizi cu un efect heterozis maxim. Ca material iniial de ameliorare, liniile consangvinizate pot fi folosite n 19

obinerea diferitelor combinaii hibride, care n generaiile segregante pot realiza diferite forme transgresive. n acest sens fiecare ameliorator i produce sau i procur singur liniile consangvinizate pe care le folosete ca material iniial n procesul ameliorrii. 2.2.2.1.c. Formele mutante ca material iniial nou creat constituie o important surs de variabilitate genetic i deci un material iniial de ameliorare valoros pentru multe specii de plante cultivate. Formele mutante valoroase pot da natere unui soi nou sau pot prezenta nsuiri deosebit de rezistente care pot fi utilizate n continuare la diferite tehnici de ameliorare. Folosirea agenilor mutageni n scopul obinerii i seleciei de mutante valoroase la plantele cultivate a devenit n ultimile dou decenii o metod obinuit n programele de ameliorare. Privitor la procedeele practice de inducere i de selecie a mutaiilor la diferite categorii de plante, ele difer n primul rnd de modul reproducerii plantelor, de scopul urmrit, de gradul de mutabilitate, de organele supuse tratamentului i de constituia genetic a materialului biologic. Un rol deosebit n reuita ameliorrii plantelor prin mutagenez l are valoarea practic a materialului iniial cu care se ncepe procesul mutaional. De regul se folosesc biotipurilecele mai valoroase, urmnd a se face unele mbuntiri la nsuirile care frneaz obinerea unei productiviti maxime, n anumite condiii de cultur. 2.2.2.1.d. Formele poliploide ca material iniial nou creat -reprezint o surs important de variabilitate, mai ales pentru speciile cu numr mic de cromozomi. Poliploizii, ca material nou creat, dau posibilitatea creterii dimensiunilor celulelor i organelor, rezultnd astfel sporirea produciei de mas vegetativ. Poliploizii artificiali, ca atare, nu prezint interes pentru practica agricol la toate speciile datorit gigantismului lor, duratei prelungite a perioadei de vegetaie i fertilitii sczute; dar, pentru obiectivele ameliorrii plantelor, acetia prezint interes deosebit. n cazul plantelor ornamentale, pomi, arbuti fructiferi, sfecl, secar, trifoi, bumbac etc., poliploizii artificiali prezint interes. n ultima vreme, capt extindere folosirea haploizilor n programele de ameliorare, deoarece se obin forme complet homozigote ntr-un interval de timp mai scurt cu 6-8 ani fa de metoda autopolenizrii repetate a plantelor alogame (consangvinizare). 2.2.2.2. Materialul iniial nou creat prin metode neconvenionale Cu toate rezultatele bune nregistrate pn n prezent prin metodele convenionale de ameliorare, exist prerea unanim c agricultura modern i de viitor trebuie s dispun de noi forme vegetale care s concentreze n structura lor ereditar un numr maxim de gene valoroase, indiferent dac acestea se gsesc la specii nrudite sau ndeprtate taxonomic.Astfel de forme vegetale nu pot fi create ns prin utilizarea metodelor convenionale de ameliorare (hibridarea, consangvinizarea, mutageneza i poliploidia), din cauza unor bariere care se opun transferului de gene existente la speciile ndeprtate taxonomic. Dintre asemenea bariere enumerm: macrostructuri de mperechere, bariere instinctuale i etologice, nepotriviri cromozomale de sinaptizare i disjuncie, precum i incongruene moleculare la nivelul ADN, ARN i proteinelor, absena omologiilor dintre secvenele nucleotidelor. Cercetrile efectuate ndeosebi n ultimul deceniu au dus la descoperirea unei posibiliti cu adevrat extraordinare de obinere a unor recombinri interspecifice, graie elaborrii unui ansamblu de metode i tehnici, denumit inginerie genetic, care opereaz in vitro, cu gene, cromozomi i celule ntregi, n vederea construirii unei structuri genetice cu proprieti i nsuiri premeditate. Ingineria genetic permite aadar, manipularea materialului genetic fr participarea proceselor sexuale i obinerea de organisme cu caractere i nsuiri noi. Exist astfel posibilitatea manipulrii unei singure celule, fie somatice, fie germinale, extinzndu-se n acest fel modalitile de acionare asupra substanei ereditare. Deosebit de important este faptul c aplicarea 20

metodelor ingineriei genetice n ameliorarea plantelor duce la scurtarea timpului pentru obinerea de noi forme vegetale, ntruct exist posibilitatea folosirii directe a produselor de meioz (a gameilor). Se consider c folosirea metodelor convenionale n ameliorarea plantelor a permis creterea nivelului produciilor agricole de patru ori, n timp ce metodele neconvenionale vor face ca acest nivel s se mreasc de 8-9 ori. 2.2.2.2.a. Materialul folosit n tehnologia ADN recombinat trebuie s permit izolarea unei gene sau a unui complex de gene dintr-un organism procariot sau eucariot, ataarea genei respective sau a complexului de gene la o molecul-vehicul i transferarea ei la un organism nenrudit, astfel ca, n noul organism, gena respectiv si menin intacte nsuirile iniiale. Unul din cele mai importante rezultate pentru practica agricol i care se bazeaz pe tehnologia ADN recombinat este clonarea unui segment de ADN coninnd o parte din genele nif (nitrogen fixation), n 1977 de ctre Ausbel i colab. Introducerea genelor nif la restul plantelor de cultur, pentru reducerea azotului molecular din atmosfer la amoniu i redarea lui sub aceast form plantelor, ar constitui o realizare deosebit n economisirea surselor de energie folosit n prezent n industria ngrmintelor cu azot. 2.2.2.2.b. Culturile in vitro ca material nou creat -folosit n procesul de ameliorare, reprezint o posibilitate real i foarte valoroas, mai ales de perspectiv, cnd nivelul dotrilor tehnice i tehnologice se va perfeciona. Acumularea unui nivel important de date privind culturile in vitro i esuturi vegetale a contribuit la cunoaterea mai aprofundat a celulei vegetale, a omnipotenei acesteia, a mecanismului diviziunii i diferenierii celulare, a nutriiei celulei i a metabolismului ntregului organism. Pe de alt parte, folosirea acestei tehnologii n ameliorarea plantelor i n sistemul nmulirii seminelor i materialului de plantat prezint multiple avantaje: multiplicarea rapid a unor genotipuri valoroase, producerea de material liber de viroze, nlturarea incompatibilitii hibridrilor sexuate i a sterilitii hibrizilor interspecifici i intergenerici, obinerea de plante haploide i a liniilor izogene, realizarea unei variabiliti genetice pronunate, inducerea de mutaii la nivel haploid i diploid etc.Culturile in vitro de celule i esuturi constituie, de fapt, prima treapt a ingineriei genetice la nivel celular. 2.2.2.2.c. Materialul folosit n obinerea haploizilor Folosirea haploizilor ca material iniial n ameliorarea plantelor prezint numeroase avantaje cum ar fi: economisirea substanial de timp n obinerea formelor total homozigote, posibilitatea izolrii unui numr mare de genomuri individuale folosite apoi n multiple combinaii hibride, posibilitatea obinerii de linii izogenice numai ntrun singur centru etc. Haploizii scurteaz programele de ameliorare cu cel puin cinci ani comparativ cu metodele clasice de ameliorare (consangvinizare). De asemenea, ameliorarea unei nsuiri eseniale pentru fiecare specie, cum ar fi capacitatea de producie, se poate obine ntr-un interval de timp mai redus cu 34 generaii fa de metodele convenionale deoarece se realizeaz ntr-un timp mai scurt fixarea gameilor ntr-o form stabil i reproductibil. n aceast important form de activitate prezint mare importan calitatea materialului iniial folosit n obinerea haploizilor. 2.2.2.2.d. Materialul folosit n hibridrile somatice Bazat pe fuziunea protoplatilor provenii de la diferite specii, care pot fi extrem de ndeprtate din punct de vedere filogenetic, hibridarea somatic ofer posibilitatea obinerii unor genotipuri vegetale cu mult superioare celor existente. Se tie c hibridarea sexuat nu se realizeaz n mod normal ntre toate speciile de plante, fie diferenelor de nrudire, fie existenei unor deficiene n formarea organelor de reproducere etc. Toate aceste deficiene existente la hibridarea sexuat pot fi rezolvate prin hibridarea somatic. n acelai timp, comparativ cu hibridarea sexuat, hibridarea somatic prezint i unele avantaje: 21

posibilitatea folosirii pentru hibridare a unor forme ndeprtate filogenetic, evitndu-se astfel restriciile datorate incompatibilitii; - hibrizii somatici nu manifest segregarea caracterelor i nsuirilor n descenden; - se pot folosi ca parteneri plante cu nmulire vegetativ; - se pot obine hibrizi somatici i ntre plante care prezint anomalii n morfogenez; - se pot obine hibrizi somatici asimetrici i chiar hibrizi somatici multiparentali. Cu toate speranele mari pe care le nutresc amelioratorii n hibridrile somatice, exist unele voci care propun meninerea unei prudene, ntruct pn n prezent exist puine dovezi experimentale care s justifice prea mult optimism.

2.3. COLECTAREA, STUDIUL I CONSERVAREA MATERIALULUI INIIAL

Realizarea obiectivelor ameliorrii necesit existena unui material iniial ct mai numeros i diversificat. a. Colectarea materialului iniial folosit se poate realiza prin: - schimb de semine i material sditor; - organizarea de expediii tiinifice; - colectarea prin intermediul unor instituii agricole din ar; - colectarea prin intermediul laboratoarelor de controlul calitii seminelor; - colectarea de la diverse expoziii agricole. Importana prioritar ce se acord germoplasmei pe plan mondial i n ara noastr a determinat nfiinarea de instituii specializate care asigur colectarea, studiul i conservarea materialului iniial. ~n Romnia, dup\ M. Cristea 1985, num\rul total al probelor de plante colectate este de aproape 40.000 , din care 30,7% apar]in speciilor de gru, 20,1% porumbului, 10,6% orzului, [.a.m.d., `n total peste 30 de specii de plante cultivate. Dintre probele colectate, aproape 50% se g\sesc la ICCPT Fundulea, 16,1% la SCA Turda, 13,5% la SCA Suceava, unde se afl\ [i o banc\ de gene special construit\, iar restul de 20,4% de probe se afl\ `n 9 Sta]iuni de cercet\ri agricole [i 4 Universit\]i Agronomice. b. Studiul materialului iniial. Materialul iniial folosit n procesul de ameliorare, mai nti este studiat minuios, folosindu-se urmtoarele posibiliti: - studiul materialului iniial n cmpul de colecie; - studiul materialului iniial n ser; - studiul materialului iniial n case de vegetaie; - studiul materialului iniial n laborator. Un asemenea studiu, multilateral, dureaz minimum 3 ani i se refer la: caracterizarea morfologic, ecologic, biologia creterii i dezvoltrii, studii de citogenetic, fiziologie, al nsuirilor biochimice, tehnologice i de productivitate. Caracterizarea morfologic-vizeaz: nlimea plantei, ramificarea tulpinii, mrimea, forma i culoarea frunzelor, tipul de inflorescen, forma i culoarea florilor, forma, mrimea i culoarea fructelor, a seminelor, porozitatea plantei, frunzelor i fructelor etc. Pe baza caracterelor morfologice se stabilete, pentru fiecare variant supus studiului: unitatea sistematic din care face parte, precum i particularitile distincte pe baza crora se pot stabili deosebirile de alte variante ce fac parte din aceeai unitate sistematic. Studiile ecologice vizeaz stabilirea legturilor (raporturilor) ce exist ntre diferite variante (ecotipuri) din colecie i condiiile locale de mediu. Cu ct un ecotip este mai bine adaptat condiiilor locale de mediu, cu att este mai valoros pentru 22

lucrrile de ameliorare. n urma acestor studii agroecologice, pentru majoritatea plantelor de cultur n ara noastr, s-au stabilit urmtoarele grupe ecologice: de step, de silvostep, de pdure i premontan-montan. Aceste grupe ecologice sunt strns legate de zonele naturale ale climei i solului din ara noastr i se caracterizeaz prin anumite nsuiri i caractere care permit plantelor s se dezvolte bine n aceste condiii ecologice specifice. Studiile referitoare la biologia creterii i dezvoltrii plantelor constau n urmrirea desfurrii creterii pe fazele de vegetaie, n strns corelaie cu evoluia condiiilor pedoclimaterice. Aceste studii ne indic gradul de adaptare a materialului nostru la condiiile de mediu locale. Cea mai mare importan se acord studiului biologiei nfloritului i fecundrii, mai ales atunci cnd se folosete metoda de ameliorare prin hibridare. Aceste studii vizeaz: data formrii inflorescenelor i florilor, data i durata nfloritului, gradul de autogamie sau de alogamie, agenii polenizatori, condiiile optime de polenizare i fecundare etc. Studiile de citogenetic-ne dau informaii asupra constituiei genetice a materialului iniial, n funcie de care amelioratorul stabilete metodele i tehnicile cele mai adecvate ce pot fi folosite n procesul de ameliorare. Studiile de citogenetic se refer la: gradul de homozigoie sau de heterozigoie, numrul de cromozomi, ereditatea caracterelor i nsuirilor, grupele de linkage, ereditatea extracromozomal, reacia la aciunea agenilor mutageni i poliploidizani, gradul i cauzele compatibilitii la fecundare, structura genetic a populaiilor (n funcie de modul de reproducere) i factorii care modific aceast structur. Studiul nsuirilor fiziologice ca: rezistena la iernare, la secet, reacia la condiiile locale de lumin, etc., ne ofer noi elemente pentru a cunoate comportarea materialului nostru pe durata procesului de ameliorare. Determinarea nsuirilor biochimice privitoare la: coninutul n proteine, grsimi, amidon, fibre, zahr, alcaloizi, vitamine, sruri minerale etc., ne permite s folosim cel mai adecvat material pentru obinerea soiului/hibridului dorit. Studii importante ale materialului iniial urmresc i determinarea rezistenei la boli i duntori, n special pentru speciile i rasele cele mai duntoare pentru zona n care se lucreaz. Asemenea studii se fac n condiii de infecie artificial. Cercetrile tehnologice urmresc determinarea randamentului de fabricaie al unui produs (din gru, secar), calitatea malului (orz, orzoaic), capacitatea de fierbere a boabelor (leguminoasele boabe), calitile culinare (leguminoase, cartof), calitile tehnice ale fibrelor (in, cnep), sicativitatea uleiului (in, cnep, floarea soarelui) etc. Indicii de productivitate se refer la: densitatea plantelor, numrul plantelor fertile pe unitatea de suprafa, numrul ramificaiilor fructifere pe o plant, numrul de flori fertile pe o inflorescen, numrul, mrimea i greutatea seminelor/fructelor pe o plant etc. Toate aceste componente prezint o deosebit importan n aprecierea valorii materialului folosit n procesul ameliorrii. O atenie deosebit trebuie acordat studiului materialului provenit din import, format n condiii ecologice diferite fa de cele specifice zonei n care se lucreaz. n aceste situaii, dac nu se aplic msurile specifice este posibil ca materialul, fiind incomplet stabilizat din punct de vedere genetic, s se elimine n ntregime proprietile i nsuirile eseniale specifice care caracterizau acest material. De asemenea trebuie acordat mare atenie strii fitosanitare. Pentru aceasta, tot materialul importat va fi nsmnat, mai nti ntr-un cmp izolat, numit cmp de carantin, dup care, pe baza testrilor i observaiilor fcute se trece apoi n cmpul de colecie. n baza tuturor studiilor prezentate se face caracterizarea materialului iniial i se stabilete valoarea lui n procesul de ameliorare. c. Conservarea materialului iniial 23

Avnd n vedere c o gen sau un complex de gene pot salva, la un moment dat, pieirea unei specii de baz n alimentaia uman, ne putem da seama de rolul uria al resurselor genetice n viaa omenirii. Conservarea genetic a plantelor trebuie s asigure att viabilitatea seminelor, ct i stabilitatea genetic iniial a materialului supus pstrrii. n funcie de posibilitile existente i de particularitile fiecrei plante, se hotrte forma de conservare (semine, polen, rdcini, tuberculi, culturi de esuturi etc.). Conservarea genetic se poate realiza pe trei ci principale: in situ; ex situ i n bnci de gene. Conservarea genetic in situ (n rezervaii naturale) const n pstrarea populaiilor n ecosistemele naturale n care s-au format i dezvoltat i n care sunt foarte bine adaptate la condiiile de mediu. O astfel de conservare este specific ndeosebi speciilor slbatice, care n general triesc ntr-un echilibru cu mediul respectiv care este relativ stabil. Pentru ca rezervaiile naturale s funcioneze ca habitate cu evoluie continu i s serveasc generaiilor viitoare, trebuie ca durata existenei lor s fie lung, iar arealul s fie ct mai mare i mai reprezentativ. O schem pentru o astfel de rezervaie natural a fost elaborat de Programul UNESCO, n 1973-1974 sub denumirea Omul i biosfera. Parcuri i rezervaii naturale n Europa se gsesc: n Rusia 86 cu 67 milioane hectare; n Suedia 17 cu 1,0 milioane hectare; n Finlanda 20 cu 330.000 hectare; n Polonia 14 cu 238.000 hectare etc., iar n Romnia 3 cu 65.000 hectare. n America de Nord se gsesc 34 de rezervaii naturale cu 10 milioane hectare, iar n Africa cea mai mare rezervaie natural se afl n Morogoro din Tanzania. Dintre rezervaiile naturale din Romnia, n ordinea descrescnd a suprafeelor ocupate, avem: Retezat, Delta Dunrii, Bucegi, Pietrosul Mare al Rodnei i Ceahlu. Conservarea genetic ex situ (n grdinile botanice) const n concentrarea tuturor plantelor n anumite locuri controlate de om, n conformitate cu anumite principii de organizare i de funcionare. n general, n ntreaga lume, grdinile botanice sunt cele care adpostesc att speciile autohtone, adaptate la condiiile ecologice locale, ct i speciile strine. Pentru ca o grdin botanic s poat ndeplini i funcia de conservare genetic, trebuie ca fiecare colecie vie ce se gsete n grdin s fie astfel format i dimensionat nct s permit meninerea structurii genetice a populaiei respective. Un numr insuficient de indivizi dintr-o populaie sau cu o recoltare necorespunztoare a probelor ce asigur conservarea numai a unei anumite pri din varianta total a populaiei duce la modificarea structurii genetice a populaiei respective. Grdinile botanice pot, de asemenea, contribui la ocrotirea unor plante, ndeosebi a acelora care deocamdat nu pot fi conservate n bncile de gene sau prin culturi de esuturi. n Romnia, cea mai veche i mai mare grdin botanic se afl la Iai, nfiinat n 1856 i deine astzi peste 100 ha, apoi urmeaz cea de la Bucureti nfiinat n 1860 i ocup 7 ha, iar cea de la Cluj s-a nfiinat n 1920 i deine suprafaa de 14 ha. Conservarea genetic n bnci de gene Bncile de gene sunt instituii special nfiinate care au sarcina de a prospecta, colecta, evalua i conserva plantele pe termen lung. Conservarea n bncile de gene se realizeaz mai mult sub form de semine. Factorii care influeneaz conservarea seminelor n bncile de gene sunt: -factorii anteriori recoltrii semine normale, sntoase, recoltate pe timp uscat i netreierate, asigur o pstrare mai ndelungat a seminelor; -structura i compoziia seminelor seminele nedecorticate au o via mai lung comparativ cu cele decorticate; -maturitatea seminei realizat pe deplin asigur o pstrare ndelungat; -repaosul seminal mai lung demonstreaz o viabilitate prelungit i invers; -umiditatea seminelor ridicat reduce durata de pstrare; 24

-leziunile mecanice provocate seminelor la recoltare provoac reducerea duratei de pstrare. Condiiile ce se cer depozitelor care asigur conservarea seminelor din colecie sunt urmtoarele: -temperatura de depozitare 100C i chiar 200C; -coninutul n umiditate al seminelor s fie sub 5%; -umiditatea relativ a aerului sub 20%; -coninutul n bioxid de carbon al aerului din depozit s fie mare; -lumina solar s fie absent; -coninutul n oxigen al aerului din depozit s fie redus. Mnuirea n mod corespunztor a genelor valoroase influeneaz cu siguran dezvoltarea agriculturii, att prin creterea intrinsec a capacitii de producie a noilor soiuri, ct i prin sporirea rezistenei acestora la condiiile nefavorabile de mediu i la atacul bolilor i duntorilor.

25

Cap. 3. METODELE FOLOSITE N AMELIORARE

3.1. IMPORTANA ALEGERII CORECTE A METODEI DE AMELIORARE
Crearea de noi soiuri/hibrizi la plantele cultivate impune adoptarea de metode de ameliorare adecvate, care s rspund eficient obiectivului propus. Folosirea unei singure metode sau a mai multor metode consecutiv este n concordan cu particularitile biologice ale speciei cu care se lucreaz (modul de reproducere, biologia floral, particularitile fiziologice etc.), precum i cu obiectivele ameliorrii. Prima cerin n alegerea metodei de ameliorare o reprezint modul de reproducere a speciei pe care o ameliorm. Din acest punct de vedere distingem: a Plante autogame cele care se fecundeaz cu polen propriu (gru, orz, orzoaic, ovz, orez, mazre, fasole, soia, lupin, in, sorg, iarba de Sudan, mei etc.); sunt n general forme homozigote i, prin aplicarea seleciei corespunztoare, se obine n final un nou soi sau o linie pur. Aceste linii pure sau soiuri pot fi folosite n lucrrile de ameliorare fr msuri speciale de nlturare a polenizrilor strine, ntruct se polenizeaz cu polenul propriu. b Plante alogame cele care se fecundeaz cu polen strin (porumb, floarea soarelui, sfecl de zahr, secar, cnep, lucern, trifoi, ghizdei, sparcet, obsig, golom, piuul nalt, piuul de livad, piuul rou, raigrasul aristat, raigrasul peren, timoftica, firua etc.) sunt, n general, forme heterozigote, la care se cunoate numai forma matern. Selecia practicat n cadrul plantelor alogame uneori poate constitui i factor negativ, atunci cnd se reduce la minimum numrul indivizilor care asigur polenizarea (se zice c selecia este prea strns). La aceast categorie de plante se aplic metoda consangvinizrii (autopolenizrii forate), pentru a se realiza linii pure homozigote dup 78 autopolenizri repetate care prin hibridare s dezvolte efectul heterozis maxim i de aici creterea produciei prin intermediul hibrizilor F1. c Plante cu nmulire vegetativ (cartoful, trestia de zahr etc.) au transmiterea neschimbat a caracterelor i nsuirilor, deoarece refacerea numai pe cale vegetativ asigur obinerea de organisme heterozigote sau homozigote, aa dup cum au rezultat n urma ultimei hibridri sau nmuliri sexuate. Prin selecie clonal se obin n final linii pure (soiuri), care pot fi modificate numai prin apariia mutaiilor sau ploidiei naturale. ntre plantele autogame i cele alogame exist o grup intermediar de plante (Vicia faba, Brassica napus, Sorghum ssp.) care se fecundeaz fie cu polen propriu, fie cu polen strin. Metodele de ameliorare folosite sunt cele corespunztoare plantelor autogame i a celor alogame. O metod de ameliorare trebuie s mai ia n considerare i urmtoarele: a) Caracterul monoic sau dioic al plantelor la plantele dioice metoda de ameliorare prin consangvinizare (autopolenizare repetat) nu este posibil, n timp ce la plantele monoice consangvinizarea este foarte eficient. Dintre plantele dioice menionm spanacul, sparanghelul, iar dintre cele monoice avem porumbul, ricinul, castraveii etc. b) Caracterul hermafrodit la florile hermafrodite castrarea este dificil, fiind necesare forme androsterile sau autoincompatibile. Alegerea i folosirea celor mai bune metode de ameliorare se face i n funcie de caracterele i nsuirile ce trebuie s le ndeplineasc noul soi, precum i n funcie de condiiile naturale pentru zona n care se va cultiva noul soi. Orice metod de ameliorare folosit trebuie s fie simpl, exact, tiinific i s permit atingerea obiectivului propus ntr-un timp ct mai scurt. 26

3.2. CLASIFICAREA I CARACTERIZAREA METODELOR

Principalele metode folosite n ameliorarea plantelor se clasific astfel: 3.2.1. Metode convenionale pentru ameliorarea plantelor 3.2.1.1. Hibridarea. 3.2.1.2. Consangvinizarea. 3.2.1.3. Mutageneza. 3.2.1.4. Ploidia (poliploidia). 3.2.1.5. Selecia.

27

3.2.2. Metode neconvenionale pentru ameliorarea plantelor 3.2.2.1. Tehnologia ADN recombinat. 3.2.2.2. Culturi de celule i de esuturi in vitro. 3.2.2.3. Haploidia. 3.2.2.4. Hibridarea somatic. 3.2.1.1. Hibridarea Hibridarea = unirea pe cale sexuat sau parasexuat a doi sau mai muli parteneri cu ereditate diferit. Organismul nou obinut n urma hibridrii poart numele de hibrid i posed o ereditate dubl, tripl sau multipl, n funcie de numrul partenerilor din care provine. La hibridrile sexuate formele parentale se noteaz astfel: forma parental femel sau matern se noteaz cu i se nscrie prima n cadrul formulei (A), iar forma parental mascul sau patern se noteaz cu i se nscrie a doua n cadrul formulei (B). De exemplu, hibridarea simpl A x B (A mam, B tat). Hibridarea este cea mai sigur cale de obinere a variabilitii genetice, este cea mai eficient metod de creare a unor soiuri/hibrizi noi i n acelai timp reprezint principala cauz a evoluiei. Importana hibridrii const n: constituie principala metod de creare a materialului iniial nou; pune n eviden efectul heterozis la diferite tipuri de hibrizi, folosii att n procesul de ameliorare, dar mai ales n activitatea de producie; reprezint metoda principal de creare a variabilitii genotipice n cadrul materialului iniial folosit n procesul de ameliorare; prin hibridare se pot obine transgresiuni, adic forme hibride care cumuleaz ntr-un grad accentuat nsuirile genitorilor; hibrizii, avnd o ereditate zdruncinat, sunt mai maleabili din punct de vedere biologic i poate fi dirijat mai uor creterea i dezvoltarea lor. Hibridarea nu se face ntmpltor, ea se realizeaz numai pe baza cunoaterii amnunite a nsuirilor ereditare ale formelor parentale, precum i a posibilitilor de transmitere a acestora n descenden. Variabilitatea ce se obine n urma hibridrii este cu att mai mare, cu ct formele ce se ncrucieaz sunt mai puin nrudite genetic i cu ct numrul partenerilor care particip este mai mare. Rezult astfel c hibridarea nu este o metod n sine, ci este o metod de ameliorare aplicat deliberat, pe baza unor programe riguroase. Aplicat n prezent la toate plantele de cultur, hibridarea , urmat de selecia n populaiile hibride, reprezint metoda fundamental folosit n toate programele moderne de ameliorare. Rezultatele aplicrii hibridrii se concretizeaz prin cele 95% din soiurile cultivate n prezent pe plan mondial i care sunt de origine hibrid. Apariia genotipurilor noi, ca urmare a hibridrii, este consecina faptului c n procesul de formare a gameilor la noul organism hibrid, heterozigot, intervine segregarea genelor, libera combinaie a acestora, recombinarea lor datorit crossing-over-ului precum i datorit unor transgresiuni. Astfel, prin segregarea alelelor provenite de la cei doi prini, hibridul produce, cu probabilitate egal, dou tipuri de gamei i prin unirea acestora, pe baza legii hazardului, n

