Coprologie parasitaire

COPROLOGIE PARASITAIRE :

Mise en vidence et identification des parasites vivant dans le TD ou ceux pour lesquels les selles constituent le vhicule normal de leurs formes de dissmination dans le milieu extrieur.

Ncessit dune collaboration troite entre le biologiste et le clinicien prescripteur

COPROLOGIE PARASITAIRE : 3 principes importants :

1 Chaque parasite nest bien mis en vidence que par une TK qui lui est ) spcifiquement adapte Fournir au biologiste les lments dorientation dans le choix des techniques

lments dorientation dans le choix des techniques :

Origine gographique du malade Notion de sjour en pays chaud Des donnes cliniques Troubles intestinaux, digestifs ou gnraux Antcdents parasitaires Rsultats des autres examens paracliniques Rectoscopie Radiographie Hmatologie: NFS, osinophilie Biologie Notion dune thrapeutique rcente ou en cours notion de camouflage des parasites par certains mdicaments

COPROLOGIE PARASITAIRE : 3 principes importants :

1 Chaque parasite nest bien mis en vidence que par une TK qui lui est ) spcifiquement adapte Fournir au biologiste les lments dorientation dans le choix des techniques 2 Un examen isol dont le rsultat est ngatif n a aucune valeur ) dlimination 3 Le prlvement doit tre examin rapidement )

COPROLOGIE PARASITAIRE : 3 principes importants :

1 Chaque parasite nest bien mis en vidence que par une TK qui lui est ) spcifiquement adapte Fournir au biologiste les lments dorientation dans le choix des techniques 2 Un examen isol dont le rsultat est ngatif n a aucune valeur ) dlimination 3 Le prlvement doit tre examin rapidement )
Prescription de 3 examens coprologiques quelques jours dintervalle Si possible : selles mises au laboratoire (sinon, bien prciser heure dmission)

COPROLOGIE PARASITAIRE :
Mise en vidence et identification : Parasite sous sa forme dfinitive (forme adulte pour helminthes, forme vgtative ou kystique pour les protozoaires) Parasite sous une forme volutive (ufs, larves pour helminthes) lments du parasite (anneaux pour tnias)

Espces Nmatodes
Anguillule Ascaris Ankylostome Oxyure Tricocphale

Dates dapparition des ufs dans selles

3 4 semaines 8 10 semaines 6 semaines 3 semaines 4 semaines

Trmatodes
Grande douve Shistosome Opistorchis 3 4 mois 6 semaines 7 8 semaines

Cestodes
Bothriocphale Taenia saginata Taenia solium 2 semaines 2 3 mois 2 3 mois

COPROLOGIE PARASITAIRE :
EXAMEN MACROSCOPIQUE : Aspect et consistance des selles

Prsence ventuelle de glaires, de mucus, de sang, de pus, . Recherche dlments macroscopiques : Les selles sont dilues dans de leau puis observes pour mettre en vidence la prsence de certains parasites comme les oxyures, Ascaris, les anneaux de tnia,.

COPROLOGIE PARASITAIRE :
EXAMEN MICROSCOPIQUE DIRECT :

Tout examen des selles doit comporter obligatoirement : Examen direct entre lame et lamelle dun talement mince de selles fraches dans srum physiologique chaud (37 = examen direct ltat C) frais (recherche formes vgtatives damibes) Examen direct aprs coloration: Entre lame et lamelle : coloration au lugol (+/- coloration lhmatoxyline ferrique de frottis de selles; bleu de mthylne tamponn; etc) En tube : coloration au Mercurothiolate, Iode, Formol (=MIF) Examen aprs concentration des lments parasitaires (2 techniques)

Mthode de MIF coloration

REACTIFS : 1 Solution mre stable M.F. ) - Eau distille..250ml - Solution de merthiolate 1%..........................200ml - Formol25ml - Glycrine5ml 2 Solution iode frachement prpare ) Iode.5gr Iodure de potassium.10gr Eau distille100ml TECHNIQUE : Verser 2.35ml de la solution M.F. dans 0.15ml de la solution iode Mlanger 0.25ml dchantillon fcal Laisser reposer puis recueillir la partie suprieure du culot une goutte de liquide avec une pipette pasteur et observer entre lame et lamelle

