Lucrri practice Fiziologie I

EXPLORAREA SERIEI LEUCOCITARE

1. NUMRTOAREA LEUCOCITELOR
Mduva hematogen este considerat actualmente ca fiind unul dintre cele mai mari organe ale corpului uman adult, dimensiunile sale fiind comparate cu cele ale ficatului. n mod normal, 75% dintre celulele hematopoietice apar in seriei mieloide, iar 25% apar in seriei eritrocitare. Mduva hematogen con ine: Celule stem pluripotente care au urmtoarele caracteristici principale: sunt celulele de origine ale tuturor liniilor sanguine i au capacitate de autoregenerare i diferen iere Celule progenitoare hematopoietice angajate, care vor da natere diferitelor tipuri de celule sanguine. Pot fi de dou tipuri: - Celule progenitoare mieloide, din care deriv eritrocitele, o parte din leucocite (granulocitele neutrofile, eozinofile, bazofile i monocitele) i trombocitele - Celule progenitoare limfoide, din care deriv limfocitele B i T Celulele adulte, apar innd seriei leucocitare, vor ac iona mpreun n vederea aprrii organismului mpotriva agresiunii infec ioase (virale, bacteriene sau parazitare). Seria leucocitar este format din 3 linii celulare: 1. SERIA GRANULOCITAR - cuprinde celule polinucleare, clasificate n: Granulocite nesegmentate (tinere) - au nucleul n form de potcoav Granulocite segmentate (adulte) - au nucleul segmentat. Cu ct celula este mai matur, cu att are mai multe segmente. n func ie de tipul granula iilor prezente n citoplasm, exist mai multe tipuri de granulocite: 1.1. Granulocitul segmentat neutrofil - are citoplasma slab acidofil (roz palid), cu granula ii neutrofile specifice, mici, punctiforme i numeroase; nucleul este segmentat n 2-5 lobi lega i ntre ei prin pun i fine de cromatin. Are urmtoarele roluri: rol n microfagocitoz - func ia principal n aprarea organismului contra infec iilor (reprezint prima linie de aprare prin nglobarea i distrugerea de particule din mediul extracelular) rol secretor pentru: transcobalamina I (transport vitamina B12), interleukine (IL1 -induce febra), prostaglandine, etc. 1.2. Granulocitul segmentat eozinofil - are n citoplasm granule mari, egale, eozinofile (portocalii), iar nucleul su prezint 2 segmente. Are urmtoarele roluri: rol n fagocitoz - factorii care determin chemotaxia eozinofilului sunt: complexele imune antigen-anticorp (de in rolul major n reac iile imune), fibrina, enzime proteolitice, histamina. Eozinofilele pot fagocita i bacterii sau fungi, dar sunt mai pu in atrase de acestea dect neutrofilele. rol n aprarea antiparazitar - chiar dac nu poate fagocita parazi ii, eozinofilul se ataeaz de acetia i elibereaz la exterior granula ii care con in o substan cu o puternic ac iune citotoxic (PBM - proteina bazic major). rol n bolile alergice 1.3. Granulocitul segmentat bazofil - con ine granula ii caracteristice bazofile care ocup toat citoplasma, uneori suprapunndu-se peste nucleu; nucleul este incomplet segmentat. Are urmtoarele roluri: 1

Lucrri practice Fiziologie I rol n fagocitoz, dar la o scar mai redus. rol n degranulare, cu eliberarea la exteriorul celulei a numeroi mediatori, fenomen cu importan n patogenia i diagnosticul unor afec iuni alergice, dar au i rol chemotactic pentru neutrofile i eozinofile.