28

descendenele heterozigoilor pot s apar numeroase genotipuri noi i diferite. Libera combinare a genelor determin segregarea ndeprtat a fiecrei perechi de gene (respectiv de caractere) n F2, oferind astfel apariia de noi combinaii prin regruparea genelor. Asemenea recombinri, care mresc considerabil variabilitatea genotipic, pot s apar i datorit crossing-over-ului, care favorizeaz schimbul de gene ntre cromozomii omologi, ca urmare a conjugrii cromozomilor, ruperii i reunirii segmentelor de cromozom n punctele omoloage. De asemenea, ncepnd cu F2, n cazul ereditii polimere segregarea i recombinrile permit apariia unor indivizi la care un anumit caracter se exprim foarte puternic fa de valorile celui mai bun printe, rezultnd astfel o transgresiune. Avem posibilitatea ca prin hibridare, n generaiile segregante s obinem genotipuri noi prin noi combinaii, recombinaii i transgresiuni. Astfel, prin segregarea alelelor provenite de la cei doi p\rin]i, hibridul produce, cu probabilitate egal\, dou\ tipuri de game]i [i prin unirea acestora, pe baza legii hazardului, `n descenden]ele heterozigo]ilor pot s\ apar\ numeroase genotipuri noi [i diferite. Libera combinare a genelor determin\ segregarea `ndep\rtat\ a fiec\rei perechi de gene (respectiv de caractere) `n F2, oferind astfel apari]ia de noi combina]ii prin regruparea genelor. Asemenea recombin\ri, care m\resc considerabil variabilitatea genotipic\, pot s\ apar\ [i datorit\ crossing-over-ului, care favorizeaz\ schimbul de gene `ntre cromozomii omologi, ca urmare a conjug\rii cromozomilor, ruperii [i reunirii segmentelor de cromozom `n punctele omoloage. De asemenea, `ncepnd cu F2, `n cazul eredit\]ii polimere segregarea [i recombin\rile permit apari]ia unor indivizi la care un anumit caracter se exprim\ foarte puternic fa]\ de valorile celui mai bun p\rinte, rezultnd astfel o transgresiune. Avem posibilitatea ca prin hibridare, `n genera]iile segregante s\ ob]inem genotipuri noi prin noi combina]ii, recombina]ii [i transgresiuni. Msurile necesare pentru realizarea unei hibridri corecte Succesul hibridrii depinde, n mare msur, de: - studiul materialului iniial i analiza caracteristicilor genetice; - alegerea formelor parentale; - sincronizarea nfloritului formelor parentale; - alegerea plantelor, a inflorescenelor i a florilor; - castrarea, polenizarea controlat i izolarea inflorescenelor; - metoda de selecie aplicat n populaiile hibride; - prelucrarea adecvat a materialului hibrid i a rezultatelor nregistrate. Alegerea formelor parentale-n vederea hibridrii, trebuie s fie fcut pe baza urmtoarelor principii: - prinii sau genitorii trebuie s fie homozigoi, cel puin pentru perechile de alele care controleaz nsuirea sau caracterul urmrit n hibridare. n acest scop, obinuit se practic hibridarea ntre liniile pure la plantele autogame i ntre liniile consangvinizate la plantele alogame; - forma matern s posede unul sau mai multe caractere dominante uor identificabile n fenotip. Prin aceasta exist posibilitatea verificrii dac hibridarea s-a efectuat corect. Astfel, dac n F1 hibridul respectiv se aseamn mai mult cu forma matern, nseamn c polenizarea s-a realizat cu polen propriu i deci hibridarea nu a reuit; 29

folosirea ca genitori a unor ecotipuri ndeprtate geografic care ofer posibilitatea obinerii unor hibrizi valoroi; - una dintre formele parentale s fie soiul zonat, bine adaptat la condiiile specifice locale i posesor al unor caractere i nsuiri valoroase; - cunoaterea valorii hibridologice a formelor parentale este imperios necesar ntruct n funcie de aceasta vom ti, din start, dac vom obine sau nu hibrizi cu capacitate de producie ridicat. Aceast valoare hibridologic (capacitate combinativ ridicat) a formelor parentale se obine, n F1, folosind hibridarea ciclic, hibridarea dialel i hibridarea n mas. De asemenea, alegerea formelor parentale trebuie s se fac i n funcie de: - cunoaterea perioadei de vegetaie a fiecrui genitor, n corelare cu perioada de vegetaie ce o dorim a fi realizat n viitorul hibrid n F1. Prin aceasta se pot dirija elementele productivitii cu precocitatea sau tardivitatea; - cunoaterea amnunit a componentelor capacitii de producie: capacitatea de nfrire, producia de boabe pe un spic, panicul sau plant, numrul spiculeelor fertile ntr-un spic, MMB etc. - cunoaterea nsuirilor fiziologice, biochimice i tehnologice care condiioneaz n mare msur rezistena plantelor la stresurile climaterice, fitopatogene, la cdere, scuturare etc. Sincronizarea nfloritului la formele parentale constituie o condiie obligatorie, ntruct prin aceasta se realizeaz existena unui numr suficient de plante din forma matern receptive la polenizare, dup cum i un numr suficient de plante din forma patern care s produc polen. n funcie de decalajul existent la nflorit, ntre formele parentale, sincronizarea nfloritului se poate realiza astfel: Grbirea nfloritului se poate realiza prin: - expunerea plantelor la temperaturi mai ridicate; - tratarea seminelor cu stimulatori de cretere; - aplicarea ngrmintelor cu fosfor; - supunerea plantelor la intensiti mai mari de iluminare; - eliminarea irigaiilor. ntrzierea nfloritului se poate realiza prin: - expunerea plantelor la temperaturi mai sczute; - tratarea seminelor cu inhibitori de cretere; - aplicarea ngrmintelor cu azot; - supunerea plantelor la intensiti mai reduse de iluminare; - aplicarea irigaiilor. De asemenea, n imposibilitatea aplicrii msurilor menionate, sincronizarea nfloritului se mai poate realiza i prin nsmnarea la epoci diferite a formelor parentale precum i prin folosirea polenului conservat. Alegerea plantelor, a inflorescenelor i a florilor n vederea hibridrii trebuie fcut cu grij. Alegerea plantelor din cadrul formelor parentale, se face urmrind ca s fie sntoase, bine dezvoltate i s exteriorizeze ct mai pronunat caracterele i nsuirile valoroase specifice fiecrui genitor n parte. 30

Alegerea inflorescenelor-n cadrul unei plante se face astfel: spicul principal la cereale, inflorescenele bazale la leguminoase, calathidiul principal la floarea soarelui etc. Toate aceste inflorescene s fie bine dezvoltate i s reprezinte caracteristica de baz a formei parentale respective. Alegerea florilor din cadrul fiecrei inflorescene se face difereniat, astfel: florile din treimea mijlocie a spicului, florile de la baza racemului etc. Restul florilor din cadrul inflorescenelor vor fi eliminate cu ocazia lucrrilor de toaletare. Castrarea, polenizarea controlat i izolarea inflorescenelor sunt operaii obligatorii n tehnica hibridrii i se consider reuite numai atunci cnd s-a exclus autopolenizarea, iar polenizarea strin, nedorit, a fost eliminat. naintea castrrii, de fiecare dat, plantele genitorului matern sunt supuse unei toaletri care vizeaz eliminarea inflorescenelor nedezvoltate sau a celor necorespunztoare, eliminarea florilor sterile, a celor nedezvoltate i a florilor nflorite. Se elimin i anumite pri din aparatul vegetativ care mpiedic efectuarea castrrii n bune condiii (vrfuri de glume i palei, frunze etc.). Castrarea propriu-zis const n eliminarea componentelor sexuale mascule din florile genitorului matern naintea ajungerii lor la maturitate. Ca regul general, castrarea se face dimineaa, dup ce se ridic roua, sau seara, pentru a evita cldurile din timpul zilei sau vnturile prea puternice. Anterele trebuie eliminate ntregi, iar gineceul trebuie s rmn intact i nevtmat. n lucrrile de ameliorare castrarea se face manual, n timp ce n sistemul producerii i nmulirii seminelor se folosete castrarea genetic (androsterilitatea). Imediat dup castrare se execut izolarea florilor sau a inflorescenelor cu ajutorul izolatorilor din pnz sau din hrtie de pergament. Izolatorii sunt de diferite mrimi i forme, dar toi trebuie s asigure o izolare perfect, s fie uori i rezisteni la aciunea factorilor externi. Polenizarea-se poate executa forat, liber sau semiliber. Polenizarea forat-const n depunerea polenului proaspt sau conservat, colectat de la forma patern, pe stigmatele florilor castrate ale formei materne. n acest caz izolarea inflorescenelor este obligatorie, att la genitorul matern ct i la genitorul patern, cu scopul de a cunoate precis ambii parteneri n realizarea hibridului. Polenizarea cuprinde dou etape: etapa recoltrii polenului i etapa polenizrii propriu-zise. Colectarea polenului se face sub form de grunciori de polen (porumb, secar etc.) sau sub form de antere ntregi (gru, orz, ovz etc.). Tehnica polenizrii forate (dup ce s-a realizat proba germinaiei) const n ridicarea izolatorului de pe inflorescenele sau florile castrate i apoi n depunerea polenului pe stigmatul florii castrate. Depunerea polenului se face cu ajutorul unei pensule fine, penset sau cu o spatul subire ori cu aparate speciale dup sistemul pulverizatorului (la porumb). Imediat dup polenizare se instaleaz din nou izolatorul pe care se noteaz denumirea formei paterne, data polenizrii i numele executantului. Polenizarea liber-se realizeaz prin polenizarea florilor castrate ale plantelor materne, neizolate, cu polenul plantelor paterne, adus pe cale natural. n cazul plantelor hermafrodite se ndeprteaz staminele din florile plantelor materne, la plantele unisexuat monoice se castreaz inflorescenele mascule, iar la cele unisexuat dioice se elimin toate plantele mascule din forma matern. La polenizarea liber se cunoate numai genitorul 31

matern, n timp ce genitorul patern este anonim. Aceast form de polenizare, ntlnit mai mult n sistemul producerii i nmulirii seminelor, asigur cel mai mare procent de fecunditate i se obin forme hibride cu vitalitate sporit. La polenizarea forat fecunditatea este cuprins ntre 525 % iar la polenizarea liber valorile ajung la 5075%. Polenizarea semiliber (semiforat) const n introducerea sub izolatorul genitorului matern (castrat) a inflorescenelor ntregi provenite de la genitorul patern. Aici polenizarea are loc liber, dar numai cu polenul genitorului patern prestabilit. Se cunosc deci ambele forme parentale din care provine hibridul respectiv. n cele mai multe cazuri, pentru ca inflorescenele formei paterne s nu se distrug, tulpina acestora se introduce ntr-o eprubet cu ap i se fixeaz pe un suport lng genitorul matern. Se mai poate proceda i la nsmnarea genitorului patern lng genitorul matern favorizndu-se operaiile necesare unei polenizri semilibere. ~n cele mai multe cazuri, pentru ca inflorescen]ele formei paterne s\ nu se distrug\, tulpina acestora se introduce `ntr-o eprubet\ cu ap\ [i se fixeaz\ pe un suport lng\ genitorul matern. Se mai poate proceda [i la `ns\mn]area genitorului patern lng\ genitorul matern favorizndu-se opera]iile necesare unei poleniz\ri semilibere. Dac este necesar, sub acelai izolator pot fi introduse inflorescene de la mai multe plante din forma patern. Este important de reinut c polenizarea este liber, stigmatul matern manifestndu-i selectivitatea dorit n procesul fecundrii, dar numai cu polenul genitorului patern cunoscut. Rezultatele acestei metode sunt asemntoare cu rezultatele metodei de polenizare liber. n lucrrile de hibridare polenizarea se face n momentul cnd stigmatele manifest cea mai mare receptivitate pentru polen, iar polenul folosit nu i-a pierdut viabilitatea. Pentru aceasta, la fiecare specie trebuie s cunoatem durata viabilitii stigmatelor i a polenului. Viabilitatea stigmatelor este foarte mic la autogame (datorit autopolenizrii) i mai mare la alogame (mpiedicnd consangvinizarea). Receptivitatea maxim a stigmatelor este la cteva zile dup nflorit i scade treptat pe msura trecerii timpului. Viabilitatea polenului este mai scurt comparativ cu viabilitatea stigmatelor i se prezint cu valori maxime n primele zile de la nflorit, dup care scade treptat.

Folosirea hibrizilor Aa dup cum s-a menionat la definirea hibridrii sexuate, produsul nou obinut, denumit hibrid, ntrunete toat bogia de posibiliti ereditare ale formelor parentale. Hibridul, prin heterozigoia maxim nregistrat n F1 manifest un pronunat efect heterozis cu implicaii majore n practica agricol (este cazul hibrizilor comerciali de la plantele alogame productoare de semine: porumb, sorg, floarea soarelui etc.). n generaiile segregante, F2, F3, ....Fn, hibrizi sexuai nu mai prezint interes pentru practica agricol ci, pentru studiile de genetic i pentru activitatea de ameliorare. Hibrizii sexuai se utilizeaz: 1. Pentru practica agricol-hibrizii comerciali, n generaia F1 prezint intensitatea maxim a heterozisului. Heterozisul sau vigoarea hibrid implic superioritatea hibrizilor din F1 fa de ambele forme parentale i nu se poate confunda cu dominana total 32

(hibridul poate fi egal cu unul din prini) ori cu dominana parial (hibridul se apropie de unul dintre prini). Generaia F1 a hibrizilor, pentru lucrrile de ameliorare, nu prezint importan. Aceasta se datoreaz uniformitii pronunate a hibrizilor din F1, provocat de starea de heterozigoie maxim. Mai precizm c intensitatea heterozisului se difereniaz i n funcie de ataamentul speciei la alogamie. Astfel, la porumb boabe, specia cu ataament maxim la alogamie (autogamia deine o pondere foarte redus i numai n anumite condiii vitrege), prin autopolenizare forat-practicat la obinerea liniilor consangvinizate homozigote plantele sufer puternic i, tocmai din acest motiv, atunci cnd sunt lsate s fie polenizate liber (hibrizii F1) sunt foarte recunosctoare printr-un efect heterozis maxim. Nu acelai lucru se observ la hibrizii de la specia bob alimentar (Vicia faba, var. major L.) care prezint 50% alogamie i 50% autogamie. Consangvinizate, formele parentale de bob alimentar realizeaz hibrizi sexuai cu efect heterozis minim n F1; aceasta deoarece plantele suport bine i autopolenizarea (autogamia). O a doua precizare pentru hibrizii sexuai se refer la modul de manifestare a fenomenului heterozis n F1. Astfel, la hibrizii alogamelor (ex. porumbul) efectul heterozis se manifest total i uniform la toi indivizii. Prin aceasta nelegem c heterozisul afecteaz morfologia, fiziologia i metabolismul plantei n mod egal pentru toi indivizii cultivai n F1. De aici rezult marea uniformitate a acestora. Dimpotriv, la hibrizii autogamelor (ex, grul) efectul heterozis din F1 se manifest unilateral i individual, rezultnd astfel un efect heterozis mediu i cumulat prin contribuia specific a fiecrui individ. Prin aceasta nelegem c hibrizii de gru prezint n F1 efect heterozis difereniat pentru unul sau mai multe caractere/nsuiri, dar care nu se regsesc identic la restul indivizilor. Vom avea plante cu efect heterozis la mrimea spicului, altele la greutatea boabelor, altele la talie .a.m.d. Valoarea intensitii heterozisului este valoare medie ponderat, fiecare individ aducndu-i contribuia ntr-o msur mai mare sau mai mic. Din aceste considerente, hibrizii autogamelor prezint n F1 efect heterozis mai mic n comparaie cu hibrizii alogamelor. Studiul i determinarea intensitii heterozisului se realizeaz la aplicaiile practice. 2. Pentru ameliorarea plantelor- hibrizii prezint interes numai ncepnd cu generaia F2, pn n F3-4, adic numai n generaiile segregante. Prin segregare exist posibilitatea obinerii unei variabiliti ridicate pe care amelioratorii pot aciona n vederea identificrii formelor transgresive valoroase. Segregarea n raportul de 3 : 1 (1 : 2 : 1) pentru aceeai nsuire/caracter controlat monogenic ne d imaginea numrului imens al combinaiilor ce se pot obine la fiecare generaie. Clasificarea metodelor de hibridare Metodele de hibridare se clasific astfel: Dup numrul genitorilor participani: - Hibridare simpl-unde particip numai dou forme parentale (A i B) reprezentate prin soiuri sau linii consangvinizate. Aici distingem: -hibridarea direct; -hibridarea reciproc; -hibridarea repetat, retroncruciarea (backcross); -hibridarea ciclic; -hibridarea dialel. 33

- Hibridarea complex-unde particip mai mult de dou forme parentale. Acest tip de hibridri permite ntrunirea ntr-un singur hibrid a genelor favorabile de la mai multe forme parentale. n aceast categorie avem: -hibridarea n dou etape cnd se obin H.T. i H.D.; -hibridarea n mai multe etape cnd se obin soiurile sintetice; -hibridarea n mas (de tip polycross). Dup gradul de nrudire a genitorilor participani: - Hibridarea apropiat (intraspecific) - Hibridarea ndeprtat-la care genitorii sunt ndeprtai din punct de vedere genetic. Aici distingem hibridri interspecifice (genitorii aparin aceluiai gen) i hibridri intergenerice (genitorii aparin aceleiai familii). Hibridarea simpl\ direct\ - este de tipul A x B, `n care ambii genitori prezint\ aproximativ aceea[i valoare. Acetia vor aduce contribu]ii egale `n viitorul hibrid simplu. Hibridarea simpl\ direct\ se practic\ frecvent atunci cnd unele caracteristici ale genitorului femel (A) sunt condi]ionate citoplasmatic [i se manifest\ dominant la noul hibrid simplu. La autogame, asemenea metode de hibridare sunt folosite la crearea de variabilitate genetic\, mai ales `n genera]iile segregante unde pot fi identificate genotipuri noi. La alogame hibridarea simpl\ direct\ dintre liniile consangvinizate ofer\ posibilitatea determin\rii valorilor efectului heterozis, `n F1, asupra componentelor principale ale capacit\]ii de produc]ie. Hibridarea simpl\ reciproc\ - const n schimbarea genitorilor `ntre ei pentru fiecare combina]ie hibrid\ `n parte, adic\ este de tipul B x A. Acest tip de hibridare se practic\ la studiile de genetic\ [i mai ales ca metod\ specific\ pentru `nl\turarea deficien]elor care se `ntlnesc la hibrid\rile `ndep\rtate, `ntruct aici apar frecvent hibrizi sterili. De exemplu, la gru, speciile cu num\r mai mare de cromozomi vor fi folosite ca parteneri femeli [i nu ca parteneri masculi, dup\ cum la cartof, combina]ia simpl\ direct\ dintre specia Solanum tuberosum (A) x Solanum acaule (B) nu reu[e[te, `n timp ce inversarea partenerilor, Solanum acaule (B) x Solanum tuberosum (A), asigur\ hibrizi fertili, deoarece tubul polenic la Solanum tuberosum este mai lung [i reu[e[te s\ ajung\ la ovulul partenerului femel de la Solanum acaule. Hibridarea simpl\ repetat\, retro`ncruci[area sau hibridarea de tip backcross se folose[te, mai ales pentru ameliorarea `nsu[irilor de rezisten]\ la soiurile / hibrizii foarte productivi. La hibridarea simpl\ direct\ sau reciproc\ aportul genitorilor la `mbun\t\]irea zestrei ereditare a hibridului este acela[i. n cazul hibrid\rilor repetate este posibil ca s\ se transmit\ o `nsu[ire valoroas\ la un soi foarte productiv, dar care nu posed\ aceast\ `nsu[ire valoroas\. ~n acest caz forma parental\ ce posed\ `nsu[irea valoroas\ poart\ denumirea de donator (donor) [i va fi folosit numai ca mam\. Forma parental\ foarte productiv\, dar deficitar\ `n acea `nsu[ire se nume[te recurent sau primitor se va folosi numai ca tat\ . Prin hibridarea repetat\ (retro`ncruci[are) a unui hibrid F1, cu p\rintele recurent (B), folosind la fiecare hibridare numai indivizi asemntori cu p\rintele recurent, vom ob]ine, dup\ 56 hibrid\ri succesive, un hibrid care se aseam\n\ `n totalitate cu forma parental\ B(recurent\). Acesta va poseda [i jum\tate din acea `nsu[ire valoroas\ transmis\ de p\rintele donator (A) la prima hibridare. Dup cele 56 retro`ncruci[\ri ale hibrizilor F1

34

cu p\rintele recurent, cnd avem `n noul hibrid peste 98% din `nsu[irile valoroase ale recurentului, este obligatorie autofecundarea. Aceasta va asigura ob]inerea descenden]ilor ce posed\ fixat\ `n totalitate la p\rintele recurent [i `nsu[irea valoroas\ de la donator. La plantele autogame metoda hibrid\rilor repetate (backcross), d\ rezultate bune, atunci cnd se urm\re[te ob]inerea unei anumite rezisten]e la boli. Pentru aceasta, se folose[te ca p\rinte donator soiul rezistent la boala respectiv\, dar nevaloros sub ca `nsu[iri agronomice. Soiul recurent va fi soiul agronomic valoros, dar slab rezistent la boala respectiv\. Pentru repetarea hibrid\rilor, la fiecare genera]ie F1, vor fi alese plante care se aseam\n\ fenotipic mai mult cu p\rintele recurent, dar care posed\ jum\tate din genele care controleaz\ rezisten]a la boala specific\ donatorului. Singurul dezavantaj al metodei de hibridare repetat\ este acela c\ nu permite acumularea genelor valoroase de la mai multe forme parentale. Aceast\ metod\ trebuie repetat\ separat cu fiecare soi `n parte i necesit\ timp `ndelungat. Hibridarea ciclic\ - (top-cross) const\ `n hibridarea succesiv\ a tuturor formelor din colec]ie (A, B, C, D etc.), cu o form\ parental\ valoroas\ [i cunoscut\, numit\ TESTER (T) sau analizator. Testerul va fi forma mam\, de regul\ HS, iar formele A, B, C, D, etc. sunt forme homozigote, de regul\ linii consangvinizate. ~n urma hibrid\rii vor rezulta hibrizii triliniari HT. Hibridarea ciclic\ se folose[te, de regul\, pentru testarea preliminar\ a noilor linii consangvinizate prin determinarea capacit\]ii combinative generale (C.C.G.). Corela]ia pozitiv\ (r = 0,530,90) dintre C.C.G. [i capacitatea de combinare a liniilor consangvinizate, `n viitorii hibrizi simpli, a determinat, `ntr-o etap\ ini]ial\, folosirea hibrid\rii ciclice pentru testarea [i selec]ia noilor linii consangvinizate la porumb. Ulterior, metoda s-a extins [i la alte forme parentale [i la alte specii de plante cultivate. Formele din colec]ie se vor folosi numai ca tat\ iar testerul numai ca mam\. Vor rezulta astfel hibrizii triliniari: T x A; T x B; T x C; T x D etc. Pentru a verifica fiecare combina]ie `n parte (capacitate de produc]ie, efect heterozis etc.), anul viitor, `n cmpul de culturi comparative, se seaman separat ficare combina]ie hibrid\, `mpreun\ cu martorul (testerul). Combina]iile care asigur\ productivitate mare (efect heterozis maxim `n F1) comparativ cu testerul, se consider\ c\ posed\ CAPACITATE COMBINATIV| GENERAL| (C.C.G.) ridicat\. Acestea vor fi re]inute ca forme parentale pentru viitoarele hibrid\ri. Hibridarea dialel\ - const\ `n hibridarea fiec\rei forme parentale cu toate celelalte forme care constituie grupul liniilor consangvinizate, a soiurilor sau liniilor ce urmeaz\ a fi testate. La aceast\ metod\ de hibridare, fiecare form\ parental\ devine succesiv forma matern\ pentru toate celelalte linii, dar `n acela[i timp, devine [i forma patern\ pentru acelea[i linii. De exemplu, `ntr-un grup de 4 linii A, B, C, D `n func]ie de pozi]ia pe care o ocup\ fiecare form\ parental\, hibridarea dialel\ poate fi: - hibridare dialel\ direct\: A x B; A x C; A x D; B x C; B x D; C x D. -hibridare dialel\ reciproc\: B x A; C x A; D x A; C x B; D x B; D x C; - hibridarea dialel\ total\( direct\ + reciproc\): Hibridarea dialel\ se folose[te pentru alegerea formelor parentale dup\ CAPACITATEA COMBINATIV| SPECIFIC| (C.C.S.), care se exprim\ prin valoarea maxim\ a capacit\]ii de produc]ie sau a altor `nsu[iri ale hibridului `n F1, rezultat prin `ncruci[area unei forme parentale cu fiecare form\ din grupul dialel. 35

 Hibridarea `n dou\ etape urm\re[te ob]inerea hibrizilor triliniari [i a hibrizilor dubli pentru a fi folosi]i `n activitatea productiv\, dar [i pentru scopurile amelior\rii plantelor. Hibridul triliniar (HT) se ob]ine prin `ncruci[area unui hibrid simplu (HS) cu o linie consangvinizat\ dup\ formula (A x B) x C. Hibridul dublu (HD) se ob]ine prin `ncruci[area a doi hibrizi simpli dup\ formula (A x B) x (C x D). Hibridarea `n mai multe etape se `nregistreaz\ la soiurile sintetice, dup urm\toarele scheme: - `ncruci[area dintre un hibrid dublu [i un hibrid simplu [ (A x B) x (C x D) ] x (E x F); - `ncruci[area dintre doi hibrizi dubli [(A x B) x (C x D)] x [(E x F) x (G x H)]; - `ncruci[area dintre un hibrid dublu [i un hibrid triliar [(A x B) x (C x D)] x [(E x F) x G]; - polenizarea formei materne cu amestec de polen de la mai multe forme parentale. Soiurile sintetice prezint\ avantajul c\ `mbin\ `ntr-o popula]ie hibrid\ genele favorabile existente la mai multe forme parentale. Prin aceasta, poten]ialul lor productiv este mai pu]in fluctuant deoarece `nsu[irile de rezisten]e valoroase prezint\ o manifestare mai activ\. Fiind genotipuri complexe, soiurile sintetice sunt tot mai puternic dependente de asigurarea unor condi]ii optime de vegeta]ie. La soiurile sintetice, al\turi de genele favorabile, fiecare p\rinte aduce [i gene mai pu]in favorabile sau chiar nefavorabile, mai ales `nsu[iri controlate de gene recesive. De aceea, se recomand\ ca dup\ un anumit num\r de hibrid\ri succesive, s\ se practice autopolenizarea [i eliminarea plantelor homozigote cu caractere / `nsu[iri nefavorabile. - Hibridarea `n mas\ (polycross) se folose[te la plantele alogame [i const\ `n `ns\mn]area mai multor genotipuri, sub form\ randomizat\, `n mai multe repeti]ii, dup\ o anumit\ schem\ stabilit\ pe cale experimental\ [i polenizarea liber\ a acestora.
SCHEMA RANDOMIZ|RII A OPT LINII FOLOSITE LA HIBRIDAREA ~N MAS| (POLYCROSS) A B C D E F B C D E F G C D E F G H D E F G H A E F G H A B F G H A B C G H A B C D H A B C D E

36

G H

H A

A B

B C

C D

D E

E F

F G

~n acest caz, fiecare linie, ocup\ o pondere egal\ `n acest amestec (12,5%), dar `n mod obi[nuit fiecare linie constituent\ particip\ `n propor]ii diferite `n func]ie de capacitatea combinativ\ general\ [i specific\. De asemenea, propor]ia liniilor se stabile[te [i `n func]ie de caracteristicile sau `nsu[irile pe care dorim a le ob]ine `n hibridul rezultat. Metoda hibrid\rilor `n mas\ se ntrebuin]eaz\ pe scar\ larg\ la ameliorarea plantelor furajere perene, a sfeclei de zah\r etc. Hibridarea `ndep\rtat\ - interspecific\ [i intergeneric\ - se bazeaz\ pe folosirea de forme parentale `ndep\rtate din punct de vedere genetic. Astfel, la hibrid\rile interspecifice (dintre specii) se impune ca speciile respective s\ apar]in\ aceluia[i gen. La hibrid\rile intergenerice (dintre genuri), este necesar ca genurile s\ apa]in\ aceleia[i familii. Pn\ `n prezent nu s-au `nregistrat hibrizi fertili dintre plante ce apar]in de familii diferite. La familia Poaceae (Gramineae), genurile: Triticum, Aegilops, Secale, Haynaldia [i Agropyron se `ncruci[eaz\ `ntre ele (intergeneric) dar [i `ntre speciile aceluia[i gen (interspecific). De asemenea, se `ncruci[eaz\ intergeneric [i interspecific plantele din familiile: Solanaceae, Cruciferae, Rosaceae, Salicaceae, Oenotheraceae, Liliaceae, Umbeliferae [i Leguminosae. Hibridarea `ndep\rtat\ - interspecific\ sau intergeneric\ - se folose[te `n mod deosebit pentru fixarea pe genotipurile ameliorate [i foarte productive a `nsu[irilor de rezisten]\ la stresurile climatice, fitopatogenice [i de intensivizare. Din punct de vedere al posibilit\]ilor de fecundare [i al dezvolt\rii hibrizilor interspecifici, nu se poate face o delimitare strict\ `ntre hibridarea apropiat\ [i cea `ndep\rtat\. ~n unele cazuri speciile se `ncruci[eaz\ greu, dar hibrizii ob]inu]i sunt fertili, dup\ cum `n alte cazuri hibridarea se face u[or dar hibrizii ob]inu]i sunt sterili sau se dezvolt\ foarte greu. Aceast\ diferen]\ genetic\ pronun]at\ dintre formele parentale determin\ ca `n hibrid\rile `ndep\rtate s\ apar\ dou\ mari dificult\]i: a-intersterilitatea formelor parentale b-sterilitatea hibrizilor `n F1. a. Intersterilitatea formelor parentale este determinat\ de: constitu]ia genetic\, `nsu[irile morfologice, `nsu[irile fiziologice [i condi]iile de mediu. Aceste deosebiri provoac\ tulbur\ri `n procesul fecunda]iei, `n formarea semin]elor [i `n germina]ia acestora, ceea ce face dificil\ ob]inerea hibridului. Exist\ astfel cazuri cnd polenul nu germineaz\ pe stigmat, cnd polenul germineaz\ dar tubul polenic nu poate str\bate stigmatul, sau str\bate stigmatul dar nu str\bate stilul pentru a ajunge la ovul. De asemenea, sunt cazuri `n care gametul mascul ajunge la ovul dar nu l fecundeaz\, sau chiar dac\ l fecundeaz\ nu se formeaz\ zigotul, iar uneori zigotul format se dezvolt\ slab [i nu ajunge la maturitate. Toate aceste aspecte negative se datoreaz\ fie num\rului diferit de cromozomi, fie calit\]ii diferite a genoamelor celor dou\ forme parentale.