METHODES DE CONCENTRATION DES SELLES

Mthodes de concentration des selles

BUT : Rassembler dans un petit volume les formes parasites prsentes en faible quantit dans lchantillon, sans augmenter leur nombre. Mthodes physiques

Mthodes diphasiques ou physico-chimiques

Mthodes mixtes

Mthodes physiques

Mthodes physiques
PRINCIPE : Diffrence de densit entre les lments parasitaires et les dbris alimentaires par rapport un liquide de dilution Techniques de sdimentation : utilisent un liquide dont la densit est infrieure celle des lments parasitaires Techniques par flottation : utilisent un liquide de densit suprieure celle des lments parasitaires qui se concentrent la surface (ex. Willis)

Techniques de sdimentation
PRINCIPE : Dilution des selles dans un liquide de densit d dbris alimentaires < d < lments parasitaires

REALISATION : - 5 gr de selles dilues dans 300ml deau glycrine 0.5% dans un verre pied - 3 sdimentations successives acclres par centrifugation - examiner le dpt Technique peu utilise Valable pour les ufs de shistosomes (+ ou ufs dAscaris)

Techniques par flottation: Mthode de Willis

REACTIF : Solution sature de NaCl 25% (densit de la solution = 1,2) TECHNIQUE : - Diluer 2gr de selles dans 20ml de la solution - Tamiser ensuite sur un tamis mtallique et recueillir dans 1 tube cylindrique de 2.5cm de diamtre : il faut que la solution arrive ras-bord et forme un mnisque sans bulle (liminer les dbris remonts la surface sil y a lieu) - Poser une lamelle 22x22 dgraisse la surface du mnisque. Attendre 15 20 min. - Retirer la lamelle puis la poser sur une lame porte-objet. Examiner rapidement. INDICATIONS: ufs dankylostomids, dAscaris, dOxyures, dHymenolepis nana et de Trichocphales CONTRE-INDICATIONS: Larves / kystes / Douves / Shistosomes

Techniques par flottation: Mthode de Janeckso-Urbanyi

PRINCIPE : la dilution fcale est ralise dans un liquide de densit d lments parasitaires < d les lments parasitaires surnagent et se concentrent dans le film superficiel REACTIFS : Solution diodomercurate de potassium - Iodure mercurique.100gr - Iodure de potassium..530gr - Eau distille qsp 1000ml Dissoudre liodure de potassium dans le plus faible volume deau; ajouter lentement liodure mercurique en agitant. Aprs dissolution, diluer avec le reste de leau distille. La densit de la solution = 1,440 TECHNIQUE : - Diluer 5gr de selles dans 20ml de la solution - Tamiser ensuite sur une gaze pralablement humidifie - Centrifuger 2500 t/min pendant 3 minutes - Attoucher la surface du liquide avec une lamelle. Dposer la lamelle sur une lame et observer au microscope.

Mthode de Janeckso et Urbanyi

AVANTAGES : Mthode rapide, assez polyvalente : Indique pour la recherche des ufs de : Fasciola hepatica, Shistosoma mansoni, Ancylostoma duodenale, Necator americanus Enterobius vermicularis, Trichuris trichiura, Strongyloides stercoralis, Taenia, Hymenolepis Des larves de vers Les kystes de Giardia (contre-indique pour les kystes damibes et pour les Ascaris)

INCONVENIENTS: Prlvement ds la fin de la centrifugation pour viter dformation des lments occasionne par hypertonicit du milieu Action caustique et allergique du ractif (manipuler avec prcaution) Cot lev des ractifs

Techniques par flottation

Mthode de Faust
PRINCIPE : Mme principe que la technique de Janeckso-Urbanyi mais REACTIF = ZnSO4 33% La densit de la solution = 1,180