2. SERIA LIMFOCITAR. Dup mrime limfocitele pot fi: mici, medii i mari n func ie de gradul de maturare i reprezint componenta celular major din esuturile limfatice. Forma limfocitelor este rotund sau uor ovalar, cu diametrul de 6 - 12 m. Nucleul este mare i ocup cea mai mare parte a celulei fiind intens colorat. Citoplasma este slab bazofil (albastru deschis). Limfocitele au urmtoarele roluri: rol n rspunsul imun, declanat de ptrunderea n organism a unor celule strine sau a unor macromolecule proteice. Acest rspuns este caracterizat prin produc ia de anticorpi de ctre limfocitele B (imunitate umoral) i de produi celulari citotoxici elibera i de ctre limfocitele T (imunitate celular). 3. SERIA MONOCITAR. Monocitele sunt cele mai mari celule din seria leucocitar, cu un diametru cuprins ntre 10 - 25 m i sunt specializate n aprarea organismului. Nucleul este nesegmentat, reniform i nu prezint nucleoli. Citoplasma este abundent i intens bazofil (albastru nchis). Seria monocitar include: precursorii din mduva hematogen monocitele din snge macrofagele din esuturi Monocitele ndeplinesc urmtoarele roluri: rol n macrofagocitoza particulelor coloidale, a celulelor degenerate rol n rspunsul imun ca i celule accesorii (prezentatoare de antigen)

Fig.nr.2. Snge periferic normal. Frotiu colorat MGG. 1. granulocit neutrofil segmentat; 2. granulocit eozinofil; 3. granulocit bazofil; 4. limfocit; 5. monocit

Principiu Metoda manual: numrtoarea direct la microscop a leucocitelor dintr-un volum cunoscut de snge, diluat ntr-o propor ie cunoscut. Celulele se numr n dispozitive speciale numite hemacitometre (camere de numrat). 2

Lucrri practice Fiziologie I Metoda automat (metod de impedan electric): o suspensie de leucocite dintr-un volum cunoscut de snge, trec printr-un orificiu. Un curent electric constant este aplicat ntre electrozii de platin afla i de-o parte i de alta a orificiului. Deoarece fiecare celul este nonconductoare, ea va produce, la trecerea prin orificiu, o modificare brusc de tensiune, denumit puls. Aceste pulsuri vor fi numrate electronic.

Valoarea normal: valoare medie a numrului de leucocite: 4000-10000 leucocite/mm3 la adult: 5000 9000 leucocite/mm3 la copil (pn la 18 ani): 4500 13000 leucocite/mm3 Varia ii fiziologice: numrul de leucocite crete (leucocitoz fiziologic) la sugari, n sarcin, dup un efort fizic, n perioadele postprandiale, la altitudine, stres emo ional, etc. numrul de leucocite scade (leucopenie fiziologic) la vrstnici, n somn, etc. Varia ii patologice: Numrul de leucocite crete (leucocitoz) n boli infec ioase, leucemii, alergii, etc. Numrul de leucocite scade (leucopenie) n distrugeri ale mduvei hematoformatoare dup tratament cu radia ii ionizante, medicamente citostatice, la surmena ii fizic, etc.

2. FORMULA LEUCOCITAR
Defini ie. Formula leucocitar reprezint distribu ia procentual a diferitelor tipuri de leucocite pe un frotiu de snge periferic. Formula leucocitar se determin prin metode clasice sau metode automate. Principiu Metoda manual: se numr la microscopul optic, folosind obiectivul cu imersie, 200 de leucocite de pe un frotiu din sngele periferic colorat May-Grnwald-Giemsa (MGG) pe care se pune o pictur de ulei de cedru. Se identific tipurile de leucocite pe baza criteriilor morfologice (aspectul nucleului, granula ii citoplasmatice) i se determin raportul procentual ntre acestea. Metoda automat: se izoleaz i se efectueaz automat raportul procentual dintre tipurile de leucocite din sngele periferic, n func ie de volum, prezen a granula iilor citoplasmatice i complexitatea segmentrii nucleului, cu ob inerea histogramelor. Formula leucocitar normal are urmtorul aspect: Leucocite Neutrofile Eozinofile Bazofile Limfocite Monocite Adult 56-68% 1-3% 0-1% 20-40% 4-10% Copil 25-40% 1-4% 0-1% 50-70% 4-8%

Observa ii Valorile normale pot prezenta varia ii de la un laborator la altul n func ie de metodele i reactivii folosi i. La copiii mici, n formula leucocitar predomin limfocitele fa de neutrofilele segmentate. Procentele se egaleaz n jurul vrstei de 5-6 ani, apoi se inverseaz, ajungnd treptat la valorile adultului. 3