37

De asemenea [i condi]iile de mediu temperatura [i umiditatea aerului pe durata poleniz\rii fecund\rii pot provoca mari greut\]i `n reu[ita hibrid\rilor `ndep\rtate. Astfel, unele genuri se hibrideaz\ mai u[or pe timp uscat [i cald (Triticum, Secale), `n timp ce altele pe timp mai umed [i r\coros (Avena, Brassica). Pentru `nl\turarea intersterilit\]ii formelor parentale se folosesc urm\toarele metode: -hibridarea reciproc\ - se practic\ atunci cnd una din formele parentale posed\ un sistem de incompatibilitate care inhib\ germina]ia polenului celeilalte forme parentale. De exemplu, la gru speciile cu num\r mare de cromozomi se folosesc drept partener femel [i nu partener mascul. De asemenea, la cartof hibridarea de tip Solanum tuberosum x Solanum acaule nu reu[e[te, `n timp de hibridarea de tip Solanum acaule x Solanum tuberosum formeaz\ tubul polinic lung [i reu[e[te fecundarea ovulului partenerului femel; -folosirea amestecului de polen pentru polenizarea formei mam\ stimuleaz\ stigmatul [i `nlesne[te germinarea polenului pentru ca apoi acesta s\ p\trund\ prin stigmat [i stil ajungnd astfel la ovul; -folosirea stimulatorilor de cre[tere acidul giberelinic care aplicat pe stigmatul matern favorizeaz\ germinarea polenului, cre[terea tubului polinic [i p\trunderea prin stigmat, stil, pn\ la oosfer\; -folosirea embrioculturii care const\ `n transplantarea embrionului, deta[at de pe endosperm, imediat dup\ formarea sa, pe medii de cultur\ speciale. Se elimin\ astfel incompatibilitatea manifestat\ la unele specii dintre embrionul diploid [i endospermul triploid. Embriocultura a fost folosit\ cu succes la hibrizii dintre Hordeum sativum x Hordeum bulbosum precum [i la hibridarea interspecific\ din genul Solanum. ~n mod similar, prin transplantarea embrionilor de gru pe endosperm de secar\ s-au ob]inut indivizi care au fost folosi]i ca parteneri femeli la hibridarea cu secara [i ob]inerea triticalelor; -dublarea sau `njum\t\]irea num\rului de cromozomi la una din formele parentale pentru realizarea egalit\]ii garniturilor cromozomale pentru ambii parteneri. Astfel, dublarea cromozomilor s-a realizat la Lotus tenuis (2n = 12+ colchicinizare=24) x Lotus corniculatus (2n = 24), pentru a realiza egalizarea cromozomilor cu partenerul mascul [i ob]inerea de hibrizi fertili; -folosirea uneia sau a ambelor forme parentale `n stare hibrid\. De multe ori, hibridarea reu[e[te mai u[or dac\ planta mam\ sau ambele forme parentale sunt hibrizi `n F1. Pentru aceasta se realizeaz\ `n prealabil hibridarea `ntre variet\]ile sau tipurile ecologice din cadrul aceleia[i specii [i apoi hibridarea dintre speciile aceluia[i gen. De asemenea, la plantele perene hibridarea reu[e[te mai bine atunci cnd se folosesc organisme mai tinere la prima `nflorire; -folosirea intermediarilor atunci cnd se proiecteaz\ hibrid\ri `ntre forme parentale mult prea `ndep\rtate genetic. ~n acest caz se `ncepe cu hibridarea unui p\rinte (A) cu o specie `nrudit\ cu ambii p\rin]i (C) [i apoi hibridul F1 (A x C) se hibrideaz\ din nou cu cel\lalt p\rinte (B); -cultivarea speciilor s\lbatice pe agrofonduri superioare `nlesne[te hibridarea mai u[oar\ a acestora cu speciile cultivate. Reprezint\ a doua mare dificultate `n cadrul hibrid\rilor [i este produs\ de imposibilitatea `mperecherii cromozomilor de la cei doi game]i parentali sau de
b - Sterilitatea hibrizilor `n F1

38

repartizarea neregulat\ a cromozomilor la cei doi poli ai fusului nuclear `n timpul meiozei. ~n func]ie de gradul de `nrudire dintre specii (genuri) [i gradul de omologie a genomurilor parentale, sterilitatea hibrizilor `n F1 se prezint\ astfel: -genomurile sunt omologe, dar num\rul de cromozomi este diferit:
Triticum aestivum genom ABD 2n = 42 Triticum durum genom AB 2n = 28

F1- par]ial steril

-genomurile sunt neomologe, dar num\rul de cromozomi este egal:

Triticum durum genom AB 2n = 28 Aegilops ventricosa genom DMV 2n = 28

F1 par]ial steril -genomurile sunt neomologe [i num\rul de cromozomi diferit: Triticum aestivum Aegilops cylindrica genom ABD 2n = 42 genom DC 2n = 28 X

F1-total steril -genomurile sunt omologe [i num\rul de cromozomi este egal:

Triticum aestivum ssp. spelta genom ABD 2n = 42

Triticum aestivum ssp. vulgare genom ABD 2n = 42

F1 total fertil

39

Nu exist\ nici o corela]ie `ntre greutatea efectu\rii sau reu[ita hibrid\rii [i fertilitatea / sterilitatea hibrizilor `n F1. Din punct de vedere practic, ]innd seama de gradul de fertilitate al hibrizilor `nd\p\rta]i `n F1, distingem dou\ grupe: prima grup\, a hibrizilor par]ial fertili care se pot `nmul]i prin autopolenizare, `ncruci[are `ntre hibrizi sau retro`ncruci[area cu p\rin]ii, iar a doua grup\, hibrizii sterili care pot fi reprodu[i numai pe cale vegetativ\. Reproducerea sexuat\ a hibrizilor `ndep\rta]i, sterili, se poate realiza numai prin ploidizare. ~nl\turarea sterilit\]ii hibrizilor `n F1 se poate realiza prin folosirea urm\toarelor metode: -retro`ncruci[area (backcross) hibrizilor `n F1 cu unul din formele parentale care au participat la realizarea hibridului respectiv. Se poate folosi ca partener fie forma mam\ (ex. A3xB) care se soldeaz\ cu eliminarea treptat\ a cromozomilor paterni [i refacerea total\ a genomului matern sau uneori pot rezulta hibrizi intermediari cu importan]\ deosebit\ pentru lucr\rile de ameliorare. De asemenea, se poate folosi ca partener forma tat\ (ex. AxB3), caz `n care genomul patern se reface complet, realizndu-se o adev\rat\ transplantare a nucleului unei specii `n citoplasma speciei materne. Ace[ti hibrizi, foarte asem\n\tori formei paterne vor prezenta caracterele [i `nsu[irile formei materne, devenind astfel hibrizi alloplasmatici. Este cazul hibridului de gru x secar\ (triticale) care se aseam\n\ cu planta de secar\, dar cei 14 cromozomi ai secarei sunt `ngloba]i `n citoplasma grului. Refacerea fertilit\]ii acestor hibrizi `n F1 se poate realiza chiar [i printr-un singur backcross. -dublarea num\rului de cromozomi la hibrizii F1 va restabili omologia genomului [i egalizarea cromozomilor care vor da na[tere la game]i fertili. ~n aceast\ situa]ie, prin colchicinizarea semin]elor hibride, a embrionilor, a plantulelor `n F1, a l\starilor tineri sau a vrfurilor de cre[tere, se asigur\ desf\[urarea normal\ a meiozei, la fel ca `n cazul speciilor diploide [i prin aceasta ob]inem allopoliploizi (amfidiploizi) fertili. Se cunosc, `n prezent, amfidiploizi `ntre diferite specii ale genurilor: Triticum, Brassica, Rosa, Fragaria, Rubus, Gosypium, Nicotiana, Solanum, Lactuca, Phleum, Prunus precum [i `ntre specii care apar]in unor genuri diferite ca: Triticum x Aegilops; Triticum x Secale; Haynaldia x Triticum; Aegilops x Haynaldia; Triticum x Agropyron; Raphanus x Brassica, etc. -folosirea ca intermediar o a treia specie cum este cazul hibrizilor din F1 dintre gru x pir. Cnd s-a `ncruci[at hibridul F1 gru x pir cu grul, procentul de plante fertile a fost de numai 1%, `n timp ce prin `ncruci[area hibridului F1 gru x pir cu secara procentul plantelor fertile a fost `n F1 de 50%, iar `n F2 de 75%. -cultivarea hibrizilor F1 sterili pe agrofonduri superioare poate determina apari]ia unor forme cu o fertilitate diferen]iat\. -`ncruci[area `ntre ei a hibrizilor sterili `n F1. ~n hibrid\rile `ndep\rtate, o mare importan]\ o prezint\ alegerea , `n cuno[tin]\ de cauz\, a formelor parentale. Aceasta este cu att mai important\ cu ct se [tie c\ de multe ori descenden]ele amfidiploide nu mai segreg\ [i deci unele `nsu[iri nedorite, introduse din neglijen]\, nu mai pot fi separate. Acela[i lucru trebuie respectat [i la retro`ncruci[area hibrizilor F1 cu una dintre formele parentale ini]iale. Faptul c\ fertilitatea amfidiploizilor `n descenden]\ este fluctuant\, determin\ ca ace[tia s\ nu capete o extindere mare `n produc]ie, fiind folosi]i mai mult `n tehnica amelior\rii plantelor.

40

3.2.1.2. Consangvinizarea Consangvinizarea reprezint autofecundarea forat a plantelor alogame care, n mod obinuit se fecundeaz cu polen strin. Se consider consangvinizare, autofecundarea forat a plantelor alogame unisexuat monoice (porumbul), a plantelor alogame cu flori hermafrodite (secara, floarea soarelui etc.) precum i ncruciarea indivizilor nrudii la plantele alogame unisexuat dioice (cnepa). La autogame, autopolenizarea reprezint un fenomen biologic normal i natural, ca rezultat al adaptrii filogenetice i fr consecine negative asupra organismului , la alogame, unde reproducerea se face cu participarea polenului strin, autofecundarea reprezint un fenomen anormal, cu repercusiuni negative asupra organismului. Rezultatul consangvinizrii plantelor alogame sunt liniile consangvinizate. Aceste linii sunt homozigote (ca i liniile pure de la autogame), cu o larg folosin n hibridare pentru obinerea i exploatarea fenomenului de heterozis (vigoare hibrid), cu cea mai mare intensitate. Diferitele generaii consangvine sunt notate cu simbolurile C0, C1,...Cn. Importana consangvinizrii Principalele avantaje ale consangvinizrii ca metod de ameliorare sunt: - reprezint, pn n prezent, calea cea mai important de cretere a capacitii de producie la plantele alogame. Prin autopolenizarea alogamelor un numr de 67 generaii (C6 sau C7) se obin liniile consangvinizate, cu o stare de homozigoie de peste 98%. Prin folosirea acestora la hibridare, se obine la hibrizii F1 un efect heterozis maxim asupra componentelor de baz ale capacitii de producie; - reprezint metoda de baz n crearea de material iniial nou pentru ameliorare. Acest material nou se obine prin cultivarea hibrizilor n generaiile segregante (F2....F5). Singur, consangvinizarea, nu contribuie la crearea de noi forme valoroase deoarece efectele ei biologice determin unele consecine negative asupra genotipului. Completarea consangvinizrii cu hibridarea pentru obinerea de hibrizi, determin n final, indirect, posibiliti reale i contribuii importante n procesul de ameliorare. Reacia plantelor la consangvinizare este foarte diferit, fiind totui condiionat de fidelitatea fiecrui genotip fa de alogamie sau de autogamie. Astfel porumbul, la care alogamia deine ponderea cea mai mare, reacia la consangvinizare este foarte puternic i de aici rezult i efectul heterozis maxim. La sfecla de zahr, la cnep i n special la dovleac, unde procentul de autogamie este mare, reacia la consangvinizare este mic i de aici efectul heterozis al hibrizilor n F1 este foarte mic. Efectele consangvinizrii i baza lor genetic Consangvinizarea plantelor alogame se exteriorizeaz n fenotip prin trei efecte principale i anume: a. Reducerea vitalitii plantelor. b. Scderea variabilitii n cadrul liniilor consangvinizate. c. Desfacerea populaiei iniiale n biotipurile constituente. 3.2.1.2.a. Reducerea vitalitii plantelor-este foarte evident chiar de la prima autopolenizare i se manifest prin: 41

scderea vertiginoas a capacitii de producie, determinat de reducerea valorii componentelor ei de baz; - creterea ponderii plantelor slab dezvoltate, a celor nedezvoltate sau a celor cu defecte morfologice i fiziologice; - scderea vertiginoas a taliei plantelor, a numrului de frunze pe plant, a mrimii frunzelor i, de aici, scderea valorilor suprafeei foliare, a intensitii fotosintetice, a randamentului fotosintetic etc.; - apariia de plante albinotice, sectoare internervurale pe frunze cu deficiene clorofiliene, anomalii florale, etc.; - sensibilitate ridicat la boli, cdere, scuturare. Reducerea vitalitii se manifest mai puternic n primele generaii de consangvinizare, dup care la C7C10 se nregistreaz un minimum de consangvinizare, ceea ce nseamn c reducerea vitalitii la urmtoarele consangvinizri este foarte mic. Depresiunea prin consangvinizare se manifest la toate speciile alogame indiferent de gradul lor de autosterilitate, fiind n corelaie direct cu ponderea polenizrii plantelor cu polen strin (alogamie). Astfel, dac alogamia deine o pondere ridicat n totalul plantelor polenizate (cum e cazul la porumb), atunci i curba scderii vitalitii plantelor consangvinizate este mai abrupt, iar minimum de consangvinizare apare mai de timpuriu (la porumb dup C6C7 ). Dac dimpotriv alogamia deine o pondere mai redus (ex. dovleacul), curba scderii vitalitii este lent, iar minimum de consangvinizare se instaleaz mai trziu. Natura acestui fenomen poate fi `n]eleas\ dac\ lu\m `n considerare istoria evolu]iei plantelor alogame. Alogamia a men]inut `n popula]iile naturale o continu\ stare de heterozigo]ie, astfel `nct `n decursul evolu]iei, selec]ia natural\ a favorizat acumularea acelor gene care au fost capabile ca, `n stare heterozigot\ s\ produc\ genotipuri favorabile echilibrate. Trecerea acestor gene din stare heterozigot\ `n stare homozigot\ prin autopolenizare for]at\, se soldeaz\ cu deranjarea echilibrului genetic [i drept consecin]\ reducerea vitalit\]ii plantelor. De[i `nc\ nu este pe deplin elucidat, mecanismul genetic care produce aceast\ reducere a vitalit\]ii plantelor consangvinizate ar consta `n: - separarea `n homozigo]i a factorilor favorabili care ini]ial erau reuni]i `n heterozigo]i; - existen]a unui linkaj strns `ntre factorii favorabili [i unii factori nefavorabili, ceea ce face imposibil\ ob]inerea unui homozigot care s\ cumuleze numai factorii favorabili; - dispari]ia interac]iunilor de supradominan]\; - modificarea interac]iunilor de epistazie. S-a mai constatat c\ efectele negative ale autopoleniz\rii repetate a plantelor alogame se aseam\n\ foarte mult cu cele ale autopoleniz\rii indivizilor heterozigo]i de la plantele autogame. Prin aceast\ cre[tere continu\ a homozigo]iei [i sc\derea heterozigo]iei se explic\ [i reducerea vitalit\]ii plantelor consangvinizate. De asemenea s-a constatat c\ depresiunea de consangvinizare este opus\ fenomenului de heterozis (vigoare hibrid\), iar studiul rela]iei depresiune-heterozis demonstreaz\ o interdependen]\ genetic\ foarte strns\.

42

A[a se face c\ explicarea bazelor genetice ale sc\derii vitalit\]ii plantelor consangvinizate se explic\ prin elucidarea cauzelor care explic\ fenomenul de heterozis. Astfel, pn\ `n prezent, se accept\ unanim c\ vigoarea hibrid\ din F1 la hibrizi (efectul heterozis maxim) se datoreaz\ prezen]ei heterozigo]ilor pentru majoritatea genelor, deci a st\rii de heterozigo]ie total\. ~n mod analog, reducerea vitalit\]ii liniilor consangvinizate este consecin]a trecerii de la heterozigo]ie la homozigo]ie, `ndeosebi la homozigotarea factorilor favorabili recesivi. 3.2.1.2.b. Scderea variabilitii n cadrul liniilor consangvinizate Acest efect negativ se manifest prin uniformitatea fenotipic ridicat a indivizilor unei linii consangvinizate n generaii avansate de autopolenizare. Uniformitatea fenotipic ridicat este determinat de gradul ridicat de homozigoie i reducerea corespunztoare a heterozigoiei. Cre[terea homozigo]iei prin consangvinizarea plantelor alogame se realizeaz\ `n acela[i mod ca `n cazul autopoleniz\rii indivizilor heterozigo]i de la plantele autogame. Cu ct individul supus consangviniz\rii prezint\ o heterozigo]ie pentru mai mul]i factori, cu att ponderea indivizilor complet homozigo]i va fi mai mic\, mai ales `n primele genera]ii. Ulterior, `n genera]iile consangvine avansate (C7C8) ponderea homozigo]iei este dominant\, heterozigo]ia se prezint\ foarte redus. 3.2.1.2.c. Desfacerea populaiei iniiale n biotipurile constituente Reprezint efectul negativ care prezint cea mai mare importan pentru lucrrile de ameliorare i fr importan pentru activitatea de producie. Datorit acestui efect, consangvinizarea repetat a alogamelor permite izolarea genotipurilor homozigote valoroase cu importan pentru lucrrile de ameliorare. Numrul maxim de genotipuri homozigote ce se pot obine dintr-o plant consangvinizat se poate determina n funcie de numrul factorilor heterozigoi existeni iniial, naintea consangvinizrii folosind relaia: x = 2n n care: x = numrul genotipurilor homozigote iar n= numrul factorilor heterozigoi existeni nainte de consangvinizare. Trecerea factorilor dominani i recesivi n stare homozigot i gruparea lor n cele mai variate combinaii posibile, desfacerea materialului iniial supus consangvinizrii, atunci cnd posed numai o singur pereche de factori are loc dup urmtorul model:
Nr. gen. consang. HETEROZIGOIE (%)

C0 C1 C2 C3 C4 C5 C6 Aa Aa Aa Aa Aa Aa

Aa Aa Aa Aa Aa Aa aa aa aa aa aa aa

100,0 50,0 25,0 12,5 6,3 3,2 1,6

43

Nr. gen. consang.

HETEROZIGOIE (%)

C7

Aa

aa

0,8

Conform formulei de calcul x = 2n, pentru o singur\ pereche de factori, dup\ 7 autopoleniz\ri genotipul ini]ial heterozigot se va desface `n dou\ linii homozigote, net diferen]iate `ntre ele: o linie homozigot\ dominant\ [i o linie homozigot\ recesiv\. Asemenea genotipuri homozigote prezint\ deosebit\ importan]\ `n lucr\rile de ameliorare, `ntruct multe din ele reprezint\ genotipuri noi. Astfel, majoritatea genotipurilor-recesive prezint\ defec]iuni ca: nanism, deficien]e clorofiliene, debilitate, malforma]ii, sterilitate par]ial\ sau total\ etc. ~n acela[i timp, unele genotipuri homozigote-recesive pot prezenta caractere [i `nsu[iri valoroase pentru ameliorare ca: tulpina scurt\, rezisten]\ la c\dere (porumb [i sorg), tulpini erecte [i bogate `n frunze (trifoi), con]inut ridicat `n proteine (porumb), plante hermafrodite (cnep\), con]inut sc\zut `n alcaloizi (lupin), rezisten]\ la stresurile climatice [i fitopatogenice, precocitate etc. Aceste genotipuri homozigote-recesive pot fi recunoscute u[or [i eliminate / re]inute chiar din primele dou\ genera]ii de consangvinizare deoarece se [tie c\ genele recesive se manifest\ fenotipic numai sub form\ homozigot\. Deosebit de valoroase sunt `ns\ genotipurile homozigote-dominante deoarece prin viitoarele hibrid\ri vom reu[i s\ transmitem aceste caractere [i `nsu[iri valoroase numai dominant. A[a s-au transmis la hibrizii de porumb rezisten]a la t\ciune, rezisten]a la temperaturi sc\zute (cu 20C mai sc\zute fa]\ de hibrizii omologi); la floarea soarelui rezisten]a la rugini [i molie; la secar\ rezisten]a la rugin\ [i f\inare etc. Toate aceste alele dominante sunt u[or de identificat, chiar din prima genera]ie consangvin\, deoarece se manifest\ pregnant `n fenotip, fie c\ sunt d\un\toare, fie c\ sunt folositoare procesului de ameliorare. Ob]inerea, men]inerea [i `mbun\t\]irea liniilor consangvinizate a) Ob]inerea liniilor consangvinizate Valoarea liniilor consangvinizate noi este influen]at\ `n mare m\sur\ de calitatea materialului ini]ial, de tehnica [i tehnologia autopoleniz\rii, de metodele folosite pentru men]inerea [i `mbun\t\]irea calit\]ii precum [i de metodele cu care se realizeaz\ `nmul]irea pe durata folosirii lor. Materialul ini]ial pe care se practic\ autofecundarea for]at\ (consangvinizarea) trebuie s\ `ndeplineasc\ anumite cerin]e: - s\ con]in\ genotipuri cu caractere [i `nsu[iri corespunz\toare obiectivelor amelior\rii; - s\ permit\ realizarea de linii consangvinizate capabile de un efect heterozis (vigoarea hibrid\) maxim la hibrizii F1; - s\ con]in\ genele a c\ror combinare se urm\re[te a se realiza `n hibrid; - s\ con]in\ genotipuri cu capacitate combinativ\ ridicat\. Pentru ob]inerea liniilor consangvinizate, se folosesc ca material ini]ial popula]iile locale, soiurile ameliorate [i diferite tipuri de hibrizi (simpli, triliniari, dubli etc.). Se consider\ c\ `n urma hibrid\rilor, `n F1, efectul heterozis este cu att mai mare, cu ct originea liniilor consangvinizate este mai `ndep\rtat\ sub aspect genetic [i ecologic. 44

Astfel, la porumb hibrizii dintre liniile de indurata prezint\ o cre[tere a produc]iei cu 17,5% fa]\ de martor, hibrizii dintre liniile de indentata dep\[esc cu 21,6% martorul, `n timp ce hibrizii indurata x indentata asigur\ un spor de 42,5%. Tehnica [i tehnologia autopoleniz\rii difer\ de la o specie la alta fiind dependent\ de constitu]ia floral\ [i de biologia `nfloritului. Succesiunea opera]iilor privind consangvinizarea plantelor alogame este urm\toarea: -izolarea inflorescen]elor ce urmeaz\ a fi autopolenizate, cu ajutorul izolatorilor de pnz\ sau hrtie cu dimensiunile adecvate inflorescen]ei respective; -colectarea polenului `n izolatorul inflorescen]ei mascule; -depunerea polenului propriu pe stigmatele ajunse `n faza de receptivitate maxim\ pentru polenizare. Aceast\ opera]ie se face repede [i cu m\surile de precau]ie pentru evitarea poleniz\rii cu polen str\in; -izolarea din nou a inflorescen]elor autopolenizate cu men]ionarea pe izolatori a datei [i a numelui operatorului. La plantele unisexuat monoice (porumbul) se izoleaz\ separat, cu izolatori diferi]i, att inflorescen]a femel\ ct [i inflorescen]a mascul\ cu mult timp `naintea `nfloritului. Autopolenizarea se face `n momentul cnd inflorescen]a femel\ este `nflorit\, prin trecerea izolatorului cu polen de pe inflorescen]a mascul\, direct pe inflorescen]a femel\. Opera]ia se face `ntr-un timp foarte scurt. La plantele unisexuat dioice (cnepa), se introduce sub acela[i izolator att inflorescen]a femel\ ct [i inflorescen]a mascul\ de la doi indivizi proveni]i din s\mn]a aceleia[i plante elit\. La plantele hermafrodite se izoleaz\ fiecare inflorescen]\, iar polenizarea se face `n mod natural `n interiorul acesteia. S\mn]a C0 reprezint\ s\mn]a ob]inut\ la o plant\ autofecundat\ for]at. ~n anul viitor, `n cmpul de selec]ie cu linii consangvinizate se vor ob]ine plantele C1, din care vor fi alese alte elite ce vor fi din nou autopolenizate [i care vor da s\mn]a C1 , care din nou vor da plante C2, apoi s\mn]\ C3 [.a.m.d. ~n urma autopoleniz\rii repetate, la C7 C8, `n func]ie de specie, se ob]ine o linie consangvinizat\ nou\ cu homozigo]ia apropiat\ de 100%. b. ~mbun\t\]irea liniilor consangvinizate ~mbun\t\]irea liniilor consangvinizate - vizeaz\ dou\ aspecte principale [i anume: - `mbun\t\]irea liniilor consangvinizate pe durata ob]inerii lor; - `mbun\t\]irea liniilor consangvinizate deja ob]inute.

Pentru `mbun\t\]irea liniilor consangvinizate pe durata ob]inerii lor, se practic\ metoda selec]iei recurente. Aceast\ metod\ se bazeaz\ pe dou\ grupe de efecte: `n primul rnd izolarea rapid\ a genotipurilor homozigote prin autopolenizare repetat\ [i, deci, m\rirea eficien]ei selec]iei [i, `n al doilea rnd, combinarea genelor prin poleniz\ri reciproce [i ob]inerea de genotipuri superioare. Dup\ Sprague (1955) se folosesc patru tipuri de selec]ie recurent\: - selec]ia recurent\ pentru fenotip;

45

- selec]ia recurent\ pentru capacitatea combinativ\ generat\; - selec]ia recurent\ pentru capacitatea combinativ\ specific\; - selec]ia recurent\ reciproc\. Sele]ia recurent\ - practicat\ `n cadrul liniilor consangvinizate este de tipul selec]iei individuale repetate (I. Gologan 1981). Selec]ia repetat\ a plantelor alogame autofecundate duce la fixarea rapid\ a genelor [i limiteaz\ posibilit\]ile de progres ulterior ale popula]iei. ~n acela[i timp, selec]ia individual\ repetat\ la plantele alogame p\streaz\ posibilit\]ile de progres ulterior ale popula]iei, dar pentru ob]inerea rezultatelor dorite este necesar\ o durat\ foarte mare de timp. ~mbinarea avantajelor ambelor sisteme se realizeaz\ prin selec]ia recurent\ care const\ `n autofecundare repetat\ un num\r de genera]ii, [i selec]ia celor mai valoroase linii, apoi, dup\ `ncruci[area liniilor `ntre ele, se continu\ autopolenizarea [i selec]ia liniilor valoroase. Selec]ia recurent\ pentru fenotip (simpl\) are la baz\ cteva cicluri de selec]ie care revin periodic (recurent) pentru ridicarea valorii materialului ini]ial. Un ciclu de selec]ie dureaz\ 2 ani i se desfoar astfel:

ANUL I CICLUL I ANUL II

ANUL I CICLUL II ANUL II

46

~n ciclul I anul 1 Cmpul de alegere [i autopolenizare a elitelor. S\mn]a cu materialul ini]ial se `ns\mn]eaz\, pe straturi, bob cu bob, `n rnduri distan]ate pentru accesul amelioratorului care va efectua identificarea elitelor, izolarea [i autopolenizarea lor. Se ob]ine s\mn]a C0. La recoltare vor fi re]inute, separat, individual, toate elitele autopolenizate. - anul 2 Cmpul de hibridare. S\mn]a C0, re]inut\ la recoltare, `n anul anterior, se `ns\m]eaz\ `n rnduri [i se las\ ca polenizarea s\ fie f\cut\ `n mod liber. Ob]inem astfel s\mn]a hibrid\ F0. Toamna, elitele valoroase vor fi re]inute; s\mn]a fiec\rei descenden]e se amestec\ [i se continu\ cu un nou ciclu. Alegerea elitelor la aceast\ metod\ se face dup\ aprecierea vizual\ a caracterelor fenotipice care prezint\ o variabilitate mai pronun]at\, motiv pentru care se nume[te selec]ie recurent\ pentru fenotip. Selec]ia recurent\ pentru capacitatea combinativ\ general\, se desf\[oar\ pe cicluri de cte 3 ani [i se aseam\n\ cu metoda jum\tate [tiulete pe rnd sau a rezervei de s\mn]\.. Ciclul I - anul 1 Cmpul de alegere [i autopolenizare a elitelor. S\mn]a unui material ini]ial (popula]ie, soi, hibrid etc.) se `ns\mn]eaz\ bob cu bob, pe straturi distan]ate pentru accesul amelioratorului care va identifica elitele, va efectua autopolenizarea [i izolarea lor, iar la recoltare va re]ine individual, s\mn]a C0 ob]inut\. Tot `n anul 1, cu o parte din polenul fiec\rei elite se va poleniza un num\r de plante ce apar]in unui tester (hibrid simplu). Testerul este cunoscut bine [i va fi folosit ca partener matern. Polenizarea se face concomitent de c\tre acela[i ameliorator, care va ]ine o eviden]\ strict\ a plantelor elit\ polenizate cu acela[i polen. La recoltare, s\mn]a F0 de la fiecare elit\, se re]ine separat. - anul 2 Cmpul de control. Este organizat pentru verificarea hibrizilor ob]inu]i dintre tester [i elitele autofecundate. Pentru aceasta, `ntreaga s\mn]\ F0, ob]inut\ `n anul 1 se `ns\mn]eaz\ `n parcele, pe repeti]ii, `mpreun\ cu martorul (hibridul singur). La recoltare, se analizeaz\ produc]iile fiec\rui hibrid precum [i alte `nsu[iri morfo-fiziologice. To]i hibrizii care dep\[esc foarte semnificativ martorul, demonstreaz\ c\ plantele elit\ autopolenizate `n anul I prezint\ o capacitate combinativ\ general\ ridicat\ [i, deci, poate continua procesul de ameliorare. Restul hibrizilor [i respectiv a elitelor autopolenizate se elimin\. - anul 3 Cmpul de selec]ie. Acesta va fi ocupat cu s\mn]a C0 ce apar]ine elitelor autopolenizate din anul 1 [i care `n anul 2 au dovedit valori superioare fa]\ de tester hibridul simplu. Aceste linii se `ns\mn]eaz\ pe rnduri, separat, [i se las\ pentru polenizare liber\. La recoltare, s\mn]a ob]inut\ se amestec\ [i se continu\ `n anul 4, cu un nou ciclu de 3 ani, identic cu primul ciclu. Materialul ini]ial cu care se `ncepe cel de-al II-lea ciclu, prezint\ caracteristici morfo-productive superioare fa]\ de primul ciclu. Aceast\ metod\ de selec]ie este deosebit de potrivit\ pentru ob]inerea de hibrizi simpli care vor trebui s\ intre `n componen]a hibrizilor dubli.