Mthodes diphasiques

Mthodes diphasiques ou physico-chimiques

PRINCIPE : Mettre les selles en prsence de 2 phases non miscibles : une aqueuse et une organique (ther). En plus de laction dissolvante de lther, la mise en jeu de 2 phases non miscibles ralise pour chaque lment fcal un coefficient de partage dont la valeur dpend de sa balance hydrophile / lipophile permettant ainsi de concentrer les lments fcaux dans le culot. Ex. Ritchie, Teleman-Rivas, Bailenger

Mthode de Ritchie modifie

PRINCIPE : Mthode diphasique

REACTIFS : - Solution aqueuse 10% de formol pur (formol pur = solution formaldhyde 40%) - ther TECHNIQUE : - Dlayer 2gr. de selles dans 2Oml de solution de formol 10% - Tamiser sur tamis mtallique et mulsionner dans 1 tube en verre centrifuger avec un gal volume dther en agitant vigoureusement pendant 30 sec. - Centrifuger 2500 t/min pendant 3 5 minutes - Rcuprer le culot en liminant les couches suprieures. Examiner INDICATIONS: TK standard, kystes de protozoaires

Mthode de Teleman-Rivas
PRINCIPE : Mthode diphasique REACTIFS : - Solution aqueuse 5% dacide actique cristallisable - ther thylique TECHNIQUE : - Dlayer 1 2 gr. de selles dans 5 10ml de la dilution actique - Les dbris volumineux sont limins par sdimentation de moins dune minute - Emulsionner alors avec un gal volume dther dans un tube centrifuger en verre - Centrifuger 1500 t/min pendant 3 minutes On obtient : une couche superficielle thre un anneau + ou adhrent aux parois du verre une couche aqueuse un culot que lon examinera AVANTAGES : conomique, rapide, simple INCONVENIENTS : Trop faible volume de selles examines; trop souvent en dfaut (Ascaris, Fasciola hepatica, Shistosomes, Entamoeba, Giardia)

Mthode de Bailenger
PRINCIPE : Mthode diphasique, effectue en milieu tamponn pH 5 REACTIFS : Tampon acto-actique pH 5 - Actate de sodium cristallis..15gr - Acide actique3.60ml - Eau distille.1000ml Ajuster pH 5 avec de lacide actique - ther thylique TECHNIQUE : - Dlayer 2 3 gr. de selles avec 10 fois son volume en tampon - Tamiser sur tamis mtallique et recueillir dans 1 tube en verre centrifuger - Ajouter 1 volume gal dther et agiter vigoureusement - Centrifuger 2500 t/min pendant 3 min. - Retirer couches suprieures et examiner le sdiment entre lame et lamelle Cette mthode analogue la mthode de Teleman-Rivas donne de meilleurs rsultats

Mthode de MIF concentration

PRINCIPE : Mthode diphasique

REACTIFS : - ther thylique - Ractif de MIF (prpar extemporanment) TECHNIQUE : - Diluer 1gr. de selles dans 10ml du ractif de MIF - Tamiser puis mulsionner par agitation nergique dans 1 tube centrifuger en verre avec un gal volume dther - Laisser reposer 2 minutes (stabilit de lmulsion) et centrifuger 1500 t/min pendant 1 minute - Examiner le culot INDICATIONS : Excellente concentration pour les ufs de Shistosomes, dAscaris non fconds, dHymenolepis nana

Mthodes mixtes

Mthode mixte : Technique de Junod modifie

REACTIFS : - Solution de formol dilue 10% - ther thylique - Solution diodomercurate de potassium TECHNIQUE : - Diluer 2 3 noix de selles dans 50ml dune solution dilue de formol 10% - Tamiser et transfrer dans un tube conique rempli aux 3/4 - Rajouter ther jusquen haut et agiter vigoureusement pendant 30 sec - Centrifuger 2500 t/min pendant 3 5 minutes - Reprendre le culot par 10ml de solution diodomercurate de potassium, remettre en suspension et centrifuger 30 sec 2500 t/min - Verser dlicatement le surnageant dans un autre tube conique, le remplir deau du robinet et centrifuger 3 minutes 2500 t/min - Vider le surnageant. Examiner le culot