Lucrri practice Fiziologie I

Varia iile formulei leucocitare: Neutrofilia reprezint creterea numrului de neutrofile peste valoarea normal. Prezen a elementelor neutrofile tinere n sngele periferic este dovada unei activit i medulare intense sau a citolizei accentuate. Neutrofilia poate fi: - fiziologic: n cursul unor eforturi fizice mari, graviditate, stres - patologic: n infec ii acute, intoxica ii endogene (uremie) i exogene, leucemia mieloid cronic, sub ac iunea agen ilor fizici (traumatisme, arsuri) Neutropenia reprezint scderea numrului neutrofilelor sub limita normal. Apare dup ac iunea unor medicamente (citostatice, tranchilizante, antiinflamatoare, antibiotice). Eozinofilia reprezint creterea numrului de eozinofile; se ntlnete n alergii, parazitoze, afec iuni dermatologice. Eozinopenia reprezint scderea numrului de eozinofile; se ntlnete n stri de hiperactivitate adrenocorticoid. Bazofilia reprezint creterea numrului de granulocite bazofile. Apare n bolile contagioase, leucemia mieloid cronic. Limfocitoza reprezint creterea numrului de limfocite i poate fi: - fiziologic - la copii - patologic - n afec iuni virale acute, mononucleoza infec ioas, TBC, leucemia limfatic cronic Limfopenia reprezint scderea numrului de limfocite. Apare n limfopoieza insuficient, infec ii virale, SIDA, etc. Monocitoza reprezint creterea numrului de monocite. Apare n mononucleoza infec ioas, infec ii bacteriene (endocardit, TBC), afec iuni virale (hepatit, grip, rujeol), convalescen a infec iilor bacteriene i virale.

3. INVESTIGAREA FUNC IONAL A GRANULOCITELOR

Principala func ie a granulocitelor este fagocitoza, precedat de diapedez (trecerea granulocitelor din snge n esuturi prin peretele vascular), care este declanat de numeroi factori chemotactici pozitivi (atrag leucocitele spre focarul inflamator, leziuni tisulare). n practica medical se poate testa, in vitro, func ia fagocitar a granulocitelor prin: indicele fagocitar al particulelor de latex, testul NBT. 3.1. Indicele fagocitar al particolelor de latex reprezint procentul de granulocite neutrofile care au nglobat particule de latex. Valori normale: 50% - 55%. 3.2. Testul NBT Nitrobluetetrazolium (NBT) este un colorant galben, care este nglobat i redus de neutrofilele normale la nitroformazan. NBT este un acceptor de electroni i se reduce, iar donorul de electroni este NADPH2 format prin activarea metabolismului leucocitar, n timpul fagocitozei. Testul NBT este un test "in vitro" de utilitate clinic, prin care se evalueaz metabolismul oxidativ al granulocitelor, producerea de radicali liberi ai oxigenului, care asigur func ia bactericid a fagocitelor. Se determin procentul celulelor NBT pozitive, adic a granulocitelor care au nglobat i redus NBT la nitroformazan, precipitat albastru nchis, vizibil n granulocitele colorate cu Giemsa. Valori normale: 1% - 14%.

Lucrri practice Fiziologie I Importan a testului NBT n patologia uman. Testul NBT este folosit pentru diagnosticul disfunc iilor neutrofilului, mai ales ale metabolismului oxidativ, situa ii n care reducerea colorantului NBT este insuficient. Creterea testului NBT: n infec ii bacteriene (inclusiv tuberculoza miliar, meningita tuberculoas), n infec ii parazitare, la gravide, la pacien ii cu arsuri (semnific apari ia unei stri septice), etc. Test NBT sczut sau normal: n prezen a unei infec ii bacteriene, n terapia cu antibiotice (eficacitatea tratamentului este indicat de scderea testului NBT fa de valorile anterioare, uneori n mai pu in de 6 ore), n infec ii localizate, n administrarea de corticosteroizi i medicamente imunosupresive, n boala granulomatoas cronic, n deficien a de mieloperoxidaz sau glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza neutrofilului, n lupusul eritematos sistemic, n agamaglobulinemie congenital sau ctigat. Observa ie: metabolismul oxidativ leucocitar se poate investiga i prin chemiluminiscen .