47

POPULA}IA A

ANUL 1

HIBRIDARE CICLIC| CU TESTER HS

CICLUL I

ANUL 2

ANUL 3

POPULA}IA A ANUL 1 HIBRIDARE CICLIC| CU TESTER HS

CICLUL II

ANUL 2

ANUL 3

. SCHEMA SELEC}IEI RECURENTE PENTRU CAPACITATEA COMBINATIV| GENERAL| ~N CADRUL LINIILOR CONSANGVINIZATE

48

Selec]ia recurent\ pentru capacitate combinativ\ specific\ Are aceea[i metodologie de lucru ca selec]ia recurent\ pentru capacitate combinativ\ general\ (vezi figura 11), cu deosebirea c\, la hibridarea ciclic\, testerul este reprezentat de o linie consangvinizat\ [i nu de un hibrid simplu. Aceast\ metod\ are o utilizare mai restrns\. Selec]ia recurent\ reciproc\ Aceast\ metod\ de selec]ie are ca principal obiectiv cre[terea valorii biologice, `n mod concomitent, la dou\ surse de popula]ii heterozigote, A [i B, `n timp ce metodele anterioare ale selec]iei recurente folosesc drept material ini]ial de ameliorare numai o singur\ popula]ie heterozigot\. Lucr\rile se desf\[oar\ `n acela[i mod ca la selec]ia recurent\ pentru capacitatea combinativ\ general\, cu deosebirea c\ la hibridarea ciclic\, pentru popula]ia A se folose[te drept tester popula]ia B, [i invers, pentru popula]ia B se folose[te drept tester popula]ia A. Pentru `mbun\t\]irea liniilor consangvinizate deja ob]inute se practic\ metodele de ameliorare convergente sau selec]ia convergent\. Ameliorarea convergent\ permite includerea prin backcross, `ntr-o linie consangvinizat\ valoroas\ a unor `nsu[iri / caractere deficitare [i care se g\sesc la alte linii. ~n func]ie de num\rul liniilor folosite la ameliorarea convergent\ distingem: - ameliorarea convergent\ simpl\; - ameliorarea convergent\ multipl\; - ameliorarea convergent\ paralel\. Prima - ameliorarea convergent\ simpl\ - folose[te dou\ linii consangvinizate A [i B, care demonstreaz\ o capacitate combinativ\ specific\ ridicat\ [i se vor completa reciproc prin `nsu[irile lor. Indivizii ob]inu]i `n F1, se separ\ `n dou\ grupe, dintre care o grup\ se retro`ncruci[eaz\ timp de 34 ani cu linia A, iar a doua grup\ se va retro`ncruci[a cu linia B. Dup\ fiecare retro`ncruci[are se aplic\ selec]ia pentru a se ob]ine `n continuare cele mai valoroase elite-posesoare att a `nsu[irilor bune de la recurent, ct [i a `nsu[irilor bune de la donator. Dup\ aceste 34 backcross-uri, ob]inem `n paralel dou\ linii diferite AB [i BA, mult `mbun\t\]ite care se homozigoteaz\ prin autopolenizare for]at\. Hibrizii F1 rezulta]i din aceste dou\ linii (AB x Ba) prezint\ un efect heterozis superior hibrizilor ini]iali F1 cu A x B. A doua - ameliorarea convergent\ multipl\ - folose[te trei linii consangvinizate cunoscute A, B [i C, cu scopul de a transfera `nsu[irile a dou\ linii consangvinizate la o a treia (ex. B [i C pentru A sau A [i B pentru C, ori A [i C pentru B). Prin introducerea `ntro linie consangvinizat\ valoroas\ a doi factori deficitari metoda prezint\ avantaje superioare fa]\ de prima metod\. A treia - ameliorarea convergent\ paralel\ - folose[te mai multe linii consangvinizate pentru introducerea mai multor factori deficitari concomitent (paralel) la mai multe linii consangvinizate valoroase. Este metoda utilizat\ pentru `mbun\t\]irea liniilor consangvinizate de porumb. c. Folosirea liniilor consangvinizate n ameliorarea plantelor Vitalitatea sczut a liniilor consangvinizate ca rezultat al homozigoiei se concretizeaz printr-o capacitate de producie redus. n consecin, liniile

49

consangvinizate nu prezint importan pentru producia agricol; n schimb prezint mare interes n obinerea efectului heterozis la hibrizii F1. Astfel, n funcie de etapele hibridrii i de numrul liniilor consangvinizate participante, hibrizii ce se obin prin folosirea liniilor consangvinizate pot fi: Hibrizi simpli (A x B) obinui prin ncruciarea a dou linii consangvinizate care posed o capacitate combinativ specific ridicat. Aceti hibrizi posed cel mai mare efect heterozis i ofer cele mai mari sporuri de producie, ntruct starea de heterozigoie este n proporie de 100%. Datorit faptului c producia de smn n F0 la hibrizii simpli este mic, iar preul de cost este foarte ridicat, s-a trecut la producerea de smn comercial de hibrizi triliniari sau dubli la care heterozisul este diminuat. Hibrizii triliniari (A x B) x C obinui prin ncruciarea dintre un hibrid simplu ca form matern i o linie consangvinizat-ca form patern. Hibrizii dubli (A x B) x (C x D) obinui prin ncruciarea a doi hibrizi simpli. Fa de hibrizii simpli, hibrizii dubli prezint efectul heterozis mai sczut datorit segregrii hibrizilor simpli parentali. Hibrizii compleci ( A x B) x (C x D) x (E x F) x (G x H) se folosesc mai puin deoarece efectul heterozis este foarte mult diminuat. Toi aceti hibrizi ce se obin se folosesc numai o singur generaie, F1, pentru scopurile de producie; pentru scopurile ameliorrii se folosesc n continuare generaiile segregante F2F5. Soiurile sintetice se obin prin ncruciarea liber a unui numr mai mare de patru linii consangvinizate i care manifest o capacitate de combinare specific ridicat. Soiurile sintetice se pot menine n cultur mai multe generaii ntruct efectul heterozis se menine mai mult timp. Este metoda de ameliorare la culturile furajere perene (leguminoase i graminee). Heterozisul i folosirea lui n ameliorarea plantelor Heterozisul (vigoarea hibrid) reprezint suma caracterelor i nsuirilor care determin superioritatea hibrizilor din F1, fa de ambele forme parentale. Vitalitatea , vigurozitatea, fertilitatea i productivitatea ridicat a hibrizilor din F1 se datoreaz strii de heterozigoie ce predomin la hibrizii din F1. Din punct de vedere al caracterelor i nsuirilor afectate, se deosebesc mai multe forme de heterozis: somatic (modificarea creterii i dezvoltrii); reproductiv (modificarea numrului, mrimii i greutii seminelor); adaptiv (modificarea reaciei la condiiile de mediu) i metabolic (modificarea proceselor metabolice). Heterozisul de tip reproductiv prezint cel mai mare interes pentru scopurile produciei agricole, n timp ce restul formelor de heterozis intereseaz activitatea de ameliorare a plantelor. Evidenierea efectului heterozis, pentru un anumit caracter sau nsuire, se face prin determinarea valorilor respective, mai nti la cele dou forme parentale i apoi la hibridul obinut n F1. Efectul heterozis, exprimat prin indicele heterozis (Ih) se calculeaz astfel: n care: X (F ) 2 X (F )

Ih =

X (A ) + X ( B ) 2

100

Ih =

X (A ) + X (B )

100

50

X(F1)- valoarea medie a caracterului/ nsuirii la hibridul F1; X(A) - valoarea medie a caracterului/ nsuirii la forma matern; X(B) - valoarea medie a caracterului/ nsuirii la forma patern; 3.2.1.3. Mutageneza Mutaiile sunt schimbri ereditare brute care apar n constituia genetic a unui individ sub aciunea unor factori mutageni. Indiferent de felul i natura lor, mutaiile sunt importante pentru c dau natere la constituii ereditare noi, ce se transmit ereditar. Spre deosebire de hibridare, unde schimbarea genotipului se datoreaz recombinrii factorilor ereditari ce aparin la doi indivizi diferii, n mutagenez genotipul se schimb sub aciunea unor factori externi, fr participarea unei erediti strine. Sediul tuturor mutaiilor l constituie aparatul ereditar i, mai ales, constituentul de baz al acestuia, ADN. Fr ca sursa mutagen s acioneze la nivelul ADN, nu se poate vorbi de mutaii sau de procese mutagene. ntotdeauna mutaiile apar brusc, la nivelul materialului genetic, dar manifestarea lor se poate evidenia mai devreme sau mai trziu, n mod direct (prin analize biometrice), sau indirect (prin analize biochimice) n funcie de numeroi factori ca: structura genetic a indivizilor, organul indus, tipul de mutaie, agentul mutagen etc. Mutaiile pot s apar la toate organismele i reprezint o posibilitate considerabil de realizare a variabilitii genetice. Mutaiile se deosebesc de modificaii, care sunt schimbri fenotipice provocate de mediu i nu sunt ereditare. Un exemplu tipic de modificaie l ofer plantele de ciuboica cucului (Primula sinensis). Atunci cnd plantele acestei specii cresc n zone cu temperaturi mai mari de 300C prezint florile de culoare alb - var. alba, iar atunci cnd temperatura scade sub 300C prezint florile de culoare roie var. rubra. Hibrizii n F1 dintre plantele cu flori albe i cele cu flori roii, vor prezenta florile numai de culoarea dominant-roie, indiferent de temperatura zonei. Modificrile nefiind ereditare, nu intereseaz n procesul de ameliorare. n activitatea de ameliorare prin mutagenez se folosete urmtoarea terminologie: Mutaia - biotipul care a suferit mutaia; Gen mutant - gena modificat prin mutaie; Mutagenez - procesul de schimbare a materialului genetic; Agent mutagen - factorul fizic, chimic sau biologic care acioneaz asupra materialului genetic producnd mutaia; Gen slbatic - (gena standard) gena din care provine mutaia. M0; M1...Mn - mutantele pe generaii atunci cnd nu se precizeaz agentul mutagen. X0 ; X1 ; X2 ... Xn -mutantele obinute prin folosirea razelor X . 0 ; 1 ; 2... n mutantele obinute prin iradieri cu raze gamma. 0 ; 1 ; 2..... n -mutantele obinute prin iradieri cu raze . 3.2.1.3.a. Clasificarea i caracterizarea mutaiilor a Dup modul de apariie: - Mutaii naturale - Mutaii artificiale b Dup mrimea efectului fenotipic: 51

 Macromutaii Micromutaii c Dup modul de manifestare: - Mutaii morfologice - Mutaii fiziologice - Mutaii biochimice d Dup locul apariiei: - Mutaii gametice - Mutaii somatice e Dup natura substratului material al ereditii: - Mutaii cromozomale - Mutaii extranucleare - Mutaii genice. Mutaiile naturale (spontane) sunt schimbri brute ale genomului, fr intervenia omului. Cauzele care determin mutaiile naturale sunt: - efectul razelor cosmice care este mai pregnant la mari altitudini; - radioactivitatea pmntului prin coninutul n uraniu, radiu; - radiaiile carbonului i potasiului din plante; - variaiile de temperatur n regiunile reci ale globului; - prezena n exces a manganului n sol etc. Frecvena mutaiilor naturale se consider a fi de 25%, din care numai 1% sunt vizibile. La autogame frecvena mutaiilor este mai mic n comparaie cu plantele alogame i cele cu nmulire vegetativ. Prima mutant natural a fost identificat de Sprenger, n 1590 la Chelidonium majus fiind denumit Chelidonium laciniatum. n continuare s-au mai identificat mutante naturale la: fragi (fragul monofil); la plop (piramidal); la gru (formele speltoide i pitice); la cnep (formele intersexuate); la lupin (formele fr alcaloizi); la cartofi (tuberculi de culoare diferit) etc. Unele mutante au o mare folosin practic. Exemplu: peste 85% din suprafaa cultivat cu lalele n Olanda, reprezint culturi cu forme mutante (se cunosc peste 60 de mutante de lalele). Se consider c variabilitatea ridicat ce se nregistreaz la legume i flori este o consecin a mutaiilor naturale provocate prin oscilaiile permanente de temperatur pe faze de vegetaie (ser, solar, cmp etc.). Fiind greu de prevzut, mutaiile naturale nu prezint interes deosebit n ameliorarea plantelor. Mutaiile artificiale (induse) reprezint schimbrile brute provocate de om n laborator sau n cmp, prin intermediul agenilor mutageni. Mutaiile artificiale s-au nregistrat n 1927 de ctre H.J. Mller, prin folosirea razelor X asupra Drosophilei melanogaster. Prin iradiere cu raze X, frecvena mutaiilor artificiale pentru aceast specie a crescut de 150 ori comparativ cu 1-2% la mutaiile naturale. Ulterior, numeroi cercettori care s-au ocupat de mutagenez au constatat urmtoarele: - rata mutaiilor artificiale este direct proporional cu doza de iradiere; - nu exist nici o deosebire ntre mutaiile naturale i cele artificiale; - modificrile mutagene se transmit ereditar.

52

S-a desprins astfel concluzia c mutaiile artificiale reprezint o posibilitate foarte mare n crearea unei noi variabiliti genetice cu implicaii majore n activitatea de ameliorarea plantelor. Macromuta]ii sunt acele schimb\ri care se manifest\ evident pe un singur individ [i sunt u[or de identificat, exteriorizndu-se puternic `n fenotip. De cele mai multe ori macromuta]iile reprezint\ anomalii adic\ abateri flagrante de la normal [i sunt eliminate u[or de selec]ia natural\. Nefiind transmisibile ereditar, nu prezint\ mare interes `n ameliorare. Adev\ratele macromuta]ii sunt cromozomale. Micromuta]ii - sunt schimb\ri ce apar pe grupuri mari de indivizi, prezentnd o importan]\ deosebit\ pentru evolu]ie, deoarece nu afecteaz\ negativ vitalitatea plantelor. Micromuta]iile sunt `n general muta]ii genice (muta]ii intragenice). Ele au la baz\ schimbarea pozi]ional\ a perechilor de nucleotide din macromolecula de ADN (substitu]ia, adi]ia, dele]ia, inversiunea, transpozi]ia). Domeniul micromuta]iilor a fost pu]in studiat pn\ `n prezent, dar noile programe de ameliorare cuprind [i aceste modalit\]i de inducere a variabilit\]ii.. Astfel, pentru viitoarele lucr\ri de ameliorare, micromuta]iile ce vizeaz\ caractere [i `nsu[iri de rezisten]\ sau adaptare la condi]iile nefavorabile ale mediului ambiant, pot constitui solu]ii realizabile. Muta]ii morfologice - aduc schimb\ri la caracterele (fenotipul) organismelor prin cre[terea gigantic\ sau pitic\ precum [i prin schimbarea structurii, formei, culorii, m\rimii etc. Muta]ii fiziologice - aduc schimb\ri ale unor func]ii ale organismelor, cu consecin]e asupra ritmului de cre[tere, a rezisten]ei la stresurile climatice [i fitopatogenice etc. Muta]ii biochimice - aduc schimb\ri ale biochimismului organismului prin modificarea cerin]elor fa]\ de anumite elemente nutritive, acumularea de substan]e valoroase [i de principii active etc. Astfel, organismele care nu sunt capabile s\ sintetizeze anumite substan]e specifice metabolismului propriu, datorit\ muta]iei, se numesc mutante biochimice sau nutri]ionale. - Muta]iile germinale [i gametice apar `n celulele presexuale sau sexuale [i se transmit la urma[i. Aceste muta]ii au rol esen]ial att `n evolu]ie ct [i `n programele de ameliorare. Cnd muta]ia apare `n celulele germinale, mai de timpuriu, `n urma meiozei pot forma mai mul]i game]i mutan]i [i deci mai mul]i indivizi posesori ai alelei mutante. Dac\ muta]ia se induce la game]i, se poate forma un individ mutant care provine dintr-un gamet afectat de muta]ie. Muta]iile somatice reprezint\ modific\ri ale celulelor somatice [i care nu se transmit ereditar dect `n cazuri foarte rare [i numai atunci cnd afecteaz\ game]ii. Se manifest\ prin schimbarea formei, m\rimii, culorii etc. la diferite organe [i de regul\ mai mult la organismele tinere comparativ cu cele mature. Muta]iile cromozomale sunt schimb\ri bru[te [i ereditare produse `n interiorul cromozomilor, schimb\ri care afecteaz\ fie structura cromozomului, fie anumite gene din interiorul cromozomului. Muta]iile cromozomale pot fi grupate `n transloca]ii (schimbarea de por]iuni dintre doi cromozomi neomologi sau omologi); inversiunile (`ntoarcerea cu 1800 a unui fragment de cromozom); duplica]iile (repetarea unui fragment cromozomal fie `n cadrul aceluia[i cromozom, fie `n cadrul altui cromozom neomolog) [i deficien]ele (lipsuri sau pierderi de fragmente cromozomale). 53

 Muta]ii extranucleare apar `n substan]a ereditar\ situat\ `n afara nucleului. Atunci cnd acestea apar la factorii ereditari plasmatici se numesc muta]ii plasmatice, iar atunci cnd afecteaz\ factorii ereditari cuprin[i `n plastide se numesc muta]ii plastidice. Trebuie men]ionat c\ muta]iile plasmatice, spontane sau induse, au permis crearea formelor androsterile cu androsterilitate de tip citoplasmatic, cu implica]ii majore `n producerea de s\mn]\ la hibrizii plantelor cultivate. Muta]ii genice cuprind modific\ri ce afecteaz\ direct genele, fie luate individual, fie `n grup. ~n func]ie de gradul de mutabilitate pe care-l prezint\, genele pot fi labile [i stabile. De asemenea, s-a mai constatat c\ sensul muta]iilor genice este de la starea recesiv\ spre cea dominant\. Inducerea muta]iilor Factorii mutageni folosi]i la inducerea muta]iilor pot provoca intensificarea, diminuarea sau inhibarea func]iilor biologice [i `n mod deosebit afecteaz\ zestrea ereditar\ a genotipurilor. Stabilirea contribu]iei fiec\rui factor este foarte dificil\, fie datorit\ ac]iunii simultane a lor, fie datorit\ interven]iei altora, pe durata tratamentului cu un factor cunoscut. Totu[i, majoritatea cercet\torilor au `mp\r]it multitudinea factorilor mutageni `n urm\toarele 4 grupe: factori biologici, factori genetici, factori fizici [i factori chimici. Factorii biologici determin\ apari]ia modific\rilor genetice `n func]ie de caracteristicile sistemului biologic al genotipurilor sub aspect cantitativ [i calitativ. Printre ace[ti factori men]ion\m: - sensibilitatea relativ\ a diferitelor unit\]i sistematice. Se [tie c\ pentru fiecare gen, specie, soi sau biotip, tratamentele de inducere a muta]iilor urm\resc doza critic\ letal\ (DL) unde supravie]uiesc aproximativ 50% dintre indivizi (DL = 50%). Dar, `ntre aceste unit\]i sistematice exist\ diferen]e foarte mari; de exemplu pentru inducerea cu raze X, `n timp ce semin]ele de rapi]\, mu[tar, in, varz\, ridiche au DL50 = 100.000 r., coniferele, citricile, sfecla au DL50 = 1.000 5.000 r. Chiar `n cadrul aceluia[i gen, exist\ diferen]e semnificative `n func]ie de vrst\, sex, greutate, organ etc. Astfel sunt mai sensibile: organismele tinere, indivizii masculi, cei cu greutatea mai redus\ [i organele / organismele cu con]inut ridicat `n ADN; - sensibilitatea relativ\ a diferitelor tipuri de celule, chiar la aceea[i specie (ex. nucleul fa]\ de citoplasm\), datorat\ structurii chimice diferite. Semin]ele de gru mai vechi sunt mai sensibile la radia]ii dect cele mai proaspete. Aceast\ sc\dere este mai evident\ la formele diploide comparativ cu cele hexaploide. Rezult\ astfel c\ plodia indic\ o anumit\ stabilitate genetic\, o rezisten]\ mai mare la dozele de radia]ii folosite `n mutagenez\ [i chiar un ritm mai sc\zut de `mb\trnire a celulelor [i a proceselor morfofiziologice; - sensibilitatea relativ\ a celulelor `n diferite stadii ale ciclului celular. Interfaza prezint\ cel mai mare interes deoarece are durata cea mai mare [i cu influen]\ direct\ `n transmiterea mesajului genetic `n descenden]e. Factorii genetici ac]ioneaz\ la nivelul anumitor gene prin controlul activit\]ii acestora. Totu[i, efectul mutagen este influen]at puternic de structura genetic\ a 54

materialului biologic, care prezint\ deosebit\ importan]\ `n mutageneza experimental\. Dintre fenomenele genetice care determin\ efectul mutagen [i care cu modul lor de ac]iune limiteaz\ sau intensific\ mutageneza men]ion\m: - efectul de pozi]ie pe acela[i grup de `nl\n]uire a genelor `n cromozom pot s\ apar\ cazuri cnd unele gene `[i schimb\ pozi]ia, f\r\ a modifica informa]ia genetic\ total\ a cromozomului. Prin aceasta apar numai modific\ri fenotipice; - efectul de paramuta]ie pe acela[i locus al cromozomului pot ac]iona mai multe gene (alele) care condi]ioneaz\ - unele culoarea endospermului, altele culoarea plantei etc; - efectul de recombinare genetic\ - `n mod normal separarea de gene, pe de o parte [i recombinarea de gene, pe de alt\ parte, constituie crossing-over intergenic. Cercet\rile mai recente au demonstrat c\ exist\ numeroase subgene sau pseudoalele care pot realiza [i ele a[a-zisul crossing-over intergenic. Identificarea acestor muta]ii foarte sensibile este greoaie [i pentru aceasta se folosesc markerii genetici; - efectul unor factori genetici cu ac]iune modificatoare. Ace[ti factori genetici (gene), prin pozi]ia ce o ocup\ `n anumite sisteme genetice, pot avea efect mutagen asupra altor gene, modificnd fenotipul acestora. Astfel avem identificate genele mutatoare Dt (care blocheaz\ formarea antocianului `n aleuron\ [i plante de porumb); genele activatoare Ac (care condi]ioneaz\ formarea autocianului `n aleuron\ [i `n planta de porumb); genele disaciatoare Ds (care determin\ apari]ia de culori diferite pe bobul de porumb); gene modulatoare Mp (care controleaz\ culoarea pericarpului la bobul de porumb). Factorii fizici ac]ioneaz\ direct asupra acizilor nucleici `n repaos. Din aceast\ categorie fac parte: radia]iile (sunt cele mai importante), varia]iile de temperatur\ [i ultracentrifugarea. Radia]iile mutagene cuprind: - radia]ii neionizante (ultraviolete) care genereaz\ reac]ii fotochimice provocnd excitarea moleculelor, fiind produse de c\tre l\mpile cu mercur. Radia]iile neionozante (ultraviolete), au o lungime de und\ mare, de 2600 , ce corespunde spectrului de absorb]ie al ADN-ului, motiv pentru care se consider\ c\ sunt pu]in penetrante. Aceste radia]ii provoac\ muta]iile genice; - radia]iile ionizante genereaz\ reac]ii radiochimice provocnd ionizarea [i excitarea celular\. ~n aceast\ categorie distingem: - radia]iile electromagnetice cuprind radia]iile gamma [i razele Rentgen (razele X). Razele Rentgen (razele X) au lungimea de und\ sub 100 , o putere de penetra]ie mai redus\ [i au fost primele folosite `n inducerea muta]iilor artificiale. Razele gamma au lungimea de und\ sub 1,4 [i au cea mai mare penetrabilitate, producnd dezintegr\ri radioactive, dar sunt nocive pentru operator. Se folosesc s\rurile de radiu, radon, cobalt. - radia]iile corpusculare cuprind radia]iile alfa, beta, protonii rapizi, neutronii rapizi, neutronii termici etc. Astfel, pentru producerea radia]iilor beta se folosesc radioizotopii fosforului (P32), sulfului (S35) etc.

55

Radia]iile ionizante ac]ioneaz\ brutal determinnd apari]ia de macromuta]ii sau malforma]ii. Factorii chimici ac]ioneaz\ asupra acizilor nucleici `n repaos sau `n biosinteza replicativ\ a acestora. Ca agen]i chimici `n mutagenez\ se folosesc alchila]ii (iperita, sulfamidele, EMS-etilmetasulfonatul etc.), deriva]ii purinici, pirimidinici, diferi]i alcaloizi, oxigenul, oxidul de azot, umiditatea etc. Experiment\rile `n mutagenez\ trebuie s\ se realizeze cu un material ini]ial ce va `ndeplini urm\toarele cerin]e: - s\ posede ciclul vital scurt; - caracterele morfoproductive s\ fie distincte [i u[or de identificat; - s\ ofere posibilitatea experiment\rilor ieftine [i u[or de realizat; - s\ posede un num\r redus de cromozomi; - cromozomii s\ fie mari [i u[or de identificat `ntre ei; - durata cuclului celular s\ fie bine cunoscut\. La plantele superioare aceste cerin]e sunt `ndeplinite, `n ordine, de: Tradescantia, Vicia faba, Zea mays, Oenothera, Bellevalia, Allium cepa, Hordeum vulgare. Primele trei sunt cele mai importante. Folosirea mutantelor `n ameliorarea plantelor -Mutantele pot [i vor concura serios hibrid\rile sexuate; -Unele `nsu[iri pot fi realizate mai u[or prin muta]ii fa]\ de hibridare ca: precocitatea, rezisten]a la c\dere, rezisten]a la boli/ d\un\tori etc. -Criticii muta]iilor se bazeaz\ pe faptul c\ mutantele au o vitalitate mai redus\ comparativ cu formele ini]iale; -Adep]ii muta]iilor consider\ c\ variabilitatea genetic\ ridicat\ poate oferi selec]ia mutantelor care prezint\ vitalitatea egal\ cu formele ini]iale. De asemenea, pentru productivitate mare, mutantele cu vitalitate sc\zut\ vor fi folosite doar ca material valoros `n procesul de ameliorare [i mai pu]in folosite direct `n produc]ie; -Se consider\ c\ posibilitatea identific\rii de forme cu `nsu[iri valoroase este dubl\ `n cazul mutantelor comparativ cu hibrizii genera]iilor segregante; -Durata de realizare a acestor forme noi este redus\ la jum\tate comparativ cu hibrizii. 3.2.1.4. Ploidia (poliploidia) Ploidia sau poliploidia reprezint fenomenul genetic de multiplicare a garniturilor cromozomale sau a cromozomilor. 3.2.1.4.a. Importana poliploidiei-const n rezolvarea unor probleme cuprinse n principal pe urmtoarele trei grupe: - probleme privind evoluia apariiei noilor soiuri de plante, poliploidia fiind factorul primar care a contribuit n mare msur la formarea actualelor soiuri i speciilor de plante cultivate. Este important de remarcat c exist o corelaie pozitiv ntre gradul de poliploidie i valoarea plantelor cultivate. La aceasta mai adugm c cea mai mare parte din producia mondial de glucide, grsimi i de proteine sunt realizate de ctre plantele poliploide. De asemenea, s-a mai constatat c n cadrul aceluiai gen, speciile

56

poliploide prezint importan mai mare comparativ cu speciile cu numr redus de cromozomi. Acesta a fost i motivul care a stat la baza obinerii poliploizilor artificiali. Determinnd apariia unor plante mai viguroase , prin creterea volumului celulelor n urma multiplicrii garniturilor cromozomiale i prin favorizarea fixrii unor hibrizi interspecifici sub form de amfidiploizi, poliploidia a dat natere la noi specii (ex. triticale) care s-au extins dincolo de arealul de existen a speciilor diploide. - probleme privind ameliorarea plantelor prin inducerea pe cale artificial a variabilitii genetice i selecionarea celor mai valoroase descendene. Odat cu descoperirea factorilor poliploidizani, ameliorarea plantelor a folosit i va folosi avantajele pe care le poate oferi multiplicarea garniturilor sau numrului de cromozomi, cum ar fi: a) obinerea unor dimensiuni mai mari ale diferitelor pri ale plantei, ceea ce constituie un mare avantaj mai ales la speciile cultivate pentru organe vegetative sau n floricultur (ex. sfecla de zahr i furajer, trifoiul rou, via de vie, narcisele etc.). Trebuie fcut precizarea c la plantele productoare de semine acest avantaj (mrirea dimensiunii) este anulat prin scderea fertilitii poliploizilor; b) sporirea productivitii i a calitii exemplu, la porumbul tetraploid (4 x) se obin plante mai viguroase, mai productive i cu 20% spor n vitamina A fa de porumbul diploid; c) obinerea unor caractere noi, prin poliploidizare care la formele diploide nu exist (ex. sfecla poliploid este mai rezistent la cercosporioz comparativ cu sfecla diploid, secara tetraploid are caliti biochimice superioare etc.); d) favorizarea polenizrii strine prin poliploidizare se folosete cu succes la ameliorarea sfeclei de zahr. Astfel, prin folosirea ca form matern, sfecla tetraploid ntr-o anumit proporie i a formei paterne sfecla diploid, se obine smna hibrid triploid care prezint dou avantaje n activitatea de producie i anume: primul avantaj datorat poliploidizrii prin creterea masei vegetative a rdcinii i al doilea avantaj datorat efectului heterozis al hibrizilor n F1 prin obinerea de sporuri mari de producie, att fa de formele tetraploide, ct i fa de formele diploide; e) sterilitatea poliploizilor cu numr impar de garnituri reprezint un mare avantaj economic pentru unele specii de plante cum este cazul pepenilor verzi sau galbeni. Prin ncruciarea tetraploizilor cu diploizi rezult triploizii fr semine, datorit sterilitii hibrizilor n F1; f) fixarea strii de heterozigoie reprezint o mare perspectiv pentru ameliorare. Dublarea numrului de cromozomi permite ca fiecare gamet s posede doi cromozomi omologi, care pot fi diferii din punct de vedere al genelor. Astfel se pot obine plante cu grad mai mare de heterozigoie, care s rmn neschimbat chiar i atunci cnd se autopolenizeaz. Prin aceast metod ar fi posibil fixarea heterozisului mai multe generaii succesive, la acelai nivel, pentru porumb i alte specii cultivate; g) - mbinarea genomurilor de la specii diferite, prin poliploidizare i realizarea amfidiploizilor, aa cum e cazul hibridului gru x secar, denumit triticale. - probleme privind genetica interaciunilor ce se realizeaz ntre genotip i fenotip, ntre genotip i mediu, interaciuni care vor explica n viitor importante aspecte tiinifice ce vor fi folosite n cadrul ingineriei genetice. Se preteaz la poliploidizare: 57

- speciile de plante cu garnituri cromozomiale reduse; - speciile de plante alogame se preteaz mai bine fa de cele autogame; - speciile de plante cu nmulire vegetativ se preteaz mai mult comparativ cu cele ce se nmulesc sexuat. 3.2.1.4.b. Clasificarea [i caracterizarea poliploizilor [i aneuploizilor ~n func]ie de num\rul garniturilor cromozomale sau de num\rul cromozomilor antrena]i `n fenomenul de poliploidizare, distingem urm\toarele tipuri de ploidie (poliploidie):
monohaploidie (2x x) haploidie dihaploidie (4x 2x) trihaploidie (6x 3x) (n=x, din game]i) euploidie artioploidie (x) autopoliploidie (4x; 6x; 8x) perisoploidie poliploidie (hibrizi apropia]i) (3x; 5x; 7x) (n>x) Ploidie alopoliploidie (poliploidie) (hibrizi `ndep\rta]i) monosomie (2x-1) hipoploidie (-1;-2 cromozomi) aneuploidie nulisomie (2x-2) (cromozomi) trisomie (2x+1) hiperploidie (1-2cromozomi) tetrasomie (2x+2)