METHODES SPECIFIQUES

Mthode de Baermann : Anguillules

TECHNIQUE : Dans 1 passoire fond conique, disposer 1 carr de gaze double (+ ou 1 paisseur de papier filtre si selle diarrhique) ou 1 tamis mtallique conique. Dposer une noix de selle et recouvrir la passoire dun verre de montre. La passoire est alors plonge dans 1 entonnoir ferm contenant de leau 40 C. Les larves danguillules et dankylostomes ayant des proprits hydrophiles et thermophiles migrent et se concentrent dans leau que lon soutire alors grce au robinet au bout de 2 heures. Centrifuger 2 min. 2000 t/min et observer les larves mobiles dans le culot. Si lexamen est ngatif au bout de 2 heures, prlever leau aprs 24h.

Verre de montre Passoire Entonnoir

SELLE Eau tide (40 C) Robinet

Culture des Helminthes

BUT : Diagnostic diffrentiel des ankylostomes et anguillules TECHNIQUES : Charbon, en bote de ptri (BP) Mlanger 1 mme quantit de selles et de poudre de charbon. Ajouter 1 peu deau strile pour former une pte molle. Verser dans 1 BP,en respectant les bords de la bote et en faisant au centre un petit monticule qui touche le couvercle de la bote. tuve 25 Lire les gouttes dans C. couvercle. Laver la selle avec 2ml deau strile : attendre 10 min et recueillir cette eau au pourtour de la BP. Prlever 8 10 fragments de selles. Sur buvard, en bote de ptri Envelopper 4 lames dans 1 papier buvard, taler 1 2 gr. de selles sur 1 des faces. Poser ces lames dans 1 BP contenant 10ml deau strile. tuve 25 Lire les gouttes dans couvercle et C. culot de centrifugation de tout le liquide de la BP. Sur buvard, en tube essais taler 1gr. de selles sur toute la longueur dune bandelette de buvard rigide. Introduire buvard dans 1 tube essais contenant 5ml deau strile (la selle ne doit pas toucher leau). tuve 25 C. Lire le culot de centrifugation du liquide du tube essais.

Larves rhabditodes

Anguillule :
a) Pharynx court b) sophage : 2 renflements

Ankylostome :
a) Pharynx long b) sophage : 2 renflements

Larves rhabditodes

Anguillule :
A) bauche gnitale grande et nette C) Extrmit postrieure peu effile

Ankylostome :
A) bauche gnitale petite et peu nette C) Extrmit postrieure trs effile

Larves strongylodes
Anguillule :
Taille 500 600m / 15m Trs fine Mobilit +++ Pas de gaine sophage = corps Extrmit tronque

Ankylostome :
Taille 500 600m / 25 30m Plus large Mobilit + Gaine strie sophage = corps Extrmit effile

PROTOZOAIRES

FLAGELLES

Protozoaires: Flagells
FORMES VEGETATIVES
Trs mobiles frais, sans repos, surtout si selles fraches et non refroidies (ou rchauffes en masse 37 C) Membrane ondulante prsente, latrale. Corps piriforme asymtrique 10-15 x 7-10m. Un axostyle. Un seul noyau antrieur. Jamais de kystes. Relativement rare en France

Trichomonas intestinalis

Protozoaires: Flagells
FORMES VEGETATIVES
Absence de membrane ondulante : Corps symtrique, en cerf-volant, de 10-20 x 6-10m; 2 noyaux, 8 flagelles au total dont 2 postrieurs parallles et plus gros que autres. Peu ou pas mobiles. Rarement rencontrs dans selles. Beaucoup plus commun sous sa forme kystique.