BULETINE DE INTERPRETARE
S se interpreteze urmtoarele leucograme: 1. M.G. sex femin, 30 ani, sarcina luna a IV-a Nr. Leucocite = 11.000/mm3 Neutrofile = 77% Eozinofile = 1% Bazofile = 0% Limfocite = 17% Monocite = 5% 3. S.C. sex masculin, 22 ani Nr. Leucocite = 10.000/mm3 Neutrofile = 58% Eozinofile = 12% Bazofile = 0% Limfocite = 25% Monocite = 5% 5. R.P. sex feminin, 22 ani Nr. Leucocite = 4.000/mm3 Neutrofile = 68% Eozinofile = 4% Bazofile = 6% Limfocite = 15% Monocite = 7% 2. P.B. sex masculin, 3 ani Nr. Leucocite = 8.000/mm3 Neutrofile = 38% Eozinofile = 4% Bazofile = 1% Limfocite = 52% Monocite = 5% 4. A.M. sex masculin, 27 ani Nr. Leucocite = 20.000/mm3 Neutrofile = 74% Eozinofile = 2% Bazofile = 0% Limfocite = 20% Monocite = 4% 6. B.C. sex feminin, 2 ani Nr. Leucocite = 14.000/mm3 Neutrofile = 19% Eozinofile = 1% Bazofile = 0% Limfocite = 71% Monocite = 9%

TESTE (CU UN SINGUR RSPUNS CORECT)

1. Valoarea normal a leucocitelor n sngele periferic al adultului este: A. <10000/mm3 B. 150000 - 300000/mm3 C. 5000 - 9000/mm3 D. 25%

Lucrri practice Fiziologie I 2. Care dintre urmtoarele afirma ii sunt adevrate: A. Creterea numrului de leucocite se numete leucocitoz B. Leucocitoza poate fi fiziologic la surmena ii fizic i n somn C. Leucocitoza semnific scderea numrului de leucocite n sngele periferic D. Leucocitoza apare la vrstnici n mod fiziologic 3. Leucocitoza fiziologic este ntlnit: A. La sugari B. n somn C. La vrstnici D. Surmena ii fizic 4. Formula leucocitar normal la copil (5 - 6 ani) prezint: A. Neutrofilie B. Limfocitoz C. Monocitoz D. Limfopenie 5. Granulocitul neutrofil nesegmentat: A. Are nucleu nesegmentat datorit condensrii cromatinei nucleare B. Reprezint granulocitul adult C. Apar ine seriei limfocitare D. Apar ine serie granulocitare 6. Caracteristic monocitului este : A. Are nucleu reniform B. Nucleul e segmentat n 2 - 5 lobi cu citoplasm abundent, intens bazofil C. Are rol n microfagocitoza bacterian D. Are rol n rspunsul imun ca i celul accesorie (prezentatoare de anticorp) 7. Care din afirma ia de mai jos este adevrat: A. Eozinofilele sunt celule secretoare de anticorp B. Monocitele intervin n procesele inflamatorii (capacitate de aprare mai redus) C. Limfocitele secret IL1 (substan a pirogen) i enzime lizozomale D. Neutrofilele segmentate intervin n macrofagocitoz 8. Alege i rspunsul corect: A. Eritrocitele deriv din celule progenitoare mieloide B. Eritrocitele deriv din celule progenitoare limfoide C. Leucocitele deriv din aceeai celul progenitoare mieloid, la fel ca i limfocitele D. Eozinofilele, bazofilele i monocitele apar in seriei monocitare 9. Despre formula leucocitar este corect urmtoarea afirma ie: A. Se poate citi doar de pe curbe de distribu ie a leucocitelor B. Se interpreteaz cu ajutorul histogramelor C. Valoarea neutrofilelor n formula leucocitar la adult este 25 - 40% D. Valoarea limfocitelor la adult este mai mare dect la copil 10. Alege i rspunsul corect: A. Lecopenia indic adaptarea organismului la rarefierea aerului la altitudinile mari B. Monocitoza apare tipic n parazitozele intestinale ale copilului C. Leucocitoza se ntlnete n distrugeri ale mduvei hematoformatoare D. Bazofilia se ntlnete n bolile contagioase, leucemia mieloid cronic 6

Lucrri practice Fiziologie I Rspunsuri: 1-C, 2-A, 3-A, 4-B, 5-D, 6-A, 7-B, 8-A, 9-B, 10-D.