Euploidia (euploizii sau eupoliploizii) se ob]in atunci cnd `n celulele somatice ale unei plante se g\sesc una sau mai multe garnituri complete de cromozomi. ~n acest caz, perturb\rile echilibrului genetic sunt mai pu]in pregnante pn\ la un anumit nivel, deoarece schimbarea echilibrului se produce uniform [i propor]ional cu modificarea fazei ploidice. ~n func]ie de num\rul garniturilor cromozomale din celulele somatice, formele euploide pot fi: - haploide (monoploide) n=x - diploide n = 2x - triploide n = 3x (2x + x) - tetraploide n = 4x (2x + 2x) - pentaploide n = 5x (2x + 3x) etc. ~n natur\, mai r\spndite se `ntlnesc formele tetraploide [i hexaploide. Formele cu num\rul impar de garnituri cromozomale (triploide sau pentaploide) nu se reproduc fiind sterile, prin lipsa posibilit\]ii de conjugare cromozomal\ `n diviziunea celular\. Formele cu num\r par de garnituri cromozomale (diploide, tetraploide [i hexaploide), se reproduc u[or, sunt fertile, `n timp ce formele poliploide cu garnituri cromozomale mai mari de 6x se `ntlnesc mai rar `n natur\, `ntruct num\rul prea mare de garnituri cromozomale perturb\ reproducerea. Grupa euploid\ (a euploizilor) se `mparte `n haploidie (haploizi) [i poliploidie (poliploizi). 58

Haploidia (haploizii) reprezint\ fenomenul genetic care asigur\ plantelor `n celulele somatice numai garnitura cromozomal\ existent\ `n game]i. Haploizii proveni]i din speciile diploide se numesc monohaploizi (2x----x); cei care provin din speciile tetraploide se numesc dihaploizi (4x----2x); iar cei care provin din speciile hexaploide se numesc trihaploizi (6x----3x). Acest fenomen de `njum\t\]ire a num\rului de cromozomi `n celulele somatice [i deci de apari]ie a haploizilor se desf\[oar\ natural cu o frecven]\ foarte slab\ (la genul Zea mays 0,05%, Triticum monococcum 0,5%, Triticum aestivum 0,025%, Gossypium barbadense 0,025% etc.), dar [i pe cale experimental\ (partenogenez\, pseudogamie, androgenez\ etc.) Prin redublarea num\rului de cromozomi, haploizii formeaz\ linii absolut homozigote, folosite cu mare randament la ob]inerea hibrizilor care asigur\ efectul heterozis maxim `n F1. Poliploidia (ploidie sau poliploizi) reprezint\ euploizii cu mai mult de dou\ garnituri cromozomiale `n celulele somatice, adic\ 3x, 4x, 5x, 6x. ~n cadrul unui gen pot s\ apar\ numeroase specii poliploide prin ad\ugarea uneia sau a mai multor garnituri cromozomiale `n celulele somatice. Astfel la genul Triticum (n = x = 7), s-au format specii diploide (2x = 14) ca Triticum monococcum, specii tetraploide (4x = 28) ca Triticum durum [i specii hexaploide (6x = 42) ca Triticum aestivum. De asemenea la genul Solanum ( n = x = 12) avem specii diploide (2x = 24) ca Solanum chacoense, specii triploide (3x = 36) ca Solanum commersonii, specii tetraploide (4x = 48) ca Solanum tuberosum [i Solanum andigenum, specii pentaploide (5x = 60) ca Solanum semidemissum [i specii hexaploide (6x = 72) ca Solanum demissum. Frecven]a poliploizilor naturali cre[te odat\ cu: - cre[terea latitudinii pentru latitudinea de 370 (zona M\rii Mediterane) frecven]a poliploizilor este de 37%, `n timp ce pentru latitudinea de 80-820 (Insulele FranzIosef) frecven]a este de 75%; - cre[terea altitudinii - `n zonele de cmpie poliploizii au frecven]e de pn\ la 45% `n timp ce `n zonele muntoase aceasta este de peste 85%; - plantele anuale au o frecven]\ redus\ a poliploizilor `n compara]ie cu plantele erbacee [i perene; - durata vie]ii este mai mare la poliploizi, fiind `n corela]ie direct\ cu num\rul de cromozomi. Exemplu Helianthus annuus anual\ are n = 17 cromozomi, `n timp ce Helianthus tuberosus peren\ are n = 51 cromozomi; - majoritatea poliploizilor naturali fiind alopoliploizi dovede[te c\ `n evolu]ia lor speciile [i subspeciile poliploide au rezultat prin hibridarea lor. Dup\ originea genomurilor existente la poliploizi `ntlnim forme autopoliploide (autoploide) [i alopoliploide (aloploide, amfiploide). Autopoliploidia (autopoliploizii, autoploizii) rezult\ prin multiplicarea garniturilor cromozomiale `n cadrul aceleia[i specii. Autopoliploizii au, deci, genomuri omologe, lociile acestora fiind ocupate `n majoritatea cazurilor de alele identice. Multiplicarea garniturilor cromozomiale este consecin]a perturb\rilor ap\rute `n desf\[urarea normal\ a mitozei sau a meiozei. Atunci cnd aceste perturb\ri provin `n meioz\ se formeaz\ game]i diploizi (n = 2x), iar dac\ acest gamet diploid `ntlne[te la fecundare tot un gamet diploid va rezulta un descendent tetraploid (4x), `n timp ce dac\ va g\si un gamet haploid (n = x) va rezulta un descendent triploid (n = 3x). 59

Atunci cnd perturb\rile intervin `n mitoz\ este posibil ca dup\ dublarea num\rului de cromozomi s\ nu se realizeze migrarea lor spre cei doi poli ai fusului nuclear ( al celulei), nu se vor forma cele dou\ celule fiice [i va rezulta astfel o celul\ tetraploid\ cu num\rul dublu de cromozomi (4x). Prin formarea de game]i diploizi aceste plante pot forma indivizi tetraploizi, dar [i alte descenden]e diferite. La rndul lor autopoliploizii se `mpart `n artioploizi [i perisoploizi. Artioploidie - rezult\ atunci cnd se multiplic\ garniturile cromozomiale `n num\r par (4x, 6x). ~n acest caz meioza decurge normal, deoarece fiecare cromozom are un partener cu care se poate uni [i, prin migrarea echilibrat\ a cromozomilor la cei doi poli ai celulei, vor rezulta dou\ celule fiice identice. Perisoploidia rezult\ atunci cnd se multiplic\ garniturile cromozomiale `n num\r impar (3x, 5x). ~n acest caz meioza decurge normal, iar repartizarea echilibrat\ a cromozomilor la cei doi poli nu este posibil\, motiv pentru care asemenea descenden]e sunt sterile. ~nmul]irea formelor perisoploide se face numai pe cale vegetativ\. Alopoliploidia (alopoliploizi, aloploizi, amfiploizi etc.), reprezint\ fenomenul de multiplicare a garniturilor cromozomiale prin hibrid\rile `ndep\rtate (interspecifice [i intergenerice). Alopoliploizii, aloploizii sau amfiploizii rezult\ prin dublarea num\rului de cromozomi `ntr-un zigot, pe baza a dou\ garnituri cromozomiale diferite `ntre ele genetic: fie `ntre dou\ specii, fie `ntre dou\ genuri. Reprezint\ metoda de baz\ folosit\ pentru `nl\turarea sterilit\]ii manifestate de hibrizii F1. Atunci cnd genomurile formelor parentale la un hibrid nou dorit nu sunt omologe, rezult\ `n F1 hibrizi sterili, la care prin tratamentul cu colchicin\ se realizeaz\ dublarea cromozomilor devenind astfel hibrizi fertili. Aneuplodia (aneuploizii) rezult\ prin suplimentarea sau eliminarea unui anumit num\r de cromozomi din celulele somatice [i nu garnituri cromozomiale. Pentru majoritatea plantelor aneuploidia reprezint\ un fenomen genetic negativ `ntruct se pierd anumite gene valoroase. Apari]ia aneuploizilor, de regul\, este determinat\ de anumite anomalii care survin `n cursul meiozei sau mitozei, dintre care cele mai frecvente sunt urm\toarele: pierderile de cromozomi `n anafaz\, nedivizarea unor cromozomi sau repartizarea defectuoas\ a cromozomilor `n celule fiice. Aceste perturb\ri sunt mult mai profunde [i determin\ schimb\ri morfologice [i fiziologice cu att mai vizibile cu ct cromozomii implica]i poart\ gene cu caracter ereditar mai important. Aneuploizii prezint\ importan]\ deosebit\ `n lucr\rile de ameliorare `n special formele homozigote, care sunt mai bine adaptate la condi]iile de mediu, sunt mai constante [i se comport\ mai bine ca cele diploide. Atunci cnd la aneuploizi se suplimenteaz\ cromozomii, fenomenul genetic se nume[te hiperploidie, iar cnd se reduce num\rul de cromozomi se nume[te hipoploidie. Aneuploidia st\ la baza unor metode moderne de studiu genetic [i realizarea de h\r]i genetice la unele apecii de plante (monosomia a favorizat eviden]ierea rolului fiec\rui cromozom la gru Sears, 1959) precum [i `n ameliorarea plantelor, unde s-au identificat implica]ii practice deosebite ca: adi]ia de cromozomi, substituirea cromozomilor, transferul de gene etc. -adi]ia de cromozomi de la specii sau genuri `nrudite asigur\ ob]inerea unor noi genotipuri, care `mbin\ unele din caracterele ambelor specii. Metoda are la baz\ hiperploidia [i vizeaz\ adi]ia (ad\ugarea) la specia (soiul) valoroas\ a unor caractere / `nsu[iri deficitare, cum ar fi rezisten]a la stresurile climatice sau fitopatogenice.

60

-substitu]ia de cromozomi se bazeaz\ pe hipoploidie, adic\ `nlocuirea unui cromozom sau a mai multor cromozomi de la o anumit\ specie (soi) cu un num\r egal de cromozomi de la alt genotip din aceea[i specie sau specii `nrudite care posed\ `nsu[irile valoroase dorite. Sears, folosind acest\ metod\ la soiul de gru Chinese Spring a reu[it s\ `nlocuiasc\ `n mod planificat pe oricare din cei 21 perechi de cromozomi existen]i. -transferul de gene const\ `n introducerea `ntr-un genotip a unei anumite gene de la o alt\ specie `nrudit\, prin provocarea cu ajutorul iradierii a unor transloca]ii `ntre cromozomii celor dou\ specii. 3.2.1.4.c. Inducerea ploidiei factori ploidizan]i ~n 1980, Gherasimov, ob]ine primii poliploizi artificiali la alga filamentoas\ Spirogyra prin tratarea cu temperaturi sc\zute, eter [i cloroform, ulterior Randolph (1932) dubleaz\ cromozomii la porumb prin [ocuri de temperatur\, pentru ca `n continuare, poliploizii s\ poat\ fi ob]inu]i [i prin regenerarea l\starilor noi din vrfurile vegetative, folosirea poliembrioniei, a centrifug\rii etc. Cea mai mare posibilitate de poliploidizare exist\ prin folosirea colchicinei efect ploidizant descoperit `n 1937 de Blakeslee [i Avery. Ce este colchicina? Este un alcaloid extras din bulbi (semin]ele) brndu[ei de toamn\ (Colchicum autumnale). Cum se folose[te colchicina? Sub form\ de solu]ii apoase, `n amestec cu lanolin\, agar-agar sau cu glicerin\. Concentra]ia solu]iei variaz\ `ntre 0,01 0,50%, iar durata tratamentului poate fi de la 30 minute la cteva zile `n func]ie de specie [i organul tratat. Se trateaz\: - semin]ele `n curs de germinare; - vrfurile vegetative ale ramurilor, tulpinilor, mugurilor. Efectele colchicinei asupra plantelor se materializeaz\ `n: - modific\ri citogenetice - `n mitoz\ colchicina `mpiedic\ formarea fusului nuclear [i deci deplasarea cromozomilor spre cei doi poli ai celulei nu este posibil\, rezultnd astfel o celul\ cu num\r dublu de cromozomi; - modific\ri morfologice plantele formelor poliploide au frunza mai lat\, mai groas\, mai verde, mai dezvoltat\; stomatele au dimensiuni mari, cloroplaste mai multe, iar tulpinile sunt `n general mai groase, mai ramificate sau mai `nalte. Florile sunt de dimensiuni mari, gr\unciorii de polen mari dar fertilitatea este redus\; - modific\ri fiziologice determin\ cre[terea perioadei de vegeta]ie, dar numai pn\ la un anumit grad de ploidie, se manifest\ efectul de gigantism, etc. Prin exagerarea poliploidiei, peste limita posibil\, se `nregistreaz\ o reducere foarte pronun]at\ a taliei, apar nanisme, iar intensitatea cre[terii scade semnificativ. Se men]ioneaz\ c\ poliploizii se mai pot ob]ine [i prin urm\toarele metode: - metoda centrifug\rii prin centrifugare se `mpiedic\ formarea fusului nuclear de diviziune; - metoda regener\rii prin producerea de r\ni plantelor [i prin formarea de calus de poate fi folosit `n regenerarea unor plante (este vorba mai mult de calusul dintre altoi [i portaltoi);

61

metoda poliembrioniei unele semin]e formeaz\ mai mul]i embrioni, unii dintre ace[tia fiind poliploizi; metoda [ocurilor de temperatur\ - care blocheaz\ cromozomii `n metafaz\ ob]inndu-se forme tetraploide; metoda iradierii cu radia]ii ionizante practicat\ la ]esuturile `n stare de diviziune, astfel c\ fusul nuclear fiind distrus [i deci migrarea cromozomilor spre cei doi poli `ntrerupt\; metoda trat\rii cu substan]e chimice - `n afar\ de colchicin\ se folose[te: acenaftena, monobronaftalen, feniluretanul, paradiclorbenzenul, protoxidul de azot etc.

3.2.1.4.d. Folosirea ploidiei (poliploidiei) `n ameliorarea plantelor ~n ameliorarea plantelor, ploidia (poliploidia) ca metod\ conven]ional\ de ameliorare se folose[te astfel: - ~n crearea de noi soiuri prin dublarea num\rului de cromozomi [i ob]inerea tetraploizilor, a[a cum se practic\ la secar\ [i trifoi, se `nregistreaz\ o cre[tere foarte semnificativ\ a capacit\]ii de produc]ie [i chiar a indicilor de calitate. - Ca material ini]ial de ameliorare poliploizii sunt folosi]i, de regul\, `n hibridare. Astfel, prin hibridarea tetraploizilor cu diploizii (cazul sfeclei de zah\r) se ob]in triploizii folosi]i ca s\mn]\ `n ob]inerea r\d\cinilor sfeclei de zah\r. Facem precizarea c\ triploizii sunt sterili [i numai realizarea de organe vegetative impune folosirea lor pentru scopurile de produc]ie. De asemenea, tot la hibridare se folosesc hibrizii amfidiploizi (alopoliploizii) cum ar fi triticalele ( gru x secar\). - ~n realizarea diferitelor tehnici de ameliorare cu scopul de a introduce sau de a elimina anumite caractere / `nsu[iri valoroase / nevaloroase. Astfel se pot realiza tetraploizi rezisten]i la cercosporioz\ la sfecla de zah\r sau se poate mbun\t\]i calitatea bobului de secar\ tetraploid (comparativ cu formele diploide) etc. In ultima vreme, cap\t\ o mare extindere formele haploide, respectiv haploizii. Haploizii, `n ameliorarea plantelor prezint\ urm\toarele caracteristici: -exist\ posibilitatea ob]inerii unui num\r mare de haploizi perfect homozigo]i ceea ce permite ca la hibridare s\ se `nregistreze efectul heterozis maxim `n F1; -se simplific\ [i se scurteaz\ termenul de ob]inere a liniilor homozigote. Pentru aceasta, inducerea artificial\ a haploidiei [i deci ob]inerea haploizilor se realizeaz\ cu urm\toarele metode: - tratarea plantelor mam\, dup\ polenizare cu temperaturi sc\zute sau ridicate (ex. la secar\ cu 30C, la porumb cu 480C); - hibrid\ri interspecifice; - polenizarea `ntrziat\; - stimularea dezvolt\rii oosferei, f\r\ fecundare; - polenizarea cu polen iradiat; - folosirea androgenezei. De[i cu o mare valoare teoretic\ [i cu certe implica]ii practice, haploidia a ocupat, pn\ `n prezent, un loc nesemnificativ `n lucr\rile de ameliorare: aceasta fie datorit\ inciden]ei reduse a haploidiei spontane, fie datorit\ lipsei tehnicii adecvate. 62

3.2.1.5. SELECIA PRACTICAT N PROCESUL DE AMELIORARE 3.2.1.5.a. Importana seleciei n sens larg, selecia (alegerea) reprezint un proces natural sau artificial, care favorizeaz supravieuirea sau nmulirea preferenial a unor plante sau a unui grup de plante. n ameliorarea plantelor se folosete numai selecia artificial. Aceasta constituie o anumit metodologie specific pe care o aplic amelioratorul asupra materialului iniial, din care se extrag i se nmulesc plantele sau grupele de plante ce corespund obiectivelor ameliorrii. Alegerea (selecia) acestor genotipuri noi i valoroase poart denumirea de plante elit i continu pe toat durata procesului de ameliorare i chiar n etapa producerii i nmulirii seminelor. Exist o diferen evident ntre cerinele unei plante elit folosit n procesul de ameliorare i planta elit folosit n procesul producerii de smn, dup cum urmeaz: n procesul de ameliorare planta elit trebuie s corespund obiectivului (obiectivelor) ameliorrii. n procesul producerii de smn -planta elit trebuie s corespund caracterelor i nsuirilor tipice (originale) soiului sau hibridului iniial zonat i omologat. Selecia (alegerea) se practic att n materialul iniial de baz, ct i n materialul iniial nou creat: n primul caz, soiurile nou create se consider obinute prin metoda specific de selecie aplicat, iar n cel de al doilea caz, soiul nou obinut se consider c aparine fie metodei de hibridare, fie consangvinizrii, mutagenezei ori ploidiei (poliploidiei). n acest ultim caz, selecia doar completeaz i finalizeaz obinerea noului soi. Oricum, n funcie de materialul iniial folosit, se adopt metodele difereniate i specifice de selecie. 3.2.1.5.b. Baza teoretic a seleciei const n variabilitatea genotipic a materialului iniial, de eritabilitatea ridicat a caracterelor i nsuirilor urmrite i de posibilitile pe care le are amelioratorul de a gsi, n materialul iniial plantele elit ce corespund scopurilor ameliorrii. ntruct selecia nu creaz forme noi, ci doar reine plantele valoroase din materialul iniial, variabilitatea genotipic a acestuia este hotrtoare pentru eficiena seleciei. Variabilitatea oricrui material iniial (de baz sau nou creat), cuprinde dou componente: variabilitatea caracterelor i variabilitatea nsuirilor acestuia. Caracterele-reprezint totalitatea particularitilor morfologice distinctive ale unui individ ca: form, mrime, culoare, structur etc. nsuirile-reprezint totalitatea particularitilor fiziologice, biochimice i tehnologice ale unui individ ca: precocitate, calitate, rezisten la stresurile climatice i fitopatogenice etc. Oricare caracter sau nsuire al unei forme vegetale, prezint-ntr-o msur mai mare sau mai mic-modificaii i variaii. Modificaiile-reprezint totalitatea variabilitii provocate de ctre condiiile de mediu. Modificaiile nu sunt ereditare i de multe ori ncurc munca amelioratorului deoarece, ntr-o anumit msur acoper variabilitatea. S-a stabilit pe cale experimental c, cu ct gradul de modificabilitate al unui caracter/ nsuire este mai mic, cu att vor fi 63

mascate mai puin variaiile ereditare. Aa se face c pentru selecie se consider drept corespunztoare acele caractere/nsuiri care au un grad redus de modificabilitate (adic V < 10) i drept necorespunztoare acele caractere/ nsuiri cu un grad mai mare al modificabilitii (V > 10). Variaii reprezint totalitatea variabilitii condiionate genetic. Aceast variabilitate genetic se transmite ereditar, prezint cea mai mare importan n procesul de ameliorare i se afl n corelaie invers cu modificaiile. Cu ct variabilitatea genetic va fi mai mare, modificaiile vor fi mai mici, iar ansele reuitei n ameliorare sunt mai mari. Mrimea variabilitii ntr-un anumit grup de indivizi se calculeaz cu ajutorul varianei (s2). Pe aceast baz, dac vom nota modificaiile cu M, iar variaiile genetice cu G i variabilitatea total sau fenotipic cu F, vom avea
F=M+G

sau

s2F = s2M + s2G

Separarea celor dou componente ale variabilitii fenotipice, adic variabilitatea modificaiilor (s2M) i variabilitatea genotipic (s2G) prezint cea mai important preocupare n activitatea de ameliorare. n acest scop s-a stabilit c variabilitatea genotipic, fiind cea care se transmite pe cale ereditar, s fie exprimat prin coeficientul de eritabilitate (heritabilitate) sau variana aditiv (h2). Coeficientul de eritabilitate se determin astfel:
h2 = s2G s 2G = 2 s 2 F s M + s 2G

Determinrile concrete ale acestor indici se realizeaz n cadrul aplicaiilor practice. n afara modificaiilor i variaiilor, n studiul genetic al caracterelor trebuie s se in seama i de existena corelaiilor. Prin corelaie se nelege legtura ce exist ntre dou sau mai multe caractere, legtur ce se manifest de aa manier nct caracterele respective nu se pot despri, transmindu-se ereditar, n bloc. S-a stabilit de asemenea, c exist corelaii aparente, care n realitate sunt modificaii i corelaii reale, condiionate genetic, sunt ereditare fiind datorate fenomenelor de asociere a unor gene. Variabilitatea genotipic este influenat n mare msur de specie, dar, mai ales de modul reproducerii plantelor. La autogame-prin autofecundare continu, rezult genotipuri homozigote, deci, identice din punct de vedere genetic. n acest caz ntreaga variabilitate fenotipic aparine modificaiilor (s2M) provocate de influena condiiilor de mediu. Eventualele variaii genotipice care pot s apar, i aceasta cu totul ntmpltor, se datoreaz mutaiilor, hibridrilor i poliploidizrilor naturale (spontane). Astfel, selecia este eficient doar repetat de maximum 2-3 ori, ntruct imediat se instaleaz uniformizarea populaiilor, rezultnd liniile pure. La alogame-ca urmare a polenizrilor strine repetate, a recombinrilor genetice anuale, populaia se afl ntr-o stare de heterozigoie permanent. Aici variabilitatea genotipic (s2G) este diferit de zero, se menine la valori ridicate, coeficientul de

64

eritabilitate este mare, iar selecia, n special selecia individual repetat este foarte eficient i chiar necesar. La plantele cu nmulire vegetativ-(cartoful) prin reproducerea numai pe cale vegetativ nu se nregistreaz variaii, ci doar modificaii. Variabilitatea genetic, datorat doar mutaiilor, hibridrilor i ploidizrilor spontane, este mic i efectul seleciei redus. 3.2.1.5.c. Clasificarea i caracterizarea metodelor de selecie Prima lucrare ce se execut n cadrul oricrei metode de selecie, const n alegerea plantelor elit. Dup modul cum se aleg plantele elit distingem urmtoarele metode de selecie: 1. Selecia n mas-elitele alese vor fi amestecate i semnate n amestec; 2. Selecia individual-elitele alese vor fi individualizate i urmrite separat n urmtoarele descendene 1.1. Selec]ia `n mas\ negativ\ - din cmpul de alegere se extrag [i se elimin\ toate plantele necorespunz\toare, r\mnnd astfel numai plantele valoroase, care constituie materialul ini]ial valoros [i care se va compara cu martorul `n descenden]ele urm\toare. Metoda are o folosire mai restrns\ `n procesul de ameliorare, dar are o foarte mare utilizare `n sistemul producerii [i `nmul]irii semin]elor, fiind denumit\ prin termenul de purificare biologic\. 1.2. Selec]ia `n mas\ pozitiv\ - din cmpul de alegere se extrag numai plantele elit\ valoroase care corespund obiectivelor amelior\rii. Prin amestecul acestor elite se ob]ine materialul ini]ial valoros care prin `nmul]ire, `n descenden]ele urm\toare se va compara permanent cu martorul. Selec]ia `n mas\ pozitiv\ se prezint\ cu trei variante: a selec]ia `n mas\ pozitiv\ simpl\; b selec]ia `n mas\ pozitiv\ pe grupe; c selec]ia `n mas\ pozitiv\ repetat\. a. Selec]ia `n mas\ pozitiv\ simpl\ Aceast\ metod\ const\ `n extragerea elitelor din cmpul de alegere numai o singur\ dat\. Dup\ analiza elitelor `n laborator [i determinarea caracterelor [i `nsu[irilor, vom elimina cele necorespunz\toare, iar elitele le vom amesteca [i vom constitui materialul valoros ce se va `nmul]i `n descenden]ele viitoare conform schemei din figura 16. Etapele realiz\rii [i lucr\rile specifice care se execut\ `n fiecare an sunt prezentate `n caietul de lucr\ri practice. b. Selec]ia `n mas\ pozitiv\ pe grupe Reprezint\ `n esen]\ o selec]ie `n mas\ pozitiv\ simpl\, cu deosebirea c\ dup\ alegerea elitelor din cmpul de alegere, acestea se analizeaz\ `n laborator, prilej cu care se constituie mai multe grupe de elite `n func]ie de anumite caractere [i `nsu[iri comune. Dac\ la prima metod\ se realizeaz\ un singur amestec cu elitele valoroase, la metoda sele]iei `n mas\ pe grupe, vor rezulta mai multe grupe de elite. Acestea se treier\ separat [i se `nmul]esc `n descenden]e tot separat. Grupa care va `ntrece martorul cu sporuri foarte semnificative pe cmpurile de C.C.C. `n S.C.A. vor fi prezentate pentru C.C.C. `n C.I.S. c. Selec]ia `n mas\ pozitiv\ repetat\

65

Se caracterizeaz\ prin repetarea extragerii elitelor `n decursul mai multor ani, pn\ se realizeaz\ obiectivul urm\rit sau se epuizeaz\ variabilitatea materialului ini]ial. Prin aceast\ metod\ se ob]in forme biologice mai valoroase comparativ cu metodele unei singure alegeri. 2. Selec]ia individual\ Selec]ia individual\ are la baz\ extragerea plantelor elit\ valoroase din cmpul de alegere / sele]ie [i urm\rirea descenden]elor `n mod separat pentru fiecare elit\. ~n felul acesta, amelioratorul are posibilitatea elimin\rii din timp a tuturor elitelor mai pu]in valoroase din punct de vedere genetic [i men]inerea, pentru `nmul]ire, a descenden]elor valoroase. ~n func]ie de particularit\]ile de reproducere a plantelor, selec]ia individual\ prezint\ mai multe metode, astfel: 2.1. Selec]ie individual\ simpl\ (cu o singur\ alegere): a. Pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele autogame; b. Pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele alogame; c. Pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele cu `nmul]ire vegetativ\. 2.2. Selec]ia individual\ repetat\: a. Pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele alogame cu polenizare liber\; b. Pentru popula]iile hibride ale plantelor autogame; c. Pentru ob]inerea [i testarea liniilor consangvinizate; d. ~n cadrul formelor mutante. 2.1.a. Selec]ia individual\ simpl\ pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele autogame Plantele autogame constituind un material ini]ial homozigot, extragerea plantelor elit\ care corespund obiectivelor amelior\rii se face numai o singur\ dat\. ~n continuare, descenden]a fiec\rei plante elit\ se urm\re[te individual [i poart\ denumirea de linie. 2.1.b. Selec]ia individual\ simpl\ pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele alogame ~n cazul plantelor alogame, aplicarea unei selec]ii prea strnse (stricte) cu izolarea indivizilor [i a descenden]elor duce, `n mod nemijlocit, la s\r\cirea genetic\ [i a bazei ereditare, la cre[terea homozigo]iei [i sc\derea heterozigo]iei. Consecin]a direct\ a acestei situa]ii o reprezint\ sc\derea productivit\]ii, chiar dac\ se `nregistreaz\ progrese vizibile la uniformitate, la rezisten]a pentru anumite boli etc. (V. Naghiu 1978). Apare a[a-numitul paradox al selec]iei: f\r\ selec]ie nu se poate ob]ine nimic valoros, iar cu selec]ie prea strns\ (strict\), produc]ia scade sub nivelul ini]ial. ~n acest context metodele selec]iei individuale pentru alogame cap\t\ unele nuan]e specifice, `n compara]ie cu plantele autogame. Astfel selec]ia individual\ simpl\ se combin\ cu dirijarea poleniz\rii, cu izolarea `n timp [i spa]iu, cu folosirea selec]iei `n mas\ negativ\ `nainte de `nflorit [i cu aplicarea metodei rezervei de s\mn]\ sau a metodei jum\tate [tiulete/ calatidiu pe rnd.