Giardia intestinalis
Corps asymtrique : -De grande taille : 14-20m. Piriforme. 3 flagelles. 1 sillon de torsion oblique. Kystes caractristiques. Pas rares. - De petite taille: 5-15m. 2 flagelles seulement, libres. Pas de sillon de torsion. Kystes caractristiques. Rare 4-10m. 3 flagelles dont 2 libres, l autre dans cytoplasme, sans membrane ondulante. Rare

Chilomastix mesnili

Embadomonas intestinalis Enteromonas hominis

Chilomastix mesnilii

Giardia duodenalis

Protozoaires: Flagells
FORMES KYSTIQUES
9-13m : Rgulirement ovodes, 2 4 noyaux. 2 corps parabasaux en virgule. Flagelles. Commun

Giardia intestinalis

6-9m : Piriforme court. Noyau unique. Flagelles enchevtrs. Parasite rare, sans tre exceptionnel

Chilomastix mesnili Enteromonas hominis

7-3m : Ovalaire. 1, 2 ou 4 noyaux disposs alors 2 par 2

5-2.5m : Piriforme. 1 noyau unique. Flagelle en Y embrassant le noyau

Embadomonas intestinalis

Giardia duodenalis

Chilomastix mesnilii

Embadomonas intestinalis

AMIBES

Protozoaires: Amibes
FORMES VEGETATIVES Dans nos rgions, les amibes autochtones endmiques sont : Entamoeba coli, frquente (kystes) Dientamoeba fragilis, relativement frquente mais rarement repre (pas de kystes) Pseudolimax butschlii, relativement rare mais facile reprer (kystes) Entamoeba histolytica, E. hartmanni, Endolimax nana, rares et exceptionnelles, le plus souvent cas d importations. Les porteurs sains endmiques d Entamoeba histolytica sont trs rares en France

Protozoaires: Amibes
FORMES VEGETATIVES

Trophozote de grande taille (20-30) Espce relativement peu mobile. Se mobilise en faisant du sur-place ; fragile +37 C; inclusions de bactries. Commune (kystes frquents)

Entamoeba coli

Trophozote de taille moyenne (12-30) Espce trs mobile. Pseudopodes explosifs. Mobilit directionnelle . GR phagocyts dans certains exemplaires de grande taille. Rsiste +37 C.

Entamoeba histolytica

Protozoaires: Amibes
FORMES VEGETATIVES
Trophozote de taille moyenne (10-15). Jamais hmatophages. Mobilit importante Peu mobiles; effet de sur-place: - se lyse facilement

Entamoeba histolytica minuta Pseudolimax butschlii Dientamoeba fragilis

- Rsistante, mme au froid qui la paralyse simplement; frquente

Trophozote de trs petite taille (3-10) Peu mobile pseudopodes digitifromes allongs et troits. Rsistante au froid. Mobilit comme E. histolytica Peu mobile

Entamoeba hartmanni

Endolimax nana

Petites formes Dientamoeba fragilis

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica et Pseudolimax butschlii

Endolimax nana

Entamoeba coli

Entamoeba coli et Entamoeba hartmanni

Dientamoeba fragilis

Entamoeba hartmanni

Entamoeba histolytica

Protozoaires: Amibes
FORMES KYSTIQUES

15-20m : Contours rgulirement sphriques. 8 noyaux bien visibles. Cytoplasme homogne. Commun

Entamoeba coli

10-14m : Moins rgulirement sphrique. 4 noyaux souvent mal visibles. Cytoplasme finement alvolaire. 1 corps chromatode (cristallode) bouts arrondis et hyalin. 1 vacuole glycognique discrte bords diffus. Kystes immatures souvent prsents (avec 1, 2 ou 3 noyaux atypiques

Entamoeba histolytica

Protozoaires: Amibes
FORMES KYSTIQUES
9-11m : Kyste souvent irrgulier. 1 noyau mal visible, priphrique. 1 grande vacuole glycognique bien mise en vidence au lugol, bords trs nets, et caractristiques. Pas rare

Pseudolimax butschlii

5-8m : Arrondi. 4 noyaux ressemblant ceux de E. coli

Entamoeba hartmanni
7-12m: Ovalaire, ou rectangulaire . 4 noyaux gros karyosome excentrique