66

Extragerea plantelor elit\ se face o singur\ dat\ din cadrul unui material heterozigot, al cmpului de alegere (figura 20), iar descenden]ele fiec\rei plante elite poart\ denumirea de familie. Caracteristica de baz\ a metodei rezervei de s\mn]\ (jum\tate [tiulete pe rnd), const\ `n faptul c\ pe timpul verific\rii `n descenden]\ a valorii plantelor elit\, se p\streaz\ `n laborator o rezerv\ de s\mn]\ ce va fi folosit\ `n urm\toarele verigi de ameliorare numai `n cazul cnd descenden]a respectiv\ a dep\[it foarte semnificativ martorul zonat sau `ndepline[te cerin]ele obiectivelor amelior\rii. 2.1.c. Selec]ia individual\ simpl\ pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele cu `nmul]ire vegetativ\ (cartoful) De[i plant\ autogam\, cartoful se `nmul]e[te mai mult pe cale vegetativ\ folosinduse tuberculii ca material de plantare. De altfel, `nmul]irea pe cale vegetativ\ se mai practic\ la vi]a de vie, la pomi [i la unele specii floricole. Metoda de lucru pe care se bazeaz\ selec]ia individual\ simpl\ la aceste plante este asem\n\toare cu cea aplicat\ alegerii individuale simple de la plantele autogame. Se practic\ o singur\ alegere datorit\ faptului c\ variabilitatea fenotipic\, la `nmul]irea pe cale vegetativ\, apar]ine `n totalitate condi]iilor de mediu, iar variabilitatea genotipic\ lipse[te. Avem deci s2F = s2M `n timp ce s2G =0. La hibrizii ob]inu]i pe cale generativ\ (prin castrare [i fecundare dirijat\), s\mn]a ob]inut\ F0, se seam\n\ `n ser\, dup\ care plantele se transplanteaz\ `n cmp [i tuberculii ob]inu]i F1 pot fi selecta]i ca plante elit\ `ntruct `nmul]irea, `n continuare pe cale vegetativ\ men]in neschimbate caracteristicile noului hibrid. Pentru a ob]ine segregarea caracterelor `n F2, F3........Fn sunt necesare `nmul]irile numai pe cale generativ\ (semin]e). Descenden]ele unui singur individ, `nmul]it pe cale vegetativ\ se nume[te linie vegetativ\ sau clon/clon\. Un clon poate lua na[tere din: a) diferite organe vegetative ale plantei (tubercul, rizom, bulbi, buta[i, marcote etc.); b) celulele mam\ care nu au suferit diviziunea reduc]ional\; c) indivizii altoi]i pe diferi]i portaltoi. Schema selec]iei individuale simple la plantele cu `nmul]ire vegetativ\ (cartof) se prezint\ `n figura 21. 2.2.a. Selec]ia individual\ repetat\ pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele alogame cu polenizare liber\ Dirijarea poleniz\rii `n cadrul familiilor [i grupelor de familii pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele alogame prezint\ foarte mare importan]\ deoarece, `n cazul poleniz\rii libere alegerea elitelor sa face numai dup\ caracterele materne. Heterozigo]ia natural\ dominant\ [i variabilitatea genotipic\ pronun]at\ ce caracterizeaz\ soiurile plantelor alogame nu se poate realiza numai printr-o singur\ alegere a elitelor; se impune deci, repetarea selec]iei individuale prin extragerea plantelor elit\ din cadr ul diferitelor familii, `n concordan]\ cu unele m\suri speciale (izolare spa]ial\, izolarea `n timp, constituirea grupelor de familii, dirijarea poleniz\rii etc.). Metoda de baz\ folosit\ `n selec]ia individual\ repetat\ pentru soiurile locale [i ameliorate la plantele alogame este cea pe grupe de familii.

67

3.2.2. METODE NECONVENIONALE FOLOSITE N AMELIORARE Dei aportul metodelor convenionale n ameliorarea plantelor nu a fost epuizat complet, se contureaz prerea c agricultura viitorului se va gsi ntr-un impas generat de cerinele alimentare mereu n cretere i diminuarea surselor de producere a acestora. n acelai timp, geneticienii i amelioratorii consider c ieirea din acest impas este posibil prin crearea de noi genotipuri de plante prin metode neconvenionale care permit cumularea n structura ereditar a unei plante a unui numr mare de gene valoroase, chiar dac acestea se gsesc la specii ndeprtate taxonomic. Menionm c metodele convenionale de ameliorare nu pot rezolva acest transfer, datorit existenei unei mari diferene ntre genele speciilor ndeprtate taxonomic. Dintre asemenea bariere menionm: macrostructuri de mperechere, bariere prin nepotriviri cromozomale, de sinaptizare i disjuncie, n incongruena moleculelor de la nivelul ADN, ARN i a proteinelor, absena omologiilor dintre secvenele nucleotidelor, nepotrivirea subunitilor proteice de a forma enzime oligometrice sau multimetrice etc. Recombinrile interspecifice obinute n ultimile decenii, graie ansamblului de metode neconvenionale cuprinse n genericul inginerie genetic ofer anse reale de rezolvare la timp i integral a tuturor cerinelor de consum ce le solicit viitorul mileniu. Facem precizarea c toate metodele neconvenionale opereaz cu gene, cromozomi, celule, esuturi sau organe ntregi, fr participarea proceselor sexuale ci, numai a proceselor asexuate (vegetative). Sunt considerate, pn n prezent, ca metode neconvenionale ce se folosesc n ameliorarea viitoarelor genotipuri de plante, urmtoarele: 3.2.2.1. Tehnologia ADN recombinant; 3.2.2.2. Culturile in vitro; 3.2.2.3. Metoda haploidiei; 3.2.2.4. Hibridrile somatice (hibridrile celulare). 3.2.2.1. TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT Revoluia eficienei biologice reprezint un concept lrgit n care pot fi incluse toate interveniile omului asupra patrimoniului ereditar al organismelor vii n scopul transformrii lor potrivit intereselor practice. Obiectivul major al modificrii organismelor este crearea de ideotipuri care s reuneasc caractere i nsuiri avantajoase ce se afl dispersate n cadrul varietilor dintr-o specie sau chiar n cadrul speciilor mai ndeprtate. Asemenea noi recombinri de material genetic prin metode convenionale, mai ales ntre speciile ndeprtate sunt supuse unor numeroase bariere ca: dificulti de mperechere, nepotriviri cromozomiale, incongruene moleculare la nivelul ADN, ARN i chiar a proteinelor. Toate asemenea obstacole n realizarea de recombinri interspecifice pot fi depite prin folosirea unor noi tehnici i tehnologii cuprinse ntr-un termen generic de inginerie genetic, cu scopul de a obine noi structuri genetice cu proprieti premeditate. Pn n prezent, cea mai cunoscut i utilizat metod a ingineriei genetice o reprezint TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT metod ce permite amplificarea 68

unor fragmente de ADN ori ansamblarea diferit a unor fragmente de ADN n cadrul unui genom, astfel nct se obine o nou structur genetic. De asemenea, prin aceeai tehnologie, se poate introduce ntr-un organism receptor gene diferite ce pot contribui la realizarea unei protecii biologic active, la creterea capacitii de replicare i exprimare fenotipic etc. Tehnologia ADN recombinant reprezint i un instrument valoros n cunoaterea bazelor genetice fundamentale, n manipularea/clonarea genelor pentru obinerea de noi organisme programate. n acelai timp, fiind un instrument de introspecie a materialului genetic, tehnologia ADN recombinant faciliteaz analiza expresiei genice, a reglrii expresiei genice, contribuie la elucidarea mecanismelor de transfer, la studiul rearanjrilor genetice pe timpul diferenierii i embriogenezei. Astfel prin manipularea genelor exist posibilitatea obinerii unor progrese remarcabile n urmtoarele direcii generale: 1 Modificarea genetic a microorganismelor sub raport cantitativ/calitativ, dar i prin obinerea de noi produse microbiene (enzime, antibiotice etc.). 2 Modificarea genetic a plantelor superioare prin creterea productivitii, mbuntirea indicilor calitativi, introducerea capacitii de fixare a azotului atmosferic. 3 Transferul de gene la microorganisme pentru a sintetiza noi proteine, hormoni. 4 Transformarea genetic a celulelor ce prezint defecte ereditare. Obiectivele majore ale tehnologiilor ADN recombinant sunt, deci, obinerea de noi substane deosebit de valoroase, cu costuri reduse, valorificarea materiilor prime i a materialelor neexploatate, echilibrarea balanei proteice, energice etc. 3.2.2.2. CULTURILE IN VITRO Culturile de explante in vitro, fragmente sau celule detaate din plante superioare, reprezint biotehnologii de mare perspectiv n dezvoltarea unor industrii (n prezent i n viitorul apropiat), biotehnologii care deja au revoluionat practica agricol tradiional n special n domeniul producerii de smn i de material sditor. Succesele din ultimii ani obinute n realizarea de embrioni somatici fac posibile, din punct de vedere tehnic i tehnologic, automatizarea operaiunilor de recoltare a acestora din mediul de cultur i ncapsularea lor pentru producerea de semine artificiale. De asemenea, exist posibilitatea robotizrii ntregului lan tehnologic de operaii in vitro ceea ce va asigura o mrire a eficienei muncii de multiplicare clonal, pe medii aseptice la o serie de plante cu interes economic i cu scderea treptat a costurilor materialului semincer i sditor. ~nmul]irea plantelor ~nmul]irea capacitatea plantelor de a da na[tere la urma[i, la genera]ii succesive care asigur\ perpetuarea speciei [i `ns\[i existen]a / men]inerea vie]ii pe p\mnt. ~n linii generale se consider\ ~NMUL}IREA = REPRODUCEREA. ~nmul]irea/ reproducerea plantelor nu se mai face la `ntmplare ci `n anumite restric]ii, dintre care, cea mai important\ o reprezint\ EREDITATEA. Deci noul organism viu ob]inut ca rezultat al `nmul]irii / reproducerii posed\ acelea[i caractere [i `nsu[iri ca ale p\rin]ilor, acestea fiind transmise pe cale ereditar\; informa]ia genetic\ respectiv\ fiind localizat\ `n moleculele de ADN ce compun nucleul celular. Se men]ioneaz\ [i posibilitatea interven]iei omului / condi]iilor naturale de a modifica baza genetic\ a organismelor vii prin realizarea unei variabilit\]i genetice mai 69

pronun]ate, astfel c\ noile organisme vii au posibilitatea adapt\rii mai bune la noile condi]ii create natural / artificial. Reproducerea sexuat\ - poate fi: - amfimixie (reproducere sexuat\) = descenden]i proveni]i prin contopirea a dou\ fluxuri informa]ionale genetice; - autopolenizarea (autogamia) = descenden]ii proveni]i prin contopirea game]ilor proveni]i de la un singur individ; - apomixia (parasexualitate) = descenden]i proveni]i f\r\ fecunda]ie [i provin dintr-un unic flux informa]ional genetic. ~n aceast\ categorie distingem: - Aposporia = ob]inerea de embrioni din macrospori, f\r\ desf\[urarea diviziunii reduc]ionale. ~n acest caz macrosporul este dipliod [i este similar\ aposporiei somatice; - Partenogeneza = formarea de embrioni pe cale apomictic\ (dinoosfer\ nefecundat\); - Apogamia = formarea embrionilor din celulele gametofitului femel [i nu din oosfer\; - Embriogenia adventiv\ = formarea embrionilor din celulele diploide ale ovarului, din afara sacului embrionar; - Poliembrionia = formarea embrionilor pe cale apomictic\, din p\r]i ale sacului embrionar. Este frecvent la gimnosperme. Reproducerea asexuat\ / `nmul]irea vegetativ\ Este denumit\ [i `nmul]ire clonal\. Prezint\ urm\toarele caracteristici: - asigur\ o anumit\ stabilitate genetic\ descenden]ilor; - realizeaz\ o uniformitate ridicat\ `ntre descenden]i [i mam\; - clonarea reprezint\ metoda de baz\ pentru culturile in vitro. Metodele de multiplicare vegetativ\ provocat\ sunt: 1. Metode tradi]ionale divizare, separare tufe - but\[ire - marcotaj - altoire 2. Metode IN VITRO - cultur\ de apex sau de meristeme - minibut\[ire -minimarcotaj orientarea plagiotrop\ a l\starilor pe suprafa]a substratului de cultur\ - microaltoire - regenerare din - inoculi - fragmente tisulare - calus - culturi celulare - protopla[ti - embriogenez\ Unii autori consider\ culturile in vitro cre[terea pe medii sintetice sterile a unor fragmente vegetale (explante sau inoculi), macroscopice (meristeme, organe) sau microscopice (celule, protopla[ti etc.). Avantajele acestei metode sunt multiple: - se conserv\ nealterat\ zestrea genetic\ ereditar\ a plantei; 70

se realizeaz\ o stabilitate genetic\ a descenden]ilor, to]i indivizii ob]inu]i dintr-o clon\ sunt copii fidele ale donatorului; - se ob]ine o multiplicare mai rapid\ a plantelor valoroase. Desprinderea de pe organismul vegetal-donator (tn\r sau adult) a fragmentelor macro sau microscopice [i inducerea declan[\rii proceselor de diviziune-regenerare reprezint\ o performan]\ major\ `n biologie. Reu[ita culturilor in vitro este `n strns\ leg\tur\ cu dotarea laboratoarelor [i cu `nalta specializare a celor ce activeaz\ `n acest domeniu. ~nceperea unei asemenea activit\]i (culturile in vitro) necesit\ parcurgerea urm\toarelor etape (figura 34): - cunoa[terea materialului ini]ial (varietate, regim ecologic, vrsta, starea fiziologic\, adaptarea etc.); stabilirea obiectivelor (scopului) pentru care se ini]iaz\ culturile in vitro. Aceste obiective pot fi: multiplicarea clonal\ rapid\ a unor exemplare vegetale valoroase; ob]inerea de material s\ditor devirozat; ob]inerea de plante haploide; producerea de calus; culturi de celule (pentru producerea de biomas\ ce va metaboliza substan]e farmacologice active, proteine etc.); ob]inerea de linii celulare cu rezisten]e la stresuri; multiplicare clonal\ rapid\ etc.; culturi de protopla[ti (pentru hibrid\ri somatice); - stabilirea mediului din care pot proveni explantele (mediul natural de via]\ sau mediul aseptic din calus, celule, protopla[ti etc.); - stabilirea materialului vegetal donator de explant care este `n strns\ dependen]\ cu obiectivul dorit. Dac\ dorim forme noi rezistente, explantele vor fi recoltate de la plantele care posed\ aceast\ rezisten]\. De asemenea, sunt cunoscute reac]iile diferite ale explantelor `n func]ie de specie, varietate, pozi]ia pe ramifica]ia plantei (baz\, mijloc, vrf ori zon\ umbrit\, `nsorit\, distan]a fa]\ de r\d\cin\ etc.); natura [i func]iile ]esutului; sezonul [i stadiul de vegeta]ie al plantei. Izolarea explantelor Explant = fragment deta[at din plant\ (organe, ]esuturi, celule, protopla[ti etc.) [i cultivat `n condi]ii artificiale, pe medii sterile, o durat\ mai mare de 24 ore. Prelevarea explantelor din materialul biologic donator trebuie f\cut\ `ntr-un timp ct mai scurt, `n condi]ii aseptice [i cu uniformitate pronun]at\. Dimensiunea explantului s\ fie minim\, dar s\ asigure deplina manifestare a totipoten]ialit\]ii celulelor sale. Opera]iunile de izolare a explantelor se realizeaz\ `n boxe sterile. Inocularea explantelor poate fi realizat\ pe medii de cultur\ solide sau lichide. Mediile de cultur\ solide sunt mai u[or de inoculat dar, se cere ca inoculii s\ fie orienta]i polar [i izola]i `ntre ei. Mediile de cultur\ lichide nu pretind orientarea polar\ a inoculilor, asigur\ o accesibilitate mai bun\ a elementelor nutritive dar, prezint\ greut\]i la inoculare, manipulare [i necesitat\ agitare pentru aerare. Incubarea explantelor are loc `n camere de cre[tere (vegeta]ie) cu regimul de climatizare programat (controlat). Aici flacoanele cu explante, puse `ntr-o anumit\ ordine, stau 12 s\pt\mni, perioad\ cnd are loc inducerea proceselor regenerative.

71

Regenerarea inoculilor proveni]i de la plantele ierboase, are loc `n 12 s\pt\mni, iar la plantele lemnoase `n 4560 zile. Regenerarea se finalizeaz\ cu: formarea de calus (ini]ial neorganizat, `n final poate genera chiar independent r\d\cini, mugura[i); formarea de muguri (apari]ia tulpini]elor, care genereaz\, la baz\ r\d\cini]e); formarea de r\d\cini [i formarea de embrioni somatici. Aclimatizarea noilor plante se `ncepe chiar `n camera de regenerare, prin trecerea lor din mediul gelozat-septic pe un mediu inert (perlit, nisip) sau `n amestec cu turb\, argil\ etc. Durata aclimatiz\rii este de 34 s\pt\mni. Considerat\ ini]ial o metod\ rapid\ de multiplicare a unui genotip, culturile in vitro devin ast\zi una din metodele importante ale procesului de ameliorare. Majoritatea cercet\torilor din acest domeniu constat\ c\ noile descenden]e ob]inute prin regenerarea in vitro nu sunt `n totalitate copii perfecte ale plantei parentale, `nregistrndu-se astfel o pronun]at\ variabilitate fenotipic\, denumit\ varia]ie somaclonal\. Printre mecanismele intime, celulare [i moleculare, care determin\ variabilitatea somaclonal\ avem: varia]ia num\rului de cromozomi prin poliploidizare / aneuploidizare, restructur\rile cromozomiale, amplificarea genetic\, restructur\rile intragenice, muta]iile genice nucleare [i extranucleare, recombinarea genetic\ mitotic\ reciproc\ [i nereciproc\, metilarea unor secven]e de ADN [i inactivarea lor, transpozi]ia unor gene cu ajutorul transpozonilor. 3.2.2.3. HAPLOIDIA reprezint starea (condiia) ca un organism, esut ori celul s fie constituit din numrul de cromozomi pe care i posed gameii normali ai speciei respective (forma diploid = 2n, haploid = n). La plantele superioare (forme diploide sau poliploide) starea de haploidie se confrunt cu greuti datorate dominanei, segregrii etc. Haploidia (tehnica de cultur a anterelor) capt o extindere continu, astfel c n prezent s-au obinut haploizi la 150 specii, care aparin la 52 genuri i 23 familii mono i dicotiledonate. Pn\ nu demult termenul de haploidie apar]inea botanicii, fiind consacrat pentru faza gametofit\, care con]ine numai jum\tate din num\rul somatic de cromozomi. Dup\ anul 1921, cnd Bergner a observat sporofi]i de Datura cu num\r haploid de cromozomi, `n no]iunea de haploidie sunt inclu[i [i indivizii `n celulele c\rora num\rul de cromozomi este redus la jum\tate fa]\ de forma lor ini]ial\. Haploizii apar spontan, dar pot fi ob]inu]i [i pe c\i artificiale, att la speciile diploide ct [i la speciile poliploide, num\rul lor de cromozomi depinznd de gradul de ploidie al speciei ini]iale. ~n func]ie de natura haploizilor Katayama `i clasific\ dup\ comportarea cromozomilor `n meioz\ `n monohaploizi, proveni]i din specii diploide [i polihaploizi, proveni]i din specii poliploide. Haploizii speciilor tetraploide se mai numesc euhaploizi, iar cei care con]in cromozomi sau fragmente de cromozomi `n plus sau `n minus se numesc heterohaploizi. ~n anul 1963, Kimber [i Riley au introdus o nou\ clasificare incluznd toate modific\rile posibile ale genomului.

72

Euhaploizi Haploizi Aneuhaploizi

Monohaploizi Alopolihaploizi

Autopolihaploizi Alopolihaploizi

Disomici Adi]ionali Nulisomici Substitui]i Tipuri combinate

Sporofi]ii haploizi se dezvolt\ fie partenogenetic, prin apogamie, din oosfere nefecundate, fie prin androgenez\ `n urma inactiv\rii oosferei, urmat\ de dezvoltarea spermatiei paterne. Majoritatea haploizilor apar `n urma fenomenului de apogamie. Dup\ datele lui Kimber [i Riley haploidia a fost descoperit\ la 71 de specii ce fac parte din 39 de genuri [i 16 familii. Plantele haploide prezint\ un interes deosebit att teoretic ct [i practic. Din punct de vedere teoretic prin intermediul haploizilor se pot rezolva o serie de probleme privind formarea speciilor diploide, auto [i alopoliploide. Prin `ncruci[area formelor haploide cu cele diploide se ob]in forme aneuploide cu ajutorul c\rora se pot stabili grupele de `nl\n]uire, constitu]ia genomal\ diploid\ [i alte probleme privind ac]iunea [i interac]iunea genelor. Din punct de vedere practic, prin metoda haploidiei se ob]in linii uniforme, constante, reducndu-se selec]ia `ndelungat\ a liniilor la un singur ciclu. Factorii recesivi, letali precum [i cei nefavorabili se exteriorizeaz\ imediat dup\ diploidizarea haploizilor, ceea ce permite ob]inerea de linii diploide homozigote, valoroase. ~ncruci[area liniilor, eliberate de genele nefavorabile, asigur\ manifestarea unui heterozis ridicat la hibrizi pentru crearea de linii diferite se recomand\ s\ se lucreze cu forme hibride, care formeaz\ game]i varia]i. La ICCPT Fundulea primele experien]e privind crearea de linii diploide homozigote dup\ metoda CHASE au fost ini]iate `n anul 1964. Ca forme materne s-au folosit 5 popula]ii, 5 soiuri [i 7 hibrizi simpli de porumb. ~n urma trierii semin]elor colorate [i a plantulelor care au prezentat colora]ie antocianic\ au fost ob]inute mai multe plante haploide care, dup\ tratarea cu colchicin\, au fost transformate `n linii diploide homozigote, constante. Frecven]a haploizilor a fost cuprins\ `ntre 0,023 % la hibridul simplu 405 mam\ [i 0,07 % la soiul ICAR 54. Pe `ntreaga experien]\ frecven]a haploizilor a fost de 0,018%, ceea ce reprezint\ 0,18 haploizi la 1000 de semin]e recoltate sau 0,22 la 1000 de semin]e necolorate. O importan]\ deosebit\ pentru ameliorarea plantelor prezint\ haploizii ob]inu]i prin androgenez\, care permit accelerarea ob]inerii de analogi androsterili, necesari `n procesul de creare al hibrizilor la diferite plante de cultur\. Metoda cre\rii de analogi androsterili const\ `n `ncruci[area liniilor marcatoare androsterile cu liniile la care dorim s\ cre\m analogi androsterili. ~n cazul porumbului, `n urma `ncruci[\rii se re]in ca haploide acele semin]e care nu prezint\ urme de antocian `n embrion sau endosperm. Semin]ele sunt puse la germinat, iar dintre plantule se elimin\ acelea care prezint\

73

colora]ie antocianic\. Se efectueaz\ verificarea dup\ num\rul de cromozomi [i se trece la diploidizarea haploizilor. Se ob]ine pe aceast\ cale un analog androsteril `ntr-un timp foarte scurt. Rezultatele metodei depind `n mare parte de modul `n care combina]ia dintre linia marcatoare, transformat\ `n linie androsteril\ [i linia tat\ asigur\ apari]ia de haploizi androgeni. O alt\ surs\ pentru ob]inerea de haploizi este poliembrionia. Prin poliembrionie se `n]elege fenomenul form\rii de mai mul]i embrioni `ntr-o singur\ s\mn]\. Pentru crearea de forme haploide prezint\ interes numai acele plantule care provin din transformarea `n embrion a sinergidelor [i antipodelor, sau prin divizarea embrionului imediat dup\ fecundare. Prin intermediul poliembrioniei au fost ob]inute forme haploide la floarea soarelui, gru, orez, secar\, lucern\, tomate, ardei [i alte plante de cultur\. La gru, primele plantule haploide au fost descrise de c\tre Kihara `n anul 1936. Frecven]a haploizilor `n cazurile de poliembrionie ajunge pn\ la 87%. S-a constatat c\ apari]ia poliembrionilor este condi]ionat\ de gene recesive [i este des `ntlnit\ `n urma autofecund\rii plantelor posesoare de astfel de gene recesive, cumulate prin autofecundare `n stare homozigot\. Sunt folosite, pn\ `n prezent, urm\toarele metode `n androgenez\: Cultura de antere cea mai veche [i mai folosit\. Polenul se dezvolt\ `n interiorul anterelor, fie sub forma unor structuri organizate embrioizi, fie sub forma unor mase neorganizate de celule calus. Cultura de inflorescen]e folosit\ la plantele cu florile mici Cultura de polen - precedat\ de cultura anterelor, pentru a se `mpiedica degenerarea polenului dup\ izolare. Pe suprafa]a unui strat sub]ire de mediu lichid, anterele plutesc u[or, se deschid [i elibereaz\ polenul `n mediul unde se vor dezvolta `n continuare. Etapele de lucru `n laborator, constau `n: - Recoltarea mugurilor florali; - Sterilizare; - Selec]ia anterelor `n stadiul optim de dezvoltare; - Tratamente specifice inflorescen]elor; - Preg\tirea culturilor; - Incubarea; - Regenerarea plantelor din calus; - Acomodarea plantelor pentru condi]iile de sol; - Transferul plantelor `n sol. Plantele ob]inute (haploizi) reprezint\ genotipuri homozigote cu o stare de homozigo]ie perfect\, ceea ce ofer\ posibilitatea ca prin hibridare s\ se `nregistreze efect heterozis maxim. Avantajul major al acestei metode const\ `n durata scurt\ de ob]inere a formei homozigote, propor]ia total\ a homozigo]iei [i scurtarea duratei procesului de ameliorare.

74

Fig 35. Reprezentarea schematic\ a androgenezei experimentale directe [i reciproce

3.2.2.4. HIBRIDRILE SOMATICE Realizarea de soiuri/hibrizi superintensivi care s asigure o producie medie de 12 15 t/ha la gru i orz, de 20 25 t/ha la porumb etc., impune modificarea fundamental a substratului genetic, a morfologiei, fiziologiei, biochimiei i ecologiei plantelor, adic transformarea lor genetic. Sunt necesare: - ruperea i recombinarea genetic a unor grupe linkage naturale pentru a depi antagonismele genetice dintre capacitatea de producie i nsuirile de rezisten sau dintre producie i calitate; - folosirea de noi surse de germoplasm; - ncorporarea genelor de rezisten la noile genotipuri. Aceast transformare genetic se poate realiza cu metodele convenionale de ameliorare numai n anumite limite, dup care este necesar folosirea de metode neconvenionale ce aparin ingineriei genetice, cum ar fi: tehnologia ADN recombinat, culturile in vitro i hibridrile somatice. La hibrid\rile somatice trebuie `ndeplinite urm\toarele trei condi]ii: 1. Prima condi]ie [i fundamental\ pentru finalizarea hibrid\rilor somatice o reprezint\ omnipoten]a celulei vegetaleadic\ proprietatea acesteia de diferen]iere [i rediferen]iere, realizndu-se prin aceasta posibilitatea reconstituirii unei plante `ntregi, identic\ cu cea standard, pornindu-se de la o singur\ celul\ somatic\.

75

Literatura de specialitate men]ioneaz\ c\, `n ciuda dificult\]ilor [i limitelor existente, majoritatea plantelor angiosperme `[i regenereaz\ `ntreaga plant\ pornindu-se numai de la o singur\ celul\. Astfel, dup\ Vasil [i colab. 1979, enumer\ posibilitatea regener\rii de plante `ntregi pornindu-se de la singur\ celul\, la un num\r de 331 specii, la care, prin tehnicile de cultur\ in vitro, s-au ob]inut ]esuturi izolate, muguri, tulpini, embrioizi sau plante `ntregi. 2. A doua condi]ie, tot fundamental\, o reprezint\ extensia acestei propriet\]i la nivelul protopla[tilor. {i aceast\ posibilitate s-a demonstrat practic, dup\ Takebe I. [i colab. 1971, la un num\r de 30 specii. Protoplastul celul\ vegetal\ cu membrana celulozic\ distrus\ pe cale mecanic\ sau enzimatic\. Se mai nume[te [i celul\ nud\, dar care este capabil\ de regenerarea unei noi membrane, de cre[tere [i diviziune. ~ncepnd cu 1970, Power [i colab. prezint\ o metod\ practic\ de inducere a unei noi fuziuni intra [i interspecifice a protopla[tilor, dup\ care, `n 1972, Carlson [i colab. realizeaz\ primul hibrid somatic prin fuziune de protopla[ti. Cu aceast\ ocazie, colectivul de autori a pus `n eviden]\ calit\]ile cu totul deosebite ale protoplastului vegetal, starea de competen]\ a celulei vegetale att pentru fuziune [i hibridare somatic\, dar, mai ales, pentru recep]ionarea [i transmiterea informa]iei genetice str\ine. Protopla[tii pot fi izola]i prin metode mecanice, dar mai ales, prin metode enzimatice cum sunt enzimele pectinolitice [i celulozolitice. Dup\ izolare, protopla[tii sunt transfera]i pe mediile de cultur\ speciale unde se realizeaz\ refacerea peretelui celular (membrana), diviziunea celular\, diferen]ierea (organogeneza) pentru ca `n final s\ se realizeze o nou\ plant\ (figura 36). Protopla[tii pot fi izola]i dintr-o mare varietate de ]esuturi [i organe dar, cel mai adesea, sunt folosite calusurile ce rezult\ din mezofilul foliar. Procedeul se desf\[oar\

76

astfel: explantul din mezofilul foliar al unei plante din specia cu care se lucreaz\ este
Diferen]iere Calus Colonii de celule Frunz\ Agregate celulare Diviziuni celulare
Regenerarea peretelui celular

Regenerare

Segment cu mezofilul expus Suspensie Calus Explant Tratament enzimatic

PLANT|

Filtrare

S\mn]a

~ndep\rtarea enzimelor prin centrifugare

Suspendarea protopla[tilor `n mediul de cultur\

Cultivarea protopla[tilor

Protopla[ti izola]i

Izolarea [i cultura protopla[tilor

tratat cu enzime pectinolitice / celulozolitice [i apoi imediat ce peretele celular a fost distrus se `ndep\rteaz\ ct mai repede posibil solu]ia enzimatic\ pentru a nu se afecta [i con]inutul celular. ~n acela[i timp, dup\ `ndep\rtarea solu]iei enzimatice, protopla[tii se trec pe mediile speciale de cultur\ care con]in obligatoriu [i stabilizatori osmotici, deoarece noii protopla[ti sunt foarte sensibili la varia]ia de presiune osmotic\. Protopla[tii pot fi cultiva]i `n mediu agarizat sau `n suspensii `n pic\turi sau microcamere. Indiferent de mediul de cultur\ folosit, o reu[it\ `nseamn\ refacerea peretelui celular [i intrarea protoplastului `n regenerare, ob]inndu-se calus sau, `n cazuri foarte bune, regenerarea unei plante normale, demonstrndu-se astfel omnipoten]a protopla[tilor.

Prima fuziune a protopla[tilor a fost realizat\ de Power 1970, prin tratare cu NaNO3. Ulterior condi]iile de fuziune au fost `mbun\t\]ite (Keller [i Melchers, 1973), iar 77

3 A treia condi]ie fundamental\ pentru realizarea hibrid\rilor somatice este proprietatea protopla[tilor de a fuziona unii cu al]ii [i de a capta macromolecule, organite celulare [i microorganisme.

procedeul de fuziune cu adev\rat eficient se consider\ a fi cel al aglutin\rii cu PEG (polietilenglicol sau carbowax). Fuziunea poate fi realizat\ att `ntre protopla[tii de acela[i tip, (fuziuni homocariote) ct [i `ntre protopla[ti diferi]i (fuziuni heterocariote). ~n acest ultim caz produsul ob]inut este o celul\ hibrid\ (heterocarionul); dac\ intr\ `n fuziune d\ na[tere unei clone de ]esut hibrid, din care poate regenera o plant\ ce se va numi hibrid somatic. Cultura protopla[tilor dup\ fuziune se face, de regul\, `n amestec heterocarionii, homocarionii [i protopla[tii nefuziona]i; selec]ia heterocarionilor din mediile de selec]ie [i a plantelor regenerate se face numai pe baza markerilor. Metodele de selec]ie folosite pn\ `n prezent [i care au la baz\ markerii genetici sau biochimici sunt: 1. Selec]ia pe baza diferen]ei de cre[tere a coloniilor de celule pe anumite medii (Carlson 1972; Smith 1976 hibridul Nicotiana glauca x Nicotiana langsdorfii) 2. Selec]ia pe baza corect\rii prin complementaritate a deficien]elor clorofiliene (haploide, albinotice, sensibile la lumin\ etc.) dup\ Melchers, Labib 1974; Gleba 1975 cu hibrizi dintre dou\ variet\]i de Nicotiana tabacum. 3. Selec]ia pe baza complementarit\]ii a dou\ `nsu[iri cum ar fi diferen]a de cre[tere a calusului provenit din protopla[ti pe un anumit mediu [i diferen]a de sensibilitate la actinomicina D (Power [i colab. 1976 la hibridul Petunia hybrida x Petunia parodii). 4. Selec]ia pe baza diferen]ei de sensibilitate, sau rezisten]a la antibiotice, analogi ai bazelor purinice (ex. 5 bromdioxiuridin\), erbicide sau toxine produse de patogeni vegetali. Markerii din categoria toxinelor produse de patogeni vegetali au [i importan]\ practic\ fiind utilizate [i pentru inducerea de muta]ii. 5. Selec]ia pe baz\ de auxotrofie pentru vitamine, aminoacizi. 6. Selec]ia pe baza diferen]ei de sensibilitate la c\ldur\ [i lumin\ 7. Selec]ia pe baza markerilor biochimici spectrele de izoenzime cum ar fi peroxidaza, esteraza analiza]i cu ajutorul eletroforezei `n gel. Prin aceast\ metod\, mult mai modern\, este posibil\ diferen]ierea tuturor genotipurilor, chiar [i a celor foarte apropiate. Trebuie [tiut c\ prin selec]ia timpurie, chiar `n stadiul primelor celule hibride, se asigur\ posibilitatea identific\rii de hibrizi valoro[i care, de regul\, sunt [i foarte sensibili, mai pu]in viabili, iar amestecul pe o durat\ mai mare cu homocarionii [i protopla[tii nefuziona]i poate determina dispari]ia sau distrugerea heterocarionilor (Vasil 1979). ~n concluzie, pentru realizarea unei hibrid\ri somatice sunt necesare: - genitori somatici adecva]i; - markeri genetici cu exprimare morfofiziologic\ sau biochimic\; - metod\ sigur\ de izolare a protopla[tilor; - agent de inducere eficient\ a fuziunii; - posibilitatea selec]iei celor mai valoro[i hibrizi somatici. Num\rul hibrizilor somatici realiza]i pn\ `n prezent (tabelul 15), cuprinde plante la care se pot realiza hibrizi [i pe cale sexuat\. Diferen]ele dintr-un hibrid sexuat [i un hibrid somatic sunt urm\toarele: - hibrizii somatici con]in mai mult ADN, deci mai mult\ protein\ specific\. Aceasta se explic\ prin contribu]ia ambilor parteneri la cre[terea proteinei, `n timp ce la hibridarea sexuat\ particip\ numai un singur p\rinte (de regul\ partenerul ce particip\ cu citoplasm\); - Hibridul somatic este de regul\ un amfiploid rezultat prin `nsumarea genoamelor ambilor parteneri, `n timp ce la hibridul sexuat num\rul genoamelor / cromozomilor este constant. De regul\, hibrizii somatici `[i modific\ num\rul de cromozomi (aneuploidie) [i, `n special, sufer\ o reducere (hipoploidie).

78

Cap.4. AMELIORAREA PLANTELOR AUTOGAME

Dup modul de reproducere plantele se grupeaz n autogame (polenizare cu polen propriu), alogame (polenizare cu polen strin) i plante cu nmulire vegetativ (cartoful, topinamburul, hameiul etc.). La plantele autogame se ntlnesc trei situaii: cleistogamia (autogamia strict), idiogamia (polenizarea se face cu polenul unei singure flori) i geitogamia (polenizarea se face cu polenul unei singure plante). Genetic, toate aceste trei forme sunt identice, rezultnd genotipuri homozigote. Totui, amelioratorii cunosc i faptul c n condiii de cultivare nu se poate vorbi de o autogamie perfect, ntruct influene diverse, provocate de clim, tehnologie, ageni polenizatori, specificul soiurilor etc., modific polenizarea plantelor existnd cazuri cnd abaterile sunt foarte semnificative. Este citat cazul grului. cleistogam, cnd alogamia deine 14,5% sau chiar 26% la unele varieti. Prin aceasta populaiile autogame prezint variabilitate genetic. Singurii indivizi ce prezint variabilitate genetic, n cadrul populaiei cu autogame, sunt cei heterozigoi, iar acetia provin prin abaterile de la panmixie, mutaii, migraie, selecia, driftul genetic etc.

4.1. Ameliorarea grului comun

Importan Nici un aliment nu satisface att de economic cerinele omului n principii nutritive i active ca pinea de gru. Coninutul mare n proteine (7 22%) i structura diversificat a acestora: gliadina 35 45%, glutenina 35 40%, globulina 15 20% i albumina 2 5%, confer grului un rol plastic, biocatalitic i energetic foarte important pentru organismul uman. De asemenea, coninutul foarte mare n glucide 65 70% i n special zaharurile fermentescibile (maltoza, zaharoza etc.) determin ca pinea de gru s fie i o valoroas surs energetic. La acestea trebuie s adugm i coninutul n grsimi al embrionului de gru (2 4%) precum i n vitamina E (4 7 mg%). Fina integral de gru (boabele de gru) conine complexul de vitamine B1 (tiamina 0,5 0,8mg%), B2 (riboflavina 0,2 0,4mg%), B5 (acidul pantotenic 3 5mg%), B6 (piridoxina 3 6mg%), vitamina PP (niacina 2 5mg%), grupul de vitamine K1 (filochinona), K2 (farnochinona), K3 (menadiona) i vitamina H (biotina) n cantiti mai modeste. n acelai timp, boabele de gru sunt srace n vitamina A (retinolul) i au lips total a vitaminelor C i D. Srurile minerale ce se gsesc n boabele de gru sunt: fosfor (300400mg%), potasiu (200350mg%), magneziu (100150mg%), fier i fluor. Pinea de gru, prin nsuirile de panificaie conferite de gluten, asigur alimentaiei umane aproape ntreaga serie de acizi aminici eseniali: leucina, valina, fenilalanina n cantiti mai mari i lizina, izoleucina, metionina, triptofanul, treonina i tirozina n cantiti mici sau foarte mici. Consumul de pine favorizeaz oxigenarea mai bun a organismului, normalizarea metabolismului grsimilor, colesterolului i, drept consecin, prevenirea arterosclerozei. n furajarea animalelor grul este mai valoros fa de porumb prin: - coninutul dublu n proteine total (8 9% la porumb : 16 18% la gru); - valoarea nutritiv a proteinelor datorat echilibrului aminoacizilor, lipsei substanelor antinutritive i antivitaminice precum i n coninutul ridicat al acizilor aminici eseniali;

79

nivelul produciilor medii ridicate i tehnologia de cultivare mecanizabil integral; - preul de cost al unui kilogram de gru este mai redus fa de porumb; - volumul redus la jumtate al cantitilor de furaje administrate pentru a se nregistra, la minimum, acelai spor de greutate; - timpul disponibil de care beneficiaz cultivatorii de gru ce poate fi folosit pentru educaie, sport, divertisment. Obiectivele ameliorrii grului comun Cerinele unui soi nou de gru, pentru condiiile rii noastre, sunt: capacitatea de producie maxim-peste 10 t /ha, coninutul proteic mare peste 15 17%, coninutul n gluten uscat peste 10 12%, raport fin/pine 1,00/ 1,35, rezistena activ la stresurile climatice i fitopatogenice, reacia favorabil n condiii de intensivizare. Ameliorarea capacitii de producie reprezint obiectivul fundamental, tiut fiind c producia de boabe este o nsuire deosebit de complex deoarece la realizarea ei interacioneaz numeroase elemente morfologice, fiziologice i tehnologice. Astfel, s-a stabilit c unele caractere ca: MMB, densitatea i numrul spiculeelor pe rahis, sterilitatea spiculeelor bazale i terminale prezint o mare stabilitate genetic, n timp ce lungimea rahisului, numrul boabelor n spicule i numrul boabelor n spicul principal prezint o stabilitate genetic mijlocie, iar numrul tulpinilor (frailor, producia pe plant, numrul boabelor pe plant) are o mare variabilitate. Producia de boabe este condiionat, n ultim instan, i de rezultanta interaciunii dintre genotip i mediu. De aceea, realizarea unui soi nou productiv prin modificarea unui singur factor fizic sau morfologic nu se poate ndeplini, fiind necesar gsirea unor posibiliti de combinare ereditar a unor ct mai multe componente fr eliminarea sau diminuarea contribuiei pozitive a unor componente iniiale. Astfel, s-a constatat c prin creterea numrului de frai pe plant spicele devin mai scurte, iar numrul boabelor pe spic scade, n timp ce prin creterea numrului de spiculee fertile i a numrului de boabe pe spic, mrimea bobului scade i invers. Creterea puternic a valorilor medii la una dou din aceste componente, fr diminuarea celorlalte, se poate solda cu o producie mai mare. Capacitatea de producie la gru este condiionat de componentele produciei: numrul spicelor fertile/unitate de suprafa, numrul boabelor/spic; greutatea boabelor/spic, precum i de rezistena la boli, duntori i condiii nefavorabile. Dei condiionate genetic, componentele produciei sunt puternic influenate de factorii ecologici i de cei agrofitotehnici. Elementul cel mai influenat este numrul de boabe/spic, iar cel mai puin influenat este greutatea boabelor. Exist o corelaie pozitiv foarte pronunat ntre producia spicului principal i producia la unitatea de suprafa, precum i ntre suprafaa foliar i producie. Ca obiectiv de ameliorare, capacitatea de producie la grul comun a cunoscut i va cunoate o cretere ascendent, deoarece este cel mai important obiectiv i are cele mai mari implicaii n rezultatele economice i sociale. Atunci cnd cel mai important aliment pentru om pinea lipsete, este preferabil i pinea de o calitate mai slab. Potenialul de producie al soiurilor de gru din Romnia este cuprins ntre 7 9 t/ ha dar, n condiii de producie, cu tehnologia pe care o aplic micii i marii cultivatori, se asigur 3 6 t/ ha (55 65% din potenial). Cauzele acestor nivele mici ale produciei de 80

gru comun sunt multe i se refer la nivelul tehnicii i tehnologiei, la pregtirea profesional, dar cel mai important factor negativ aparine structurii genetice a soiurilor. Faptul c soiurile actuale de gru sunt soiuri polimorfe ori multiliniale, sunt alctuite dintr-un amestec de mai multe biotipuri sau linii transgresive specializate, n anumite proporii determin ca pe parcursul producerii i multiplicrii seminei s se nregistreze o degradare biologic i de aici scderea potenialului de producie Ameliorarea calitii grului comun ntre capacitatea de producie i coninutul n proteine al boabelor de gru exist, n general, o corelaie negativ; genele care controleaz coninutul sczut n protein sunt nlnuite cu genele care controleaz greutatea bobului. Totui, la unele soiuri, aceast corelaie nu se manifest puternic, existnd astfel anse reale de cretere a calitii concomitent cu creterea capacitii de producie. n general, soiurile autohtone de gru conin 8 15% proteine total; 65 70% amidon, 1 2% grsimi, sruri minerale, zaharuri etc. Componentele calitative ale bobului de gru comun sunt: coninutul n proteine, coninutul n gluten i calitatea acestora. Sub acest aspect proteinele din endosperm: gluteina (47%) i gliadina (53%), formeaz mpreun un complex coloidal denumit gluten i care influeneaz n mare msur caracteristicile calitative ale pinii exprimate prin extensibilitate, elasticitate, rezisten la deformare, aspect, gust i miros plcut etc. Grul pentru pine trebuie, n primul rnd, s aib nsuiri de mcini bune, adic s aib boabele nici exagerat de tari, nici moi, pentru a se mcina normal i a da o cantitate de fin mare. Grnele cu bobul excesiv de tare au un randament sczut de mcini, necesit un consum sporit de energie pentru mcinare. Grnele cu bobul moale se cern mai greu necesitnd un timp prelungit de cernere. Grul pentru pine trebuie s aib randament ridicat la mcini, adic s dea o cantitate ct mai mare de fin din unitatea de greutate boabe i s aib un coninut sczut de cenu. Randamentul la mcini este influenat de greutatea hectolitric. O fin de bun calitate pentru panificaie trebuie s aib i o capacitate ridicat de absorbie pentru ap, cerine reduse de oxidare, timp de frmntare mijlociu sau nu prea lung, o toleran satisfctoare la frmntare i la mnuirea aluatului i un bun potenial n privina volumului pinii. Acesta din urm este legat i de cantitatea de maltoz care prin degradare d natere la gaze n masa aluatului, ceea ce determin creterea aluatului i n final volumul pinii. Pentru a atinge parametri buni n direciile menionate, grul trebuie s aib un coninut ridicat de substane proteice i un coninut ridicat de gluten de calitate superioar (elastic, tenace, rezistent). Coninutul ridicat de substane proteice i o compoziie echilibrat n aminoacizi a acestora este necesar i pentru ca pinea s aib o valoare nutritiv superioar. Este cunoscut influena asupra calitii a factorilor climatici, n special a temperaturii i umiditii n ultimile dou sptmni dinaintea recoltrii. S-a observat c soiurile cu nsuiri superioare de panificaie sunt mai puin influenate de condiiile nefavorabile din aceast perioad. Coninutul n proteine, i n mod deosebit n gluten, prezint o mare variabilitate att controlului genic, dar mai ales n privina influenei condiiilor de mediu i tehnologice. Astfel, condiiile specifice din timpul formrii bobului influeneaz coninutul n proteine i gluten dup cum urmeaz: 81

umiditatea redus i temperatura ridicat (din aer i sol) mrete coninutul de proteine i gluten; - umiditatea mare i temperatura sczut (din aer i sol) scade coninutul n proteine i gluten; - fertilizarea cu doze progresive de azot-ntr-o rat de 50 kg/ha s. a. (N50; N100; N150) determin o cretere a coninutului proteic cu cte 1% pentru fiecare doz de 50 kg/ha azot s. a.; - boabele din treimea superioar a spicului au protein mai puin comparativ cu restul de dou treimi; Sub aspect calitativ, la gru intereseaz i coninutul n lizin care este cuprins ntre 2,0 4,2 mg/ 100g protein. Mai menionm c dozele progresive cu azot, dei mresc coninutul n proteine total, determin reduceri n coninutul de lizin. Posibilitatea creterii coninutului proteic i a calitii acestuia exist, prin realizarea de hibridri intraspecifice i chiar interspecifice. Astfel, amfiploidul Triticale (gru x secar) poate mri coninutul proteic la 18,26 21,11 %, n timp ce, n aceleai condiii, grul avea 13,68%, iar secara 10,80%. Chiar i mutageneza poate oferi posibilitatea ameliorrii calitii grului (soiurile Sharbati Sonova i Novosibiskaia-67). Ameliorarea precocitii prezint interes pentru toate zonele de cultur din ara noastr, din urmtoarele considerente: - soiurile precoce pot scpa de efectele negative ale secetei atmosferice i chiar a solului din timpul verii, nregistrndu-se acea rezisten pasiv; - soiurile precoce de gru ofer posibilitatea practicrii sistemului de agricultur cu dou culturi pentru boabe pe an pe terenurile irigate. Astfel, dac grul se va recolta pn la sfritul lunii iunie, n zonele sudice irigabile, exist posibilitatea obinerii unor producii foarte eficiente de porumb boabe (hibrizi timpurii), de fasole boabe (soiuri precoce), de soia (soiuri precoce), sorg, mei, cartofi etc. Precocitatea sub aspectul nspicatului i coacerii este o nsuire ereditar cu o gam larg de variabilitate, afectat de mersul condiiilor de mediu pe durata vegetaiei. Precocitatea este o nsuire deosebit de important a soiurilor de gru, ea permind o armonizare mai bun ntre fazele i stadiile critice de dezvoltare ale plantelor i condiiile climatice i de cultur, ceea ce contribuie la asigurarea unei stabiliti mai bune a produciei de boabe. Studiul ereditii precocitii trebuie s se bazeze neaprat pe studiul genetic al proceselor fiziologice ale creterii i dezvoltrii plantelor. Ameliorarea pentru precocitate trebuie s urmreasc, n condiiile climatice date, perioadele critice ale ontogeniei, n scopul evitrii sau atenurii aciunii distructive a unor factori nefavorabili. Tendina actual de a se cultiva soiuri de gru mai timpurii n aproape toate zonele rii este pe deplin justificat i acest lucru impune orientarea lucrrilor de ameliorare la gru nspre obinerea de soiuri precoce, productive i de calitate superioar, adaptate condiiilor de mediu locale, rezistente la atacul la boli i duntori i la condiiile nefavorabile ale mediului extern. Ameliorarea rezistenei la iernare reprezint un obiectiv important pentru toate zonele de cultur ale grului, deoarece condiiile vitrege din timpul iernii (variaiile termice, terenul neacoperit cu zpad sau stratul de zpad prea gros, acoperirea cu ghea etc.) provoac distrugerea sau asfixierea plantelor sau sensibilizarea acestora la atacul bolilor. n general, soiurile de gru autohtone manifest o rezisten sporit la 82

iernare i, mai ales n ultima vreme, nu s-au nregistrat cazuri de distrugere a grului pe suprafee mari, dei condiiile din toamn n-au fost dintre cele mai favorabile rsririi i pregtirii plantelor pentru iernare. Se constat c soiurile rezistente la iernare prezint anumite particulariti morfologice i fiziologice cum ar fi: - prezena nodului de nfrire al plantelor mai adnc n sol mrete rezistena; - formele de toamn sunt mai rezistente ca cele de primvar; - portul culcat al plantei denot rezisten sporit fa de portul erect; - formele care nfresc mai mult au o rezisten sporit; - plantele cu talie mare sunt mai rezistente la iernare; - formele tardive manifest rezisten sporit. Hibridrile intraspecifice, interspecifice i chiar intergenerice pot asigura obinerea de soiuri cu rezisten la iernare. Complexitatea determinrii genetice a rezistenei la ger explic, pe de o parte marea diversitate a acestei nsuiri n colecia mondial i, pe de alt parte, unele din dificultile ce apar n procesul de ameliorare n aceast direcie. Ameliorarea rezistenei la secet-prezint interes deosebit pentru toate soiurile de gru dar, n mod deosebit, soiurile zonate pentru partea sudic i sud-estic a rii. Corelat, n general, cu rezistena la nghe, avnd o baz fiziologic apropiat, rezistena la secet este o nsuire ereditar foarte complex, controlat poligenic i se manifest sub dou forme: rezisten la secet pasiv-prin precocitate i rezistena la secet activ prin urmtoarele nsuiri: - dezvoltarea unui sistem radicular puternic i profund; - adaptarea sistemului foliar pentru o transpiraie mai redus (limbul frunzei mai ngust, poziia frunzei oblic sau n unghi foarte ascuit); - coeficient de transpiraie redus (sub 400 cm3 ap/ g S.U.); - randament fotosintetic mare; - realizarea de linii izogenice aristate la formele valoroase nearistate. Pentru evidenierea genotipurilor rezistente la seceta atmosferic sau a solului, liniile de gru se cultiv n condiii naturale sau artificiale i se rein cele cu mrimea normal a bobului i greutatea bobului mare (MMB s depeasc 45 50 g) . Ameliorarea rezistenei la secet se poate realiza prin hibridarea soiurilor de gru mai rezistente sau prin hibridarea intergeneric Triticum x Agropyron. Ameliorarea rezistenei la cdere i scuturare-n condiiile unei tehnologii intensive i super-intensive reprezint o cerin obligatorie. Mecanizarea tehnologiei de cultivare a grului n condiiile folosirii factorilor de intensivizare (fertilizare, irigare, etc.) impune realizarea de soiuri cu rezisten sporit la cdere i scuturare. Un soi de gru cu rezisten bun la cdere se caracterizeaz prin: - tulpina scurt, cu internodurile ce cresc n lungime de la baz spre vrf; - grosimea tulpinii, a nodurilor i internodurilor n scdere de la baz spre vrf; - elasticitatea ridicat a paiului, realizat prin structura celulelor i gradul ridicat al depunerii ligninei pe pereii celulelor; - sistemul radicular profund i bine dezvoltat; - rezistena sporit la boli i duntori. De asemenea, un soi cu rezisten bun la scuturare se caracterizeaz prin: - inserie bun a glumelor i paleilor pe rahis; 83

- dezvoltarea puternic a esutului mecanic la glume i palei; - structura anatomic a glumelor i paleilor la boabele golae; - gradul de nclinare a spicului; - forma i mrimea glumelor, paleilor i bobului etc. Formele de gru pitice, dublupitice sau triplupitice (cu 1, 2 sau 3 gene pentru piticire) au redus talia plantei pn la 6080 cm, fr s afecteze capacitatea de producie i calitatea, dar au manifestat o rezisten sporit la cdere i scuturare. Ameliorarea rezistenei la boli i duntori Pentru o serie de boli importante a devenit astzi posibil o combatere chimic eficace. Cu toate acestea, lund n consideraie costul i dificultile aplicrii tratamentelor, riscurile de poluare i posibilitatea adaptrii patogenilor la fungicidele folosite, considerm c, n prezent, continuarea eforturilor de utilizare a posibilitilor luptei genetice mpotriva acestor boli este justificat. Ameliorarea plantelor a fost definit ca o continuare, dirijat contient de om, a evoluiei naturale a speciilor cultivate. Din acest punct de vedere, ameliorarea pentru rezistena la boli trebuie privit ca o posibilitate de a dirija evoluia corelat a plantelor de cultur i a agenilor patogeni. De-a lungul a milenii de evoluie plantele i patogenii au coexistat, plantele reuind s supravieuiasc datorit unui complex de mecanisme condiionate genetic, capabile s reduc fie mbolnvirea plantelor, fie consecinele acestei mbolnviri. Acest complex st astzi la dispoziia amelioratorului pentru utilizarea contient n vederea reducerii la minimum a pierderilor de recolt. Ceea ce este important din punct de vedere al strategiei ameliorrii pentru reducerea pagubelor produse de boli este faptul c, pe msur ce aceast reducere este mai complet, presiunea de selecie exercitat asupra populaiei patogenului este mai puternic i aceasta duce automat la nmulirea biotipurilor mai adaptate pentru a depi respectivul mecanism de rezisten. Cu alte cuvinte, mecanismele care ofer o protecie complet mpotriva patogenilor sunt, din aceast cauz, mai puin durabile. Mecanismele de protecie cele mai stabile sunt cele care permit o dezvoltare ct mai normal a patogenului, ceea ce face ca pierderile s nu poat fi micorate prea mult. Metodele folosite n ameliorarea grului comun n ameliorarea grului comun se ntlnesc anumite dificulti cum ar fi: - numrul mare de obiective ce trebuie ameliorate (10 obiective i 13 rezistene); - complexitatea unor nsuiri: capacitatea de producie, calitatea; - structura poligenomic-AABBDD provenit de la trei specii diferite; - structura polifactorial a caracterelor; - cunoaterea insuficient a geneticii unor caractere (controlul genic al componentelor capacitii de producie, al calitii, al rezistenei) etc.; Investigaiile multiple din domeniul citogeneticii au determinat extinderea pentru cultura grului a urmtoarelor metode de ameliorare: selecia, hibridarea i mutageneza. Triticale un gen nou de plant O surs important de proteine i lizin o constituie Triticale un gen de plant creat artificial de om prin ncruciarea grului cu secara. Se cunosc dou forme de triticale: forma hexaploid (2n = 6x = 42 cromozomi) rezultat din ncruciarea soiurilor de gru tetraploide aparinnd speciei T turgidum conv. durum, cu secara diploid urmat de 84

dublarea numrului de cromozomi la hibridul steril din F1 i forma octoploid (2n = 8x = 56 cr.) provenit din hibridarea soiurilor de gru hexaploide aparinnd speciei T aestivum ssp. vulgare cu secara diploid, urmat de asemenea de dublarea numrului de cromozomi la hibridul din F1. Ambele forme pot fi de primvar sau de toamn. n prezent, atenia cea mai mare se acord formelor hexaploide. Boabele de triticale se utilizeaz sub form de pine, paste finoase, fulgi, la fabricarea berii i a spirtului precum i n nutriia animal sub form de nutre concentrat, furaj verde sau fn. Formele octoploide, avnd un coninut mai mare de proteine, un gluten mai bun i nsuiri de panificaie mai apropiate de ale grului comun, dau o pine mai bun dect cele hexaploide. Au fost obinute i linii de Triticale hexaploid care dau o pine de bun calitate. Cercetrile executate n ultimii ani demonstreaz c, la coninutul de proteine, liniile de Triticale hexaploid variaz ntre 11,7 22,5% cu o medie de 17,5%. Cel de lizin este cuprins ntre 2,6%-3,9% cu o medie de 3,4%, iar coninutul n lizin este corelat negativ cu cel n proteine. Capacitatea de producie a formelor de Triticale este nc mic deoarece: fertilitate redus; produce boabe itave ca urmare a dezvoltrii incomplete a endospermului; slab rezisten la cdere din cauza paiului slab i nalt; tardivitate, nsuire care expune plantele aciunii secetei; sensibilitate genetic la fotoperiodism: unele forme cer fotoperioade lungi pentru a nflori i fructifica riscnd de a nu se dezvolta n condiii de zi scurt; adaptabilitate limitat; susceptibilitate la diferite boli.

4.2. Ameliorarea grului de primvar (Triticum durum L.)

Grul de primvar constituie materia prim ideal pentru fabricarea pastelor finoase cu caliti superioare, deoarece: - determin o rezisten mare la rupere a pastelor finoase; - pastele finoase au culoarea galben strlucitoare; - pastele finoase, prin fierbere, i mresc volumul i devin gustoase. Ameliorarea grului durum a fost iniiat n cadrul ICAR n perioada 1948 1954, folosindu-se metoda seleciei n mas la populaiile locale din Transilvania. Apoi, n perioada 1953 1957 ameliorarea grului durum se realizeaz la SCA Studina i SCA Caracal, reuindu-se obinerea primului soi-Arnut de Studina, prin aceeai metod a seleciei. Soiul Arnut de Studina era tardiv, sensibil la cdere, slab productiv, factori ce au limitat extinderea grului durum, fiind cultivat pe suprafee mici n nordul Moldovei, Transilvania, sudul Olteniei i Dobrogea. ncepnd cu 1967, la ICCPT Fundulea i SCA Caracal sunt iniiate programe intensive de hibridare care au ca obiectiv ameliorarea rezistenei la cdere (prin utilizarea genelor pentru talie mic), rezistenei la iernare i a calitilor tehnologice. S-a folosit germoplasma populaiilor locale din Transilvania, soiul Arnut de Studina, soiurile de gru durum de toamn importate din fosta URSS pe de o parte i pe de alt parte populaiile hibride semipitice din Mexic, Italia i Frana. n lucrrile de hibridare s-au mai folosit i unele soiuri romneti de gru comun i Triticale.

85

Un prim rezultat a fost omologarea n 1977 a primului soi romnesc de gru durum, de toamn, semipitic, numit Topaz. Apoi, n 1984, este omologat al doilea soi de gru durum, de toamn, numit Rodur, care este mai precoce i mai productiv dect Topaz. Experimentrile cu grul durum de toamn din perioada 1976 1986 evideniaz 3 etape: prima, cnd s-a obinut soiul Topaz care depete soiul martor Apullum 233 cu 17,3% (670 kg/ha spor, fa de 3850 kg/ha martor), datorit precocitii, rezistenei sporite la iernare, taliei reduse i rezistenei la cdere; a doua etap, cnd se obine soiul Rodur ce depete cu 15% soiul Topaz, fiind mai precoce i mrimea boabelor sporit, iar a treia etap cnd se compar cu soiul de gru comun Lovrin 34 i se constat c diferenele de producie nu sunt semnificative. Diferenele de producie pot fi compensate prin preul mai ridicat al grului durum. Trebuie s menionm c ambele soiuri de gru durum de toamn sunt mijlociu de rezistente la rugina galben, sunt rezistente la rugina brun, mijlociu de sensibile la finare i septorioz i sensibile la fuzarioz, n special Fusarium nivale. Indicii de calitate a soiurilor romneti de gru durum de toamn, determinai la ICCPT Fundulea (Elena Oproiu) i Institutul de Cercetri Alimentare evideniaz un coninut n proteine egal cu 14,9% (la soiul Rodur) comparabil cu soiurile cu o larg rspndire pe plan mondial ca: Creso (12,2%); Mexicoli 75 (9,8%); Javaras 79 (9,6%). De asemenea i restul indicilor de calitate ce caracterizeaz cele dou soiuri ncadreaz soiul Rodur n categoria grului durum de calitate foarte bun iar soiul Topaz n categoria celor de calitate bun. Programul viitor de ameliorare a grului durum vizeaz: - ameliorarea coninutului de pigmeni carotenoizi; - ameliorarea rezistenei la iernare i fuzarioz; - mbuntirea arhitecturii spicului, pentru a permite o fertilitate mai bun, boabe mari i grele; - intensificarea hibridrilor i retroncrucirilor dintre grul durum i triticale pentru a mbunti creterea vegetativ de toamn-primvar, o morfologie mai bun a tulpinii i meninerea n stare verde a prilor plantei pn la maturitatea deplin etc. Obiectivele ameliorrii i metodele folosite n ameliorarea grului de primvar sunt identice cu cele prezentate la grul comun de toamn.