Endolimax nana

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica

Entamoeba coli

Entamoeba coli

Entamoeba coli

Pseudolimax butschlii

Endolimax nana

Protozoaires
FORMES KYSTIQUES
DIVERS Kystes de grande taille relative. Rarement observs dans selles (exceptionnels) 45-65m : Sphrique ou sub-ovalaire

Balantidium coli (cili)

25-33m : Ovodes. Coque assez paisse. 1 grosse cellule indivise lmission (sporoblaste); maturation possible en qques jours, lair (sporogonie). 1 extrmit plus troite (aspect de bouteille)

Isospora belli (coccidie)

12-14m : Ovode. Gnralement isols ou parfois accols par paires sous une enveloppe commune; (sporogonie acheve: prsence de 4 sporozotes allongs par kyste simple)

Sarcocystis hominis (coccidie)

Balantidium coli Balantidium coli

Isospora belli

Isospora belli

Sarcocystis hominis

Cryptosporidium parvum

HELMINTHES

ufs dHelminthes
I ufs non operculs (Nmatodes et certains Plathelminthes) ) A) Membrane paisse brune
uf non embryonn (1 blastomre unique): Contour ovode. Paroi mamelonne 60-50m

Ascaris lumbricoides

Parfois sans coque externe : uf incolore rgulirement ovalaire, coque paisse Parfois non fcond : 90-100m, bouts aplatis Contour en citron. Paroi lisse. 1 bouchon clair chaque ple : 55-25m

Tricocphale (Trichuris trichiura)

uf embryonn (embryon hexacanthe): Contours sphriques; coque strie de faon rayonnante, brun fonc, 30-40m

Taenia solium ou saginata

Trichuris trichiura et Ascaris lumbricoides

Trichuris trichiura

Ascaris lumbricoides

ufs dHelminthes
I ufs non operculs (Nmatodes et certains Plathelminthes) ) B) Membrane incolore unique
Epaisse. 1 embryon L2. Coque asymtrique, 50-30m Mince :

Oxyure (Enterobius vermicularis)

Coque symtrique. Pas dembryon, mais quelques blastomres, 60-70 x 40m

Ancylostoma duodenale, Necator americanus

1 embryon cili (miracidium). uf de grande taille relative: 1 peron latral, 140-60m

Shistosoma mansoni Shistosoma japonicum

Pas dperon ou trs peu visible, latral, 70-80m

C) 2 membranes incolores concentriques, minces; filaments polaires sur la membrane

interne + 1 embryon hexacanthe de cestode, 50-45m

Hymenolepis nana

Enterobius vermicularis

Ancylostoma duodenale

Shistosoma mansoni

Shistosoma japonicum

Shistosoma mekongi

Shistosoma intercalatum

ufs dHelminthes
II ufs operculs (Plathelminthes) )
ufs ovodes, symtriques. Opercule relativement peu apparent. Paroi dpaisseur moyenne. Non embryonns la ponte, 140-80m 75-45m

Fasciola hepatica, Fasciolopsis buski Bothriocphale (Diphyllobothrium latum) Paragonimus

ufs daspect utriculaire. Opercule marqu. Grande taille : grand diamtre du ct de lopercule, 85-53m

Petite taille : grand diamtre plus loign de lopercule. Coque bruntre ou non. Diagnostic despce difficile. 40-25m

Dicrocoelium Clonorchis Opistorchis Metagonimus, Heterophyes

1 petit mucron intrieur, 30-16m 30-16m 30-16m

ufs de douves

Fasciola hepatica

Fasciolopsis buski

Paragonimus sp.

Dicrocoelium dendriticum

Clonorchis sinensis

Heterophyes heterophyes

Bothriocphale

Hymenolepis nana

ufs de Cestodes

Taenia saginata ou solium

ELEMENTS NON PARASITAIRES

Trachide

Mcles

Asques et ascospores de morilles

Spores de morille

Spore de champignon

Spores de lycopode et de truffes

Pollen de conifre

Pollen

uf dAcarien