4.3. Ameliorarea orzului de toamn

Obiectivele ameliorrii orzului de toamn Ameliorarea capacitii de producie are la baz ameliorarea urmtoarelor componente: numrul de spice pe m2; numrul de boabe/spic; greutatea boabelor pe spic; masa a 1000 boabe. Pentru o producie de 10 t /ha un soi de orz trebuie s asigure, n medie, 600 spice recoltabile pe m2 (300 de plante cu 12 frai) cu 40 boabe/ spic i 42 grame MMB. Sunt mai productive: - formele de toamn fa de cele de primvar; - formele hexastichum comparativ cu cele distichum; - formele aristate comparativ cu cele cu bobul gola; - formele cu talie mai redus comparativ cu cele nalte. 86

Ameliorarea calitii Orzul furajer, nefiind solicitat de industrie, nu are ca obiectiv major ameliorarea calitii (se tie c industria pretinde anumite caliti). Totui, ar fi bine ca paleele s nu depeasc 10% din greutatea boabelor. Aa a venit ideea obinerii orzului gola, dar aceste orzuri sunt slab productive, au rezisten slab la cdere i scuturare sau ideea obinerii orzului cu aristalele caduce care sunt, ns, slab rezistente la boli i iernare. n fine, s-a propus obinerea de orzuri cu aristele netede dar acestea prezint o sterilitate pronunat. n final, calitatea orzului furajer ar consta n coninutul i calitatea proteinelor n special lizina i triptofanul. Aceste nsuiri se pot ameliora deoarece: - sortimentul mondial de germoplasm prezint valori mari; - exist corelaia pozitiv direct dintre cantitatea i calitatea la orz. Ameliorarea rezistenei la iernare - prezint interes pentru zonele din Transilvania, Brgan, Dobrogea i Moldova; - factorii cu implicaii majore n mpiedicarea unei vegetaii normale n timpul iernii a plantelor de orz sunt: temperatura sczut, oscilaiile termice cu amplitudine mare la trecerea de iarn la primvar, seceta de iarn, crusta de ghea pe zpad, stratul de ghea direct pe suprafaa solului, desrdcinarea (desclarea), asfixierea, acoperirea plantelor cu praful purtat de vnturi etc.; - rezistena activ la iernare este n corelaie direct numai cu concentraia n glucide a sucului celular de la nivelul nodului de nfrire; pentru restul aciunilor individuale sau cumulate ale factorilor enumerai anterior plantele de orz nu manifest o rezisten activ, ci doar o aa-zis rezisten pasiv; - clirea poate fi considerat o etap de pregtire a plantelor pentru a putea suporta mai uor aciunea negativ a temperaturilor sczute. Se consider c o plant cu rezisten slab la temperaturi sczute dar clit, suport aceleai temperaturi negative ca i o plant cu rezisten mare dar neclit. Spre deosebire de gru, la care clirea se desfoar n dou faze, la orz, clirea are loc ntr-o singur faz i aceasta cnd n prezena luminii i a temperaturii aerului ntre 0 60C are loc translocarea glucidelor la nivelul nodului de nfrire; -amelioratorii au constatat c rezistena mai slab la iernare a orzului fa de gru se datoreaz ritmului lent, de 1,5 ori mai mic, n care are loc sinteza i translocarea substanelor protectoare pe timpul clirii (glucoz, zaharoz, rafinoz, prolin etc.). Ameliorarea precocitii rezolv urmtoarele probleme: -evit efectele negative ale secetei pronunate din iulie prin maturizarea precoce; -favorizeaz practicarea rotaiilor anuale intensive mai ales pe terenurile irigate (boabe-boabe, boabe-furaj, furaj-boabe, furaj-furaj); -permite o ealonare optim a recoltrii pioaselor; -la orz nu se manifest corelaia negativ dintre precocitate i productivitate, aceast corelaie fiind eliminat de amelioratori. Ameliorarea rezistenei la secet i arie -nu exist soiuri de orz cu rezisten activ la secet i arie; -o plant ce suport mai uor efectele negative ale secetei i arielor (rezisten pasiv) se prezint astfel: -precocitate ridicat; 87

-sistemul radicular mai dezvoltat i profund; -masa foliar mai redus; -limbul frunzei ngust i subire; -numrul mic de stomate active; -prezena perozitii i a substanelor ceroase pe frunze i tulpin; -gradul ridicat de nfrire (acoper mai bine solul). Ameliorarea rezistenei la boli i duntori - bolile ce pot fi combtute prin tehnologia de cultivare nu constituie obiective ale ameliorrii (tciunele zburtor, tciunele semizburtor, tciunele mbrcat, mlura etc.); - boli ce constituie obiective ale ameliorrii pentru creterea rezistenei active: finarea, sfierea frunzelor, rugina pitic, rugina galben, rugina neagr etc. Ameliorarea rezistenei la cdere, frngere i scuturare-rezistenele active din aceast categorie favorizeaz reacia favorabil a plantelor la msurile de intensivizare. - rezistena la cdere favorizeaz recoltarea mecanizat, creterea capacitii de producie i protejeaz plantele de infecie cu boli/duntori. Rezistena la cdere este mai mare la plantele cu talia mic, la cele cu nfrire mai mare, la cele cu sistemul radicular bine dezvoltat i profund, diametrul tulpinii n scdere de la baz spre vrf etc. - rezistena la frngere i scuturare prezint interes atunci cnd temperatura la maturizare este mare (supracoacere) i cnd intervin perioadele de secet atmosferic. Metodele de ameliorare la orzul de toamn sunt selecia, hibridarea, mutageneza.

4.4. Ameliorarea orzoaicei n Romnia

Obiectivele ameliorrii orzoaicei Ameliorarea capacitii de producie Ca i la orzul pentru furaj, la orzoaic ameliorarea capacitii de producie cuprinde aceleai obiective dar exist i unele particulariti specifice orzoaicei:: nfrirea mai puternic, mrimea boabelor (cu valori mai ridicate), mrimea embrionului (de asemenea mare), uniformitatea boabelor (care asigur uniformitatea plantulei) etc. Totui potenialul productiv al orzoaicei este mult mai redus n comparaie cu orzul i aceasta din cauza celor dou rnduri de boabe. Ameliorarea calitii Ameliorarea indicilor de calitate la orzoaic reprezint o cerin impus de tehnologia fabricrii berii, dar i de consumatorii de bere. Astfel, un soi de orzoaic cu nsuiri de calitate superioare va ndeplini urmtoarele cerine: boabele s fie mari i uniforme; paleile s fie n proporie redus i fine (nu este permis lipsa lor); energia germinativ mare; coninut n amidon mare; coninut n proteine redus ( dar nu lips). Fabricile de bere solicit ca boabele mari s fie n proporie de peste 80%, germinaia de peste 95%, coninutul n proteine sub 10%, iar al paleilor fine s fie de 5 7%. Menionm c unii indici calitativi se refer i la calitatea malului, ca: separarea uoar a proteinelor din must, hidroliza rapid a amidonului, procesele favorabile din etapa fermentrii i fierberii, maturizarea etc.

88

Ameliorarea rezistenei la secet i arie Aceeai problematic ca la orzul de toamn. Ameliorarea rezistenei la cdere, frngere, scuturare sunt obiective specifice intensivizrii;sunt obligatorii pentru orzoaic ntruct se depreciaz calitatea recoltei, a malului i n final a berii. Ameliorarea rezistenei la boli i duntori Idem orzul furajer. Metodele de ameliorare sunt aceleai ca i la orzul furajer.

4.5. Ameliorarea fasolei

Obiectivele ameliorrii fasolei Ameliorarea capacitii de producie. Dup modul de cultur, coninutul i destinaia produciei, la fasole se identific mai multe forme: fasolea de cmp (boabe), fasolea mixt (psti, boabe) i fasolea de grdin - cultivat numai pentru psti. Obiectivele capacitii de producie sunt difereniate dup formele de fasole. O producie ideal pentru fasole se poate obine n urmtoarele condiii: - realizarea unui numr optim de plante fertile pe unitatea de suprafa; - realizarea uni numr optim de psti pe o plant; - realizarea de genotipuri cu cretere determinat i nedeterminat n funcie de scopul i destinaia produciei. Astfel, pentru un soi de fasole destinat produciei de boabe, realizarea unei produciii de 3500 kg/ha este posibil dac: sunt 40 plante/ m2; plantele au cte 6 psti, o pstaie are cte 6 boabe, iar MMB este de peste 250 g. La aceste cerine mai trebuie adugate: realizarea de forme cu creterea determinat, erecte, rezistente la cdere, scuturare, nlimea de inserie a primelor psti la peste 1820 cm, maturarea uniform a pstilor, boabele s aib suprafaa plan la contactul cotiledoanelor pe zona hilului, iar rezistena la stresurile climatice i fitopatogenice s fie activ. Soiurile moderne de fasole cultivate n cultur pur trebuie s posede o tulpin viguroas, erect, rezistent la cdere etc., caractere ce se pot obine prin selecia genotipurilor cu portul pitic n cadrul generaiilor hibride segregante. Ameliorarea calitii prin creterea coninutului n proteine la peste 32% i n mod deosebit al lizinei i triptofanului (peste 4,5, respectiv peste 1,5 mg/ 100 g proteine), dar i prin reducerea procentului de coji sub 810%, n timp ce coeficientul de fierbere s fie ridicat (K = 1015). Nu trebuie neglijat aspectul comercial al boabelor (uniformitatea mrimii, culoarea, forma). Toate aceste caractere i nsuiri pozitive se pot obine practicnd o selecie individual de tip pedigree n cadrul populaiilor hibride. Ameliorarea rezistenei la temperaturi sczute cu referire la efectele nocive ale ngheurilor trzii din primvar, constituie obiectiv important n ameliorarea fasolei. Avansarea epocii semnatului la fasole cu 1012 zile, n special la soiurile precoce, prin obinerea unei rezistene active la temperaturile sczute din primvar, ar facilita evitarea scderilor catastrofale de producie prin efectul temperaturilor ridicate din perioada formrii pstilor. Ameliorarea rezistenei la secet i arie cel puin n etapa actual, vizeaz numai obinerea de soiuri precoce i foarte precoce, dar exist i posibilitatea obinerii unei rezistene active prin folosirea hibridrilor interspecifice (Ph. vulgaris x Ph. acutifolius; Ph. vulgaris x Ph. aureus).

89

Ameliorarea precocitii obiectiv motivat de faptul c soiurile precoce de fasole asigur producii mai constante prin evitarea efectelor negative ale secetei din partea a doua a vegetaiei i pot fi cultivate cu succes pe terenurile irigate, n rotaiile: gru-fasole, orz-fasole, secar mas verde-fasole, borceag de toamn-fasole etc. Ameliorarea rezistenei la boli i duntori aa cum s-a menionat, rezistena la unele boli este controlat monogenic, dar i poligenic. Ceea ce este deosebit de important este faptul c la planta de fasole s-au identificat genele care controleaz fiecare rezisten la boli i, de asemenea, faptul c germoplasma mondial posed genotipurile cu asemenea rezistene. Folosind hibridrile interspecifice de tip backcross, n viitor vom dispune de soiuri cu rezisten activ la acest important stres. Metode de ameliorare sunt selecia, hibridarea i mutageneza.

4.6. Ameliorarea soiei

Obiectivele ameliorrii Ameliorarea capacitii de producie Un soi productiv de soia va trebui s ndeplineasc urmtoarele cerine: s realizeze n mod constant o producie medie de peste 4000 kg/ha; coninutul n protein s fie de aproape 50%, nlimea de inserie a primelor psti la peste 20 cm, perioada de vegetaie scurt spre mijlocie, cu randament fotosintetic ridicat i cu rezisten activ ridicat la stresurile climatice i fitopatogenice. De asemenea, viitorul soi de soia va trebui s posede frunzele mai nguste, orientate vertical, cu peiolul ct mai scurt pentru a facilita ptrunderea luminii la etajele inferioare, meninerea n stare activ a frunzelor bazale i creterea densitii plantelor la unitatea de suprafa. Realizarea obiectivelor este posibil ntruct germoplasma mondial dispune de astfel de nsuiri i caractere. Ameliorarea calitii vizeaz creterea coninutului de protein la peste 50% precum i cel de grsimi la peste 25%. Trebuie menionat c, la acelai genotip, ambele componente nu pot fi majorate fie datorit controlului genic deosebit de strict i n multe cazuri n sens negativ, fie datorit tehnologiilor specifice deosebite folosite n industria prelucrtoare. Sunt stabilite condiionrile reciproce ntre creterea produciei cu scderea coninutului de protein, precum i ntre creterea coninutului n protein i scderea coninutului n ulei. n acelai timp, s-a stabilit c folosirea la hibridare a formelor parentale bogate n proteine sau grsimi asigur hibrizilor n F2 i F3 o mare variabilitate a descendenelor cu protein mai mult sau a descendeelor cu grsimi mai multe. Aa de exemplu la ICCPT Fundulea prin aceast metod s-a reuit o cretere a coninutului n protein fa de cei mai valoroi prini cu 18-23% i a lizinei de la 4,2 la 5,6 mg/ 100 g protein. Creteri mai spectaculoase s-au nregistrat la coninutul de grsimi fiind de 2023 % fa de partenerii cei mai valoroi. Ameliorarea precocitii soiei n condiiile rii noastre se impune deoarece soiurile precoce i foarte precoce ar oferi posibilitatea extinderii arealului de cultur, se preteaz foarte bine n cultur succesiv pe terenurile irigate din sudul rii, pot asigura producii mari i constante ntruct pot evita efectele negative ale secetei i ariei din timpul verii, n special n partea de sud i sud-est a rii. n ultim instan, soiurile precoce prezint i o oarecare rezisten pasiv la atacul unor boli i duntori. Trebuie menionat i faptul c nu se nregistreaz un efect pregnant al precocitii asupra scderii produciei la soia. De asemenea, s-a stabilit pe cale 90

experimental c hibridarea intraspecific, dar i interspecific, prin folosirea genitorilor cu perioad de vegetaie scurt determin obinerea unor descendene hibride, n generaiile segregante, deosebit de precoce. Ameliorarea rezistenei la scuturare prezint interes pentru toate soiurile dar, mai ales, pentru soiurile recomandate unei agriculturi mecanizate. Un soi nou de soia cu rezisten activ la scuturare trebuie s posede ramuri cu fragilitate redus, tulpinile s aib higroscopicitatea redus, iar pstile s fie mai puin sensibile n condiiile oscilaiilor diurne ale temperaturii i umiditii aerului. Evitarea pierderilor, mai ales la recoltarea mecanizat, se mai poate realiza i prin crearea de soiuri cu nlimea de inserie a primelor psti la peste 20 cm fa de sol. Cercetrile genetice au evideniat c gruparea primelor psti la nivele superioare pe tulpin este controlat de o gen recesiv, n comparaie cu situaia normal care este controlat de o gen dominant. Ameliorarea rezistenei la boli este un obiectiv foarte dificil, pe de o parte datorit numrului ridicat de rase fiziologice i chiar al numrului mare de boli ce afecteaz planta de soia, iar pe de alt parte controlul poligenic al unor boli ca: sclerotinia, mozaicul etc., face imposibil identificarea unor genotipuri rezistente. ncercrile de obinere a unor genotipuri cu rezisten activ prin hibridri intraspecifice i interspecifice de tip backcross, precum i prin mutagenez sau poliploidie nu s-au soldat cu rezultate semnificative. La ora actual se preconizeaz introducerea ntr-un singur genotip valoros de soia a genelor de rezisten vertical, cu scopul de a se limita schimbarea populaiilor patogenilor, asigurndu-se astfel rezistena vertical numai a unui singur genotip i, indirect, o rezisten orizontal pentru ntreg arealul ocupat de genotipul respectiv. Prin aceasta se sper a se realiza o oarecare rezisten activ la noile soiuri multiliniale de soia. Metodele de ameliorare sunt selecia, hibridarea i mutageneza.

ntrebri recapitulative:
1. 2. 3. 4. 5. 6. Importana ameliorrii grului comun. Obiectivele ameliorrii grului comun: clasificare, caracterizare, determinare. Triticale: importan, obiectivele ameliorrii. Orzul i orzoaica: importan, obiectivele ameliorrii. Fasolea: importan, obiectivele ameliorrii. Soia: importan, obiectivele ameliorrii.

Cap. 5. AMELIORAREA PLANTELOR ALOGAME

5.1. Ameliorarea porumbului
Obiectivele ameliorrii porumbului Ameliorarea capacitii de producie dei reprezint obiectivul fundamental n ameliorarea porumbului, capacitatea de producie este greu de ameliorat, datorit faptului c la realizarea produciei particip un numr mare de gene, numeroase componente morfologice controlate poligenic i muli factori externi foarte greu de controlat. Cu

91

toate aceste, prin eforturi, s-a reuit ca la porumb creterea anual a capacitii de producie s fie, n medie pe an, pe ultimile 4 decenii egal cu 4,5%, n comparaie cu 3,0% la gru, 2,5% la sfecla de zahr, 1,5% la cartof etc. Acumularea n hibrid a unui numr ct mai mare de gene favorabile care s mreasc nivelul produciei este condiionat de: valoarea genetic a liniilor consangvinizate (ca forme parentale), capacitatea combinativ specific ridicat, mrimea efectului heterozis i componentele de productivitate influenate prin heterozis. Pentru porumb, principalele componente ale capacitii de producie sunt: tipul plantei de porumb; densitatea optim de plante la hectar; numrul tiuleilor pe o plant; lungimea tiuletelui; proporia boabelor n greutatea tiuletelui (randamentul); numrul boabelor pe tiulete; mrimea boabelor; greutatea a 1000 boabe (MMB). Privitor la tipul plantei de porumb, considerm c este interesant evoluia n condiiile rii noastre. Astfel identificm urmtoarea evoluie: - Tipul de porumb cu un singur tiulete pe plant-dar un tiulete mare care s satisfac cerinele depnuatului manual. Reprezint primul tip de porumb al unei agriculturi bazate pe munca manual i tehnologie simplificat. - Tipul de porumb cu doi tiulei pe plant sau aa-zisul tip prolific aparine etapei actuale i care rspunde mai bine cerinelor de intensivizare a produciei de porumb. Acest tip de porumb se preteaz la densiti mai mari (60.000 80.000 plante/ ha), la fertilizare mai puternic, la irigare etc. - Tipul de porumb cu mai muli tiulei pe plant-aa numiii hibrizi pitici care se preconizeaz, permit densiti mari (100.000 120.000 plante/ha) i o talie redus ntruct se constat lipsa unei corelaii negative ntre talia plantei i lungimea tiuleilor. Privitor la corelaia negativ dintre densitatea plantelor i mrimea tiuleilor se consider c aceasta va fi anulat prin modificarea habitusului plantei de porumb. Astfel se consider c porumbul viitorului va avea urmtorul habitus: talie mic a plantei; frunzele cu limbul ngust orientat n poziie ct mai vertical; randamentul fotosintetic al frunzelor s fie mare; realizarea de plante cu frunze brahitice (frunze fr ligul). Ameliorarea calitii pentru producia de porumb reprezint una dintre cele mai importante i actuale obiective care preocup fiziologii, geneticienii i amelioratorii. Din punct de vedere economic, intereseaz mai mult producia total de protein la hectar i procentul de protein al hibrizilor. Cercetrile de lung durat (peste 50 ani) au evideniat c, la porumb, creterea procentului de protein din boabe poate ajunge de la 10,9% pn la circa 20% i cel n grsimi de la 4,75% pn la 15%. Prin lucrrile de ameliorare i, mai ales, prin selecia repetat a indivizilor cu cel mai redus procent de protein sau de grsimi s-a ajuns ca dup 50 ani, proteina s scad pn la minimum 5%, iar grsimile pn la 1%. Sporirea cantitii totale de protein la porumb este o cerin dificil de realizat i nu rezolv dect parial obiectivul calitii. Se cere n continuare mbuntirea calitii proteinelor i, n mod deosebit, la coninutului n lizin i triptofan. Se tie c bobul de porumb conine dou tipuri de proteine: zein (component proteic prezent n endosperm i fr aminoacizi eseniali) i glutelina, globulina, albumina (componente proteice eseniale, prezente n endosperm i embrion). Aceast din urm grup mai conine lizina i triptofanul (1,6 respectiv 0,5 g/100 g proteine). Toate ncercrile de a crete coninutul

92

n proteine la porumb s-au soldat cu creterea numai a coninutului n zein i nu al lizinei, triptofanului sau a altor aminoacizi eseniali. Scoaterea din impas a problemei s-a realizat n 1965 (Universitatea din Purdue SUA) cnd s-au descoperit genele mutante opaque-2 i floury-2 care controleaz reducerea zeinei de la 54,2% pn la 25,4 28,7% i majorarea coninutului de lizin de la 1,6 pn la 3,7 g/100 g proteine, iar cel de triptofan de la 0,3 pn la 0,7 0,8 g/100 g proteine. Drept consecin, valoarea porumbului a crescut de 23 ori, sporurile n greutate la animale s-a dublat etc. Se apreciaz c aceast descoperire echivaleaz ca importan cu descoperirea hibrizilor i efectului heterozis. Transferul acestor gene mutante la porumbul normal se face prin backcrossarea liniilor consangvinizate sau a hibrizilor n F1. Se face menionarea c gena mutant opaque-2 provoac i unele efecte negative ca: reducerea capacitii de producie, scade rezistena la fuzarioz, scade capacitatea de pstrare a boabelor i facultatea germinativ. Ameliorarea precocitii. Orientarea spre formele extratimpurii de porumb prezint avantajele: premergtoare mai bune pentru cerealele de toamn; consum energetic mai redus; compensarea produciei sczute prin creterea densitii i mecanizarea mai uoar a lucrrilor; se anihileaz oscilaiile mari de producie datorate carenelor mari ce apar n aplicarea tehnologiei la formele tardive cum ar fi: fertilizarea neadecvat, realizarea densitii optime, realizarea lucrrilor n afar de optimum valoric incomplet a resurselor termice. Obiectivul de precocitate la hibridul de porumb se justific astfel: -hibrizii precoci pentru zonele de deal, premontane i chiar montane unde temperaturile mai reduse din perioada vegetaiei mpiedic maturarea tiuleilor; -hibrizii precoci pentru zonele sudice cu temperaturi ridicate care produc itvirea boabelor i diminuarea considerabil a produciei; -hibrizii precoci pentru culturi succesive pe terenurile irigabile din sudul i sud-estul rii. Iat de ce, n ara noastr, programul obinerii hibrizilor precoci de porumb i gsete preocupri majore la numeroase Staiuni de Cercetri ca: SCA Suceava, SCA Turda (pentru hibrizii timpurii destinai zonelor premontane i montane), ICCPT Fundulea, SCA Lovrin (pentru hibrizii timpurii cultivai n ogor propriu i pentru cultur succesiv). Crearea de forme tolerante sau chiar rezistente la stresul temperaturilor sczute din primele faze de vegetaie foarte frecvente n ara noastr-precum i posibilitile oferite prin utilizarea retardanilor de germinaie pentru nsmnarea timpurie sau existena unor msuri neconvenionale de prelucrare i conservare a produciei de porumb (fulguire, nsilozare boabe/tiulei etc.), toate pledeaz pentru folosirea formelor extratimpurii i timpurii de porumb, care ofer i avantaje tehnologice. O alt problem major n ameliorarea precocitii porumbului o constituie echilibrarea duratei fazei vegetative i a fazei generative. Astfel, din cele circa 100 zile (durata vegetaiei la un hibrid timpuriu) necesare obinerii unei producii normale de porumb din grupa timpurie, faza vegetativ (semnat-nflorit), de peste 65 zile (65%) este prea lung, n comparaie cu faza generativ (formarea bobului-maturitate) care necesit doar 3035 zile (35%). Scurtarea primei faze este posibil fie prin intensificarea creterii vegetative, fie prin creterea rezistenei la temperaturi sczute i continuarea procesului 93

de sintez la temperaturi mai joase etc. Asemenea realizri s-au nregistrat deja la hibrizii timpurii noi omologai de SCA Suceava i SCA Turda. Succesul lucrrilor de ameliorare a precocitii depinde de precizarea momentului dezvoltrii plantelor de porumb cnd se consider maturitate fiziologic i deci, finalul perioadei de vegetaie, precum i unitile n care se exprim perioada de vegetaie. Ameliorarea rezistenei la temperaturi sczute prezint foarte mare interes pentru majoritatea zonelor de cultur din ar. Posibilitatea ca smna de porumb s germineze normal, fr clocire i fr atac de mucegai, la temperatura solului de 680C, precum i o rezisten activ a plantelor tinere la brume, ar da posibilitatea devansrii epocii de nsmnare a porumbului cu 10 12 zile i prin aceasta, unii hibrizi (timpurii, semitardivi) ar scpa de efectul nociv al temperaturilor excesive din cursul verii. Se menioneaz posibilitatea real de obinere a obiectivului ntruct, se tie, liniile consangvinizate provenite din formele de porumb de tip indurata precum i din cadrul populaiilor locale prezint aceast rezisten. Ameliorarea rezistenei la secet i ari-prezint interes mai ales pentru hibrizii de porumb cultivai n zonele sudice ale rii, unde temperaturile excesive de la nflorit i formarea bobului mpiedic polenizarea, transferarea asimilatelor n bob i de aici, itvirea boabelor cu scderi spectaculoase de producie. Hibrizii precoce, cu sistemul radicular mai profund i bogat, cu cretere intens n prima faz vegetativ, cu un randament fotosintetic ridicat, cu protandrie redus i cantitate mare de polen etc. sunt mai rezisteni la secet i itvire. Ameliorarea rezistenei la cdere i frngere-este o cerin major mai ales pentru hibrizii de porumb destinai suprafeelor irigate. Se tie c hibrizii cu rdcini bine dezvoltate i profunde, cu o tulpin viguroas, elastic i bogat n esut sclerenchimatic cu internodurile bazale scurte i groase etc. prezint o rezisten activ la cdere i frngere. De asemenea, rezistena activ la cdere i frngere se nregistreaz i la formele pitice de porumb forme ce vor cpta o extindere deosebit n viitor pentru considerentele menionate n primul paragraf. Ameliorarea rezistenei la boli asigur condiii optime recoltrii mecanizate a porumbului, reduce pagubele provocate de ciuperci, bacterii i virusuri, iar n unele cazuri chiar elimin compromiterea produciei. Rezistena activ la Ustilago maydis i Sorosporium holci-Sorghi f. Zeae ar nsemna eliminarea celor 2 4% pierderi anuale de producie la porumb, dei formele numeroase de tciune i lipsa germoplasmei cu o asemenea nsuire de rezisten face, deocamdat, imposibil aceast realizare. Exist tentative, i chiar s-a realizat un progres, dar nu s-au obinut hibrizi cu rezisten activ la tciune. Mutageneza este o posibil metod ce ar putea permite obinerea unor gene cu o astfel de rezisten. Rugina comun (Puccinia sorghi) poate fi eliminat din seria bolilor periculoase deoarece gena Rp1d, transferat prin backcrossare liniilor consangvinizate, asigur o bun rezisten activ din partea hibrizilor de porumb. Ptarea cenuie a frunzelor de porumb (Helminthosporium turcicum) poate fi combtut prin crearea de hibrizi cu rezisten activ. Exist linii consangvinizate la care s-a transferat gena de rezisten i, avnd n vedere transmiterea dominant la hibrizi i condiionarea monogenic, hibrizii noi obinui prezint rezisten activ.

94

Rezistena la Helminthosporium mayze care este condiionat poligenic i transmiterea acestor gene imprim o sensibilitate plantelor, n special celor cu androsterilitatea de tipul T (Texas), spre o valoare productiv slab, nu s-a rezolvat n totalitate. Ceea ce s-a rezolvat este identificarea altor tipuri de androsterilitate la porumb care nu este n linkaj cu genele sensibilitii la Helminthosporium mayze. Frngerea tulpinilor porumbului ca urmare a putrezirii bazei lor este una din cele mai pgubitoare boli n toate rile cultivatoare de porumb. n condiiile unei agriculturi intensive, cu recoltarea mecanizat, frngerea tulpinilor porumbului determin pierderi anuale ntre 710% din producie. Acest fenomen este foarte complex i implic o serie de cauze de origine parazitar i neparazitar. Ameliorarea rezistenei la atacul insectelor vizeaz n mod deosebit rezistena activ mpotriva atacului produs de sfredelitorul porumbului (Ostrinia nubilalis). Liniile consangvinizate americane, iugoslave, cehe i slovace prezint n sucul de frunze o aciune toxic ce mpiedic ptrunderea larvelor parazitului. Ameliorarea reaciei favorabile la intensivizare din partea plantelor de porumb, prezint interes atunci cnd hibrizii respectivi se cultiv numai n condiii de irigare. Se tie c prin irigare majoritatea factorilor tehnologici sunt controlai. Hibrizii ca organisme cultivate vor trebui s prezinte un nivel ridicat de productivitate, dar, n acelai timp, devenind mai sensibili trebuie urmrite i anumite obiective speciale n ameliorare. Astfel, aceti hibrizi trebuie s prezinte un metabolism mai activ, un randament fotosintetic mai ridicat (pentru a valorifica superior apa i elementele nutritive), s tolereze densiti mari, s suporte umbrirea, s posede o talie mic, o rezisten mare la cdere, o dezvoltare profund a sistemului radicular etc. Metodele de ameliorare sunt selecia, hibridarea, consangvinizarea, mutageneza, poliploidia.

95